CS253336B1 - Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 Download PDFInfo
- Publication number
- CS253336B1 CS253336B1 CS863522A CS352286A CS253336B1 CS 253336 B1 CS253336 B1 CS 253336B1 CS 863522 A CS863522 A CS 863522A CS 352286 A CS352286 A CS 352286A CS 253336 B1 CS253336 B1 CS 253336B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- mouse
- hybridoma
- reverse transcriptase
- lymphocytar
- hybridome
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000713838 Avian myeloblastosis virus Species 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytárního
hybridomu produkujícího protilátku proti
reverzní transkriptáze, uloženého ve Sbírce
Thybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV·
pod označením RT-12. Monoklonální protilátka
hybridomu RT-12 je vhodná pro použití
v metodách enzymoimunologických, radioimunologických
a preparativních.
Description
(54) Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12
Řešení se týká myšího lymfocytárního hybridomu produkujícího protilátku proti reverzní transkriptáze, uloženého ve Sbírce Thybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV· pod označením RT-12. Monoklonální protilátka hybridomu RT-12 je vhodná pro použití v metodách enzymoimunologických, radioimunologických a preparativních.
Vynález se týká nového hybridomu, t j . hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie Sp 2/0-Ag 14 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti reverzní transkriptáze.
Doposud se protilátky proti reverzní transkriptáze připravuji tak, že je reverzní transkriptáza opakovaně injikována jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům; Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době po podáni antigenu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných především pro kvalitativní stanovení reverzní transkriptázy a k izolaci vysoce čistých preparátů tohoto enzymu. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejich spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat vysycováriím. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a další antigeny pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti reverzní transkriptáze, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská ul. 1083, pod označením IMG CZAS RT-12.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth, S., Scheidegger, D.: Production of monoolonal antibodies. Stratégy and tactics. J. Immunol. Meth., 35: 1-21, 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard, J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš. Nátuře 266: 550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzi buněk myší myelomové linie Sp 2/D-Ag 14 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene 810.A imunizovaných reverzní transkriptázou izolovanou z virusu ptačí myeloblastózy (AMV) o 50% čistotě.
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s oběma podjednotkami reverzní transkriptázy, jak bylo zjištěno po přenosu virových proteinů (separovaných na elektroforéze za redukujících podmínek) na nitrocelulózovou membránu a po specifické detekci nepřímým imunologickým testem (s využitím protilátky RT-12 a prasečí protilátky proti myšímu imunoglobulinukonjugované s peroxidázou; ÚSOL, Praha). V dalších pokusech nebyl prokázán blokovací efekt protilátky na enzymatickou aktivitu izolované reverzní transkriptázy.
Hybridom RT-12 je možno kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší hybridů F^ (BIO.A + BALB/c). Z konzerv hybridomových buněk uchovávaných v kapalném dusíku je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu.
Přiklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 2x10® buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 10 dní před převodem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po 12 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 3,0 ascitické tekutiny, která obsahovala 5 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka reagovala se specifickým antigenem v enzymoimunologickém testu (při použití prasečí antimyší protilátky značené křenovou peroxidázou) až do ředění 1:10®.
Buňky hybridomu RT-12 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3 mM), pyruvát sodný (1 mM). Toto médium (označené jako H-MEMd, Ostav molekulární genetiky ČSAV), je pro kul tivaci hybridomu RT-12 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoestanolem (0,05 nM), pufrem HEPES (10 nM) a inaktivovaným bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10%). Hybridom je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 16,4 hod. a 13 měsíců po sestrojení byl modální počet chromosomů 79. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgG 2b s lehkými řetězci typu kappa, její izoelektrický bod je pH 7,1-7,3.
Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem RT-12 reaguje specificky s reverzní transkriptázou.
Hybridom RT-12 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti reverzní transkriptáze v metodách analytických nebo preparativních.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUMyší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 produkující monoklonální protilátku podtřídy IgG 2b proti reverzní transkriptáze ptačí myoblastózy.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS863522A CS253336B1 (cs) | 1986-05-15 | 1986-05-15 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS863522A CS253336B1 (cs) | 1986-05-15 | 1986-05-15 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS352286A1 CS352286A1 (en) | 1987-03-12 |
| CS253336B1 true CS253336B1 (cs) | 1987-11-12 |
Family
ID=5375569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS863522A CS253336B1 (cs) | 1986-05-15 | 1986-05-15 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS253336B1 (cs) |
-
1986
- 1986-05-15 CS CS863522A patent/CS253336B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS352286A1 (en) | 1987-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0819160B2 (ja) | ジゴキシンに対し高い親和性を有するモノクローナル抗体を産生するハイブリッドセルライン及びその製造法 | |
| CN113621583A (zh) | 一株分泌烯酰吗啉单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 | |
| CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 | |
| CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
| CN113005098A (zh) | 一株分泌莨菪碱单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 | |
| CS238780B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS228857B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferům | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS233810B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu | |
| CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
| CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS255844B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu | |
| CS243652B1 (cs) | MySí lyafocytární hybrido· IMG CZAS HP-03 | |
| RU1835848C (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus l - продуцент моноклональных антител к холерному энтеротоксину | |
| CS248383B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridem IMG CZAS MEM-09 | |
| SU1685997A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
| CS234935B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 | |
| CS263122B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridorn produkující protilátku pr >ti lidskému alfa-1'etoproteinu | |
| CS228858B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu 6 |