CS233810B1 - Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu Download PDFInfo
- Publication number
- CS233810B1 CS233810B1 CS171183A CS171183A CS233810B1 CS 233810 B1 CS233810 B1 CS 233810B1 CS 171183 A CS171183 A CS 171183A CS 171183 A CS171183 A CS 171183A CS 233810 B1 CS233810 B1 CS 233810B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- human insulin
- insulin
- piggish
- lymphocytoid
- mousy
- Prior art date
Links
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 title claims abstract description 8
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 title claims abstract description 8
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 claims description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 abstract description 12
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 abstract description 9
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 abstract description 7
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 abstract description 7
- 241000282887 Suidae Species 0.000 abstract 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- -1 captomtomol Chemical compound 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Vynález se týká myáího lymfocytárního
hybridomů, produkujícího protilátku
proti praseSímu a lidskému insulinu,
uloženého ve sbírce hybridomů Ústavu
molekulární genetiky ČSAV pod oznaSením
IN-05. Samotná monoklonální protilátka
hybrodmu IN-05 je vhodná pro použití
v enzymoimunologická a radioimunologické
analýze a pro SiStění insulinu afinitní
chromatografií.
Description
Vynález β· týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fází baňky myší myeloaové linie P3-X63-Ag8.653 a myší elezinné lymfoidní baňky, produkující protilátka proti prasečímu a lidskému insulinu.
Doposud se protilátky proti insulinu vyrábějí tak, že je insulin opakované injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji morčatům. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době působení antigonu, slouží jako zdroj protilátek, užívanýeh zejména pro kvantitativní stanovení plasnatiokého insulinu metodou radioimunologické analýzy. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séra imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigonu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu. Výrobní šarže konvenčníeh sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a dalěí antigeny pro vysyeení balastních protilátek proti nečistotám.
Uvedené nedostatky výěe zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k disposici hybridem, produkující monoklonální protilátku proftřl insulinu, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky. ČSAV v Praze 4, Vídeňská č. 1083, pod označením IK6 CZAS ΏΓ-05.
Uvedený hybridem byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth, S., Schoidigger, D.: Produotion of monoclonal antibodies: Stratégy and tactios, J. Immunol. Meth·, 35:1-21, 1980} Galfré, G., Hově, S.C.,
- 3 233 810
Mlstein, C., Butoher, G.W., Howard, J.C.: Antibodiea t© major histoeompatibility antigens produced by hybrid cell llaoa, Bature 266:550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fusí buněk myší myelomové linie P3-X63-AgG. 653 a buněk, získaných ze sleziny myěí kmene BalbZc, imunizovaných prasečím insulinem.
Výhodou hybridami jo, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklenální, která je sehopna specificky reagovat s prasečím i lidským insulinem. Hybrido» ZB-G5 je možně kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a jo adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BalbZc. Z konserv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalěího antlgenu. Protilátka, produkovaná hybridomem H-05, reaguje jak s prasečím, tak lidským insulinem (tj. rozeznává determinantu společnou pro tyto dva velmi podobné peptidy) a není třeba se zbavovat protilátek balast nich.
Příklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 5 x Ιθθ buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 14 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (Θ.5 ml lntraperitoneálně). Po 22 dnech růstu hýbridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a neprodukovaná asoitioká tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 2.5 ml asoitieké tekutiny, která obsahovala 11 mgZml imunoglobulinu. Protilátka reagovala se specifickým antigenem (lidským nebo prasečím insulinem) v enzymoimunologickém testu (při použití prasečí antimyší protilátky značené křenovou peroxidázou) až do ředění l:loL Po navázání protilátky na agarosový gol bylo možno na tomto imunosorbentu izolovat insulin metodou afinitní chromátografie.
233 810
Buňky hýbridomu IH-05 nají ultrastruktumí obraz typických myelomových buněk. Banky hybridovi nají dra typy jader. První typ má tvar kulovitý, druhý typ jo eharaktorisován značnou polymorflí. Cytoplaama obou typů obsahuje velké množství polyrlbosonů, nitoohondrle a slabě vyvinuté endoplasmatieké retikulum. In vitro rostou jako polosuspensní kultury. Základním kultivačním médiem je Bagleve minimální esenciální médium s Haaksovou solnou směsí doplněné o noosoneiální aminokyseliny, L-glutamin (3 ml), pyruvát sodný (1 *). Toto médium (označované jako H-MBMo, Ústav molekulární genetiky ČSAV) jo pro kultivaci hybridonu IH-O5 doplněno penicilinem, stroptomyolnom, gentamycinem, 2-morkaptoetanelem (0.05 mH) pufrem HEPES (10 mM) a inaktivovaným bovinnín sérem (Biovota, Ivanovice na Hané, 10%). Hybridem jo kultivován při 37°C. Střední generační Sas jo 19.8 hod. a 10 měsíců po sestrojonl byl modální počet chromosomů 91. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgGl s lehkými řetěze! typu tc, její iseelektrlcký bod je v rozmezí pH 6.2-6,4.
Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem IH-05 reaguje specificky s prasečím a lidským insulinem.
Hybridom IH-05 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti insulinu v metodách analytických nebo proparatlvníoh.
Monoklonální protilátka hýbridomu IH-05 může být využita pro analytické stanovení insulinu při klinické diagnostice v zdravotnických zařízeních, zvláště endokrinologicky zaměřených. Zmobilizované monoklonální protilátky může být použito k čištění insulinu pomocí afinitní chromatografio.
Claims (1)
- pSbdbžt vii/le zn233 810 lymfooytární hybridem DíG CZAS UJ-05, produkující monoklonální protilátku podtřídy IgGl proti prasečími a lidskému insulinu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS171183A CS233810B1 (cs) | 1983-03-11 | 1983-03-11 | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS171183A CS233810B1 (cs) | 1983-03-11 | 1983-03-11 | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS233810B1 true CS233810B1 (cs) | 1985-03-14 |
Family
ID=5352175
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS171183A CS233810B1 (cs) | 1983-03-11 | 1983-03-11 | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS233810B1 (cs) |
-
1983
- 1983-03-11 CS CS171183A patent/CS233810B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR880000585A (ko) | 임파선증 결합 바이러스에 대한 인체 모노클로날항체 | |
| EP0111344A2 (en) | Anti-interleukin-2 monoclonal antibodies | |
| CS233810B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS228857B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferům | |
| CS228856B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G | |
| CS228858B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu 6 | |
| CS238780B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS222781B1 (en) | Electromotor with friction brake with decreased noise | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS234935B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 | |
| CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 | |
| CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
| CS222780B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridem | |
| CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS248383B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridem IMG CZAS MEM-09 | |
| CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
| CS255844B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu | |
| CS222779B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS243652B1 (cs) | MySí lyafocytární hybrido· IMG CZAS HP-03 |