CS234935B1 - Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 - Google Patents
Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 Download PDFInfo
- Publication number
- CS234935B1 CS234935B1 CS873883A CS873883A CS234935B1 CS 234935 B1 CS234935 B1 CS 234935B1 CS 873883 A CS873883 A CS 873883A CS 873883 A CS873883 A CS 873883A CS 234935 B1 CS234935 B1 CS 234935B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- microglobulin
- beta
- hybridoma
- hybrid
- img
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 101000937544 Homo sapiens Beta-2-microglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000047279 human B2M Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 claims 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 claims 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000012045 crude solution Substances 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Vynález se týká myšího lymfocytárního
hybridomu, produkujícího protilátku proti
lidskému beta 2 mikroglobulinu, uloženého
-ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární
genetiky ČSAV pod označením B2M-01. Samotná
monoklonální protilátka hybridomu
B2M-01 je vhodná pro použití v enzymoimunologické
a radioimunologické analýze a
pro čištění beta 2 mikroglobulinu afi-nitní
chromatografií.
Description
Vynález se týká myšího lymfocytárního hybridomu, produkujícího protilátku proti lidskému beta 2 mikroglobulinu, uloženého -ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením B2M-01. Samotná monoklonální protilátka hybridomu B2M-01 je vhodná pro použití v enzymoimunologické a radioimunologické analýze a pro čištění beta 2 mikroglobulinu afi-nitní chromatografií.
234335
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie Sp2/O-Agl4 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti lidskému beta 2 mikroglobulinu.
Doposud se protilátky proti beta 2 mikroglobulinu vyrábějí tak, že beta 2 mikroglobulin je opakovaně injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům. Sérum takto· imunizovaných zvířat, odebírané po· určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných zejména pro kvantitativní stanovení beta 2 mikroglobulinu v- séru nebo v moči metodou radioimunologické analýzy. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednolivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby, v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a další antigeny pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální urotilátku proti beta 2 mikroglobulinu, uložený ve Sbírce hybridoinů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská č. 1083, pod označením IMG CZAS B2M-01.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth, S., Scheidigger, D.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol. Meth., 35:1—21, 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Ho-ward, J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře 266:550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí buněk myší myelomové linie Sp2/0-Agl4 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene Balb/c imunizovaných lidským beta 2 mikroglobulinem.
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku momoklonální, která je schopna specificky reagovat s lidským beta 2 mikroglobulinem. Hybridom B2M-01 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene B,alb/c. Z konzerv·, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky, bez dalšího· antigenu. Protilátka, produkovaná hybridomem B2M-01, reaguje specificky jak s lidským beta 2 mikroglobulinem, tak s populacemi lidských buněk nesoucích jako Složku buněčné membrány beta 2 mikroglo4 bulin a není třeba se zbavovat protilátek balastních.
Příklad 1
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo, aplikováno 5xl08 buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla * myš 14 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po 12 dnech růstu hyb- r ridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 5 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 2 mg/ml imunoglobulinu. Protilátka reagovala se specifickým antigenem (lidským beta 2 mikroglobulinem nebo lidskými lymfocyty z periferní krve] v enzymo,imunologickém testu (při použití prasečí antimyší protilátky značené křenovou peroxidázou) až do ředění 1 : 106.
Příklad 2
Z 8 ml ascitické tekutiny obsahující protilátku B2M-01 byla připravena globullnová frakce precipitací síranem amonným a navázána na 2 ml CNBr-aktivované Sepharosy 4B. 1 ml tohoto imunosorbentu byl třepán 2 hodiny s 10 ml surového roztoku zahuštěných lidských močových proteinů (získaných precipitací nasyceným roztokem síranu amonného ze 100 ml patologické moči). Poté byl imunosorbent přenesen na kolonku, pro,myt 20 ml fyziologického roztoku a specificky adsorbovaný beta 2 mikroglobulin byl vymyt celkem 5 ml 0,1 M glycin-HCl pufru pH 2,2 a eluát byl ihned neutralizován 1 M fosfátovým pufrem pH 7,2. Celkový výtěžek byl 2,2 mg beta 2 mikroglobulinu, jehož čistota byla nejméně 80 %.
Buňky hybridomu B2M-01 mají ultrastrukturní obraz typických myelomových buněk. Cytoplazma obsahuje velké množství polyribosomů, mitochondrie a slabě vyvinuté endoplasmatické retikulum. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo· minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3 mM), pyruvát sodný (1 mM). Toto médium (označované jako H-MEMd, 0stav molekulární genetiky ČSAV) je pro kultivaci hybridomu B2M-01 doplněno· penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem (0,05 mM) pufrem HEPES (10 mM) a inaktivovaným bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10%). Hybridom je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 16,2 hod. ,a 10 měsíců po, sestrojení byl modální počet chrOmosomů 92. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgG2a s lehkými řetězci typu kapa, její isoelektrický bod je pH 7,0.
Monoklonálmí protilátka produkovaná hybridomem B2M-01 reaguje specificky s lidským beta 2 mikroglobulinem.
Hybridom B2M-01 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti beta 2 mikroglobulinu v metodách analytických nebo preparativních.
Monoklonální protilátka hybridomu B2M-
Claims (1)
- PREDMETMyší lymfocytární hybridom IMG CZAS B2M-01 produkující monoklonální protilátku-01 může být využita pro analytické stanovení beta 2 mikroglobulinu (v moči, séru nebo jiných tělních tekutinách] při klinické diagnostice v zdravotnických zařízeních, zvláště při poruchách ledvin. Imobilizované monoklonální protilátky může být použito k čištění beta 2 mikroglobulinu pomocí afinitní chromatoigrafie.vynalezu podtřídy IgG2a proti lidskému beta 2 mikroglobulinu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS873883A CS234935B1 (cs) | 1983-11-23 | 1983-11-23 | Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS873883A CS234935B1 (cs) | 1983-11-23 | 1983-11-23 | Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS234935B1 true CS234935B1 (cs) | 1985-04-16 |
Family
ID=5438378
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS873883A CS234935B1 (cs) | 1983-11-23 | 1983-11-23 | Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS234935B1 (cs) |
-
1983
- 1983-11-23 CS CS873883A patent/CS234935B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0111344A2 (en) | Anti-interleukin-2 monoclonal antibodies | |
| CS234935B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS248383B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridem IMG CZAS MEM-09 | |
| WO1986002359A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
| CS233810B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu | |
| CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 | |
| CS263123B1 (cs) | Myši lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému alfa-fetoproteinu | |
| CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 | |
| CS238780B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 | |
| CS228857B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferům | |
| CS222780B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridem | |
| SU1685997A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
| CS222779B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS258886B1 (cs) | Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B | |
| CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS263122B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridorn produkující protilátku pr >ti lidskému alfa-1'etoproteinu | |
| CS265494B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) | |
| CS228858B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu 6 | |
| CS255642B1 (cs) | Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B |