CN1279165C - 流感疫苗组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明描述了一种灭活的流感病毒制剂,它含有在没有硫柳汞存在条件下,或低水平硫柳汞条件下稳定的血细胞凝集素抗原,其中的血细胞凝集素可通过SRD测定法检测。所述流感病毒制剂可含有足以使血细胞凝集素稳定量的胶束修饰赋形剂,如α-生育酚或其衍生物。
Description
本发明涉及新的流感病毒抗原制剂,制备它们的方法以及它们在预防或治疗中的用途。具体而言,本发明涉及灭活的流感疫苗,它们是破裂的,而不是完整的病毒疫苗,而且它们在没有有机汞防腐剂存在的条件下是稳定的。此外,所述疫苗含有按照标准试验为的稳定的血细胞凝集素。所述疫苗可通过适于这种疫苗的任何途径,如肌内,皮下,皮内或粘膜,如鼻内给予。
流感病毒是世界上最普遍存在的病毒之一,它可影响人类和牲畜。流感造成的经济损失是巨大的。
流感病毒是一种有被膜的RNA病毒,粒径大小约为125nm。它主要由与核蛋白有关的核糖核酸(RNA)核心或内层核壳组成,被具有脂双层结构的病毒被膜和外层糖蛋白围绕。病毒被膜内层主要由基质蛋白组成,外层主要由宿主衍生的脂质物质组成。表面糖蛋白神经氨酸苷酶(NA)和血细胞凝集素(HA)作为10-12nm长的突起存在于微粒表面上。这些表面蛋白,特别是血细胞凝集素可确定流感亚型的抗原特异性。
目前所用的流感疫苗或为灭活的,或为活的减毒流感疫苗。灭活的流感疫苗由三种可能的抗原制剂形式组成:灭活的全病毒,亚毒粒,其中纯化的病毒颗粒是用去污剂或其它试剂破裂的,从而使脂质被膜(也称作“断裂(split)”疫苗)或纯化的HA和NA(亚单位疫苗)稳定。这些灭活疫苗通过肌内(i.m.)或鼻内(i.n.)给予。目前还没有市售的减毒活疫苗。
所有种类的流感疫苗通常都是三价的疫苗。它们通常含有来源于两个流感A病毒株和一个流感B病毒株的抗原。通过单辐射免疫扩散(SRD)测量可知,在绝大多数情况下,标准的0.5ml可注射剂量含有15μg来源于每株病毒的血细胞凝集素抗原成分(J.M.Wood等:用于测定流感血细胞凝集素抗原的改进的单辐射免疫扩散技术:适于有效测定灭活全病毒和亚单位疫苗,J.Biol.Stand.5(1977)237-247;J.M.Wood等,单辐射扩散和免疫电泳技术用于测定流感病毒血细胞凝集素抗原的国际协作研究,J.Biol.Stand.9(1981)317-330)。
每个季节掺入流感疫苗中的流感病毒株都是由国际卫生组织与国家的健康专家和疫苗制造商合作确定的。
典型流感的流行可导致肺炎和下呼吸道疾病的发病率上升,这一点可由住院或死亡率的增加来证明。老年人和那些患有基础慢性病的人最有可能经历这种并发症,但幼小的婴儿也可能会患上严重的疾病。因此,这些人群特别需要保护。
目前,用来控制与每年流感流行有关的发病率和死亡率的努力都是以肌内给予灭活的流感疫苗为基础的。这种疫苗在预防呼吸道疾病和流感并发症方面的效果在健康成年人中为75%,在老年人中则低于50%。
用于测量流感疫苗的效果有一个国际标准。对流感有效的疫苗的European Union官方标准在下面的表中列出。理论上,为了满足European Union的要求,对于疫苗中所含的所有流感株而言,流感疫苗必须满足表中所列的其中一个标准。然而在实践中,所有株都需要满足至少两个或全部三个标准,特别是对于新的疫苗,如通过不同途径递送的新疫苗而言。在某些情况下,两个标准就足够了。例如,所有株满足3个标准中的两个就可以接受,而第三个标准只有一部分而不是所有毒株都满足(例如,三株中的两株)。成年人群(18-60岁)和老年人群(>60岁)的要求是不同的。
18-60岁 | >60岁 | |
血清转变率* | >40% | >30% |
转变因数** | >2.5 | >2.0 |
保护率*** | >70% | >60% |
*血清转变率是对每一疫苗株而言,接种后,血清血细胞凝集素抑制(HI)滴度至少增加4倍的疫苗接种者百分比。
**转变因数是对每一疫苗株而言,接种后,血清HI几何平均滴度(GMT)增加的倍数。
***保护率是(对每一疫苗株而言),接种后,血清HI滴度等于或大于1∶40的疫苗接种者百分比,且它通常被认为可指示保护。
对于能够在市场上销售的新的流感疫苗而言,它不仅需要满足那些标准,而且在实践中还需至少与目前市售的可注射疫苗同样有效。就抗原量和所需给予次数而言,它还需要在销售时是活的。
目前市售的流感疫苗是断裂或可注射亚单位疫苗。这些疫苗通常是通过用有机溶剂或去污剂使病毒颗粒破裂,分离或纯化病毒蛋白至各种程度而制备的。断裂疫苗是通过用溶解浓度的有机溶剂或去污剂使感染性或灭活的整个流感病毒断裂,随后除去增溶剂和某些或绝大部分病毒脂质物质而制备的。断裂疫苗通常含有污染基质蛋白及核蛋白,有时含有脂质,及膜被膜蛋白。断裂疫苗通常含有绝大多数或全部病毒结构蛋白,但无需与全病毒中所含的比例相同。另一方面,亚单位疫苗主要由高度纯化的病毒表面蛋白,血细胞凝集素和神经氨酸苷酶组成,它是在接种后,负责激发所需中和病毒的抗体的表面蛋白。
目前所用的很多疫苗都需要防腐剂来防止变质。经常使用的防腐剂是硫柳汞,它是一种含汞的化合物。一些公众已经表达了他们对含汞化合物所造成影响的担心。现在,还没有适当的监视系统能够检测低到中等剂量的有机汞制剂对神经系统发育的作用,而对接受高剂量有机汞制剂的儿童所进行的专门研究则要花费若干年的时间才能完成。某些评论者强调,含硫柳汞疫苗的潜在危险不应被夸大描述(Offit;P.A.JAMA Vol.283;No:16)。虽然如此,找到能够替换在生产过程中使用硫柳汞制备疫苗的选择性方法仍将十分有益。因此,现在仍然需要研究没有硫柳汞的疫苗,特别是像流感疫苗这样,以年为基础,至少被推荐给某些人群的疫苗。
迄今为止,在生产/纯化过程和/或终产品疫苗中,对商用灭活流感疫苗使用防腐剂是标准的操作方法。使用防腐剂是为了在纯化的不同阶段防止微生物生长。对来源于卵的流感疫苗而言,通常可把硫柳汞加入到粗制尿囊液中,而且还可在病毒加工过程中第二次加入。因此,在该过程结束时,会有残留的硫柳汞存在,从而还需要把终产品疫苗中的防腐剂调节至所需的防腐浓度,例如,调节到大约100μg/ml的浓度。
在流感疫苗中使用硫柳汞作为防腐剂的次要作用是一种稳定作用。市售流感疫苗中的硫柳汞可使疫苗的HA成分,特别但不仅使B株流感的HA稳定。某些A株血细胞凝集素,例如,H3也需要稳定。因此,虽然希望除去流感疫苗中的硫柳汞,或至少降低终产品疫苗中硫柳汞的浓度,但还需要克服没有硫柳汞存在条件下,HA不够稳定的问题。
本发明已经发现使用不含有机汞制剂的替代试剂可使灭活流感制剂中的HA稳定。与没有稳定赋形剂,通过相同方法生产的不稳定抗原制剂相比,在更大程度上,HA保持稳定,因而可通过定量标准方法,特别是SRD而随时间检测。SRD方法是按照上文所述进行的。重要的是,HA需保持稳定多达12个月,这是终产品流感疫苗的标准要求。
一方面,本发明提供一种灭活的流感病毒制剂,它含有在没有硫柳汞存在条件下,或低水平硫柳汞条件下稳定的血细胞凝集素抗原,其中的血细胞凝集素可通过SRD测定法检测。
低水平的硫柳汞是指使来源于流感B的HA稳定性降低的那些水平,如此就需要使用稳定赋形剂使HA稳定。低水平的硫柳汞通常为5μg/ml或更低。
通常,稳定的HA是指与没有任何稳定赋形剂,通过相同方法生产的不稳定抗原制剂相比,在更大程度上可通过定量标准方法,特别是SRD而随时间检测的HA。HA的稳定优选在超过一年的时间里,基本维持HA的活性不变。优选稳定是指在6个月的贮藏期,更优选1年的贮藏期后,还能使含有HA的疫苗提供可接受的保护。
适当地,稳定是通过稳定赋形剂,优选胶束修饰赋形剂(micellemodifying excipient)进行的。胶束修饰赋形剂通常是可被掺入由去污剂形成的胶束中的一种赋形剂,所述去污剂用于,或适于使单独或组合的膜蛋白HA,如去污剂Tween 80,Triton X 100和脱氧胆酸盐溶解。
不希望受理论的限制,相信赋形剂是通过与终产品制剂中的脂质,去污剂和/或蛋白相互作用而使HA稳定的。可形成赋形剂与蛋白和脂质的混合胶束,如Tween和脱氧胆酸盐与残留脂质和/或Triton X-100的胶束。表面蛋白可由那些复合胶束维持溶解。优选,蛋白聚集是利用含有适宜赋形剂的胶束,如含有带负电去污剂的胶束的电荷排斥而限制的。
适宜的胶束修饰赋形剂包括:带正电,带负电或两性的带电两亲分子,如烷基硫酸酯,或烷基-芳基-硫酸酯;非-离子型两亲分子,如烷基多聚糖苷或其衍生物,如Plantacare(可从HenkelKGaA购得),或烷基醇聚亚烷基醚或其衍生物,如Laureth-9。
优选的赋形剂是α-生育酚,或α-生育酚的衍生物,如α-生育酚琥珀酸酯。用于本发明中的其它优选生育酚衍生物包括D-α-生育酚,D-δ-生育酚,D-γ-生育酚和DL-α-生育酚。可使用的生育酚优选衍生物包括醋酸酯,琥珀酸酯,磷酸酯,甲酸酯,丙酸酯,丁酸酯,硫酸酯和葡萄糖酸酯。特别优选α-生育酚琥珀酸酯。α-生育酚或衍生物的量足以使血细胞凝集素稳定。
其它适宜的赋形剂可通过本领域的标准方法确定,并按照这里所述,使用进行稳定性分析的SRD方法进行测试。
在优选方面,本发明提供一种流感病毒抗原制剂,它含有至少一种稳定的流感B株血细胞凝集素抗原。
另一方面,本发明提供一种制备稳定的血细胞凝集素抗原的方法,该方法包括在有稳定胶束修饰赋形剂,优选α-生育酚或其衍生物,如α-生育酚琥珀酸酯存在的条件下纯化抗原。
本发明进一步提供含有这里所述的抗原制剂的疫苗,和它们在预防受试者流感感染或疾病的方法中的用途,该方法包括给予受试者本发明的疫苗。
该疫苗可通过任何适宜的递送途径,如皮内,粘膜,例如,鼻内,肌内或皮下给予。其它递送途径为本领域所熟知。
优选皮内递送。任何适宜的装置都可用于皮内递送,例如,短针头装置,如在US4,886,499,US5,190,521,US5,328,483,US5,527,288,US4,270,537,US5,015,235,US5,141,496,US5,417,662中描述的那些。皮内疫苗还可通过下列装置及其功能等同物给予,即它们可限制针在皮肤中的有效刺入长度,如在WO99/34850和EP1092444中描述的那些,这两篇文献引入此处作为参考。其它适宜的是喷射注射装置,它们经由刺入角质层并产生到达真皮的喷射流的液体喷射注射器或针把液体疫苗递送到真皮。喷射注射装置在US5,480,381,US5,599,302,US5,334,144,US5,993,412,US5,649,912,US5,569,189,US5,704,911,US5,383,851,US5,893,397,US5,466,220,US5,339,163,US5,312,335,US5,503,627,US5,064,413,US5,520,639,US4,596,556,US4,790,824,US4,941,880,US4,940,460,WO97/37705和WO97/13537中描述。其它适宜的是冲击式粉末/颗粒递送装置,它利用压缩空气加速粉末形式的疫苗穿过皮肤外层到达真皮。此外,常规的注射器也可用于皮内给予的经典mantoux方法中。然而,常规注射器的使用需要非常熟练的操作人员,因此优选无需非常熟练的使用者即可准确递送的装置。
本发明因此提供一种预防受试者流感感染或疾病的方法,该方法包括皮内给予受试者本发明的流感疫苗。
本发明还扩展到与本发明疫苗结合的皮内装置,特别是在WO99/34580或EP1092444中公开的装置。
本发明还提供了胶束修饰赋形剂,优选α-生育酚或其衍生物作为血细胞凝集素的稳定剂在制备流感疫苗中的用途。
本发明特别,但不仅仅用于B株流感血细胞凝集素的稳定。
优选本发明的稳定HA可稳定6个月,更优选12个月。
优选α-生育酚以酯形式存在,更优选琥珀酸酯或醋酸酯,最优选琥珀酸酯。
α-生育酚或其衍生物的优选浓度为1μg/ml-10mg/ml,更优选10μg/ml-500μg/ml。
本发明的疫苗通常含有A株和B株病毒的抗原,通常以两个A株和一个B株的三价组合物形式存在。然而,不排除二价和单价的疫苗。单价疫苗在大流行情况下可能较有利,例如,它对于生产大量疫苗并尽可能快地给药非常重要。
用于本发明中的非活性流感抗原制剂选自断裂病毒抗原制剂,亚单位抗原(或是重组表达的,或是从全病毒制备的),灭活的全病毒,它们是用甲醛,β-丙内酯化学灭活的,或是以其它方式,如U.V.或热灭活的。优选所述抗原制剂或是断裂病毒制剂,或是从全病毒制备的亚单位抗原,特别是在断裂过程之后,通过纯化表面抗原而制备的。最优选断裂病毒制剂。
对于流感病毒制剂每株而言,血细胞凝集素抗原的浓度优选1000μg/ml,更优选3-300μg/ml,最优选约30μg/ml,这些是通过SRD测定法测量的。
本发明的疫苗还可进一步含有佐剂或免疫刺激剂,例如但不限制于任何来源的去毒脂质A和脂质A的无毒衍生物,皂苷,和其它能够刺激TH1型反应的试剂。
很早以前人们就已经知道了肠细菌脂多糖(LPS)是免疫系统的有效刺激剂,虽然它在佐剂中的使用已经由于其毒性作用而被禁止。LPS的无毒衍生物,即通过除去核心碳水化合物基团而产生的单磷酰基脂质A(MPL),和来源于还原性末端葡糖胺的磷酸酯已经由Ribi等描述(1986,细菌内毒素的免疫学和免疫药理学,Plenum Publ.Corp.,NY,p407-419),并具有下列结构:
MPL的其它去毒形式是通过除去二糖主链3-位的酰基链而产生的,被称作3-O-脱酰基化单磷酰基脂质A(3D-MPL)。它可通过GB2122204B中教导的方法纯化和制备,这篇参考文献还公开了二磷酰基脂质A及其3-O-脱酰基变体的制备。
3D-MPL的优选形式是含有粒径小于0.2μm的微小颗粒的乳液,其制造方法在WO94/21292中公开。含有单磷酰基脂质A和表面活性剂的含水制剂已经在WO9843670A2中描述。
在本发明组合物中配制的细菌性脂多糖衍生的佐剂可以是从细菌源纯化并加工的,或可选择性地,它们可以是合成的。例如,纯化的单磷酰基脂质A在Ribi等1986(supra)中描述,来源于沙门氏菌的3-O-脱酰基化单磷酰基或二磷酰基脂质A在GB2220211和US 4912094中描述。其它纯化及合成的脂多糖也已经描述过(Hilgers等,1986,Int.Arch.Allergy.Immunol.,79(4):392-6;Hilgers等,1987,Immunology,60(1):141-6;和EP0549074B1)。特别优选的细菌性脂多糖佐剂是3D-MPL。
因此,可用于本发明中的LPS衍生物是结构与LPS或MPL或3D-MPL相似的那些免疫刺激剂。另一方面,本发明的LPS衍生物可以是酰化的单糖,它是上述MPL结构的亚部分。
皂苷在Lacaille-Dubois,M和Wagner H.(1996.有关皂苷的生物和药理活性的评论,Phytomedicine vol 2 pp 363-386)中教导。皂苷是广泛分布在植物界和海洋动物界中的甾族化合物或三萜烯糖苷。皂苷可在水中形成胶体溶液,振摇时产生泡沫,而且可使胆固醇沉淀。当皂苷接近细胞膜时,它们在膜中产生孔样结构,导致膜破裂。红细胞溶血就是这种现象的一个例子,它是皂苷的某些,但非全部的性质。
皂苷被认为是用于全身给予的疫苗中的佐剂。现有技术中已经广泛研究了各种皂苷的佐剂和溶血活性(Lacaille-Dubois和Wagner)。例如,Quil A(来源于南美皂树的树皮)及其一部分已经在US5,057,540和“作为疫苗佐剂的皂苷”,Kensil,C.R.,Crit RevTherDrug Carrier Syst,1996,12(1-2):1-55;和EP 0 362 279 B1中描述。含有Quil A级分的颗粒状结构,也被称作免疫刺激复合物(ISCOMS)是溶血性的,而且已经用于制造疫苗(Morein,B.,EP 0109 942 B1;WO96/11711;WO96/33739)。溶血皂苷QS21和QS17(HPLC纯化的Quil A的级分)已经被描述为有效的系统佐剂,它们的生产方法在美国专利号5,057,540和EP 0 362 279 B1中描述。已经用于全身接种研究中的其它皂苷包括来源于其它植物种类,如丝石竹和肥皂草的那些(Bomford等,Vaccine,10(9):572-577,1992)。
增强系统包括无毒脂质A衍生物和皂苷衍生物的组合,特别是在WO94/00153中公开的QS21和3D-MPL的组合,或WO96/33739中公开的较少反应原性的组合物,其中QS21是用胆固醇猝灭的。
WO95/17210中描述了一种特别有效的佐剂制剂,它含有QS21和3D-MPL的水包油乳液,是一种优选的制剂。
因此,本发明其中一个实施方案提供一种疫苗,它含有用去毒的脂质A或脂质A的无毒衍生物作为佐剂,更优选用单磷酰基脂质A或其衍生物作为佐剂的本发明的流感抗原制剂。
优选所述疫苗还含有皂苷,更优选QS21。
优选所述制剂还含有水包油乳液。本发明还提供一种生产疫苗制剂的方法,包括把本发明的抗原制剂与药学上可接受的赋形剂,如3D-MPL混合。
本发明的疫苗还可含有至少一种表面活性剂,特别是非离子型表面活性剂。适宜的非离子型表面活性剂选自辛基-或壬基苯氧基聚氧乙醇(例如,市售的TritonTM系列),聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯(TweenTM系列)和通式(I)的聚氧乙烯醚或酯:
(I)HO(CH2CH2O)n-A-R
其中n为1-50,A是一个键或-C(O)-,R是C1-50的烷基或苯基C1-50烷基;和这些之中两个或多个的组合。
落在通式(I)范围之内的优选表面活性剂是n为4-24,更优选6-12,最优选9;R是C1-50,优选C4-C20烷基,最优选C12烷基。
辛基苯氧基聚氧乙醇和聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯在“表面活性剂系统”Eds:AttWood和Florence(1983,Chapman和Hall)中描述。辛基苯氧基聚氧乙醇(octoxynols),包括t-辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(Triton X-100TM)也在Merck Index Entry 6858(第1162页,12thEdition,Merck&Co.Inc.,Whitehouse Station,N.J.,USA;ISBN0911910-12-3)中描述。聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯,包括聚氧乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯(Tween 80TM)在Merck Index Entry 7742(第1308页,12th Edition,Merck & Co.Inc.,Whitehouse Station,N.J.,USA;ISBN 0911910-12-3)中描述。两者都是使用所述方法制造的,或从市场上,如Sigma Inc.购买的。
特别优选的非离子型表面活性剂包括Triton X-45,t-辛基苯氧基聚乙氧乙醇(Triton X-100),Triton X-102,Triton X-114,TritonX-165,Triton X-205,Triton X-305,Triton N-57,Triton N-101,Triton N-128,Breij 35,聚氧乙烯-9-十二烷基醚(laureth 9)和聚氧乙烯-9-硬脂酰基醚(steareth 9)。Triton X-100和laureth 9是特别优选的。还特别优选聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯,聚氧乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯(Tween 80TM)。
通式(I)其它适宜的聚氧乙烯醚选自:聚氧乙烯-8-硬脂酰基醚,聚氧乙烯-4-十二烷基醚,聚氧乙烯-35-十二烷基醚,和聚氧乙烯-23-十二烷基醚。
聚氧乙烯十二烷基醚的其它术语或名称在CAS目录中公开。聚氧乙烯-9-十二烷基醚的CAS目录号为:9002-92-0。聚氧乙烯醚,如聚氧乙烯十二烷基醚在Merck索引(12th ed:entry 7717,Merck &Co.Inc.,Whitehouse Station,N.J.,USA;ISBN 0911910-12-3)中描述。Laureth 9是通过使环氧乙烷与十二烷基醇反应形成的,平均具有9个氧化乙烯单位。
这里所述的疫苗制剂中可含有来源于所述不同表面活性剂组的两种或多种非离子型表面活性剂。具体而言,优选聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯,如聚氧乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯(Tween 80TM)和octoxynol,如t-辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(Triton)X-100TM的组合。其它特别优选的非离子型表面活性剂的组合包括laureth 9加聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯或octoxynol或两者。
非离子型表面活性剂,如上面讨论的那些在终产品疫苗组合物中的优选浓度如下:聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯,如Tween 80TM:0.01-1%,最优选约0.1%(w/v);辛基-或壬基-苯氧基聚氧乙醇,如TritonX-100TM或Triton系列的其它去污剂:0.001-0.1%,最优选0.005-0.02%(w/v);通式(I)的聚氧乙烯醚,如laureth 9:0.1-20%,优选0.1-10%,最优选0.1-1%或约0.5%(w/v)。
对于某些疫苗制剂而言,制剂中还可含有其它疫苗成分。本发明的制剂还可含有胆酸或其衍生物,特别是盐的形式。这些包括胆酸的衍生物及其盐,特别是胆酸的钠盐或胆酸的衍生物。胆酸及其衍生物的例子包括胆酸,脱氧胆酸,鹅去氧胆酸,石胆酸,熊去氧胆酸,猪去氧胆酸和衍生物,如前述胆酸的甘氨酸-,牛磺酸-,酰胺丙基-1-丙磺酸-,酰胺丙基-2-羟基-1-丙磺酸衍生物,或N,N-双(3D葡萄糖酸酰胺丙基)脱氧胆酰胺。特别优选的例子是脱氧胆酸钠(NaDOC),它可存在于终产品疫苗中。
本发明还提供含有疫苗给予装置的试剂盒,所述疫苗给予装置中填充有本发明的疫苗。这种给予装置包括,但不限制于针头装置,液体喷射装置,粉末装置和喷雾装置(鼻内用)。
本发明的流感病毒抗原制剂可通过常规的含胚卵方法产生,或通过组织培养,使病毒生长或表达重组流感病毒表面抗原的任何一种新的生产方法产生。病毒生长的适宜细胞底物包括,例如,狗肾细胞,如MDCK,或来源于MDCK克隆的细胞,MDCK-样细胞,猴肾细胞如AGMK细胞,包括Vero细胞,适宜的猪细胞系,或适于生产流感病毒疫苗的任何其它哺乳动物细胞类型。适宜的细胞底物还包括人类细胞,例如,MRC-5细胞。适宜的细胞底物不限制于细胞系;还包括原代细胞,如鸡胚成纤维细胞。
流感病毒抗原制剂可通过商业上应用的任何一种方法生产,例如在专利号DD 300 833和DD 211 444中描述的断裂流感病毒方法,这两篇文献引入此处作为参考。通常断裂流感病毒是使用溶剂/去污剂,如三-正-丁基磷酸酯,或二乙醚与TweenTM组(也称为“Tween-醚”断裂)处理产生的,而且该过程仍然用于某些生产设备中。现在所用的其它断裂剂包括去污剂或蛋白水解酶或胆酸盐,例如专利号DD 155 875中描述的脱氧胆酸钠,这篇文献引入此处作为参考。可用作断裂剂的去污剂包括阳离子型去污剂,如溴化十六烷基三甲铵,或非离子型去污剂,如上面描述的那些,包括Triton X-100(例如在L ina等,2000,Biologicals 28,95-103描述的方法中)和Triton N-101,或任意两种或多种去污剂的组合。
断裂疫苗的制备方法包括多个不同的过滤和/或其它分离步骤,如以各种不同方式组合的超速离心,超滤,区带离心和层析(例如,离子交换),以及任选的灭活步骤,例如加热,使用甲醛,或β-丙内酯或U.V.,这个步骤可在断裂之前或之后进行。断裂过程可分批进行,或按照连续或半-连续的过程进行。
本发明优选的断裂流感疫苗抗原制剂含有生产过程中保留的残余量的Tween 80和/或Triton X-100,尽管它们可在制备断裂抗原之后加入,或调节它们的浓度。优选Tween 80和Triton X-100同时存在。这些无毒表面活性剂在疫苗剂量中的最终浓度的优选范围是:Tween 80:0.01%-1%,更优选约0.1%(v/v)Triton X-100:0.001-0.1(%w/v),更优选0.005-0.02%(w/V)。
可选择性地,本发明的流感病毒抗原制剂可来源于除活流感病毒之外的来源,例如血细胞凝集素抗原可重组产生。
附图说明
图1表示按照实施例10中的方法接种14天后,采集动物的血液,并使用标准的血细胞凝集素测定法(HI)评估接种诱导的抗体滴度的结果。
图2表示按照实施例12中的方法所得的HI结果。
现在,在下列非限制性实施例中进一步描述本发明。
实施例
实施例1-使用α-生育酚琥珀酸酯作为没有防腐剂的疫苗(硫柳汞含量降低的疫苗)的稳定剂制备流感病毒抗原制剂
单价断裂疫苗是按照下列过程制备的。
病毒接种物的制备
在接种含胚卵当天,通过使工作接种物与磷酸盐缓冲盐水混合而制备新鲜的接种物,其中磷酸盐缓冲盐水含有0.5mg/ml的硫酸庆大霉素和25μg/ml的氢化可的松。(病毒株-依赖性的)。所述病毒接种物在2-8℃保持。
含胚卵的接种
使用9-11天的含胚卵进行病毒复制。净化卵壳。用0.2ml病毒接种物接种卵。将接种的卵在适宜温度下(病毒株-依赖性的)温育48-96小时。在温育阶段结束时,通过冷却杀死胚胎,并将卵在2-8℃贮藏12-60小时。
收获
收获冷冻含胚卵的尿囊液。通常,每只卵可收获8-10ml的粗制尿囊液。
来源于尿囊液的全病毒的浓缩和纯化
1.澄清
将收获的尿囊液通过中速离心(4000-14000g)而澄清。
2.吸附步骤
为了在澄清的病毒混合物中获得CaHPO4凝胶,根据病毒株的不同加入0.5mol/L Na2HPO4和0.5mol/L CaCl2溶液,使CaHPO4的终浓度达到1.5g-3.5g CaHPO4/升。
沉淀至少8小时后,除去上清液,然后根据所用CaHPO4量的不同,通过加入0.26mol/L EDTA-Na2溶液而再次溶解含有流感病毒的沉淀物。
3.过滤
将重悬浮的沉淀物在6μm滤过膜上过滤。
4.蔗糖梯度离心
以含有100μg/ml硫柳汞的线性蔗糖梯度(0.55%(w/v))通过等密度离心浓缩流感病毒。流速为8-15升/小时。
离心结束时,通过4个不同的级分回收转子的内含物(蔗糖是在折射计中测量的):
-级分1:55-52%的蔗糖
-级分2:大约52-38%的蔗糖
-级分3:38-20%的蔗糖*
-级分4:20-0%的蔗糖
*病毒株-依赖性的:级分3可降至15%的蔗糖。
对于其它疫苗制剂而言,仅使用级分2和3。
级分3是通过用磷酸盐缓冲液渗滤而洗涤的,以便把蔗糖含量降至大约低于6%。使该稀释级分中的流感病毒沉淀,从而除去可溶性污染物。
将沉淀重悬浮并完全混合,从而获得均匀的悬浮液。把级分2与级分3的重悬浮沉淀混合,加入磷酸盐缓冲液,使体积达到约40升。该产物是单价的全病毒浓缩物。
5.使用脱氧胆酸钠进行蔗糖梯度离心
将单价的全流感病毒浓缩物加入ENI-Mark II超速离心机。K3转子含有线性蔗糖梯度(0.55%(w/v)),此外还覆盖了脱氧胆酸钠梯度。在断裂过程中存在0.1%(w/v)的Tween 80,对于B株病毒而言,还加入了0.5mM生育酚琥珀酸酯。最高的脱氧胆酸钠浓度为0.7-1.5%(w/v),而且是毒株依赖性的。流速为8-15升/小时。
离心结束时,利用3个不同的级分回收转子的内含物(蔗糖是在折射计中测量的)。级分2用于进一步加工。各级分蔗糖含量的限度(47-18%)根据毒株不同而改变,并在评估后固定。
6.无菌过滤
断裂病毒级分是在0.2μm的滤过膜上过滤的。含有0.025%(w/v)Tween 80和(对于B株病毒而言)0.5mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲液可用于进行稀释。滤过后的级分2的终体积是该级分原体积的5倍。
7.灭活
将过滤的单价物质在22±2℃至多温育84小时(根据病毒株的不同,可缩短温育时间)。然后加入含有0.025%(w/v)Tween 80的磷酸盐缓冲液,使总蛋白含量降至最高250μg/ml。对于B株病毒而言,则使用含有0.025%(w/v)Tween 80和0.25mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲盐水进行稀释,使总蛋白含量降至250μg/ml。加入甲醛至50μg/ml的终浓度,20℃±2℃灭活至少72小时。
8.超滤
在带有20kDa MWCO醋酸纤维素膜的超滤装置中,将灭活的断裂病毒物质浓缩至少2倍。然后用含有0.025%(w/v)TWeen 80的磷酸盐缓冲液洗涤该物质,接着用含有0.01%(w/v)Tween 80的磷酸盐缓冲盐水洗涤。对于B株病毒而言,则使用含有0.01%(w/v)Tween 80和0.1mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲盐水进行洗涤。
9.最后的无菌过滤
超滤后的物质是在0.2μm的滤过膜上过滤的。清洗滤过膜,如果需要,使用含0.01%(w/v)TWeen 80和(对于B株病毒而言)0.1mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲盐水稀释该物质,使蛋白浓度不超过500μg/ml。
10.贮藏
将最终的单价疫苗在2-8℃最多贮藏18个月。
稳定性
表1.通过SRD对最终的单价疫苗中的时间依赖性HA含量(μg/ml)进行的比较
病毒株 | 稳定剂 | 产生后 | 30℃4周 | 2-8℃6个月 | 2-8℃12个月 |
B/Yamanashi/166/98 | 生育酚琥珀酸酯(残留的汞3μg/ml) | 169 | 139(82%) | 172(>100%) | ND |
B/Yamanashi/166/98 | 硫柳汞(108μg/ml) | 192 | 160(83%) | 186(97%) | 178(93%) |
B/Yamanashi/166/98 | 无(残留的汞3μg/ml) | 191 | 122(60%) | 175(92%) | 154(81%) |
B/Johannesburg/5/99 | 生育酚琥珀酸酯(残留的汞4μg/ml) | 166 | 183(>100%) | 158(95%) | 179(>100%) |
B/Johannesburg/5/99 | 生育酚琥珀酸酯(残留的汞4μg/ml) | 167 | 179(>100%) | 158(95%) | 178(>100%) |
B/Johannesburg/5/99 | 生育酚琥珀酸酯(残留的汞3μg/ml) | 144 | 151(>100%) | 130(90%) | 145(>100%) |
B/Johannesburg/5/99* | 硫柳汞 | 159 | ND | 172(>100%) | 154(97%) |
B/Johannesburg/5/99** | 无 | 169 | 107(63%) | 153(90%) | ON |
*按照许可的FLUARIXTM生产的,**按照实施例1生产的,但没有生育酚琥珀酸酯,ON:正在进行的,ND:没有测出
实施例2-使用α-生育酚琥珀酸酯作为硫柳汞含量降低的疫苗的稳定剂制备流感疫苗
三个病毒株,A/New Caldonia/20/99(H1N1)IV-116,A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir-17和B/Yamanashi/166/98的最终的单价疫苗是按照实施例1描述的方法生产的。
混合
将适量的最终的单价疫苗分别与终HA浓度为30μg/ml的A/NewCaldonia/20/99(H1N1)IVR-116,A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir-17,和终HA浓度为39μg/ml的B/Yamanashi/166/98混合。分别把Tween 80和Triton X-100调节至580μg/ml和90μg/ml。用磷酸盐缓冲盐水把终体积调节至3升。用0.8μm的醋酸纤维素膜过滤三价混合物,获得最终的三价疫苗。把最终的三价疫苗填充到注射器中,每支至少0.5mL。
表2.通过SRD测量的,从注射器回收的最终的三价疫苗中,时间依赖性HA含量的比较
疫苗制剂 | 病毒株 | 0个月 | 2个月 | 4个月 | 6个月 |
没有稳定剂的流感疫苗 | A/NCal/20/99 | 33(32-34) | 32(31-33) | 36(34-38) | 31(30-32) |
A/Pan/2007/99 | 29(27-31) | 31(28-34) | 34(32-36) | 32(31-33) | |
B/Yam/166/98 | 36(34-38) | 33(32-34) | 32(30-34) | 31(29-33) | |
含有α-生育酚琥珀酸酯的流感疫苗 | A/NCal/20/99 | 31(30-32) | 32(31-33) | 36(34-38) | 32(31-33) |
含有α-生育酚琥珀酸酯的流感疫苗 | A/Pan/2007/99 | 33(30-36) | 33(30-36) | 36(35-37) | 33(31-35) |
B/Yam/166/98 | 37(35-39) | 36(34-38) | 38(35-41) | 36(33-39) |
实施例3-用于测量血细胞凝集素含量的SRD方法
用琼脂糖凝胶包被玻璃平板(12.4-10.0cm),该琼脂糖凝胶含有NIBSC推荐的浓度的抗-流感HA血清。凝胶凝固后,将72样品孔(3mm)用力压到琼脂糖中。把10微升参照物和样品的适当稀释物装到孔中。在保湿室中室温(20-25℃)温育平板24小时。之后,用NaCl-溶液浸泡平板过夜,并在蒸馏水中简单洗涤。然后压缩凝胶并干燥。完全干燥时,将该平板在考马斯亮蓝溶液中染色10分钟,在甲醇和醋酸的混合物中褪色两次,直至见到清晰的染色区。干燥平板后,在成直角的两个方向上,测量抗原孔周围的染色区直径。或者,可使用测量表面的装置。建立抗原稀释度对表面的剂量-反应曲线,并按照标准斜率测定法计算结果(Finney,D.J.(1952).Statistical Methods inBiological Assay.London:Griffin,Quotedin:Wood,JM等(1977).J.Biol.Standard.5,237-247)。
实施例4-α-生育酚稳定的流感疫苗(硫柳汞含量降低)的临床试验
使用按照实施例2所述获得的注射器进行临床试验
H3N2:A/Panama/2007/99 RESVIR-17
H1N1:A/New Caledonia/20/99(H1N1)IVR-116
B:B/Yamanashi/166/98
表3
18-60岁的成人 | |||||||
硫柳汞含量降低的 | 加上硫柳汞 | ||||||
H3N2 | H1N1 | B | H3N2 | H1N1 | B | ||
接种前 | GMT | 47 | 41 | 111 | 55 | 37 | 102 |
滴度<10[%] | 10.3% | 13.8% | 1.7% | 5.3% | 12.3% | 8.8% | |
滴度≥40,SPR[%] | 60.3% | 55.2% | 75.9% | 70.2% | 52.6% | 75.4% | |
接种后 | 血清转变率[%] | 10.3% | 13.8% | 1.7% | 5.3% | 12.3% | 8.8% |
抗体滴度显著增加[%] | 58.6% | 74.1% | 58.6% | 63.2% | 73.7% | 52.6% | |
血清转变[%] | 58.6% | 74.1% | 58.6% | 63.2% | 73.7% | 52.6% | |
GMT | 328 | 525 | 766 | 324 | 359 | 588 | |
GMT倍数 | 7.3 | 13.0 | 6.9 | 5.9 | 9.8 | 5.9 | |
滴度≥40,SPR[%] | 100.0% | 100.0% | 100.0% | 100.0% | 100.0% | 100.0% |
n.d.=C.I,比例p=n/N没有定义,因为p*(1-p)*N<9
n/N=作为(亚)人群(N)受试者数一部分的反应者(n),即,血清转变或显著增加,还可见:CPMAP/BWP/214/96,1997年3月12日,p.17ff
GMT=几何平均滴度,倒数
95%C.I.=95%置信区间,
SPR=血清保护率:接种前或接种后,保护滴度≥40的受试者比例
滴度=HI-抗体滴度
血清转变率=抗体从接种前<10到接种后≥40的受试者比例
GMT倍数=GMT增加的倍数
显著增加=接种前抗体滴度≥10到接种后抗体增加4倍(滴定的两个步骤)的受试者比例
req.=EU要求
血清转变=neg到pos或g.e.4-倍(neg:滴度<10,pos:滴度:≥40)=血清转变(<10到≥40)或显著增加的受试者比例
结果表明,所述疫苗能够提供与含有硫柳汞作为防腐剂的疫苗相等的保护。
实施例5a-使用α-生育酚琥珀酸酯作为没有硫柳汞的疫苗的稳定剂制备流感病毒抗原制剂
单价断裂疫苗是按照下列过程制备的。
病毒接种物的制备
在接种含胚卵当天,通过把接种工作物与磷酸盐缓冲盐水混合而制备新鲜的接种物,其中磷酸盐缓冲盐水含有0.5mg/ml的硫酸庆大霉素和25μg/ml的氢化可的松。(病毒株-依赖性的)。所述病毒接种物在2-8℃保持。
含胚卵的接种
使用9-11天的含胚卵进行病毒复制。净化卵壳。用0.2ml病毒接种物接种卵。将60,000个接种卵在适宜的温度下(病毒株-依赖性的)温育48-96小时。在温育阶段结束时,通过冷却杀死胚胎,并将卵在2-8℃贮藏12-60小时。
收获
收获冷冻含胚卵的尿囊液。通常,每只卵可收获8-10ml的粗尿囊液。
来源于尿囊液的全病毒的浓缩和纯化
澄清
将收获的尿囊液通过中速离心(4000-14000g)而澄清。
沉淀步骤
把饱和磷酸铵溶液加入到澄清的病毒混合物中,使硫酸铵终浓度达到0.5mol/L。沉淀至少1小时后,通过在深度滤器(通常为0.5μm)上过滤而除去沉淀物。
过滤
将澄清的粗制全病毒在具有有效无菌膜(通常为0.2μm)的滤过膜上过滤。
超滤
将无菌过滤的粗制单价全病毒在带有1000kDa MWCO BIOMAXTM膜的盒上浓缩至少6倍。把浓缩的存留物用磷酸盐缓冲盐水洗涤至少1.8倍。
蔗糖梯度离心
以线性蔗糖梯度(0.55%(w/v))通过等密度离心浓缩流感病毒。流速为8-15升/小时。
离心结束时,通过4个不同的级分回收转子的内含物(蔗糖是在折射计中测量的):
-级分1:55-52%的蔗糖
-级分2:大约52-38%的蔗糖
-级分3:38-20%的蔗糖*
-级分4:20-0%的蔗糖
*病毒株-依赖性的:级分3可降至15%的蔗糖。
对于其它疫苗制剂而言,或者仅使用级分2或者使用级分2和进一步纯化的级分3。
级分3是通过用磷酸盐缓冲液渗滤而洗涤的,以便把蔗糖含量降至大约低于6%。任选地,可省略该步骤。使该稀释级分中的流感病毒沉淀,从而除去可溶性污染物。
将沉淀重悬浮并完全混合,从而获得均匀的悬浮液。把级分2与级分3的重悬浮沉淀混合,加入磷酸盐缓冲液,使体积达到约40升。该产物是单价的全病毒浓缩物。
使用脱氧胆酸钠进行蔗糖梯度离心
将单价的全流感病毒浓缩物加入ENI-Mark II超速离心机。K3转子含有线性蔗糖梯度(0.55%(w/v)),此外还覆盖了脱氧胆酸钠梯度。在断裂过程中存在0.1%(w/v)的Tween 80,对于B株病毒而言,加入0.5mM生育酚琥珀酸酯。最高的脱氧胆酸钠浓度为0.7-1.5%(w/v),而且是毒株依赖性的。流速为8-15升/小时。
离心结束时,利用3个不同的级分回收转子的内含物(蔗糖是在折射计中测量的)。级分2用于进一步加工。各级分蔗糖含量的限度(47-18%)根据毒株不同而改变,并在评估后固定。
无菌过滤
断裂病毒级分是在0.2μm的滤过膜上过滤的。含有0.025%(w/v)Tween 80和(对于B株病毒而言)0.5mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲液可用于进行稀释。滤过后的级分2的终体积是该级分原体积的5倍。
灭活
将过滤的单价物质在22±2℃至多温育84小时(根据病毒株的不同,可缩短温育)。然后加入含有0.025%(w/v)Tween 80的磷酸盐缓冲液,使总蛋白含量降至最高450μg/ml。对于B株病毒而言,则使用含有0.025%(w/v)Tween 80和0.25mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲盐水进行稀释,使总蛋白含量降至450μg/ml。加入甲醛至100μg/ml的终浓度,20℃±2℃灭活至少72小时。
超滤
在带有20kDa MWCO的醋酸纤维素膜的超滤装置中,将灭活的断裂病毒物质浓缩至少2倍。然后用含有0.025%(w/v)Tween 80的磷酸盐缓冲液洗涤该物质,接着用含有0.01%(w/v)Tween 80的磷酸盐缓冲盐水洗涤。对于B株病毒而言,则使用含有0.01%(w/v)Tween 80和0.1mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲盐水进行洗涤。
最后的无菌过滤
超滤后的物质是在0.2μm的滤过膜上过滤的。清洗滤过膜,如果需要,使用含0.01%(w/v)Tween 80和对于B株系病毒而言的0.1mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲盐水稀释该物质,使蛋白浓度不超过500μg/ml。
贮藏
将最终的单价疫苗在2-8℃最多贮藏18个月。
稳定性
表4.通过SRD对最终的单价疫苗中的时间依赖性HA含量(μg/ml)进行的比较
毒株 | 稳定剂 | 产生后 | 30℃4周 | 2-8℃6个月 |
B/Johannesburg/5/99 | 生育酚琥珀酸酯 | 214 | 196(92%) | 206(96%) |
B/Johannesburg/5/99** | 无 | 169 | 107(63%) | 153(90%) |
**按照实施例1生产的,没有生育酚琥珀酸酯。
实施例5b-使用α-生育酚琥珀酸酯作为没有硫柳汞的疫苗的稳定剂制备流感病毒抗原制剂
优选的实施例5a方法的改进如下:
收获全病毒之后是沉淀步骤(硫酸铵沉淀)。然后是澄清步骤,其中流体是通过中速离心(4000-14000g)澄清的。因此,与实施例5a相比,沉淀和澄清步骤是的顺序相反的。
无菌过滤,超滤和超速离心(蔗糖梯度离心)步骤是按照实施例5a进行的。然而,无需对由超速离心步骤产生的部分再加工。
本过程中的其余步骤与实施例5a描述的相同。
因此,本实施例的概括过程如下:
收获
沉淀(硫酸铵)
澄清
无菌过滤
超滤
超速离心
断裂(优选脱氧胆酸钠)
无菌过滤
灭活
超滤
最终的无菌过滤
实施例5a的另外一个优选变化包括第一次无菌过滤之前的预过滤步骤。其中使用的是不能无菌过滤,但能在无菌过滤之前,除去污染物,如白蛋白的膜。这样所得的产率更高。进行预过滤的适宜膜约为0.8-1.8μm,例如1.2μm。预过滤步骤可在实施例5a或实施例5b的方案中使用。
实施例6-使用α-生育酚琥珀酸酯作为没有硫柳汞的疫苗的稳定剂制备流感病毒抗原制剂
三个病毒株,A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR-116,A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir-17和B/Yamanashi/166/98的最终的单价疫苗是按照实施例5描述的方法生产的。
混合
将适量的最终的单价疫苗分别与终HA浓度为30μg/ml的A/NewCaldonia/20/99(H1N1)IVR-116,A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir-17,和终HA浓度为36μg/ml的B/Johannesburg/5/97混合。分别把Tween 80和Triton X-100调节至580μg/ml和90μg/ml。用磷酸盐缓冲盐水把终体积调节至3升。用0.8μm的醋酸纤维素膜过滤三价混合物,获得最终的三价疫苗。把最终的三价疫苗填充到注射器中,每支至少0.5mL。
表5.通过SRD对最终的三价疫苗的时间依赖性HA含量(μg/ml)进行的比较
疫苗制剂 | 毒株 | 0个月 | 30℃4周 | 2-8℃ 6个月 |
没有稳定剂的流感疫苗 | A/NCa1/20/99 | 31 | 32 | 30 |
A/Pan/2007/99 | 31 | 34 | 33 | |
B/Joh/5/99* | 35 | 25 | 31 | |
含有α-生育酚琥珀酸酯的流感疫苗 | A/NCa1/20/99 | 34 | 35 | 34 |
A/Pan/2007/99 | 33 | 33 | 34 | |
B/Joh/5/99* | 29 | 23 | 28 |
*制剂是以39μg/ml的目标浓度为基础的。**制剂是以34μg/ml的目标浓度为基础的。
实施例7-使用十二烷基硫酸钠作为没有防腐剂的疫苗(硫柳汞含量降低的疫苗)的稳定剂制备流感病毒抗原制剂
B/Johannesburg/5/99的单价全病毒浓缩物是按照实施例1所述获得的
使用脱氧胆酸钠进行蔗糖梯度离心
将单价的全流感病毒浓缩物加入ENI-Mark II超速离心机。K3转子含有线性蔗糖梯度(0.55%(w/v)),此外还覆盖了脱氧胆酸钠梯度。在断裂过程中存在0.1%(w/v)的Tween 80。最高的脱氧胆酸钠浓度为0.7-1.5%(w/v),而且是毒株依赖性的。流速为8-15升/小时。
离心结束时,利用3个不同的级分回收转子的内含物(蔗糖是在折射计中测量的)。级分2用于进一步加工。各级分蔗糖含量的限度(47-18%)根据毒株不同而改变,并在评估后固定。
无菌过滤
取10ml级分2的样品进行进一步的加工。断裂病毒级分是在0.2μm的滤过膜上过滤的。含有0.025%(w/v)Tween 80和0.5mM十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲液可用于进行稀释。滤过后的级分2的终体积是该级分原体积的5倍。
灭活
将过滤的单价物质在22±2℃至多温育84小时(根据病毒株的不同,可缩短温育时间)。然后加入含有0.025%(w/v)Tween 80和0.5mM十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲液,使总蛋白含量降至最高250μg/ml。加入甲醛至50μg/ml的终浓度,20℃±2℃灭活至少72小时。
超滤
在带有20kDa MWCO的醋酸纤维素膜的超滤装置中,将灭活的断裂病毒物质浓缩至少2倍。然后用4个体积含有0.01%(w/v)Tween 80和0.5mM十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲盐水洗涤该物质。
最后的无菌过滤
超滤后的物质是在0.2μm的滤过膜上过滤的。清洗滤过膜,如果需要,使用含0.01%(w/v)Tween 80和0.5mM十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲盐水稀释该物质,使蛋白浓度不超过500μg/ml。
贮藏
最终的单价疫苗在2-8℃贮藏。
表7.通过SRD测量的最终的单价疫苗的时间依赖性HA含量的比较
稳定剂 | 产生后 | 30℃4周 | |
B/Johannesburg/5/99 | 无 | 182 | 139(77%) |
B/Johannesburg/5/99 | 十二烷基硫酸钠 | 288 | 264(92%) |
*按照实施例7生产的,没有加入十二烷基硫酸钠。
实施例8-使用Plantacare或Laureth-9作为没有防腐剂的疫苗(硫柳汞含量降低的疫苗)的稳定剂制备流感病毒抗原制剂
B/Yamanashi/166/98的单价全病毒浓缩物是按照实施例1所述获得的片段化
用pH7.4的磷酸盐缓冲盐水把单价全流感病毒的浓缩物稀释至蛋白浓度为1,000μg/ml。加入Plantacare2000 UP或Laureth-9至1%(w/v)的终浓度。轻轻混合该物质30分钟。然后将该物质覆盖在桶中的蔗糖垫15%(w/w)上。25,000rpm和20℃,在Beckman甩出式转子SW28中超速离心2小时。
无菌过滤
取上清液进行进一步的加工。将断裂病毒级分在0.2μm的滤过膜上过滤。
灭活
如果需要,加入磷酸盐缓冲盐水,从而使总蛋白含量降至最高500μg/ml。加入甲醛至100μg/ml的终浓度,20℃±2℃灭活至少6天。
超滤
在灭活物质中将Tween 80和Triton X 100分别调节至0.15%和0.02%。在带有30kDa MWCO的醋酸纤维素膜的超滤装置中,将灭活的断裂病毒物质浓缩至少2倍。然后,用4个体积的磷酸盐缓冲盐水洗涤该物质。
最后的无菌过滤
将超滤后的物质在0.2μm的滤过膜上过滤。清洗滤过膜,然后使用磷酸盐缓冲盐水稀释该物质,使蛋白浓度不超过500μg/ml。
贮藏
最终的单价疫苗在2-8℃贮藏。
表8.通过SRD测量的最终的单价疫苗的时间依赖性HA含量的比较
稳定剂 | 产生后 | 30℃4周 | |
B/Yamanashi/166/98 | 无 | 143 | 98(68%) |
B/Yamanashi/166/98 | Plantacare2000 UP | 476 | 477(100%) |
B/Yamanashi/166/98 | Laureth-9 | 468 | 494(>100%) |
实施例9-老年组中经由ID和IM给予的α-生育酚稳定的流感疫苗(硫抑汞含量降低的疫苗)的临床试验
A流感病毒抗原制剂的制备
单价断裂疫苗是按照下列过程制备的。
病毒接种物的制备
在接种含胚卵当天,通过使工作接种物与磷酸盐缓冲盐水混合而制备新鲜的接种物,其中磷酸盐缓冲盐水含有0.5mg/ml的硫酸庆大霉素和25μg/ml的氢化可的松。(病毒株-依赖性的)。所述病毒接种物在2-8℃保持。
含胚卵的接种
使用9-11天的含胚卵进行病毒复制。净化卵壳。用0.2ml病毒接种物接种卵。将接种的卵在适宜温度下(病毒株-依赖性的)温育48-96小时。在温育阶段结束时,通过冷却杀死胚胎,并将卵在2-8℃贮藏12-60小时。
收获
收获冷冻含胚卵的尿囊液。通常,每只卵可收获8-10ml的粗尿囊液。
来源于尿囊液的全病毒的浓缩和纯化
1.澄清
将收获的尿囊液通过中速离心(4000-14000g)而澄清。
2.吸附步骤
为了在澄清的病毒混合物中获得CaHPO4凝胶,根据病毒株的不同加入0.5mol/L Na2HPO4和0.5mol/L CaCl2溶液,使CaHPO4的终浓度达到1.5g-3.5g CaHPO4/升。
沉淀至少8小时后,除去上清液,然后根据所用CaHPO4量的不同,通过加入0.26mol/L EDTA-Na2溶液而再次溶解含有流感病毒的沉淀物。
3.过滤
将重悬浮的沉淀物在6μm滤过膜上过滤。
4.蔗糖梯度离心
以含有100μg/ml硫柳汞的线性蔗糖梯度(0.55%(w/v))通过等密度离心浓缩流感病毒。流速为8-15升/小时。
离心结束时,通过4个不同的级分回收转子的内含物(蔗糖是在折射计中测量的):
-级分1:55-52%的蔗糖
-级分2:大约52-38%的蔗糖
-级分3:38-20%的蔗糖*
-级分4:20-0%的蔗糖
*病毒株-依赖性的:级分3可降至15%的蔗糖。
对于其它疫苗制剂而言,仅使用级分2和3。
级分3是通过用磷酸盐缓冲液渗滤而洗涤的,以便把蔗糖含量降至大约低于6%。使该稀释级分中的流感病毒沉淀,从而除去可溶性污染物。
将沉淀重悬浮并完全混合,从而获得均匀的悬浮液。把级分2与级分3的重悬浮沉淀混合,加入磷酸盐缓冲液,使体积达到约40升,这个体积适于120,000个卵/批。该产物是单价的全病毒浓缩物。
5.使用脱氧胆酸钠进行蔗糖梯度离心
将单价的全流感病毒浓缩物加入ENI-Mark II超速离心机。K3转子含有线性蔗糖梯度(0.55%(w/v)),此外还覆盖了脱氧胆酸钠梯度。在断裂过程中存在0.1%(w/v)的Tween 80,对于B株病毒而言,还加入了0.5mM生育酚琥珀酸酯。最高的脱氧胆酸钠浓度为0.7-1.5%(w/v),而且是毒株依赖性的。流速为8-15升/小时。
离心结束时,利用3个不同的级分回收转子的内含物(蔗糖是在折射计中测量的)。级分2用于进一步加工。各级分蔗糖含量的限度(47-18%)根据毒株不同而改变,并在评估后固定。
6.无菌过滤
断裂病毒级分是在0.2μm的滤过膜上过滤的。含有0.025%(w/v)Tween 80和(对于B株病毒而言)0.5mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲液可用于进行稀释。滤过后的级分2的终体积是该级分原体积的5倍。
7.灭活
将过滤的单价物质在22±2℃至多温育84小时(根据病毒株的不同,可缩短温育时间)。然后加入含有0.025%(w/v)Tween 80的磷酸盐缓冲液,使总蛋白含量降至最高250μg/ml。对于B株病毒而言,则使用含有0.025%(w/v)Tween 80和0.25mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲盐水进行稀释,使总蛋白含量降至250μg/ml。加入甲醛至50μg/ml的终浓度,20℃±2℃灭活至少72小时。
8.超滤
在带有20kDa MWCO的醋酸纤维素膜的超滤装置中,将灭活的断裂病毒物质浓缩至少2倍。然后用含有0.025%(w/v)Tween 80的磷酸盐缓冲液洗涤该物质,接着用含有0.01%(w/v)Tween 80的磷酸盐缓冲盐水洗涤。对于B株病毒而言,则使用含有0.01%(w/v)Tween 80和0.1mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲盐水进行洗涤。
9.最后的无菌过滤
超滤后的物质是在0.2μm的滤过膜上过滤的。清洗滤过膜,如果需要,使用含0.01%(w/v)Tween 80和(对于B株病毒而言)0.1mM生育酚琥珀酸酯的磷酸盐缓冲盐水稀释该物质,使蛋白浓度不超过1,000μg/ml,使血细胞凝集素的浓度超过180μg/ml。
10.贮藏
将最终的单价疫苗在2-8℃最多贮藏18个月。
B流感疫苗的制备
三个病毒株,A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR-116,A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir-17和B/Johannesburg/5/99的最终的单价疫苗是按照上面部分A描述的方法生产的。
混合
将适量的最终的单价疫苗分别与终HA浓度为60μg/ml的A/NewCaldonia/20/99(H1N1)IVR-116,A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir-17,和终HA浓度为68μG/ml的B/Johannesburg/5/99混合。分别把Tween 80,Triton X-100和生育酚琥珀酸酯调节至1,000μg/ml,110μg/ml和160μg/ml。用磷酸盐缓冲盐水把终体积调节至3升。用0.8μm的醋酸纤维素膜过滤三价混合物,获得最终的三价疫苗。把最终的三价疫苗填充到注射器中,每支至少0.165mL。
疫苗的给予
疫苗是在预先填充的注射器中提供的,并在三角肌区皮内给予。皮内(ID)注射用针在EP1092444中描述,它具有一个皮肤刺入限制器,从而确保适当的皮内注射。注射部位形成的风团(斑块)证实了ID给药的良好质量,研究人员测量了接种30分钟后,受试者风团的准确大小。
一剂(100μl)含有下列成分:
3个流感毒株的血细胞凝集素 | ||
A/NEW CALEDONIA/20/99 | : | 6.0μg |
A/PANAMA/2007/99 | : | 6.0μg |
B/JOHANNESBURG 5/99 | : | 6.0μg |
硫柳汞防腐剂 | : | 0.4μg-0.8μg |
B.将上述疫苗与标准的三价断裂流感疫苗FluarixTM进行比较:
Fluarix疫苗是在预先填充的注射器中提供的,并在三角肌区肌内给予。所用针头的长度至少为2.5cm/l英寸(23号),以便确保适当的肌内注射。
一剂(0.5ml)含有下列成分:
3个流感毒株的血细胞凝集素 | ||
A/NEW CALEDONIA/20/99 | : | 15.0μg |
A/PANAMA/2007/99 | : | 15.0μg |
B/JOHANNESBURG 5/99 | : | 15.0μg |
硫柳汞防腐剂 | : | 50.0μg |
结果
给予疫苗时,全部分组的平均年龄为70.4±6.2岁标准偏差(S.D.),女性/男性的比例为1.7∶1。
免疫原性结果:衍生的免疫原性变量的分析如下: | ||||||||
变量 | Flu-red ID(N=65) | FluarixTM IM(N=65) | ||||||
GMT | GMT | LL | UL | GMT | LL | UL | ||
A/NEW CALEDONIA | PRE | 99.5 | 76.9 | 128.7 | 90.0 | 70.1 | 115.7 | |
POST | 165.1 | 129.2 | 211.0 | 174.3 | 133.3 | 227.9 | ||
A/PANAMA | PRE | 75.5 | 54.7 | 104.2 | 69.2 | 51.9 | 92.4 | |
POST | 128.6 | 99.1 | 166.8 | 164.3 | 126.0 | 214.1 | ||
B/JOHANNESBURG | PRE | 236.0 | 187.7 | 296.8 | 222.6 | 176.9 | 280.2 | |
POST | 341.2 | 276.0 | 421.7 | 402.4 | 312.1 | 518.9 | ||
血清转变率 | % | LL | UL | % | LL | UL | ||
A/NEW CALEDONIA | 15.4 | 7.6 | 26.5 | 18.5 | 9.9 | 30.0 |
A/PANAMA | 20.0 | 11.1 | 31.8 | 29.2 | 18.6 | 41.8 | ||
B/JOHANNESBURG | 9.2 | 3.5 | 19.0 | 16.9 | 8.8 | 28.3 | ||
换算因数 | GMR | LL | UL | GMR | LL | UL | ||
A/NEW CALEDONIA | 1.7 | 1.4 | 2.0 | 1.9 | 1.6 | 2.3 | ||
A/PANAMA | 1.7 | 1.4 | 2.1 | 2.4 | 1.9 | 3.0 | ||
B/JOHANNESBURG | 1.4 | 1.2 | 1.7 | 1.8 | 1.5 | 2.1 | ||
血清保护率 | % | LL | UL | % | LL | UL | ||
A/NEW CALEDONIA | PRE | 87.7 | 77.2 | 94.5 | 90.8 | 81.0 | 96.5 | |
POST | 92.3 | 83.0 | 97.5 | 96.9 | 89.3 | 99.6 | ||
A/PANAMA | PRE | 75.4 | 63.1 | 85.2 | 81.5 | 70.0 | 90.1 | |
POST | 90.8 | 81.0 | 96.5 | 93.8 | 85.0 | 98.3 | ||
B/JOHANNESBURG | PRE | 98.5 | 91.7 | 100.0 | 96.9 | 89.3 | 99.6 | |
POST | 100.0 | 94.5 | 100.0 | 98.5 | 91.7 | 100.0 | ||
N:具有有效结果的受试者数;%:在规定参数内的受试者百分比;LL/UL:95%CI的下限和上限;Pre:在给予疫苗的时候;Post:给予疫苗后21天 |
据报道,有10/65(15.4%)的疫苗接种者出现注射部位疼痛,这是FluarixTMIM给药的最普遍症状。在ID组中,有3/65(4.6%)的疫苗接种者出现疼痛。这种差异在统计学上是显著的(p=0.038;Fisher精确检验)。因此,优选ID递送硫柳汞含量降低的产品。
结论
在老年组中,硫柳汞含量降低的流感疫苗的ID和IM给予可提供100%血清保护。
就几何平均滴度,血清保护率,血清转变率和换算因数而言,在IM和ID接种个体中,都可见到对接种的可比较反应,其中ID组接受了少于2.5倍的抗原。在两个治疗组中,在与疫苗有关的诱导/非诱导性全身症状的整个发病率方面,没有可辨别的差异。
实施例10-硫柳汞含量降低的疫苗的皮内递送
按照实施例9所述(区别在于,混合是独立进行的,且疫苗没有填充到注射器中)制备的硫柳汞含量降低的断裂流感疫苗的免疫原性是使用标准针头在豚鼠中通过ID递送而评估的。
给每组中的5只动物用完全灭活的三价流感病毒鼻内给药,其中所述完全灭活的三价流感病毒在200μl的总体积中含有5μgHA。激发28天后通过皮内或肌内途径接种动物。皮内剂量在0.1ml中含有0.1,0.3,或1.0μg三价,硫柳汞含量降低的断裂流感病毒,使用标准针头在豚鼠背部给药。肌内剂量在0.1ml的体积中含有10μg三价,硫柳汞含量降低的断裂流感病毒,在豚鼠的后腿给药。各组如下:
1组-0.1μg三价,硫柳汞含量降低的断裂流感病毒ID;
2组-0.3μg三价,硫柳汞含量降低的断裂流感病毒ID;
3组-1.0μg三价,硫柳汞含量降低的断裂流感病毒ID
4组-1.0μg三价,硫柳汞含量降低的断裂流感病毒IM
接种14天后,采集动物的血液,并使用标准的血细胞凝集素测定法(HI)评估接种诱导的抗体滴度。结果在图1表示。对所有三个毒株的强烈HI反应都是由接种诱导的。没有见到明显的剂量反应,表明当通过ID途径给药时,非常低剂量的,硫柳汞含量降低的抗原仍然能够诱导非常有效的HI抗体反应。通过ID或IM接种诱导的HI滴度之间没有显著性差异。因此,在豚鼠中获得的结果证实,ID途径与IM途径相比,硫柳汞含量降低的三价断裂流感抗原可在动物中诱导相似水平的HI抗体。
实施例11-硫柳汞含量降低的,含有佐剂的流感疫苗的皮内递送
在第0天,用含有5μg三价全灭活流感病毒的200μl疫苗鼻内给予豚鼠而进行激发。
接种-第28天-按照实施例9所述,制备每株三价断裂流感病毒含有0.1μgHA的疫苗(区别在于:混合步骤导致1.0μg/ml的终抗原浓度,从而给予和实施例9中60μg/ml相比,0.1μg/100μl的剂量)。含佐剂或不含佐剂,最终的三价制剂是用结核菌素注射器皮内给予100μl。
放血-第42天
加入佐剂的作用是利用HI测定法测量抗体反应而评估的(第0,28,42天)。
所有ID实验都是用标准注射用针进行的。
结果
G1-G5是指5组豚鼠,每组5只。
G1断裂,三价,硫柳汞含量降低的,0.1μg
G2断裂,三价,硫柳汞含量降低的,0.1μg+3D-MPL 50μg
G3断裂,三价,硫柳汞含量降低的,0.1μg+3D-MPL 10μg
G4断裂,三价,硫柳汞含量降低的,0.1μg+3D-MPLin 50μg+QS21 50μg
G5断裂,三价,硫柳汞含量降低的,0.1μg+3D-MPLin 10μg+QS21 10μg
3D+MPLin+QS21是指一种佐剂制剂,它包括含胆固醇的单层脂质体,具有含二油酰基磷脂酰胆碱的脂质双层,其中QS21和3D-MPL与脂质双层相连,或包埋在脂质双层内。这种佐剂制剂在EP 0 822 831B中描述,这篇文献公开的内容引入此处作为参考。
HI滴度抗-A/New Caledonia/20/99
NC | 免疫前 | 加强前 | 加强后 |
G1 | 5 | 10 | 92 |
G2 | 5 | 10 | 70 |
G3 | 5 | 11 | 121 |
G4 | 7 | 9 | 368 |
G5 | 5 | 10 | 243 |
HI滴度抗-A/Panama/2007/99
P | 免疫前 | 加强前 | 加强后 |
G1 | 5 | 485 | 7760 |
G2 | 5 | 279 | 7760 |
G3 | 5 | 485 | 8914 |
G4 | 7 | 485 | 47051 |
G5 | 5 | 320 | 17829 |
HI滴度抗-B/Johannesburg/5/99
J | 免疫前 | 加强前 | 加强后 |
G1 | 5 | 23 | 184 |
G2 | 5 | 11 | 121 |
G3 | 5 | 11 | 70 |
G4 | 6 | 15 | 557 |
G5 | 5 | 13 | 320 |
因此,无论是含佐剂还是不含佐剂的硫柳汞含量降低的三价断裂流感病毒抗原,都是一种有效的免疫原,而且当通过ID或IM途径给药时,能够诱导较强的HI反应。这些反应至少与标准Fluarix制剂诱导的反应同样有效。
实施例12-比较含有硫柳汞和没有硫柳汞的疫苗在猪中的皮内递送
为了评估ID途径给予的断裂流感疫苗的免疫原性(加上或减去硫柳汞),使用了猪模型。因为群体的绝大多数已经历了至少一次流感的感染,因此流感疫苗必须能够加强预先存在的免疫反应。因此,要努力进行动物试验,以便更好地模拟人类的情况。
在该实验中,对4周龄的猪通过鼻内途径给药。每组5只,共6组动物是如下给药的:
1组-在第0天和第14天,用三价全灭活病毒(50μg每种HA)激
发两次;2组-在第0天和第14天,用三价全灭活病毒(50μg每种HA)
激发两次;3组-在第0天,用三价全灭活病毒(50μg每种HA)激发
一次;4组-在第0天和第14天,用三价全灭活病毒(25μg每种HA)
激发两次;5组-在第0天,用三价全灭活病毒(25μg每种HA)激发
一次;6组-在第0和第14天,用三价全灭活病毒(12.5μg每种HA)激发两次。
在最后一次激发后的第28天,通过ID途径用100μl中的3μgHA的三价断裂抗原给动物接种(病毒株A/New Caledonia H1N1,A/PanamaH3N2,和B/Johannesburg)。1组接受含有硫柳汞防腐剂的标准FluarixTM作为疫苗抗原。所有其它组都接受没有防腐剂的抗原。
该实验所得的HI结果在图2中表示(通过用各种抗原剂量激发,并通过皮内途径用3μg三价流感抗原加上或减去硫柳汞接种,而在猪中诱导的抗-流感血细胞凝集素抑制滴度)。
在该实验中,可对B株病毒诱导相对较低的HI低度,而抗A/H3N2毒株的本低较高。当减少激发剂量时,仍然可以观察到接种反应的有益作用。在几乎所有的情况下,抗原浓度或激发剂量数的降低(用50μg激发两次)都可导致对接种的反应增强。而使用50μg激发两次的1组和2组动物对接种的反应并不明显,在这些条件下,似乎没有防腐剂的抗原(2组)的作用至少与FluarixTM(1组)的相同。其它激发的动物(3-6组)对于利用ID途径,使用没有防腐剂的三价流感抗原进行接种的强烈反应是很清楚的,而且这种反应甚至可在B株中见到,虽然HI滴度仍然很低。
Claims (16)
1.一种灭活的流感病毒制剂,它含有在没有硫柳汞存在条件下,或低水平硫柳汞条件下稳定的血细胞凝集素抗原,其中的血细胞凝集素可通过SRD测定法检测,且其中所述制剂含有足以使HA稳定量的α-生育酚琥珀酸酯。
2.根据权利要求1所述的灭活流感病毒制剂,其中所述α-生育酚琥珀酸酯的浓度为1μg/ml-10mg/ml。
3.根据权利要求2所述的灭活流感病毒制剂,其中所述α-生育酚琥珀酸酯的浓度为10-500μg/ml。
4.根据权利要求1-3任何一项所述的灭活流感病毒制剂,其中所述流感病毒抗原制剂选自断裂病毒抗原制剂,亚单位抗原,化学或其它方式灭活的全病毒。
5.根据权利要求4所述的灭活流感病毒制剂,其中所述流感抗原制剂是断裂病毒抗原制剂。
6.根据权利要求1所述的灭活流感病毒制剂,它含有A株和B株血细胞凝集素。
7.根据权利要求6所述的灭活流感病毒制剂,它是三价的流感病毒制剂。
8.根据权利要求1所述的灭活流感病毒制剂,它含有稳定的B株流感HA。
9.一种含有权利要求1-8任何一项所述的流感病毒制剂的流感疫苗。
10.根据权利要求9所述的流感疫苗,其中按照SRD测定法测量的每株流感疫苗的血细胞凝集素抗原浓度为1-1000μg/ml。
11.根据权利要求9或10所述的流感疫苗,它还含有佐剂。
12.一种制备稳定的血细胞凝集素抗原的方法,该方法包括在有α-生育酚或α-生育酚衍生物存在的条件下纯化抗原,所述α-生育酚衍生物选自:D-α-生育酚,D-δ-生育酚,D-γ-生育酚和DL-α-生育酚,α-生育酚醋酸酯,α-生育酚琥珀酸酯,α-生育酚磷酸酯,α-生育酚甲酸酯,α-生育酚丙酸酯,α-生育酚丁酸酯,α-生育酚硫酸酯和α-生育酚葡萄糖酸酯。
13.根据权利要求12的方法,其中所述α-生育酚衍生物是α-生育酚琥珀酸酯。
14.权利要求1-8任何一项所述的流感病毒制剂在制备用于预防受试者中的流感感染或疾病的药物中的用途。
15.根据权利要求14所述的用途,其中疫苗是皮内,鼻内,肌内,口服或皮下制剂。
16.α-生育酚或其琥珀酸酯作为血细胞凝集素稳定剂在制备流感疫苗中的用途。
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AU2005314563B2 (en) | 2004-11-03 | 2011-06-30 | Seqirus UK Limited | Influenza vaccination |
US9161905B2 (en) * | 2005-01-12 | 2015-10-20 | Ocular Research Of Boston, Inc. | Dry eye treatment |
KR20070116650A (ko) * | 2005-03-23 | 2007-12-10 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 조성물 |
NZ565512A (en) * | 2005-08-02 | 2011-08-26 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Reducing interference between oil-containing adjuvants and surfactant-containing antigens |
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US11707520B2 (en) | 2005-11-03 | 2023-07-25 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
AU2006310163B2 (en) | 2005-11-04 | 2011-09-15 | Seqirus UK Limited | Influenza vaccine with reduced amount of oil-in-water emulsion as adjuvant |
JP2009514838A (ja) | 2005-11-04 | 2009-04-09 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル | 細胞培養物において増殖されたインフルエンザウイルスから調製された非ビリオン抗原を含むアジュバントワクチン |
DE202006021242U1 (de) * | 2005-11-04 | 2014-01-29 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Emulsionen mit freiem wässrigen Phasen Tensid als Adjuvans für Spalt-Grippeimpfstoffe |
CN102755645A (zh) | 2005-11-04 | 2012-10-31 | 诺华疫苗和诊断有限公司 | 佐剂配制的包含细胞因子诱导剂的流感疫苗 |
ES2377884T3 (es) | 2005-11-04 | 2012-04-02 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Vacunas contra la gripe que incluyen combinaciones de adyuvantes particulados e inmunopotenciadores |
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CA2646349A1 (en) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co Kg | Storage of influenza vaccines without refrigeration |
US20100015168A1 (en) | 2006-06-09 | 2010-01-21 | Novartis Ag | Immunogenic compositions for streptococcus agalactiae |
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ES2694805T7 (es) | 2006-09-11 | 2021-10-21 | Seqirus Uk Ltd | Fabricación de vacunas contra virus de la gripe sin usar huevos |
US9481912B2 (en) | 2006-09-12 | 2016-11-01 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences in biological samples |
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EP2185191B1 (en) | 2007-06-27 | 2012-09-12 | Novartis AG | Low-additive influenza vaccines |
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RU2496519C2 (ru) * | 2007-08-28 | 2013-10-27 | Бакстер Интернэшнл Инк. | Способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, и применение препарата |
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HUE026586T2 (hu) | 2008-04-16 | 2016-06-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vakcina |
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US20120093860A1 (en) * | 2009-02-10 | 2012-04-19 | Novartis Ag | Influenza vaccines with increased amounts of h3 antigen |
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USH2284H1 (en) | 2009-04-27 | 2013-09-03 | Novartis Ag | Vaccines for protecting against influenza |
KR101800245B1 (ko) | 2009-05-21 | 2017-11-22 | 노파르티스 아게 | 비-내인성 pol i 프로모터를 사용하는 역 유전학 |
AU2010270722B2 (en) | 2009-07-06 | 2015-06-04 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
CA2803282C (en) | 2009-07-06 | 2018-05-01 | David E. Anderson | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
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KR20120081587A (ko) | 2009-09-10 | 2012-07-19 | 노파르티스 아게 | 기도 질병에 대한 조합 백신 |
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AU2011224245B2 (en) | 2010-03-11 | 2014-12-04 | Immune Design Corp. | Vaccines for influenza |
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CA2801151A1 (en) | 2010-06-01 | 2011-12-08 | Novartis Ag | Concentration of vaccine antigens with lyophilization |
KR20220163497A (ko) | 2010-06-01 | 2022-12-09 | 노파르티스 아게 | 동결건조하지 않는 인플루엔자 백신 항원의 농축 |
WO2011154976A2 (en) | 2010-06-08 | 2011-12-15 | Panacea Biotec Limited | Improved influenza vaccine |
EP2590674B1 (en) | 2010-07-06 | 2017-02-22 | Variation Biotechnologies Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
US9517205B2 (en) | 2010-08-20 | 2016-12-13 | Seqirus UK Limited | Soluble needle arrays for delivery of influenza vaccines |
EP3012330A1 (en) | 2010-09-07 | 2016-04-27 | Novartis AG | Generic assays for detection of mammalian reovirus |
BR112013010338A2 (pt) | 2010-10-27 | 2016-08-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | composição, métodos para preparar uma composição imunogênica, para adjuvantar uma resposta imune, para eliciar uma resposta imune contra um agente infeccioso, para evitar e/ou reduzir a deposição de amilóide ou doença de alzheimer em um indivíduo, e para tratar/reduzir/melhorar a infecção por uma agente infeccioso, uso de uma proteína, e, kit |
AU2012205315B2 (en) | 2011-01-13 | 2017-05-04 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
EP2663327A4 (en) | 2011-01-13 | 2015-12-02 | Variation Biotechnologies Inc | COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTIONS |
JP5798356B2 (ja) * | 2011-04-06 | 2015-10-21 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | 新規インフルエンザワクチン安定化剤 |
GB201216121D0 (en) | 2012-09-10 | 2012-10-24 | Novartis Ag | Sample quantification by disc centrifugation |
WO2013057715A1 (en) | 2011-10-20 | 2013-04-25 | Novartis Ag | Adjuvanted influenza b virus vaccines for pediatric priming |
EP2780350B1 (en) | 2011-11-18 | 2019-03-06 | Variation Biotechnologies Inc. | Synthetic derivatives of mpl and uses thereof |
CN104302323A (zh) | 2012-01-12 | 2015-01-21 | 变异生物技术公司 | 用于治疗病毒感染的组合物和方法 |
CN104203272A (zh) | 2012-01-26 | 2014-12-10 | 长角牛疫苗和诊断有限责任公司 | 复合抗原序列及疫苗 |
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GB201205189D0 (en) | 2012-03-23 | 2012-05-09 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel medical use |
US20130315955A1 (en) * | 2012-04-13 | 2013-11-28 | Protein Sciences Corporation | Stability and potency of hemagglutinin |
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GB201218195D0 (en) | 2012-10-10 | 2012-11-21 | Istituto Zooprofilattico Sperimentale Delle Venezie | Composition |
AU2013354219A1 (en) | 2012-12-03 | 2015-07-02 | Novartis Ag | Reassortant influenza a viren |
AU2014204826A1 (en) | 2013-01-10 | 2015-07-09 | Seqirus UK Limited | Influenza virus immunogenic compositions and uses thereof |
AU2014229255B2 (en) | 2013-03-13 | 2018-12-13 | Novartis Ag | Influenza B virus reassortment |
JP2016521282A (ja) | 2013-05-10 | 2016-07-21 | ノバルティス アーゲー | インフルエンザワクチンにおけるナルコレプシーのリスクの回避 |
DE202013005130U1 (de) | 2013-06-05 | 2013-09-10 | Novartis Ag | Influenza Virus Reassortierung |
DE202013005100U1 (de) | 2013-06-05 | 2013-08-26 | Novartis Ag | Influenza Virus Reassortierung |
CA2914604A1 (en) | 2013-06-06 | 2014-12-11 | Novartis Ag | Influenza virus reassortment |
CN104436157A (zh) | 2013-09-23 | 2015-03-25 | 恩金生物有限公司 | 流感疫苗和治疗 |
WO2015079952A1 (ja) * | 2013-11-29 | 2015-06-04 | テルモ株式会社 | アジュバント組成物およびこれを含むワクチン組成物、並びにこれらの製造方法 |
EP3511020B1 (en) | 2014-12-02 | 2021-01-20 | Novartis AG | Manufacture of surfactant-containing compositions |
CA2985652C (en) | 2015-05-14 | 2020-03-10 | Gerald W. FISHER | Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples |
KR20180035807A (ko) | 2015-06-26 | 2018-04-06 | 세퀴러스 유케이 리미티드 | 항원적으로 매치된 인플루엔자 백신 |
BR112018000296A2 (pt) | 2015-07-07 | 2018-09-04 | Seqirus UK Limited | ensaios de potência de influenza |
WO2017167768A1 (en) | 2016-03-28 | 2017-10-05 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel vaccine composition |
GB201614799D0 (en) * | 2016-09-01 | 2016-10-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Compositions |
CN113993542A (zh) | 2019-01-30 | 2022-01-28 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 用于自乳化的油/表面活性剂混合物 |
JP2023502650A (ja) | 2019-11-18 | 2023-01-25 | セキラス ピーティーワイ リミテッド | 遺伝子再集合インフルエンザウイルスを産生するための方法 |
RU2754398C1 (ru) * | 2020-06-25 | 2021-09-01 | Общество с ограниченной ответственностью «ФОРТ» | Способ получения четырехвалентной вакцины для профилактики гриппа |
US20230218526A1 (en) | 2020-06-30 | 2023-07-13 | Seqirus UK Limited | Cold filtration of oil-in-water emulsion adjuvants |
Family Cites Families (71)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US639A (en) | 1838-03-17 | of boston | ||
US5520A (en) | 1848-04-18 | Oegan-pipb | ||
US4270537A (en) | 1979-11-19 | 1981-06-02 | Romaine Richard A | Automatic hypodermic syringe |
DD155875A1 (de) | 1980-12-31 | 1982-07-14 | Willy Nordheim | Verfahren zur herstellung eines ballaststoffarmen inaktivierten influenzaimpfstoffes |
US4436727A (en) | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
DD211444A3 (de) | 1982-08-19 | 1984-07-11 | Saechsisches Serumwerk | Verfahren zur herstellung von influenza-impfstoffen |
SE8205892D0 (sv) | 1982-10-18 | 1982-10-18 | Bror Morein | Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin |
US4596556A (en) | 1985-03-25 | 1986-06-24 | Bioject, Inc. | Hypodermic injection apparatus |
DD300833A7 (de) | 1985-10-28 | 1992-08-13 | Saechsische Landesgewerbefoerd | Verfahren zur herstellung von inaktivierten influenza-vollvirusimpfstoffen |
CA1283827C (en) | 1986-12-18 | 1991-05-07 | Giorgio Cirelli | Appliance for injection of liquid formulations |
GB8704027D0 (en) | 1987-02-20 | 1987-03-25 | Owen Mumford Ltd | Syringe needle combination |
CA1331443C (en) | 1987-05-29 | 1994-08-16 | Charlotte A. Kensil | Saponin adjuvant |
US5057540A (en) | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
US4941880A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-17 | Bioject, Inc. | Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly |
US4940460A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-10 | Bioject, Inc. | Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly |
US4790824A (en) | 1987-06-19 | 1988-12-13 | Bioject, Inc. | Non-invasive hypodermic injection device |
US5339163A (en) | 1988-03-16 | 1994-08-16 | Canon Kabushiki Kaisha | Automatic exposure control device using plural image plane detection areas |
US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
FR2638359A1 (fr) | 1988-11-03 | 1990-05-04 | Tino Dalto | Guide de seringue avec reglage de la profondeur de penetration de l'aiguille dans la peau |
AU626049B2 (en) | 1989-05-29 | 1992-07-23 | Lion Corporation | Method for preparing vaccine for dental caries and vaccinal compositions for dental caries used as nasal drop |
US5312335A (en) | 1989-11-09 | 1994-05-17 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5064413A (en) | 1989-11-09 | 1991-11-12 | Bioject, Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5190521A (en) | 1990-08-22 | 1993-03-02 | Tecnol Medical Products, Inc. | Apparatus and method for raising a skin wheal and anesthetizing skin |
US5527288A (en) | 1990-12-13 | 1996-06-18 | Elan Medical Technologies Limited | Intradermal drug delivery device and method for intradermal delivery of drugs |
GB9118204D0 (en) | 1991-08-23 | 1991-10-09 | Weston Terence E | Needle-less injector |
SE9102652D0 (sv) | 1991-09-13 | 1991-09-13 | Kabi Pharmacia Ab | Injection needle arrangement |
JP3723231B2 (ja) | 1991-12-23 | 2005-12-07 | ディミナコ アクチェンゲゼルシャフト | アジュバント |
IL101007A (en) * | 1992-02-18 | 1997-08-14 | Pharmos Ltd | Dry stable compositions prepared by lyophilization |
US5328483A (en) | 1992-02-27 | 1994-07-12 | Jacoby Richard M | Intradermal injection device with medication and needle guard |
JP3755890B2 (ja) | 1992-06-25 | 2006-03-15 | スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス(ソシエテ・アノニム) | アジュバント含有ワクチン組成物 |
US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5569189A (en) | 1992-09-28 | 1996-10-29 | Equidyne Systems, Inc. | hypodermic jet injector |
US5334144A (en) | 1992-10-30 | 1994-08-02 | Becton, Dickinson And Company | Single use disposable needleless injector |
CN1087176C (zh) | 1993-03-23 | 2002-07-10 | 史密斯克莱·比奇曼生物公司 | 含有3-o脱酰基单磷酰脂a的疫苗制剂 |
WO1995011700A1 (en) * | 1993-10-29 | 1995-05-04 | Pharmos Corp. | Submicron emulsions as vaccine adjuvants |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
WO1995024176A1 (en) | 1994-03-07 | 1995-09-14 | Bioject, Inc. | Ampule filling device |
US5466220A (en) | 1994-03-08 | 1995-11-14 | Bioject, Inc. | Drug vial mixing and transfer device |
US5616487A (en) * | 1994-09-15 | 1997-04-01 | Aastrom Biosciences, Inc. | Stabilized retrovirus compositions |
AUPM873294A0 (en) | 1994-10-12 | 1994-11-03 | Csl Limited | Saponin preparations and use thereof in iscoms |
US5599302A (en) | 1995-01-09 | 1997-02-04 | Medi-Ject Corporation | Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring |
UA56132C2 (uk) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
US5730723A (en) | 1995-10-10 | 1998-03-24 | Visionary Medical Products Corporation, Inc. | Gas pressured needle-less injection device and method |
EP0750907B1 (en) * | 1995-06-30 | 2002-03-20 | American Cyanamid Company | Stable macrolide and macrolide vaccine compositions |
US20020165168A1 (en) | 1995-12-16 | 2002-11-07 | Joachim Bunger | Use of sugar derivatives as antimicrobial, antimycotic and/or antiviral active substances |
US5893397A (en) | 1996-01-12 | 1999-04-13 | Bioject Inc. | Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus |
GB9607549D0 (en) | 1996-04-11 | 1996-06-12 | Weston Medical Ltd | Spring-powered dispensing device |
US5919480A (en) * | 1996-06-24 | 1999-07-06 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Liposomal influenza vaccine composition and method |
US6403098B1 (en) * | 1996-09-26 | 2002-06-11 | Merck & Co., Inc. | Rotavirus vaccine formulations |
DE19649895A1 (de) | 1996-12-02 | 1998-06-04 | Henkel Kgaa | Schäumende Körperreinigungsmittel |
EP1007077B1 (en) * | 1997-01-13 | 2009-10-07 | Emory University | Glutathione for the treatment of influenza infection |
GB9705740D0 (en) | 1997-03-20 | 1997-05-07 | Medeva Europ Ltd | A method of preservation |
CN1326564C (zh) | 1997-04-01 | 2007-07-18 | 科里克萨有限公司 | 单磷酰基脂质a的水性免疫佐剂组合物 |
US5993412A (en) | 1997-05-19 | 1999-11-30 | Bioject, Inc. | Injection apparatus |
GB9711990D0 (en) * | 1997-06-11 | 1997-08-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
ES2298316T3 (es) * | 1997-09-05 | 2008-05-16 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Emulsiones de aceite en agua que contienen saponinas. |
IT1298087B1 (it) | 1998-01-08 | 1999-12-20 | Fiderm S R L | Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni |
PL354714A1 (en) | 1998-04-09 | 2004-02-09 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Adjuvant compositions |
FR2780278B1 (fr) * | 1998-06-24 | 2001-01-19 | Oreal | Composition conditionnante et detergente et utilisation |
DE19841796A1 (de) | 1998-09-12 | 2000-03-16 | Beiersdorf Ag | Kombinationen von Antiadhäsiva (Kohlenhydrate) und Mikrobiziden |
KR100922031B1 (ko) * | 1999-04-19 | 2009-10-19 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 백신 |
AUPQ233799A0 (en) | 1999-08-19 | 1999-09-09 | Minister For Agriculture, Minister For Land And Water Conservation For And On Behalf Of The State Of New South Wales | Recombinant sub-unit vaccine |
CA2383105C (en) * | 1999-09-24 | 2010-01-26 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Intranasal influenza virus vaccine |
EP1221971A2 (en) * | 1999-09-24 | 2002-07-17 | SmithKline Beecham Biologics SA | Use of the combination of polyoxyethylene sorbitan ester and octoxynol as adjuvant and its use in vaccines |
BR0014285A (pt) * | 1999-09-24 | 2002-05-21 | Smithkline Beecham Biolog | Adjuvantes compreendendo um éster ou éter de alquila de polioxietileno e pelo menos um tensoativo não-iÈnico |
US6494865B1 (en) | 1999-10-14 | 2002-12-17 | Becton Dickinson And Company | Intradermal delivery device including a needle assembly |
CN1379667A (zh) * | 1999-10-19 | 2002-11-13 | 宝洁公司 | 预防和治疗感冒和流感样症状的组合物和它们的使用方法 |
CA2423610A1 (en) | 2000-10-02 | 2002-04-11 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Split enveloped virus preparation |
JP2004536785A (ja) * | 2001-02-23 | 2004-12-09 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 新規なワクチン |
MY134424A (en) * | 2001-05-30 | 2007-12-31 | Saechsisches Serumwerk | Stable influenza virus preparations with low or no amount of thiomersal |
US9856414B2 (en) | 2013-06-10 | 2018-01-02 | Dober Chemical Corp. | Compositions, systems and methods of making coated additive components |
-
2002
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