CS228859B1 - Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A Download PDFInfo
- Publication number
- CS228859B1 CS228859B1 CS593282A CS593282A CS228859B1 CS 228859 B1 CS228859 B1 CS 228859B1 CS 593282 A CS593282 A CS 593282A CS 593282 A CS593282 A CS 593282A CS 228859 B1 CS228859 B1 CS 228859B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- group
- against human
- antisubstance
- hybridom
- antigene
- Prior art date
Links
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 title 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 17
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 13
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 claims description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A.
Diagnostická séra proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A (zkráceně diagnostická séra anti-Aj jsou základní složkou souborů diagnostických sér sloužících k určení skupinové příslušnosti lidských erytrocytů v systému ABO. Vyšetřování skupinové příslušnosti v systému ABO je základním a nejčastějším sérologickým vyšetřením v humánní hematologické a transfúzní praxi. Provádí se například jako základní součást úplného předtransfúzního vyšetřeni, kontroly krevní skupiny u lůžka při začátku krevní transfúze, sérologických vyšetřování při potransfúzních příhodách, predporodního vyšetřování rodiček a vyšetřování novorozenců.
Diagnostická séra anti-A se dosud připravují z lidské krve vybraných dárců, u nichž byly předem prokázány přirozené vysoké hodnoty aglutininů anti-A nebo z krve dobrovolných dárců záměrně imunizovaných slinami vylučovatelů skupinově specifické substance A, případně substancí A připra2 vénou z lidských slin nebo zvířecího materiálu — například žaludeční mukózy prasat či koní. Substance užívané k imunizaci lidských dobrovolníků je nezbytné podrobit státní kontrole sterility, neškodností a účinnosti. Protože koncentrace žádaných protilátek v séru klesá po imunizaci s časem, je nutné provádět imunizaci opakovaně. Imunizace dobrovolníků izolovanými substancemi mohou být provázeny nepříznivými projevy, jimiž lze předcházet pouze desenzibilizací imunizovaných jedinců. Dosud užívaný způsob přípravy diagnostických sér anti-A klade tedy značné nároky na materiální, kádrové, metodické i organizační zajištění výrobního procesu.
Vedle žádaných protilátek anti-A se v séru každého záměrně imunizovaného i neimunizovaného dárce, jehož organismus je nepřetržitě vystaven nejrůznějším antigennim podnětům, vyskytují v heterogenní — složení vždy jedinečné a neopakovatelné — směsi mnohé další protilátky, z nichž některé přímo ovlivňují reakci séra s erytrocyty a znehodnocují diagnostickou účinnost získaného séra. Takové protilátky je nutné ze séra odstranit. Standardizace jednotlivých šarží diagnostických sér je při stávajícím způsobu přípravy obtížná a vždy neúplná, neboť z vlastní podstaty dosavadní přípravy sér vyplývá nemožnost získat dvě výrobní šarže stejných vlastností. Nepříznivým rysem dosavadního způsobu přípravy diagnostických sér anti-A je spotřeba velkých množství lidské krve.
Při sérologických vyšetřováních s diagnostickými séry anti-A připravenými dosavadním způsobem může být dosaženo chybných výsledků způsobených neočekávanými vlastnostmi diagnostických sér i vyšetřovaných erytrocytů. Četné obtíže a chyby se mohou projevit při odlišování podskupin Ai a A2, případně AiB a AzB a při určování slabých aglutinogenů A.
Mnohé z uvedených problémů dosud používaného postupu přípravy diagnostických lidských sér anti-A i řadu obtíží vyplývajících z nepříznivých vlastností současných diagnostických sér je možné odstranit zavedením přípravy myších monoklonálních protilátek anti-A, produkovaných lymfocytárními hybridomy.
Zdrojem monoklonální protilátky proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A je hybridom, uložený ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská ul. č. 1083, pod označením IMG CZAS HE-02.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth, S., Scheidigger, D.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol. Meth., 35 : 1, 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard, J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře 266:550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí buněk myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene Bald/c, imunizovaných slinami vylučovatele skupinově specifické substance A.
Lymfocytární hybridom HE-02 produkuje zcela homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která specificky reaguje s lidskými typovými erytrocyty Ai, AiB a A2 a nereaguje s erytrocyty A2B, B a O. Hybridom HE-02 je možné kultivovat v podmínkách in vitro v kultivačních médiích vhodných pro živočišné buňky nebo v podmínkách in vivo v peritoneální dutině myší kmene Balb/c. Hybridom HE-02 je možné dlouhodobě uchovávat v konzervách, uložených v kapalném dusíku. Produkci protilátky je možné zahájit po rozmražení buněčné konzervy, aniž by bylo třeba dalšího antigenu. Monoklonální protilátka produkovaná hybridomem HE-02 je specifická pro lidský erytrocytární skupinový antigen A a je prostá jakýchkoliv balastních protilátek.
Příklad
Za účelem pomnožení buněk hybridomu HE-02 v podmínkách In vivo bylo aplikováno 3 X 10® hybridomových buněk do peritoneální dutiny myší Balb/c. Pro zlepšení uchycení aplikovaných buněk a podporu rozvoje hybridomu v peritoneální dutině myší byla zvířata 14 dnů před podáním hybridomových buněk ovlivněna 0,5 ml parafinového oleje injikovaného intraperitoneálně. Po 17 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla vybraná myš usmrcena a vytvořená ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získána 4,7 ml ascitické tekutiny obsahující 14 mg/ml imunoglobulinu. Účinnost monoklonální protilátky HE-02 byla testována postupným dvojnásobným ředěním ascitické tekutiny v prostředí izotonického roztoku chloridu sodného v aglutinačních zkumavkách podle oborové normy ON číslo 84 3225. Ascitická tekutina aglutinovala na -)- (podle ON 84 3225) arytrocyty Ai v ředění 1: 105, erytrocyty AiB v ředění 1:5 X X 104, erytrocyty A2 v ředění 1: 1024. S erytrocyty A2B, B a O ascitická tekutina nereagovala.
Buňky hybridomu HE-02 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. V podmínkách in vitro rostou v podobě polosuspenzních kultur. Základní kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí, doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3 mM) a pyruvát sodný (1 mM). Toto médium (označované jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV] je pro kultivaci hybridomu HE-02 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoethanolem (5 X 10'5M), pufrem HEPES (2 — 4 X 10_3M) a inaktivovaným bovinním sérem pro TK (Bioveta, n. p., Ivanovice na Hané, 10%).
Hybridom HE-02 je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 16,6 hod., modální počet chromosomů 13 měsíců po sestrojení (fúzi) je 84 chromosomů. Produkovaná monoklonální protilátka je imunoglobulin třídy IgM.
Monoklonální protilátka produkovaná lymfocytárním myším hybridomem HE-02 může být využita ve zdravotnické praxi k bezpečnému odlišení lidského erytrocytárního antigenu podskupiny AiB od antigenu podskupiny A2B.
Claims (1)
- PREDMETMyší lymfocyhární hybridom IMG CZAS HE-02, produkující monoklonální protilátkuYNÁLEZU třídy IgM proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS593282A CS228859B1 (cs) | 1982-08-10 | 1982-08-10 | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS593282A CS228859B1 (cs) | 1982-08-10 | 1982-08-10 | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS228859B1 true CS228859B1 (cs) | 1984-05-14 |
Family
ID=5405231
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS593282A CS228859B1 (cs) | 1982-08-10 | 1982-08-10 | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS228859B1 (cs) |
-
1982
- 1982-08-10 CS CS593282A patent/CS228859B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4752582A (en) | Monoclonal antibodies to human glycophorin A and cell lines for the production thereof | |
| Ishizaka et al. | Regulation of Antibody Response in Vitro: II. Formation of Rabbit Reaginic Antibody | |
| EP0093775A1 (en) | Monoclonal antibodies against brugia malayi | |
| CS228859B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A | |
| Bankert et al. | Screening and replica plating of anti-hapten hybridomas with a transfer template hemolytic spot assay | |
| CS229996B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridom | |
| Gengozian et al. | Characterization of the antibody response of the marmoset to sheep red blood cells | |
| EP0093774A1 (en) | Monoclonal antibodies against leishmania | |
| US4767710A (en) | Cell lines for the production of monoclonal antibodies to human glycophorin A | |
| CS229995B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| WO1986002359A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| GB2113713A (en) | Forming monoclonal antibodies to carbohydrate hapten antigens | |
| RU1776691C (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, - продуцент моноклональных антител против J @ Е человека | |
| WO1986002355A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| CS261297B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému krevná skupinovému antigenu B | |
| CS275909B6 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS HE-193 produkující protilátku proti lidskému skupinovému antigenu A | |
| CS276354B6 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG-CZAS HE-195 produkující protilátku proti lidskému skupinovému antigenu A | |
| WO1986002363A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| RU2093572C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к l -цепям иммуноглобулинов свиньи | |
| FI93469C (fi) | Menetelmä hybridoomasolulinjan ja sen tuottaman vasta-aineen tuottamiseksi | |
| EP0093776A1 (en) | Monoclonal antibodies against schistosoma | |
| WO1986002354A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| WO1986003498A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| Müller et al. | Perturbation of the idiotypic network: I. Induction with multiple alloantigen stimulation | |
| RU2093573C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к igm свиньи |