CN1296567A - 用于检测动物怀孕的方法和装置 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了特异性结合早期怀孕因子的,可在动物包括但不限于牛、猫、狗、马、人、羊和猪的体液中发现的抗体。本发明提供了用于检测动物是否怀孕的方法,在从动物中收集的适宜体液中没有早期怀孕因子则表明没有怀孕。提供了用于检测动物体液中的早期怀孕因子的装置,包括特异性结合早期怀孕因子的抗体。

Description

用于检测动物怀孕的方法和装置
发明领域
本发明涉及检测动物包括人怀孕和/或植入领域，以及其装置。
发明背景
医生和兽医一直在寻找可靠的怀孕、植入和可生存怀孕(viable)的检测标记以帮助治疗不孕和早期怀孕治疗。在人类中，以胎盘蛋白标记的为基础的早期怀孕诊断只有在怀孕4周后才可靠，超声分析在受孕7-8周才可靠。
在家畜工业中，重要的是能够鉴定交配后受孕不成功的动物。例如，在目前的牛工业中，在交配后的35-40天前没有办法鉴定，而且必须由兽医用扪诊方式鉴定。或者，在21天超声分析可鉴定正在发育的胚胎。兽医扪诊远非最常用的方法，每次检测需花费约4-10美元。超声分析的费用抑制了将超声分析用于常规农场管理。除这些检测的费用外，农场主由于拥有已交配但未受孕的牛，也称为“未确定的”牛(“open”cow)而遭受额外的显著经济损失。“未确定的”牛每天需额外花费农场主4-10美元。较好的奶牛是最难交配的牛，所以当它们是“未确定的”的时，损失甚至更大。第一次交配后，只有不到50％的牛受孕。因此，通常的交配过程允许每头牛2 1/2次受精失败。如果能将牛“未确定的”的时间间隔缩短到数天而不是数月，就可以大大提高总下仔率。
已经用一种生物检测方法检测动物中的一种因子，称为早期怀孕因子(EPF)或者最近称为免疫抑制性早期怀孕因子(ISEPF)，据认为，这种因子可抑制母亲对胚胎/胎的免疫反应。尽管通过生物检测说明了活性，但已有文献呈现出ISEPF有数种不同的MW形式。在小鼠中，Clarke等(Clin Exp.Immunol.32：318,1978)报道了一种约180000kD的EPF。在羊中，Clarke等(F.Reprod.Immunol.1980 Vol.2：151)描述了存在多种形式的EPF，包括20kD，50kD和250-350kD形式。在来自同一实验室的一篇1987年的论文中，Clarke等描述了从怀孕12周的羊胚胎中纯化12kD EPF(J.Reprod.Immunol.1987 10：133-156)。Cavanaugh描述了从培养的小鼠卵巢和输卵管中纯化21kD EPF，该EPF由10.5,7.2和3.4kD的三个亚单位组成(J.Reprod.Fertil.71：581,1984)。最近已将该因子描述作为高分子量的糖蛋白(Threlfall，1993)，但在本发明之前，尚不知功能纯的制品。
ISEPF的间接生物检测利用Bach和Antoine(Nature 217：658,1968)描述的体外花结抑制试验，该试验测量ISEPF增强抗淋巴细胞血清(ALS)诱导的T细胞与异源红细胞之间花结形成之抑制作用的能力。在花结试验中，必须同时存在两种分子量组分才能检测ISEPF。据推测，在该试验中，ALS从立体上阻碍了红细胞的结合。ISEPF通过使淋巴细胞上的一些结合位点饱和来提高抑制作用(Smart,YC等，Fertil.&Steril.35：397,1981)。已在小鼠(Morton等，自然(Nature)249：4591974)、大鼠(Heywood,LH等，Australian Soc.for Reprod.Biol.1979)、人(Morton,H等，柳叶刀(Lancet)394 1977)、羊(Morton,H等，Res.in Vet.Sci.26：261 1979)、猪(Grewal,AS等，AustralianSoc.for Reprod.Biol.1981)和牛(Nancarrow等J.Reprod.& Fert.57：385 1979)中发现了ISEPF。Noonan等(Nature 278：629和649 1979)还描述了ISEPF为种非特异性的。
如果在交配后不久即出现ISEPF，那么ISEPF可能是优秀的动物怀孕的早期标记。但是，花结试验在技术上很难完成，费时，费力，而且产生大量的假阳性读数(Sinosich等，1985)。为了开发一种可再现且没有大量假阳性信号的ISEPF检测，需要基本上纯的ISEPF制品。在本发明之前，尚未报道过高分子量ISEPF的完全纯化方法。
仍然需要一种可靠的检测方法以便在受孕后尽可能早地检测怀孕并进一步检测自然流产。
还需要能够使动物交配并在12-48小时内确定所述交配是否导致受孕。例如在牛中，可给所述未受孕的牛注射前列腺素并使所述牛再次受孕，使之再次怀孕而不会损失30天。还有能够提高种牛以高比例植入的能力的需要。
发明概述
本发明提供本文称为“早期怀孕因子”或ECF的纯化因子，ECF特异性抗体，用于检测取自动物的体液或组织样品中是否存在ECF的试剂盒和装置。描述了在交配12-48小时内用于检测受孕的方法。还提供了受孕和植入后用于检测胎死亡的方法。还提供了利用本发明ISEPF和抗ISEPF抗体提高胚胎植入的方法。
附图描述
图1是本发明支持物的示意图，表明1)一种支持物，在其上已分析了含ECF的样品(ECF阳性)和2)一种支持物，在其上已分析了不含ECF的样品(ECF阴性)；“T”标明待测或抗ECF抗体带的位置；“C”标明对照抗体的带。
图2与本发明支持物在接触中的物体的示意图，以开放和封闭位置标明。
发明详述
定义
在本文中，可将“受孕”与“受精”交换使用。
在本文中，“一种”可以是一个或一个以上。
在本文中，“纯化的”指充分不含与其正常共存的污染或细胞组分从而将其与其天然环境中的污染或其他组分区别开的蛋白质(多肽、肽等)。纯化的蛋白质可以是同质的，但无需是均质的。它必须充分不含污染物以便用于临床或研究，例如用于检测蛋白质的抗体的检测。
详细描述
本发明提供了与纯化的ECF特异性结合的抗体。所述抗体可与抗原的特有表位特异性反应或者它们也可与其他生物的表位反应。术语“结合”指能够与抗原反应或者与抗原非随机相连。“特异性结合”、“特异性反应”或者“特异性针对”描述了基本上不与任何抗原交叉反应，而只与一种具体的，在这种情况下，仅与纯化的ECF反应。
优选，按照通过在4-15％梯度聚丙烯酰胺凝胶中的变性凝胶电泳中测量的，纯化ECF的分子量为190000-205000，适宜的MW标准包括20000、144000和208000[Amersham Polyacryl标准]。通过除去所有非糖蛋白的最初纯化步骤得到糖蛋白ECF。该步骤可以是高氯酸提取。按本文所述将所得的糖蛋白馏份用于生产抗体并治疗动物，包括人。按实施例1所述，可将ECF通过离子交换色谱进一步纯化，再用柱色谱纯化，得到馏份A1、A2和B。将这些馏份合并得到进一步纯化的ECF。用实施例1所述的一个或多个步骤纯化的ECF以及其馏份A1、A2和B可以得自牛、猫、狗、人、马、羊和猪。
本发明提供了可识别并结合来自牛、猫、狗、人、马、羊和猪的ECF的抗体。本发明抗体可以是来自任何动物的任何同种型，例如IgG、IgM或IgA，它们可以是多克隆的、单克隆的，人源化的，全人的或嵌合的。所述抗体可以是单价或二价单链抗体。如本文所预期的，抗体包括结合ECF的任何配体，例如完整抗体、抗体片段或者与抗原有反应性的其他试剂。从一个种的ECF产生的抗体可用于识别并结合来自其他种的ECF。按照本领域已知的方法完成种间抗原一抗体反应的优化，包括抗体-抗原与用于提高特异性的封闭蛋白间比例的优化。优选，从一给定种的ECF产生的抗体可用于识别并结合来自同种的ECF。
本发明提供了通过将来自个体的体液或组织样品与一定量与ECF特异性反应的抗ECF抗体接触，然后检测反应，这样利用抗体检测糖蛋白ECF的方法。预期可检测样品中完整形式的ECF，或者其片段。该方法的体液样品可包括含ECF的任何体液或者含ECF的细胞，例如血液、血浆、血清、唾液和尿。其他可行的体液包括痰、粘液、胃液等。用于检测ECF的一种有效方法例如可以是如下方法：(1)将抗ECF抗体与支持物结合；(2)将结合的抗体与含ECF的体液或者组织接触；(3)将上述复合物与结合有可检测部分(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)的二级抗体接触；(4)将上述与酶底物接触；(5)将上述与颜色剂接触；(6)观察颜色变化。在具体的实施方案中，在上述所列的一步或多个步骤间还包括洗涤步骤。可检测部分将可以使得用肉眼检测沉淀或颜色变化，通过显微镜肉眼检测，或者通过分光光度计、放射性测量等自动检测。可检测部分的实例包括荧光素和硷性蕊香红B(用于荧光显微镜)，辣根过氧化物酶(用于光学或电子显微镜以及生物化学检测)，生物素-链霉抗生物素蛋白(用于光学或电子显微镜)，胶态金(用于沉淀形成)以及碱性磷酸酶(用于通过颜色变化的生物化学检测)。所用的检测方法和部分确定例如上述所列的或者通过应用于所述选择的标准而确定的其他适宜方法和部分(James W.Goding，单克隆抗体：原理和实践(Monoclonal Antibodies：Principles andPractice),Academic Press,1983；和Harlow和Lane，抗体：实验室手册(Antibodies；A Laboratory Manual),Cold Spring HarborLaboratory,Cold Spring Harbor,New York 1988)。
本发明用于检测ECF的具体实施方案涉及利用“浸条(dipstick)”检测，其中在与上样位置不同的具体位置上，用固定在窄带中的条上的抗ECF抗体制备条(即“浸条”)。在上样的位置，沉积用可检测部分标记的抗ECF抗体。然后a)将待测液体加到负载样品的垫上；b)测试液体中的ECF与抗ECF抗体结合，然后通过毛细管流，该复合物沿所述条移动直到它与固定的抗ISEPF抗体带接触；c)ECF：抗ECF抗体复合物在所述带浓缩，通过任何上述方法用肉眼观察可检测部分。在本发明的另一实施方案中，将第二个抗体带固定在所述条上，位于上样带的远端。选择所述第二带的抗体以便识别产生抗ECF抗体的动物免疫球蛋白，例如抗山羊IgG。该第二带作为所述浸条检测的一个内部阳性对照以说明所述浸条工作正常。控制固定在第一带上的抗ISEPF抗体的量以便有足够的ECF：抗ECF抗体复合物能够通过所述第一带的位置，与抗山羊IgG抗体接触。
本发明提供了检测动物受孕或植入的方法，所述方法包括检测取自交配过的雌性动物的样品中是否存在ECF。所取的样品类型取决于待检测的动物物种，但血清、尿或奶是优选的。也可以使用唾液或阴道分泌物。样品不经进一步处理即可使用，或者可将样品用液体，例如限制非特异性结合的封闭溶液稀释。封闭溶液的实例包括与1％新生牛血清和含2％Tween-20的10mM Tris混合的SeaBlock(East CoastBiologicals,New Brerwich,ME)。
本发明还提供了在交配后12-48小时内检测动物没有受孕的方法，所述方法包括确定是否存在ECF，没有ECF则表明没有受孕。
本发明提供了通过监测交配不到1天至48小时后的ECF水平来检测怀孕动物中的自发性流产的方法。优选在受孕和/或植入后定期监测ECF水平。在人中，通过表明交配后是否已受孕和植入，所述监测还可使流产-诱导药物例如RU-486的使用降低到最小的程度。
本发明可用于提高动物包括人植入或受孕的可能性，并使流产的机会降到最低。低水平的ECF与较低可能性的受孕或植入有关，而较高水平的ECF是受孕、植入和保持怀孕可能性高的良好指标。因此，可给动物提供额外的ECF，最可能的是通过静脉内施用以使ECF的水平达到受孕、植入和保持怀孕的适宜范围。
本发明提供了用于检测ECF存在的装置，所述装置包括存在ECF抗体的支持物。在一实施方案(图1)中，支持物(1)包括由材料组成的液体可以沿其流动的条。在所述条的末端，加入样品液体，所述液体沿支持物流动，与ECF抗体接触。在一具体实施方案中，芯(2)例如Whatman CHO-17与所述条的非样品端相连以提高液体的流动。在一具体的实施方案中，加入样品的位置包括吸附垫(3)，由玻璃纤维材料Whatman F0-75或者任何其他适宜的材料组成。
本发明提供了用于检测ECF存在的装置，所述装置包括与存在ECF抗体的支持物接触的物体。该物体可以由不同的材料，例如塑料、金属或者薄纸板制成，它可以是适合所述支持物的任何形状。所述物体(4)的一个具体实施方案(图2)是10厘米长的足球形垫，用标(5)铰在一端以确保支持物和一个孔(6)用于导入样品，另一孔(7)用于观察抗体-抗原反应。另一具体实施方案是底和高为(2-3)×(4-10)cm的长方形盒。所述支持物可以是抗体可以与之结合的任何材料。正如本领域熟知的，不同类型的抗体可以与一种支持物结合得比另一种支持物更好。例如，IgA单克隆抗体与大多数膜结合得都不好。然而，已有了一种方法可以达到此目的，本发明可以利用IgA抗体。
在一个装置的实施方案中，ECF抗体是单克隆IgAs，样品垫是玻璃纤维材料。在一具体的实施方案中，吸附样品垫是由Whatman FO-75制成的。在一个装置的具体实施方案中，ECF抗体是多克隆的，支持物是5微米硝酸纤维素膜。在一具体的实施方案中，硝酸纤维素膜是Whatman 5μM。还可以使用目前可得到的或者以后开发的其他膜。可将吸附剂样品垫和任何芯放在支持物例如硝酸纤维素膜的顶部。或者吸附剂样品垫和芯还可放置成使其末端与支持物例如硝酸纤维素膜末端相邻的方式。
在一个装置的实施方案中，所述支持物在两个不同的位置上放置抗ECF抗体。将来自动物的含测试样品的液体放在支持物上，所述支持物使液体移动以便其首先接触支持物上已沉积了标记的抗体的位置，然后继续沿支持物移动，与其中结合抗体的第二个位置接触。在这两个位置可以同时使用抗ECF多克隆抗体或者在所述两个位置上使用抗ECF单克隆和多克隆抗体的组合。例如，将标记的抗ECF单克隆抗体放在支持物的一个位置上，将抗ECF多克隆抗体与另一位置结合，然后将测试样品放在其中已放置了单克隆抗体的位置上。在另一实施方案中，将标记的抗ECF多克隆抗体放在加入样品的位置，将抗ECF单克隆抗体固定在第二个位置上。在所述两个位置均可使用识别不同表位的抗ECF单克隆抗体。
所述装置还包括用于检测含样品液体到达支持物上选定的位置的装置。在另一实施方案中，在将样品放在支持物上后，可加入如本文所述的封闭溶液。
在本申请中，参考了各种文献。这些文献的内容全文引入本文作为参考以便更全面地描述本发明所属之领域的状态。
                     实施例
实施例1 ECF的纯化
在交配后12-48小时从牛中收集体积大于250毫升的血清然后冷冻，直到在45天确定是否怀孕。当确定血清可以用于ECF提取时，通过其他方法确定怀孕，在室温将血清融解。用磁搅拌器将等体积的稀释高氯酸溶液(以每50毫升蒸馏水1毫升的比例稀释的70％高氯酸)与血清混合。将所述混合物保持在冰浴中，同时恒定搅拌1小时。然后用冷却离心以2000g将混合物离心30分钟。将所得上清液用蒸馏水透析72小时，然后用免疫学数据检测ECF的存在。
将用磷酸钠缓冲到pH7.4的含ECF的透析上清液再用含二乙基氨基乙基(DEAE)交换基团的用0.025M磷酸钠缓冲液pH7.4平衡的高度纯化的纤维素粉末进一步纯化。将来自DEAE粉末的未吸附的馏份收集为馏份A。用0.05m磷酸钠，0.9％氯化钠pH7.4洗脱与DEAE柱结合的上清液中的物质，然后收集为馏份B。然后将馏份A和B分别对蒸馏水进行透析。
然后通过使馏份A通过含0.05M Tris HCl缓冲液pH7.4的Sepharose 4B来将其进一步纯化，收集两个峰，标为馏份A1和馏份A2，然后再合并重新构成馏份A。
用生理盐水分别将两个ECF馏分，A(按上述重组的)和B，以及等毫克馏份A和B的混合物稀释到每毫升盐水1毫克。用这三种制品免疫三个不同级别的山羊，产生抗体。检测这三种免疫制品的三种山羊抗血清。例如用馏份A和馏份B的混合物免疫的山羊No.20对所有三种免疫抗原有均有强免疫反应。
实施例2抗ECF多克隆抗体的产生
用来自实施例1的纯化的ECF馏份A和B免疫分级别的山羊，将所述馏份混合并稀释到1mg/ml。
给每个山羊首次注射8次含弗氏完全佐剂的抗原。典型的免疫抗原制品含20毫升1mg/ml重组的馏份A和馏份B(均按实施例1所述制备的)和20毫升弗氏完全佐剂。取2毫升这种制品并匀浆至不到1毫升，然后注射到山羊肌肉中。一周注射两次，每次间隔3天。第8次注射后8天，取山羊血，然后从血液中收集抗体。检测所述抗体对纯化ECF的活性。给检测为阳性的动物每月进行加强注射，每次加强注射后8天取血以提供稳定供应的抗血清。
为了提高所生产的抗血清的特异性，用合并的正常人血清和来自未免疫牛的血清吸附每个血清收集物直到用Quchterlony凝胶扩散研究观察不到线。该预吸附的抗血清然后使用硫酸钠分级进一步纯化。然后将所得的抗体制品用于血细胞凝集-抑制实验和酶免疫检测的显色。用Procept A(Bioprocessing Ltd.,Durham，United Kingdom)色谱柱进一步纯化所述抗体，用pH7.4的磷酸缓冲的盐洗脱，然后将这些抗体用于浸条实验。
实施例3 抗ECF单克隆抗体的产生
用实施例2中所述的免疫制品免疫Balb C小鼠。将用于山羊的免疫方案同样用于小鼠，不同的是最后一次注射2天后，用在RPMI1640培养基中的30％聚乙二醇将小鼠脾细胞与SP2/O-Ag黑素瘤细胞(可得自美国典型培养物保藏中心)融合。然后将杂交瘤用标准方法保持在含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT)的培养基中(Goding,1983；和Harlow和Lane,1988)。用血细胞凝集方法，用按照本领域已知的标准方法制备的用ECF包覆的红细胞鉴定具有最大滴度的生产抗体的细胞。
使杂交瘤细胞增殖以生产单克隆抗体。用在液相中的限制稀释和半固体琼脂糖技术克隆特异性的杂交瘤细胞系。用本领域已知的方法(Harlow和Lane,1988)保持生产抗ECF抗体的克隆，然后在含HAT的DMEM(Dulbecco’s改性的Eagle’s培养基)培养基中生长。
用这些方法筛选的抗ECF单克隆抗体是同种型的，而且是IgA。通过Western印迹分析表明，所述抗体与各种ECF抗原反应。用本领域已知的方法(例如Julian Beesley，胶态金(Colloidal Gold),OxfordPress,1989)将所述单克隆抗体与胶态金结合。
实施例4 构建用于确定受孕状态的检测试剂盒
用实施例2所述的与4.5×0.5厘米Whatman’s 5微米硝酸纤维素膜条结合的抗ECF多克隆抗体构建试剂盒。将实施例3所述的抗ECF单克隆抗体与胶态金结合形成结合物，然后沉积在2.5cm×0.5Whatman’s OF-75材料的垫上。
通过将两个含抗体的条末端相对放置为一7厘米条来组装成为侧流动装置的试剂盒，将动物测试样品放在FO75垫，即“样品垫”上。将由CHO-17玻璃纤维材料制成的第二个垫放在另一端(即非样品端)以便有助于液体从样品端通过硝酸纤维素膜条的流动。在位于所述条样品端约3.4cm处的“测试”带(约0.1cm宽)将抗ECF多克隆抗体与膜结合。在位于距抗ECF多克隆抗体约0.5cm处的类似大小的“对照”带上，在距样品端远端的一侧，结合对照山羊IgG抗体(Sigma,St.Louis,MO)。
实施例5 完成有关“未确定”牛的ECF检测
将来自待测牛的一滴血清样品滴在实施例4的条试剂盒的样品端，距所述条的一端约1厘米。将约2-8滴封闭缓冲液直接加到血清样品之上，使液体沿条移动到所述两个区域，与抗体结合。在所述条上存在一条线(将位于对照带)表明牛是“未确定的”，即牛尚未怀孕。在条上，存在两条线，分别位于对照和测试带，则表明牛已怀孕。
用已进行人工受精的153头牛进行实验，将ECF的结果与来自兽医扪诊的结果进行比较。通过兽医扪诊表明有65头动物怀孕，在ECF检测中，53头动物为阳性。用扪诊表明89个动物没有怀孕，在ECF检测中，45个为阴性。
实施例6 人的ECF检测
从人工受精的患者中收集样品。用脲酶-抗ECF结合物检测样品中是否存在ECF。收集到下列结果：病人编号      受精后取样时间(天数)      怀孕？
     0.25    2.0     6.0     12.0
1    .358    .120    .100    .100    否
2    .114    .095    .094    .091    否
3    .103    .099    .093    .098    否
4    .103    .096    .100    .095    否
5    .070    .079    .052    .088    否
6    .104    .096    .081    .108    否
7    .301    .159    .105    .111    否
8    .104    .106    .094    .101    否
9    .102    .098    .092    .058    否
10   .075    .085    .091    .050    否
11   .075    .082    .078    .087    否
12   .073    .076    .081    .096    否
13   .079    .081    .078    .078    否
14   1.657   1.691   1.674   1.557   是
15   1.660   1.690   1.708   1.577   是
16   .087    .070    .087    .088    否
17   .074    .078    .075    .077    否
18   .085    .077    .074    .074    否
19   .087    .081    .075    .030    否
20   .082    .077    .079    .096    否
21   .084    .079    .074    .075    否
22   .083    .078    .078    .077    是*
23   .087    .088    .090    .078    否
24   .077    .074    .078    .080    否
患者15在3个月时流产。*患者22在6周时流产。
尽管已参照具体实施方案的具体详细内容描述了本发明，但是应理解所述描述不应认为是限制本发明的范围，而应以权利要求所要求的范围为限。

Claims (22)

1、特异性结合纯化的早期怀孕因子的分离的抗体。
2、分子量为约200000的特异性结合纯化的早期怀孕因子的分离的抗体。
3、权利要求2的分离的抗体，其中所述早期怀孕因子来自牛、猫、狗、马、人、羊和猪。
4、权利要求1、2或3的任一抗体，其中所述抗体选自多克隆、单克隆、人源化、全人或嵌合抗体。
5、检测动物受孕的方法，所述方法包括检测动物体液中是否存在早期怀孕因子。
6、权利要求5的方法，其中所述体液是血清。
7、权利要求5的方法，其中所述体液是尿。
8、权利要求5的方法，其中所述体液是奶。
9、在受孕前12小时内确定牛没有受孕的方法，所述方法包括确定是否存在早期怀孕因子，没有早期怀孕因子则表明没有受孕。
10、在受孕前24小时内确定牛没有受孕的方法，所述方法包括确定是否存在早期怀孕因子，没有早期怀孕因子则表明没有受孕。
11、检测动物中的早期怀孕因子的方法，所述方法包括下列步骤：
a.从动物中收集样品；
b.将所述样品与抗(早期怀孕因子)抗体接触使抗体与样品中的早期怀孕因子蛋白可以结合；
c.检测抗体-早期怀孕因子复合物。
12、权利要求11的方法，其中所述样品选自血清、尿和奶。
13、权利要求11的方法，其中将抗早期怀孕因子抗体与可检测部分结合，然后，通过加入底物或诱导剂并监测容器中的可检测变化来检测抗早期怀孕因子复合物。
14、权利要求13的方法，其中将所述抗(早期怀孕因子)抗体与选自碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、胶态金和脲酶的部分结合。
15、检测来自个体的含样品液体中的早期怀孕因子的装置，所述装置包括：
a.物体部分；
b.支持物，在其上有抗早期怀孕因子的抗体，与物体部分接触。
16、权利要求15的装置，其中所述支持物包括使液体移动的材料。
17、权利要求15的装置，其中所述抗体与可检测部分结合。
18、权利要求15的装置，其中所述底物上有单克隆和多克隆抗(早期怀孕因子)抗体。
19、权利要求18的装置，其中所述单克隆和多克隆抗(早期怀孕因子)抗体位于支持物上的不同位置。
20、权利要求18的装置，其中所述多克隆抗体位于一个带上，其中所述带与所述支持物的纵轴基本上垂直。
21、权利要求18的装置，还包括在物体部分上用于导向液体到支持物上的装置。
22、权利要求21的装置，其中物体部分上用于导向液体到支持物上的装置使所述液体移动到支持物上单克隆抗体所在的位置，由此，所述样品与所述单克隆抗体接触，所述支持物再使所述单克隆抗体和液体移动，与含多克隆抗体的带接触。
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