CS235850B1 - Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu - Google Patents
Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu Download PDFInfo
- Publication number
- CS235850B1 CS235850B1 CS286883A CS286883A CS235850B1 CS 235850 B1 CS235850 B1 CS 235850B1 CS 286883 A CS286883 A CS 286883A CS 286883 A CS286883 A CS 286883A CS 235850 B1 CS235850 B1 CS 235850B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- htp
- against human
- transferine
- lymphocytare
- mousy
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 101000766306 Homo sapiens Serotransferrin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 abstract description 5
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Vynález se týká myšího lymfocitárního
hybridonu, produkujícího protilátku
proti lidskému transferinu, uloženo ve
sbírce hybridomů Ústavu molekulární ge -
netiky ČSAV pod označením HTP - 04.
Samotná monoklonální protilátka hybridonu
HTP - 04 je vhodná pro použití v enzymoimunologické
a radioimunologické analýza
a při vizualizaci receptorů pro
transferin na úrovni optického a elektronového
mikroskopu.
Směs protilátek HTP ©4, HTP 06 a HTP 14
je použitelná pro precipitaČní testy.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj, hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie P3-X63-Ag.0653 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti lidskému transferinu.
Doposud se protilátky, proti transferinu vyrábějí tak, že je transferin opakovaně injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům a prasatům. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době působení antigepu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných zejména pro kvantitativní stanovení plasmatického transferinu metodou jednoduché radiální imunodifuze. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek,. jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat vysycováním. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a další antigeny pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti lidskému transferinu, uložený ve Sbírce hybridomů Ostavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňské ul. 1003, pod označením IMG CZAS HTF-04.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury /Fazekas de St.Groth, S,,Scheidigger,D,: Production of monoclonal antibodies: Stratedy and tactics, 3, Immunol, Meth.,35:1-21, 1900; Galfré,G,, Howe,S,C,, Milstein, C,, Butcher,G.W,, Howard,3.C,: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, <· 3 —
235 850
Nátuře 266:550, 1977/ klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí buněk myší myelomové linie P3-X63-Ag8,653 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene BALB/c, imunizo* váných lidským transferinem.
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku, tzv, protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s lidským transferinem. Hybridám HTF-04 je možné kultivovat in vitro v mediích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konserv, uchovávaných v kapalném dusíku je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu. Protilátka, produkovaná hybridomem HTF-04, je specifická výhradně pro lidský transferin a není třeba se zbavovat protilátek balastních.
Příklad:
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo s aplikováno 2 x 10 buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 16 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem /0.5 ml intraperitoneálně/. Po 14 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a naprodukovaná asci tická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 4.Θ ml ascitické tekutiny, která obsahovala 12 mg/ml imunoglobulinů, Proti látka reagovala se specifickým antigenem v enzymoimunologickém testu /při použití prasečí antimyší protilátky značené 7 křenovou peroxidázou/ až do ředění 1:10 , Za pomoci nepřímé imunofluorescenční techniky byl takto získanou protilátkou detekován receptor pro transferin na lidských myelomových buňkách. Směs protilátek HTFO4, HTF 06 a HTF 14 je použitel ná pro precipitační testy.
235 850
Buňky hybridomu HTF-04 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových puněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyríbosomy, In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním mediem je Eaglovo minimální esenciální medium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin /3 mM/, pyruvát sodný /1 mM/. Toto médium /označované jako H-MEMd, Ostav molekulární genetiky ČSAV/, je pro kultivaci hybridomu HTF-04 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem /0,05 mM/ pufrem HEPES /10mM/ a inaktivovaným bovinním sérem /Bioveta, Ivanovice na Hané, 10%/. Hybridom je kultivován při 37°C. Střední generační čas je 13,1 hod. a 12 měsíců po sestrojení byl modální počet ohromosomů 82, Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtrídy IgG1, kappa typu,
Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem HTF-0 reaguje specificky s lidským transferinsm,
Hybridom HTF-04 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti transferinu v metodách analytických nebo preparativních.
Claims (1)
- Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS HTF-04, produkující monoklonální protilátku podtřídy IgG1 proti lidskému transferinu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS286883A CS235850B1 (cs) | 1983-04-21 | 1983-04-21 | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS286883A CS235850B1 (cs) | 1983-04-21 | 1983-04-21 | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS235850B1 true CS235850B1 (cs) | 1985-05-15 |
Family
ID=5367035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS286883A CS235850B1 (cs) | 1983-04-21 | 1983-04-21 | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS235850B1 (cs) |
-
1983
- 1983-04-21 CS CS286883A patent/CS235850B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS228857B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferům | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS238780B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
| CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS233810B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu | |
| CS222780B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridem | |
| CS228858B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu 6 | |
| CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 | |
| CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 | |
| CS228856B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G | |
| CS222781B1 (en) | Electromotor with friction brake with decreased noise | |
| CS222779B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
| CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
| CS243652B1 (cs) | MySí lyafocytární hybrido· IMG CZAS HP-03 | |
| CS248383B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridem IMG CZAS MEM-09 | |
| CS263122B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridorn produkující protilátku pr >ti lidskému alfa-1'etoproteinu | |
| CS268403B1 (cs) | Myši B-lymfocytárni hybrldomová produkční linie HBS - 01 AO 35/86 | |
| CS263121B1 (cs) | i.iyóí lymfocytúrní hybridom produkující protilátku proti lidskému alfa-fetoproteinu | |
| CS240807B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC - 01 |