CS229996B1 - Myši lymfocytárni hybridom - Google Patents
Myši lymfocytárni hybridom Download PDFInfo
- Publication number
- CS229996B1 CS229996B1 CS254383A CS254383A CS229996B1 CS 229996 B1 CS229996 B1 CS 229996B1 CS 254383 A CS254383 A CS 254383A CS 254383 A CS254383 A CS 254383A CS 229996 B1 CS229996 B1 CS 229996B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- human
- monoclonal antibody
- antigen
- diagnostic
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Vynález se týká myšího lymfocytárního hybridomu, produkujícího protilátku proti lidskému erytrocytarnimu skupinovému antigenu A, uloženého ve sbirce hydridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod osnášením HE-18. Samotná monoklonální protilátka hybridomu HE-18 je vhodná pro odlišeni lidského erytrocytárního antigenu podskupiny A1B od antigenu podskupiny A2B ve zdravotnické,praxi.
Description
(54)
Myši lymfocytárni hybridom
Vynález se týká myšího lymfocytárního hybridomu, produkujícího protilátku proti lidskému erytrocytarnimu skupinovému antigenu A, uloženého ve sbirce hydridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod osnášením HE-18. Samotná monoklonální protilátka hybridomu HE-18 je vhodná pro odlišeni lidského erytrocytárního antigenu podskupiny A1B od antigenu podskupiny A2B ve zdravotnické,praxi.
299 996
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myβlomové linie P3-X63-Ag8,653 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnlmu skupinovému antigenu A.
Diagnostická séra proti lidskému erytrocytárnlmu skupinovému antigenu A /zkráceně diagnostická séra anti-A/ jsou základní složkou souborů diagnostických sér sloužících k určení skupinově příslušnosti lidských erytrocytů v systému ABO. Vyšetřování skupinové příslušnosti v systému ΑΘΟ je základním a nejčastějším sérologickým vyšetřením v humánní hematologické a transfúzní praxi. Provádí se např. jako základní součást úplného přsdtransfúzního vyšetření, kontroly krevní skupiny u lůžka při začátku krevní transfúze, sérologických vyšetřování při potransfúzních příhodách, předporodniho vyšetřování rodiček a vyšetřování novorozenců ,
Diagnostická séra anti-A se dosud připravují z lidské krve vybraných dárců, u nichž byly předem prokázány přirozené vysoké hodnoty aglutininů anti-A nebo z krve dobrovolných dárců záměrně imunizovaných slinami vylučovatelů skupinově specifické substance A, přip. substancí A připravenou z lidských slin nebo zvířecího materiálu - např, žaludeční mukozy prasat či koní. Substance uží* váné k imunizace lidských dobrovolníků je nezbytné podrobit státní kontrol* sterility, neškodnosti a účinnosti. Protože koncentrace žádaných protilátek v séru klesá po imunizace s časem, je nutné provádět imunizaci opakovaně. Imunizace dobrovolníků izolovanými substancemi mohou být provázeny nepříznivými projevy,jimž lze předcházet pouze desenzibilizacl imunizovaných jedinců. Dosud užívaný způsob přípravy diagnostických sér anti-A klade tedy značné nároky na materiální, kádrové, metodické i organizační zajištění výrobního procesu.
229 996
Vedle žádaných protilátek anti-A se v séru každého záměrně imunizovaného i neimunizovaného dárce, jehož organismus je nepřetržitě vystaven nejrůznějším antigenním podnětům, vyskytují v heterogenní - složením vždy jedinečné a neopakovatelné - směsi mnohé další protilátky, z nichž některé přímo ovlivňují reakci séra s erytrocyty a znehodnocují diagnostickou účinnost získaného séra. Takové protilátky je nezbytné ze séra odstranit. Standardizace jednotlivých šarží diagnostických sér je při stávajícím způsobu přípravy obtížná a vždy neúplná, neboť z vlastní podstatydosavadní přípravy sér vyplývá nemožnost získat dvě výrobní šarže stejných vlastností. Nepříznivým rysem dosavadního způsobu přípravy diagnostických sér anti-A je spotřeba velkých množství lidské krve.
Při sérologických vyšetřováních s diagnostickými séry anti-A připravenými dosavadním způsobem může být dosaženo chybných výsledků způsobených neočekávanými vlastnostmi diagnostických sér i vyšetřovaných erytrocytů. Četné obtíže a chyby se mohou projevit při odlišování podskupin a A£, příp. A^B a A£B a při určování slabých aglutinogenů A.
Mnohé z uvedených problémů dosud používaného postupu přípravy diagnostických lidských sér anti-A i řadu obtíží vyplývajících z nepříznivých vlastností současných diagnostických sér je možné odstranit zavedením přípravy myších monoklonálních protilátek anti-A, produkovaných lymfocytárními hybridomy.
Zdrojem monoklonální protilátky proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A je hybridom, uložený ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňské ul. 1083 pod označením IMG CZAS ΗΕ-1Θ.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury /Fazekas de St. Groth, S.,Scheidigger,D.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol.Meth.:
35: 1,1980; Galfré, G., Howe, S.S.,Mílstein,C., Butcher,G.W,, Howard,J.C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš. Nátuře, 266: 550, 1977/ klonováním
229 999 souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí buněk myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene BALB/c, imunizovaných slinami vylučovatels skupinově specifické substance A.
Lymfocytární hybridám HE-1B produkuje zcela homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonálnl, která specificky reagu je s lidskými typovými erytrocyty A^, A^B a A^ a nereaguje S erytrocyty A2B, B a 0. Hybridom ΗΕ-1Θ je možné kultivovat v podmínkách in vitro v kultivačních médiích vhodných pro živočišné buňky nebo v podmínkách in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Hybridom HE-18 je možné dlouhodobě uchovávat v konservách uložených v kapalném dusíku. Produkci protilátky je možné zahájit po rozmražení buněčné konservy, aniž by bylo třeba dalšího antigenu. Monoklonálnl protilátka produkovaná hybridomem HE-18 je specifická pro lidský erytrocytární skupinový antigen A a je prostá jakýchkoliv balastních protilátek.
Příklad:
Za účelem pnmnožení buněk hybridomu HE-18 v podmínkách g
in vitro bylo vpraveno 1 x 10 hybridomových buněk do kultivační lahve Legroux obsahující 20 ml kultivačního média H-MEMd.
Po třech dnech růstu kultury hybridomových buněk bylo z lahve získáno kultivační médium obohacené o monoklonální protilátku HE-18 uvolňovanou do média hybridomovými buňkami. Účinnost monoklonální protilátky HE-18 byla testována postupným dvojnásobným ředěním kultivačního média obsahujícího monoklonální protilátku v prostředí izotonického roztoku chloridu sodného v aglutinačníoh zkumavkách podle oborové normy ON 84 3225. Kultivační médium aglutinovalo na /podle UN 84 3225/ erytrocyty A^ v ředění 1:512, erytrocyty A^ v ředění 1:256, erytrocyty A2 v ředění 1:64. S erytrocyty A2B, B a 0 kultivační médium obsahující monoklonální protilátku HE-18 nereagovalo.
229 996
Buňky hybridomu HE-18 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. V podmínkách in vitro rostou v podobě polosuspensnícli kultur. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí, doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin /3mM/ a pyruvát sodný Z1mM/. Toto médium /označované jako H-MEMd, Ostav molekulární genetiky ČSAV/ je pro kultivaci hybridomu HE-18 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem /5 x 10 5|»|/, pufrem HEPES /2-4x10*^I*l/ a inaktivovaným bovinním sérem pro TK /Bioveta n.p., Ivanovice na Hané, 10%/. Pro získávání kultivačního média obohaceného o monoklonální protilátku HE-18 /supernatantu kultury hybridomových buněk/ k diagnostickým účelům je v kultivačním médiu nahrazeno inaktivované bovir»ní sérum inaktivovaným fatálním telecím sérem.
Hybridom HE-18 je kultivován při 37°C. Střední generační čas je 17 hodin, modá|ní počet chromosomů 20 měsíců po sestrojení /fúzi/ je 87 chromosomů. Produkovaná monoklonální protilátka je myši imunoglobulin třídy IgM,
Monoklonální protilátka produkovaná myším lymfocytárním hybridomem HE-18 může být využita ve zdravotnické praxi k bezpečnému odlišeni lidského erytrocytárního antigenu podskupiny A,jB od antigenu podskupiny A2B.
Claims (1)
- pRedmét VYNALEZU229 996Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS HE-18, produkující monoklonální protilátku třídy IgM proti lidskému erytrocytár nímu skupinovému antigenu A.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS254383A CS229996B1 (cs) | 1983-04-08 | 1983-04-08 | Myši lymfocytárni hybridom |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS254383A CS229996B1 (cs) | 1983-04-08 | 1983-04-08 | Myši lymfocytárni hybridom |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS229996B1 true CS229996B1 (cs) | 1984-07-16 |
Family
ID=5362869
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS254383A CS229996B1 (cs) | 1983-04-08 | 1983-04-08 | Myši lymfocytárni hybridom |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS229996B1 (cs) |
-
1983
- 1983-04-08 CS CS254383A patent/CS229996B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zola et al. | Techniques for the production and characterization of monoclonal hybridoma antibodies | |
| McKearn et al. | Anti-Idiotypic Antibody in Rat Transplantation Immunity: I. Production of anti-Idiotypic Antibody in Animals Repeatedly Immunized with Alloantigens | |
| EP0105804B1 (en) | Human monoclonal antibodies against bacterial toxins | |
| US4689299A (en) | Human monoclonal antibodies against bacterial toxins | |
| EP0014519A2 (en) | Cell lines, process for preparing them and process for producing antibodies | |
| CN110903396B (zh) | 分泌抗人AB型血型的IgM型单抗的杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用 | |
| Gigliotti et al. | Reproducible production of protective human monoclonal antibodies by fusion of peripheral blood lymphocytes with a mouse myeloma cell line | |
| Andrews et al. | Production, characterization, and applications of a murine monoclonal antibody to dog erythrocyte antigen 1.1 | |
| Foung et al. | Human monoclonal antibodies to Rho (D) | |
| Ishizaka et al. | Regulation of Antibody Response in Vitro: II. Formation of Rabbit Reaginic Antibody | |
| EP0093775A1 (en) | Monoclonal antibodies against brugia malayi | |
| Tucker et al. | Murine/bovine hybridomas producing monoclonal alloantibodies to bovine red cell antigens | |
| McDuffie et al. | The behavior in the Coombs test of anti-A and anti-B produced by immunization with various blood group A and B substances and by heterospecific pregnancy | |
| CS229996B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridom | |
| Bankert et al. | Screening and replica plating of anti-hapten hybridomas with a transfer template hemolytic spot assay | |
| CS229995B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS228859B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A | |
| Gengozian et al. | Characterization of the antibody response of the marmoset to sheep red blood cells | |
| Scharff et al. | Hybridomas as a source of antibodies | |
| US4767710A (en) | Cell lines for the production of monoclonal antibodies to human glycophorin A | |
| CS261297B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému krevná skupinovému antigenu B | |
| EP0093774A1 (en) | Monoclonal antibodies against leishmania | |
| JP2575015B2 (ja) | ＩｇＧ型モノクロ−ナルリウマトイド因子及びその調製法 | |
| CS276354B6 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG-CZAS HE-195 produkující protilátku proti lidskému skupinovému antigenu A | |
| CS275909B6 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS HE-193 produkující protilátku proti lidskému skupinovému antigenu A |