RU2093572C1 - Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к l -цепям иммуноглобулинов свиньи - Google Patents
Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к l -цепям иммуноглобулинов свиньи Download PDFInfo
- Publication number
- RU2093572C1 RU2093572C1 RU95104742A RU95104742A RU2093572C1 RU 2093572 C1 RU2093572 C1 RU 2093572C1 RU 95104742 A RU95104742 A RU 95104742A RU 95104742 A RU95104742 A RU 95104742A RU 2093572 C1 RU2093572 C1 RU 2093572C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- immunoglobulins
- monoclonal antibodies
- pig
- chains
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Использование: ветеринарная биотехнология, разработка диагностических реагентов для выявления иммуноглобулинов свиньи в биологических жидкостях. Сущность: получение штамма гибридных культивируемых клеток мыши, продуцирующего моноклональные антитела (МКА) к легким цепям иммуноглобулинов свиньи. Штамм получают при слиянии спленоцитов мышей линии BALB/c, иммунизированных поверхностным IgA свиньи, с клетками миеломы Sp 2/0. Антитела относятся к изотипу IgGI и стимулируют преципитирующую активность моноклональных антител к IgG свиньи. 2 табл., 3 пр.
Description
Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной биотехнологии, в частности к получению штамма гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела, которые могут быть использованы для приготовления высокоспецифических диагностических реагентов с целью идентификации и количественного определения уровня иммуноглобулинов в биологических жидкостях организма свиньи.
В настоящее время существует два основных иммунохимических метода для идентификации и количественного определения уровня иммуноглобулинов животных: радиальной иммунодиффузии (РИД) и иммуноферментный (ИФА). В качестве основных иммунодиагностических реагентов в них используются поликлональные антисыворотки, моноклональные антитела. Полученные гипериммунной антисыворотки, специфичной к L-цепям иммуноглобулинов свиньи трудно осуществимо, поскольку практически невозможно выделить иммунохимически чистые L-цепи в достаточном для иммунизации количестве.
Известно, что штамм гибридных клеток, полученный из одного клона, является постоянным продуцентом антител строго определенной специфичности.
Необходимость данной работы обусловливается важной ролью иммуноглобулинов в инфекционной и неинфекционной патологии животных. При этом большое значение приобретают исследования, связанных с излучением основных иммунных механизмов и роли различных классов иммуноглобулинов при вирусных и бактериальных инфекциях животных. Получение высокоспецифических реагентов также необходимо для определения видовой принадлежности белков крови. Кроме того, излучение антигенной структуры l-цепей иммуноглобулинов свиньи имеет важное научное и практическое значение, поскольку антительная специфичность ряда Ig связана с определенными маркерами L-цепей.
Известны штаммы гибридных клеток, продуцирующие моноклональные антитела к L-цепям иммуноглобулинов человека [1,2] Моноклональные антитела данных клонов используются при эпитопном картировании L-цепей иммуноглобулинов человека и обладают большой диагностической ценностью при аутоиммунных заболеваниях и злокачественных B-клеточных опухолях.
Известен также штамм гибридных клеток, продуцирующий моноклональные антитела к L-цепям иммуноглобулинов свиньи [3] Штамм был получен путем слияния спленоцитов иммунных мышей BALB/c с клетками миеломы Sp 2/0. Однако моноклональные антитела, продуцируемые этой гибридомой, были недостаточно хорошо охарактеризованы и не была показана потенциальная возможность из применения в практике. Кроме того, не показано, что данные антитела стимулируют преципитирующую активность при их смешивании с другими моноклональными реагентами, не обладающими этой способностью.
Технический результат заключается в получении штамма гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела к L-цепям иммуноглобулинов свиньи, которые могут быть использованы на практике не только для эпитопного картирования, но и для видовой идентификации иммуноглобулинов, а также как иммунохимические реагенты, стимулирующие преципитационную активность моноклональных антител к IgG свиньи.
Штамм гибридных клеток получен путем слияния клеток мышиной миеломы линии Sp 2/0 с лимфоцитами селезенки мышей линии BALB/c, иммунизированных четырехкратно (200 мкг) sIgA, выделенным из бронхо-альвеолярных смывов свиньи хроматографическими методами. Слияние клеток проводили через 3 дня после последней внутривенной инъекции антигена по стандартной методике с использованием ПЭГ с М.м.1500. Клетки миеломы и лимфоциты смешивали в соотношении 1: 4-1:10. Селекцию гибридом проводили на среде, содержащей гипоксатин, аминоптерин и тимидин. Гибридомы культивировали на 96-луночных панелях (фирма "Nunc") на среде RPMI-1640 или ДМЕМ с 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота в атмосфере с 5% CO2.
Скрининг гибридом на продукцию специфических моноклональных антител проводили методами непрямого твердофазного ИФА с использованием антивидовых иммунопероксидазных конъюгатов, а также препарата, содержащего иммунохимически чистый sIgA свиньи. Клонирование и реклонирование клеточных культур проводили на 96-луночных панелях методом предельных разведений с использованием макрофагального фидерного слоя.
В результате был отобран и размножен клон, продуцирующий моноклональные антитела к L-цепям свиньи, которые реагировали с IgG, IgM, sIgA в ИФА, перекрестные реакции с иммуноглобулинами других видов животных отсутствовали. Этот клон клеток последовательно размножен в 96-, 24-луночных панелях, а затем в культуральных матрасах. Культуральная жидкость была исследована на содержание специфических антител. Титр специфических антител в ИФА составлял - 1: 800. Препараты моноклональных антител получали 2-х кратным осаждением раствором сульфата аммония 50% насыщения с последующим диализом. Была определена специфичность моноклональных антител в иммуноблоттинге, ИФА, РДП, дот-блот ИФА.
Предложенный штамм гибридных клеток мышей Mus. Musculus СХЖ РАСХН N 53, продуцент моноклональных антител к L-цепям иммуноглобулинов свинти обладает следующими свойствами.
Морфологические признаки. Клетки округлой формы с большим ядром, плохо прикрепляются к субстрату, размножаются в суспензии.
Культуральные свойства. Клетки перевивают один раз в 2-3 дня с полной заменой ростовой среды с коэффициентом 1:2-1:4.
Характеристика культуры животных. Клетки вызывают образование асцитов у линейных мышей BALB/c, обработанных пристаном за 7-10 дней внутрибрюшинного введения 2-10•106 клеток/мышь.
Контаминацмя 1. 0 Тесты на микоплазмы, бактерии, плесневые грибы и дрожжи отрицательны.
Изотип 1 0продуцируемых моноклональных антител IgG1.
Хранение культуры Среда для замораживания: 90%-эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, 10%-диметилсульфоксида. Режим замораживания: до -70oC 1o/мин, далее жидкий азот (-196oC). Восстановление после размораживания: быстрое размораживание при +37oC, центрифугирование при 1200 об/мин 10 мин, ресуспендирование в ростовой среде до концентрации 0,3-0,5•106 кл/мл. Жизнеспособность после размораживания 70-80%
Пример 1. Клетки клона пассировали на среде ДМЕМ с 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, 4мМ пирувата натрия, 2 мМ L-глютамина в атмосфере с 5% CO2. Титр специфических моноклональных антител в культурной жидкости в ИФА составил 1:800.
Пример 1. Клетки клона пассировали на среде ДМЕМ с 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, 4мМ пирувата натрия, 2 мМ L-глютамина в атмосфере с 5% CO2. Титр специфических моноклональных антител в культурной жидкости в ИФА составил 1:800.
Пример 2. Клетки клона вводили в брюшную полость линейных мышей BALB/c, предварительно за 7 суток праймированным 0,3 мл пристана по 2-10•106 клеток/мышь в 0,5 мл фосфатно-солевого буфера. На 10-14 сутки получена асцитическая жидкость, титр специфических моноклональных антител в которой составлял в ИФА- 2:105. Реагенты, полученные при смешивании моноклональных антител данного клона с моноклональными антителами к IgG свиньи обладали преципитирующей активностью в разведении 1:8-1:32 в РДП.
Пример 3. Препараты моноклональных антител, полученные из асцитической жидкости двукратным осаждением раствором сульфата аммония 50% насыщения, меченные пероксидазой, были использованы в качестве конъюгата в ИФА. Титр конъюгированных антител составил 1:2000 и ИФА.
Табл. 1. Определение специфичности моноклональных антител в радиальной иммунодиффузии, ИФА, иммуноэлектрофорезе и иммуноблоттинге с использование различных антигенов.
Конъюгированные антитела были использованы для определения видовой принадлежности иммуноглобулинов методом дот-блот ИФА.
Табл. 2. Определение видовой специфичности моноклональных антител с использованием сывороток различных видов животных и человека.
Таким образом, установлено, что из исследованных сывороток крови от 11 видов животных и человека конъюгированные моноклональные антитела специфически взаимодействовали только с сывороткой крови свиньи.
Предложенный штамм апробирован нами с положительным результатом в лабораторных условиях в 1994 году.
Штамм гибридных клеток мышей Mus. Musculus L. СХЖ РАСХН N 53, продуцент моноклональных антител к L-цепям иммуноглобулинов свиньи хранится в Специализированной коллекции перевиваемых соматических культур клеток сельскохозяйственных и промысловых животных Российской коллекции культур клеток при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии (СХЖ РАСХН) под N СХЖ РАСХН 53
Штамм является продуцентом моноклональных антител специфически реагирующих только с L-цепями иммуноглобулинов свиньи, и не дающих перекрестных реакций с иммуноглобулинами других видов животных.
Штамм является продуцентом моноклональных антител специфически реагирующих только с L-цепями иммуноглобулинов свиньи, и не дающих перекрестных реакций с иммуноглобулинами других видов животных.
Наработку моноклональных антител можно проводить в неограниченном количестве. Моноклональные антитела являются препаратом, имеющим стандартные характеристики.
Штамм может быть использован в научно-исследовательских институтах, проблемных лабораториях, ведущих работы в области иммунологии и биотехнологии.
Препараты моноклональных антител, полученные из асцитической жидкости, можно использовать для идентификации и количественного определения уровня иммуноглобулинов свиньи методом радиальной иммунодиффузии (РИД) и в иммуноферментном анализе (ИФА).
Источники информации
1. Арсеньева Е. Л, Богачева Г.Т, Ибрагимов А.Р. и др. Способ получения моноклональных антител к легким цепям иммуноглобулинов человека. Авт. свид. N 14021617, БИ N 22, 1988.
1. Арсеньева Е. Л, Богачева Г.Т, Ибрагимов А.Р. и др. Способ получения моноклональных антител к легким цепям иммуноглобулинов человека. Авт. свид. N 14021617, БИ N 22, 1988.
2. Арсеньева Е. Л, Богачева Г.Т. Ибрагимов А.Р. и др. Способ получения моноклональных антител к легким цепям иммуноглобулинов человека. Авт. свид. N 1416509, БИ N 30, 1988.
3. Paul P.S. Mengeling W.L. Malstrom C.E. Van Deusen R.A. Production and characterization of monoclonal antibodies to porcine immunoglobulin gamm, alpha and chains. Am.J.Vet.Res. 1989, 50, 471-479 (прототип).
Claims (1)
- Штамм гибридных культивируемых клеток Mus musculus L. СХЖ РАСХН N 53, используемый для получения моноклональных антител к L-цепям иммуноглобулинов свиньи.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95104742A RU2093572C1 (ru) | 1995-03-31 | 1995-03-31 | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к l -цепям иммуноглобулинов свиньи |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95104742A RU2093572C1 (ru) | 1995-03-31 | 1995-03-31 | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к l -цепям иммуноглобулинов свиньи |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95104742A RU95104742A (ru) | 1997-03-27 |
RU2093572C1 true RU2093572C1 (ru) | 1997-10-20 |
Family
ID=20166251
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95104742A RU2093572C1 (ru) | 1995-03-31 | 1995-03-31 | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к l -цепям иммуноглобулинов свиньи |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2093572C1 (ru) |
-
1995
- 1995-03-31 RU RU95104742A patent/RU2093572C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Paul P.S., Mengeling W.L., Malstrom C.E., Van Deusen R.A. - Production and characterization of monoclonal antibodies to porcine immunoglobulin gamma alpha and light chains. - Am. J. Vet. Res., 1989, 50, 471 - 479. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU95104742A (ru) | 1997-03-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8765133B2 (en) | Method of producing anti-CD166 antibody in ostrich | |
CA1337717C (en) | Monoclonal antibodies against human necrosis factor (tnf) _ use thereof for detecting tnf in samples, and pharmaceutical compositions containing them | |
EP0119629A2 (en) | Use of anti-idiotype antibodies in immunoassay | |
CN104928258A (zh) | 犬细小病毒杂交瘤细胞、及单克隆抗体和应用 | |
WO1986002364A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
CN1296567A (zh) | 用于检测动物怀孕的方法和装置 | |
RU2093572C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к l -цепям иммуноглобулинов свиньи | |
RU2093573C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к igm свиньи | |
RU2093574C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к igg свиньи | |
RU2377299C1 (ru) | ШТАММ 5А10 ПОСТОЯННОЙ ГИБРИДОМНОЙ ЛИНИИ КЛЕТОК МЫШИ Mus. musculus - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К IgG КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | |
AU2012203085B2 (en) | Antibody produced using ostrich and method for production thereof | |
JPS60156383A (ja) | 膣トリコモナス決定因子に対して向けられたモノクロ−ナル抗体を産生するハイブリツド細胞系統 | |
JPH06153979A (ja) | 魚類イリドウイルスに対するモノクローナル抗体並びに該抗体を製造するためのハイブリドーマ及び方法 | |
RU1776691C (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, - продуцент моноклональных антител против J @ Е человека | |
WO1986002355A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
RU2407795C1 (ru) | Клон гибридных клеток f3h10 животных mus musculus l. - продуцент моноклональных антител к дифтерийному токсину | |
RU2198922C2 (ru) | Штамм гибридных клеток r1/s-5a6 животных mus musculus l., продуцирующих моноклональные антитела к риккетсиям провачека | |
RU2401303C1 (ru) | Клон гибридных клеток g10b6 животных mus musculus l - продуцент моноклональных антител к дифтерийному токсину | |
RU2377298C1 (ru) | ШТАММ 1Н8 ПОСТОЯННОЙ ГИБРИДОМНОЙ ЛИНИИ КЛЕТОК МЫШИ Mus. Musculus - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К IgG ОВЦЫ | |
SU1752763A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS MUScULUS L. - продуцент моноклональных антител к I @ Е человека | |
JPS63258493A (ja) | 抗ガングリオシドgm↓1単クロ−ン性抗体、これを産生する細胞及びこれから成る試薬 | |
Rødahl et al. | Participation of antigens related to the psoriasis associated antigen, pso p27, in immune complex formation in patients with ankylosing spondylitis. | |
RU2012594C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus l - продуцент моноклональных антител к 146s-компоненту вируса ящура азия-1 | |
Ramasamy | Applications of monoclonal antibody technology | |
EP0307186B1 (en) | Anti-ganglioside GD1a monoclonal antibody MZ, MZ-producing cells and MZ-containing reagent |