CS258886B1 - Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B - Google Patents
Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B Download PDFInfo
- Publication number
- CS258886B1 CS258886B1 CS867432A CS743286A CS258886B1 CS 258886 B1 CS258886 B1 CS 258886B1 CS 867432 A CS867432 A CS 867432A CS 743286 A CS743286 A CS 743286A CS 258886 B1 CS258886 B1 CS 258886B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- antigen
- cortical
- mouse
- antibodies against
- producing antibodies
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 30
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 30
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 title claims description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title description 3
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 title description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 abstract description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 abstract 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- IXSZQYVWNJNRAL-UHFFFAOYSA-N etoxazole Chemical compound CCOC1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C1N=C(C=2C(=CC=CC=2F)F)OC1 IXSZQYVWNJNRAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Řešení ae týká myšího lymfocytárního
hybridovu, produkujícího protilátky proti
korovému antigenu viru hepatitidy ,B,"který
je uložen ve Sbírcg hybridomú Ústavu
molekulární genetiky ČSAV pod označením
HBc 18 H5G1. Protilátka je vhodná pro detekci
korového antigenu, pro afinitní purifikaci
korového antigenu a pro detekci
protilátek proti korovému antigenuv lidských
eéreoh.
Description
Vynález se týká myšího lymfocytárnlho hybrldomu produkujícího protilátky proti korovému antigenu viru hepartlťidy 0.
Hybridní buněčná Unie byla sestrojena fúzi buněk myši myelomové Unie SP2/0 a myších slezínných lymfoldnich buněk, produkujících protilátky proti korovému /dřeňovému/ antigenu viru hepatltldy B. Korový antigen je strukturální součásti vlrlonu viru hepatltldy B. Pro výraz korový antigen je odbornou světovou véřejnostl běžně přijímáno označeni CORE HBcAg.
Stanoveni hladiny protilátek proti korovému antigenu v lidských sérech má zásadní význam, pro diagnostiku a monitorováni hepatltldy B. Toto vyšetřeni zatím není možné v klinických podmínkách v ČSSR provádět, vzhledem k tomu, že není dostupná detekční souprava obsahující purlflkovaný korový antigen a protilátky proti němu.
Tento nedostatek odstraňuje myši lymfocytárni hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru hepatltldy podle vynálezU/Uložený ve Sb1rce hybrldomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV, Praha 6, Flemlngpvo nám. 2, pod označením HBc Uvedené protilátky mohou být použity v enzymolmunologl ckém testu pro detekci borového antigenu, dále pro af1nltni Čištěni korového antigenu, což umožňuje puriflkovat vysoce čistý korový antigen z jater nemocných hepatltldou typu B.
Monoklonálni proti látku je rovněž možné využi t v modi fikovaném enzymolmunologlckém testu pro detekci protilátek proti korovému antigenu v lidských sérech. Podstatného pokroku v diagnostice a monitorováni hepatltldy B se dosáhne, je-11 k dispozici klonovaná hybridní linie, produkující protilátky proti korovému antigenu viru hepatltldy B.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Kohler, G., Milstein, C., Nátuře 256: 495-497,
1975) klonováním populace hybridních buněk získaných hybridizací buněk ze sleziny myší kmene BALB/c, které byly imunizovány korovým antigenem viru hepatitidy B a buněk myší myelomové linie SP2/0. Výhodou hybridomu HBc 18 Hj-G^ je» že produkuje protilátky specificky reagující s korovým antigenem viru hepatitidy B. Tuto monoklonální protilátku lze použít pro detekci korovóho antigenu, pro afinitní purifikaci korového antigenu a pro diagnostiku protilátek proti korovému antigenu v lidských sérech. Použití této protilátky umožňuje vyvinutí diagnostické soupravy pro detekci protilátek proti korovému antigenu dosahující optimálních parametrů.
Hybridom HBc 18 H^Gj je možno kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konzerv, které jsou uchovávány v kapalném dusíku je možné zahájit produkci protilátky.
Příklad:
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 1,5 a 106 hybridomových buněk do peritoneální dutiny myši kmene BALB/c. Této myši bylo 14 dní před podáním hybridomových buněk aplikováno 0,7 ml parafinového oleje do peritoneálni dutiny. Po 12 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš usmrcena a neprodukovaná ascitická tekutina byla odebrána. Celkem bylo získáno 5 ml ascitické tekutiny, ve které bylo obsaženo přibližně 3 mg/ml imunoglobulinu, Monoklonální protilátka reagovala specificky s korovým antigenem v enzynoimunologickém testu.
Z ascitické tekutiny byl pomocí síranové metody vypurifikován imunoglobulin. Baroky mikrotitračních destiček byly potahovány monoklonální protilátkou produkovanou klonem HBc 18 H^Gi v koncentraci 30^Ug/ml, pak byly přidány vzorky obsahující různé koncentrace korového antigenu viru hepatitidy B a nakonec byl přidán konjugát polyklonální protilátky proti korovému antigenu s křenovou peroxidázou a enzymoimunologický test byl ** 3 ·· dokončen standardním způsobem. Tento test umožnil detekci 10 ng korového antigenu/ml.
Základní kultivační médium pro buňky hybridomu HBc 18 H^G^ je Eaglovo minimální esenciální medium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny. Toto medium (označované jako H-MEMd- Ostav molekulární genetiky'ČSAV) je pro kultivaci hybridomů doplněno inaktivovaným telecím sórem (Bioveta, Ivanovice na Hané), penicilinem a streptomycinem. Hybridom je kultivován při 37°C. Hybridom HBc 18 H^Gj produkuje'protilátku podtřídy IgG2A, izoelektrický bod je pH 7,3 - 7,6.
Monoklonální protilátka produkovaná klonem HBc 18 HgG.j reaguje specificky s korovým antigenem viru hepatitidy B, Tuto protilátku lze využit k detekci korového antigenu, k afinitni purifikaci korového antigenu a k detekci lidských protilátek proti korovému antigenu v enzymoimunologické testu. Tento hybridom může být průmyslově využíván jako zdroj protilátky proti korovému antigenu v diagnostických soupravách*
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUMyši lymfocytárni hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B, uložený ve Sbírce hvbridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV, pod označením HBc 18 HgG|.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS867432A CS258886B1 (cs) | 1986-10-15 | 1986-10-15 | Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS867432A CS258886B1 (cs) | 1986-10-15 | 1986-10-15 | Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS743286A1 CS743286A1 (en) | 1988-01-15 |
| CS258886B1 true CS258886B1 (cs) | 1988-09-16 |
Family
ID=5423442
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS867432A CS258886B1 (cs) | 1986-10-15 | 1986-10-15 | Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS258886B1 (cs) |
-
1986
- 1986-10-15 CS CS867432A patent/CS258886B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS743286A1 (en) | 1988-01-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| IE57956B1 (en) | Novel monoclonal antibodies and hybridoma cells,processes for their preparation and their applications | |
| JPH06113832A (ja) | ジゴキシンに対し高い親和性を有するモノクローナル抗体を産生するハイブリッドセルライン及びその製造法 | |
| FI83669C (fi) | Foerfarande foer specifik bestaemning av pankreas -amylas. | |
| WO1997023509A1 (fr) | ANTICORPS MONOCLONAL, ANTI COMPLEXE 'Xa . TFPI' ET SON UTILISATION | |
| CN1017349B (zh) | 抗人心房钠尿肽的单克隆抗体 | |
| CS258886B1 (cs) | Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B | |
| JPS60155198A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| CS255642B1 (cs) | Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B | |
| CS265494B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) | |
| JP3841364B2 (ja) | 抗ヒトビトロネクチン・トロンビン・アンチトロンビンｉｉｉ 複合体モノクローナル抗体、ハイブリドーマ及び免疫学的測定方法 | |
| CS265495B1 (cs) | Myči lymfocytámí hybridem produkující protilátky proti „core" antigenu viru hepatitidy B | |
| RU2049817C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к фенобарбиталу | |
| CS253240B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBslC6B12 | |
| CS255640B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou | |
| CS252792B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A? | |
| RU2049818C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., испольуемый для получения моноклональных антител к дигоксину | |
| RU2049816C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к тироксину | |
| JPH0475597A (ja) | ヒト免疫不全ウイルスの逆転写酵素に対するモノクローナル抗体、その製法及びその抗体産生株 | |
| JP2593865B2 (ja) | ヒトファクターｉに対する単クローン性抗体 | |
| SU1673597A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS. мUSсULUS L., используемый дл получени моноклональных антител к теофиллину | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS234935B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 | |
| SU1496266A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS - продуцент моноклональных антител против ангиотензин-превращающего фермента из легких человека | |
| CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
| CS248383B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridem IMG CZAS MEM-09 |