CS222779B1 - Myší lymfocytární hybridom - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom Download PDFInfo
- Publication number
- CS222779B1 CS222779B1 CS34782A CS34782A CS222779B1 CS 222779 B1 CS222779 B1 CS 222779B1 CS 34782 A CS34782 A CS 34782A CS 34782 A CS34782 A CS 34782A CS 222779 B1 CS222779 B1 CS 222779B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- ptf
- antibody
- transferrin
- antibodies
- Prior art date
Links
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 title description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims abstract description 16
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Vynález se týká myšího lymfocytáraího
hybridomu IMGCZAS PTF-01, produkujícího
protilátku prasečímu transferinu podtřídy
IgGl, uloženého ve sbírce hybridoraů Ústavu
molekulární genetiky ČSAV.
Samotná monoklonální protilátka hybridomu
PTF-01 je vhodná pro použití v radioimunoanalýse
a nebo enzymoimunoanalyse.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného buněčnou fúzí myší myelomové buněčná linie P3-K63-Ag8.653 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti prasečímu transferinu.
Dosud se protilátky proti transferinu vyrábějí tak jako protilátky proti jiným plasmatickým bílkovinám, tj. transferin je injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům, prasatům nebo ovcím. Sérum těchto zvířat, odebrané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek užívaných v diagnostice, zejména při kvantitativní analyse koncentrace transferinu v plasmě nebo jiných tělních tekutinách. Tento postup, nazývaný konvenční imunisací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se projevuje značně heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří vedle protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat složitým způsobem, zvaným vysycování. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality. Z toho plyne nutnost srovnávání výsledků s velkým počtem standardů antigenu v diagnostických metodách, postavených na konvenčních sérech. Pro výrobu každé šarže séra je třeba připravit značně čistý imunizační antigen a další antigeny pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám.
Uvedené nedostatky výše zmíněného dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti prasečímu transferinu, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňské ul. č. 1US3 pod označením IMG OCAS PTF-O1.
- 2222 77β
Uvedený hybridom byl získán způsobem znaným z odborné literatury /Fazekss de, St., Groth, S., Scheidigger, D.: Froduction of raonoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Iinmunol.
Meth., 35:1-21, 1980j Galfré, G., Howe, S.C., Milstein, C., Butcher, G.W., Howard, J.C.: Antibodies to major histocompatibility antigens piOduced by hybrid cell lineš, Náturo 266:550, 1977/ klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí myší myelemové linie P>-Xč3/AgS.65> a buněk, získaných ze sleziny myší kmene Balb/c, imunizovaných prasečím transferinem.
Výhodou hybridomů je, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s prasečím transferinem. Hybridom PTF-01 je možné kultivovat xn vitro v mediích vhodných pro živočišné buňky β jo adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině rnyší kmene Balb/c. 2 konserv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu. Protilátka, produkovaná hybridomem PTF-01, je specifická výhradně pro transferin a není třeba se zbavovat protilátek balastních.
Příklad provedení
2a účelem pomnožení buněk hybridomů PTF-01 in vivo a získání protilátky jím produkované bylo aplikováno 1,5 x 10° buněk hybridomů do peritoneální dutiny myši kmene Balb/c, která byla 14 dní před injikováním buněk hybridomů iritována 0,5 ml parafinového oleje podaného intraperitoneálně. Po 18 dnech růstu hybridomů v peritoneální dutině byla myš zabita a z peritoneální dutiny odebráno celkem 3 ml ascitické tekutiny. Ascitická tekutina obsahovala podle elektiOforetické analýzy 7,7 mg/ml imunoglobulinu nesoucího protilátkovou aktivitu. Aktivita protilátky byla měřena enzymoimunologiclíým testem s prasečím transferinem v pevné fázi a prasečí anti-myší protilátkou značenou křenovou peroxidázou. Positivní reakce byla pozorována až do ředění ascitické tekutiny 1:10^. Využitelnost protilátky produkované hybridomem PTF-02 pro imunoprecipitační reakce tyla dále testována tak, že ascitická tekutina hybridomů PTF-01 byla smísena ve e tejných objemech s ascitickými tekutinami hybridomů PTF-02 a xTF-03. Směs těchto tří tekutin obsahujících jednotlivé mono- 3 222 779 klonální protilátky proti prasečímu transferinu poskytovala precipitát s prasečím transferinem ve dvojité imunodifuzi v azurovém gelu.
Buňky hybridomu PTF-01 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako polosuspcnzní kultury. Základním kultivačním mediem je Eaglovo minimální esenciální m/dium s Hankcovou solnou smésí a doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin />mM/, pyruvát sodný A mM/. Toto medium /označované jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV/, je pro kultivace hybridomu PTF-01 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem /0,05 mM/ pufrem HEPES /10 mlú/ a inaktivovaným bovinním sérem /Bioveta, Ivanovice na Hané, 10 %/. Hybridom je kultivován při 27°C. Střední generační Čas je 18,8 hod. a půl roku po sestrojení byl modální počet chromosomů 92. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgGl.
Specifičnost protilátky byla ověřena křížovou reakcí s trans feriny člověka, koná a ovce metodou enzymoi imunologické analysy. Reakce piOtilátky, produkované hybridomem PTF-01 byla nulová. Podobné bylo ověřeno, že protilátka nereaguje s transferinem qysím.
Pro sesti‘ojení hybridomu PTF-01 byl použit znaný postup, spo Sívající ve fúzi myelomových buněk s buňkami z imunní sleziny pod vlivem polyethylenglykolu o molekulové hmotnosti 1500 s následnou selekcí v mediu, obsahujícím hypoxanthin, aminopterin a thymidin.· Po identifikaci protilátky produkujících populací hybridních buněk byly tyto populace opakovaně klonovány v polotekutérn agaru a testovány na produkci specifické protilátky7.
Hybridom PTF-01 může být průmyslové využíván jako zdroj protilátky proti prasečímu transferinu v metodách analytických nebo preparativních. Samotná monoklonální protilátka hybridomu PTF-01 je vhodná pro použití v radioimunoanalýse nebe enzymcimunoanalýse.
-4 223 779
Pro svou jednoduchost je výhodné metoda radiální imunodifúze v gelu· V této metodě se protilátka hybridomů PTF-01 dá použít ve spojení s protilátkami hybridomů PTF-02 a PTF-O3· Směs těchto tří monoklonálních protilátek poskytuje s prasečím transferinem typický imunní precipitét. Precipitační linie nebo prstence získané v gelu jsou ostřejší než linie a prstence, získané pomocí konvenčního séra proti prasečímu transferinu.
Claims (1)
- Myší lymfocytární hybridom IKíGíZAS PTF-01, produkující monoklonální protilátku podtřídy IgGl proti prasečímu transferinu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS34782A CS222779B1 (cs) | 1982-01-18 | 1982-01-18 | Myší lymfocytární hybridom |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS34782A CS222779B1 (cs) | 1982-01-18 | 1982-01-18 | Myší lymfocytární hybridom |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS222779B1 true CS222779B1 (cs) | 1983-07-29 |
Family
ID=5335402
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS34782A CS222779B1 (cs) | 1982-01-18 | 1982-01-18 | Myší lymfocytární hybridom |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS222779B1 (cs) |
-
1982
- 1982-01-18 CS CS34782A patent/CS222779B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS222779B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS222781B1 (en) | Electromotor with friction brake with decreased noise | |
| CS222780B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridem | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS238780B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 | |
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| CS228857B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferům | |
| CN116836278B (zh) | 抗孕酮抗体、检测孕酮的试剂和试剂盒 | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 | |
| CS234935B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 | |
| CS233810B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu | |
| CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS248383B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridem IMG CZAS MEM-09 | |
| CS228858B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu 6 | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
| MARTIN | E. COEN BEUVERY | |
| CS239761B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS T3-01 produkující protilátku proti trijodtyroninu | |
| CS243652B1 (cs) | MySí lyafocytární hybrido· IMG CZAS HP-03 | |
| CS228856B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G | |
| SU1712411A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к иммуноглобулину G павианов | |
| CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 |