CS238248B1 - Mouse lymphocytic hybridoma IMG CZAS MPH-01, producing anti-mycoplasma antibody Mycoplasma hyorhinis - Google Patents
Mouse lymphocytic hybridoma IMG CZAS MPH-01, producing anti-mycoplasma antibody Mycoplasma hyorhinis Download PDFInfo
- Publication number
- CS238248B1 CS238248B1 CS340784A CS340784A CS238248B1 CS 238248 B1 CS238248 B1 CS 238248B1 CS 340784 A CS340784 A CS 340784A CS 340784 A CS340784 A CS 340784A CS 238248 B1 CS238248 B1 CS 238248B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- mycoplasma
- mph
- hybridoma
- antibody
- hyorhinis
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Vynález se týká myšího lymfocytárního hybridomu, produkujícího protilátku třídy IgGj proti prasečím mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis, uloženého ve sbírce, hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením MPH-01. Monoklonální protilátka hybridomu MPH-01 je vhodná pro identifikaci izolovaných kmenů mykolpazmat v klinické veterinární diagnostice, dále pro identifikaci izolovaných kmenů mykoplazmat. kontaminujících buněčné kultury, což muže vysvětlit případný zdroj kontaminace a také pro případnou dekontaminaci infikovaných buněčných kultur.The invention relates to a mouse lymphocyte hybridoma, producing an IgG1 antibody against porcine mycoplasmas of the species Mycoplasma hyorhinis, stored in the hybridoma collection of the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences under the designation MPH-01. The monoclonal antibody of the hybridoma MPH-01 is suitable for the identification of isolated strains of mycoplasmas in clinical veterinary diagnostics, as well as for the identification of isolated strains of mycoplasmas contaminating cell cultures, which can explain the possible source of contamination and also for the possible decontamination of infected cell cultures.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a myší slezinné buňky produkující protilátku proti mykoplazmatům druhu Mycoplasma hyorhinis, který je patogenní pro prasata a častým kontaminantem buněčných kultur.The invention relates to a novel hybridoma, i.e. a hybrid unicellular organism, constructed by fusing a mouse myeloma cell line P3-X63-Ag8.653 and a mouse spleen cell producing an antibody against Mycoplasma hyorhinis, which is pathogenic to pigs and a frequent contaminant of cell cultures.
Doposud se protilátky proti mykoplazmatům připravují hyperimunizací zvířat (nejčastěji králíků), a to injikováním přibližně 12 imunizačních dávek antigenu po dobu 2-3 měsíců, Sérum takto imunizovaných zvířat slouží jako zdroj protilátek užívaných zejména pro typizaci mykoplazmat. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má řadu nevýhod. Pro každou imunizaci a testování protilátkové aktivity je nutno použít antigen připravený náročným způsobem. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém organismu různé a neopakovatelné. Organismus vytváří protilátky proti celé řadě antigenů a antigenních míst a specificita sér mnohdy závisí na způsobu jejich absorbce a testování.To date, anti-mycoplasma antibodies have been prepared by hyperimmunizing animals (most commonly rabbits) by injecting approximately 12 immunization doses of antigen for 2-3 months. The serum of such immunized animals serves as a source of antibodies used primarily for typing mycoplasmas. This procedure, called conventional immunization, has a number of drawbacks. For each immunization and testing of antibody activity, a challenging antigen must be used. In the serum of immunized animals there is a heterogeneous mixture of antibodies, the spectrum of which is different and unrepeatable in each organism. The organism generates antibodies against a wide range of antigens and antigenic sites, and the specificity of sera often depends on how they are absorbed and tested.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a doposud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkující protilátku proti druhu Mycoplasma hyorhinis, který je uložen ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze, Vídeňská 1083, pod označením IMG CZAS MPH-01.The mentioned drawbacks of the above-mentioned and hitherto used procedure will be eliminated if a hybridoma producing an antibody against the species Mycoplasma hyorhinis, which is stored in the hybridoma collection of the Institute of Molecular Genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences, Vídeňská 1083, is available IMG CZAS MPH-01.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Kohler, G., Milstein, C.: Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity, Nátuře, 256:495-497, 1975; Kennett, R.H., McKearn, T.J., Bechtol, K.B. (eds.): Monoclonal antibodies, hybridomas: a new dimension in biological analysis, Plenům Press, New York and London, 1980). Pro fúzi byly použity buňky myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a buňky získané ze slezin myší kmene BALE/c imunizovaných buňkami myší teratokarcinomové linie F9, které byly infikovány Mycoplasma hyorhinis.The hybridoma was obtained by a method known in the literature (Kohler, G., Milstein, C .: Continuous Cultures of Fused Cells Secreting Antibody of Predefined Specificity, Nature, 256: 495-497, 1975; Kennett, RH, McKearn, TJ, Bechtol , KB (eds.): Monoclonal antibodies, hybridomas: a new dimension in biological analysis, Plenum Press, New York and London, 1980). P3-X63-Ag8.653 mouse myeloma cell lines and cells derived from the spleens of BALE / c mice immunized with F9 mouse teratocarcinoma cells infected with Mycoplasma hyorhinis were used for fusion.
Lymfocytární hybridom MPH-01 produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která reaguje s kmenyThe lymphocyte hybridoma MPH-01 produces a homogeneous antibody, a monoclonal antibody that reacts with strains
- 2 238 248 mykoplazmat, náležejícími do druhu Mycoplasma hyorhinis a nereaguje s dalšími druhy mykoplazmat. Hybridom MPH-01 je možno kultivovat in vitro v médiích určených pro savčí buňky a je adaptován pro růst v peritoneální dutině myší BALB/c.- 2 238 248 mycoplasmas belonging to the species Mycoplasma hyorhinis and do not react with other mycoplasma species. The MPH-01 hybridoma can be cultured in vitro in mammalian cell media and is adapted for growth in the peritoneal cavity of BALB / c mice.
Z konserv uchovávaných v tekutém dusíku je možné zahájit produkci protilátek, aniž by bylo nutné provádět imunizace, absorbce a testování sér. Monoklonélní protilátka produkovaná hybridomem MPH-01 je specifická pro druh o plasma hyorhinis a je prosta jakýchkoliv balastních protilátek.Antibody preservation can be initiated from canned products stored in liquid nitrogen without the need for immunization, absorption and serum testing. The monoclonal antibody produced by the hybridoma MPH-01 is specific for the plasma hyorhinis species and is free of any ballast antibodies.
Příklad:Example:
Za účelem pomnožení buněk hybridomu MPH-01 in vivo bylo aplikováno 10' buněk do peritoneální dutiny BALB/c myši. Aby došlo k větší produkci ascitické tekutiny, byla myš 14 dnů před aplikací hybridomových buněk ovlivněna olejem 2,6,10,14-tetramethylpentadecan (0,5 ml intraperitoneálně). Po 14 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a neprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkově bylo získáno 3 ml ascitické tekutiny.To multiply MPH-01 hybridoma cells in vivo, 10 'cells were injected into the peritoneal cavity of BALB / c mice. To increase production of ascites fluid, mice were treated with 2,6,10,14-tetramethylpentadecan oil (0.5 ml intraperitoneally) 14 days prior to hybridoma cell administration. After 14 days of hybridoma growth in the peritoneal cavity, the mouse was killed and unproduced ascites fluid was collected. A total of 3 ml of ascites fluid was obtained.
Monoklonální protilátka reagovala v nepřímém enzymoimunologickém testu s antigenem připraveným z Mycoplasma hyorhinis kmene CCM-M32 (izolovaným z plic prasete) a antigenem Mycoplasma hyorhinis kmene 100 (izolovaným z kultury myších teratokarcinomových buněk) až do ředění ascitické tekutiny 1 : 1,3 x 106. Protilátka přitom nereagovala s prototypovými antigeny druhu Mycoplasma arginini CCM-M43, Mycoplasma bovirhinis CCM-M22 a Mycoplasma bovigenitalium CCM-M62 ani v ředění 1 : 5 (viz tab. 1). Výsledky nepřímého radioimunologického a imunofluorescenčního testu prokázaly, že pomocí této protilátky lze bezpečně určit buňky kontaminované Mycoplasma hyorhinis (viz tab. 2).The monoclonal antibody reacted in an indirect enzymatic immunoassay with an antigen prepared from Mycoplasma hyorhinis strain CCM-M32 (isolated from pig lungs) and a Mycoplasma hyorhinis strain 100 antigen (isolated from mouse teratocarcinoma cell culture) until dilution of ascites fluid 1: 1.3 x 10 6 . The antibody did not react with prototype antigens of Mycoplasma arginini CCM-M43, Mycoplasma bovirhinis CCM-M22 and Mycoplasma bovigenitalium CCM-M62 even at a 1: 5 dilution (see Table 1). The results of an indirect radioimmunoassay and immunofluorescence assay have shown that cells contaminated with Mycoplasma hyorhinis can be safely identified with this antibody (see Table 2).
Buňky hybridomu MPH-01, které jsou morfologicky podobné buňkám rodičovské myeloidní linie, rostou jako polosuspenzní kultura. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí, doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3mM) a pyruvát sodný (ImM). Toto médium (označované jako H-MEMd, Ústav molekulárníMPH-01 hybridoma cells, which are morphologically similar to those of the parental myeloid lineage, grow as a semi-suspension culture. The basic culture medium is Eagle's minimum essential medium with Hanks salt mixture supplemented with non-essential amino acids, L-glutamine (3mM) and sodium pyruvate (ImM). This medium (referred to as H-MEMd, Institute of Molecular Chemistry)
- 3 238 248 genetiky ČSAV) je pro kultivaci hybridomu MPH-01 doplněno penicilinem, streptomycinem a teplotně inaktivovaným (56°C, min) bovinním sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané; 10%).- 3,238,248 genetics of the Czechoslovak Academy of Sciences) is supplemented with penicillin, streptomycin and temperature inactivated (56 ° C, min) bovine serum (Bioveta, Ivanovice na Hané; 10%) for cultivation of hybridoma MPH-01.
Hybridom je kultivován při 37°C. Střední generační čas jeThe hybridoma is cultured at 37 ° C. The mean generation time is
15,5 h; za 11 měsíců po sestrojení byl modální počet chromozomů 74. .Produkovaná monoklonální protilátka je imunoglobulin třídy IgG^, kappa.15.5 h; at 11 months post construction, the modal number of chromosomes was 74. The produced monoclonal antibody is an immunoglobulin of the IgG class, kappa.
Tab. 1. Reaktivita protilátek produkovaných hybridomemTab. 1. Reactivity of antibodies produced by hybridoma
MPH-01 s antigeny prototypových kmenů mykoplazmatMPH-01 with antigens of mycoplasma prototype strains
Antigen Ředění ascitické tekutiny dávající positivní reakci^Antigen Dilution of ascites fluid giving a positive reaction ^
Mycoplasma hyorhinis CCM-M32^ 1,3 x 10^Mycoplasma hyorhinis CCM-M32 1,3 1.3 x 10.
Mycoplasma arginini CCM-M43 <5Mycoplasma arginini CCM-M43 <5
Mycoplasma bovirhinis CGM-M22 <5Mycoplasma bovirhinis CGM-M22 <5
Mycoplasma bovigenitalium CCM-M62 <5 fiMycoplasma bovigenitalium CCM-M62 <5 fi
Mycoplasma hyorhinis 100J 1,3 x 10Mycoplasma hyorhinis 100 J 1.3 x 10
Byl použit nepřímý enzymoimunologický test, ve kterém ascitická tekutina z myši s rostoucím hybridomem MPH-01 byla naředěna geometrickou řadou a přidána k antigenu typových .kmenů mykoplasmat. Po inkubaci a odmytí nenavázané protilátky byla přidána peroxidázou značená protilátka králičí anti-myší IgG. Po inkubaci a odstranění nenavázané protilátky byla reakce vyhodnocována spektrofotometricky.An indirect enzyme immunoassay was used in which the ascitic fluid from a mouse with growing MPH-01 hybridoma was diluted in a geometric series and added to an antigen of mycoplasma type strains. After incubation and washing of unbound antibody, peroxidase-labeled rabbit anti-mouse IgG antibody was added. After incubation and removal of unbound antibody, the reaction was evaluated spectrophotometrically.
CCM-M - označení kmenů mykoplazmat uvedené v katalogu Československé sbírky mikroorganizmůCCM-M - designation of mycoplasma strains in the catalog of the Czechoslovak Collection of Microorganisms
Kmen Mycoplasma hyorhinis izolovaný z kultury myších teratokarcinomových buněk.Mycoplasma hyorhinis strain isolated from a mouse teratocarcinoma cell culture.
Monoklonální protilátka produkovaná myším lymfocytárním hybridomem MPH-01 může být využita v klinické veterinární praxiThe monoclonal antibody produced by the murine lymphocyte hybridoma MPH-01 can be used in clinical veterinary practice
238 248 pro identifikaci kmenů mykoplazmat, izolovaných z nemocných zvířat, dále v laboratořích pracujících s tkáňovými kulturami, k bezpečné identifikaci Mycoplasma hyorhinis a jimi infikovaných buněk, nebo i k případné dekontaminaci infikovaných buněčných linií a k biochemické a biologické analýze cílové antigenní struktury.238 248 for the identification of mycoplasma strains isolated from diseased animals, in tissue culture laboratories, for the safe identification of Mycoplasma hyorhinis and their infected cells, or for possible decontamination of infected cell lines and for biochemical and biological analysis of the target antigenic structure.
Tab. 2. Reaktivita protilátek produkovaných hybridomem MPH-01 s buňkami infikovanými Mycoplasma hyorhinisTab. 2. Reactivity of antibodies produced by MPH-01 hybridoma to Mycoplasma hyorhinis infected cells
Buňky Test použitý pro detekci reaktivityCells Test used to detect reactivity
2 Radioimunologický Imunofluorescenční (imp. min-^) (% svítících buněk)2 Radioimmunological Immunofluorescence (imp. Min - ^) (% shining cells)
Neinfikované 100 <0,1Uninfected 100 <0.1
Infikované 6 700 97Infected 6 700 97
Byl použit nepřímý radioimunologický test, ve kterém myší teratokarcinomové buňky F9 byly inkubovány s kultivačním supernatantem hybridomu MPH-01, nenavázaná protilátka v i os byla odmyta a buňky inkubovány s I-značenými F(ab)£ fragmenty protilátky králičí anti-myší IgG. Po odstranění nenavázané protilátky byla měřena radioaktivita vázaná na buňky.An indirect radioimmunoassay was used in which murine F9 teratocarcinoma cells were incubated with culture supernatant of MPH-01 hybridoma, unbound antibody in the os was washed off, and cells incubated with I-labeled F (ab) β fragments of rabbit anti-mouse IgG antibody. After removal of unbound antibody, cell-bound radioactivity was measured.
Byl použit nepřímý imunofluorescenční test, ve kterém v prvním stupni byl použit kultivační supernatant hybridomu MPH-01 a ve druhém stupni FITC-značená protilátka králičí anti-myší IgG.An indirect immunofluorescence assay was used in which the culture supernatant of MPH-01 hybridoma was used in the first step and the rabbit anti-mouse IgG FITC-labeled antibody in the second step.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS340784A CS238248B1 (en) | 1984-05-08 | 1984-05-08 | Mouse lymphocytic hybridoma IMG CZAS MPH-01, producing anti-mycoplasma antibody Mycoplasma hyorhinis |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS340784A CS238248B1 (en) | 1984-05-08 | 1984-05-08 | Mouse lymphocytic hybridoma IMG CZAS MPH-01, producing anti-mycoplasma antibody Mycoplasma hyorhinis |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CS238248B1 true CS238248B1 (en) | 1985-11-13 |
Family
ID=5374027
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CS340784A CS238248B1 (en) | 1984-05-08 | 1984-05-08 | Mouse lymphocytic hybridoma IMG CZAS MPH-01, producing anti-mycoplasma antibody Mycoplasma hyorhinis |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CS (1) | CS238248B1 (en) |
-
1984
- 1984-05-08 CS CS340784A patent/CS238248B1/en unknown
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Kintner et al. | Identification of antigenic determinants unique to the surfaces of cells transformed by Epstein–Barr virus | |
YELTON et al. | Use of monoclonal anti-mouse immunoglobulin to detect mouse antibodies | |
Imai et al. | Differential effect of interferon on the expression of tumor-associated antigens and histocompatibility antigens on human melanoma cells: relationship to susceptibility to immune lysis mediated by monoclonal antibodies. | |
Sarnesto et al. | Relative immunogenicity in mice of different regions of the human IgG | |
WO1983001739A1 (en) | Monoclonal antibodies against brugia malayi | |
CS238248B1 (en) | Mouse lymphocytic hybridoma IMG CZAS MPH-01, producing anti-mycoplasma antibody Mycoplasma hyorhinis | |
Enghofer et al. | Immunoglobulins with different specificities have similar idiotypes | |
GB2133543A (en) | Monoclonal antibody specific to human melanoma | |
Bona et al. | Release from maternally-induced allotypic suppression in rabbit by Nocardia water-soluble mitogen. | |
US4678746A (en) | Monoclonal antibodies to epizootic hemorrhagic disease virus antigen | |
JPS60208925A (en) | Production of monoclonal antibody for cancer diagnostics andtherapy | |
EP0581108A2 (en) | Bispecific antibody reactive with sialyl-Lea antigen and CD3 | |
Koyama et al. | Monoclonal antibody against human gallbladder carcinoma-associated antigen | |
EP0093774A1 (en) | Monoclonal antibodies against leishmania | |
CS240807B1 (en) | Mouse Lymphocytic Hybridoma IMG CZAS TEC - 01 | |
WO1983001837A1 (en) | Monoclonal antibodies against schistosoma | |
CS228856B1 (en) | Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance against hog g-immunoglobulin | |
CS240846B1 (en) | Mouse Lymphocytic Hybridoma IMG CZAS IN - 04 | |
SU1723127A1 (en) | Strain of hybridous cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibodies to the human somatotropin | |
CS228858B1 (en) | Mouse lymphocytic hybridom producing an antisubstance against hog g-immunoglobulin | |
CS239800B1 (en) | Mouse lymphocytic hybridoma IMG CZAS TU-04 | |
RU2059721C1 (en) | Strain of hybrid cultured murine cells mus musculus l used for preparing monoclonal antibodies to the human thyrotropic hormone | |
RU2059720C1 (en) | Strain of hybrid cultured murine cells mus musculus l used for preparing monoclonal antibodies to the human thyrotropic hormone | |
Ungar-Waron et al. | A specific enzyme-linked immunosorbent assay for determination of bovine IgM: Use in screening hybridoma cell lines | |
SU1514768A1 (en) | Strain of hybrid cultivable mus musculus cells as producer of monoclonal antibody to recombinant necrosis factor of human beta-tumours |