CS228856B1 - Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G Download PDFInfo
- Publication number
- CS228856B1 CS228856B1 CS592982A CS592982A CS228856B1 CS 228856 B1 CS228856 B1 CS 228856B1 CS 592982 A CS592982 A CS 592982A CS 592982 A CS592982 A CS 592982A CS 228856 B1 CS228856 B1 CS 228856B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- immunoglobulin
- producing
- antisubstance
- hybridom
- antibody
- Prior art date
Links
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 title 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 15
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 5
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IYKLQEMQEGWXOQ-UHFFFAOYSA-N 3-(7-amino-4-chloro-1-oxoisochromen-3-yl)oxypropyl carbamimidothioate Chemical compound NC1=CC=C2C(Cl)=C(OCCCSC(=N)N)OC(=O)C2=C1 IYKLQEMQEGWXOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 1
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 1
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- -1 J-glutamine (3 mM) Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- WKQCYNCZDDJXEK-UHFFFAOYSA-N simalikalactone C Natural products C1C(C23C)OC(=O)CC3C(C)C(=O)C(O)C2C2(C)C1C(C)C=C(OC)C2=O WKQCYNCZDDJXEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
(54) Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného buněčnou fúzí myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G.
Dosud se protilátky proti imunoglobulinu G vyrábějí tak, že je imunoglobulin G opakovaně injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům nebo koním. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebrané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných zejména pro kvalitativní nebo kvantitativní analýzu imunoglobulinu ve výzkumu a v imunodiagnostické praxi. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat vysycováním. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a další anti2 geny pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátky proti prasečímu imunoglobulinu G, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská č. 1083, pod označením IMG CZAS PGG-02.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth, S., Scheidigger, D.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol. Meth., 35 : 1-21, 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard, J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře 266 : 550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene Balb/c, imunizovaných prasečím imunoglobulinem G.
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s prasečím imunoglobulinem G. Hybridom PGG-02 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene Balb/c. Z konzerv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu.
Příklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 1,4 X 106 buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 18 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parařinovým olejem (0,4 ml intraperitoneálně j. Po 16 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 6,2 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 11 mg/ml imunoglobulinu. Ascitická tekutina obsahující produkt hyhridomu PGG-02 byla smíšena ve stejných objemech s acitickou tekutinou obsahující produkt hyhridomu PGG-05. Směs těchto dvou monoklonálních protilátek poskytovala precipitát s prasečím imunoglobulinem G ve dvojité imunodifúzi v agarovém gelu.
Buňky hyhridomu PGG-02 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí a doplněné o neesenciální aminokyseliny, J-glutamin (3 mM), pyruvát sodný (1 mMJ. Toto médium (označované jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV), je pro kultivace hyhridomu PGG-02 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoethanolem (0,05 mMj pufrem HEPES (10 mM) a inaktivovaným bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10% J. Hybridom je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 17,2 hod. a 8 měsíců po sestrojení byl modální počet chromosomů 81. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgGl.
Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem PGG-02 poskytuje ve směsí s monoklonální protilátkou produkovanou hybridomem PGG-05 precipitát s prasečím imunoglobulinem G a též s Fc fragmentem prasečího imunoglobulinu G. Fc fragment získaný limitovanou enzymatickou hydrolýzou trypsinem je složen z C-koncových polovin polypeptidického řetězce χ, tj. těžkého řetězce imunoglobulinu G. Fc fragment obsahuje pouze konstantní části řetězce χ, které charakterizují imunoglobulin třídy G. Precipitace fragmentu Fc je důkazem, že monoklonální protilátka produkovaná hybridomem PGG-02 je zaměřena proti antigenní determinentě lokalizované v části molekuly imunoglobulinu tvořící Fc fragment.
Hybridom PGG-02 může být průmyslově využíván jako zdroj protilátky proti prasečímu imunoglobulinu G v metodách analytických nebo preparativních. Protože protilátka je specifická pro konstantní část těžkého řetězce imuloglobulinu G, může sloužit k identifikaci imunoglobulinu třídy G a k jeho kvantitativní analýze. Ve směsi s monoklonální protilátkou PGG-05 se dá použít pro kvantitativní analýzu metodou radiální imunodifúze v gelu. Další možné použití je ve funkci druhé protilátky, tj. protilátky proti protilátce v imunochemických a imunologických metodách v případech, kdy prvá protilátka je konvenční protilátka připravená imunizací pokusných prasat. V imunohistologických a imunohistochemických metodách využívajících optického nebo elektronového mikroskopu se použije monoklonální protilátka samotná po konjugaci s fluorescenčními látkami, enzymy, feritinem nebo biotinem. Pro vytvoření precipitátu druhou protilátkou, například v radiolmunoanalýze, nebo pro vytvoření zákalu, například v imunonefelometril, se použije monoklonální protilátka PGG-02 ve směsi s monoklonální protilátkou PGG-05.
Claims (1)
- předmEtMyší lymfocytární hybridom IMG CZAS PGG-02, produkující monoklonální protilátVYNALEZU ku podtřídy IgGl proti prasečímu imunoglobulinu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS592982A CS228856B1 (cs) | 1982-08-10 | 1982-08-10 | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS592982A CS228856B1 (cs) | 1982-08-10 | 1982-08-10 | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS228856B1 true CS228856B1 (cs) | 1984-05-14 |
Family
ID=5405199
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS592982A CS228856B1 (cs) | 1982-08-10 | 1982-08-10 | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS228856B1 (cs) |
-
1982
- 1982-08-10 CS CS592982A patent/CS228856B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Stähli et al. | High frequencies of antigen-specific hybridomas: dependence on immunization parameters and prediction by spleen cell analysis | |
| CS228856B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G | |
| Enghofer et al. | Immunoglobulins with different specificities have similar idiotypes | |
| CS228858B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu 6 | |
| CS228857B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferům | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| EP0119859A2 (en) | Monoclonal antibodies, processes for their preparation and methods for their use | |
| CS233810B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu | |
| CS238780B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| SU1685997A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
| CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 | |
| CS243652B1 (cs) | MySí lyafocytární hybrido· IMG CZAS HP-03 | |
| CS222781B1 (en) | Electromotor with friction brake with decreased noise | |
| RU2093572C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к l -цепям иммуноглобулинов свиньи | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 | |
| CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
| CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
| CS222780B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridem | |
| CS263123B1 (cs) | Myši lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému alfa-fetoproteinu |