CS238248B1 - Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MPH-01, produkující protilátku proti mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MPH-01, produkující protilátku proti mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis Download PDFInfo
- Publication number
- CS238248B1 CS238248B1 CS340784A CS340784A CS238248B1 CS 238248 B1 CS238248 B1 CS 238248B1 CS 340784 A CS340784 A CS 340784A CS 340784 A CS340784 A CS 340784A CS 238248 B1 CS238248 B1 CS 238248B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- mph
- hybridoma
- mycoplasma
- antibody
- producing
- Prior art date
Links
- 241000202938 Mycoplasma hyorhinis Species 0.000 title claims abstract description 15
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 5
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 title claims description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 abstract description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 abstract description 2
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 208000001608 teratocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000204028 Mycoplasma arginini Species 0.000 description 2
- 241000202955 Mycoplasma bovigenitalium Species 0.000 description 2
- 241001148550 Mycoplasma bovirhinis Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002725 anti-mycoplasma Effects 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Vynález se týká myšího lymfocytárního
hybridomu, produkujícího protilátku
třídy IgGj proti prasečím mykoplazmatům
druhu Mycoplasma hyorhinis, uloženého ve
sbírce, hybridomů Ústavu molekulární genetiky
ČSAV pod označením MPH-01. Monoklonální
protilátka hybridomu MPH-01 je
vhodná pro identifikaci izolovaných kmenů
mykolpazmat v klinické veterinární diagnostice,
dále pro identifikaci izolovaných
kmenů mykoplazmat. kontaminujících
buněčné kultury, což muže vysvětlit případný
zdroj kontaminace a také pro případnou
dekontaminaci infikovaných buněčných
kultur.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a myší slezinné buňky produkující protilátku proti mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis, který je patogenní pro prasata a častým kontaminantem buněčných kultur.
Doposud se protilátky proti mykoplazmatům připravují hyperimunizací zvířat (nejčastěji králíků), a to injikováním přibližně 12 imunizačních dávek antigenu po dobu 2-3 měsíců, Sérum takto imunizovaných zvířat slouží jako zdroj protilátek užívaných zejména pro typizaci mykoplazmat. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má řadu nevýhod. Pro každou imunizaci a testování protilátkové aktivity je nutno použít antigen připravený náročným způsobem. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém organismu různé a neopakovatelné. Organismus vytváří protilátky proti celé řadě antigenů a antigenních míst a specificita sér mnohdy závisí na způsobu jejich absorbce a testování.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a doposud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující protilátku proti druhu Mycoplasma hyorhinis, který je uložen ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze, Vídeňská 1083, pod označením IMG CZAS MPH-01.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Kohler, G., Milstein, C.: Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity, Nátuře, 256:495-497, 1975; Kennett, R.H., McKearn, T.J., Bechtol, K.B. (eds.): Monoclonal antibodies, hybridomas: a new dimension in biological analysis, Plenům Press, New York and London, 1980). Pro fúzi byly použity buňky myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a buňky získané ze slezin myší kmene BALE/c imunizovaných buňkami myší teratokarcinomové linie F9, které byly infikovány Mycoplasma hyorhinis.
Lymfocytární hybridom MPH-01 produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která reaguje s kmeny
- 2 238 248 mykoplazmat, náležejícími do druhu Mycoplasma hyorhinis a nereaguje s dalšími druhy mykoplazmat. Hybridom MPH-01 je možno kultivovat in vitro v médiích určených pro savčí buňky a je adaptován pro růst v peritoneální dutině myší BALB/c.
Z konserv uchovávaných v tekutém dusíku je možné zahájit produkci protilátek, aniž by bylo nutné provádět imunizace, absorbce a testování sér. Monoklonélní protilátka produkovaná hybridomem MPH-01 je specifická pro druh o plasma hyorhinis a je prosta jakýchkoliv balastních protilátek.
Příklad:
Za účelem pomnožení buněk hybridomu MPH-01 in vivo bylo aplikováno 10' buněk do peritoneální dutiny BALB/c myši. Aby došlo k větší produkci ascitické tekutiny, byla myš 14 dnů před aplikací hybridomových buněk ovlivněna olejem 2,6,10,14-tetramethylpentadecan (0,5 ml intraperitoneálně). Po 14 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a neprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkově bylo získáno 3 ml ascitické tekutiny.
Monoklonální protilátka reagovala v nepřímém enzymoimunologickém testu s antigenem připraveným z Mycoplasma hyorhinis kmene CCM-M32 (izolovaným z plic prasete) a antigenem Mycoplasma hyorhinis kmene 100 (izolovaným z kultury myších teratokarcinomových buněk) až do ředění ascitické tekutiny 1 : 1,3 x 106. Protilátka přitom nereagovala s prototypovými antigeny druhu Mycoplasma arginini CCM-M43, Mycoplasma bovirhinis CCM-M22 a Mycoplasma bovigenitalium CCM-M62 ani v ředění 1 : 5 (viz tab. 1). Výsledky nepřímého radioimunologického a imunofluorescenčního testu prokázaly, že pomocí této protilátky lze bezpečně určit buňky kontaminované Mycoplasma hyorhinis (viz tab. 2).
Buňky hybridomu MPH-01, které jsou morfologicky podobné buňkám rodičovské myeloidní linie, rostou jako polosuspenzní kultura. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí, doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3mM) a pyruvát sodný (ImM). Toto médium (označované jako H-MEMd, Ústav molekulární
- 3 238 248 genetiky ČSAV) je pro kultivaci hybridomu MPH-01 doplněno penicilinem, streptomycinem a teplotně inaktivovaným (56°C, min) bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané; 10%).
Hybridom je kultivován při 37°C. Střední generační čas je
15,5 h; za 11 měsíců po sestrojení byl modální počet chromozomů 74. .Produkovaná monoklonální protilátka je imunoglobulin třídy IgG^, kappa.
Tab. 1. Reaktivita protilátek produkovaných hybridomem
MPH-01 s antigeny prototypových kmenů mykoplazmat
Antigen Ředění ascitické tekutiny dávající positivní reakci^
Mycoplasma hyorhinis CCM-M32^ 1,3 x 10^
Mycoplasma arginini CCM-M43 <5
Mycoplasma bovirhinis CGM-M22 <5
Mycoplasma bovigenitalium CCM-M62 <5 fi
Mycoplasma hyorhinis 100J 1,3 x 10
Byl použit nepřímý enzymoimunologický test, ve kterém ascitická tekutina z myši s rostoucím hybridomem MPH-01 byla naředěna geometrickou řadou a přidána k antigenu typových .kmenů mykoplasmat. Po inkubaci a odmytí nenavázané protilátky byla přidána peroxidázou značená protilátka králičí anti-myší IgG. Po inkubaci a odstranění nenavázané protilátky byla reakce vyhodnocována spektrofotometricky.
CCM-M - označení kmenů mykoplazmat uvedené v katalogu Československé sbírky mikroorganizmů
Kmen Mycoplasma hyorhinis izolovaný z kultury myších teratokarcinomových buněk.
Monoklonální protilátka produkovaná myším lymfocytárním hybridomem MPH-01 může být využita v klinické veterinární praxi
238 248 pro identifikaci kmenů mykoplazmat, izolovaných z nemocných zvířat, dále v laboratořích pracujících s tkáňovými kulturami, k bezpečné identifikaci Mycoplasma hyorhinis a jimi infikovaných buněk, nebo i k případné dekontaminaci infikovaných buněčných linií a k biochemické a biologické analýze cílové antigenní struktury.
Tab. 2. Reaktivita protilátek produkovaných hybridomem MPH-01 s buňkami infikovanými Mycoplasma hyorhinis
Buňky Test použitý pro detekci reaktivity
2 Radioimunologický Imunofluorescenční (imp. min-^) (% svítících buněk)
Neinfikované 100 <0,1
Infikované 6 700 97
Byl použit nepřímý radioimunologický test, ve kterém myší teratokarcinomové buňky F9 byly inkubovány s kultivačním supernatantem hybridomu MPH-01, nenavázaná protilátka v i os byla odmyta a buňky inkubovány s I-značenými F(ab)£ fragmenty protilátky králičí anti-myší IgG. Po odstranění nenavázané protilátky byla měřena radioaktivita vázaná na buňky.
Byl použit nepřímý imunofluorescenční test, ve kterém v prvním stupni byl použit kultivační supernatant hybridomu MPH-01 a ve druhém stupni FITC-značená protilátka králičí anti-myší IgG.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU238 248Myší lymfocytární hybridom IMG ÓZAS MPH-O1, produkující monoklonální protilátku třídy IgG^ proti mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS340784A CS238248B1 (cs) | 1984-05-08 | 1984-05-08 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MPH-01, produkující protilátku proti mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS340784A CS238248B1 (cs) | 1984-05-08 | 1984-05-08 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MPH-01, produkující protilátku proti mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS238248B1 true CS238248B1 (cs) | 1985-11-13 |
Family
ID=5374027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS340784A CS238248B1 (cs) | 1984-05-08 | 1984-05-08 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MPH-01, produkující protilátku proti mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS238248B1 (cs) |
-
1984
- 1984-05-08 CS CS340784A patent/CS238248B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| YELTON et al. | Use of monoclonal anti-mouse immunoglobulin to detect mouse antibodies | |
| Kintner et al. | Identification of antigenic determinants unique to the surfaces of cells transformed by Epstein–Barr virus | |
| Imai et al. | Differential effect of interferon on the expression of tumor-associated antigens and histocompatibility antigens on human melanoma cells: relationship to susceptibility to immune lysis mediated by monoclonal antibodies. | |
| US5057598A (en) | Monoclonal antibodies reactive with endotoxin core | |
| Alejandro et al. | A ganglioside antigen on the rat pancreatic B cell surface identified by monoclonal antibody R2D6. | |
| US5620890A (en) | Monoclonal antibodies to hygromycin B and the method of making the same | |
| WO1983001739A1 (en) | Monoclonal antibodies against brugia malayi | |
| JPH08512195A (ja) | クラミジアワクチン及びその製造方法 | |
| CS238248B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MPH-01, produkující protilátku proti mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis | |
| Enghofer et al. | Immunoglobulins with different specificities have similar idiotypes | |
| Bankert et al. | Screening and replica plating of anti-hapten hybridomas with a transfer template hemolytic spot assay | |
| METTLER et al. | Monoclonal sperm antibodies: their potential for investigation of sperms as target of immunological contraception | |
| JPS60208925A (ja) | ガン診断と治療のためのモノクロ−ナル抗体の生産法 | |
| US4678746A (en) | Monoclonal antibodies to epizootic hemorrhagic disease virus antigen | |
| Bona et al. | Release from maternally-induced allotypic suppression in rabbit by Nocardia water-soluble mitogen. | |
| EP0581108A2 (en) | Bispecific antibody reactive with sialyl-Lea antigen and CD3 | |
| Koyama et al. | Monoclonal antibody against human gallbladder carcinoma-associated antigen | |
| EP0093774A1 (en) | Monoclonal antibodies against leishmania | |
| WO1983001837A1 (en) | Monoclonal antibodies against schistosoma | |
| CS240807B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC - 01 | |
| CA1294905C (en) | Anti-lafora body monoclonal antibody | |
| WO1986003498A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| JPS62500587A (ja) | モノクロ−ナル抗体およびその用途 | |
| CS228856B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G | |
| JPS62180270A (ja) | インタ−フエロン−γの免疫化学的測定法および測定用試薬 |