CS255642B1 - Mouse lymphocytar hybridome forming antibodies against cortical antigen of hepatitis-b virus - Google Patents

Mouse lymphocytar hybridome forming antibodies against cortical antigen of hepatitis-b virus Download PDF

Info

Publication number
CS255642B1
CS255642B1 CS867431A CS743186A CS255642B1 CS 255642 B1 CS255642 B1 CS 255642B1 CS 867431 A CS867431 A CS 867431A CS 743186 A CS743186 A CS 743186A CS 255642 B1 CS255642 B1 CS 255642B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
antigen
cortical
virus
hepatitis
antibodies against
Prior art date
Application number
CS867431A
Other languages
Czech (cs)
Other versions
CS743186A1 (en
Inventor
Ivo Hlozanek
Evzen Korec
Vlasta Dostalova
Jana Stara
Original Assignee
Ivo Hlozanek
Evzen Korec
Vlasta Dostalova
Jana Stara
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ivo Hlozanek, Evzen Korec, Vlasta Dostalova, Jana Stara filed Critical Ivo Hlozanek
Priority to CS867431A priority Critical patent/CS255642B1/en
Publication of CS743186A1 publication Critical patent/CS743186A1/en
Publication of CS255642B1 publication Critical patent/CS255642B1/en

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Řešení se týká myšího lymfocytámího hybridomu, produkujícího protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B, který je uložen ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením IMG-CZAS HBc 18 E^B.^. Protilátka je vhodná pro detekci korového antigenu, pro afinitní purifikaci korového antigenu a pro detekci protilátek proti korovému antigenu v lidských sérech.The solution relates to mouse lymphocyte antibody-producing hybridoma against hepatitis B virus cortical antigen, which is deposited in the Institute's Hybridoma Collection molecular genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences under the designation IMG-CZAS HBc 18 E ^ B. The antibody is Suitable for detection of cortical antigen for affinity purification of cortical antigen and for the detection of anti-cortical antibodies antigen in human sera.

Description

Vynález se týká myšího lymfocytárního hybridomu produkujícího protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B.The invention relates to a murine lymphocyte hybridoma producing antibodies against the hepatitis B virus cortical antigen.

Hybridní buněčná linie byla sestrojena fúzí buněk myší myelomové linie SP2/0 a myších slezinných lymfoidních buněk, produkujících protilátky proti korovému /dřeňovému/ antigenu viru hepatitidy B. Korový antigen je strukturální součástí virionu viru hepatitidy B. Pro výraz korový antigen” je odbornou světovou veřejností běžně přijímáno označení CORE HBcAg.The hybrid cell line was constructed by fusing cells of the mouse myeloma line SP2 / 0 and mouse spleen lymphoid cells producing antibodies against the hepatitis B virus root / marrow / antigen. The root antigen is a structural component of the hepatitis B virus virion. commonly accepted as CORE HBcAg.

Stanovení hladiny protilátek proti korovému antigenu v lidských sérech má zásadní význam pro diagnostiku a monitorování hepatitidy B. Toto vyšetření zatím není možné v klinických podmínkách v ČSSR provádět, vzhledem k tomu, že není dostupná detekční souprava obsahující purifikovaný korový antigen a protilátky proti němu.Determination of levels of anti-cortical antigen in human sera is essential for the diagnosis and monitoring of hepatitis B. This examination is not yet possible under clinical conditions in Czechoslovakia, as a detection kit containing purified cortical antigen and antibodies against it is not available.

Tento nedostatek odstraňuje myší lymfocytární hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B podle vynálezu uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV, Praha 6, Flemingovo nám. 2, pod označením IMG-CZAS HBc 18 EuBi2· Uvedené protilátky mohou být použity v enzymoimunologickém testu pro detekci korového antigenu, dále pro afinitní čištění korového antigenu, což umožňuje purifikovat vysoce čistý korový antigen z jater nemocných hapatitidou typu B.This deficiency is eliminated by the murine lymphocyte hybridoma producing antibodies against the hepatitis B virus cortical antigen of the invention deposited in the Collection of Hybridomas of the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences, Prague 6, Flemingovo nam. 2, under the designation IMG-HBc Czasy E 18 B u · I2 Said antibodies can be used in the enzyme immunoassay for the detection of cortical antigen as for affinity purification cortical antigen, which allows a highly purified pure crustal antigen from the liver of patients for hepatitis type B.

Monoklonální protilátku je rovněž možné využít v modifikovaném enzymoimunologickém testu pro detekci protilátek proti korovému antigenu v lidských sérech. Podstatného pokroku v diagnostice a monitorování hepatitidy B se dosáhne, je-li k dispozici klonovaná hybridní linie, produkující protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B.The monoclonal antibody can also be used in a modified enzyme immunoassay for the detection of anti-cortical antigen antibodies in human sera. Substantial progress in the diagnosis and monitoring of hepatitis B is achieved when a cloned hybrid line producing antibodies against the hepatitis B virus cortical antigen is available.

Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Ktthler, G., Milstein, C., Nátuře 256: 495-497, 1975) klonováním populace hybridních buněk získaných hybridizací buněk ze sleziny myši BALB/c, které byly imunizovány korovým antigenem viru hepatitidy B a buněk myší myelomové linie SP2/0. Výhodou hybridomu HBc 18 Ε^Β.^ 3e' produkuje protilátky specificky reagující s korovým antigenem viru hepatitidy B. Tuto monoklonální protilátku lze použít pro detekci korového antigenu, pro afinitní purifikaci korového antigenu a pro diagnostiku protilátek proti korovému antigenu v lidských sérech. Použití této protilátky umožňuje vyvinutí diagnostické soupravy pro detekci protilátek proti korovému antigenu dosahující optimálních parametrů.The hybridoma was obtained by a method known in the literature (Ktthler, G., Milstein, C., Nature 256: 495-497, 1975) by cloning a population of hybrid cells obtained by hybridizing cells from the spleen of BALB / c mice immunized with the hepatitis virus root antigen. B and cells of the mouse myeloma line SP2 / 0. The advantage of the HBc 18 Ε ^Β ^ 3e 'hybridoma produces antibodies specifically reacting with the hepatitis B virus cortical antigen. This monoclonal antibody can be used to detect cortical antigen, to affinity purify the cortical antigen, and to diagnose anti-cortical antigen antibodies in human sera. The use of this antibody allows the development of a diagnostic kit for the detection of antibodies against cork antigen achieving optimal parameters.

Hybridom HBc 18 E^^B^2 3e mo^no kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konzerv, které jsou uchovávány v kapalném dusíku je možné zahájit produkci protilátky.Hybridoma HBc E ^^ 18 ^ 2 B ^ 3e mo well cultured in vitro in a suitable media for animal cells, and adapted to grow in vivo in the peritoneal cavity of BALB / c. From cans that are stored in liquid nitrogen, antibody production can be initiated.

PříkladExample

Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 1,5 x 10 hybridomových buněk do peritoneální dutiny myši kmene BALB/c. Této myši bylo 14 dní před podáním hybridomových buněk aplikováno 0,7 ml parafinového oleje do peritoneální dutiny. Po 12 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš usmrcena a naprodukovaná ascitická tekutina byla odebrána. Celkem bylo získáno 5 ml ascitické tekutiny, ve které bylo obsaženo přibližně 5 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka reagovala specificky s korovým antigenem v enzymoimunologickém testu.To expand the hybridoma cells in vivo, 1.5 x 10 6 hybridoma cells were injected into the peritoneal cavity of the BALB / c mouse. This mouse was injected with 0.7 ml paraffin oil 14 days prior to the administration of the hybridoma cells into the peritoneal cavity. After 12 days of hybridoma growth in the peritoneal cavity, the mouse was sacrificed and the produced ascites fluid was collected. A total of 5 ml of ascites fluid was obtained containing approximately 5 mg / ml of immunoglobulin. The monoclonal antibody reacted specifically with the cortical antigen in an enzyme immunoassay.

Z ascitické tekutiny byl pomocí síranové metody vypurifikován imunoglobulin. Jamky mikrotltrakčníoh destiček byly potahovány monoklonální protilátkou produkovanou klonem HBc 18 e11e12' v koncentraci 30 )Ug/ml. Pak byly přidány vzorky obsahující různé koncentrace korového antigenu viru hepatitidy B a nakonec byl přidán konjugát polyklonální protilátky proti korovému antigenu s křenovou peroxidázou a enzymoimunologický test byl dokončen standardním způsobem. Tento tes umožnil detekci 10 ng korového antigenu/ml.Immunoglobulin was purified from the ascites fluid by the sulphate method. The wells of the microtiter plates were coated with the monoclonal antibody produced by clone HBc 18 e 11 e 12 ' at a concentration of 30 µg / ml. Samples containing various concentrations of the hepatitis B virus cortical antigen were then added, and finally the horseradish peroxidase polyclonal antibody conjugate antibody against cortical antigen was added and the enzyme immunoassay was completed in a standard manner. This assay allowed the detection of 10 ng of cork antigen / ml.

Základní kultivační médium pro buňky hybridomu HBc 18 E21B12 Ea94ovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny. Toto médium (označované jako H-MEMd - Ostav molekulární genetiky ČSAV) je pro kultivaci hybridomů doplněno inaktivovaným telecím sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané), penicilinem a streptomycinem. Hybridom je kultivován při 37 °C. Hybridom HBc 18 produkuje protilátku podtřídyEssential culture medium for HBc 18 E 21 B 12 Ea hybridoma cells 94's minimal essential medium with Hanks salt mixture supplemented with non-essential amino acids. This medium (referred to as H-MEMd - The Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences) is supplemented with inactivated calf serum (Bioveta, Ivanovice na Hané), penicillin and streptomycin for hybridoma culture. The hybridoma is cultured at 37 ° C. The HBc 18 hybridoma produces a subclass antibody

IgG3, izoelektrický bod je pH 9. Λ IgG3, isoelectric point is pH 9. Λ

Monoklonální protilátka produkovaná klonem HBc 18 E^^B^2 reaguje specificky s korovým antigenem viru hepatitidy B. Tuto protilátku lze využít k detekci korového antigenu, k afinitní purifikaci korového antigenu a k detekci lidských protilátek proti korovému antigenu v enzymoimuňologickém testu. Tento hybridom může být průmyslově využíván jako zdroj protilátky proti korovému antigenu v diagnostických soupravách.' ,.The monoclonal antibody produced by the HBc 18 E ^^ B ^ 2 clone reacts specifically with the hepatitis B virus cortical antigen. This antibody can be used to detect cortical antigen, to affinity purify the cortical antigen, and to detect human antibodies against cortical antigen in an enzyme immunoassay. This hybridoma can be industrially used as a source of anti-cortical antigen antibody in diagnostic kits. ,.

PŘEDMĚT VYNÁLEZUSUBJECT OF THE INVENTION

Claims (1)

PŘEDMĚT VYNÁLEZUSUBJECT OF THE INVENTION Myší lymfocytární hybridom IMG-CZAS HBc 18 Ε^Β·^, produkující protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B.Mouse lymphocyte hybridoma IMG-CZAS HBc 18 Ε ^ Β · ^, producing antibodies against the hepatitis B virus cortical antigen
CS867431A 1986-10-15 1986-10-15 Mouse lymphocytar hybridome forming antibodies against cortical antigen of hepatitis-b virus CS255642B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS867431A CS255642B1 (en) 1986-10-15 1986-10-15 Mouse lymphocytar hybridome forming antibodies against cortical antigen of hepatitis-b virus

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS867431A CS255642B1 (en) 1986-10-15 1986-10-15 Mouse lymphocytar hybridome forming antibodies against cortical antigen of hepatitis-b virus

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS743186A1 CS743186A1 (en) 1987-07-16
CS255642B1 true CS255642B1 (en) 1988-03-15

Family

ID=5423430

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS867431A CS255642B1 (en) 1986-10-15 1986-10-15 Mouse lymphocytar hybridome forming antibodies against cortical antigen of hepatitis-b virus

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS255642B1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
CS743186A1 (en) 1987-07-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI87933C (en) Method for Preparation of Monoclonal Human Renin Antibody R 3-36-16 and Hybridoma Cell Producing the Same
EP0232921A2 (en) Monoclonal antibodies against hepatitis B virus
EP0363041A1 (en) Monoclonal antibody to morphine, preparation of monoclonal antibody, assaying kit and assaying method of morphine
WO1997023509A1 (en) ANTIFACTOR Xa-TISSUE FACTOR PATHWAY INHIBITOR COMPLEX MONOCLONAL ANTIBODY AND USE OF THE SAME
CS255642B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome forming antibodies against cortical antigen of hepatitis-b virus
KR20080112246A (en) Hapten compound and antibody
US5171664A (en) Monoclonal antibody to okadaic acids, process for producing the monoclonal antibody, assay reagent for assaying okadaic acids using the monoclonal antibody, and assay method
JPS60155198A (en) Monoclonal antibody
CS258886B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome producing antibodies against cortical antigen of b-hepatitis virus
CS265494B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome producing antibodies against antigen of b-hepatitis virus (hbeag)
JPS63209596A (en) Monoclonal antibody and use thereof
CS265495B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome producing antibodies against"core" antigen of b-hepatitis
CS255640B1 (en) Mouse lymphocytar hybridome forming antibodies against surface antigen of hepatitis-b virus which can be marked by horse-radish peroxidase
JP3841364B2 (en) Anti-human vitronectin / thrombin / antithrombin III complex monoclonal antibody, hybridoma, and immunological assay
JPH01160493A (en) Monoclonal antibody and use thereof
RU2049817C1 (en) Strain of hybrid cultured murine cells mus musculus l used for preparing monoclonal antibodies to phenobarbital
CS253240B1 (en) Mouse lymphocyte hybridome hbs1c6b12
SU1673597A1 (en) Strain of hybridous cultured mammalian cells mus musculus l
CS252792B1 (en) Mouse lymphocyte hybridom hbs 72c4a7
RU1776691C (en) Strain of cultivated hybrid cells of animals -mus musculus -l-producer of monoclonal antibodies against -j@@@-e of man
JPS6344894A (en) Anti-human serum albumin monoclonal antibody and production thereof
JPH08242883A (en) Monoclonal antibody against 2-mthylisoborneol, its production and measurement of 2-methylisoborneol with the same
JP2001048900A (en) Antibody and assay using the same
CS268403B1 (en) Mouse b-lymphocytar hybridome production series hbs-01 a0 35/86
JPS6192566A (en) Preparation of antibody-forming cells