CS240807B1 - Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC - 01 - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC - 01 Download PDFInfo
- Publication number
- CS240807B1 CS240807B1 CS128684A CS128684A CS240807B1 CS 240807 B1 CS240807 B1 CS 240807B1 CS 128684 A CS128684 A CS 128684A CS 128684 A CS128684 A CS 128684A CS 240807 B1 CS240807 B1 CS 240807B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- tec
- hybridoma
- antibody
- cells
- granulocytes
- Prior art date
Links
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 title 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 7
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 abstract description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 abstract description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 abstract description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 abstract 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 208000001608 teratocarcinoma Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
fiešení se týká myšího lymfocytárního
hybridomu. produkujícího protilátku proti
membránovému antigenu lidských granulocytů,
uloženého ve sbírce hybridomů Ústavu
molekulární genetiky ČSAV pod označením
TEC-01. Monoklonální protilátka hybridomu
TEC-01 je vhodné pro identifikaci granulocytů
lidské periferní krve a myeloidnícn
leukemickych buněk, jejich eliminaci
z buněčných suspenzi a analýzu cílové antigenní
struktury.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a myší slezinné buňky produkující protilátku proti membránovému antigenu lidských granulocytů.
Doposud se protilátky proti membránovým antigenům lidských granulocytů vyrábějí tak, že granulocyty izolované z lidské krve jsou opakovaně injikovány jako antigen lidským dobrovolníkům nebo pokusným zvířatům (nejčastěji myš, potkan, králík). Sérum takto imunizovaných lidí nebo zvířat, odebírané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek užívaných zejména pro identifikaci a typizaci granulocytů periferní krve. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má řadu nevýhod.
Pro každou imunizaci a testování protilátkové aktivity v sérech je nutné izolovat granulocyty z periferní krve.
V séru imunizovaných lidí i zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém organismu různé a neopakovatelné. Organismus vytváří protilátky proti celé řadě membránových antigenů a specifita sér závisí na způsobu jejich absorbce a testování. Výrobní šarže sér připravených konvenční imunizací je proto obtížné standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud užívaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom produkující protilátku proti membránovému antigenu lidských granulocytů, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská 1083, pod označením IMG CZAS TEC-01.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Kohler, G., Milstein, C.: Gontinuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity, Nátuře, 256:495-497, 1975; Kennett, R.H., McKearn, T.J., Bechtol, K.B. (eds.): Monoclonal antibodies, hybridomas:
240 807 a new dimension in biological analysis, Plenům Press,
New York and London, 1980). Pro fúzi byly použity buňky myší myelomové linie P3-X63~Ag8.653 a buňky získané ze slezin myší kmene BALE/c imunizovaných buňkami teratokarcinomové linie F9.
Lymfocytární hybridom TEC-01 produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která reaguje s lidskými granulocyty a nereaguje s dalšími typy buněk lidské periferní krve (monocyty, lymfocyty, erytrocyty). Hybridom TEC-01 je možno kultivovat in vitro v médiích určených pro savčí buňky a je adaptován pro růst v peritoneální dutině myší BALE/c. Z konserv uchovávaných v kapalném dusíku je možné zahájit produkci protilátek, aniž by bylo nutné provádět imunizace a absorbce sér. Monoklonální protilátka produkovaná hybridomem TEC-01 je specifická pro membránový antigen lidských granulocytů a je prosta jakýchkoliv balastních protilátek.
Příklad:
Za účelem pomnožení buněk hybridomu TEC-01 in vivo bylo aplikováno 10' buněk do peritoneální dutiny BALE/c myši. Aby došlo k větší produkci ascitické tekutiny, byla myš 14 dnů před aplikací hybridomových buněk ovlivněna olejem 2,6,10,14-tetramethylpentadecan (0.5 ml intraperitoneálně). Po 14 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a neprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkově bylo získáno 4 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 12 mg/ml imunoglobulinu třídy IgM.
Monoklonální protilátka reagovala v nepřímém radioimunologickém testu s granulocyty periferní krve až do ředění ascitické tekutiny 1:10^ a nereagovala s lymfocyty ani v ředění 1:10. Výsledky přímého radioimunologického testu a nepřímého imunofluorescenčního testu prokázaly, že z buněk lidské periferní krve pouze granulocyty nesou antigen rozpoznávaný uvedenou protilátkou (viz tabulka).
- 3' 240 807
Tab. Reaktivita protilátek produkovaných hybridomem TEC-01 s buňkami periferní krve
Buňky1
Test použity pro detekci reaktivity
3 radioimunologický imunofluorescenční (imp. min.^) % svítících buněk
Lymfocyty, monocyty 300 <2
Granulocyty 12 400 98
Erytrocyty 100 <0.1 *
Buňky lidské periferní krve byly rozděleny podle hustoty na gradientu Percoll
125 Byl použit přímý radioimunologický test, ve kterém ^1značená monoklonální protilátka (50 000 imp. min.^) byla inkubována 1 h s 0.25 x 10^ buněk a měřena radioaktivita vázaná na buňky
Byl použit nepřímý imunofluorescenční test, ve kterém buňky byly inkubovány s 0.1 mg monoklonální protilátky; nenavázaná protilátka byla odmyta a buňky inkubovány s FlTC-značeným prasečím anti-myším IgM. Po odstranění nenavázané protilátky byly buňky prohlíženy ve fluorescenčním mikroskopu.
Při testování na liniích lidských myeloidních a lymfoidních leukemických buněk, TEC-01 protilátka se vázala pouze na myeloidní leukemické buňky.
Buňky hybridomů TEC-01 mají ultrastrukturní obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3mM) a pyruvát sodný (1mM).
- 4 240 807
Toto médium (označované jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV) je pro kultivaci hybridomu TEC-01 doplněno penicilinem, streptomycinem a teplotně inaktivovaným (56°C, 30 min) bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10%). Hybridom je kultivován při 37°G. Střední generační čas je 14.6 h; za 6 měsíců po sestrojení byl modální počet chromosomů 76. Produkovaná monoklonální protilátka je imunoglobulin třídy IgM, kappa.
Monoklonální protilátka produkovaná myším lymfocytárním hybridomem TEC-01 může být využita ve zdravotnictví k bezpečné identifikaci granulocytů periferní krve, k odliše ní myeloidních leukemických buněk od lymfoidních leukemických buněk, k eliminaci myeloidních leukemických buněk z buněčných suspensí in vitro a k biochemické a biologické analýze cílové antigenní struktury .
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUMyší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC-01, produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti membránovému antigenu lidských granulocytů.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS128684A CS240807B1 (cs) | 1984-02-23 | 1984-02-23 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC - 01 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS128684A CS240807B1 (cs) | 1984-02-23 | 1984-02-23 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC - 01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS240807B1 true CS240807B1 (cs) | 1986-03-13 |
Family
ID=5346875
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS128684A CS240807B1 (cs) | 1984-02-23 | 1984-02-23 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC - 01 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS240807B1 (cs) |
-
1984
- 1984-02-23 CS CS128684A patent/CS240807B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4935343A (en) | Monoclonal antibodies for interleukin-1β | |
| US4350683A (en) | Antibody production from hybrid cell line | |
| JPH0313879B2 (cs) | ||
| EP0274198B1 (en) | Immunoassay kit | |
| CS240807B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC - 01 | |
| Eddy et al. | Preparation of monoclonal antibody to sulfatoxygalactosylglycerolipid by in vitro immunization with a glycolipid-glass conjugate | |
| US4952507A (en) | Production and diagnostic use of antibodies against pancreatic alpha-amaylase | |
| FI93469B (fi) | Menetelmä hybridoomasolulinjan ja sen tuottaman vasta-aineen tuottamiseksi | |
| Gard et al. | A solid-phase β-galactosidase ELISA for detecting and quantifying monoclonal antibody binding to dissociated cell cultures of postnatal rodent cerebellum | |
| CS238248B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MPH-01, produkující protilátku proti mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis | |
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| RU1776691C (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, - продуцент моноклональных антител против J @ Е человека | |
| CS268403B1 (cs) | Myši B-lymfocytárni hybrldomová produkční linie HBS - 01 AO 35/86 | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| JPH01500722A (ja) | 膵臓α‐アミラーゼに対する抗体の産生及び診断への使用 | |
| CS222780B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridem | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| EP0352817A2 (en) | Monoclonal antibody to catecholamine metabolite and quantitative assay for catecholamine metabolite | |
| CS245849B1 (cs) | Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01 | |
| CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
| CS270543B1 (cs) | Myši lymfocytáeny hybridóm VU 2-L/5 | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS270542B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridoma vu cf2 |