JPH07165798A - ５−ジヒドロテストステロン特異性モノクロナール抗体 - Google Patents
５−ジヒドロテストステロン特異性モノクロナール抗体Info
- Publication number
- JPH07165798A JPH07165798A JP6198363A JP19836394A JPH07165798A JP H07165798 A JPH07165798 A JP H07165798A JP 6198363 A JP6198363 A JP 6198363A JP 19836394 A JP19836394 A JP 19836394A JP H07165798 A JPH07165798 A JP H07165798A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dihydrotestosterone
- antibody
- monoclonal antibody
- inhibitor
- reductase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/743—Steroid hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 新規モノクロナール抗体を提供する。
【構成】 このモノクロナール抗体は５−ジヒドロテス
トステロンに特異的である。これらの抗体を用いて５−
α−レダクターゼ活性を測定して５−ジヒドロテストス
テロン濃度を決定するための新規検定系が得られる。
トステロンに特異的である。これらの抗体を用いて５−
α−レダクターゼ活性を測定して５−ジヒドロテストス
テロン濃度を決定するための新規検定系が得られる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】哺乳類の酵素であるステロイド５
−α−レダクターゼは哺乳類の皮膚、雄性生殖器および
前立腺を含む組織に存在し、ステロイドホルモンである
テストステロンからステロイドホルモンである５−ジヒ
ドロテストステロン（１７β−ヒドロキシ−５α−アン
ドロスタン−３−オン）への変換を触媒する。
−α−レダクターゼは哺乳類の皮膚、雄性生殖器および
前立腺を含む組織に存在し、ステロイドホルモンである
テストステロンからステロイドホルモンである５−ジヒ
ドロテストステロン（１７β−ヒドロキシ−５α−アン
ドロスタン−３−オン）への変換を触媒する。
【化１】 テストステロンおよび５−ジヒドロテストステロン（５
−ＤＨＴ）は共に男性ホルモンであって、雄性における
一次的男性ホルモンである。これらのステロイドは雌性
から雄性を区別する身体的特徴のための第一義的な原因
である。５−ジヒドロテストステロンは、しかしなが
ら、テストステロンよりも男性ホルモンとしてはるかに
強力であり、殊に成長を介してある種の組織における最
終器官エフェクターとして作用する。５−ＤＨＴの形成
は５−α−レダクターゼによるテストステロンの還元の
結果として一次的に標的細胞それ自体の中で起きる。皮
膚が男性ホルモンに反応することおよび男性ホルモン代
謝の活性部位であることが知られている。殊に、テスト
ステロンは皮膚で５−α−レダクターゼの作用によって
５−ＤＨＴに変換される。皮膚でのテストステロン代謝
は時には異常に過剰になり、形成された５−ＤＨＴの結
果、望ましくない効果を示しうる。こうして、５−ＤＨ
Ｔが尋常性ざ瘡を含むニキビならびに他の男性ホルモン
−関連症状の病因に関与していることにかなりの証拠が
ある。Ｐｒｉｃｅなど、Ａｒｃｈｉｖｅｓ・ｉｎ・Ｄｅ
ｒｍａｔｏｌｏｇｙ、１１１：１４９６（１９７５）。
５−α−レダクターゼの活性阻害によるような皮膚内で
テストステロンから５−ＤＨＴの形成阻害が可能な薬剤
はニキビの治療に有用であろう。
−ＤＨＴ）は共に男性ホルモンであって、雄性における
一次的男性ホルモンである。これらのステロイドは雌性
から雄性を区別する身体的特徴のための第一義的な原因
である。５−ジヒドロテストステロンは、しかしなが
ら、テストステロンよりも男性ホルモンとしてはるかに
強力であり、殊に成長を介してある種の組織における最
終器官エフェクターとして作用する。５−ＤＨＴの形成
は５−α−レダクターゼによるテストステロンの還元の
結果として一次的に標的細胞それ自体の中で起きる。皮
膚が男性ホルモンに反応することおよび男性ホルモン代
謝の活性部位であることが知られている。殊に、テスト
ステロンは皮膚で５−α−レダクターゼの作用によって
５−ＤＨＴに変換される。皮膚でのテストステロン代謝
は時には異常に過剰になり、形成された５−ＤＨＴの結
果、望ましくない効果を示しうる。こうして、５−ＤＨ
Ｔが尋常性ざ瘡を含むニキビならびに他の男性ホルモン
−関連症状の病因に関与していることにかなりの証拠が
ある。Ｐｒｉｃｅなど、Ａｒｃｈｉｖｅｓ・ｉｎ・Ｄｅ
ｒｍａｔｏｌｏｇｙ、１１１：１４９６（１９７５）。
５−α−レダクターゼの活性阻害によるような皮膚内で
テストステロンから５−ＤＨＴの形成阻害が可能な薬剤
はニキビの治療に有用であろう。
【０００２】これに加えるに、その他の身体的条件およ
び良性前立腺増殖症、男性ホルモン性脱毛症（通常の男
性型脱毛症）、脂濾症および女性多毛症を含む疾病症状
も男性ホルモン活性の上昇に関連し、５−α−レダクタ
ーゼ阻害剤の投与によって処置できるであろう。たとえ
ば、Ｔ．Ｌｉａｎｇなど、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇ
ｙ、１１７：５７１（１９８５）；Ｊ．Ｒ．Ｂｒｏｏｋ
ｓなど、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ、４７：１（１９７６）；
Ｊ．Ｒ．Ｃａｒｌｉｎなど、Ｊｏｕｒｎａｌ・ｏｆ・Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、４２７：７９（１９８
８）参照。５−α−レダクターゼの効果を阻害すること
によってテストステロンから５−ＤＨＴへの形成を阻害
することが可能な薬剤は、それ故これらの症状の処置に
有用であろう。
び良性前立腺増殖症、男性ホルモン性脱毛症（通常の男
性型脱毛症）、脂濾症および女性多毛症を含む疾病症状
も男性ホルモン活性の上昇に関連し、５−α−レダクタ
ーゼ阻害剤の投与によって処置できるであろう。たとえ
ば、Ｔ．Ｌｉａｎｇなど、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇ
ｙ、１１７：５７１（１９８５）；Ｊ．Ｒ．Ｂｒｏｏｋ
ｓなど、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ、４７：１（１９７６）；
Ｊ．Ｒ．Ｃａｒｌｉｎなど、Ｊｏｕｒｎａｌ・ｏｆ・Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、４２７：７９（１９８
８）参照。５−α−レダクターゼの効果を阻害すること
によってテストステロンから５−ＤＨＴへの形成を阻害
することが可能な薬剤は、それ故これらの症状の処置に
有用であろう。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】５−α−レダクターゼ
の効果を阻害する化合物の発見および単離に関連する多
くの課題の一つは存在する酵素の量を測定できる便利で
迅速な検定法の不在である。換言すれば、５−α−レダ
クターゼ阻害剤の効果を測定する方法として試料中の５
−ＤＨＴの量を測定する迅速で便利な検定法を持つこと
は大変有利であろう。
の効果を阻害する化合物の発見および単離に関連する多
くの課題の一つは存在する酵素の量を測定できる便利で
迅速な検定法の不在である。換言すれば、５−α−レダ
クターゼ阻害剤の効果を測定する方法として試料中の５
−ＤＨＴの量を測定する迅速で便利な検定法を持つこと
は大変有利であろう。
【０００４】
【課題を解決するための手段】この発明は５−ジヒドロ
テストステロンに特異的なモノクロナール抗体ならびに
該モノクロナール抗体の免疫学的に活性な断片および組
換え体を提供する。この発明はこの発明の抗体を生産す
る宿主細胞をも提供する。
テストステロンに特異的なモノクロナール抗体ならびに
該モノクロナール抗体の免疫学的に活性な断片および組
換え体を提供する。この発明はこの発明の抗体を生産す
る宿主細胞をも提供する。
【０００５】用語「ＩＣ50」はここにおいては測定され
るべき活性を５０％阻害する化合物の濃度を示す。用語
「ＩＣ100」はここにおいては測定されるべき活性を１
００％阻害する化合物の濃度を示す。ここにおいては用
語「抗体」は抗体、抗体の断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ
（ａｂ’）2およびＦｖ断片のようなものであるが、こ
れだけに限定はされない）およびキメラ化、ヒト化、ベ
ニア化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）、再表面化（ｒｅｓｕｒｆ
ａｃｅｄ）またはＣＤＲ−移植抗体であって、それらを
誘導して来た元の抗体分子の抗原と類似の性質を持つも
のと結合可能なものを含む。本発明は単鎖ポリペプチド
結合分子も含む。用語「抗体」はこの文書では抗体が製
造された方法によっては限定されず、また、インシチュ
であるか否かによっても限定されない。用語「抗体」は
この明細書では細菌、酵母、昆虫細胞系または哺乳類細
胞系内での発現を含む組換えＤＮＡ技術により製造され
た抗体を含むことを意味するが、これらに限定するもの
ではないが、一態様ではこの発明は本発明の抗体を産生
することが可能な宿主細胞も含む。好適な宿主細胞には
マウス、酵母、昆虫および細菌起源のものを含む。マウ
ス起源の宿主細胞、殊にハイブリドーマは特に好適であ
る。
るべき活性を５０％阻害する化合物の濃度を示す。用語
「ＩＣ100」はここにおいては測定されるべき活性を１
００％阻害する化合物の濃度を示す。ここにおいては用
語「抗体」は抗体、抗体の断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ
（ａｂ’）2およびＦｖ断片のようなものであるが、こ
れだけに限定はされない）およびキメラ化、ヒト化、ベ
ニア化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）、再表面化（ｒｅｓｕｒｆ
ａｃｅｄ）またはＣＤＲ−移植抗体であって、それらを
誘導して来た元の抗体分子の抗原と類似の性質を持つも
のと結合可能なものを含む。本発明は単鎖ポリペプチド
結合分子も含む。用語「抗体」はこの文書では抗体が製
造された方法によっては限定されず、また、インシチュ
であるか否かによっても限定されない。用語「抗体」は
この明細書では細菌、酵母、昆虫細胞系または哺乳類細
胞系内での発現を含む組換えＤＮＡ技術により製造され
た抗体を含むことを意味するが、これらに限定するもの
ではないが、一態様ではこの発明は本発明の抗体を産生
することが可能な宿主細胞も含む。好適な宿主細胞には
マウス、酵母、昆虫および細菌起源のものを含む。マウ
ス起源の宿主細胞、殊にハイブリドーマは特に好適であ
る。
【０００６】動物、特にマウスにおけるモノクロナール
およびポリクロナール両抗体の産生は、当業界ではよく
公知である。たとえば、Ｃ．Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｈａｎ
ｄｂｏｏｋ・ｏｆ・Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ・Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ・Ｓｃｉｅｎｔｉ
ｆｉｃ・Ｐｕｂ．，１９８６）；Ｊ．Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍ
ｏｎｏｃｌｏｎａｌ・Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎ
ｃｉｐｌｅｓ・ａｎｄ・Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ・Ｐｒｅｓｓ，１９８３）参照。モノクロナール
抗体の産生のために基本的方法はマウスまたは他の適当
な動物に免疫源を注射することから始まる。次にマウス
を屠殺し、その脾臓から取り出した細胞を骨髄腫細胞と
融合して試験管内で増殖するハイブリドーマを得る。ハ
イブリドーマの集団を検索して免疫原に特異的な単一抗
体種を分泌する各クローンを単離する。この方法で得ら
れる各抗体種は各々免疫原物質に認識される特異的抗原
性部位と反応して発生する免疫動物由来単一Ｂ細胞の生
産物である。
およびポリクロナール両抗体の産生は、当業界ではよく
公知である。たとえば、Ｃ．Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｈａｎ
ｄｂｏｏｋ・ｏｆ・Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ・Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ・Ｓｃｉｅｎｔｉ
ｆｉｃ・Ｐｕｂ．，１９８６）；Ｊ．Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍ
ｏｎｏｃｌｏｎａｌ・Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎ
ｃｉｐｌｅｓ・ａｎｄ・Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ・Ｐｒｅｓｓ，１９８３）参照。モノクロナール
抗体の産生のために基本的方法はマウスまたは他の適当
な動物に免疫源を注射することから始まる。次にマウス
を屠殺し、その脾臓から取り出した細胞を骨髄腫細胞と
融合して試験管内で増殖するハイブリドーマを得る。ハ
イブリドーマの集団を検索して免疫原に特異的な単一抗
体種を分泌する各クローンを単離する。この方法で得ら
れる各抗体種は各々免疫原物質に認識される特異的抗原
性部位と反応して発生する免疫動物由来単一Ｂ細胞の生
産物である。
【０００７】種々のハイブリドーマ細胞系を検索して所
期の抗原への抗体を産生するものを見出した後、各ハイ
ブリドーマ細胞系により産生される抗体を検索して免疫
原物質、本件では５−ジヒドロテストステロン、に最高
の親和性を持ち、一方、テストステロンには低い親和性
を維持するものを見出す。好ましくは、モノクロナール
抗体は少なくとも約１０8リットル／モルの親和性、よ
り好ましくは、少なくとも約１０9リットル／モルの親
和性を持つものが選択されよう。ラット、マウス、ウサ
ギ、ヒツジおよびヒトを含む無数の種が、ハイブリドー
マを造るために利用する融合プロトコールで用いる免疫
化リンパ球の源泉として有用である。ＢＡＬＢ／ｃマウ
スは本発明の抗体の産生のための免疫細胞の源泉として
特に好適である。パパインおよびペプシンのような蛋白
分解酵素による抗体の処理はＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）2種
のような抗体断片を発生するが、これらはこの発明の範
囲内に含まれる。この発明の抗体のそのような酵素での
処理は、それ故、本発明の５−ジヒドロテストステロン
に結合する断片を発生するために用いられる。
期の抗原への抗体を産生するものを見出した後、各ハイ
ブリドーマ細胞系により産生される抗体を検索して免疫
原物質、本件では５−ジヒドロテストステロン、に最高
の親和性を持ち、一方、テストステロンには低い親和性
を維持するものを見出す。好ましくは、モノクロナール
抗体は少なくとも約１０8リットル／モルの親和性、よ
り好ましくは、少なくとも約１０9リットル／モルの親
和性を持つものが選択されよう。ラット、マウス、ウサ
ギ、ヒツジおよびヒトを含む無数の種が、ハイブリドー
マを造るために利用する融合プロトコールで用いる免疫
化リンパ球の源泉として有用である。ＢＡＬＢ／ｃマウ
スは本発明の抗体の産生のための免疫細胞の源泉として
特に好適である。パパインおよびペプシンのような蛋白
分解酵素による抗体の処理はＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）2種
のような抗体断片を発生するが、これらはこの発明の範
囲内に含まれる。この発明の抗体のそのような酵素での
処理は、それ故、本発明の５−ジヒドロテストステロン
に結合する断片を発生するために用いられる。
【０００８】この発明の抗体または抗体断片の抗原結合
領域が本発明の鍵となる特性であることを当業者は理解
するであろう。ＭｏＡｂ２７６−１抗体を産生するハイ
ブリドーマは本発明のそのような抗原結合領域をコード
するＤＮＡの好適な源泉として役立つ。このＤＮＡは、
組換えＤＮＡ技術により、所期のアミノ酸残基配列をコ
ードするＤＮＡに共有結合的に結合でき、新規ハイブリ
ッド蛋白質をコードする新規ハイブリッドＤＮＡ配列を
得る。この技術の変種は誘導して来た元の抗体分子のと
似た性質の抗原に結合可能なキメラ化、ヒト化、ビニア
化、再表面化およびＣＤＲ−移植化抗体を産生するのに
使用できる。キメラ化抗体はＳ．Ｃａｂｉｌｌｙなどに
１９８９年３月２８日に付与された米国特許第４８１６
５６７号に記載されている。この文献はキメラ化抗体の
製造法およびベクターを開示する。米国特許第４８１６
５６７号のここに内容全般を参考のために引用する。遺
伝子組換え抗体の別種の製法は同じ１９８９年３月２８
日にＭ．Ｂｏｓｓなどに付与された米国特許第４８１６
３９７号に提供され、ここに内容全般を参考のために引
用する。このＢｏｓｓ特許は同一の宿主細胞における抗
体の重鎖および軽鎖の同時的な共発現を教示する。
領域が本発明の鍵となる特性であることを当業者は理解
するであろう。ＭｏＡｂ２７６−１抗体を産生するハイ
ブリドーマは本発明のそのような抗原結合領域をコード
するＤＮＡの好適な源泉として役立つ。このＤＮＡは、
組換えＤＮＡ技術により、所期のアミノ酸残基配列をコ
ードするＤＮＡに共有結合的に結合でき、新規ハイブリ
ッド蛋白質をコードする新規ハイブリッドＤＮＡ配列を
得る。この技術の変種は誘導して来た元の抗体分子のと
似た性質の抗原に結合可能なキメラ化、ヒト化、ビニア
化、再表面化およびＣＤＲ−移植化抗体を産生するのに
使用できる。キメラ化抗体はＳ．Ｃａｂｉｌｌｙなどに
１９８９年３月２８日に付与された米国特許第４８１６
５６７号に記載されている。この文献はキメラ化抗体の
製造法およびベクターを開示する。米国特許第４８１６
５６７号のここに内容全般を参考のために引用する。遺
伝子組換え抗体の別種の製法は同じ１９８９年３月２８
日にＭ．Ｂｏｓｓなどに付与された米国特許第４８１６
３９７号に提供され、ここに内容全般を参考のために引
用する。このＢｏｓｓ特許は同一の宿主細胞における抗
体の重鎖および軽鎖の同時的な共発現を教示する。
【０００９】米国特許第４８１６３９７号の方策は１９
８７年９月３０日に刊行された欧州特許公開０２３９４
００号に教示されたようにさらに洗練された。この欧州
特許公開（Ｗｉｎｔｅｒ）の教示はこの発明の活性なモ
ノクロナール抗体の遺伝子組換えのための好適な様式で
ある。Ｗｉｎｔｅｒ技術はヒト抗体の相補性を決定する
領域（ＣＤＲ）のマウスモノクロナール抗体のＣＤＲに
よる置換を含み、それによってヒト抗体の特異性をＣＤ
Ｒ領域の源泉であったマウス抗体の特異性へ転換する。
単鎖抗体技術は今では当業界でよく公知な遺伝子組換え
抗体の更に別の変種である。たとえば、Ｒ．Ｅ．Ｂｉｒ
ｄなど、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３〜４２６（１
９８８）；１９８８年３月１０日のＰＣＴ公表公報ＷＯ
８８／０１６４９号参照。単鎖抗体技術は重鎖と軽鎖の
結合領域をポリペプチド配列で結合してそれから誘導さ
れた抗体の結合特異性を持つ単一ポリペプチドを発生さ
せることを含む。
８７年９月３０日に刊行された欧州特許公開０２３９４
００号に教示されたようにさらに洗練された。この欧州
特許公開（Ｗｉｎｔｅｒ）の教示はこの発明の活性なモ
ノクロナール抗体の遺伝子組換えのための好適な様式で
ある。Ｗｉｎｔｅｒ技術はヒト抗体の相補性を決定する
領域（ＣＤＲ）のマウスモノクロナール抗体のＣＤＲに
よる置換を含み、それによってヒト抗体の特異性をＣＤ
Ｒ領域の源泉であったマウス抗体の特異性へ転換する。
単鎖抗体技術は今では当業界でよく公知な遺伝子組換え
抗体の更に別の変種である。たとえば、Ｒ．Ｅ．Ｂｉｒ
ｄなど、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３〜４２６（１
９８８）；１９８８年３月１０日のＰＣＴ公表公報ＷＯ
８８／０１６４９号参照。単鎖抗体技術は重鎖と軽鎖の
結合領域をポリペプチド配列で結合してそれから誘導さ
れた抗体の結合特異性を持つ単一ポリペプチドを発生さ
せることを含む。
【００１０】前記遺伝子組換え的手法は当業者に分子内
の残部を変化させつつ元の抗体の結合特性を保持した分
子を発生させるために無数の手段を提供する。このよう
な技術は双特異性抗体の生産に特に有用である。これら
双特異性抗体は５−ジヒドロテストステロンならびにシ
グナル部分のような他の抗原のための特異性を持つ。あ
るいは、これらの技術はこの発明の抗体からの抗原認識
領域がシグナル部分であるβ−ガラクトシダーゼのよう
な酵素に共有結合的に結合して、キメラ分子を産生させ
る。本発明の抗体はテストステロンに対するよりも５−
ジヒドロテストステロンに対してさらに大きい特異性を
示さなければならない。好適な態様において、この発明
の抗体は５−ＤＨＴの対する特異性を１００％とした
時、テストステロンとの交差活性は２５％以下を示す。
特に好適な態様において、この発明の抗体はテストステ
ロンに対する交差反応性１２．５％以下を示す。
の残部を変化させつつ元の抗体の結合特性を保持した分
子を発生させるために無数の手段を提供する。このよう
な技術は双特異性抗体の生産に特に有用である。これら
双特異性抗体は５−ジヒドロテストステロンならびにシ
グナル部分のような他の抗原のための特異性を持つ。あ
るいは、これらの技術はこの発明の抗体からの抗原認識
領域がシグナル部分であるβ−ガラクトシダーゼのよう
な酵素に共有結合的に結合して、キメラ分子を産生させ
る。本発明の抗体はテストステロンに対するよりも５−
ジヒドロテストステロンに対してさらに大きい特異性を
示さなければならない。好適な態様において、この発明
の抗体は５−ＤＨＴの対する特異性を１００％とした
時、テストステロンとの交差活性は２５％以下を示す。
特に好適な態様において、この発明の抗体はテストステ
ロンに対する交差反応性１２．５％以下を示す。
【００１１】抗体の特異性を定量化する通常の方法は競
合ＥＬＩＳＡ検定によるもので、当業者にはよく公知で
ある。このような検定ではアビジン／５−ＤＨＴ複合体
を下記のようにマイクロタイター板のウェルのような担
体に結合させることにより反応性を測定する。次に抗−
５−ＤＨＴ抗体（ＭｏＡｂ２７６−１のような）の所定
量を添加し、同時に抗体について結合５−ＤＨＴと競合
する種々の濃度の５−ジヒドロテストステロンをも添加
する。非結合抗体を次にウェルから除去する。抗体の結
合を５０％阻害する５−ジヒドロテストステロンの濃度
をＩＣ50と定義する。５−ジヒドロテストステロンの代
わりにテストステロンを用いる本実験を平行的に行う。
次にテストステロンのＩＣ50と５−ジヒドロテストステ
ロンのＩＣ50とを比較して相対的な結合親和性を得る。
この発明の最も好適な抗体、ＭｏＡｂ２７６−１は５−
ジヒドロテストステロンについてはＩＣ50５３７ｎＭを
示し、一方、テストステロンについてはＩＣ50４５６８
ｎＭを持つ。この抗体は、それ故、５−ジヒドロテスト
ステロンに対してはテストステロンに対するよりも８．
５倍特異的である。モノクロナール抗体ＭｏＡｂ２７６
−１を産生するハイブリドーマは２０８５２メリーラン
ド州、ロックビルにあるアメリカン・タイプ・カルチャ
ー・センター（ＡＴＣＣ）から受託番号ＡＴＣＣ・１１
４１０として入手可能である。
合ＥＬＩＳＡ検定によるもので、当業者にはよく公知で
ある。このような検定ではアビジン／５−ＤＨＴ複合体
を下記のようにマイクロタイター板のウェルのような担
体に結合させることにより反応性を測定する。次に抗−
５−ＤＨＴ抗体（ＭｏＡｂ２７６−１のような）の所定
量を添加し、同時に抗体について結合５−ＤＨＴと競合
する種々の濃度の５−ジヒドロテストステロンをも添加
する。非結合抗体を次にウェルから除去する。抗体の結
合を５０％阻害する５−ジヒドロテストステロンの濃度
をＩＣ50と定義する。５−ジヒドロテストステロンの代
わりにテストステロンを用いる本実験を平行的に行う。
次にテストステロンのＩＣ50と５−ジヒドロテストステ
ロンのＩＣ50とを比較して相対的な結合親和性を得る。
この発明の最も好適な抗体、ＭｏＡｂ２７６−１は５−
ジヒドロテストステロンについてはＩＣ50５３７ｎＭを
示し、一方、テストステロンについてはＩＣ50４５６８
ｎＭを持つ。この抗体は、それ故、５−ジヒドロテスト
ステロンに対してはテストステロンに対するよりも８．
５倍特異的である。モノクロナール抗体ＭｏＡｂ２７６
−１を産生するハイブリドーマは２０８５２メリーラン
ド州、ロックビルにあるアメリカン・タイプ・カルチャ
ー・センター（ＡＴＣＣ）から受託番号ＡＴＣＣ・１１
４１０として入手可能である。
【００１２】本発明は５−ジヒドロテストステロンと特
異的な反応性のある全ての抗体を包括するが、起源の種
または免疫グロブリンのクラスまたはＩｇＧ、ＩｇＡ、
ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤを含むサブクラスには関わ
らない。最も好適な本発明の抗体はＩｇＧクラスのもの
である。本発明の抗体は免疫、ハイブリドーマの生産お
よび５−ジヒドロテストステロンに対する選択的な反応
性を持つ抗体の確認によって構築および単離をすること
ができる。
異的な反応性のある全ての抗体を包括するが、起源の種
または免疫グロブリンのクラスまたはＩｇＧ、ＩｇＡ、
ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤを含むサブクラスには関わ
らない。最も好適な本発明の抗体はＩｇＧクラスのもの
である。本発明の抗体は免疫、ハイブリドーマの生産お
よび５−ジヒドロテストステロンに対する選択的な反応
性を持つ抗体の確認によって構築および単離をすること
ができる。
【００１３】この発明は試料中の５−ジヒドロテストス
テロン量測定の迅速で容易な検定法も提供するが、その
検定はジヒドロテストステロンに特異的な抗体を用いる
免疫学的検定を含んでいる。この発明はさらに５−α−
レダクターゼ酵素阻害剤の効果を測定する方法も含み、
この方法は ａ．精製５−α−レダクターゼの所定量を容器系に添加
すること； ｂ．５−α−レダクターゼ酵素阻害剤と５−α−レダク
ターゼとに第一インキュベーションを行うこと； ｃ．５−α−レダクターゼと５−α−レダクターゼ酵素
阻害剤との混合物とテストステロンの所定量とをインキ
ュベートすること； ｄ．５−ジヒドロテストステロンに特異的な抗体を用い
て、反応混合物中のジヒドロテストステロン量を測定す
ること；および ｅ．５−α−レダクターゼ酵素阻害剤無添加の対照と比
較してジヒドロテストステロンの濃度の低下を検出する
こと；からなる。
テロン量測定の迅速で容易な検定法も提供するが、その
検定はジヒドロテストステロンに特異的な抗体を用いる
免疫学的検定を含んでいる。この発明はさらに５−α−
レダクターゼ酵素阻害剤の効果を測定する方法も含み、
この方法は ａ．精製５−α−レダクターゼの所定量を容器系に添加
すること； ｂ．５−α−レダクターゼ酵素阻害剤と５−α−レダク
ターゼとに第一インキュベーションを行うこと； ｃ．５−α−レダクターゼと５−α−レダクターゼ酵素
阻害剤との混合物とテストステロンの所定量とをインキ
ュベートすること； ｄ．５−ジヒドロテストステロンに特異的な抗体を用い
て、反応混合物中のジヒドロテストステロン量を測定す
ること；および ｅ．５−α−レダクターゼ酵素阻害剤無添加の対照と比
較してジヒドロテストステロンの濃度の低下を検出する
こと；からなる。
【００１４】本発明の検定の一般的な方策は、まず標的
５−ジヒドロテストステロンの容器系内に含まれるか、
あるいは容器を構成する固体の担体に固定化することを
必要とする。この担体は容器内の粒子（ビーズまたは
膜）であってもよい。好適な態様においては容器内面自
体を担体とする。採用する容器系の特性は使用する標識
部分のタイプに依存する。例えば、放射能シグナルの使
用は容器が放射粒子に対して透過性であることを要求す
る。色素原または螢光原的シグナルを用いる時、容器系
はそのシグナルを検出するために採用する波長において
透明であるかまたは反応液を直視できるように構築され
なければならない。好適な系はマイクロタイター検定ま
たは組織培養に通常用いるようなプレートのウェルを採
用する。色素原または螢光原シグナルのための最も好適
な系は９６個のウェルを持ち、底が平らなウェルを持つ
プレートを採用する。この発明の最も好適な態様はリガ
ンドを容易に結合するためにウェルの壁を前処理して活
性化した商業的供給元からのマイクロタイタープレート
を採用する。
５−ジヒドロテストステロンの容器系内に含まれるか、
あるいは容器を構成する固体の担体に固定化することを
必要とする。この担体は容器内の粒子（ビーズまたは
膜）であってもよい。好適な態様においては容器内面自
体を担体とする。採用する容器系の特性は使用する標識
部分のタイプに依存する。例えば、放射能シグナルの使
用は容器が放射粒子に対して透過性であることを要求す
る。色素原または螢光原的シグナルを用いる時、容器系
はそのシグナルを検出するために採用する波長において
透明であるかまたは反応液を直視できるように構築され
なければならない。好適な系はマイクロタイター検定ま
たは組織培養に通常用いるようなプレートのウェルを採
用する。色素原または螢光原シグナルのための最も好適
な系は９６個のウェルを持ち、底が平らなウェルを持つ
プレートを採用する。この発明の最も好適な態様はリガ
ンドを容易に結合するためにウェルの壁を前処理して活
性化した商業的供給元からのマイクロタイタープレート
を採用する。
【００１５】固体担体に５−ジヒドロテストステロンを
固定化する別の方法はリンカーによるものである。頻繁
に採用されるリンカーは蛋白質である。この目的のため
に好適な蛋白質はアビジンである。蛋白質に５−ジヒド
ロテストステロンを結合する方法に頻繁に採用される方
法の一つは当業界ではよく公知なクロスリンカーを使用
する５−ジヒドロテストステロンのアビジンへの結合を
採用する。このようなクロスリンカー試薬は１７位にあ
るヒドロキシと蛋白質内反応性アミノ基とを結合する。
好適なクロスリンカー手法はＮ−ヒドロキシスルホサク
シンイミド強化ＥＤＣ［１−エチル−３−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）カルボジイミド］操作法を採用す
る。Ｊ．Ｖ．Ｓｔａｒｏｓなど、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
・Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１５６：２２０〜２２
２。結合した５−ＤＨＴ／蛋白質複合体を次に親水的な
相互作用（ｐＨ９．６の炭酸塩−重炭酸塩緩衝液のよう
な被覆緩衝液に使用により促進される）によって固体担
体上に固定化する。あるいは、５−ＤＨＴ／蛋白質複合
体を標準的技術を用いる反応性側鎖によって固体担体に
結合する。
固定化する別の方法はリンカーによるものである。頻繁
に採用されるリンカーは蛋白質である。この目的のため
に好適な蛋白質はアビジンである。蛋白質に５−ジヒド
ロテストステロンを結合する方法に頻繁に採用される方
法の一つは当業界ではよく公知なクロスリンカーを使用
する５−ジヒドロテストステロンのアビジンへの結合を
採用する。このようなクロスリンカー試薬は１７位にあ
るヒドロキシと蛋白質内反応性アミノ基とを結合する。
好適なクロスリンカー手法はＮ−ヒドロキシスルホサク
シンイミド強化ＥＤＣ［１−エチル−３−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）カルボジイミド］操作法を採用す
る。Ｊ．Ｖ．Ｓｔａｒｏｓなど、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
・Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１５６：２２０〜２２
２。結合した５−ＤＨＴ／蛋白質複合体を次に親水的な
相互作用（ｐＨ９．６の炭酸塩−重炭酸塩緩衝液のよう
な被覆緩衝液に使用により促進される）によって固体担
体上に固定化する。あるいは、５−ＤＨＴ／蛋白質複合
体を標準的技術を用いる反応性側鎖によって固体担体に
結合する。
【００１６】５−ジヒドロテストステロン／リンカー複
合体は担体表面と直接的または間接的に結合することが
できる。標的を結合する間接的方法にはリガンド／受容
体反応を採用する。リガンドを担体表面に結合する。標
的５−ジヒドロテストステロンと共有結合的に結合した
受容体を次に容器に導入する。次にリガンド／受容体相
互作用が５−ジヒドロテストステロンを担体表面に結合
する役目を果たす。好適なリガンド／受容体の対はビオ
チンとストレプトアビジン、ビオチンとアビジンおよび
糖類とレクチン類を含む。リガンド／受容体の対として
のビオチンとアビジンまたはビオチンとストレプトアビ
ジンの使用は、それらの極端に高い親和性相互作用（Ｋ
d＝１０-15）のために大変好適である。アビジンは分子
量各１５０００ダルトンを持つ４個の同じサブユニット
を含むテトラマーとして天然に存在するグリコプロテイ
ンである。これは卵白から容易に単離される。たとえ
ば、Ｍ．ＷｉｌｃｈｅｋおよびＥ．Ａ．Ｂａｙｅｒ、Ａ
ｎａｌｙｔｉｃａｌ・Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１７
１：１〜３２（１９８８）およびその中の参考文献参
照。この発明に特に好適な態様は卵白アビジンの代わり
にストレプトアビジンを採用する。ストレプトアビジン
はいくつかの理由からしばしばアビジンより好まれる。
ストレプトマイセス種の培養濾液から単離されるストレ
プトアビジンは炭水化物部分を持たない点およびアビジ
ンのｐＩ値１０．０と比較してｐＩ値５．０を持つ点で
アビジンとは相違する。これは炭水化物の存在および高
ｐＩ値が非特異的結合を増加できる点で重要である。卵
白アビジンの脱グリコシル化体もバックグラウンド結合
値の低下に用いうる。Ｙ．Ｈｉｌｌｅｒなど、Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａｌ・Ｊｏｕｒｎａｌ，２４８：１６７〜１
７１（１９８７）。
合体は担体表面と直接的または間接的に結合することが
できる。標的を結合する間接的方法にはリガンド／受容
体反応を採用する。リガンドを担体表面に結合する。標
的５−ジヒドロテストステロンと共有結合的に結合した
受容体を次に容器に導入する。次にリガンド／受容体相
互作用が５−ジヒドロテストステロンを担体表面に結合
する役目を果たす。好適なリガンド／受容体の対はビオ
チンとストレプトアビジン、ビオチンとアビジンおよび
糖類とレクチン類を含む。リガンド／受容体の対として
のビオチンとアビジンまたはビオチンとストレプトアビ
ジンの使用は、それらの極端に高い親和性相互作用（Ｋ
d＝１０-15）のために大変好適である。アビジンは分子
量各１５０００ダルトンを持つ４個の同じサブユニット
を含むテトラマーとして天然に存在するグリコプロテイ
ンである。これは卵白から容易に単離される。たとえ
ば、Ｍ．ＷｉｌｃｈｅｋおよびＥ．Ａ．Ｂａｙｅｒ、Ａ
ｎａｌｙｔｉｃａｌ・Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１７
１：１〜３２（１９８８）およびその中の参考文献参
照。この発明に特に好適な態様は卵白アビジンの代わり
にストレプトアビジンを採用する。ストレプトアビジン
はいくつかの理由からしばしばアビジンより好まれる。
ストレプトマイセス種の培養濾液から単離されるストレ
プトアビジンは炭水化物部分を持たない点およびアビジ
ンのｐＩ値１０．０と比較してｐＩ値５．０を持つ点で
アビジンとは相違する。これは炭水化物の存在および高
ｐＩ値が非特異的結合を増加できる点で重要である。卵
白アビジンの脱グリコシル化体もバックグラウンド結合
値の低下に用いうる。Ｙ．Ｈｉｌｌｅｒなど、Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａｌ・Ｊｏｕｒｎａｌ，２４８：１６７〜１
７１（１９８７）。
【００１７】現発明の抗体は検出できるシグナルを発生
することが可能である。採用する検出可能なシグナルの
型は実験者の裁量に委されている。このシグナルは色素
原、螢光、放射能、電気的または磁気的であることがで
きる。好適な態様において、検出可能なシグナルは分光
学的技術により検出される。特に好適な態様において、
酵素を抗体にリンクする。酵素をリンクした抗体は５−
ジヒドロテストステロンに特異的な抗体か、または抗−
５−ジヒドロテストステロン抗体に特異的な第２次抗体
か、のどちらかであることができる。例として、酵素ア
ルカリホスファターゼ（ＥＣ３．１．３．１）は反応性
チオール基を含む抗体と容易に結合できる。一般に、ア
ルカリホスファターゼは４−（Ｎ−マレインイミドメチ
ル）シクロヘキサン−１−カルボン酸−Ｎ−ヒドロキシ
サクシンイミドエステルのようなヘテロ双官能クロスリ
ンカーを経て抗体に結合する。Ｓ．Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ
など、Ｊｏｕｒｎａｌ・ｏｆ・Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ，９２：１４１３（１９８２）。
することが可能である。採用する検出可能なシグナルの
型は実験者の裁量に委されている。このシグナルは色素
原、螢光、放射能、電気的または磁気的であることがで
きる。好適な態様において、検出可能なシグナルは分光
学的技術により検出される。特に好適な態様において、
酵素を抗体にリンクする。酵素をリンクした抗体は５−
ジヒドロテストステロンに特異的な抗体か、または抗−
５−ジヒドロテストステロン抗体に特異的な第２次抗体
か、のどちらかであることができる。例として、酵素ア
ルカリホスファターゼ（ＥＣ３．１．３．１）は反応性
チオール基を含む抗体と容易に結合できる。一般に、ア
ルカリホスファターゼは４−（Ｎ−マレインイミドメチ
ル）シクロヘキサン−１−カルボン酸−Ｎ−ヒドロキシ
サクシンイミドエステルのようなヘテロ双官能クロスリ
ンカーを経て抗体に結合する。Ｓ．Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ
など、Ｊｏｕｒｎａｌ・ｏｆ・Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ，９２：１４１３（１９８２）。
【００１８】アルカリホスファターゼではｐ−ニトロフ
ェニルホスフェートのような色素原基質の添加によって
シグナルが発生する。ｐ−ニトロフェニルホスフェート
の加水分解はｐ−ニトロフェノール基を放出し、４０５
ｎｍでの吸光度（Ａ405）の増加と黄色の出現をもたら
す。色素原シグナルを発生することが可能な好適な酵素
の他の例は：ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β
−Ｄ−グルクロニダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、
６−ホスホ−β−Ｄ−ガラクトシド−６−ホスホガラク
トヒドロラーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−
グルコシダーゼ、α−アミラーゼ、α−グルコシダー
ゼ、ニューラミナダーゼ、ブチレートエステラーゼ、リ
パーゼ、酸ホスファターゼ、ピログルタミルアミノペプ
チダーゼ、Ｌ−アラニンアミノペプチダーゼ、アリール
アミノペプチダーゼ、コアグロース、ウレアーゼ、ルシ
フェラーゼ、グルコースオキシダーゼおよび他のペルオ
キシダーゼである。採用する基質ならびに吸光度を測定
する波長はシグナルの発生に用いる特定の酵素により決
定される。採用する酵素の型は検定系の構成により決ま
りうる。例えば、ペプチダーゼの使用は抗体１個または
それ以上、５−ジヒドロテストステロンを担体に結合す
るリンカーまたは第二の抗体を分解するので賢明でな
い。
ェニルホスフェートのような色素原基質の添加によって
シグナルが発生する。ｐ−ニトロフェニルホスフェート
の加水分解はｐ−ニトロフェノール基を放出し、４０５
ｎｍでの吸光度（Ａ405）の増加と黄色の出現をもたら
す。色素原シグナルを発生することが可能な好適な酵素
の他の例は：ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β
−Ｄ−グルクロニダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、
６−ホスホ−β−Ｄ−ガラクトシド−６−ホスホガラク
トヒドロラーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−
グルコシダーゼ、α−アミラーゼ、α−グルコシダー
ゼ、ニューラミナダーゼ、ブチレートエステラーゼ、リ
パーゼ、酸ホスファターゼ、ピログルタミルアミノペプ
チダーゼ、Ｌ−アラニンアミノペプチダーゼ、アリール
アミノペプチダーゼ、コアグロース、ウレアーゼ、ルシ
フェラーゼ、グルコースオキシダーゼおよび他のペルオ
キシダーゼである。採用する基質ならびに吸光度を測定
する波長はシグナルの発生に用いる特定の酵素により決
定される。採用する酵素の型は検定系の構成により決ま
りうる。例えば、ペプチダーゼの使用は抗体１個または
それ以上、５−ジヒドロテストステロンを担体に結合す
るリンカーまたは第二の抗体を分解するので賢明でな
い。
【００１９】シグナルを発生する他の好適な方法は螢光
原基質および放射能シグナルの使用を含む。抗体に結合
（直接または間接に）された螢光原基質は存在する抗体
を定量化する迅速な方法を提供する。螢光原基質の例は
フルオレッセインイソチオシアネート、テキサス赤、ロ
ダミンイソチオシアネート、スルホロダミン、ルシフェ
ラーゼ、エオシンイソチオシアネート、ダンシルクロラ
イド、トリフルオロメチルクマリン、フタルジアルデヒ
ド、キノリジノ−置換フルオレッセインイソチオシアネ
ートおよびテトラメチルロダミンイソチオシアネートを
含む。フルオロクロームは活性チオール、ヒドロキシま
たはカルボニル基の利点を用いて種々の方法で抗体に導
入することができる。螢光の迅速な定量化は商業的に供
給されているマイクロタイター板での測定が可能な螢光
光度計（分光螢光光度計）を用いて行うことができる。
放出光の波長および受光部のフィルターは採用する特定
の螢光原基質に依存する。インジウム、鉛、レニウム、
テクニシウム、ヨード、ガリウム、ルテチウム、アスタ
チン、ビスマス、ホウ素、白金、銀、コバルト、イッテ
ルビウム、ルテニウム、水銀、スカンジウム、炭素、臭
素、水素、燐、硫黄およびイットリウムのような元素の
同位体は本発明の抗体を放射能標識するために用いう
る。シグナル化部分として用いる放射性同位元素の好適
な例は、燐−３２、ヨード−１２５、炭素−１４、トリ
チウム、インジウム−１１１、ヨード−１３１および硫
黄−３５である。抗体に放射能シグナルを結合する方法
は採用する放射性同位元素および抗体とシグナル化部分
とに直接または間接結合があるか否かに依存する。例え
ば、抗体のような蛋白質のヨード−１２５標識は当業界
でよく知られている。たとえば、Ｄａｖｉｄなど、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３：１０１４〜１０２１（１
９７４）参照。
原基質および放射能シグナルの使用を含む。抗体に結合
（直接または間接に）された螢光原基質は存在する抗体
を定量化する迅速な方法を提供する。螢光原基質の例は
フルオレッセインイソチオシアネート、テキサス赤、ロ
ダミンイソチオシアネート、スルホロダミン、ルシフェ
ラーゼ、エオシンイソチオシアネート、ダンシルクロラ
イド、トリフルオロメチルクマリン、フタルジアルデヒ
ド、キノリジノ−置換フルオレッセインイソチオシアネ
ートおよびテトラメチルロダミンイソチオシアネートを
含む。フルオロクロームは活性チオール、ヒドロキシま
たはカルボニル基の利点を用いて種々の方法で抗体に導
入することができる。螢光の迅速な定量化は商業的に供
給されているマイクロタイター板での測定が可能な螢光
光度計（分光螢光光度計）を用いて行うことができる。
放出光の波長および受光部のフィルターは採用する特定
の螢光原基質に依存する。インジウム、鉛、レニウム、
テクニシウム、ヨード、ガリウム、ルテチウム、アスタ
チン、ビスマス、ホウ素、白金、銀、コバルト、イッテ
ルビウム、ルテニウム、水銀、スカンジウム、炭素、臭
素、水素、燐、硫黄およびイットリウムのような元素の
同位体は本発明の抗体を放射能標識するために用いう
る。シグナル化部分として用いる放射性同位元素の好適
な例は、燐−３２、ヨード−１２５、炭素−１４、トリ
チウム、インジウム−１１１、ヨード−１３１および硫
黄−３５である。抗体に放射能シグナルを結合する方法
は採用する放射性同位元素および抗体とシグナル化部分
とに直接または間接結合があるか否かに依存する。例え
ば、抗体のような蛋白質のヨード−１２５標識は当業界
でよく知られている。たとえば、Ｄａｖｉｄなど、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３：１０１４〜１０２１（１
９７４）参照。
【００２０】本発明の検定で必要な段階の一つは非結合
抗体の除去を含む。この課題を達成する正常な方法は容
器系を生理学的食塩水で繰返し洗浄した後に、食塩水を
吸引して除去することによる。
抗体の除去を含む。この課題を達成する正常な方法は容
器系を生理学的食塩水で繰返し洗浄した後に、食塩水を
吸引して除去することによる。
【００２１】本発明の検定は試料、特に生物学的試料内
の５−ジヒドロテストステロンを定量するのに殊に価値
がある。そのような生物学的体液の例は：血液または血
清、脳脊髄液、リンパ液、唾液および尿を含む。この発
明の最も好適な態様においては、尿を生物学的体液とし
て用いる。これらの検定は５−α−レダクターゼ阻害剤
の効力ならびにそのような阻害剤を摂取している患者の
適応性を観察するのに特別の価値がある。
の５−ジヒドロテストステロンを定量するのに殊に価値
がある。そのような生物学的体液の例は：血液または血
清、脳脊髄液、リンパ液、唾液および尿を含む。この発
明の最も好適な態様においては、尿を生物学的体液とし
て用いる。これらの検定は５−α−レダクターゼ阻害剤
の効力ならびにそのような阻害剤を摂取している患者の
適応性を観察するのに特別の価値がある。
【００２２】
【実施例】下記の実施例で本発明をさらに説明する。採
用する物質、種および条件は本発明を更に説明すること
を意図するもので、その合理的範囲の限定を意図するも
のではない。
用する物質、種および条件は本発明を更に説明すること
を意図するもので、その合理的範囲の限定を意図するも
のではない。
【００２３】実施例１ ＭｏＡｂ２７６−１抗体の産生 ＭｏＡｂ２７６−１抗体を産生する凍結ハイブリドーマ
のバイアルはメリーランド州、ロックビルにあるアメリ
カン・タイプ・カルチャー・コレクションから受託番号
ＨＢ１１４１０の下に入手することができる。急速で均
一な解凍を促進するためバイアルを廻しながら、３７℃
の水浴内でバイアル内容物を解凍することによって健常
な細胞を回収する。細胞懸濁液を平衡塩溶液（ＢＳＳ）
（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）で１：２に希釈し、凍結培地か
ら分配するために血清層を通して２００×ｇで遠心分離
する。細胞ペレットの上にある物質を吸引した後、細胞
を取り、当分野で通常行うように血清および抗生物質を
補充した組織培養培地中に希釈して標準的な条件（３７
℃および５％二酸化炭素）で細胞培養を樹立する。細胞
培養の間、中庸な変化にはよく耐えられるけれども、細
胞を濃度１×１０5〜１×１０7細胞／ｍＬに維持するの
が望ましい。ＭｏＡｂ２７６−１抗体は組織培養からミ
リリットル当りマイクログラムの量で回収しうる。ある
いは、抗体産生は囓歯目の中で腹水腫瘍としてのハイブ
リドーマを樹立することによってさらに生産性を求めう
る。抗体の産生および回収方法はＧａｆｌｒｅおよびＭ
ｉｌｓｔｅｉｎによって、「Ｍｅｔｈｏｄｓ・ｉｎ・Ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」、７３Ｂ巻（ＬａｎｇｏｎｅとＶ
ａｎ・Ｖｕｎａｋｉｓ編、１９８１）、４３〜４５頁に
詳細に記載されている。
のバイアルはメリーランド州、ロックビルにあるアメリ
カン・タイプ・カルチャー・コレクションから受託番号
ＨＢ１１４１０の下に入手することができる。急速で均
一な解凍を促進するためバイアルを廻しながら、３７℃
の水浴内でバイアル内容物を解凍することによって健常
な細胞を回収する。細胞懸濁液を平衡塩溶液（ＢＳＳ）
（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）で１：２に希釈し、凍結培地か
ら分配するために血清層を通して２００×ｇで遠心分離
する。細胞ペレットの上にある物質を吸引した後、細胞
を取り、当分野で通常行うように血清および抗生物質を
補充した組織培養培地中に希釈して標準的な条件（３７
℃および５％二酸化炭素）で細胞培養を樹立する。細胞
培養の間、中庸な変化にはよく耐えられるけれども、細
胞を濃度１×１０5〜１×１０7細胞／ｍＬに維持するの
が望ましい。ＭｏＡｂ２７６−１抗体は組織培養からミ
リリットル当りマイクログラムの量で回収しうる。ある
いは、抗体産生は囓歯目の中で腹水腫瘍としてのハイブ
リドーマを樹立することによってさらに生産性を求めう
る。抗体の産生および回収方法はＧａｆｌｒｅおよびＭ
ｉｌｓｔｅｉｎによって、「Ｍｅｔｈｏｄｓ・ｉｎ・Ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」、７３Ｂ巻（ＬａｎｇｏｎｅとＶ
ａｎ・Ｖｕｎａｋｉｓ編、１９８１）、４３〜４５頁に
詳細に記載されている。
【００２４】実施例２ ＭｏＡｂ２７６−１のＦ（ａｂ’）2断片の産生 ＭｏＡｂ２７６−１のＦ（ａｂ’）2断片はペプシン１
２．６ｍｇ／ｍＬを含むペプシン溶液２．４ｍＬを生理
学的に緩衝した食塩水２７０ｍＬ中のＭｏＡｂ２７６−
１抗体１．５ｇに添加して産生する。混合物を３７℃に
約２から３時間維持し、次にトリエタノールアミンの添
加により反応を停止させる。生成物を次に０．１５Ｍ−
酢酸ナトリウムで溶出するセファロース・ファスト・フ
ロウ（商標）系上でのクロマトグラフィーにより濃縮す
る。Ｆ（ａｂ’）2を含む画分を集め、透析により濃縮
してＭｏＡｂ２７６−１抗体のＦ（ａｂ’）2断片９９
２ｍｇを含む生成物溶液１００ｍＬを得る。
２．６ｍｇ／ｍＬを含むペプシン溶液２．４ｍＬを生理
学的に緩衝した食塩水２７０ｍＬ中のＭｏＡｂ２７６−
１抗体１．５ｇに添加して産生する。混合物を３７℃に
約２から３時間維持し、次にトリエタノールアミンの添
加により反応を停止させる。生成物を次に０．１５Ｍ−
酢酸ナトリウムで溶出するセファロース・ファスト・フ
ロウ（商標）系上でのクロマトグラフィーにより濃縮す
る。Ｆ（ａｂ’）2を含む画分を集め、透析により濃縮
してＭｏＡｂ２７６−１抗体のＦ（ａｂ’）2断片９９
２ｍｇを含む生成物溶液１００ｍＬを得る。
【００２５】実施例３ ５−α−レダクターゼの活性を測定するための検定法 ９６穴マイクロタイタープレートのウェル中でテストス
テロン１．２５μｇ／ｍＬ溶液２０μＬ、燐酸カリウム
緩衝液（ｐＨ６．５）１５０μＬ、雌ラット肝調製物か
らの５−α−レダクターゼ酵素（０．８６μｇ）２０μ
Ｌおよびβ−ニコチンアミド・アデニン・ジヌクレオチ
ド・ホスフェートの還元型（０．７７ｍｇ／ｍＬ溶液）
１０μＬを混合した。この反応混合物を３７℃で２０分
間インキュベートした。反応混合物を次に８０℃で１０
分間インキュベートして酵素を不活化した。次に前記反
応混合物の１００マイクロリットルをアビジン−５−ジ
ヒドロテストステロンであらかじめ被覆しておいたウェ
ルに移した。さらに、反応混合物を順次希釈し、これら
の希釈液各１００μＬを別々のウェルに添加した。各ウ
ェルにＭｏＡｂ２７６−１を１００μＬ（０．３５μ
ｇ）添加した。このプレートを次に３７℃で２時間イン
キュベートした。このインキュベーション期間後、プレ
ートを燐酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で４回洗浄した。洗浄
後、各ウェルに抗−マウス抗体／アルカリホスファター
ゼ複合体２００μＬを添加した。これを次に３７℃で１
時間インキュベートした。インキュベーション後、各ウ
ェルをＰＢＳで４回洗浄した。次に各ウェルにｐ−ニト
ロフェニルホスフェート２００μＬを添加した。この反
応物を次に３７℃で１時間インキュベートした。各ウェ
ルを分光光度計により測定を行い、４１０ｎｍを観測し
た。この測定は阻害剤がない時の５−α−レダクターゼ
活性のベースライン活性を提供した。
テロン１．２５μｇ／ｍＬ溶液２０μＬ、燐酸カリウム
緩衝液（ｐＨ６．５）１５０μＬ、雌ラット肝調製物か
らの５−α−レダクターゼ酵素（０．８６μｇ）２０μ
Ｌおよびβ−ニコチンアミド・アデニン・ジヌクレオチ
ド・ホスフェートの還元型（０．７７ｍｇ／ｍＬ溶液）
１０μＬを混合した。この反応混合物を３７℃で２０分
間インキュベートした。反応混合物を次に８０℃で１０
分間インキュベートして酵素を不活化した。次に前記反
応混合物の１００マイクロリットルをアビジン−５−ジ
ヒドロテストステロンであらかじめ被覆しておいたウェ
ルに移した。さらに、反応混合物を順次希釈し、これら
の希釈液各１００μＬを別々のウェルに添加した。各ウ
ェルにＭｏＡｂ２７６−１を１００μＬ（０．３５μ
ｇ）添加した。このプレートを次に３７℃で２時間イン
キュベートした。このインキュベーション期間後、プレ
ートを燐酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で４回洗浄した。洗浄
後、各ウェルに抗−マウス抗体／アルカリホスファター
ゼ複合体２００μＬを添加した。これを次に３７℃で１
時間インキュベートした。インキュベーション後、各ウ
ェルをＰＢＳで４回洗浄した。次に各ウェルにｐ−ニト
ロフェニルホスフェート２００μＬを添加した。この反
応物を次に３７℃で１時間インキュベートした。各ウェ
ルを分光光度計により測定を行い、４１０ｎｍを観測し
た。この測定は阻害剤がない時の５−α−レダクターゼ
活性のベースライン活性を提供した。
【００２６】実施例４ ５−α−レダクターゼ阻害剤の効果測定のための検定法 各ウェルにあるテストステロンと酵素所定量との混合物
に種々の量のトランス−ｄｌ−４，８−ジメチル−１，
２，３，４，４ａ，５，６，１０ｂ−オクタヒドロベン
ゾ［ｆ］キノリン−３−オン化合物
に種々の量のトランス−ｄｌ−４，８−ジメチル−１，
２，３，４，４ａ，５，６，１０ｂ−オクタヒドロベン
ゾ［ｆ］キノリン−３−オン化合物
【化２】 を添加することを除いて実施例３のと同様な検定を行っ
た。この化合物はここに参考のために引用する１９９３
年８月２４日に発行された米国特許第５２３９０７５号
に記載のようにして製造した。異なる濃度の阻害剤につ
いて測定したＡ410値を次に阻害剤を添加しなかった反
応ウェルと比較した。この実験の一つにより、この化合
物がＩＣ100値０．３ｍＭを持つことが判明した。
た。この化合物はここに参考のために引用する１９９３
年８月２４日に発行された米国特許第５２３９０７５号
に記載のようにして製造した。異なる濃度の阻害剤につ
いて測定したＡ410値を次に阻害剤を添加しなかった反
応ウェルと比較した。この実験の一つにより、この化合
物がＩＣ100値０．３ｍＭを持つことが判明した。
【００２７】実施例５ 試料中の５−ジヒドロテストステロン量測定のための検
定法 ９６穴、高結合性、平底マイクロタイタープレートの各
ウェルをアビジン／５−ジヒドロテストステロン複合体
１５μｇ／ｍＬの０．０５Ｍ−炭酸塩−重炭酸塩緩衝液
（ｐＨ９．６）溶液２００μＬの添加により、予備的に
被覆する。この予備被覆反応物を４℃で一夜インキュベ
ートする。プレートを次に蒸留水で一度洗浄して非結合
アビジン／５−ＤＨＴ複合体を除去する。次に各ウェル
にＭｏＡｂ２７６−１を１００μＬ（０．３５μｇ）添
加する。このプレートを次に３７℃で２時間インキュベ
ートする。インキュベーション後に、各ウェルを燐酸緩
衝化食塩水で４回洗浄した後に吸引することによって非
結合抗体を除去する。洗浄後、抗−マウス抗体／アルカ
リホスファターゼ複合体２００μＬを各ウェルに添加す
る。これを次に３７℃で１時間インキュベートする。イ
ンキュベーション後、各ウェルをＰＢＳで４回洗浄す
る。次に各ウェルにｐ−ニトロフェニルホスフェート２
００μＬを添加する。この反応物を次に３７℃で１時間
インキュベートした。各ウェルの分光光度計による測定
を行い、４１０ｎｍを観測する。尿試料を添加しなかっ
た対照と比較して減少したＡ410値は尿試料中の５−ジ
ヒドロテストステロンの量を示す。
定法 ９６穴、高結合性、平底マイクロタイタープレートの各
ウェルをアビジン／５−ジヒドロテストステロン複合体
１５μｇ／ｍＬの０．０５Ｍ−炭酸塩−重炭酸塩緩衝液
（ｐＨ９．６）溶液２００μＬの添加により、予備的に
被覆する。この予備被覆反応物を４℃で一夜インキュベ
ートする。プレートを次に蒸留水で一度洗浄して非結合
アビジン／５−ＤＨＴ複合体を除去する。次に各ウェル
にＭｏＡｂ２７６−１を１００μＬ（０．３５μｇ）添
加する。このプレートを次に３７℃で２時間インキュベ
ートする。インキュベーション後に、各ウェルを燐酸緩
衝化食塩水で４回洗浄した後に吸引することによって非
結合抗体を除去する。洗浄後、抗−マウス抗体／アルカ
リホスファターゼ複合体２００μＬを各ウェルに添加す
る。これを次に３７℃で１時間インキュベートする。イ
ンキュベーション後、各ウェルをＰＢＳで４回洗浄す
る。次に各ウェルにｐ−ニトロフェニルホスフェート２
００μＬを添加する。この反応物を次に３７℃で１時間
インキュベートした。各ウェルの分光光度計による測定
を行い、４１０ｎｍを観測する。尿試料を添加しなかっ
た対照と比較して減少したＡ410値は尿試料中の５−ジ
ヒドロテストステロンの量を示す。
【００２８】培養物の寄託 特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペ
スト条約の規定に則って、次の培養物を２０８５２メリ
ーランド州、ロックビルにあるアメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）の永久培養物コレ
クションに寄託してある。 寄託物 ＝ ハイブリドーマ２７６−１ 寄託日 ＝ １９９３年７月２０日 受託番号 ＝ ＡＴＣＣ ＨＢ１１４１０
スト条約の規定に則って、次の培養物を２０８５２メリ
ーランド州、ロックビルにあるアメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）の永久培養物コレ
クションに寄託してある。 寄託物 ＝ ハイブリドーマ２７６−１ 寄託日 ＝ １９９３年７月２０日 受託番号 ＝ ＡＴＣＣ ＨＢ１１４１０
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/08 9161−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ａ //(Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 レイモンド・チェ−フォン・ヤオ アメリカ合衆国46033インディアナ州カー メル、ウッドゲイト・ドライブ1189番
Claims (5)
- 【請求項１】 ５−ジヒドロテストステロンに特異的な
反応性のあるモノクロナール抗体。 - 【請求項２】 ＭｏＡｂ２７６−１である請求項３のモ
ノクロナール抗体またはその誘導体。 - 【請求項３】 ａ．容器系からなるかまたはそれに含ま
れている固体担体に５−ジヒドロテストステロンを固定
すること； ｂ．試料の一部と、検出できるシグナルを発生し得る請
求項１および２のいずれか一つに請求されているモノク
ロナール抗体の所定量とを混合すること； ｃ．容器内で試料とモノクロナール抗体との混合物所定
量をインキュベートすること； ｄ．非結合抗体を除去すること； ｅ．該検出可能なシグナルを発生させること；および ｆ．試料を添加しなかった対照と比較して該検出可能な
シグナルの減少を測定すること；からなる試料中の５−
ジヒドロテストステロン量を測定する方法。 - 【請求項４】 ａ．精製５−α−レダクターゼとニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートとの所定
量を容器系に添加すること； ｂ．５−α−レダクターゼ酵素と阻害剤とに第一インキ
ュベーションを行うこと； ｃ．５−α−レダクターゼ酵素と阻害剤との混合物と共
にテストステロン既知量をインキュベートすること； ｄ．（ｉ）容器系からなるかまたはそれに含まれている
固体担体に５−ジヒドロテストステロンの所定量を固定
すること； （ｉｉ）５−α−レダクターゼ酵素と阻害剤との混合物
適当量および検出できるシグナルを発生することが可能
な請求項１および２のいずれか一つに請求されているモ
ノクロナール抗体所定量とを混合すること； （ｉｉｉ）容器内で５−α−レダクターゼ酵素、阻害剤
およびモノクロナール抗体の混合物所定量をインキュベ
ートすること； （ｉｖ）非結合抗体を除去すること；および （ｖ）該検出可能なシグナルを発生させること；によっ
て反応混合物中のジヒドロテストステロンの量を測定す
ること；および ｅ．５−α−レダクターゼ酵素阻害剤無添加の対照と比
較して該検出可能なシグナルの減少を測定することから
なる５−α−レダクターゼ酵素阻害剤の効果を測定する
方法。 - 【請求項５】 ＡＴＣＣ・ＨＢ・１１４１０であるハイ
ブリドーマ。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US11179593A | 1993-08-25 | 1993-08-25 | |
| US111795 | 1993-08-25 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07165798A true JPH07165798A (ja) | 1995-06-27 |
Family
ID=22340487
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6198363A Withdrawn JPH07165798A (ja) | 1993-08-25 | 1994-08-23 | ５−ジヒドロテストステロン特異性モノクロナール抗体 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0640690A1 (ja) |
| JP (1) | JPH07165798A (ja) |
| CA (1) | CA2130386A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITFI20110140A1 (it) * | 2011-07-18 | 2013-01-19 | In Fieri S R L | Composizione ad uso topico per il trattamento delle alopecie |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3114362C2 (de) * | 1980-04-11 | 1983-08-18 | Toshiyuki Prof. Nara Hamaoka | Verfahren zur Herstellung eines Antikörpers bzw. Antiserums, Verwendung dieses Verfahrens zur Gewinnung von Säugetierzellen, welche fähig sind, einen solchen Antikörper zu erzeugen und Verwendung des so hergestellten Antikörpers bzw. Antiserums zur Immunoprüfung |
| US5137882A (en) * | 1990-06-11 | 1992-08-11 | Holt Dennis A | Steroidal 3-acetic acid derivatives as 5-alpha-reductase inhibitors |
-
1994
- 1994-08-18 CA CA 2130386 patent/CA2130386A1/en not_active Abandoned
- 1994-08-19 EP EP94306123A patent/EP0640690A1/en not_active Withdrawn
- 1994-08-23 JP JP6198363A patent/JPH07165798A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2130386A1 (en) | 1995-02-26 |
| EP0640690A1 (en) | 1995-03-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1069124A (zh) | 新的抗体及其使用方法 | |
| CA2660947A1 (en) | Monoclonal antibody to soluble lox-1 | |
| FI83669C (fi) | Foerfarande foer specifik bestaemning av pankreas -amylas. | |
| US7833726B2 (en) | Antibody for assaying ADAMTS13 activity and method for assaying the activity | |
| JPH0943237A (ja) | 抗ｐｉｖｋａ−２抗体産生ハイブリドーマ及び免疫学的測定方法 | |
| JPH10226700A (ja) | Ｍｉａの検出のためのイムノアッセイ | |
| US20080305499A1 (en) | Anti-Synoviolin Antibody | |
| JPH07165798A (ja) | ５−ジヒドロテストステロン特異性モノクロナール抗体 | |
| US6764827B1 (en) | Anti-human medullasin monoclonal antibody process for producing the same and immunoassay using the same | |
| CA2355893C (en) | Antiuracil monoclonal antibody | |
| JP5840274B2 (ja) | ストロムライシン１と特異的に反応するモノクローナル抗体 | |
| JPH05252986A (ja) | 異種二機能抗体およびその利用法 | |
| JP2518602B2 (ja) | ヒトプロテインｓに対するモノクロ―ナル抗体を用いた免疫学的測定試薬及びキット | |
| JP3433245B2 (ja) | ビタミンｂ１２を決定するためのイムノアッセイ、ならびにそのための試薬およびキット | |
| JP2516011B2 (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| EP1106701A1 (en) | Monoclonal antibody against canine trypsin | |
| JPH11507014A (ja) | 標識として用いる酵素の反応生成物に向けられた抗体を使用する免疫学的検定 | |
| JP3036545B2 (ja) | モノクローナル抗体とこれを産生するハイブリドーマ細胞株、およびこれを用いる免疫学的測定法 | |
| JP2532330B2 (ja) | 乳酸菌に対するモノクロ―ナル抗体およびこれを用いた乳酸菌の検出法 | |
| JPH10512369A (ja) | 癌診断薬としてのａ蛋白質 | |
| WO1996018102A1 (fr) | Methode de mesure de la concentration en proteines de fixation de fk506 | |
| JPH0346116B2 (ja) | ||
| JP2000060551A (ja) | 抗プリオン抗体 | |
| JPH1048217A (ja) | プロテインキナーゼのリン酸化酵素活性の測定法及び測定キット | |
| JPH01262797A (ja) | 抗ヒト膵リパーゼモノクローナル抗体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20011106 |