CS255844B1 - Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu Download PDFInfo
- Publication number
- CS255844B1 CS255844B1 CS868199A CS819986A CS255844B1 CS 255844 B1 CS255844 B1 CS 255844B1 CS 868199 A CS868199 A CS 868199A CS 819986 A CS819986 A CS 819986A CS 255844 B1 CS255844 B1 CS 255844B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- acrosine
- monoclonal antibody
- mouse
- hybridoma
- antibody against
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytámího
hybridomu, produkujícího protilátku proti
prasečímu akrozínu (beta-formě akrozínu).,
uloženého ve sbírce hybridomů Ostavu
molekulární genetiky ČSAV pod označením
MO.AKR.l. Samotná monoklonální protilátka
hybridomu MO.AKR.l je vhodná pro použití
v radioimunologické nebo enzymoimunologické
analýze pro stanovení množství prasečího
akrozínu.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného buněčnou fúzí. myší myelomové linie SP 2/0 - Ag 14 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti prasečímu akrozínu.
Pokud se vyrábějí protilátky proti akrozínu, vyrábějí se tak, že je akrozín opakovaně injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji myším nebo potkanům. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebrané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných pro stanovení akrozínu u poškozených spermií. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat vysycováním. šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a další antigeny.pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám. Konvenční protilátka proti akrozínu často reaguje s proakrozínem, který se nachází v nepoškozených spermiích a proto nelze jednoznačně takovou protilátkou určit míru poškození spermií, která je dána uvolněním enzymu akrozínu.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu, uložený ve Sbírce hybridomů Ostavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská č. 1 083, pod označením IMG CZAS MO.AKR 1.
Uvedený -hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth, s., Schei.digger, .0.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol. Met., 35: 1 až 21 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard,
J. C.: Antibodies tó major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře 266: 550,' 1977)· klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí myší myelomové linie SP 2/0-Ag 1.4 a' buněk, získaných ze sleziny myší kmene BALB/c, imunizovaných akrozínem.
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní .protilátku tzv. protilátku monoklonální, která je schopná' specificky reagovat s prasečím akrozínem (specificky s beta-formou akrozínu). Hybridom MO.AKR 1 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konserv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky běz dalšího antigenu.
Příklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk/in vivo bylo aplikováno 1,5.10® buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 10 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po 16 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 5 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 7 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka obsažená v ascitické tekutině reaguje specificky s beta-akrozínem v ELISA testu do ředění (10 ). Specifita monoklonální protilátky byla dále zjišťována po elektroforetickém přenosu antigenu děleného SDS PAGE (Laemmli, U. K., Nátuře, 227:680, 1970) na nitrocelulosovou membránu a detekci nepřímým enzymoimunologickým testem (Towbin, H., a spol., Proč, Nať. Acad. Sci., 76:4 350, 1979). Monoklonální protilátka (MO.AKR 1) reagovala pouze ze zonou odpovídající molekulové hmotnosti beta-akrozínu (m. v. 34 000).
Buňky hybridomu MO.AKR 1 mají ultrastrukturální obraz typických myelovových buněk. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je médium RPMI 1 640 (Moore, G. E. a spol. J. Am. Med. Assoc., 199:519, 1967) připravené Ostavem molekulární genetiky ČSAV, doplněné glutaminem, merkaproetanolem, HEPES-em, antibiotiky a 10% telecího séra (Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridom je kultivován při 37 °C a 5% CO2. Střední generační čas je 16,7 hod. Modální počet chromosomů je 86.
Hybridom MO.AKR 1 může být průmyslově využíván jako zdroj protilátky proti prasečímu akrozínu. Protože protilátka specificky reaguje s beta-formou akrozínu, lze pomocí této protilátky stanovit množství uvolněného akrozínu u poškozených spermií a tím otestovat různé inseminační dávky spermatu po rozmražení a vybrat vhodné (fertilní, nepoškozené) pro inserainaci.
Claims (1)
- Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MO.AKR 1, produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu beta-formě.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS868199A CS255844B1 (cs) | 1986-11-12 | 1986-11-12 | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS868199A CS255844B1 (cs) | 1986-11-12 | 1986-11-12 | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CS819986A1 CS819986A1 (en) | 1987-07-16 |
CS255844B1 true CS255844B1 (cs) | 1988-03-15 |
Family
ID=5432236
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CS868199A CS255844B1 (cs) | 1986-11-12 | 1986-11-12 | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CS (1) | CS255844B1 (cs) |
-
1986
- 1986-11-12 CS CS868199A patent/CS255844B1/cs unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CS819986A1 (en) | 1987-07-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Knowles et al. | Monoclonal antibody detecting a stage-specific embryonic antigen (SSEA-1) on preimplantation mouse embryos and teratocarcinoma cells | |
JPH0819160B2 (ja) | ジゴキシンに対し高い親和性を有するモノクローナル抗体を産生するハイブリッドセルライン及びその製造法 | |
CS255844B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu | |
CS259995B1 (cs) | Myší lymfooytární hybridom produkující o monoklonální protilátku proti akrozínu | |
Joling et al. | Intrathymic differentiation in the rat | |
US4873189A (en) | Monoclonal antibodies to bluetongue virus antigen | |
JPH06153979A (ja) | 魚類イリドウイルスに対するモノクローナル抗体並びに該抗体を製造するためのハイブリドーマ及び方法 | |
CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 | |
CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
CS233810B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu | |
CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
SU1742324A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток MUS мUSсULUS L., используемый дл получени высокоспецифичных моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
CS228857B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferům | |
SU1454850A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных мUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к J @ G человека и высших обезь н | |
CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
CS222780B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridem | |
KR920008367B1 (ko) | 프로제스테론 홀몬의 특이항체 분비 세포주 | |
SU1712411A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к иммуноглобулину G павианов | |
CS238780B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 | |
CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
JPS6344894A (ja) | 抗ヒト血清アルブミンモノクロ−ナル抗体およびその製法 | |
CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 |