CS268403B1 - Myši B-lymfocytárni hybrldomová produkční linie HBS - 01 AO 35/86 - Google Patents
Myši B-lymfocytárni hybrldomová produkční linie HBS - 01 AO 35/86 Download PDFInfo
- Publication number
- CS268403B1 CS268403B1 CS865403A CS540386A CS268403B1 CS 268403 B1 CS268403 B1 CS 268403B1 CS 865403 A CS865403 A CS 865403A CS 540386 A CS540386 A CS 540386A CS 268403 B1 CS268403 B1 CS 268403B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hbs
- hbsag
- mouse
- lymphocytar
- hybridome
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 4
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 101710142246 External core antigen Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003914 blood derivative Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešeni se týká nové produkční myší
hybrldomová linie HBS-01 vytvářející specifickou
monoklonálni protilátku podtřidy
IgGl proti povrchovému entigenu viru
hepetitidy B (HBsAg)
Description
Vynález se týká nové produkční hybridomové linie vytvářející specifickou monoklonélní protilátku proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B /HBsAg/. Hybridom byl sestrojen fúzí buňky myší myelomové linie a myšího lymfocytu, senzibilizovaného antigenem HBs. '
Diagnostická séra proti HBsAg jsou základní složkou souboru imunoreagencií, nezbytných pro eerologickou diagnostiku onemocnění člověka virovou hepatitidou 8 a pro zjišťování přítomnosti viru hepatitidy B v krvi a krevních derivátech v transfuzni službě. Tato aéra jsou součástí souprav pro detekci HBsAg /SEVATEST ELISA HBsAg - MACRO I nebo ELISA HBsAg MICRO 1/, které jsou používány ve zdravotnictví při rutinním vyšetřování krve.
Diagnostická séra používaná pro stanovení HBsAg pomocí uvedených testů jsou hyperimuni králičí e kozí antiséra, připravovaná dosud opakovanou imunizaci zvířat purifikovaným HBsAg,· připravovaným z lidských plazem nosičů HBsAg. Příprava HBsAg je značně náročná na materiální, metodické i organizeční zajištěni výrobního procesu. Nedostatkem tohoto způsobu přípravy hyperimuních antlsér je, že některá zvířata nedostatečně reaguji na imunizaci HBsAg, čímž dochází k výrobním ztrátám. Vedle žádaných protilátek proti HBsAg se v hyperimuních antisérech mohou vyskytnout i nežádoucí protilátky proti lidekým sérovým bílkovinám, které je nutno ze séra odstranit vysycením. Standardizace jednotlivých šarží diagnostických sér je při stávajícím způsobu přípravy obtížná a vždy neúplná, neboť z vlastní podstaty dosavadního způsobu přípravy imunních sér vyplývá, že nelze zíeket dvě výrobní Serže stejných vlastností. ·
Dalším nedostatkem vyšetřování HBsAg prováděného pomoci dosud užívaných polyklonálnich eér je, že nelze vyloučit chybné výsledky, způsobené nižší citlivostí nebo neočekávanými vlestnostmi diagnostických sér. f
Mnohé z uvedených problémů dosud používaného postupu přípravy diagnostických sér i řadu nedostatků vyplývajících z nevhodných vlestností dosud používaných polyklonálnich diagnostických sér je možné odstranit zevedením přípravy myších monoklonálních protilátek proti HBsAg produkovaných B-lymfocytérními hybrldomy. Hlavním přínosem zavedení monoklonálních protilátek je především zjednodušení a urychlení výrobního postupu, úspora purifikovaného HBs antigenu, standardizace přípravy jednotlivých šerží diagnostických sér, zvýšeni citlivosti a specifity vyšetření i zkrácení doby nutné pro provedení diagnostického testu.
Zdrojem monoklonální protilátky proti HBsAg je hybridomové linie HBS-01, uložená ve'sbirce hybridomů Ústavu sér a očkovacích látek, Praha 10, W.Piecka 108 pod označením HBS - 01.
Uvedený hybridom byl sestrojen způsobem známým z odborné literatury /S.Fazekas de St. Groth, 0. Scheidigger: Production of monoklonal antibodies: Strategy and tactics, 0. Immunol. Meth. 35:1, i960; 0. Kalil. 0. Crevet, M. Fellous, 3. Drouet, A.M. Courouce, C. Ropers: Production d'anticorps monoclonaus anti-HBs. Ann.Immunol. /Inst.Pasteur/ 132c,319,1961/ klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí buněk myši myelomové linie P3-X63-Ag8.653 e ssnzibillzovaných lymfocytů, získaných ze slezin myší kmene 8ALB/c, imunizovaných HBsAg.
B-lymfocytárni hybridomové linie HBs-01 produkuje zcela homogeni protilátky tzv. protilátky monoklonální, které specificky reaguji s HBsAg a nikoliv s lidskými plasmatickými bílkovinami. Hybridom HBS - Ol je možné pěstovat v podmínkách buněčné kultury in vitro nebo in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c nebo jej dlouhodobě uchovávet při teplotě kapalného dusíku.' Monoklonální protilátka produkovaná hybridomem HBs - 01 je specifická pro HBsAg a prostá dalších nežádoucích protilátek.
Buňky hybridomů HBS - 01 jeví ultrastrukturálni obraz typických myelomových buněk s volnými i na membránu vázanými polyribozomy. V podmínkách buněčné kultury rostou jako
CS 268403 Bl slabš adherujlcl buňky /polosuapenzni kultura/ v mádlu MEM nebo RPMI 1640, doplněném 2-merkaptoetanolem /5 x 10$M/, 10 % telecího séra pro tkáňové kultury a antibiotiky / 100 j penicilinu, 10 pg βtřeptomyclnu a 40 /jg gentamyclnu v 1 ml/přl 37 °C. Střední generační doba produkční linie HBS -01 člnl 20 hodin. Produkovaná monoklonální protilátka je myší Imunoglobulln třídy IgG 1, její izoelektricky bod je 6,6 až 6,8.
Přiklad 1
Za účelem pomnožení produkční hybrídomové linie HBe - 01 a zlákání monoklonální protilátky bylo vyseto do kultivační nádobky 1 χ 105 buněk /1 ml kultivačního média. Po 3 dnech růstu buněk bylo z kultivační nádoby získáno kultivační médium, obohacené o monoklonálnl protilátky, vytvořené buňkami produkční hybrídomové linie. Monoklonální protilátky reagovaly β purifikovaným HBsAg v radioimunologickém stanoveni až do ředěni i 106
Přiklad 2 g Monoklonální protilátka proti HBsAg byla ziakána in vivo po inokulací 5 x 10 buněk hybrídomové produkční linie HBS - 01 do perltoneální dutiny myši kmene BALB/c, které bylo 14 dní předem injikováno stejným způsobem 0,5 ml parafínového oleje. Monoklonální protilátky proti HBeAg byly obsaženy v ascitické tekutině, získané z perltoneální dutiny myáí za 12 dni po Inokulací buněk. Monoklonální protilátky reagovaly a purifikovaným 9
HBsAg v radioimunologickém stanoveni až do ředěni 1 i 10 , Bylo získáno 5 ml ascitické tekutiny a obsahem imunoglobulinu 12 mg/ml.
Claims (1)
- P R E 0 M E T vynalezu • Myěí B-lymfocytárnl hybridomová produkční linie HBS - 01 AO 35/86 produkující monoklonální protilátku podtřidy IgGl proti povřchovému antigenu viru hepatitidy B.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS865403A CS268403B1 (cs) | 1986-07-16 | 1986-07-16 | Myši B-lymfocytárni hybrldomová produkční linie HBS - 01 AO 35/86 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS865403A CS268403B1 (cs) | 1986-07-16 | 1986-07-16 | Myši B-lymfocytárni hybrldomová produkční linie HBS - 01 AO 35/86 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS540386A1 CS540386A1 (en) | 1989-07-12 |
| CS268403B1 true CS268403B1 (cs) | 1990-03-14 |
Family
ID=5398877
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS865403A CS268403B1 (cs) | 1986-07-16 | 1986-07-16 | Myši B-lymfocytárni hybrldomová produkční linie HBS - 01 AO 35/86 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS268403B1 (cs) |
-
1986
- 1986-07-16 CS CS865403A patent/CS268403B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS540386A1 (en) | 1989-07-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0038642A1 (en) | A monoclonal antibody against hepatitis B and its production, a hybridoma producing the monoclonal antibody and compositions containing it, the propagation of the hybridoma and the monoclonal antibody for use as an antiviral agent against hepatitus B and in isolating hepatitus b surface antigen from a sample | |
| CA1211725A (en) | Lewis blood group phenotype assay | |
| WO1983001739A1 (en) | Monoclonal antibodies against brugia malayi | |
| CS268403B1 (cs) | Myši B-lymfocytárni hybrldomová produkční linie HBS - 01 AO 35/86 | |
| Groves et al. | A bovine monoclonal antibody to oestrone/oestradiol prepared by a (murine× bovine)× bovine interspecies fusion | |
| CS268404B1 (cs) | Myši B-lymfocytárnl hybridomová produkční linie HBS - 02 AO 36/Θ6 | |
| WO1983001785A1 (en) | Monoclonal antibodies against leishmania | |
| WO1986003498A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| RU1776691C (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, - продуцент моноклональных антител против J @ Е человека | |
| EP0093776A1 (en) | Monoclonal antibodies against schistosoma | |
| US5849539A (en) | Thymidine kinase-lacking ouabain-resistant chicken hybridoma | |
| EP0186371A2 (en) | Monoclonal antibodies specific to antigens of Hepatitis B virus | |
| SU1752763A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS MUScULUS L. - продуцент моноклональных антител к I @ Е человека | |
| KR910002851B1 (ko) | 체외면역에 의한 항황우독소 단일클론성 항체의 제조방법과 황우독소의 분석방법 | |
| RU2093574C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к igg свиньи | |
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| JPH01257477A (ja) | 安定なウサギ−マウスハイブリドーマ及びその分泌物 | |
| CS253240B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBslC6B12 | |
| CS255642B1 (cs) | Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS240807B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC - 01 | |
| CS228859B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS265495B1 (cs) | Myči lymfocytámí hybridem produkující protilátky proti „core" antigenu viru hepatitidy B | |
| CS265494B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) |