CN1400868A - 用于喂养水生生物的海洋类脂组合物 - Google Patents

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Abstract

一种用于喂养水产养殖的可捕食生物如Artemia和轮虫，包括一种含有至少25％重量比的磷脂的类脂组合物，并能提供至少30％重量比的DHA含量。该类脂组合物适合得自海洋生物如鱼肉、浮游植物或浮游动物。该组合物用于为包括鲑鱼、鳟鱼、鲈鱼、甲壳类动物以及软体动物在内的鱼类水产养殖提供具有高含量的高度不饱和脂肪酸(HUFA)的可捕食生物。

Description

用于喂养水生生物的海洋类脂组合物
技术领域
本发明涉及水产养殖领域，特别是提供一种用于喂养可捕食生物的类脂组合物，这种可捕食生物用作幼鱼、甲壳类动物的幼虫和双壳贝类动物的食物。尤其是本发明提供海洋类脂组合物中含有大量的高价不饱和脂肪酸(HUFA)，特别是二十二碳六烯酸(DHA)，和含有大量富含DHA的磷脂。
背景技术
大量消费者所需的如鲑鱼、鳟鱼、大比目鱼和鳗鲡等海洋食物种类的消费不断增加，由于这种大量的需求和有限的天然原种，人们作了很多努力，开发低成本喂养上述物种的水产养殖。一个特别重要的问题是保证所养殖物种孵化出的幼虫的高存活率。
水产养殖业的扩大需要注意几个问题，其中一个最重要的问题是难以供应活的可捕食生物，这种可捕食生物为鱼蚴提供足够营养的食物。野生仔鱼以一种能提供均衡营养的混合种群浮游可捕食生物为食。但是，收集足够多的浮游生物来满足水产养殖的需求是不可行的。作为一种替代方法，经挑选的可捕食生物种类，特别是轮虫和Artemia类当前正被培养并用作食物。
但是通常这种人工培养的可捕食生物，虽然能提供大量的蛋白质和能量，含有某种类脂组合物，这种类脂组合物没有包含对某些高价不饱和脂肪酸(HUFA)，特别是二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)的需求，可是DHA和EPA对鱼蚴的最佳存活、发育和成长是必须的。特别是人们已经知道高含量的DHA是必须的，并且可捕食生物中DHA和EPA的比应该至少为1∶1，最好是至少为2∶1。为了提供含有那种关于HUFA的组合物的可捕食生物，有必要在有高含量DHA的富集组合物存在的情况下培养这种生物，更适宜的是至少为20％的重量比，DHA和EPA的比率要超过在可捕食生物中的目标比率，例如至少是3∶1，并且最好是更高些。
当前人们正在关注这个问题，他们用在富集组合物存在情况下培养可捕食生物，以使这些生物富含这些重要的脂肪酸。但是，当前用于该目的的，可供给市售的组合物，如以商品名Selco出售的乳状液产品不能满足上述要求，因为其DHA含量相对较低和/或DHA∶EPA的比率不够高。有人已经报导了采用这类组合物，总类脂物中的3-5％的Artemia富集量(McEvoy et a1.Aquaculture(水产养殖)163(1998)237-250)，也有人已经报导了用这类Artemia喂养鱼蚴，鱼蚴的存活率范围在12％-15％之间(McEvoy et al，supra；；Navarro et al，J.Fish.Biol.43(1993)503-515)。在这方面，存活率定义为自第一次喂养到变态的存活百分率。对于划算的水产养殖生产，应该获得50％的鱼蚴存活率，或者最好是更高些。
用于可捕食生物富集作用的其他市售组合物是以商品名Algamac(TM)出售的，它含有高达14％重量比的DHA；和金枪鱼油(TOO)，含有高达30％重量比的DHA。
WO99/37166公开了一种利用基于从海藻油提取的废液流中获得的HUFA的干皂粉的鱼幼体的必需营养来富集活的可捕食生物的方法。提供这些粉末的原料含有磷脂和约28％重量比游离脂肪酸，并且它含有23％重量比的DHA，但显然没有其他n-3脂肪酸。公开了大约干重量的2.7％的Artemia富集水平。
在WO99/06585专利中介绍了另一种用于水产养殖的原料。实施例公开了DHA的含量为24％重量比，但是未公布磷脂的含量。然而这种原料含有高比率的游离脂肪酸(约32-37％重量比))和高含量的非类脂原料(约39-44％重量比)，这种非类脂原料可以减少可捕食动物的类脂摄取量。高含量的游离脂肪酸通常被认为对鱼蚴和新生的幼体是有害的。
上面最后提到的两种原料都不是鱼基的，并且他们都缺少许多在鱼类中发现的HUFA，例如EPA和其他n-3脂肪酸。
按照Sargent等人最近的观点(Aquaculture(水产养殖)179(1999)217-229)，他们强调除了HUFA方面的需求，鱼蚴还有在磷脂方面的规定食物，并且强调鱼蚴理想的饵料是含有类似于鸡蛋黄的组合物。按照这些作者的观点，鱼卵黄包括约10％重量比(干的物质组合物)的磷脂，它含有17％重量比的DHA和约9％重量比的EPA。这些作者总结他们的观点认为，存在的问题是关于如何用当前可用原料，以商业规模制备这种饵料。
现已发现有可能提供一种类脂组合物用于富集水产养殖可捕食生物，这是基于从大量有用的海洋生物原料，如鱼肉中分离出来的含DHA的磷脂的应用。通过使用这种起始原料，有可能提供含有HUFA和磷脂的组合物的可捕食生物，这种组合物非常接近于鱼卵黄并且是十分适合获得最佳的幼鱼，如大比目鱼幼体的存活、生长、色素淀积和形态形成。
发明内容
相应地在第一方面，本发明属于一种用于水产养殖中喂养可捕食生物的组合物，包括一含有至少25％重量比的磷脂的类脂成分，该组合物提供的DHA含量至少为30％重量比。在有用的实施例中，含磷脂类脂成分的来源是可大量供给的海洋生物原料，如鱼肉。按照本发明，这种组合物对于提供含有相应类脂组合物的Artemia类和轮虫，用于喂养鱼仔是特别有用的。
另一方面本发明提供一种含有上述组合物的类脂相的乳状液。
另一方面本发明还涉及到制备上述组合物的方法，包括从海洋生物原料中分离出粗类脂成分(包括甘油三酸酯和磷脂)的步骤，接下来是磷脂富集步骤，包括在甘油三酸酯未沉淀的温度下增加一种溶剂到粗类脂成分中，并冷却混合物，使甘油三酸酯沉淀，以得到一种含有至少25％重量比的磷脂的类脂馏份。
这里也提供一种包含至少50％重量比的磷脂的海洋类脂组合物。
按本发明的组合物用于喂养可捕食生物，包括它的必需成分即富含磷脂的成分。
本文中，措词“可捕食生物”是指任何能被用作水产养殖设备中生产的海洋物种的鱼蚴的活饲料的海洋生物。对那种捕食生物的一般评述可见1995年国际粮食和农业组织公布的“水产养殖的活食的生产和应用指南”，Lavens & Sorgeloos(eds.)，这里可以作为参考。相应地最常用的被捕食性生物包括几个种类和微藻类、轮虫、Artemia和浮游动物类，浮游动物包括桡脚亚纲类、水蚤类、线虫类核担轮幼虫。
这里所用的术语“水产养殖”是指最大范围内的，它包括在水产养殖条件下生产的任何水生物种的任何产品，如鱼类，包括鲑鱼、鳟鱼、鲤鱼、鲈鱼、鳊鱼、大比目鱼、海鲈、鲽鱼、遮目鱼、银白胭脂鱼、石斑鱼、比目鱼、海鲷、鳕鱼、黑线鳕、日本比目鱼、鳗鱼；甲壳类动物如小虾、龙虾、小龙虾、螃蟹；软体类动物如双壳类体动物。
这些水生物种的一个共同特征是生命周期中包括一个或多个可能有特别的营养需求的幼虫阶段，并且对于成功的水产养殖生产来说，相应地能满足这些需求的活的可捕食生物的供应是基本因素。如上所述，高含量的基本脂肪酸DHA就是这样一种特别的需求，术语“基本”表明可捕食生物不是能重新合成的化合物。本发明中的组合物含有至少30％重量比的DHA，例如它的范围为30-35％重量比，或者35-40％重量比，更好是至少40％重量比，如至少50％重量比，当然也包括至少60％重量比。
为了提供一种具有这么高含量的DHA，必须精心挑选组合物的类脂成分，以提供所需数量的DHA。在可用的实施例中，富含磷脂的成分能提供所需数量的DHA。但是，在其他实施例中，磷脂成分中的DHA含量可能是不足的。在那种情况下，至少要加入另一种能提供足够DHA含量的磷脂成分。典型的另一种磷脂成分，包含至少20％重量比的DHA，较好的是至少含有30％重量比的DHA，最好是含有至少50％重量比的DHA。在较佳实施例中，另一种磷脂成分含有至少60％重量比的DHA，例如至少70％重量比的DHA，也包括至少90％重量比的DHA。
如果需要，还可在本发明中的组合物中加入一定量的另一种富含DHA的类脂成分，使该组合物中DHA总含量至少为30％重量比。按照富含磷脂成分的DHA含量，所要求另加的类脂成分中的含量可在5-99％重量比范围内。在本发明的某些实施例中，另加的类脂成分的含量在50-95％重量比的范围内，例如约50-70％重量比范围，或者更高。
另加的类脂成分的来源可能是一些天然存在的含至少20％重量比DHA的类脂(较好的是包含甘油酯，如甘油三酸酯和甘油二酯)和那些化学合成和酶法合成的类脂类。天然存在的富含DHA的类脂的例子是金枪鱼油(TOO)和从具有高含量DHA的微生物细胞中分离出的类脂类，例如包括小球藻类和crypthecodinium类的海藻，和某些酵母类如酵母属、被孢酶属(moteriella)，裂桴草属(Schizochytrium)和破囊壶菌属(thraustochytrium)。作为选择可使用天然存在的富含DHA类脂类，这些类脂类可用化学合成或酶法合成。本发明有用的实施例中，通过DHA以游离脂肪酸和甘油在化学催化剂的存在下，进行接触，得到甘油脂，或者可以从反应物中生成甘油脂的酶的作用下生成甘油脂，这种类脂是以甘油脂来提供的。所述的酶，如脂肪酶，包括从南极洲假丝酵母中分离出的脂肪酶。
按照本发明发现使用鱼基的原料作为该组合物的类脂来源具有特别的用处(例如：作为含磷脂成分的来源和/或另外富含DHA成分的来源)。除了DHA，那些原料还提供其他有价值的HUFA(特别是n-3HUFA)，这些是鱼类的特征(如20∶5EPA(二十碳五烯酸)、18∶3、18∶4和20∶4脂肪酸)，这些成份均在幼鱼的天然食物和鱼卵黄中被发现，并且被认为对喂养鱼用的可捕食生物的成功富集是有益的。在一个有利的实施例中，富集组合物中HUFA的总含量至少为30％重量比，例如至少40％重量比，较好的是50％重量比，更好的是60％重量比。在那种组合物中，EPA(二十碳五烯酸)的范围较好的是2-15％重量比，例如5-10％重量比的范围，相比于DHA和EPA，其他n-3HUFA的含量范围较好的是2-25％重量比，更好的范围是5-15％重量比，例如大约10％重量比。在另外有利的实施中，n-3HUFA的总含量至少为50％重量比，例如至少60％重量比。
如上所述，本发明中的组合物包括一个主要的富含磷脂成分，该成分包含至少25％重量比的磷脂。在本文中，术语“磷脂”用来描述一类磷酸单酯或二酯的类脂物。这样磷脂包括卵磷脂(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇激酶(PI)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰丝胺酸(PS)、磷脂酸(PA)。术语“卵磷脂”通常也用于上述磷脂的混合物。本发明人发现，磷脂类组份的分布可能对本发明组合物的功能有重要的影响，能获得幼鱼的高存活率和好的色素淀积比。特别地还发现青鱼肉中的磷脂组合物可以获得幼鱼恰当色素淀积的特高比率。
按照本发明，可使用任何富含磷脂的成分。但是，当前更好的磷脂是从海洋生物原料中分离出来的磷脂，包括新鲜原料和干化的原料。新鲜原料包括如鱼或海洋生物的内脏、鱼肉、鱼卵、鱿鱼、软体动物和浮游生物。干化原料包括，特别是鱼肉如青鱼、鳞鱼、鲭鱼、鲱鱼、沙丁鱼、凤尾鱼、竹荚鱼的肉、蓝鳕鱼和浮游生物的肉。如上所提供的那些鱼类海洋原料不仅有高含量的DHA，还有EPA和其他n-3PUFA、鱼的特性，并且与幼鱼的天然饵料有一定程度上的相似。
众所周知，商品鱼肉的质量各不相同。特别是低质量的鱼肉中的磷脂多少都已经变坏，包括氧化和水解作用。为实现本发明的目的，特别要使用高质量的商品鱼肉作为含磷脂成分的来源。本文中高质量鱼用下列涉及质量和新鲜度的参数来描述：“总的挥发性氮”(TVN)应该如在Antonacopoulus中描述的低于50毫克/100克被测物，N.Handbuch derLebensmittelcheme，vol.III/2，Springer Verlag，柏林(1968年)，以及蛋白质的mink可消化性应该至少90％。
在较佳实施例中，含磷脂成分中磷脂的含量至少30％重量比，较好是至少40％重量比，更好是至少50％重量比，例如至少60％重量比，包括70％重量比的磷脂，或者更高。假设含磷脂成分被精选过而含有足够高的DHA含量，本发明中的组合物可能包括这种成分作为单一含磷脂成分。但是，如上所述，它可能要求用另外的具有高含量DHA的类脂成分来增加含磷脂成分。在那种情况下，含磷脂成分的比例是在1-99％重量比之间，例如范围为2-75％重量比，包括5-50％重量比范围，又例如范围为5-25％重量比之间，包括大约5％重量比，大约10％重量比和大约15％重量比，或者位于25-50％重量比的范围内。
如上所述，可以看出，不但幼鱼的食物中要求有高含量的DHA，而且可捕食生物中DHA和EPA之间的比率对培养物幼鱼的存活和生长都很重要。通常认为可捕食生物中DHA∶EPA的比值至少应为1∶1，较好的是至少2∶1。但是，已经发现为了在可捕食生物中获得所需的比值，给可捕食生物的富集组合物就要求十分高的比值。相应地，本发明中的富集组合物中DHA∶EPA的重量比的范围在1∶1到10∶1之间，例如2∶1到8∶1，包括4∶1到6∶1间的范围。
如上文中Sargent等人所述，其他HUFA可能非常重要，例如二十碳四烯酸。相应地按照本发明要补充一种含有足够量的二十碳四烯酸的富集组合物。如果需要，富集组合物中二十碳四烯酸的含量范围可为全部脂肪酸的1-20％重量比，例如2-10％重量比。
在目前的工艺水平中通常人们都知道，高含量的游离脂肪酸可能对小鱼有害。本发明中组合物的较佳实施例含有少量的游离脂肪酸，例如总含量约少于10％重量比，包括约少于5％重量比，更适合的是约少于3％重量比，例如约少于1％重量比。
在有用的实施例中，本发明的富集组合物包括补充成分，该成分包括乳化剂、免疫刺激剂，例如葡聚糖或烷氧基甘油、维生素、抗氧化剂、无机物和二十碳四烯酸。适合的乳化剂包括巴斯夫产的Chremophore A25(TM)、Croda的VOLPO(TM)、大豆卵磷脂、磷脂、甘油酯和包括肥皂在内的脂肪酸。
可加入本组合物中的维生素包括一些水溶性维生素如维生素B、维生素C和一些非水溶性维生素如维生素A、维生素D和维生素E。已经发现，维生素C的高含量可能对富集组合物对幼小食肉动物的存活和生长方面的功能产生重要的影响。(Merchie，G；Sorgeloos，P.Effects of dietary vitamin C on fish and crustacean Iarvae(食用维生素C对鱼和甲壳类幼虫的影响)，Proceedings Larvi’95，Ghent(1995)；Merchie，G.Nutritional effect of Vitamin C on the growthand physiological condition of the Iarvae of aquaculture organisms(维生素C对海洋生物幼体的成长和生理条件的营养功能)，Thesis(论文)，1995，University in Ghent(根特大学)；Merchie，G.Et.al，，Aquaculture(水产养殖)，134(1995)325-337。)相应地在有用的实施例中，维生素C的含量可能的范围是1-15％重量比，例如5-10％重量比。有效的抗氧化剂包括TBHQ，促长啉、BHT、BHA、维生素A和维生素C。
熟练的技术工人将会懂得，本发明的富集组合物可用作药用活性物质，如抗微生物剂和包括抗菌疫苗和抗病毒感染疫苗在内的免疫活性物质，和任何它们的化合物的方便的载体。
本发明中的组合物可以是液体、易倾倒的乳化剂、或一种糊状物、或干态，例如粒状、粉末状或薄片。当本组合物以乳化剂，更好的是类脂在水中的乳化剂提供时，首选的是一种相对浓缩形态。那样一种浓缩乳化剂形态可用作预乳化剂，因为它能在水介质中经一步或多步稀释而为可捕食生物提供最终的富集介质。在较佳实施例中，按照本发明这样的预乳化剂作为类脂相存在，占富集组合物中的至少50％重量比。
从上面公开的内容看，本富集组合物可用于富集含有必需HUFA和磷脂的水产可捕食生物。
在另一方面，本发明提供一种制备上面所描述的富集组合物的方法。该方法的第一步是从上面所描述的海洋生物原料中分离出一种粗磷脂成分。该分离步骤可以通过传统的从有机原料中分离出磷脂的方法来完成，例如用一些适合的溶剂来萃取的方法，适合的溶剂包括有机溶剂如包括乙醇和丙醇在内的醇类，烃类溶剂，举例来说如戊烷、己烷，或烷烃，环烃或芳香烃溶剂的混合物；醚、酯或其混合物以及其他发现适合的溶剂。也可以考虑使用超临界萃取的方法。其他的从原料中分离磷脂的方法还包括层析法、离心过滤法、浓缩法、热处理法或任意这些方法的结合使用。在第二步中，通过对磷脂成分进行处理是粗磷脂成分中的磷脂部分被富集，这个处理过程导致甘油三酸酯部分至少是部分的沉淀或固化，随后甘油三酸酯可被移走。这种处理有利地包括在某一温度时加入一种适合的溶剂，如上面所涉及到的任何一种到天然磷脂成分中，该温度下甘油三酸酯不沉淀，随后冷却磷脂/溶剂的混合物到甘油三酸酯的大部分沉淀的温度。移去沉淀物并且蒸发溶剂部分，以获得一种富含磷脂的成分。这种处理能够重复一次或多次，并且所得到的富含磷脂成分的等分试样可以合并。用以提供富含磷脂成分的适当原料包括上面所描述的海洋生物。
如上所述，可能要求用另一种具有高DHA含量的类脂成分来增加磷脂成分。相应地，本发明的方法包括磷脂成分与那样一种如前所述的富含DHA成分的合并的实施例。
在另一方面，本发明提供一种新的海洋类脂组合物，包括至少50％重量比的能由上述方法制备的磷脂。那样一种组合物可能含有至少75％重量比的磷脂，和甚至至少90％重量比的磷脂。如上所述，那样一种组合物可能用于本发明的富集组合物。然而，那样一种组合物的其他的用途是可预料的，例如作为一种食品中的膳食成分，包括婴儿处方和肠道外或通过管道用药的营养组合物，或作为一种医学活性剂和化妆品中的一种成分。
根据本发明中的这种海洋类脂组合物可以适当的形式提供，包括对于上面富集组合物所描述的形式。
具体实施方式
实施例1毛鳞鱼肉中富含磷脂的类脂成分的实验室分离
将100克鳞鱼肉加入到400毫升乙醇(约99％体积比)中并将混合物在室温下搅拌3小时。过滤分离肉渣并将乙醇的滤出液在真空下于旋转蒸发器中蒸馏以获得10-11克的粗类脂馏分，包含约80％重量比的下列组合物的类脂：54％重量比磷脂(PL)，4％重量比游离脂肪酸(FFA)和42％重量比甘油三酸酯(TG)。这个提取方法可重复用于分离的肉渣，能产生另外1.5克的粗类脂。
通过加入重量体积比为1∶5的乙醇使该合并的粗类脂馏分纯化，得到的悬浮液在4℃下静置一个晚上，使甘油三酸脂的实质部分沉淀。分离乙醇部分并使用旋转蒸发器蒸馏，产生一红-淡黄色的浓厚的富含磷脂的部分，糖浆状物料6.5-6.8克，如下所示约含有71％类脂组合物。(最左边栏的数字表示该类脂组合物的脂肪酸中碳和双键的数量，DHA为22∶8，EPA为20∶5)：
    磷脂71％   甘油三酸酯23％  游离脂肪酸6％     合计100％
    14∶016∶016∶118∶018∶118∶218∶318∶420∶120∶420∶522∶122∶422∶522∶6     4,122,54,90,09,60,00,02,32,30,023,50,00,00,030,8     12,114,516,70,016,92,40,07,56,20,011,43,80,00,06,9     5,730,36,23,715,50,00,00,05,20,015,60,00,00,017,9     4,320,86,41,313,41,40,62,64,20,613,23,51,019,4
    100,0     100,0     98,5     92,7
实施例2青鱼肉中富含磷脂的类脂成分的实验室分离
用与实施例1中所描述的本质上相同的方法来从青鱼肉中获得富含磷脂的成分，带有下列类脂组合物：
    磷脂81％   甘油三酸酯5％   游离脂肪酸14％     合计100％
    14∶016∶016∶118∶018∶118∶218∶318∶420∶120∶420∶522∶6     3,225,21,71,25,90,70,40,80,80,714,938,2     21,014,813,00,010,80,00,08,53,60,013,87,8     11,324,16,02,510,31,41,45,03,71,312,115,4     5,224,52,91,36,80,80,80,51,80,714,433,5
    93,7     93,3     94,5     93,7
从上可看到，根据本发明青鱼肉为富含磷脂的成分提供一种很好的原料，含有高比例的DHA磷脂。
实施例1和2中乙醇的提取方法能被该领域熟练的技术人员用传统的方法按比例增加，类似于实施例3中所描述的不同溶剂方式。
实施例3
从鱿鱼套膜中大规模地分离富含磷脂的类脂组合物
将切碎的鱿鱼(150千克)加入到300升异丙醇中，将混合物用力摇动4-6小时并静置过夜。接下来，过滤混合物，将300升正己烷加入到滤出液并混合。这就导致了混合液分成了可分离的两相。包含大部分的正己烷和异丙醇的上面一层被分离，经在真空下，在几个圆形锅中蒸馏，并通过50升的旋转蒸发器得到真空容器中的蒸馏物，总共产出了2.2千克富含磷脂的产出物，这部分是含有为65％重量比的磷脂、其余为脂肪酸组合物的棕黄色蜡状物(最左边一栏的数字代表了碳元素和类脂组合物的脂肪酸中双键的数目，DHA是22∶6、EPA是20∶5)：
  14∶016∶016∶118∶118∶218∶318∶418∶420∶120∶420∶521∶522∶122∶6   1,928,30,62,93,20,20,00,22,71,413,80,00,040,4
  95,5
实施例4
为幼鱼可捕食生物的富集组合物所做的准备
通过合并，混合下面的组合物，可得到一种可捕食生物的组合物，例如Artemia物种，表4.1
鱿鱼套膜中的富含磷脂组合物(实施例3)TG4010(TM)，Croda，三酸甘类脂含量约等于40％重量比的的DHA维生素C(抗坏血酸棕榈酸盐)共乳化剂，巴斯夫Chremophore(TM)Glucan Macroguard(TM)(免疫刺激剂)维生素A(维生素A棕榈酸盐，1mill i，u./g)维生素E(DL-α维生素E乙酰胺)维生素B(维生素B1氢氯化物)TBHQ(抗氧化剂)植物生长调节剂(抗氧化剂)总计  9.7g78.0g8.5g1.6g0.8g0.190g0.155g1.2g0.036g0.036g100g
原料TG4010用作组合物中的富含DHA成分，该成分从富含DHA的鱼类油基原料分离出来，包含40％重量比的DHA，大约10％重量比的EPA和大约10％重量比的其它n-3HUFA。脂肪酸主要以甘油三酸酯形式存在，该原料含有的游离脂肪酸量很少。
作为富含DHA的资源的其它原料也被测试过，例如TG5010(也是来自Croda)，大约含有50％重量比的DHA，还有高度酶化富含DHA的甘油三酸酯。
实施例5
用于培养Artemia的富集组合物的应用
Artemia的胞囊在最佳条件(海水中27-29℃下，PH值约为8，氧含量约为4mg/L)下孵化出来。冲洗新孵化出来的Artemia幼虫，并将其转移到一个250升的容器以得到200.00/L的密度。温度保持在25-28℃，氧含量5-6mg/L，用重碳酸钠(2g/l)将PH值缓冲到7.5。通过在内容器底部的贯穿孔，使容器充满空气。把实施例4中介绍的富集组合物加到容器中以达到0.2g/L的浓度，10小时后在加入同样的量，第一次加入富集组合物24小时后，Artemia有了如下的类脂组成(类脂干重量31％)：
 磷脂16％  甘油三酸酯76％  游离脂肪酸8％  合计100％
 14∶016∶016∶118∶018∶118∶218∶318∶4  8.815.02.66.425.24.213.22.2  1.08.83.22.715.63.519.23.1  3.136.03.16.313.01.86.51.7  0.811.12.54.217.13.314.72.4
 20∶120∶420∶522∶122∶422∶522∶6  1.62.812.50.00.00.04.6  1.02.110.20.01.11.020.0  0.00.04.40.00.00.014.8  0.92.29.51.21.118.9
 99.0  92.5  90.7  90.0
根据本发明，得到的Artemia富含高浓度DHA，因此特别适合饲养幼鱼，尤其是大比目鱼的幼鱼。
实施例6
用于培养Artemia的富集组合物的应用
新孵化出来的Artemia放置在250L的容器中，并保持在实施例3中叙述的条件下。用混合了重量比为2％的Chremophore A25乳化液的类脂组合物喂养Artemia。类脂组合物和包含了重量比为50％的实施例1中的磷脂组合物；25％重量比的‘DHA-80’；包含重量比为80％的DHA的甘油三酸酯，通过从南极洲假丝酵母(Candida Antarctica)(美国专利5,604,119中所述)得来的脂肪酶从甘油和DHA脂肪酸酶法合成；25％ Lysi-22(TM)(Lysi hi，冰岛)，含有22％重量比DHA的鱼油。把饲料组合物加到容器中以达到0.2g/L的浓度，12小时后在加入同样的量，第一次加入富集组合物24小时后，Artemia有了如下的类脂组成(类脂干重量34％)：
 磷脂25％  甘油三酸酯72％  游离脂肪酸3％  合计100％
 14∶016∶016∶118∶018∶118∶218∶318∶420∶120∶420∶522∶6  0.913.63.35.826.23.713.82.71.02.113.18.4  1.110.63.52.215.42.715.02.11.91.78.728.8  0.032.03.310.615.70.04.40.05.30.05.023.6  1.311.23.43.315.12.513.72.22.01.99.728.0
 94.6  93.7  100  94.1
根据本发明得到的Artemia与其它鱼特征n-3HUFAs同样高度富含DHA，总浓度9.5％，因此特别适合饲养幼鱼，尤其是大比目鱼的幼鱼。
实施例7
用来养殖臂尾轮虫(Brachionus plichatilis)的富集组合物的应用。
轮虫在与实施例5中描述的相似的环境中养殖，他们被用Isochrysis浮游生物和酵母喂养，并除了用Croda 50代替Croda 40外，实施例4中描述的富积组合物在27℃富积6小时，Croda 50包含50％重量比的DHA。轮虫有下面的类脂组合物(22％类脂干重量：)
 磷脂32％  甘油三酸酯56％  游离脂肪酸13％  合计100％
 14∶016∶016∶118∶018∶118∶218∶318∶420∶120∶420∶522∶6  6.625.91.93.64.54.93.12.21.25.010.125.6  7.84.92.55.74.50.33.26.21.92.314.738.8  3.315.21.32.75.52.01.92.21.52.214.840.4  6.913.02.24.74.72.03.04.41.63.213.435.2
 94.7  92.7  93.0  94.3
根据本发明，得到的轮虫具有高含量的DHA，并含有其他的n-3HUFA和非常高的类脂含量，并由此举证说明本发明的功效。
实施例8
用于培养Artemia的富集组合物的比较
Artemia胞囊在实施例5的条件下孵化，并转移到培养器，培养器的条件与实施例3保持相同(除去温度上少许不同，见表)用实施例4中描述的相似方法，准备富集组合物。例如添加表4.1中的一些添加剂，例如乳化剂、维生素或者实施例3中所述的鱿鱼套膜中提取的富含磷脂成分。大多数(80％)配剂的成分是表表8.1中列出的市售类脂组合物。它们是AlgaMac 2000(TM)，DHA Selco(TM)，DC DHA(TM)和饲料级鳕鱼肝油(从Lysi，冰岛)。把准备的配料倒入容器中，以达到0.2g/L的浓度，10小时后在加入同样的量，第一次加入富集组合物24小时后，Artemia有了如下的类脂组成：
表8.1
 AlgaMac2000  DHA Selco  DC DHA  鳕鱼肝油 实施例2中的组合物
 成长中的温度  20℃  27℃  27℃  20℃  27℃
 ％类脂干重量比  17％  24％  22％  23％  31％
 14∶016∶016∶118∶018∶118∶218∶318∶420∶120∶420∶522∶122∶422∶522∶6  2.312.64.44.719.23.623.13.90.41.34.42.87.8  3.413.54.65.524.85.628.44.85.34.1  1.110.93.74.634.56.917.92.80.91.36.30.60.68.3  3.216.06.24.525.84.421.14.32.86.02.9  0.811.12.54.217.13.314.72.40.92.29.51.21.118.9
 90.3  100.0  89.3  97.3  90.0
根据本发明富含了优选的组合物的Artemia很显然富集了高浓度的DHA，这样也就特别适合饲养幼鱼，尤其是大比目鱼的幼鱼。
实施例9
HUFA和富含磷脂的Artemia对水产养殖大比目鱼的应用
大比目鱼幼体在230-250°d下被第一次喂养(°d：温度(℃)的乘法因素和从孵化开始的天数)。采用3，5或7m3的圆形饲养池。幼体逐渐适应11℃的饲养温度和300-500勒克斯的光强度。每天在早上和傍晚喂Artemia给幼体两次。根据本发明在早上喂养前24小时，Artemia富积富集组合物，接下来在13-15℃下又储存7-8小时为下午的喂养。调节进食率以允许很好消化Artemia。将微藻(microalgae)(Isocrysis sp.)加入到养殖水中，以减少应力和便于最大的摄取率。在饲养池的中间设有微小曝气，以均化水质和食物颗粒。要有微小环流导入，以分散幼体。要进行换水，从开始时的每24小时1.2次，提高到最后阶段的每24小时3.3次。要每天清洗幼体饲养池。
从喂养开始到幼体阶段后期，观测到饲养池中存活率超过80％(90％排除“嘴裂”：颚畸形的幼体)，通常已观测到65-75％的存活率。平均起来大约80％的幼体显现了正常的色素淀积，但是在一个饲养池中观测到最多达96％的正常的色素淀积。正常的色素淀积定义为在眼睛边的正常染色和盲边的不染色。在一个饲养池总平均起来65％的幼体而最多80％的幼体显现出正确的眼睛色移，即两只眼睛的色移均在眼睛边。正在进行的实验表明甚至能得到更高的存活率和色素淀积率。
结果显示根据本发明富含DHA的可捕食生物尤其适合于水产类如高存活率和高质量的大比目鱼的养殖。

Claims (41)

1.一种用在水产养殖中用于喂养可捕食生物的组合物，包括一种含有至少25％重量比的磷脂含量的类脂成分，该组合物提供至少30％重量比的DHA含量。
2.如权利要求1所述的一种组合物，其特征在于，该类脂成分提取白一种海洋生物。
3.去权利要求1所述的组合物，其特征在于，该含有磷脂的成分包含至少50％重量比的磷脂。
4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，该含有磷脂的成分包含至少70％重量比的磷脂。
5.如权利要求1所述的组合物包括其他含有至少20％重量比的DHA含量的类脂组合物。
6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，该其他类脂成分有至少30％重量比的DHA含量，例如至少40％重量比。
7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，该其他类脂成分有至少50％重量比的DHA含量。
8.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，该其他类脂成分的数量范围是该组合物的50-95％重量比。
9.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，该富含磷脂成分的数量范围是5-50％重量比。
10.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，DHA∶EPA的重量比范围是1∶1至10∶1。
11.如权利要求10所述的组合物，其特征在于，该DHA∶EPA的比值范围是2∶1至8∶1，包括4∶1至6∶1。
12.如权利要求1所述的组合物还有至少40％重量比的DHA含量。
13.如权利要求12所述的组合物，其特征在于，该DHA的总含量是至少50％重量比，包括至少60％重量比。
14.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，该富含磷脂成分从海洋生物原料的分离获得的。
15.如权利要求14所述的组合物，其特征在于，该海洋生物原料是一种鱼肉。
16.如权利要求15所述的组合物，其特征在于，该鱼肉选自由毛鳞鱼肉、青鱼肉、鲱鱼肉、鲭鱼肉、凤尾鱼肉、沙丁鱼肉、金枪鱼肉和蓝鳕鱼肉组成的鱼肉类。
17.如权利要求15所述的组合物，其特征在于，该鱼肉是高质量的市售鱼肉。
18.如权利要求14所述的组合物，其特征在于，该海洋生物原料选自由鱼卵、鱿鱼的套膜和浮游生物组成的种类。
19.如权利要求1所述的组合物包括至少一个选自由乳化剂、免疫刺激剂、维生素、无机物和二十酸四烯酸组成的种类中的其他成分。
20.如权利要求1所述的组合物，其形式选自由干粉、粒状、浆糊和薄片组成的种类。
21.一种乳状液包括权利要求1-19中任一项所述的一种组合物中的类脂部分。
22.如权利要求21所述的乳状液包括至少50％重量比的如权利要求1所述的组合物。
23.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，HUFA的总含量至少是30％重量比。
24.如权利要求23所述的组合物，其特征在于，HUFA的总含量至少是40％重量比，例如至少50％重量比。
25.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，n-3HUFA的总含量至少是50％重量比。
26.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，游离脂肪酸的数量大约少于5％重量比。
27.一种制备如权利要求1所述的组合物的方法，包括从海洋生物中分离出一种包括甘油三酸酯和磷脂的粗类脂成分，接下来是一磷脂富集步骤，该步骤包括在甘油三酸酯不沉淀的温度下加入一溶剂到该天然类脂成分中、冷却该混合物至甘油三酸酯沉淀和移去该沉淀以获得一含有至少25％重量比的磷脂的类脂馏分。
28.如权利要求27所述的方法，其特征在于，该海洋生物原料是选自由鱼肉、鱼卵、鱿鱼套膜和浮游生物组成的种类。
29.如权利要求28所述的方法，其特征在于，该鱼肉选自由鳞鱼肉、青鱼肉、鲱鱼肉、鲭鱼肉、凤尾鱼肉、沙丁鱼肉、金枪鱼肉和蓝鳕鱼肉组成的鱼肉类。
30.如权利要求27所述的方法包括用一种含有至少20％重量比的DHA含量的其他类脂成分混合该含有磷脂的馏分。
31.如权利要求30所述的方法，其特征在于，该其他类脂成分通过一种方法获得，该方法包括在催化剂存在下，能使甘油和HUFA接触，或者用能结合甘油和HUFA的酶，在允许形成甘油酯或甘油酯的混合物的条件下。
32.如权利要求31所述的方法，其特征在于，该酶是脂肪酶，包括一种南极洲假丝酵母产生的脂肪酶。
33.如权利要求27所述的方法，其特征在于，该含有磷脂的类脂成分有至少50％重量比的磷脂含量，包括至少75％重量比的磷脂含量。
34.一种海洋类脂组合物包括至少50％重量比的磷脂。
35.如权利要求34所述的组合物包含至少75％重量比的磷脂，包括至少90％重量比的磷脂。
36.如权利要求34所述的组合物可以通过从海洋生物原料中分离而获得。
37.如权利要求36所述的组合物，其特征在于，该海洋生物原料选自由鱼肉、鱼卵、鱿鱼套膜和浮游生物组成的种类。
38.如权利要求37所述的组合物，其特征在于，该鱼肉选自由毛鳞鱼肉、青鱼肉、鲱鱼肉、鲭鱼肉、凤尾鱼肉、沙丁鱼肉、金枪鱼肉和蓝鳕鱼肉组成的鱼肉类。
39.如权利要求34所述的组合物，其形式选自由干粉、粒状、浆糊和薄片组成的种类。
40.如权利要求1或34所述的组合物进一步包括一种医学活性物质。
41.如权利要求40所述的组合物，其特征在于，该医学活性物质选自由抗微生物剂、包括抗菌疫苗和抗病毒感染疫苗在内的免疫活性物质和任何它们的化合物的载体所组成的种类。
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