CS252792B1 - Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A? - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A? Download PDFInfo
- Publication number
- CS252792B1 CS252792B1 CS86425A CS42586A CS252792B1 CS 252792 B1 CS252792 B1 CS 252792B1 CS 86425 A CS86425 A CS 86425A CS 42586 A CS42586 A CS 42586A CS 252792 B1 CS252792 B1 CS 252792B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- surface antigen
- hybridoma
- hbs
- monoclonal antibody
- hybridom
- Prior art date
Links
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 30
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 abstract description 4
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 abstract description 4
- 206010048643 Hypereosinophilic syndrome Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101000613620 Homo sapiens Protein mono-ADP-ribosyltransferase PARP15 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102100040846 Protein mono-ADP-ribosyltransferase PARP15 Human genes 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012514 monoclonal antibody product Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytárního
hybridomu, produkujícího protilátku
proti povrchovému antigenu hepatitidy ES,
který je uložen ve Sbírce hybridomů Ústavu
molekulární genetiky ČSAV pod označením
HESs 7 2 C A.?. Samotná monoklonální protilátka
tohoto hybridomu je vhodná pro
detekci povrchového antigenu v enzymoimunologickém
testu .
Description
(54)
Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A?
Řešení se týká myšího lymfocytárního hybridomu, produkujícího protilátku proti povrchovému antigenu hepatitidy ES, který je uložen ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením HESs 7 2 C A.?. Samotná monoklonální protilátka tohoto hybridomu je vhodná pro detekci povrchového antigenu v enzymoimunologickém testu .
252 792 *·>
eZ
252 792
Vynález se týká nového hybridomu, t.j. hybridní buněčné linie, která byla sestrojena fúzí buněk myelomové linie Sp2/O a mycích slezinných lymfoidních buněk, produkujících protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy 3* Povrchový antigen je důležitou součástí viru hepatitidy 3 a jeho stanovení má zásadní význam při diagnostice onemocnění.
Dosud se protilátky proti povrchovému antigenu vyrábějí tak, že purifikovaný povrchový antigen je opakovaně injikován produkčním zvířatům, nejčastěji králíkům (kozám).
Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek. Tento postup, který je nazýván konvenčni imunizace ma 2 zásadní neodstranítelné nevýhody. ?ro každou imunizaci je nezbytný povrchový antigen, jehož purifikace představuje velmi nákladný a zdravotně rizikový postup. Protilátky proti povrchovému antigenu, ale i protilátky proti lidským sérovým bílkovinám, především proti lidskému sérovému albuminu, přičemž tyto balastní protilátky je nutno odstraňovat.
Nevýhody konvenčních sér proti povrchovému antigenu odstraňuje použití hybridomové technologie, Produkt hybridomu - monoklonální protilátka je namířena proti jediné antigenní determinantě povrchového antigenu a produkce monoklonálních protilátek nevyžaduje imunizací zvířat antigenem. Použití monoklonální protilátky dále umožňuje zvýšení citlivosti detekční metody SL13A, který je používán pro diagnostiku choroby.
Z publikovaných výsledků je známo, že povrchový antigen viru hepatitidy 3 není jedinou antigenní složkou, ale představuje komplex několika antigenů. Ve všech izolátech se nachází skupinově specifická determinanta a. Další 2 páry subtypově specifických determinant d/y a r/w se obvykle nevyskytují společně a jsou považovány za alely (Le Bovier,
G.L.: The heterogeneity of Australia antigen, J· Infect.
Dis. 123: 671, 1971)0
252 792
Monoklonální protilátky proti skupinově specifické determinantě a jsou výhodné pro diagnostické použití
Podstatného pokroku v diagnostice heoatitidy B, který se projeví ve výší citlivosti a zároveň vyšší spolehlivosti testu, se dosáhne jsou-li k dispozici klonované hybridní buněčné linie produkující monoklonální protilátku proti skupinově specifické a determinantě povrchového antigenu. Takový hybridom je uložen ve Sbírce hybridomů Ústavu moleKulární genetiky ČSAV v Praze ó, Plemingovo nám. 2, ood označením HBs 720 ^·
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Kunitomo, K., íahara, S., Saji, H·, Hosoi, T.j Monoclonal antibodies to hepatitis B surface antigen (HBsAg) as a tool for the au tomated HBsAg screening. Vox Sanguinis 4b: 104) 1983)» klonováním populace hybridních buněk získaných hybridizací buněk ze sleziny myší kmene BAL3/c, které byly imunizovány povrchovým antigenem viru heoatitidy 3 a buněk myší myelomové linie Sp2/0.
Výhodou hybridomů je, že produkují homogenní monoklonální protilátky, které reagují s povrchovým antigenem. Hybridom HBs 720^Αγ je možno kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišně buňky a je adaptován pro růst in vivo v oeritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konzerv, které jsou uchovávány v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu. Protilátka produkovaná klonem HBs 720^A^ reaguje specificky s a determinantou povrchového antigenu viru hepatitidy B.
Příklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 2xlOb hybridomových buněk do peritoneální dutiny myši kmene 3ALB/'c. Této myši bylo 14 dní před podáním hybridomových buněk aplikováno 0,7 ml parafinového oleje do peritoneální dutiny. Po 12 dnech růstu hybridomů v peritoneální
252 792
- 4 dutině byla myš usmrcena a naprodukovaná ascitická tekutina byla odebrána· Celkem bylo získáno 5 ml ascitická tekutiny, ve které bylo obsaženo 10 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální orotilátka reagovala specificky s povrchovým antigenem viru heoatitidy B v enzymoimunologickém a radioimunologickém testu.
Z ascitické tekutiny byl petrifikován imunoglobulin oomocí síranové metody a tímto imunoglobulinem byly potahovány mikrotitracní destičky v koncentraci >0 ug/ml. Pak byly přidány vzorky vyšetřované na přítomnost povrchového antigenu viru heoatitidy B a konjugát polyklonální protilátky proti povrchovému antigenu s křenovou peroxidázou a enzymoimunologický test byl dokončen způsobem oouzíváným pro detekci oovrchového antigenu pomocí diagnostické soupravy 1L1SA HtísAg Micro 1 (Ú50L) viz leták. Použití monoklonální protilátky umožnilo detekci 1,5 ng povrchového antigenu/ml, což představuje dvojnásobné zvýšení citlivosti testu ve •srovnání se systémem používajícím konvenční polyklonální protilátky.
Základním kultivačním medium pro buňky hybridomu HBs 72C .A„ je Haglovo minimální esenciální medium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, foto medium (označované jako H-MZMd - Ústav molekulární genetiky GtíAV) je pro kultivaci hybridomů doplněno penicilinem, střep torny činem a- inaktivovaným telecím šerem (3ioveta, Ivanovice na Hané). Hybridom je kultivován při 37°C· Hybridom HBs 720^Αγ produkuje protilátku podtřídy IgGI, izoelektrický bod je pH 5j2-5>4·
Monoklonální protilátka produkovaná klonem HBs 720^Αγ reaguje specificky s povrchovým antigenem viru heoatitidy B. Tento hybridom může být průmyslově využíván jako zdroj protilátky proti povrchovému antigenu v diagnostických soupravách.
Claims (1)
- PH DUŠI VYNÁLEZUKíyší lymfocytární hybridom HBs 720^ produkující monoklonální protilátku podtřídy IgGI proti povrchovému antigenu viru hepatitidy BVytiskly Moravské tiskařské závody,
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS86425A CS252792B1 (cs) | 1986-01-20 | 1986-01-20 | Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A? |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS86425A CS252792B1 (cs) | 1986-01-20 | 1986-01-20 | Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A? |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS42586A1 CS42586A1 (en) | 1987-02-12 |
| CS252792B1 true CS252792B1 (cs) | 1987-10-15 |
Family
ID=5336291
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS86425A CS252792B1 (cs) | 1986-01-20 | 1986-01-20 | Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A? |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS252792B1 (cs) |
-
1986
- 1986-01-20 CS CS86425A patent/CS252792B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS42586A1 (en) | 1987-02-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4623627A (en) | Monoclonal antibody having specificity for the double-stranded conformation of native DNA and diagnostic methods using same | |
| JP5715634B2 (ja) | 非交差反応性抗ＩｇＧ抗体 | |
| JP5766286B2 (ja) | 抗ヒトＩｇＧ１抗体 | |
| US11413342B2 (en) | Cyclophosphamide analogs for use as immunogens and assay conjugates for an immunoassay of cyclophosphamide and ifosfamide | |
| CA1296660C (en) | Monoclonal antibody against a ras oncogene p21 related dodecapeptide | |
| US6942977B1 (en) | Immunoassays for determining vitamin b12, and reagents and kits therefor | |
| EP1098198A1 (en) | Method for the qualitative and quantitative determination of class igG human antibodies | |
| US5144010A (en) | Method of producing monoclonal auto-anti-idiotypic antibodies | |
| CS252792B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A? | |
| JP3745411B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| KR880005258A (ko) | Ifn-오메가에 대한 모노클로날 항체, 이들의 제조방법, 및 ifn-오메가의 정제 및 탐지를 위한 이들의 용도 | |
| Quesniaux et al. | An enzyme immunoassay for the screening of monoclonal antibodies to cyclosporin | |
| CS253240B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBslC6B12 | |
| KR100188245B1 (ko) | 면역원성 물질의 고도로 보존된 아미노산 서열에 대한 항체, 이의 제조 방법 및 이를 함유하는 면역 검정물 | |
| CS255640B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou | |
| JP4037933B2 (ja) | 抗ヒトカルシトニンモノクローナル抗体 | |
| CS265494B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) | |
| EP0419367A1 (fr) | Procédé de détection d'une substance biologique à l'aide de ligands | |
| RU2049816C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к тироксину | |
| CS255642B1 (cs) | Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B | |
| JPH08242883A (ja) | ２−メチルイソボルネオールに対するモノクローナル抗体、その製造方法及びこれを用いる２−メチルイソボルネオールの測定方法 | |
| CS258886B1 (cs) | Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| WO1998008090A1 (en) | Anti-idiotypic antibodies to an epiglycanin | |
| WO1990000404A1 (en) | Enrichment of antigen-specific polyclonal antibodies through selection of immortal hybrid cells |