CS247450B1 - Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 Download PDFInfo
- Publication number
- CS247450B1 CS247450B1 CS619385A CS619385A CS247450B1 CS 247450 B1 CS247450 B1 CS 247450B1 CS 619385 A CS619385 A CS 619385A CS 619385 A CS619385 A CS 619385A CS 247450 B1 CS247450 B1 CS 247450B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- map
- hybridoma
- proteins
- cells
- lymphocyte
- Prior art date
Links
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 2
- 108090000192 Methionyl aminopeptidases Proteins 0.000 abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 8
- 102000009664 Microtubule-Associated Proteins Human genes 0.000 abstract description 7
- 101001059497 Arabidopsis thaliana Methionine aminopeptidase 2A Proteins 0.000 abstract description 4
- 101000962679 Arabidopsis thaliana Methionine aminopeptidase 2B Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract 1
- 108010020004 Microtubule-Associated Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 102100021118 Microtubule-associated protein 2 Human genes 0.000 abstract 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 9
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 8
- 102100026046 Mannan-binding lectin serine protease 2 Human genes 0.000 description 7
- 108091077621 MAPRE family Proteins 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 2
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 102100026061 Mannan-binding lectin serine protease 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710161855 Methionine aminopeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710103983 Modulator of apoptosis 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytárního hybridomu,
produkujícího protilátku proti proteinům
asociovaným s mikrotubuly (MAP 2A a
MAP 2B), uloženého ve Sbírce hybridomů Ústavu
molekulární genetiky ČSAV pod označením
MA-01. Samotná monoklonální protilátka hybridomu
MA-01 je vhodná pro použití v enzymoimunologické
a radioimunologické analýze, při
vizualizaci MAP-2 proteinů v buňkách na
úrovni optického a elektronového mikroskopu
a k biochemické a biologické analýze cílové
antigenní struktury.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného buněčnou fúzí myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a myší slezinné lymfoidnl buňky, produkující protilátku proti proteinům asociovaným s mikrotubuly MAP-2.
Doposud se protilátky proti proteinům asociovaným s mikrotubuly (MAP) vyrábějí tak, že jsou MPA izolovány z mozkové tkáně a opakovaně injikovány jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době působením antigenu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných pro identifikaci buněčných struktur, obsahujících MAP.
Tento poBtup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné.
Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigennlho preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat složitým způsobem, zvaným vysycováni. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality.
ji
Pro výrobu každé šarže je třeba připravit značně čistý imunizační antigen a další antigeny pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti MAP-2, uložený ve Sbírce hybridomů Ostavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská ul. č. 1083, pod označením IMG CZAS MA-01.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de, St., Groth, S., Schneidigger, D.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, 3. Immunol. Meth., 35: 1-21, 1980; Galfré, G., Howe, S.C., Milstein, C., Butcher, G.W., Howard, J.C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře 266-550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene Balb/c, imunizovaných mikrotubulárními proteiny (obsahují tubulin a proteiny asociované s mikrotubuly) připravenými z mozku prasat.
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s proteiny asociovanými s mikrotubuly MAP-2. Reaktivita monoklonální protilátky MA-01 s MAP-2 proteiny byla prokázána v imunoblotingů (separace proteinů elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsulfátu sodného za redukujících podmínek, následný elektroforetický přenos proteinů na nitrocelolózovou membránu, specifická detekce nepřímým imunologickým testem s použitím MA-01 protilátky a komplexu peroxidáza/myší monoklonální protilátka proti peroxidáze (Viklický V., Dráber P., Macků B., Dráberová E., Rozprimová L. 1984 Fol. biol. Praha 30, 377-382). Monoklonální protilátka MA-01 se vázala na dvojici vysokomolekulárních proteinů nacházejících se v poloze reaktivních molekulových hmotností odpovídajících proteinů MAP-2A a MAP-2B (tj. kolem 280 000) ve vzorcích: '
- celých homogenátů mozkové tkáně různých druhů (prase, tur, králík, krysa, myš)
- mikrotubulů připravených z těchto tkání opakovanými cykly polymerace a depolymerace. Charakteristickým znakem MAP je společná polymerace s tubulinem za vzniku mikrotubulů
- termostabilních frakcí mikrotubulů. Ze stavebních komponent mikrotubulů jsou pouze MPA-2 proteiny rezistentní k tepelné denaturaci.
V žádném případě nedocházelo k vazbě na proteiny v poloze tubulibu a dalších MAP f-proteiny,
MAP-1 proteiny).
Asociace antigenní determinanty rozpoznávané MA-01 protilátkou s mikrotubuly byla prokázána v nepřímé imunofluorescenci u buněk různého druhového a tkáňového původu. MA-01 se vázala pouze na struktury mikrotubulů (interfázní, mitotické mikrotubuly) a nebyla pozorována vazba na žádné další cytoskeletální struktury.
Hybridom MA-01 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene Balb/c. Z konzerv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigénu. Protilátka, produkovaná hybridomem MA-01 jé specifická pro neuronální MAP 2A a MAP 2B proteiny a není třeba se zbavovat protilátek balastních.
Příklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 6x10® buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 14 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po 13 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 3,2 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 10 mg/ml imunoglobinu. Protilátka reagovala se specifickým antigenem v enzymolmunologickém testu (při použití prasečí antimyší protilátky značené křenovou peroxidázou) až do ředění l:104. Za pomoci nepřímé imunofluorescenční techniky byl takto získanou protilátkou zobrazen mikrotubulární komplex v buňkách myší fibroblastoidní linie C^H původu (až do ředění 1:10 ).
Buňky hybridomu MA-01 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí a doplněné o neesenciální imunokyseliny, L-glutamin (3mM), pyruvát sodný (lmM). Toto médium (označované jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV), je pro kultivace hybridomu MA-01 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem (0,05 mM) , pufrem HEPES (10 mM) a inaktivovaných bovínním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10%). Hybridom je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 13,6 hod. a 6 měsíců pro sestrojení byl modální počet chromosomů 79. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobin třídy IgG^ kappa, namířená proti epitopu přítomném na MAP 2A a MAP 2B.
Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem MA-01 analogicky s konvenčními protilátkami reaguje s MAP-2 proteiny řady druhů. Je proto využitelná k detekci buněčných cytoskeletálních struktur většiny druhů obsahujících MAP-2 proteiny.
Hybridom MA-01 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti MAP-2 proteinům v metodách analytických nebo preparativních.
Claims (1)
- Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01, produkující monoklonální protilátku třídy IgGj kappa lehký řetězec, proti mozkovým MPA-2 proteinům.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS619385A CS247450B1 (cs) | 1985-08-29 | 1985-08-29 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS619385A CS247450B1 (cs) | 1985-08-29 | 1985-08-29 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS247450B1 true CS247450B1 (cs) | 1986-12-18 |
Family
ID=5408404
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS619385A CS247450B1 (cs) | 1985-08-29 | 1985-08-29 | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS247450B1 (cs) |
-
1985
- 1985-08-29 CS CS619385A patent/CS247450B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS245849B1 (cs) | Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01 | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| CS233810B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu | |
| CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 | |
| CS228857B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferům | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
| CS255843B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti β-podjednotce tubulinu | |
| CS238780B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 | |
| CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 | |
| CS255844B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu | |
| CS228858B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu 6 | |
| CS255643B1 (cs) | Myši lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti a a β podjednotce tubulinu | |
| CS228856B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G | |
| CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
| CS222780B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridem | |
| CS222779B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CN119391649A (zh) | 一种cc126单克隆抗体及其试剂盒的制备方法和用途 | |
| CS222781B1 (en) | Electromotor with friction brake with decreased noise | |
| CS248383B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridem IMG CZAS MEM-09 |