CS253337B1 - Mouse lymphocytar hybridome img czas tr-14 - Google Patents

Mouse lymphocytar hybridome img czas tr-14 Download PDF

Info

Publication number
CS253337B1
CS253337B1 CS863523A CS352386A CS253337B1 CS 253337 B1 CS253337 B1 CS 253337B1 CS 863523 A CS863523 A CS 863523A CS 352386 A CS352386 A CS 352386A CS 253337 B1 CS253337 B1 CS 253337B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
mouse
hybridoma
reverse transcriptase
lymphocytar
hybridome
Prior art date
Application number
CS863523A
Other languages
Czech (cs)
Other versions
CS352386A1 (en
Inventor
Sergej Bresten
Vladimir Viklicky
Ludmila Frolova
Blanka Macku
Miloslav Travnicek
Lev Kiselev
Josef Riman
Original Assignee
Sergej Bresten
Vladimir Viklicky
Ludmila Frolova
Blanka Macku
Miloslav Travnicek
Lev Kiselev
Josef Riman
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sergej Bresten, Vladimir Viklicky, Ludmila Frolova, Blanka Macku, Miloslav Travnicek, Lev Kiselev, Josef Riman filed Critical Sergej Bresten
Priority to CS863523A priority Critical patent/CS253337B1/en
Publication of CS352386A1 publication Critical patent/CS352386A1/en
Publication of CS253337B1 publication Critical patent/CS253337B1/en

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Řešeni se týká myšího lymfocytárniho hybridomu produkujícího protilátku proti reverzní transkriptáze, uloženého ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární-genetiky ČSAV pod označením RT-14. Monoklonální protilátka hybridomu RT-14 je vhodná pro použití v metodách enzymoimunologických, radioimunologických a preparativnlch.The solution concerns mouse lymphocyte antibody-producing hybridoma reverse transcriptase deposited in the Collection of Hybridomas of the Institute of Molecular-Genetics of the CSAV under the designation RT-14. Monoclonal antibody the hybridoma RT-14 is suitable for use in enzymimmunological, radioimmunological methods and preparativnlch.

Description

Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie Sp 2/0-Ag 14 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti reverzní transkriptáze.The invention relates to a novel hybridoma, i.e. a hybrid unicellular organism, constructed by fusing a mouse cell of the myeloma line Sp 2/0-Ag 14 and a mouse spleen lymphoid cell producing an antibody against reverse transcriptase.

Doposud se protilátky proti reverzní transkriptáze připravují tak, že je reverzní transkriptáza opakovaně injikována jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům, sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době po podání antigenu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných především pro kvalitativní stanovení reverzní transkriptázy a k izolaci vysoce čistých preparátů tohoto enzymu. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejich spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat vysycováním. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a další antígeny pro vysyoení balastních protilátek proti nečistotám.To date, antibodies to reverse transcriptase have been prepared by repeatedly injecting reverse transcriptase as an antigen to test animals, most commonly rabbits, and the serum of such immunized animals taken some time after antigen administration serves as a source of antibodies used primarily for qualitative determination of reverse transcriptase and isolation. highly purified preparations of this enzyme. This procedure, called conventional immunization, has several disadvantages. The serum of immunized animals contains a heterogeneous mixture of antibodies, the spectrum of which varies from one organism to another and does not repeat. As a rule, the organism will produce antibodies to the impurities of the antigen preparation in addition to the antibodies to the antigen of interest; these must be removed from the sera by saturation. Consequently, batches of conventional sera are difficult to standardize and are based on production in a wide quality range. For the production of each batch, it is necessary to prepare pure immunization antigen and other antigens in order to seize ballast antibodies against impurities.

Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti reverzní transkriptáze, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská ul. 1083, pod označením IMG CZAS RT-14.These drawbacks of the above-mentioned and previously used procedure will be eliminated if a hybridoma producing a monoclonal antibody against reverse transcriptase, deposited in the Collection of Hybridomas of the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences in Prague 4, Vídeňská street 1083, is available IMG CZAS RT-14.

Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth, S. Scheidegger, D.: Production of monoclonal antibodies. Stratégy and tactics. J. Immunol. Meth., 35·: 1-21, 1980; Galfré, G. , Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W. , Howard, J. C.: Antibodies to major histocompatibllity antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře 266: 550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí buněk myší myelomové linie Sp 2/D-Ag 14 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene 810.A imunizovaných reverzní transkriptázou izolovanou z virusu pt^čí myeloblastózy (AMV) o 50% čistotě.The hybridoma was obtained by a method known in the literature (Fazekas de St. Groth, S. Scheidegger, D .: Production of monoclonal antibodies. Strategies and tactics. J. Immunol. Meth., 35: 1-21, 1980; G., Howe, SC, Milstein, C., Butcher, GW, Howard, JC: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell line, Nature 266: 550, 1977) by cloning a set of hybrid cells resulting from fusion of mouse myeloma cell line Sp 2 / D-Ag 14 and cells obtained from the spleen of mouse 810.A mice immunized with reverse transcriptase isolated from avian myeloblastosis virus (AMV) of 50% purity.

Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která je schopna.specificky reagovat s oběma podjednotkami reverzní transkriptázy, jak bylo zjištěno po přenosu virových proteinů (separovaných na elektroforéze za redukujících podmínek) na nitrocelulózovou membránu a po specifické detekci nepřímým imunologickým testem (s využitím protilátky RT-14 a prasečí 'protilátky proti myšímu imunoglobulinukonjugované s peroxidázou; ÚSOL, Praha). V blokovacích pokusech nebyl zjištěn efekt protilátky RT-14 na enzymatickou aktivitu reverzní transkriptázy.The advantage of the hybridoma is that it produces a homogeneous antibody, the so-called monoclonal antibody, which is capable of reacting specifically with both reverse transcriptase subunits, as detected after transfer of viral proteins (separated by reducing electrophoresis) to the nitrocellulose membrane and specific detection by indirect immunological assay (using RT-14 antibody and porcine peroxidase-conjugated porcine immunoglobulin antibody; ÚSOL, Prague). In blocking experiments, the effect of RT-14 on the enzymatic activity of reverse transcriptase was not detected.

Hybridom RT-14 je možno kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší hybridů F^ (BIO.A + BALB/c). Z konzerv hybridomovýoh buněk uchovávaných v kapalném dusíku je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu.The RT-14 hybridoma can be cultured in vitro in animal cell media and is adapted for growth in vivo in the peritoneal cavity of mouse F4 hybrids (BIO.A + BALB / c). From canned hybridoma cells stored in liquid nitrogen, antibody production can be started without additional antigen.

PříkladExample

Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 2x10^ buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 10 dní před převodem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po 12 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a neprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 2,5 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 4 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka reagovala se specifickým antigenem v enzymoimunologickému testu (při pog užití prasečí antimyši protilátky značené křenovou peroxidázou) až do ředění 1:10 .To expand the hybridoma cells in vivo, 2x10 6 cells were injected into the peritoneal cavity of mice. To improve attachment of the cells applied, the mouse was treated with paraffin oil (0.5 ml intraperitoneally) 10 days prior to transfer of the hybridoma cells. After 12 days of hybridoma growth in the peritoneal cavity, the mouse was killed and unproduced ascites fluid was collected. A total of 2.5 ml of ascites fluid containing 4 mg / ml immunoglobulin was obtained. The monoclonal antibody reacted with the specific antigen in an enzyme-immunoassay (using horseradish peroxidase-labeled pig antimouse antibody) up to a 1:10 dilution.

Buňky hybridomu RT-14 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3 mM), pyruvát sodný (1 mM). Toto médium (označené jako H-MEMd, Ostav molekulární genetiky ČSAV), je pro kul tivaci hybridomu RT-14 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoestanolem (0,05 nM), pufrem HEPES (10 nM) a inaktivovaným bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10%). Hybridom je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 17,8 hod. a 20 měsíců po sestrojení byl mpdální počet chromosomů 76. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgG 2b s lehkými řetězci typu kappa, její izoelektrický bod je pH 7,1-7,5.RT-14 hybridoma cells have an ultrastructural pattern of typical myeloma cells where the predominant organelle is free and membrane-bound polyribosomes. They grow in vitro as semi-suspension cultures. The basic culture medium is Eagle's minimum essential medium with Hanks salt mixture supplemented with non-essential amino acids, L-glutamine (3 mM), sodium pyruvate (1 mM). This medium (referred to as H-MEMd, the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences) is supplemented with penicillin, streptomycin, gentamycin, 2-mercaptoestanol (0.05 nM), HEPES buffer (10 nM) and inactivated bovine serum to cultivate RT-14 hybridoma. (Bioveta, Ivanovice na Hane, 10%). The hybridoma is cultured at 37 ° C. The mean generation time is 17.8 h and 20 months after construction, the mpd chromosome count was 76. The antibody produced is a monoclonal immunoglobulin of subclass IgG 2b with kappa light chains, its isoelectric point is pH 7.1-7.5.

Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem RT-14 reaguje specificky s reverzní transkriptázou.The monoclonal antibody produced by the RT-14 hybridoma reacts specifically with reverse transcriptase.

Hybridom RT-14 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti reverzní transkriptáze v metodách analytických nebo preparativních.RT-14 can be used industrially as a source of monoclonal antibody to reverse transcriptase in analytical or preparative methods.

Claims (1)

Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-14'produkující monoklonální protilátku podtřídy IgG 2b proti reverzní transkriptáze ptačí myoblastózy.IMG CZAS RT-14' murine lymphocyte hybridoma producing monoclonal antibody of IgG 2b subclass against avian myoblastosis reverse transcriptase.
CS863523A 1986-05-15 1986-05-15 Mouse lymphocytar hybridome img czas tr-14 CS253337B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS863523A CS253337B1 (en) 1986-05-15 1986-05-15 Mouse lymphocytar hybridome img czas tr-14

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS863523A CS253337B1 (en) 1986-05-15 1986-05-15 Mouse lymphocytar hybridome img czas tr-14

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS352386A1 CS352386A1 (en) 1987-03-12
CS253337B1 true CS253337B1 (en) 1987-11-12

Family

ID=5375586

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS863523A CS253337B1 (en) 1986-05-15 1986-05-15 Mouse lymphocytar hybridome img czas tr-14

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS253337B1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
CS352386A1 (en) 1987-03-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH06113832A (en) Hybrid cell line for producing monoclonal antibody having high affinity for digoxin and its production
JPS60155134A (en) Monoclonal antibody against alpha-amylase of saliva and method and reagent for measuring alpha-amylase of pancreas as well as of humoral saliva
CS253337B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome img czas tr-14
CS253336B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome img czas rt-12
CS240846B1 (en) Mouse lymphatic hybridom img czas in-%4
CS243348B1 (en) Mousy lymphocytoid hybridom img-czas hft-21
CN112813035B (en) Hybridoma cell strain secreting nifuroxazone monoclonal antibody and application thereof
CS238780B1 (en) Mouse-type lymphocytic hybridom img-czas htf %1
CS244398B1 (en) Mousy lymphocytoid hybridome img-czas al 01
CS228860B1 (en) Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance a
CS239800B1 (en) Mouse-type lymphocytic hybridon imgcastu-04
CS228857B1 (en) Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance a
CS235850B1 (en) Mousy lymphocytare hybridome producing anti-matter against human transferine
CS236001B1 (en) Mousy lymphocytare hybridome producing anti-substace against human transferine
CS233810B1 (en) Mousy lymphocytoid hybride generating antimatter against piggish and human insulin
CS223535B1 (en) Mice lymfocytarous hybridon
CS248383B1 (en) Mousy lymphocite hybridome img czas mem-19
CS243652B1 (en) Mousy lymphocytoid hybridom img czas hp-03
CS255844B1 (en) Mouse lymphocytaric hybridom producing monoclonal antibody against piggish acrosine
CS247450B1 (en) Mousy lymphocyte hybridom img czas ma-01
SU1742324A1 (en) Strain of hybridous cultured cells mus musculus l., used for preparation of high-specific monoclonal antibodies to human thyreotropin
CS234935B1 (en) Mousy lymphocytoid hybrid img ozas b2m-01
CS258886B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome producing antibodies against cortical antigen of b-hepatitis virus
CS263123B1 (en) Mouse lymphocytaric hybridome producing antibody against human alpha-fetoproteine
CN113005098A (en) Hybridoma cell strain secreting hyoscyamine monoclonal antibody and application thereof