CS265494B1 - Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) - Google Patents
Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) Download PDFInfo
- Publication number
- CS265494B1 CS265494B1 CS876277A CS627787A CS265494B1 CS 265494 B1 CS265494 B1 CS 265494B1 CS 876277 A CS876277 A CS 876277A CS 627787 A CS627787 A CS 627787A CS 265494 B1 CS265494 B1 CS 265494B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hbeag
- antibodies against
- mouse
- producing antibodies
- lymphocytar
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 title 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 4
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 abstract description 3
- 101710142246 External core antigen Proteins 0.000 abstract 2
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytárního
hybridomu, produkujícího protilátky proti
HBeAg, který je uložen ve Sbírce hybridomů
Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením
IMG CZAS HBe A2C12F9B1. Protilátka je
vhodná pro detekci a afinitní purifikaci
HBeAg.
Description
Vynález se týká myšího lymfocytárního hybridomu produkujícího protilátky proti e antigenu viru hepatitídy B.
Hybridní buněčná linie byla sestrojena fůzí buněk myší myelomové linie SP2/0 a myších slezinných lymfoidních buněk, produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg). E antigen vzniká proteolytickým štěpením core antigenu v infikované jaterní buňce, přičemž následuje vyplavováni e antigenu do krve.
Stanoveni hladiny HBeAg v krvi má zásadní význam pro diagnostiku a zvláště pro monitorováni průběhu hepatitidy B. Tato vyšetření byla do současné doby prováděna pomocí lidských polyklonálnich protilátek. Test, využívající lidské polyklonální anti-HBeAg protilátky, ale dosahuje nízké citlivosti a specifity reakcí.
Tento nedostatek odstraňuje myší lymfocytární hybridom produkující protilátky proti HBeAg podle vynálezu, uložený ve Sbírce hybridomu Ústavu molekulární genetiky ČSAV, Praha 6, Flemingovo 2, pod označením HBe á2C22FgB2·
Uvedené protilátky mohou být použity v enzymoimunologickém testu pro detekci HBeAg, dále pro afinitní čištění HBeAg, což umožňuje purifikovat vysoce čistý e antigen.
Podstatného pokroku v diagnostice a monitorování hepatitidy B se dosáhne, je-li k dispozici klonovaná hybridní linie, produkujíc! protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Kčhler, G., Mistein,
C., Nátuře 256: 495 až 497, 1975) klonováním populace hybridních buněk získaných hybridizací buněk ze sleziny myší BALB/c, které byly imunizovány HBeAg a buněk myší myelomové linie SP2/0. HBeAg byl připraven štěpením HBeAg, který byl purifikován z bakterií, obsahujících rekombinantní expresní plasmid.
Výhodou hybridomu HBe A2C12F9B1 je, že produkuje protilátky specificky reagující s HBeAg. Tuto protilátku lze použít pro detekci HBeAg a pro afinitní purifikaci HBeAg.
Použití této protilátky umožňuje vyvinutí diagnostické soupravy pro detekci HBeAg dosahující optimálních parametrů.
Hybridom HBe A2C12F9B1 je možno kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. z konzerv, které jsou uchovávány v kapalném dusíku lze zahájit produkcí protilátky.
Příklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno lxlO6 hybridomových buněk do peritoneální dutiny myší kmene BALB/c. Této myši bylo 14 dni před podáním hybridomových buněk aplikováno 0,7 ml parafinového oleje do peritoneální dutiny. Po 15 až 30 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš usmrcena a ascitická tekutina odebrána.
Průměrně byly získány 4 ml ascitické tekutiny, ve které bylo obsaženo přibližně 4 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka reagovala specificky s HBeAg v enzymoimunologickém testu.
Z ascitické tekutiny byl pomocí síranové metody purifikován imunoglobulin. Jamky mikrotitračních destiček byly potahovány monoklonální protilátkou produkovanou klonem HBe A2Ci2F9Bl v koncentraci 50 ug/ml. Pak byly přidány vzorky obsahují různé koncentrace HBeAg a nakonec byl přidán konjugát polyklonální protilátky proti HBeAg s křenovou peroxidázou a enzymoimunologický test byl dokončen standardním způsobem.
Tento test umožnil detekci 10 ng HBeAg/ml.
Základní kultivační médium pro buňky hybridomů HBe A2C12F9B1 je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny. Toto médium (označované jako H-MEMd- Ostav molekulární genetiky ČSAV) je pro kultivaci hybridomů doplněno inaktivovaným telecím sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané), penicilinem a streptomycinem. Hybridom je kultivován při 37 °C. Hybridom HBe A2C12F9B1 produkuje protilátku isotypu IgG2B, isoelektrický bod je pH 6,7 až 7,3.
Monoklonální protilátka produkovaná klonem HBe A2C22F9B1 reaguje specificky s HBeAg.
Tuto protilátku lze využít k detekci a k afinitní purifikaci HBeAg. Tento hybridom může být průmyslově využíván jako zdroj protilátky proti HBeAg v diagnostických soupravách.
Claims (1)
- Myši lymfocytární hybridom IMG CZAS HBe A2C12F9B1' produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS876277A CS265494B1 (cs) | 1987-08-27 | 1987-08-27 | Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS876277A CS265494B1 (cs) | 1987-08-27 | 1987-08-27 | Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS627787A1 CS627787A1 (en) | 1989-03-14 |
| CS265494B1 true CS265494B1 (cs) | 1989-10-13 |
Family
ID=5409455
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS876277A CS265494B1 (cs) | 1987-08-27 | 1987-08-27 | Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS265494B1 (cs) |
-
1987
- 1987-08-27 CS CS876277A patent/CS265494B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS627787A1 (en) | 1989-03-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0359063B1 (en) | Antibody having high affinity to methamphetamine and immunogen for obtaining the same | |
| JPH06113832A (ja) | ジゴキシンに対し高い親和性を有するモノクローナル抗体を産生するハイブリッドセルライン及びその製造法 | |
| FI83669C (fi) | Foerfarande foer specifik bestaemning av pankreas -amylas. | |
| JPH09176199A (ja) | 抗ファクターＸａ・ティシュファクターパスウェイインヒビター複合体モノクローナル抗体及びその使用 | |
| US5171664A (en) | Monoclonal antibody to okadaic acids, process for producing the monoclonal antibody, assay reagent for assaying okadaic acids using the monoclonal antibody, and assay method | |
| CS265494B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridom produkující protilátky proti e antigenu viru hepatitidy B (HBeAg) | |
| JPH0789998A (ja) | 抗ミクロシスチンモノクローナル抗体およびそれを産生するハイブリドーマ | |
| CS258886B1 (cs) | Myší lymfocytářní hybridom produkující protilátky proti korovému antigenu viru-hepatitidy B | |
| CS255642B1 (cs) | Myáí lymfocytérníhybridom produkujíc! protilátky proti korovému antigenu viru hepatitidy B | |
| JP2003125766A (ja) | 抗５−メチル−２’−デオキシシチジン抗体および５−メチル−２’−デオキシシチジンの測定法 | |
| CS265495B1 (cs) | Myči lymfocytámí hybridem produkující protilátky proti „core" antigenu viru hepatitidy B | |
| CS255640B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem produkující protilátky proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B, které lze značit křenovou peroxidázou | |
| RU2395575C1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО Mus musculus L. - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БЕЛКА VP40 ВИРУСА МАРБУРГ (ШТАММ Рорр) (ВАРИАНТЫ), МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, ПРОДУЦИРУЕМОЕ ШТАММОМ (ВАРИАНТЫ), НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ФОРМАТА "СЭНДВИЧ" ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ МАТРИКСНОГО БЕЛКА VP40 ВИРУСА МАРБУРГ (ШТАММ Рорр) | |
| JP5448424B2 (ja) | ヒトＩｇＧのＦｃを含有するタンパク質の測定試薬 | |
| CS253240B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBslC6B12 | |
| CS252792B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom HBs 720^A? | |
| WO1986003498A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| RU2049817C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к фенобарбиталу | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| KR20240097988A (ko) | 신규한 일본뇌염 바이러스 항원과 일본뇌염 특이 항체 및 이의 용도 | |
| RU2049816C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к тироксину | |
| SU1685997A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
| JPH0475597A (ja) | ヒト免疫不全ウイルスの逆転写酵素に対するモノクローナル抗体、その製法及びその抗体産生株 | |
| JPH08242883A (ja) | ２−メチルイソボルネオールに対するモノクローナル抗体、その製造方法及びこれを用いる２−メチルイソボルネオールの測定方法 | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 |