CS255844B1 - Mouse lymphocytaric hybridom producing monoclonal antibody against piggish acrosine - Google Patents

Mouse lymphocytaric hybridom producing monoclonal antibody against piggish acrosine Download PDF

Info

Publication number
CS255844B1
CS255844B1 CS868199A CS819986A CS255844B1 CS 255844 B1 CS255844 B1 CS 255844B1 CS 868199 A CS868199 A CS 868199A CS 819986 A CS819986 A CS 819986A CS 255844 B1 CS255844 B1 CS 255844B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
acrosine
monoclonal antibody
mouse
hybridoma
antibody against
Prior art date
Application number
CS868199A
Other languages
Czech (cs)
Other versions
CS819986A1 (en
Inventor
Jana Peknicova
Jana Capkova
Dana Cechova
Brigita Sulcova
Original Assignee
Jana Peknicova
Jana Capkova
Dana Cechova
Brigita Sulcova
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jana Peknicova, Jana Capkova, Dana Cechova, Brigita Sulcova filed Critical Jana Peknicova
Priority to CS868199A priority Critical patent/CS255844B1/en
Publication of CS819986A1 publication Critical patent/CS819986A1/en
Publication of CS255844B1 publication Critical patent/CS255844B1/en

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Řešení se týká myšího lymfocytámího hybridomu, produkujícího protilátku proti prasečímu akrozínu (beta-formě akrozínu)., uloženého ve sbírce hybridomů Ostavu molekulární genetiky ČSAV pod označením MO.AKR.l. Samotná monoklonální protilátka hybridomu MO.AKR.l je vhodná pro použití v radioimunologické nebo enzymoimunologické analýze pro stanovení množství prasečího akrozínu.The solution relates to mouse lymphocyte antibody-producing hybridoma porcine acrosine (beta-acrosine). deposited in the Ostavu hybridoma collection molecular genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences under the designation MO.AKR.l. Monoclonal antibody alone hybridoma MO.AKR.1 is suitable for use radioimmunoassay or enzymimmunologic analysis to determine the amount of porcine acrosine.

Description

Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného buněčnou fúzí. myší myelomové linie SP 2/0 - Ag 14 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti prasečímu akrozínu.The invention relates to a novel hybridoma, i.e. a hybrid unicellular organism, constructed by cell fusion. mouse myeloma lines SP 2/0 - Ag 14; and mouse spleen lymphoid cells producing anti-porcine acrosin antibody.

Pokud se vyrábějí protilátky proti akrozínu, vyrábějí se tak, že je akrozín opakovaně injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji myším nebo potkanům. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebrané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných pro stanovení akrozínu u poškozených spermií. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat vysycováním. šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a další antigeny.pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám. Konvenční protilátka proti akrozínu často reaguje s proakrozínem, který se nachází v nepoškozených spermiích a proto nelze jednoznačně takovou protilátkou určit míru poškození spermií, která je dána uvolněním enzymu akrozínu.When anti-acrosin antibodies are produced, they are made by repeatedly injecting the acrosin as an antigen into test animals, most commonly mice or rats. The serum of the immunized animals collected after a period of antigen treatment serves as a source of antibodies used to determine acrosin in damaged spermatozoa. This procedure, called conventional immunization, has several disadvantages. In the serum of immunized animals there is a heterogeneous mixture of antibodies whose spectrum varies and does not repeat in each individual organism. As a rule, the organism will produce antibodies to the impurities of the antigen preparation in addition to the antibodies to the antigen of interest; these must be removed from the sera by saturation. therefore, batches of conventional sera are difficult to standardize and come in a wide quality range. Pure immunization antigen and other antigens should be prepared for each batch to saturate ballast antibodies against impurities. A conventional anti-acrosin antibody often reacts with proacrosin, which is found in undamaged spermatozoa, and therefore the degree of sperm damage caused by the release of the acrosin enzyme cannot be clearly determined by such an antibody.

Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu, uložený ve Sbírce hybridomů Ostavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská č. 1 083, pod označením IMG CZAS MO.AKR 1.The above mentioned drawbacks of the above-mentioned and hitherto used procedure will be eliminated if a hybridoma producing a monoclonal antibody against porcine acrosine, deposited in the Collection of Hybridomas of the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences in Prague 4, Vídeňská No. 1,083, is available IMG CZAS MO.AKR 1.

Uvedený -hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth, s., Schei.digger, .0.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol. Met., 35: 1 až 21 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard,The hybridoma was obtained by a method known in the literature (Fazekas de St. Groth, p., Schei.digger, 1990: Production of monoclonal antibodies: Strategies and tactics, J. Immunol. Met., 35: 1-21 21 1980) Galfré, G., Howe, SC, Milstein, C., Butcher, GW, Howard,

J. C.: Antibodies tó major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře 266: 550,' 1977)· klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí myší myelomové linie SP 2/0-Ag 1.4 a' buněk, získaných ze sleziny myší kmene BALB/c, imunizovaných akrozínem.· Cloning of a set of hybrid cells resulting from the fusion of mice of the myeloma line SP 2/0-Ag 1.4 and 'cells obtained from the spleen of BALB / mouse mice c, immunized with acrosin.

Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní .protilátku tzv. protilátku monoklonální, která je schopná' specificky reagovat s prasečím akrozínem (specificky s beta-formou akrozínu). Hybridom MO.AKR 1 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konserv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky běz dalšího antigenu.The advantage of the hybridoma is that it produces a homogeneous antibody, the so-called monoclonal antibody, which is capable of specifically reacting with porcine acrosin (specifically with the beta-form of acrosin). MO.AKR 1 hybridoma can be cultured in vitro in animal cell media and is adapted for growth in vivo in the peritoneal cavity of BALB / c mouse mice. From preserves stored in liquid nitrogen, production of the antibody can be initiated from another antigen.

PříkladExample

Za účelem pomnožení hybridomových buněk/in vivo bylo aplikováno 1,5.10® buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 10 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po 16 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 5 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 7 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka obsažená v ascitické tekutině reaguje specificky s beta-akrozínem v ELISA testu do ředění (10 ). Specifita monoklonální protilátky byla dále zjišťována po elektroforetickém přenosu antigenu děleného SDS PAGE (Laemmli, U. K., Nátuře, 227:680, 1970) na nitrocelulosovou membránu a detekci nepřímým enzymoimunologickým testem (Towbin, H., a spol., Proč, Nať. Acad. Sci., 76:4 350, 1979). Monoklonální protilátka (MO.AKR 1) reagovala pouze ze zonou odpovídající molekulové hmotnosti beta-akrozínu (m. v. 34 000).To enhance hybridoma cells / in vivo, 1.5 x 10 6 cells were injected into the peritoneal cavity of mice. To improve attachment of the cells applied, the mouse was treated with paraffin oil (0.5 ml intraperitoneally) 10 days prior to transfer of the hybridoma cells. After 16 days of hybridoma growth in the peritoneal cavity, the mouse was killed and the produced ascites fluid was collected. A total of 5 ml of ascites fluid containing 7 mg / ml immunoglobulin was obtained. The monoclonal antibody contained in the ascites fluid reacts specifically with beta-acrosin in the ELISA assay until dilution (10). The specificity of the monoclonal antibody was further determined by electrophoretic transfer of an antigen separated by SDS PAGE (Laemmli, UK, Nature, 227: 680, 1970) to a nitrocellulose membrane and detected by an indirect enzyme-immunoassay (Towbin, H., et al., Proc, Nat'Ac. Acad. Sci., 76: 4,350, 1979). The monoclonal antibody (MO.AKR 1) reacted only with a zone corresponding to the molecular weight of beta-acrosine (m. V. 34,000).

Buňky hybridomu MO.AKR 1 mají ultrastrukturální obraz typických myelovových buněk. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je médium RPMI 1 640 (Moore, G. E. a spol. J. Am. Med. Assoc., 199:519, 1967) připravené Ostavem molekulární genetiky ČSAV, doplněné glutaminem, merkaproetanolem, HEPES-em, antibiotiky a 10% telecího séra (Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridom je kultivován při 37 °C a 5% CO2. Střední generační čas je 16,7 hod. Modální počet chromosomů je 86.MO.AKR 1 hybridoma cells have an ultrastructural pattern of typical myelic cells. They grow in vitro as semi-suspension cultures. The basic culture medium is RPMI 1640 (Moore, GE et al. J. Am. Med. Assoc., 199: 519, 1967) prepared by the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences, supplemented with glutamine, mercaproethanol, HEPES, antibiotics and 10% veal. serum (Bioveta, Ivanovice na Hané). The hybridoma is cultured at 37 ° C and 5% CO 2 . The mean generation time is 16.7 hours. The modal number of chromosomes is 86.

Hybridom MO.AKR 1 může být průmyslově využíván jako zdroj protilátky proti prasečímu akrozínu. Protože protilátka specificky reaguje s beta-formou akrozínu, lze pomocí této protilátky stanovit množství uvolněného akrozínu u poškozených spermií a tím otestovat různé inseminační dávky spermatu po rozmražení a vybrat vhodné (fertilní, nepoškozené) pro inserainaci.The MO.AKR 1 hybridoma can be industrially used as a source of anti-porcine acrosin antibody. Since the antibody specifically reacts with the beta-form of acrosin, this antibody can be used to determine the amount of acrosine released in damaged spermatozoa, thereby testing various semen insemination doses after thawing and selecting appropriate (fertile, undamaged) for inseraination.

Claims (1)

Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MO.AKR 1, produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu beta-formě.Mouse lymphocyte hybridoma IMG CZAS MO.AKR 1, producing a monoclonal antibody against porcine acrosin beta-form.
CS868199A 1986-11-12 1986-11-12 Mouse lymphocytaric hybridom producing monoclonal antibody against piggish acrosine CS255844B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS868199A CS255844B1 (en) 1986-11-12 1986-11-12 Mouse lymphocytaric hybridom producing monoclonal antibody against piggish acrosine

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS868199A CS255844B1 (en) 1986-11-12 1986-11-12 Mouse lymphocytaric hybridom producing monoclonal antibody against piggish acrosine

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS819986A1 CS819986A1 (en) 1987-07-16
CS255844B1 true CS255844B1 (en) 1988-03-15

Family

ID=5432236

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS868199A CS255844B1 (en) 1986-11-12 1986-11-12 Mouse lymphocytaric hybridom producing monoclonal antibody against piggish acrosine

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS255844B1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
CS819986A1 (en) 1987-07-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Williams et al. Thymic B lymphocyte clones from patients with myasthenia gravis secrete monoclonal striational autoantibodies reacting with myosin, alpha actinin, or actin.
Knowles et al. Monoclonal antibody detecting a stage-specific embryonic antigen (SSEA-1) on preimplantation mouse embryos and teratocarcinoma cells
JPH0819160B2 (en) Hybrid cell line producing monoclonal antibody having high affinity for digoxin and method for producing the same
CS255844B1 (en) Mouse lymphocytaric hybridom producing monoclonal antibody against piggish acrosine
CS259995B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome producing monocline antibody against acrosine
Joling et al. Intrathymic differentiation in the rat
US4873189A (en) Monoclonal antibodies to bluetongue virus antigen
JPH06153979A (en) Monoclonal antibody against fish iridovirus, hybridoma for producing the antibody and production method
CS253336B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome img czas rt-12
CS239800B1 (en) Mouse-type lymphocytic hybridon imgcastu-04
CS233810B1 (en) Mousy lymphocytoid hybride generating antimatter against piggish and human insulin
CS247450B1 (en) Mousy lymphocyte hybridom img czas ma-01
CS223535B1 (en) Mice lymfocytarous hybridon
SU1742324A1 (en) Strain of hybridous cultured cells mus musculus l., used for preparation of high-specific monoclonal antibodies to human thyreotropin
CS253337B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome img czas tr-14
CS235850B1 (en) Mousy lymphocytare hybridome producing anti-matter against human transferine
CS228857B1 (en) Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance a
SU1454850A1 (en) Strain of hybrid cultivable cells of mus musculus animals for producing monoclonal antibodies to igc of man and higher primates
CS240846B1 (en) Mouse lymphatic hybridom img czas in-%4
CS222780B1 (en) Mice lymphocytar hydridom
KR920008367B1 (en) Hybridoma for progesterone
SU1712411A1 (en) Strain of hybridous cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibodies to immunoglobulin g of baboons
CS243348B1 (en) Mousy lymphocytoid hybridom img-czas hft-21
JPS6344894A (en) Anti-human serum albumin monoclonal antibody and production thereof
CS244398B1 (en) Mousy lymphocytoid hybridome img-czas al 01