CS255642B1 - Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B - Google Patents
Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B Download PDFInfo
- Publication number
- CS255642B1 CS255642B1 CS867431A CS743186A CS255642B1 CS 255642 B1 CS255642 B1 CS 255642B1 CS 867431 A CS867431 A CS 867431A CS 743186 A CS743186 A CS 743186A CS 255642 B1 CS255642 B1 CS 255642B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- antigen
- cortical
- virus
- hepatitis
- antibodies against
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 32
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 32
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 title claims abstract description 21
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 title claims abstract description 11
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 7
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 abstract description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 5
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytámího
hybridomu, produkujícího protilátky
proti korovému antigenu viru hepatitidy B,
který je uložen ve Sbírce hybridomů Ústavu
molekulární genetiky ČSAV pod označením
IMG-CZAS HBc 18 E^B.^. Protilátka je
vhodná pro detekci korového antigenu,
pro afinitní purifikaci korového antigenu
a pro detekci protilátek proti korovému
antigenu v lidských sérech.
Description
Vynález se týká myšího lymfocytárního hybridomu produkujícího protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B.
Hybridní buněčná linie byla sestrojena fúzí buněk myší myelomové linie SP2/0 a myších slezinných lymfoidních buněk, produkujících protilátky proti korovému /dřeňovému/ antigenu viru hepatitidy B. Korový antigen je strukturální součástí virionu viru hepatitidy B. Pro výraz korový antigen” je odbornou světovou veřejností běžně přijímáno označení CORE HBcAg.
Stanovení hladiny protilátek proti korovému antigenu v lidských sérech má zásadní význam pro diagnostiku a monitorování hepatitidy B. Toto vyšetření zatím není možné v klinických podmínkách v ČSSR provádět, vzhledem k tomu, že není dostupná detekční souprava obsahující purifikovaný korový antigen a protilátky proti němu.
Tento nedostatek odstraňuje myší lymfocytární hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B podle vynálezu uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV, Praha 6, Flemingovo nám. 2, pod označením IMG-CZAS HBc 18 EuBi2· Uvedené protilátky mohou být použity v enzymoimunologickém testu pro detekci korového antigenu, dále pro afinitní čištění korového antigenu, což umožňuje purifikovat vysoce čistý korový antigen z jater nemocných hapatitidou typu B.
Monoklonální protilátku je rovněž možné využít v modifikovaném enzymoimunologickém testu pro detekci protilátek proti korovému antigenu v lidských sérech. Podstatného pokroku v diagnostice a monitorování hepatitidy B se dosáhne, je-li k dispozici klonovaná hybridní linie, produkující protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Ktthler, G., Milstein, C., Nátuře 256: 495-497, 1975) klonováním populace hybridních buněk získaných hybridizací buněk ze sleziny myši BALB/c, které byly imunizovány korovým antigenem viru hepatitidy B a buněk myší myelomové linie SP2/0. Výhodou hybridomu HBc 18 Ε^Β.^ 3e' produkuje protilátky specificky reagující s korovým antigenem viru hepatitidy B. Tuto monoklonální protilátku lze použít pro detekci korového antigenu, pro afinitní purifikaci korového antigenu a pro diagnostiku protilátek proti korovému antigenu v lidských sérech. Použití této protilátky umožňuje vyvinutí diagnostické soupravy pro detekci protilátek proti korovému antigenu dosahující optimálních parametrů.
Hybridom HBc 18 E^^B^2 3e mo^no kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konzerv, které jsou uchovávány v kapalném dusíku je možné zahájit produkci protilátky.
Příklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 1,5 x 10 hybridomových buněk do peritoneální dutiny myši kmene BALB/c. Této myši bylo 14 dní před podáním hybridomových buněk aplikováno 0,7 ml parafinového oleje do peritoneální dutiny. Po 12 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš usmrcena a naprodukovaná ascitická tekutina byla odebrána. Celkem bylo získáno 5 ml ascitické tekutiny, ve které bylo obsaženo přibližně 5 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka reagovala specificky s korovým antigenem v enzymoimunologickém testu.
Z ascitické tekutiny byl pomocí síranové metody vypurifikován imunoglobulin. Jamky mikrotltrakčníoh destiček byly potahovány monoklonální protilátkou produkovanou klonem HBc 18 e11e12' v koncentraci 30 )Ug/ml. Pak byly přidány vzorky obsahující různé koncentrace korového antigenu viru hepatitidy B a nakonec byl přidán konjugát polyklonální protilátky proti korovému antigenu s křenovou peroxidázou a enzymoimunologický test byl dokončen standardním způsobem. Tento tes umožnil detekci 10 ng korového antigenu/ml.
Základní kultivační médium pro buňky hybridomu HBc 18 E21B12 Ea94ovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny. Toto médium (označované jako H-MEMd - Ostav molekulární genetiky ČSAV) je pro kultivaci hybridomů doplněno inaktivovaným telecím sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané), penicilinem a streptomycinem. Hybridom je kultivován při 37 °C. Hybridom HBc 18 produkuje protilátku podtřídy
IgG3, izoelektrický bod je pH 9. Λ
Monoklonální protilátka produkovaná klonem HBc 18 E^^B^2 reaguje specificky s korovým antigenem viru hepatitidy B. Tuto protilátku lze využít k detekci korového antigenu, k afinitní purifikaci korového antigenu a k detekci lidských protilátek proti korovému antigenu v enzymoimuňologickém testu. Tento hybridom může být průmyslově využíván jako zdroj protilátky proti korovému antigenu v diagnostických soupravách.' ,.
PŘEDMĚT VYNÁLEZU
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUMyší lymfocytární hybridom IMG-CZAS HBc 18 Ε^Β·^, produkující protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS867431A CS255642B1 (cs) | 1986-10-15 | 1986-10-15 | Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS867431A CS255642B1 (cs) | 1986-10-15 | 1986-10-15 | Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS743186A1 CS743186A1 (en) | 1987-07-16 |
| CS255642B1 true CS255642B1 (cs) | 1988-03-15 |
Family
ID=5423430
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS867431A CS255642B1 (cs) | 1986-10-15 | 1986-10-15 | Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS255642B1 (cs) |
-
1986
- 1986-10-15 CS CS867431A patent/CS255642B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS743186A1 (en) | 1987-07-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| IE57956B1 (en) | Novel monoclonal antibodies and hybridoma cells,processes for their preparation and their applications | |
| JPH06113832A (ja) | ジゴキシンに対し高い親和性を有するモノクローナル抗体を産生するハイブリッドセルライン及びその製造法 | |
| EP0232921A2 (en) | Monoclonal antibodies against hepatitis B virus | |
| WO2021190587A1 (zh) | 一种广谱型微囊藻毒素单克隆抗体及其制备方法 | |
| EP0363041A1 (en) | Monoclonal antibody to morphine, preparation of monoclonal antibody, assaying kit and assaying method of morphine | |
| JP3681206B2 (ja) | 抗ファクターＸａ・ティシュファクターパスウェイインヒビター複合体モノクローナル抗体及びその使用 | |
| US5171664A (en) | Monoclonal antibody to okadaic acids, process for producing the monoclonal antibody, assay reagent for assaying okadaic acids using the monoclonal antibody, and assay method | |
| CS255642B1 (cs) | Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B | |
| JPS60155198A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| CS258886B1 (cs) | Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B | |
| CS265494B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) | |
| JPS63209596A (ja) | モノクロ−ナル抗体及びその使用方法 | |
| CS265495B1 (cs) | Myči lymfocytámí hybridem produkující protilátky proti „core" antigenu viru hepatitidy B | |
| CS255640B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou | |
| JPH01160493A (ja) | モノクローナル抗体及びその使用方法 | |
| RU2049817C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к фенобарбиталу | |
| CS253240B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBslC6B12 | |
| SU1673597A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS. мUSсULUS L., используемый дл получени моноклональных антител к теофиллину | |
| RU2049816C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к тироксину | |
| CS252792B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A? | |
| RU2049818C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., испольуемый для получения моноклональных антител к дигоксину | |
| JPH0475597A (ja) | ヒト免疫不全ウイルスの逆転写酵素に対するモノクローナル抗体、その製法及びその抗体産生株 | |
| RU1776691C (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, - продуцент моноклональных антител против J @ Е человека | |
| JPS6344894A (ja) | 抗ヒト血清アルブミンモノクロ−ナル抗体およびその製法 | |
| CN120441699A (zh) | 一种夹心法检测孕酮的抗体组合及其应用 |