CS229995B1 - Myší lymfocytární hybridom - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom Download PDFInfo
- Publication number
- CS229995B1 CS229995B1 CS222783A CS222783A CS229995B1 CS 229995 B1 CS229995 B1 CS 229995B1 CS 222783 A CS222783 A CS 222783A CS 222783 A CS222783 A CS 222783A CS 229995 B1 CS229995 B1 CS 229995B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- antigen
- monoclonal antibody
- sera
- human
- Prior art date
Links
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 abstract description 20
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract description 3
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Vynález se týká myšího, lymfocytárního
hybridomu, produkujícího protilátku proti
lidskému erytrocytarnimu skupinovému antigenu
A, uloženého ve sbírce hybridomu
Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením
HE-24. Samotna monoklonální protilátka
hybridomu HE-24 je vhodná pro odlišení
lidského erytrocytárniho antigenu podskupiny
AiB od antigenu podskupiny A2B ve
zdravotnické praxi.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzi buňky myší myelomové linie P3-X63-Ag0.653 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A.
Diagnostická séra proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A /zkráceně diagnostická séra anti-A/ jsou základní složkou souborů diagnostických sér sloužících k určení skupinové příslušnosti lidských erytrocytfl v systému ABO. Vyšetřování skupinové příslušnosti v systému ABO je základním a nejčastějším sérologickým vyšetřením v humánní hematologické a transfúzní praxi. Provádí se např. jako základní součást úplného předtransfúzního vyšetření, kontroly krevní skupiny u lůžka při začátku krevní transfúze, sérologických vyšetřování při potransfúzních příhodách, předporodního vyšetřování rodiček a vyšetřování novorozenců.
Diagnostická séra anti-A se dosud připravují z lidské krve vybraných dárců, u nichž byly předem prokázány přirozené vysoké hodnoty aglutininů anti-A nebo z krve dobrovolných dárců záměrně imunizovaných slinami vylučovatelů skupinově specifické substance A, příp, substancí A připravenou z lidských slin nebo zvířecího materiálu - např. žaludeční mukozy prasat či koní. Substance užívané k imunizaci lidských dobrovolníků je nezbytné podrobit státní kontrole sterility, neškodnosti a účinnosti. Protože koncentrace žádaných protilátek v séru klesá po imunizace s časem, je nutné provádět imunizace opakovaně. Imunizace dobrovolníků Izolovanými substancemi mohou být provázeny nepříznivými projevy, jimž lze předcházet oouze desenzibilizací imunizovaných jedinců. Dosud užívaný způsob přípravy diagnotických sér anti-A klade tedy značné nároky na materiální, kádrové, metodické i organizační zajištění výrobního procesu ·
229 995
Vedle žádaných protilátek anti-A se v séru každého záměrně imunizovaného i neimunizovaného dárce, jehož organismus je nepřetržitě vystaven nejrůznějším antigenním podnětům, vyskytují v heterogenní - složením vždy jedinečné a neopakovatelné - směsi mnoh^ další protilátky, z nichž některé přímo ovlivňují reakci séra s erytrocyty a znehodnocují diagnostickou účinnost získaného séra. Takové protilátky je nezbytné ze séra odstranit. Standardizace jednotlivých šarží diagnotických sér je při stávajícím způsobu přípravy obtížná a vždy neúplná, nebol z vlastní podstaty dosavadní přípravy sér vyplývá nemožnost získat dvě výrobní šarže stejných vlastností. Nepříznivým rysem dosavadního způsobu přípravy diagnostických sér anti-A je spotřeba velkých množství lidské krve.
Při sérologických vyšetřováních s diagnostickými séry anti-A připravenými dosavadním způsobem může být dosaženo chybných výsledků způsobených neočekávanými vlastnostmi diagnostických sér i vyšetřovaných erytrocytů. Četné obtíže a chyby se mohou projevit při odlišování podskupin A^ a A^, příp. A^B a A£B a při určovaní slabých aglutinogenů A.
•
Mnohé z uvedených problémů dosud používaného postupu přípravy diagnotických lidských sér anti-A i řadu obtíží vyplývajících z nepříznivých vlastností současných diagnotických sér je možné odstranit zavedením přípravy myších monoklonálních protilátek anti-A, produkovaných lymfocytárními hybridomy.
Zdrojem monoklonální protilátky proti lidksému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A je hybridom, uloženy ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídenská ul 1083 pod označením IMG CZAS HE-24.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury -Fazekas de St, Groth, S.,Scheidigger,D.sProduction of monoclonal antibodies:Stratégy and tactics, 3. Immunol. Meth,, 35:1,1980; Galfré,G.,Howe,S.C.,Milstein,C.,Butcher,G.M.,Howard^
3,C.:Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš. Nátuře, 286:550, 1977/klonování
229 995 souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí buněk myší myelomové linie P3-X63-Ag8,653 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene BALB/c, imunizovaných slinami vylučovatele skupinově specifické substance A,
Lymfocytární hybridom HE-24 produkuje zcela homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální,· která specificky reaguje s lidskými typovými erytrocyty Α^,Α^Β a A2 a nereaguje s etytrocyty A2B, B a 0. Hybridom HE-24 je možné kultivovat v podmínkách in vitro v kultivačních médiích vhodných pro živočišné buňky nebo v podmínkách in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Hybridom HE-24 je možné dlouhodobě uchovávat v konservách uložených v kapalném dusíku. Produkci protilátky je možné zahájit po rozmražení buněčné konservy, aniž by bylo třeba dalšího antigenu, Monoklonální protilátka produkovaná hybridomem HE-24 je specifická pro lidský erytrocytární skupinový antigen A a je prostá jakýchkoliv balastních protilátek.
Příklad:
Za účelem pomnožení buněk hybridomu HE-24 v podmínkách in g
vitro bylo vpraveno 1 x 10 hybridomových buněk do kultivační lahve Legroux obsahující 20 ml kultivačního média H»MEMd. Po třech dnech růstu kultury hybridomových buněk bylo z lahve získáno kultivační médium obohacené o monoklonální protilátku HE-24 uvolňovanou do média hybridomovými buňkami. Účinnost monoklonální protilátky HE-24 byla testována postupným dvojnásobným ředěním kultivačního média obsahujícího monoklonální protilátku v prostředí izotonického roztoku chloridu sodného v aglutinačních zkumavkách podle oborové normy ON Θ4 3225. Kultivační médium aglutinovalo na ♦ /podle ON Θ4 3225/ erytrocyty A,* v ředění 1:1024, erytrocyty A^B v ředění 1:512, erytrocyty A2 v ředění 1:128. S erytrocyty A2B, B a 0 kultivační médium obsahující monoklonální protilátku HE-24 nereagovalo.
229 995
Buňky hybridomu HE-24 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy, V podmínkách in vitro rostou v podobě polosuspensních kultur. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí, doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin /3mM/ a pyruvát sodný /1mM/. Toto médium /označované jako H«MEMd, Ostav molekulární genetiky ČSAV/ je pro kultivaci hybridomu HE-24 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem /5x10~^M/, pufrem HEPES /2-4x10*^M/ a inaktivovaným bovinním sérem pro TK. /Bioveta n.p,, Ivanovice na Hané, 10%/, Pro získávání kultivačního média obohaceného o monoklonální protilátku HE-24 /supernatantu kultury hybridomových buněk/ k diagnostickým účelům je v kultivačním médiu nahrazeno inaktivované bovinní sérum inaktivovaným fetálním telecím sérem.
Hybridom HE-24 je kultivován při 37°C, Střední generační čas je 13 hod,, modální počet chromosomů 20 měsíců po sestrojení /fúzi/ je Θ6 chromosomů.Produkovaná monoklonální protilátka je myší imunoglobulin třídy IgM, lambda.
Monoklonální protilátka produkovaná myším lymfocytárním hybridomem HE-24 může být využita ve zdravotnické praxi k bezpečnému odlišení lidského erytrocytárního antigenu podskupiny A^B od antigenu podskupiny A2B.
Claims (1)
- pRedmět VYNÁLEZU229 995Myší lymfocytární hybridám IMG CZAS HE-24, produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti lidskému erytrocytár· nímu skupinovému antigenu A.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS222783A CS229995B1 (cs) | 1983-03-30 | 1983-03-30 | Myší lymfocytární hybridom |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS222783A CS229995B1 (cs) | 1983-03-30 | 1983-03-30 | Myší lymfocytární hybridom |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS229995B1 true CS229995B1 (cs) | 1984-07-16 |
Family
ID=5358778
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS222783A CS229995B1 (cs) | 1983-03-30 | 1983-03-30 | Myší lymfocytární hybridom |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS229995B1 (cs) |
-
1983
- 1983-03-30 CS CS222783A patent/CS229995B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0105804B1 (en) | Human monoclonal antibodies against bacterial toxins | |
| Kumpel et al. | Human monoclonal anti‐D antibodies. I. Their production, serology, quantitation and potential use as blood grouping reagents | |
| EP0014519B1 (en) | Cell lines, process for preparing them and process for producing antibodies | |
| Gigliotti et al. | Reproducible production of protective human monoclonal antibodies by fusion of peripheral blood lymphocytes with a mouse myeloma cell line | |
| US4752582A (en) | Monoclonal antibodies to human glycophorin A and cell lines for the production thereof | |
| Foung et al. | Human monoclonal antibodies to Rho (D) | |
| GB2189506A (en) | Human anti-rhesus d producing heterohybridomas | |
| CS229995B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| Tucker et al. | Murine/bovine hybridomas producing monoclonal alloantibodies to bovine red cell antigens | |
| CS229996B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridom | |
| Bankert et al. | Screening and replica plating of anti-hapten hybridomas with a transfer template hemolytic spot assay | |
| CS228859B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A | |
| US4767710A (en) | Cell lines for the production of monoclonal antibodies to human glycophorin A | |
| Gengozian et al. | Characterization of the antibody response of the marmoset to sheep red blood cells | |
| CS261297B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému krevná skupinovému antigenu B | |
| CS276354B6 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG-CZAS HE-195 produkující protilátku proti lidskému skupinovému antigenu A | |
| EP0093774A1 (en) | Monoclonal antibodies against leishmania | |
| JP2575015B2 (ja) | ＩｇＧ型モノクロ−ナルリウマトイド因子及びその調製法 | |
| CS275909B6 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS HE-193 produkující protilátku proti lidskému skupinovému antigenu A | |
| RU1776691C (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, - продуцент моноклональных антител против J @ Е человека | |
| WO1986002363A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| RU2093572C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к l -цепям иммуноглобулинов свиньи | |
| Scott et al. | Monoclonal antibodies to human red blood cell blood group antigens | |
| FI93469C (fi) | Menetelmä hybridoomasolulinjan ja sen tuottaman vasta-aineen tuottamiseksi | |
| GB2113713A (en) | Forming monoclonal antibodies to carbohydrate hapten antigens |