CS253336B1 - Mouse lymphocytar hybridome img czas rt-12 - Google Patents

Mouse lymphocytar hybridome img czas rt-12 Download PDF

Info

Publication number
CS253336B1
CS253336B1 CS863522A CS352286A CS253336B1 CS 253336 B1 CS253336 B1 CS 253336B1 CS 863522 A CS863522 A CS 863522A CS 352286 A CS352286 A CS 352286A CS 253336 B1 CS253336 B1 CS 253336B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
mouse
hybridoma
reverse transcriptase
lymphocytar
hybridome
Prior art date
Application number
CS863522A
Other languages
Czech (cs)
Other versions
CS352286A1 (en
Inventor
Sergej Beresten
Vladimir Viklicky
Ludmila Frolova
Blanka Macku
Miloslav Travnicek
Lev Kiselev
Josef Riman
Original Assignee
Sergej Beresten
Vladimir Viklicky
Ludmila Frolova
Blanka Macku
Miloslav Travnicek
Lev Kiselev
Josef Riman
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sergej Beresten, Vladimir Viklicky, Ludmila Frolova, Blanka Macku, Miloslav Travnicek, Lev Kiselev, Josef Riman filed Critical Sergej Beresten
Priority to CS863522A priority Critical patent/CS253336B1/en
Publication of CS352286A1 publication Critical patent/CS352286A1/en
Publication of CS253336B1 publication Critical patent/CS253336B1/en

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Řešení se týká myšího lymfocytárního hybridomu produkujícího protilátku proti reverzní transkriptáze, uloženého ve Sbírce Thybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV· pod označením RT-12. Monoklonální protilátka hybridomu RT-12 je vhodná pro použití v metodách enzymoimunologických, radioimunologických a preparativních.The present invention relates to mouse lymphocytic antibody-producing hybridoma reverse transcriptase deposited in the Collection Thybridoma Institute of Molecular Genetics CSAV · under the designation RT-12. Monoclonal antibody the hybridoma RT-12 is suitable for use in enzymimmunological, radioimmunological methods and preparative.

Description

(54) Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12(54) IMG CZAS RT-12 murine lymphocyte hybridoma

Řešení se týká myšího lymfocytárního hybridomu produkujícího protilátku proti reverzní transkriptáze, uloženého ve Sbírce Thybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV· pod označením RT-12. Monoklonální protilátka hybridomu RT-12 je vhodná pro použití v metodách enzymoimunologických, radioimunologických a preparativních.The invention relates to a murine lymphocyte hybridoma producing an anti-reverse transcriptase antibody deposited in the Thybridoma Collection of the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences under the designation RT-12. The monoclonal antibody of the RT-12 hybridoma is suitable for use in enzymatic, radioimmunological and preparative methods.

Vynález se týká nového hybridomu, t j . hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie Sp 2/0-Ag 14 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti reverzní transkriptáze.The invention relates to a novel hybridoma, i. a hybrid unicellular organism constructed by fusing a mouse cell of the myeloma line Sp 2/0-Ag 14 and a mouse spleen lymphoid cell producing an antibody against reverse transcriptase.

Doposud se protilátky proti reverzní transkriptáze připravuji tak, že je reverzní transkriptáza opakovaně injikována jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům; Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době po podáni antigenu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných především pro kvalitativní stanovení reverzní transkriptázy a k izolaci vysoce čistých preparátů tohoto enzymu. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejich spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat vysycováriím. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a další antigeny pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám.To date, antibodies against reverse transcriptase have been prepared by repeatedly injecting reverse transcriptase as an antigen into test animals, most commonly rabbits; The serum of the immunized animals, taken some time after antigen administration, serves as a source of antibodies used primarily for the qualitative determination of reverse transcriptase and for the isolation of highly purified preparations of this enzyme. This procedure, called conventional immunization, has several disadvantages. The serum of immunized animals contains a heterogeneous mixture of antibodies, the spectrum of which varies from one organism to another and does not repeat. As a rule, the organism will produce antibodies to the impurities of the antigen preparation in addition to the antibodies to the antigen of interest; these must be removed from the sera by saturation. Consequently, batches of conventional sera are difficult to standardize and are based on production in a wide quality range. For the manufacture of each batch, a pure immunization antigen and other antigens to saturate the ballast antibodies against impurities should be prepared.

Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti reverzní transkriptáze, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská ul. 1083, pod označením IMG CZAS RT-12.The above mentioned drawbacks of the above-mentioned and hitherto used procedure will be eliminated if a hybridoma producing a monoclonal antibody against reverse transcriptase, deposited in the Collection of Hybridomas of the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences in Prague 4, Vídeňská street 1083, is available IMG CZAS RT-12.

Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth, S., Scheidegger, D.: Production of monoolonal antibodies. Stratégy and tactics. J. Immunol. Meth., 35: 1-21, 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard, J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš. Nátuře 266: 550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzi buněk myší myelomové linie Sp 2/D-Ag 14 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene 810.A imunizovaných reverzní transkriptázou izolovanou z virusu ptačí myeloblastózy (AMV) o 50% čistotě.The hybridoma was obtained by a method known in the literature (Fazekas de St. Groth, S., Scheidegger, D .: Production of monoolonal antibodies. Strategies and tactics. J. Immunol. Meth., 35: 1-21, 1980; G., Howe, SC, Milstein, C., Butcher, GW, Howard, JC: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell line (Nature 266: 550, 1977) 2 / D-Ag 14 and cells obtained from the spleen of mouse 810.A mice immunized with reverse transcriptase isolated from avian myeloblastosis virus (AMV) of 50% purity.

Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s oběma podjednotkami reverzní transkriptázy, jak bylo zjištěno po přenosu virových proteinů (separovaných na elektroforéze za redukujících podmínek) na nitrocelulózovou membránu a po specifické detekci nepřímým imunologickým testem (s využitím protilátky RT-12 a prasečí protilátky proti myšímu imunoglobulinukonjugované s peroxidázou; ÚSOL, Praha). V dalších pokusech nebyl prokázán blokovací efekt protilátky na enzymatickou aktivitu izolované reverzní transkriptázy.The advantage of the hybridoma is that it produces a homogeneous antibody, the so-called monoclonal antibody, which is capable of reacting specifically with both reverse transcriptase subunits, as detected after transfer of viral proteins (separated by reducing electrophoresis) to nitrocellulose membrane and specific detection by indirect immunoassay. (using RT-12 antibody and porcine anti-mouse antibody conjugated to peroxidase; ÚSOL, Prague). In other experiments, the blocking effect of the antibody on the enzymatic activity of the isolated reverse transcriptase was not demonstrated.

Hybridom RT-12 je možno kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší hybridů F^ (BIO.A + BALB/c). Z konzerv hybridomových buněk uchovávaných v kapalném dusíku je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu.The RT-12 hybridoma can be cultured in vitro in animal cell media and is adapted for growth in vivo in the peritoneal cavity of mouse F4 hybrids (BIO.A + BALB / c). From canned hybridoma cells stored in liquid nitrogen, antibody production can be initiated without additional antigen.

PřikladExample

Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 2x10® buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 10 dní před převodem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po 12 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 3,0 ascitické tekutiny, která obsahovala 5 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka reagovala se specifickým antigenem v enzymoimunologickém testu (při použití prasečí antimyší protilátky značené křenovou peroxidázou) až do ředění 1:10®.To expand the hybridoma cells in vivo, 2x10 6 cells were injected into the peritoneal cavity of mice. To improve attachment of the cells applied, the mouse was treated with paraffin oil (0.5 ml intraperitoneally) 10 days prior to transfer of the hybridoma cells. After 12 days of hybridoma growth in the peritoneal cavity, the mouse was killed and the produced ascites fluid collected. A total of 3.0 ascites fluids were obtained which contained 5 mg / ml immunoglobulin. The monoclonal antibody reacted with the specific antigen in an enzyme-immunoassay (using a horseradish peroxidase labeled porcine anti-mouse antibody) up to a 1: 10 ® dilution.

Buňky hybridomu RT-12 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3 mM), pyruvát sodný (1 mM). Toto médium (označené jako H-MEMd, Ostav molekulární genetiky ČSAV), je pro kul tivaci hybridomu RT-12 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoestanolem (0,05 nM), pufrem HEPES (10 nM) a inaktivovaným bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10%). Hybridom je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 16,4 hod. a 13 měsíců po sestrojení byl modální počet chromosomů 79. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgG 2b s lehkými řetězci typu kappa, její izoelektrický bod je pH 7,1-7,3.RT-12 hybridoma cells have an ultrastructural pattern of typical myeloma cells where the predominant organelle is free and membrane-bound polyribosomes. They grow in vitro as semi-suspension cultures. The basic culture medium is Eagle's minimum essential medium with Hanks salt mixture supplemented with non-essential amino acids, L-glutamine (3 mM), sodium pyruvate (1 mM). This medium (designated as H-MEMd, the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences) is supplemented with penicillin, streptomycin, gentamycin, 2-mercaptoestanol (0.05 nM), HEPES buffer (10 nM) and inactivated bovine serum to cultivate RT-12 hybridoma. (Bioveta, Ivanovice na Hane, 10%). The hybridoma is cultured at 37 ° C. The mean generation time is 16.4 h and 13 months after construction, the modal number of chromosomes was 79. The antibody produced is monoclonal immunoglobulin of subclass IgG 2b with kappa light chains, its isoelectric point is pH 7.1-7.3.

Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem RT-12 reaguje specificky s reverzní transkriptázou.The monoclonal antibody produced by the RT-12 hybridoma reacts specifically with reverse transcriptase.

Hybridom RT-12 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti reverzní transkriptáze v metodách analytických nebo preparativních.RT-12 can be used industrially as a source of a monoclonal antibody against reverse transcriptase in analytical or preparative methods.

Claims (1)

PŘEDMĚT VYNÁLEZUSUBJECT OF THE INVENTION Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 produkující monoklonální protilátku podtřídy IgG 2b proti reverzní transkriptáze ptačí myoblastózy.IMG CZAS RT-12 mouse lymphocyte hybridoma producing a monoclonal antibody of IgG 2b subclass against avian myoblastosis reverse transcriptase.
CS863522A 1986-05-15 1986-05-15 Mouse lymphocytar hybridome img czas rt-12 CS253336B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS863522A CS253336B1 (en) 1986-05-15 1986-05-15 Mouse lymphocytar hybridome img czas rt-12

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS863522A CS253336B1 (en) 1986-05-15 1986-05-15 Mouse lymphocytar hybridome img czas rt-12

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS352286A1 CS352286A1 (en) 1987-03-12
CS253336B1 true CS253336B1 (en) 1987-11-12

Family

ID=5375569

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS863522A CS253336B1 (en) 1986-05-15 1986-05-15 Mouse lymphocytar hybridome img czas rt-12

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS253336B1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
CS352286A1 (en) 1987-03-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH0819160B2 (en) Hybrid cell line producing monoclonal antibody having high affinity for digoxin and method for producing the same
CN113621583A (en) Hybridoma cell strain secreting dimethomorph monoclonal antibody and application thereof
CS253336B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome img czas rt-12
CS253337B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome img czas tr-14
CS243348B1 (en) Mousy lymphocytoid hybridom img-czas hft-21
CS240846B1 (en) Mouse lymphatic hybridom img czas in-%4
CS244398B1 (en) Mousy lymphocytoid hybridome img-czas al 01
CS238780B1 (en) Mouse-type lymphocytic hybridom img-czas htf %1
CS239800B1 (en) Mouse-type lymphocytic hybridon imgcastu-04
CS235850B1 (en) Mousy lymphocytare hybridome producing anti-matter against human transferine
CS228860B1 (en) Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance a
CS228857B1 (en) Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance a
CS236001B1 (en) Mousy lymphocytare hybridome producing anti-substace against human transferine
CS233810B1 (en) Mousy lymphocytoid hybride generating antimatter against piggish and human insulin
CS247450B1 (en) Mousy lymphocyte hybridom img czas ma-01
CS223535B1 (en) Mice lymfocytarous hybridon
CS255844B1 (en) Mouse lymphocytaric hybridom producing monoclonal antibody against piggish acrosine
CS243652B1 (en) Mousy lymphocytoid hybridom img czas hp-03
CS248383B1 (en) Mousy lymphocite hybridome img czas mem-19
SU1685997A1 (en) Strain of hybridous cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibodies to human thyrotropin
CS234935B1 (en) Mousy lymphocytoid hybrid img ozas b2m-01
CS263122B1 (en) Mouse lymphocytaric hybridom producing antibody against human alpha-fetoproteine
CS228858B1 (en) Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance against hog g-immunoglobulin
CS228856B1 (en) Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance against hog g-immunoglobulin
CS263121B1 (en) Mouse lymphocytaric hybridome producing antibody against human alpha-fetoproteine