CS245849B1 - Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01 - Google Patents

Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01 Download PDF

Info

Publication number
CS245849B1
CS245849B1 CS352585A CS352585A CS245849B1 CS 245849 B1 CS245849 B1 CS 245849B1 CS 352585 A CS352585 A CS 352585A CS 352585 A CS352585 A CS 352585A CS 245849 B1 CS245849 B1 CS 245849B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
cells
desmin
hybridoma
vimentin
antibody
Prior art date
Application number
CS352585A
Other languages
English (en)
Inventor
Eduarda Draberova
Pavel Draber
Vladimir Viklicky
Original Assignee
Eduarda Draberova
Pavel Draber
Vladimir Viklicky
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eduarda Draberova, Pavel Draber, Vladimir Viklicky filed Critical Eduarda Draberova
Priority to CS352585A priority Critical patent/CS245849B1/cs
Publication of CS245849B1 publication Critical patent/CS245849B1/cs

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Řešení se týká myšího lymfocytárního hybridomu, produkujícího protilátku proti vimentinu a desminu řady druhů, uloženého ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením VI-01. Samotná monoklonální protilátka hybridomů VI-01 je vhodná pro použití v enzymoimunologické a radioimunologické analýze testovaných tkání a buněk a při vizualizaci středních filament v buňkách na úrovni optického a elektronového mikroskopu.

Description

(54) Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01
2
Řešení se týká myšího lymfocytárního hybridomu, produkujícího protilátku proti vimentinu a desminu řady druhů, uloženého ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením VI-01. Samotná monoklonální protilátka hybridomů VI-01 je vhodná pro použití v enzymoimunologické a radioimunologické analýze testovaných tkání a buněk a při vizualizaci středních filament v buňkách na úrovni optického a elektronového mikroskopu.
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného buněčnou fúzí myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti prasečímu vimentinu a desminu.
Doposud se protilátky proti vimentinu a desminu vyrábějí tak, že je vimentin nebo desmin opakovaně injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době působení antigenu, slouží jaka zdroj protilátek, užívaných zejména pro identifikaci buněčných struktur, obsahujících vimentin a desmin. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému autigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat složitým způsobem, zvaným vysycování. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality.
Pro výrobu každé šarže je třeba připravit značně čistý imunizační antigen a další antigeny pro vysycení balastních protilátek, proti nečistotám.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti vimentinu a desminu, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská ul. č. 1083, pod označením IMG CZAS VI-01.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de, St., Groth, S., S. Scheidegger, O.: Productjon of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol. Meth., 35: 1 — 21, 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard, J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře 266 — 550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí myší myelomové linie P3-X63-Ag8. .653 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene B10.A, imunizovaných částečně purifikovaným extraktem prasečího mozku.
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s vimentinem a desminem řady druhů. Hybridom VI-01 je možné kultivovat in vltro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší první filiální generace mezi kmeny BALB/c a B10.A. Z konzerv, uchovaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu. Protilátka, produkovaná hybridomem VI-01 je specifická výhradně pro vimentin a desmin a nereaguje s žádným dalším proteinem středních filament a dalšími cytoskeletálními proteiny, jak bylo zjištěno imunoblotingem, Imunoradiometrickým testem a nepřímou imunofluorescencí. Průkaz byl získán p,o elektroforetickém přenosu různých buněčných lysátů a preparátů izlovaného cytoskeletonu z mozku získaných separací na elektroforéze v polyakrylamidovém gelu v prostředí dodecylsulfátu za redukujících podmínek. Po přenosu na nitrocelulózovou membránu byl vimentin a desmin specificky detegován s použitím VI-01 protilátky, prasečí protilátky proti myším imunoglobulinům a peroxidáza-antiperoxidázového komplexu (PAP) využívajícího monoklonální protilátku proti křenové peroxidáze. Výsledek byl dále potvrzen v imunoradiometrickém testu, kde byla prokázána vazba protilátky VI-01 na desmin a vimentin a nereaktivita s tubulinem a hovězím sérovým albuminem. V nepřímé imunofluorescencí ve světelném mikroskopu při použití prasečí protilátky proti myším imunoglobulinům značené fluorescein-iso-thiocyanátem (Ostav sér a očkovacích látek, Praha), docházelo u testovaných buněčných typů k vazbě pouze na intermediální filamenta. Po působení kolcemidem docházelo k typickému shluku filament k jádru.
Příklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 1 x 106 buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 13 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po 20 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a neprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 3,0 ml a scitické tekutiny, která obsahovala 10 mg/ml (vimentinem) v enzymoimunologickém testu (při použití prasečí antimyší protilátky značené křenovou peroxidázou) až do ředění 1: 10B. Specificita získané protilátky byla testována na panelu buněk z tkáňových kultur, a to jak v nepřímé imunofluorescencí (při použití prasečí protilátky proti myšímu imunoglobulinu značené fluorescein-iso-thiocyanátem, Ostav sér a očkovacích látek, Praha], tak i po elektroforetickém přenosu buněčných lyzátů na nitrocelulózovou membránu a specifické detekci nepřímým imunologickým testem (viz výše). Výsledky jsou shrnuty v tabulce č. 1.
Tabulka č. 1
Reaktivita VI-01 protiláky s buňkami různých linií ( + silná pozitivita, — negativní výsledek, IF — imunofluorescence, IB — imunobloting, V — vimentin, K — keratin, G — gliový kyselý protein, D — desmin).
Druh Tkáňový původ, Název linie Typ střed- Reaktivita
buněčný typ nich fila-
ment IF IB
Člověk plicní fibroblasty LEP V + +
| adenokarcinom HELA V + K + +
karcinom močového měchýře T-24 K —
T-lymfoblastoidní
linie MOLT-3 v + +
Krysa gliom C 6 V + G + +
Myš fibroblast 3T3 V + +
primární kultura Leydigovy V + +
buňky
Křeček buňky ovaria CHO v + +
buňky ledvin BHK-21 V + D + +
Z výsledků je zřejmé, že protilátka zo- a na membrány vázané polyribosomy.
brazuje vimentinový typ středních filament (Hela buňky obsahují i keratinový typ, který není zobrazen), řady druhů. Specificita byla dále upřesněna v imunoblotingu po přenosu purifikovaných materiálů na nitrocelulózu (tabulka č. 2).
Tabulka č. 2
Specificita VI-01 protilátky v imunoblotingu po přenosu purifikovaných a částečně purifikovaných materiálů na nitrocelulózovou membránu. (+ pozitivní reakce, — negativní reakce) (+ pozitivní reakce, — negativní reakce)
Materiál Výsledek
Vimentin +
Desmin +
Cytokeratiny —
Cytoskeletální proteiny izolované z myšího mozku —
Opět byla potvrzena reakce pouze s vimentinem a desminem a nereaktlvita s cytokeratiny (izolovanými z lidské kůže), proteiny neurofilament a gliálním fibrilárním kyselým proteinem.
Buňky hybridomů VI-01 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné ro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí, doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3mM), pyruvát sodný (lmM). Toto médium (označené jako H-MEMd, Ostav molekulární genetiky ČSAV), je pro kultivace hybridomů VI-01 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem (0,05mM), pufrem HEPES (10 mM) a inaktivovaným bovinním šerem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10 %). Hybridom je kultivován při 37 °C; Střední generační čas je 15,6 hod. a 6 měsíců, po sestrojení byl modální počet chromosomů 84. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin třídy IgM kappa, namířená proti epitolu nacházejícímu se na vimentinu a desminu.
Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem VI-01 analogicky s konvenčními protilátkami reaguje s vimentinem a desminem řady druhů. Je proto využitelná k detekci buněčných cytoskeletálních struktur většiny druhů obsahujících vimentin a desmin. Najde uplatnění zejména v každodenní práci na všech pracovištích patologické anatomie a onkologie, jako důležitá pomůcka při stanovení diagnózy. Je použitelná k diferenciální diagnóze mezi nádory epitheliálního (karcinomy) a mesenchymálního (sarkomy) původu.

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS VI-01, produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti vymentinu a desminu řady druhů.
CS352585A 1985-05-16 1985-05-16 Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01 CS245849B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS352585A CS245849B1 (cs) 1985-05-16 1985-05-16 Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS352585A CS245849B1 (cs) 1985-05-16 1985-05-16 Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS245849B1 true CS245849B1 (cs) 1986-10-16

Family

ID=5375610

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS352585A CS245849B1 (cs) 1985-05-16 1985-05-16 Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS245849B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH0630617B2 (ja) ジゴキシンに対し高い親和性を有するモノクロ−ナル抗体
KR910008637B1 (ko) 심근 미오신 중사슬에 대한 단일클론항체
CS245849B1 (cs) Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01
CS247450B1 (cs) Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01
CS223535B1 (cs) Myší lymfocytární hybridom
CS255643B1 (cs) Myši lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti a a β podjednotce tubulinu
CS264947B1 (cs) Myší lymfocytární hybridom GF-01 produkující protilátku proti gliovému kyselému proteinu středních filament
CS264946B1 (cs) Myší lymfocytární hybridom NF-01 produkující protilátku proti 210 kDa proteinu neurofilament
CS239800B1 (cs) Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04
CS255843B1 (cs) Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti β-podjednotce tubulinu
CS253336B1 (cs) Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12
CN119391649A (zh) 一种cc126单克隆抗体及其试剂盒的制备方法和用途
SU1759872A1 (ru) Штамм гибридных культивируемых клеток MUS мUSсULUS L., используемый дл получени моноклональных антител к трансферрину человека
CS253337B1 (cs) Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14
CS263087B1 (cs) Myší lymfocytárni hybridom produkující protilátku proti lidskému keratinu 18
CS238780B1 (cs) Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01
CS244398B1 (cs) Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01
CS243348B1 (cs) Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21
CS222781B1 (en) Electromotor with friction brake with decreased noise
CS236001B1 (cs) Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu
CN119736254A (zh) 一种misp3单克隆抗体及其试剂盒的制备方法和用途
CS235850B1 (cs) Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu
CS228860B1 (cs) Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu
SU1442545A1 (ru) Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L.,используемый дл получени моноклональных антител к @ -цеп м иммуноглобулинов человека и обезь н
CS262046B1 (cs) Myší lymfocytární hybrldom 3-04 produkující protilátku proti keratinu 18