CS255843B1 - Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti β-podjednotce tubulinu - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti β-podjednotce tubulinu Download PDFInfo
- Publication number
- CS255843B1 CS255843B1 CS868195A CS819586A CS255843B1 CS 255843 B1 CS255843 B1 CS 255843B1 CS 868195 A CS868195 A CS 868195A CS 819586 A CS819586 A CS 819586A CS 255843 B1 CS255843 B1 CS 255843B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- mouse
- subunit
- monoclonal antibody
- tubulin
- hybridoma
- Prior art date
Links
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 13
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 abstract description 5
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 abstract description 5
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 abstract description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 abstract 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 208000001608 teratocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OCJBOOLMMGQPQU-UHFFFAOYSA-N 1,4-dichlorobenzene Chemical class ClC1=CC=C(Cl)C=C1 OCJBOOLMMGQPQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100021238 Dynamin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000224522 Herpetomonas muscarum Species 0.000 description 1
- 101000817607 Homo sapiens Dynamin-2 Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 108091077621 MAPRE family Proteins 0.000 description 1
- 102100026061 Mannan-binding lectin serine protease 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100026046 Mannan-binding lectin serine protease 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710161855 Methionine aminopeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000192 Methionyl aminopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000009664 Microtubule-Associated Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710103983 Modulator of apoptosis 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000803350 Mus musculus Vimentin Proteins 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000224527 Trichomonas vaginalis Species 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000010820 immunofluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 210000003963 intermediate filament Anatomy 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 210000002332 leydig cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 210000003632 microfilament Anatomy 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000004765 promyelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- -1 streptomyoin Chemical compound 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytárního
hybridomu, produkujícího monoklonální
protilátku proti beta-podjednotce tubulinu
řady druhů, uloženého ve Sbírce hybridomů
Ostavu molekulární genetiky ČSAV pod
označením IMG-CZAS TU-06. Monoklonální
protilátka hybridomu TU-06 je vhodná pro
použiti v enzymoimunologické a radioimunologické
analýze tubulinu nebo při
vizualizaci mikrotubulň v buňkách na
úrovni optické a elektronové mikroskopie.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie FO a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti beta-podjednotce tubulinu, tj. cytoskeletálnímu proteinu, který je stavební komponentou mikrotubulů.
Protilátky proti tubulinu se připravují klasickým způsobem tak, že je tubulin opakovaně injikován pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek užívaných zejména pro identifikaci buněčných struktur obsahujících tubulin. Tento postup nazývaný konvenční imunizaci má několik nevýhod. Vzhledem k tomu, že tubulin patří mezi vysoce konzervativní proteiny, je opakované získávání dobře imunizovaných zvířat obtížné. V séru se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Zpravidla jsou v séru přítomny vedle protilátek proti žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; tyto protilátky se musí složitým způsobem odstraňovat. Připravená šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a mají široké rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit značně čistý imunizační antigen.
Nevýhody konvenčních sér proti tubulinu v principu odstraňuje hybridomová technologie. Produkt hybridomu - monoklonální protilátka - je zaměřen vždy proti jediné antigenni determinantě. Je-li konstruován dostatečně velký soubor hybridomů, je pravděpodobné, že se z něho podaří vyhledat hybridom syntetizující protilátku, která rozeznává antigenni determinantu přítomnou pouze na beta-podjednotce tubulinu.
Pokroku v detailní analýze mikrotubulárních struktur, projevujícího se v identifikaci pouze beta-podjednotky tubulinu, se dosáhne, je-li k dispozici hybridom produkující monoklonál ni protilátku proti beta-podjednotce tubulinu, uložený ve Sbírce hybridomů Ostavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská 1 083, pod označením IMG CZAS TU-06.
Uvedený hybridom byl získán způsobem z odborné literatury (Fazekas de, St., Groth, .
S. S., Scheidegger, 0.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol. Meth. 35: 1 až 21, 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard,
J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš. Nátuře 266: 550 až 552, 1977) klonováním souboru hybridních buněk vzniklých fúzí buněk myší myelomové linie FO a buněk, získaných ze slezin myší kmene (BALB/c x B 10.A) imunizovaných beta-podjednotkami tubulinu, které byly izolovány z mikrotubulárních proteinů prasečího mozku.
Mikrotubulární proteiny byly připraveny dvěma následnými cykly polymeraoe-depolymerace z homogenátu mozku (Shelanski, M. L., Gaskin, F., Cantor, C. R.: Microtubule assembly in the absence of added nuoleotides. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 70: 765 až 768, 1973). Po preparativní elektrofóréze mikrotublárníoh proteinů v polyakrylamidovém gelu, v přítomnosti dodecylsulfátu sodného za redukujících podmínek, byly proužky polyakrylamidového gelu obsahující beta-podjednotky tubulinu vyříznuty a proteiny byly z gelu izolovány elektroelucí (Stralfors, Ρ., Belfrage, P.: Electrophoretic elution of proteins from PAG-slices. Anal. Biochem. 128: 7 až 10, 1983).
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní, monoklonální protilátku, která je schopna specificky reagovat s beta-podjednotkami tubulinů různých živočišných druhů. Hybridom TU-06 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší F^ (BALB/c x B 10.A). Z konzerv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu. Protilátka, produkovaná hybridomem TU-06, reaguje s beta-podjednotkami tubulinu specificky a není třeba odstraňovat protilátky balastní.
Příklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 1 x 106 buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 14 dní před přenosem buněk hybridomů ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po dnech růstu hybridomů v peritoneální dutině byla myš zabita a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem· byly získány 3 ml ascitické tekutiny obsahující přibližně 2 mg/ml imunoglobulinu.
Monoklonální protilátka, ve formě ascitické tekutiny, reagovala se specifickým antigenem (purifikovaným prasečím tubulinem) v nepřímém enzymoimunologickém testu při použití prasečí protilátky proti myšímu imunoglobulinu značené křenovou peroxidázou (Ostav sér a očkovacích látek, Praha), do ředění 1:10^. K vazbě nedocházelo, byl-li namísto tubulinu použit hovězí sérový albumin nebo*myší vimentin. Rovněž v kontrolních experimentech při použití myší monoklonální protilátky TEC-01 (IgM, lehký řetězec kapa), která je namířena proti diferenciačnímu antigenu myších teratokarcinomových buněk (Drábeř, Pe., Pokorná, Z.: Differentiation antigens of mouše teratocarcinoma stem cells defined by monoclonal antibodies. Cell Differentiation 15: 109 až 113, 1984) k vazbě nedocházelo.
K průkazu, že monoklonální protilátka TU-06 specificky reaguje pouze s tubulinem bylo použito dvou přístupů.
a) Při imunoblotingu byly proteiny separovány elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsulfátu sodného za redukujících podmínek a elektroforeticky přeneseny z gelu na nitrocelulózovou membránu. Po inkubaci repliky s monoklonální protilátkou (ředění l:103) byla vazba navázané protilátky detegována enzymoimunologicky s použitím komplexu peroxidáza myší monoklonální protilátka proti křenové peroxidáze (Viklický, V., Dráber,
Pa., Macků, B. , Dráberová, E., Rozprimová, L.: Monoclonal antibodies against horseradish preoxidase. Fol. Biol (Praha) 30: 378 až 382, 1984).
TU-06 protilátka se vázala na beta-podjednotku purifikovaných tubulinů různých druhů (prasečí, hovězí, myší, krysí), v mikrotubulárních proteinech prasečího mozku a v celých lyzátech prasečí mozkové tkáně se vázala pouze na proteiny v poloze beta-podjednotky tubulinu.
V žádném případě se nevázala na proteiny asociované s mikrotubuly (MAP-1, MAP-2, tau proteiny).
V celých buněčných lyzátech linií LEP (lidský plicní fibroblast), HL-60 (lidský promyelocyt), C-l 300 (myší neuroblastom), 3T3 (myší embryonální fibroblast), v primární kultuře myších Leydigových buněk a v celých buněčných lyzátech protozní Trichomonas vaginalis a Herpetomonas muscarum se protilátka TU-06 vázala pouze na proteiny s elektroforetickou pohyblivostí odpovídající poloze beta-podjednotky tubulinu. V kontrolních experimentech s monoklonální protilátkou TEC-01 k vazbě nedocházelo.
b) Při nepřímé imunofluorescenci byly adherentní buňky linie 3T3 inkubovány 2 min.
s 0,15% Tritonem X-100 ve stabilizačním pufru pro cytoskelet (Smáli, J. V., Celis, J. E.: Fílaments arrangements in negatively stained cultured cells: the organization of actin^ Cytobiologie 16, 308 až 325, 1978), doplněném o 4% polethylenglykol 4 000 a fixovány 30 min.
3% paraformaldehydem. Na takto připravený cytoskelet byla aplikována protilátka TU-06 (ředění 1:100) a její vazba na cytoskeletální struktury byla sledována imunofluorescenční mikroskopií při použití prasečí protilátky proti myšímu imunoglobulinu značené fluorescein izothiokyanátem (Ostav sér a očkovacích látek, Praha). TU-06 protilátka se vázala pouze na mikrotubulární struktury interfázních a mitotických buněk a nebyly znázorněny další cytoskeletální struktury - mikrofilamenta a střední filamenta. Po působení vinblastinu docházelo k tvorbě typických parakrystalů. Při dvojím značení cytoskeletálních struktur metodou nepřímé/přímé imunofluorescence s monoklonální protilátkou TU-06 a myší monoklonální protilátkou TU-04 přímo značenou rhodaminem, která je namířena proti alfa-podjednotce tubulinu řady druhů (Dráber, Pa., Dráberová, E., Zicconi, D., Sellitto, C., Viklický, V., Cappuccinelli, P.: Heterogeneity of microtubules recognized by monoclonal antibodies to alpha-tubulin. Eur.
J. Cell Biol. 41: 82 až 88, 1985), docházelo k vazbě obou protilátek na identická vlákna mikrotubulů. V kontrolních experimentech s monoklonální protilátkou TEC-01 nebyly cytoskeletální struktury znázorněny.
Buňky hybridomu TU-06 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním mediem je Eaglovo minimální medium s Hanksovou solnou směsí, doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3 mM) , pyruvát sodný (1 mM). Toto medium (označené jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV), je pro kultivace hybridomu TU-10 doplněno penicilinem, streptomyoinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem (0,05 mM) , pufrem HEPES (10 mM) a inaktivovaným bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10%). Hybridom je kultivován při 37 °C; střední generační čas je 17,2 hod. a 8 měsíců po sestrojeni byl modální počet chromosomů 84. Produkovaná protilátka je imunoglobulin třídy IgM s lehkými řetězci typu kapa.
Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem TU-06, reaguje, analogicky s konvenčními protilátkami, s tubuliny různých druhů a je proto využitelná k detekci buněčných mikrotubulárnich struktur. Hybridom TU-06 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonálních protilátek proti beta-podjednotce tubulinu v metodách analytických nebo preparativních.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNALEZUMyší lymfooytární hybridom IMG CZAS TU-06, produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti beta-podjednotce tubulinu řady druhů.Severografia, n. p„ MOSTCena 2,40 Kčs
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS868195A CS255843B1 (cs) | 1986-11-12 | 1986-11-12 | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti β-podjednotce tubulinu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS868195A CS255843B1 (cs) | 1986-11-12 | 1986-11-12 | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti β-podjednotce tubulinu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS819586A1 CS819586A1 (en) | 1987-07-16 |
| CS255843B1 true CS255843B1 (cs) | 1988-03-15 |
Family
ID=5432186
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS868195A CS255843B1 (cs) | 1986-11-12 | 1986-11-12 | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti β-podjednotce tubulinu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS255843B1 (cs) |
-
1986
- 1986-11-12 CS CS868195A patent/CS255843B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS819586A1 (en) | 1987-07-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Danto et al. | Immunocytochemical analysis of intermediate filaments in embryonic heart cells with monoclonal antibodies to desmin. | |
| US10053476B2 (en) | Phosphohistidine and phosphotyrosine analogues | |
| US5620890A (en) | Monoclonal antibodies to hygromycin B and the method of making the same | |
| HU214700B (hu) | Eljárás izotiazolonok meghatározására és izolálására immunológiai úton | |
| CS255843B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti β-podjednotce tubulinu | |
| CS255643B1 (cs) | Myši lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti a a β podjednotce tubulinu | |
| JPH05317085A (ja) | 免疫学的検出方法 | |
| CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
| CS245849B1 (cs) | Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01 | |
| SU1723127A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к соматотропину человека | |
| CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 | |
| SU1442545A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L.,используемый дл получени моноклональных антител к @ -цеп м иммуноглобулинов человека и обезь н | |
| CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| SU1726511A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к общим антигенным детерминантам инсулина человека и свиньи | |
| CS264947B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom GF-01 produkující protilátku proti gliovému kyselému proteinu středních filament | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
| Dean | Preparation and characterization of monoclonal antibodies to proteins and other cellular components | |
| SU1645295A1 (ru) | Штамм культивируемых гибридных клеток животных МUSмUSсULUS L - продуцент моноклональных антител против В-лимфоцитов крупного рогатого скота | |
| CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| SU1446157A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к мембранному белку ЕSснеRIснIа coLI в препарате рекомбинантного интерлейкина-2 человека | |
| SU1518369A1 (ru) | Штамм гибридных клеток животных MUS MUScULIS, используемый дл получени моноклональных антител к гемагглютинину вируса кори |