CS255640B1 - Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou - Google Patents
Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou Download PDFInfo
- Publication number
- CS255640B1 CS255640B1 CS867274A CS727486A CS255640B1 CS 255640 B1 CS255640 B1 CS 255640B1 CS 867274 A CS867274 A CS 867274A CS 727486 A CS727486 A CS 727486A CS 255640 B1 CS255640 B1 CS 255640B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hepatitis
- surface antigen
- virus
- antibody
- labeled
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 24
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 title claims abstract description 17
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 title claims abstract description 14
- HRNLUBSXIHFDHP-UHFFFAOYSA-N N-(2-aminophenyl)-4-[[[4-(3-pyridinyl)-2-pyrimidinyl]amino]methyl]benzamide Chemical compound NC1=CC=CC=C1NC(=O)C(C=C1)=CC=C1CNC1=NC=CC(C=2C=NC=CC=2)=N1 HRNLUBSXIHFDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 5
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 abstract description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000005497 microtitration Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytárniho
hybridomu, produkujícího protilátku proti
povrchovému antigenu viru hepatitidy B,
které lze značit křenovou peroxidázou, který
je uložen ve Sbírce hybridomů Ostavu molekulární
genetiky ČSAV pod označením
IMG-CZAS HBs 73F.A.. Protilátku lze značit □ .1 křenovou peroxidázou. Značená i neznačená
protilátka je vhodná pro detekci povrchového
antigenu viru hepatitidy B v enzymoimunologickém
testu. Uvedený hybridom může být
využit pro zdokonaleni diagnostiky hepatitidy
B.
Description
(54) Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou
Řešení se týká myšího lymfocytárniho hybridomu, produkujícího protilátku proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou, který je uložen ve Sbírce hybridomů Ostavu molekulární genetiky ČSAV pod označením
IMG-CZAS HBs 73F.A.. Protilátku lze značit □ .1 křenovou peroxidázou. Značená i neznačená protilátka je vhodná pro detekci povrchového antigenu viru hepatitidy B v enzymoimunologickém testu. Uvedený hybridom může být využit pro zdokonaleni diagnostiky hepatitidy B.
Vynález se týká myšího lymfocytárního hybridomů produkujícího protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou.
Hybridní buněčná linie byla sestrojena fúzí buněk myelomové linie SP2/O a myších slezinných lymfoidníoh buněk, produkujících protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B. Povrchový antigen je důležitou součástí viru hepatitidy B a jeho stanovení má zásadní význam při diagnostice onemocnění hepatitidou B.
Tento vynález navazuje na vynálezy myších lymfocytárních hybridomů HBslCgB^^ a 72C4A7 produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B (AO č. 252 792,
AO č. 253 240).
Povrchový antigen viru hepatitidy je v klinické praxi detekován pomocí enzymoimunologického testu ve třech vrstvách. Jamky polystyrénových destiček jsou potahovány protilátkou proti povrchovému antigenu, pak je přidán vzorek testovaného séra a nakonec je přidán konjugát proti povrchovému antigenu s křenovou peroxidázou. Monoklonální protilátky produkované hybrídomy HBslCgB12 a 72C4A7 jsou s výhodou použitelné v 1. vrstvě, tj. pro potahováni jamek, přičemž.ve 3. vrstvě bylo dosud nutné používat polyklonální protilátky značené křenovou peroxidázou.
Tuto nevýhodu odstraňují látky produkované hybridomem podle vynálezu, které lze značit křenovou peroxidázou, který je uložen ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 6, Flemingovo nám. 2, pod označením IMG-CZAS HBs 73F5A2 a které pak mohou být použity v 3. vrstvě enzymoimunologického testu. Podstatného pokroku v diagnostice hepatitidy B, který se projeví ve vyšší spolehlivosti a citlivosti testu se dosáhne, je-li k dispozici klonovaná hybridní buněčná linie dle vynálezu, které jsou značitelné křenovou peroxidázou.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Kunimoto, K. a kol. Vox Sanguinís 45: 104, 1983) klonováním populace hybridních buněk získaných hybrídizací buněk ze slezin myší BALB/c, které byly imunizovány povrchovým antigenem viru hepatitidy B a buněk myší myelomové linie SP2/O. Výhodou hybridomů HBs 73F^A| je, že produkuje protilátky specificky reagující s povrchovým antigenem viru hepatitidy B, přičemž tyto protilátky je možné značit křenovou peroxidázou. Pro diagnostické účely je pak možné využít jak neznačenou protilátku - pro potahování jamek, tak protilátku značenou křenovou peroxidázou - v 3. vrstvě enzymoimunologického testu. Použití značené protilátky v kombinaci s neznačenou protilátkou produkovanou hybridomem lCgB^j nebo 72C^A7 umožňuje vyvinutí diagnostické soupravy pro detekci povrchového antigenu na bázi monoklonálních protilátek dosahujících optimálních parametrů.
Hybridom HBs 73FjA^ je možno kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konzerv, které jsou uchovány v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky.
Příklad:
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 2x 106 hybridomových buněk do peritoneální dutiny myši kmene BALB/c. Této myši bylo 14 dní před podáním hybrídomových buněk aplikováno 0,7 ml parafinového oleje do peritoneální dutiny. Po 12 dnech růstu hybridomů v peritoneální dutině byla myš usmrcena a naprodukovaná ascitická tekutina byla odebrána. Celkem bylo získáno 5 ml ascitické tekutiny, ve které bylo obsaženo přibližně 8 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka reagovala specificky s povrchovým antigenem v enzymoimunologickém testu.
Z ascitické tekutiny byl pomocí síranové metody vypurífíkován imunoglobulin, který byl značen křenovou peroxidázou pomocí dvoustupňové glutaraldehydové metody podle Avramease a Ternyncka (Immunochemistry 8: 1 175, 1971). Jamky mikro titračních destiček byly potahovány monoklonální protilátkou produkovanou klonem HBs ICgB^^ v koncentraci 50 yug/ml. Pak byly přidány vzorky vyšetřované na přítomnost povrchového antigenu viru hepatitidy B a byl přidán konjugát monoklonální protilátky, která je produkována hybridomem HBs 73F^A^ s křenovou peroxidázou a test byl dokončen způsobem používaným pro detekci povrchového antigenu pomocí diagnostické soupravy SEVATEST ELISA HBsAg Micro I (ŮSOL). Tento test umožnil detekci 1,5 ng povrchového antigenu/ml.
Základní kultivační médium pro buňky hybridomu HBs 73F^A^ je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné a neesenciální aminokyseliny. Toto médium (označované jako H-MEMd - Ústav molekulární genetiky ČSAV) je pro kultivaci hybridomů doplněno penicilinem, streptomycinem a inaktivovaným telecím sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridom je kultivován při 37 °C. Hybridom HBs 73F^A| produkuje protilátku podtřídy IgGl, izoelektrický bod je pH 6,1 až 6,6.
Monoklonální protilátka produkovaná klonem HBs 73F^A^ reaguje specificky s povrchovým antigenem viru hepatitidy B. Tuto protilátku lze značit křenovou peroxidázou a značenou protilátku lze využít v enzymoimunologickém testu pro detekci povrchového antigenu. Tento hybridom může být průmyslově využíván jako zdroj protilátky proti povrchovému antigenu v diagnostických soupravách.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUMyši lymfocytární hybridom IMG-CZAS HBs 73F^A^, produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, kterou lze značit křenovou peroxidázou.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS867274A CS255640B1 (cs) | 1986-10-08 | 1986-10-08 | Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS867274A CS255640B1 (cs) | 1986-10-08 | 1986-10-08 | Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS727486A1 CS727486A1 (en) | 1987-07-16 |
| CS255640B1 true CS255640B1 (cs) | 1988-03-15 |
Family
ID=5421578
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS867274A CS255640B1 (cs) | 1986-10-08 | 1986-10-08 | Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS255640B1 (cs) |
-
1986
- 1986-10-08 CS CS867274A patent/CS255640B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS727486A1 (en) | 1987-07-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4623627A (en) | Monoclonal antibody having specificity for the double-stranded conformation of native DNA and diagnostic methods using same | |
| JP5766286B2 (ja) | 抗ヒトＩｇＧ１抗体 | |
| AU675802B2 (en) | Immunoassay for isothiazolones | |
| FI83669C (fi) | Foerfarande foer specifik bestaemning av pankreas -amylas. | |
| CS255640B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou | |
| JP2020148557A (ja) | 試料中のｈｍｇｂ１の測定方法及び測定試薬 | |
| JP3292728B2 (ja) | Ｃ型肝炎ウイルスに対するモノクローナル抗体およびその使用法 | |
| WO1989007761A1 (en) | Enzyme immunoassay according to sandwich method of human iv-type collagen | |
| KR880005258A (ko) | Ifn-오메가에 대한 모노클로날 항체, 이들의 제조방법, 및 ifn-오메가의 정제 및 탐지를 위한 이들의 용도 | |
| CA2150497C (en) | Inhibitor and anti-inhibitor monoclonal antibodies specific for horseradish peroxidase | |
| JP2003125766A (ja) | 抗５−メチル−２’−デオキシシチジン抗体および５−メチル−２’−デオキシシチジンの測定法 | |
| CS252792B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A? | |
| CN117264071B (zh) | 一种抗rankl单克隆抗体或其衍生物的结合剂及其应用 | |
| CS265494B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) | |
| CS253240B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBslC6B12 | |
| CS255642B1 (cs) | Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B | |
| CS258886B1 (cs) | Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B | |
| SU1685997A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
| JPH08242883A (ja) | ２−メチルイソボルネオールに対するモノクローナル抗体、その製造方法及びこれを用いる２−メチルイソボルネオールの測定方法 | |
| Von Landenberg et al. | Monoclonal Autoantibodies from Patients with Autoimmune Diseases: Synovial Fluid B Lymphocytes of a Patient with Rheumatoid Arthritis Produced an lgGλ Antibody Recognizing J-Sequences of lgκ Chains in a Conformation-Dependent Way | |
| CS265495B1 (cs) | Myči lymfocytámí hybridem produkující protilátky proti „core" antigenu viru hepatitidy B | |
| RU2049816C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к тироксину | |
| RU2049818C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., испольуемый для получения моноклональных антител к дигоксину | |
| RU1776691C (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, - продуцент моноклональных антител против J @ Е человека | |
| RU93018332A (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток d-22 мыши линии balb/c, используемых для получения моноклональных антител к дигоксину |