CZ298697B6 - Prostredek deaktivovaného viru influenzy a vakcína s jeho obsahem - Google Patents
Prostredek deaktivovaného viru influenzy a vakcína s jeho obsahem Download PDFInfo
- Publication number
- CZ298697B6 CZ298697B6 CZ20033253A CZ20033253A CZ298697B6 CZ 298697 B6 CZ298697 B6 CZ 298697B6 CZ 20033253 A CZ20033253 A CZ 20033253A CZ 20033253 A CZ20033253 A CZ 20033253A CZ 298697 B6 CZ298697 B6 CZ 298697B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- influenza
- vaccine
- influenza virus
- virus
- thiomersal
- Prior art date
Links
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 title claims abstract description 65
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 34
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title description 98
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims abstract description 64
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims abstract description 63
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims abstract description 63
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims abstract description 63
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims abstract description 63
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 51
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 claims abstract description 51
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 48
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 48
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 37
- 229940099418 d- alpha-tocopherol succinate Drugs 0.000 claims abstract description 26
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims abstract description 10
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 109
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 61
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 33
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 30
- IELOKBJPULMYRW-NJQVLOCASA-N D-alpha-Tocopheryl Acid Succinate Chemical compound OC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C IELOKBJPULMYRW-NJQVLOCASA-N 0.000 claims description 29
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 23
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims description 22
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 20
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 19
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 13
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 claims description 12
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 claims description 11
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 claims description 11
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 claims description 10
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims description 6
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 5
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 abstract description 3
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 abstract description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 44
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 36
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 36
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 33
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 33
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 33
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 32
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 27
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 24
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 21
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 21
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 19
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 19
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 17
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 17
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 16
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 16
- 241000845082 Panama Species 0.000 description 15
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 15
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 15
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 15
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 15
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 14
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 14
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 14
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 14
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 14
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 14
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 13
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 13
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000004044 response Effects 0.000 description 11
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 10
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 9
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 9
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 9
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 9
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 229940124896 Fluarix Drugs 0.000 description 8
- 235000001630 Pyrus pyrifolia var culta Nutrition 0.000 description 8
- 240000002609 Pyrus pyrifolia var. culta Species 0.000 description 8
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 8
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 8
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 8
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 8
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 8
- 229920002884 Laureth 4 Polymers 0.000 description 7
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 7
- 229940062711 laureth-9 Drugs 0.000 description 7
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- ONJQDTZCDSESIW-UHFFFAOYSA-N polidocanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO ONJQDTZCDSESIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 6
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 229940031418 trivalent vaccine Drugs 0.000 description 6
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 5
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 4
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 4
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 4
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical class C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 3
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 3
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 3
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 3
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000001738 isopycnic centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 3
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 2
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 241000371980 Influenza B virus (B/Shanghai/361/2002) Species 0.000 description 2
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002812 cholic acid derivative Substances 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCO LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000010439 graphite Substances 0.000 description 2
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 2
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000259 polyoxyethylene lauryl ether Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 150000003900 succinic acid esters Chemical class 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003611 tocopherol derivatives Chemical class 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=CC=C1OCCO IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical class CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241000408930 Astictopterus jama Species 0.000 description 1
- SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L Brilliant Blue Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004381 Choline salt Substances 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- OCUCCJIRFHNWBP-IYEMJOQQSA-L Copper gluconate Chemical class [Cu+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O OCUCCJIRFHNWBP-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- 235000001815 DL-alpha-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011627 DL-alpha-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 241001316290 Gypsophila Species 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- DGABKXLVXPYZII-UHFFFAOYSA-N Hyodeoxycholic acid Natural products C1C(O)C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 DGABKXLVXPYZII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 101900234398 Influenza B virus Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 206010022086 Injection site pain Diseases 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical class CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 241000607149 Salmonella sp. Species 0.000 description 1
- 241000219287 Saponaria Species 0.000 description 1
- 229920004892 Triton X-102 Polymers 0.000 description 1
- 229920004929 Triton X-114 Polymers 0.000 description 1
- 229920004893 Triton X-165 Polymers 0.000 description 1
- 229920004894 Triton X-305 Polymers 0.000 description 1
- 229920004897 Triton X-45 Polymers 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N [2-[3-[6-[3-[(5R,6aS,6bR,12aR)-10-[6-[2-[2-[4,5-dihydroxy-3-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]ethoxy]ethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carbonyl]peroxypropyl]-5-[[5-[8-[3,5-dihydroxy-4-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]octoxy]-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propoxymethyl]-5-hydroxy-3-[(6S)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoyl]oxy-6-methyloxan-4-yl] (2E,6S)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methylocta-2,7-dienoate Chemical compound C=C[C@@](C)(O)CCC=C(C)C(=O)OC1C(OC(=O)C(\CO)=C\CC[C@](C)(O)C=C)C(O)C(C)OC1COCCCC1C(O)C(O)C(OCC2C(C(O)C(OCCCCCCCCC3C(C(OC4C(C(O)C(O)CO4)O)C(O)CO3)O)C(C)O2)O)C(CCCOOC(=O)C23C(CC(C)(C)CC2)C=2[C@@]([C@]4(C)CCC5C(C)(C)C(OC6C(C(O)C(O)C(CCOCCC7C(C(O)C(O)CO7)OC7C(C(O)C(O)CO7)O)O6)O)CC[C@]5(C)C4CC=2)(C)C[C@H]3O)O1 FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 125000005233 alkylalcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000004648 butanoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 1
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019417 choline salt Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 150000004675 formic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N glucosamine group Chemical group OC1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- DGABKXLVXPYZII-SIBKNCMHSA-N hyodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1[C@@H](O)C2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 DGABKXLVXPYZII-SIBKNCMHSA-N 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 1
- 229960001226 live attenuated influenza Drugs 0.000 description 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 208000030500 lower respiratory tract disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940066429 octoxynol Drugs 0.000 description 1
- 229920002114 octoxynol-9 Polymers 0.000 description 1
- 238000001558 permutation test Methods 0.000 description 1
- 125000003884 phenylalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000013310 pig model Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 229930002534 steroid glycoside Natural products 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000000856 sucrose gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N taurodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 1
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 150000003772 α-tocopherols Chemical class 0.000 description 1
- QUEDXNHFTDJVIY-DQCZWYHMSA-N γ-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1 QUEDXNHFTDJVIY-DQCZWYHMSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16161—Methods of inactivation or attenuation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Podstatu rešení tvorí prostredek deaktivovaného viru influenzy pro použití jako vakcína proti chripce, který obsahuje antigen hemaglutinin stabilizovaný v neprítomnosti thiomersalu nebo v prítomnostinejvýš 0,5 .mi.g/ml thiomersalu, kde hemaglutininse detekuje SRD testem, pricemž prostredek obsahuje množství .alfa.-tokoferolsukcinátu, dostatecné pro stabilizaci HA. Rešení se rovnež týká vakcíny proti chripce, obsahující uvedený prostredek a také zpusobu prípravy stabilního antigenu hemaglutininu, zahrnujícího cištení antigenu v prítomnosti .alfa.-tokoferolu nebo jeho derivátu, jako je .alfa.-tokoferolsukcinát. Mimo to se rešení týká použití.alfa.-tokoferolu nebo jeho sukcinátu jako stabilizátoru hemaglutininu pri výrobe vakcíny proti chripce.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká prostředku deaktivovaného viru chřipky, zvláště prostředku s obsahem štěpeného viru, stabilního v nepřítomnosti organortuťových konzervačních látek. Vynález se rovněž týká vakcíny proti chřipce s obsahem tohoto prostředku, způsobu přípravy stabilního antigenu a použití α-tokoferolu nebo jeho sukcinátu k stabilizaci tohoto antigenu při výrobě vakcíny proti chřipce.
Dosavadní stav techniky
Virus chřipky je jeden z nejrozšířenějších virů, který se vyskytuje po celém světě a napadá jak člověka, tak domácí zvířata. Ekonomický dopad chřipky je podstatný.
Virus chřipky je RNA virus s obalem. Průměr částic je přibližně 125 nm. Částice viru obsahuje vnitřní nukleokapsid nebo jádro tvořené ribonukleovou kyselinou (RNA) spojené s nukleo20 proteinem, obklopené virovým obalem tvořeným lipidovou dvoj vrstvou strukturou a vnějšími glykoproteiny. Vnitřní vrstva virového obalu se skládá převážně z matricových proteinů a vnější vrstva je tvořena většinou z lipidového materiálu získaného z hostitele. Povrchová glykorpteinová neuraminidáza (NA) a hemaglutinin (HA) tvoří na povrchu virového obalu bodce 10 až 12 nm dlouhé. Povrchové proteiny, zvláště hemaglutinin, determinují antigenní specifitu sub25 typu viru chřipky.
V současné době dostupné vakcinační prostředky proti chřipce jsou buď deaktivované, nebo živé atenuované chřipkové vakcinační prostředky. Deaktivované chřipkové vakcinační prostředky obsahují tři možné formy antigenního prostředku: deaktivovaný celý virus, sub-viriony, kde izolované virové částice jsou porušeny detergenty nebo jinými činidly, aby došlo k rozpuštění lipidového obalu (tzv. „štěpené“ vakcinační prostředky), nebo poslední formou jsou izolovány HA a NA (dílčí vakcinační prostředky). Tyto deaktivované vakcinační prostředky se aplikují intramuskulámě (i.m.) nebo intranasálně (i.n.). V současné době neexistuje běžně dostupný živý atenuovaný vakcinační prostředek.
Všechny druhy vakcinačních prostředků jsou obvykle trivalentní vakcinační prostředky. Uvedené vakcinační prostředky běžně obsahují antigeny získané ze dvou kmenů viru influenzy A a jednoho kmene viru influnezy B. Standardní dávka pro zavedení injekcí o objemu 0,5 ml ve většině případů obsahuje 15 pg antigenní složky hemaglutininu z každého kmene, jak se stanovilo radiál40 ní imunodifúzí (SRD) (popisuje je v publikaci J.M. Wood et al., An Improved single radial immunodiffusion technique for the assay of influenza haemagglutinin antigen: adaptation for potency determination of inactivated whole virus and subunit vaccines. J. biol. Stand. 5 (1977) 237-247, J. M. Wood et al., International collaborative study of single radial diffusion and immunoelectrophoresis techniques for the assay of haemugglutinin antigen of influenzae virus. J.
Biol. Stand. 9 (1981) 317-330).
Kmeny viru influenza, které se začleňují do vakcinačního prostředku, jsou každý rok stanoveny WHO ve spolupráci s řídicími orgány státního zdravotnictví a s výrobci vakcinačních prostředků.
Typická epidemie chřipky způsobuje zvýšení výskytu zápalu plic a onemocnění dolních cest dýchacích, o čemž svědčí zvýšený výskyt hospitalizací nebo úmrtí. U starých lidí a u těch, kteří trpí chronickým onemocněním, se často vyskytují uvedené komplikace, ale také mladí lidé mohou trpět vážným onemocněním. Proto je nutné zvláště tyto skupiny chránit.
-1 CZ 298697 B6
Současné úsilí řídit nemocnost a úmrtnost spojenou s částečnými epidemiemi chřipky je založeno na použití intramuskulámě aplikovaných deaktivovaných vakcinačních prostředků proti chřipce, účinnost takových vakcinačních prostředků při prevenci respiračního onemocnění a komplikací chřipky se pohybuje v rozmezí 75 % u zdravých dospělých a méně než 50 % v případě starých lidí.
Standardy se aplikují mezinárodně za účelem stanovení účinnosti vakcinačních prostředků proti viru influenzy. Oficiální kritéria evropské unie pro stanovení účinnosti vakcinačního prostředku proti chřipce jsou dány v tabulce dále v textu. Teoreticky, aby se splnily požadavky Evropské ío unie, vakcinaění prostředky proti chřipce musí splňovat pouze kriteria uvedená v tabulce v případě všech kmenů chřipky zahrnutých ve vakcinačním prostředku. Avšak v praxi je nutné, aby alespoň dvě nebo tři kritéria byly splněny pro všechny kmeny, zvláště v případě nových vakcín, které se aplikují odlišným způsobem. Za určitých okolností mohou být dvě kriteria dostatečná. Například může být přijatelné, aby všechny kmeny splňovaly dvě kritéria ze tří, zatímco třetí kritérium splňuje pouze několik kmenů, nikoliv však (například dva ze tří kmenů).
Požadavky jsou různé v případě populace dospělých lidí (18 až 60 let) a populace starých lidí (starší 60 let).
až 60 let starší 60 let
| stupeň sérokonverze* | >40 % | >30 % |
| faktor konverze** | >2,5 | >2 |
| stupeň ochrany*** | >70 % | >60 % |
*Stupeň sérokonverze se definuje jako procento vakcinovaných jedinců, kteří vykazují alespoň čtyřnásobné zvýšení sérových hemiglutininových inhibičních (HI) titrů po vakcinaci v případě každého vakcinačního kmene.
** Faktor konverze se definuje jako násobek zvýšení geometrického průměru titrů HI v séru (GMT) po vakcinaci v případě každého vakcinačního kmene.
** Stupeň ochrany se definuje jako procento vakcinovaných jedinců, u kterých je titr HI v séru po vakcinaci stejný nebo vyšší než 1:40 (v případě každého kmene) a v normálním případě je tato hodnota přijatelná jako ukazatel ochrany.
V případě nového použitelného chřipkového vakcinačního prostředku není pouze potřeba splňovat uvedené standardy, ale je také nutné, aby nové vakcinaění prostředky byly alespoň tak účinné, jako jsou současné vakcinaění prostředky, které je možné zavést injekcí. Je také nutné, aby byly obecně realizovatelné, co se týká množství antigenů a počtu nutných aplikací.
V současné době běžně dostupné vakcinaění prostředky jsou buď štěpené, nebo dílčí vakcinaění prostředky, které se zavádějí injekcí. Tyto vakcinaění prostředky se připravily poškozením virových částic, v obecném případě organických rozpouštědel nebo detergentem a separací nebo izolací virových proteinů do různého stupně. Štěpené vakcinaění prostředky se připravily fragmentací celého viru influenzy a to buď infekčního, nebo deaktivovaného s rozpouštěcími koncentracemi organických rozpouštědel nebo detergenty a následným odstraněním rozpouštěcího činidla a části nebo většiny virového lipidového materiálu. Štěpené vakcinaění prostředky v obecném případě obsahují kontaminující matricové proteiny a nukleoprotein a v některých případech nukleoprotein a někdy lipid, stejně jako membránové obalové proteiny. Štěpené vakcinaění prostředky budou obvykle obsahovat většinu nebo všechny virové strukturní proteiny, ačkoliv nemusí být
-2CZ 298697 B6 zastoupeny ve stejném poměru jako se vyskytují v celém viru. Dílčí vakcinační prostředky na druhou stranu v podstatě obsahují vysoce čisté virové povrchové proteiny, hemaglutinin a neuraminidázu, které jsou povrchovými proteiny odpovídajícími ze vyvolání požadovaných protilátek neutralizujících virus po vakcinaci.
Řada v současné době dostupných vakcinačních prostředků vyžaduje ochranný prostředek, který brání degeneraci. Často používaným ochranným prostředkem je thiomersal, který je sloučenina obsahující rtuť. Účinky sloučenin obsahující rtuť se staly předmětem veřejného zájmu. Neexistuje testovací systém pro stanovení účinků nízkých a středních dávek organohydrargyriových sloučenin na vyvíjecí se nervový systém. U speciálních studií, které sledují děti, kterých se aplikovaly vysoké dávky organohydrargyriových sloučenin, zbývá ještě mnoho let do dokončení. Také je zřejmé, že nelze přecházet potenciální nebezpečí aplikace vakcinačních prostředků, které obsahují thiomersal (popisuje se v publikaci Offit, P.A. JAMA Vol., 283, No. 16). Nicméně bude výhodné najít alternativní metody přípravy vakcinačních prostředků, aby se mohl při ve výrob15 ním postupu thiomersal nahradit. Existuje potřeba vyvinout vakcinační prostředky, které neobsahují thiomersal, zvláště vakcinační prostředky, jako jsou vakcinační prostředky proti chřipce, které se doporučují, alespoň v případě jisté části populace a aplikují se jednou v roce.
Standardní praxí v současné době je použití ochranných prostředků v případě běžných deaktivo20 váných vakcinačních prostředků během postupu produkce/čištění a/nebo se přidávají do konečného vakcinačního prostředku. Aby se zabránilo růstu mikroorganizmů v různých fázích izolace, je nutné použít konzervační činidla. V případě vakcinačních prostředků získaných z vajec se thiomersal přidává do surové alantoické tekutiny a může se také přidat podruhé během zpracování viru. Na konci postupu je přítomen zbytkový thiomersal a jeho koncentrace se pak může upravit na požadovanou hodnotu, aby došlo k ochraně konečné vakcíny, například na koncentraci přibližně 100 pg/ml.
Vedlejším účinkem použití thiomersalu, jako ochranného prostředku ve vakcinačních prostředcích proti chřipce, je stabilizační účinek. Thiomersal v běžných chřipkových vakcinačních pro30 středcích působí jako stabilizátor složky HA vakcinačního prostředku, zvláště HA kmene influenzy B. Hemaglutininy jistého kmene a, například H3, mohou také vyžadovat stabilizaci. Ačkoliv může být nutné zvažovat odstranění thiomersalu z chřipkových vakcinačních prostředků nebo alespoň snížení jeho koncentrace v konečném vakcinačním prostředku, existuje problém, který se nedá bez thiomersalu obejít, HA nebude dostatečně stabilní.
Zjistilo se, že je možné stabilizovat HA v deaktivovaných chřipkových vakcinačních prostředcích za použití alternativních činidel, které neobsahují organohydrargyriové sloučeniny. HA zůstává stabilizován tak, že je detekovatelný kvantitativními standardními metodami, zvláště pomocí SRD ve větším rozsahu než nestabilizovaný antigenní prostředek produkovaný stejnou metodou, ale bez stabilizační pomocné látky. Test SRD se může provést způsobem popsaným shora v textu. Je důležité, že HA zůstává stabilizován až 12 měsíců, což je standardní požadavek v případě konečného chřipkové vakcinačního prostředku.
Vynález popisuje deaktivovaný virus influenzy obsahující hemaglutininový antigen stabilizovaný v nepřítomnosti thiomersalu nebo malým množství thiomersalu, kde hemaglutinin se detekoval testem SRD.
Malé množství thiomersalu je definuje jako množství, při kterém je stabilita HA získaného z viru influenzy kmene B snížena tak, že je pro stabilizaci HA nutné stabilizační činidlo. Nízké množ50 ství thiomersalu je v obecném případě 5 pg/ml nebo méně.
V obecném případě stabilizovaná HA znamená HA, který je detekovatelný kvantitativními standardními způsoby, zvláště SRD testem, ve větším rozsahu než nestabilizovaný antigenní přípravek produkovaný stejnou metodou, ale bez přítomnosti stabilizační pomocné látky. Stabilizace
HA s výhodou udržuje aktivitu HA v podstatě konstantní v období jednoho roku. Stabilizace
-3 CZ 298697 B6 s výhodou umožňuje vakcíny obsahující HA poskytnout ochranu po dobu 6 měsíců, což je doba uskladnění, výhodněji po dobu jednoho roku.
Je vhodné, aby se stabilizace provedla stabilizační pomocnou látkou, s výhodou s pomocnou látkou upravující micely. Pomocná látka upravující micely je v obecném případě pomocná látka, která může být začleněna do micel vytvořených detergenty používaných nebo vhodných pro rozpuštění membránového proteinu HA, jako jsou detergenty Tween 80, Triton XI00 a deoxycholát. Tyto látky je možné použít jednotlivě nebo v kombinaci.
ío Věří se, že pomocné látky stabilizují HA v konečném přípravku interakcí mezi lipidy, detergenty a/nebo proteiny. Mohou se tvořit smíchané micely pomocné látky s proteinem a lipidem, jako jsou micely přípravku Tween a deoxycholátu se zbytkovými lipidy a/nebo Tritonem X-100. Uvažuje se, že povrchové proteiny se udržují rozpuštěné pomocí uvedených komplexních micel. Agregace proteinu je výhodně limitována indukovaným driftem micel, které obsahují vhodné pomocné látky, j ako j sou micely obsahuj ící negativně nabité detergenty.
Vhodné pomocné látky upravující micely zahrnují pozitivně, negativně nebo obojetně nabití amfifilické molekuly, jako jsou alkylsulfáty nebo alkylarylsulfáty, neiontově amfifílické molekuly, jako je alkylpolyglykosidy nebo jejich deriváty, jako je přípravek Plantacare(R) (dostupné u firmy Henkel KGaA) nebo polyalkenetery alkylalkoholu nebo jej ich deriváty, jako je Laureth-9.
Výhodné pomocné látky jsou deriváty α-tokoferolu, jako je α-tokoferolsulcinát. Jiné výhodné deriváty tokoferolu vhodné pro použití podle vynálezu zahrnují D-a-tokoferol, D-d-tokoferol, D-y-tokoferol a DL-a-tokoferol. Výhodné používané deriváty tokoferolu zahrnují acetáty, suk25 cináty, estery kyseliny fosforečné, formiáty, propionáty, butyráty, sulfáty a glukonáty. Zvláště výhodný je α-tokoferolsukcinát. Alfatokoferol nebo jeho derivát je přítomen v množství, které je dostatečné ke stabilizaci hemaglutininu.
Jiné vhodné pomocné látky se mohou identifikovat způsoby, které jsou standardní v oboru, a jejich stabilita se testuje například pomocí metody SRD.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří prostředek deaktivovaného viru influenzy pro použití jako vakcína proti chřipce, který obsahuje antigen hemaglutinin stabilizovaný v nepřítomnosti thiomersalu nebo v přítomnosti nejvýš 0,5 pg/ml thiomersalu kde hemaglutinin se detekuje SRD testem, přičemž prostředek obsahuje množství α-tokoferolsukcinátu, dostatečné pro stabilizaci HA.
Vynález se rovněž týká vakcíny proti chřipce, obsahující uvedený prostředek a také způsobu přípravy stabilního antigenu hemaglutininu, zahrnujícího čištění antigenu v přítomnosti a-tokoferolu nebo jeho derivátu, jako je α-tokoferolsukcinát. Mimo to se vynález týká použití a-tokoferolu nebo jeho sukcinátu jako stabilizátoru hemaglutininu při výrobě vakcíny proti chřipce.
Vakcinační prostředek se může aplikovat libovolným vhodným způsobem, jako je intradermálně, mukozálně, například intranasálně, orálně, intramuskulámě nebo subkutánně. V oboru jsou známy i jiné způsoby aplikace.
Preferuje se intradermální zavedení. Pro intradermální zavedení se používá libovolné vhodné zařízení, jak se popisuje v patentových dokumentech US 4 886 499, US 5 190 521, US 5 328 483, US 4 270 537, US 5 015 235, US 5 141 496, US 5 417 662. Intradermální vakcinační prostředky se mohou také aplikovat zařízeními, které omezuje účinné penetrační délka jehly při aplikaci do kůže. Tato zařízení se například popisují v patentových dokumentech WO 99/34 850 a EP 1092444 a dále se mohou použít jejich funkční ekvivalenty. Vhodné jsou
-4CZ 298697 B6 také vstřikovací zařízení které zavádějí kapalné vakcinační prostředky do dermisu prostřednictvím vstřikovací trysky nebo prostřednictvím jehly, která proniká stratům comeum a produkuje paprsek, který proniká do oblasti dermisu. Trysková vstřikovací zařízení se popisují například v patentových dokumentech US 5480 381, US 5 599 302, US 5 34 144, US 5 993 412,
US 5 649 912, US 5 569 189, US 5 704 911, US 5 383 851, US 5 893 397, US 5 466 220, US 5 339 163, US 5 312 335, US 5 503 627, US 5 064 413, US 5 520 639, US 4 596 556, US 4 790 824, US 4 941 880, US 4 940 460, WO 97/37 705 a WO 97/13537. Vhodné jsou také balistická zaváděcí zařízení pro prášek/částice, kde se používá stlačený plyn, aby se zrychlil průchod vakcinačního prostředku ve formě prášku přes vnější vrstvy kůže do dermisu. Navíc při io klasické metodě intradermální aplikace se mohou použít běžné injekční stříkačky. Avšak použití běžných injekčních stříkaček vyžaduje odborníka a tak jsou výhodnější zařízení, které umožňují přesné zavedení i nezkušenému uživateli.
Vynález dále popisuje způsob profylaxe infekce influenzy nebo onemocnění u subjektu, který zahrnuje intradermální aplikaci subjektu vakcinačního prostředku chřipky podle vynálezu.
Vynález dále popisuje intradermální zařízení v kombinaci s vakcinačním prostředkem podle vynálezu zvláště zařízení popsaná například v patentových dokumentech WO 99/34 850 nebo EP 1092444.
Také se popisuje použití pomocné látku upravující micely při výrobě chřipkového vakcinačního prostředku, s výhodu α-tokoferol nebo jeho derivát, jako hemaglutininového stabilizátoru.
Vynález se zvláště aplikuje, ale nikoli pouze, za účelem stabilizace hemaglutininu viru influenzy kmene B.
Stabilizovaný HA je s výhodou stabilní po dobu 6 měsíců, s výhodou po dobu 12 měsíců.
α-tokoferol se vyskytuje s výhodou ve formě esteru, s výhodou ve formě sukcinátu nebo acetátu a nejvýhodnější je sukcinát.
Výhodné koncentrace α-tokoferolu nebo jeho derivátu jsou v rozmezí 1 pg/ml až 10 mg/ml, výhodněji v rozmezí 10 až 500 pg/ml.
Vakcinační prostředek podle vynálezu v obecném případě obsahuje antigeny viru kmene A a B, v typickém případě trivalentní prostředek dvou kmenů A a jednoho kmene B. Vyloučeny nejsou ani divalentní a monovalentní vakcinační prostředky. Monovalentní vakcinační prostředky mohou být výhodné v případě pandemie, například kde je důležité získat velké množství vakcinačního prostředku a aplikovat ho, tak rychle, jak jen je to možné.
Přípravek antigenu neživého viru chřipky vhodného pro použití podle vynálezu se může vybrat ze skupiny obsahující štěpené virové antigenní přípravky, dílčí antigeny (buď exprimované rekombinantně, nebo připravené z celého viru), deaktivovaný celý virus, který se může deaktivovat chemicky například pomocí formaldehydu, β-propiolaktonu nebo se může deaktivovat jiným způsobem, například UV zářením nebo teplem. Antigenní přípravek je s výhodou buď štěpený virový přípravek, nebo dílčí antigen připravený z celého viru zvláště postupem štěpení, který následuje po izolaci povrchového antigenu. nejvýhodnější jsou přípravky štěpeného viru.
Koncentrace antigenu hemaglutinin je v případě každého kmene přípravku viru influenzy 1 až
1 000 pg/ml, s výhodou 3 až 300 pg/ml a nejvýhodnější je koncentrace přibližně 30 pg/ml, jak se stanovilo testem SRD.
-5CZ 298697 B6
Vakcinační prostředek podle vynálezu může dále obsahovat adjuvans nebo imunostimulant, který se neomezuje na detoxifikovaný lipid A z libovolného zdroje a netoxické deriváty lipidu A, saponiny a jiná činidla schopná stimulovat odezvu typu TH1.
Dlouho je známo, že enterobakteriální lipopolysacharid (LPS) je silný stimulátor imunitního systému, ačkoli jeho použití v adjuvans je omezeno jeho toxickými účinky. Netoxický derivát LPS, monofosforyllipid A (MPL) produkovaný odstraněním jaderné sacharidové skupiny a fosforečnanu s redukujícího koncového glukozaminu, jak se popisuje v publikaci Ribi et al., 1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenům Publ. Corp., NY, p407io 419) má následuj ící strukturu.
Další detoxifikovaná verze MPL vznikla odstraněním acylovaného řetězce z polohy 3 disachari15 dové základní struktury a nazývá se 3-O-deacylovaný monofosforyllipid A (3D-MPL). Může se izolovat a připravuje se metodami popsanými v patentovém dokumentu GB 2122204B, která také popisuje přípravu difosforyllipidu A a jeho 3-O-deacylovaných variant.
Výhodná forma 3D-MPL je emulze, která vykazuje malou velikost částic. Průměr částic je menší než 0,2 pm a způsob výroby se popisuje v patentovém dokumentu WO 94/21292. Vodné přípravky obsahujícím onofosforyllipid A a povrchově aktivní činidlo se popisuje v patentovém dokumentu WO 98/43670A.
Adjuvans odvozené do bakteriálního lipopolysacharidu se zavedlo do prostředku podle vynálezu a může se izolovat a zpracovávat z bakteriálních zdrojů nebo v jiném případě může být syntetické. Izolovaný monofosforyllipid A se například popisuje v publikaci Ribi et al., 1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenům Publ. Corp., NY, p407-419) a 3-O-deacylovaný monofosforyllipid A nebo difosforyllipid A získaný z mikroorganismu Salmonella sp., jak se popisuje v patentovém dokumentu GB 2220211 a US 4 912 094. Jiné izolované a syntetické lipopolysacharidy se popisují v publikaci Hilgers et al., 1986, Int. Arch. Allergy. Immunol., 79 (4):392-6, Hilgers et al, 1987, Immunology, 60(1):141-6 a EP 0 549 074 Bl). Zvláště výhodné bakteriální polysacharidové adjuvans je 3D-MPL.
-6CZ 298697 B6
Používané deriváty LPS podle vynálezu jsou ty imunostimulanty, které jsou podobné strukturou struktuře LPS nebo MPL nebo 3D-MPL. Ve výhodném provedení vynálezu derivátu LPS mohou být acylované monosacharidy, kterou jsou dílčí částí shora uvedené struktury MPL.
Saponiny se popisují v publikaci Lacaille-Dubois, M. and Wagner H. (1996), A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine, vol. 2, pp. 363-386. Saponiny jsou steroidní glykosidy nebo triterpenglykosidy, které se vyskytují v rostlinách a v mořských živočiších. Saponiny se zmiňují v souvislosti s tvorbou koloidních roztoků ve vodě, které při míchání pění, a v souvislosti se srážením cholesterolu. Když se saponiny dostanou do ío blízkosti membrány tvoří v membráně struktury podobné pórům, které způsobují praskání membrány. Vlastností jistých, ne všech, saponinů je například jev hemolýza erytrocytů.
Saponiny jsou známy jako adjuvans v případě vakcinačních prostředků vhodných pro systémovou aplikaci. Adjuvantní a hemolytická aktivita jednotlivých saponinů se studuje v oboru (popi15 suje se v publikaci Lacaille-Dubois, M. and Wagner H. (1996), A review of the biological and pharmacological acitivities of saponins. Phytomedicine, vol. 2, pp. 363-386). Například přípravek Wuil A (získaný z kůry jihoamerického stromu Quillaja Saponaria Molina) ajeho frakce se popisují v patentovém dokumentu US 5 057 540 a v publikaci „Saponins as vaccine adjuvants.“ Kensil, C. R„ Crit. rev. Ther. Drug Carrier Syst., 1996, 12 (1-2):1-55 a v patentovém dokumentu
EP 0 362 279 Bl. Jisté struktury nazývané imunostimulační komplexy (ISCOMS) obsahující frakce přípravku Quil A jsou hemolytické a používají se při výrobě vakcinačních prostředků (popisuje se v patentovém dokumentu Morein, B., EP 0 109 942 Bl, WO 96/11711, WO 96/33739). hemolytické saponiny QS21 a QS17 (frakce Quil A čištěné pomocí HPLC) se popisují jako silná systémová adjuvans a způsob jejich produkce se popisuje v patentovém doku25 mentu US 5 057 540 a EP 0 362 279. Jiné saponiny, které se používají ve studiích systémové vakcinace, se získaly z jiných druhů rostlin, jako je Gypsophila a Saponaria (popisuje se v publikaci Bomford et al., Vaccine, 10(9): 572-577, 1992).
Zesílený systém zahrnuje kombinaci netoxického derivátu lipidu A a derivátu saponinů zvláště v kombinaci QS21 a 3D-MPL, jak se popisuje v patentovém dokumentu WO 94/0053 nebo méně reaktogenní prostředek, kde QS21 je zhášený cholesterolem, jak se popisuje v patentovém dokumentu WO 96/33739.
Zvláště vhodné adjuvans zahrnující QS21 a 3D-MPL voleji ve vodní emulzi se popisuje v patentovém dokumentu WO 95/17210.
V jednom provedení vynálezu se popisuje vakcinační prostředek obsahující antigenní přípravek influenzy podle vynálezu upravený s detoxifikováným lipidem A nebo netoxickým derivátem lipidu A, s výhodou upravený monofosforyllipidem A nebo jeho derivátem.
Vakcinační prostředek s výhodou obsahuje saponin, výhodněji QS21.
Prostředek s výhodou obsahuje olej ve vodní emulzi. Vynález dále popisuje způsob produkce vakcinačního prostředku obsahujícího směs antigenního přípravku podle vynálezu spolu s farma45 ceuticky přijatelnou pomocnou látkou, jako je 3D-MPL.
Vakcinační prostředky podle vynálezu mohou dále obsahovat alespoň jednu povrchově aktivní látku. Vhodné neionogenní povrchově aktivní látky se vybraly ze skupiny zahrnující oktylfenoxypolyoxyetanoly nebo nonylfenoxypolyoxyetanoly (například běžně dostupné jako
Triton(tm), estery polyoxyetylensorbitanu (Tween(tm) a polyoxyetylenestery nebo estery obecného vzorce I:
HO(CH2CH2O)n-A-R (I),
-7CZ 298697 B6 kde symbol n je 1 až 50, symbol Aje vazba nebo skupina -C(O)-, symbol Rje alkyl obsahující 1 až 50 atomů uhlíku nebo fenylalkyl, kde alkyl obsahuje 1 až 50 atomů uhlíku, a kombinace dvou nebo více radikálů.
Výhodné povrchově aktivní činidla obecného vzorce I jsou molekuly, kde symbol n je 4 až 24, výhodněji 6 až 12 a nejvýhodněji 9. Symbol Rje Ci.5O, s výhodou alkyl obsahující 4 až 20 atomů uhlíku a nejvýhodněji alkyl obsahující 12 atomů uhlíku.
Oktylfenoxypolyoxyetanoly a polyoxyetylensorbitanestery se popisují v publikaci „Surfactant ío systems“ Eds: Attwood and Florence (1983, Chapman and Halí), octylfenoxypolyetanoly (okroxynoly) zahrnující t-oktylfenoxypolyetoxyetanol (Triton X-100(tm| se také popisují v publikaci měrek Index Entry 6858 (page 1162), 12* edition Merck & Co. lne., Whitehouse Station, N.J., USA, ISBN 0911910-12-3). Estery polyexyetylensorbitanu zahrnující polyoxyetylensorbitanmonooleát (Tween 80<tm>) se popisují v publikaci Merck Index Entry 7742 (page
1308, 12th Edition, Merck & Co. lne., Whitehouse Station, N. J., USA, ISBN 0911910-2-3). Oba prostředky se mohou vyrobit za použití zde popsaných způsobů nebo je možné je získat z běžných zdrojů, například od firmy Sigma lne..
Zvláště výhodné neionogenní povrchově aktivní činidla zahrnují Triton X-45, t-oktylfenoxy20 polyetoxyetanol (Triton X-100), Triton X-102, Triton X-114, Triton X-165, Triton X-205, Triton X-305, Triton N-57, Triton N-101, Triton N-128, Breij 35, polyoxyetylen-9-leuryleter (leureth 9) a polyoxyetylen-9-stearyleter (steareth 9). Zvláště se používají triton X-100 a laureth 9. Zvláště výhodný je také polyoxyetylensorbitanester, polyoxyetylensorbitanmonooleát (Tween 80(tm)).
Další výhodné polyoxyetylenetery obecného vzorce I se vybraly ze skupiny obsahující polyoxyetylen-8-stearyleter, polyoxyetylen-4-lauryleter, polyoxyetylen-35-lauryleter a polyoxyetylen23-lauryleter.
Alternativní termíny a názvy polyoxyetylenlauryleteru se popisují v CAS registru. Číslo polyoxyetylen-9-lauryleteru v CAS registru je 9002-92-0. Polyoxyetylenetery, jako je polyoxyetylenlauryleter se popisuje v publikaci Merck index (12th ed: entry 7717, Merck & Co., Inc., Whitehouse, Station, N.J. USA, ISBN. 0911910-12-3). Eaureth 9 se vytvořil reakcí etylenoxidu s dodecylalkoholem a obsahuje v průměru devět etylenoxidových jednotek.
Dva nebo více neionogenních povrchově aktivních činidel z popsaných odlišných skupin povrchově aktivních činidel může být přítomno ve zde popsaných vakcinačních prostředcích. Zvláště výhodná je kombinace poyoxyetylensorbitanesteru, jako je polyoxyetylensorbitanmonooleát (Tween 80(tm)), a oktoxynolu, zvláště výhodná kombinace neionogenních povrchově aktivních látek zahrnuje laureth 9 a polyoxyetylensorbitanester nebo oktytoxynol nebo obě látky.
Neionogenní povrchově aktivní látky, jako jsou ty popsané shora v textu, vykazují následující výhodnou koncentraci v konečném vakcinačním prostředku: polyoxyetylensorbitanestery, jako je Tween 80(tm) 0,01 až 1 %, nej výhodněji přibližně 0,1 % (hmotnost/objem), oktylfenoxypoly45 oxyetanoly nebo nonylfenoxypolyoxyetanoly, jako je triton X-l OO1 1 nebo jiné detergenty v sérii tritonů: 0,01 až 0,1 %, nejvýhodněji 0,05 až 0,02 % (hmotnost/objem), polyoxyetylenetery obecného vzorce I, jako je laureth 9: 0,1 až 20 %, s výhodou 0,1 až 10 % a nejvýhodněji 0,1 až 1 % nebo přibližně 0,5 % (hmotnost/objem).
V případě jistých vakcinačních prostředků mohou být zahrnuty ve vakcinačních prostředcích i jiné vakcinační složky. Jako takové může vakcinační prostředek obsahovat kyselinu žlučovou nebo její derivát, zvláště ve formě sole. Zahrnují například deriváty kyseliny cholové a její sole, zvláště sodné sole kyseliny cholové nebo deriváty kyseliny cholové. Příklady žlučových kyselin a jejich deriváty zahrnují kyselinu cholovou, kyselinu deoxycholovou, chenodeoxycholovou kyse55 linu, kyselinu lithocholovou, kyselinu ursodeoxycholovou, hyodeoxycholovou a jejich deriváty,
-8CZ 298697 B6 jako je glykoderiváty, tauroderiváty, nebo amidopropyl-l-propansulfonové a amidopropyl-2hydroxy-l-propansulfonové kyseliny žlučových kyselin nebo N,N-bis(3D-glukonoamidopropyl)deoxycholamid. Zvláště výhodným příkladem je deoxycholát sodný (NaDOC), který může být přítomný v dávce vakcinačního prostředku.
Vynález dále popisuje farmaceutické sady obsahující zařízení pro aplikaci vakcinačního prostředku naplněného vakcinačním prostředkem podle vynálezu. Takové aplikační prostředky zahrnují, ale nejsou omezeny na zařízení opatřená jehlou, vstřikovací zařízení vhodná pro kapalinu, zařízení pro aplikaci práškových prostředků a spreje (vhodná pro intranasální použití).
Antigenní prostředky viru influenzy podle vynálezu se mohou získat způsobem oplodnění vajíček nebo libovolnou metodou nové generace za použití tkáňové kultury pro růst viru nebo expresi povrchových antigenů rekombinantního viru influenzy. Vhodné buněčné substráty pro růst viru zahrnují například buňky ledvin psů, jako je MDCK nebo buňky z klonů MDCK, buňky podobné
MDCK, buňky opičích ledvin, jako jsou buňky AGMK zahrnující buňky Věro, vhodné prasečí buněčné linie nebo libovolný jiný typ savčích buněk vhodný pro produkci viru influenzy pro účely vakcinace. Vhodné buněčné substráty také zahrnují lidské buňky, například buňky MRC-5. Vhodné buněčné substráty se neomezují na buněčné linie, například primární buňky, jako jsou kuřecí embryonální fibroblasty.
Antigenní prostředek viru influenzy se může připravit libovolným počtem běžně dostupných aplikačních postupů, například postupem štěpení viru influenzy popsaném v patentovém dokumentu DD 300 833 a DD 211 444. Tradičně štěpený virus influenzy se připravuje použitím rozpouštědla/detergentu, jako je tri-n-butylfosfát nebo dietyleter v kombinaci s Tween0’’ (známo jako metoda štěpení „Tween-eter“). Tento postup se stále používá v některých výrobních zařízení. Jiná používaná štěpící činidla zahrnují detergenty nebo proteolytické enzymy nebo sole žlučových kyselin, například deoxycholát sodný, jako se popisuje v patentovém dokumentu DD 155 875. Detergenty, které se mohou použít jako štěpící činidla zahrnují kationogenní detergenty, například cetyltrimetylamoniumbromid (CTAB), jiné ionogenní detergenty, jako je například laurysulfát, taurodeoxycholát nebo neionogenní detergenty, jako jsou ty popsané shora v textu zahrnující Triton X-100 (například způsobem popsaným v publikaci Lina et al., 2000, Biologicals 28, 95-103) a Triton B-101 nebo v kombinaci libovolných dvou detergentů.
Způsob přípravy štěpených vakcinačních prostředků bude zahrnovat řadu různých filtrací a/nebo jiných separačních kroků, jako je ultracentrifugace, ultrafiltrace, zonální centrifugace a chromatografie (například chromatografie s výměnou iontů), v různých kombinacích, a může také zahrnovat krok deaktivace, například teplem, formaldehydem nebo β-propiolaktonem nebo UV zářením. Tento krok deaktivace se může provést před nebo po štěpení. Proces štěpení se může provést jako vsádkový, kontinuální nebo semikontinuální proces.
Výhodné štěpené vakcinační antigenní prostředky viru influenzy podle vynálezu obsahují zbytkové množství přípravku Tween X-100 z postupu přípravy, ačkoliv se také mohou přidat nebo jejich koncentrace se může také upravit po přípravě štěpeného antigenu. Je výhodné, aby byl přítomen jak Tween 80 tak Triton X-100. Výhodné rozmezí konečných koncentrací těchto neio45 nogenních povrchově aktivních látek v dávce vakcinačního prostředku jev případě Tween 80 0,01 až 1 % (objem/objem), v případě přípravku Triton X-100 0,01 až 0,1 % (hmotnost/objem), výhodněji 0,05 až 0,02 % (hmotnost/objem).
V jiném případě antigenní přípravy viru influenzy podle vynálezu se mohou získat ze zdroje jiného než je živý virus influenzy, například antigen hemaglutinin se může připravit rekombinantně.
-9CZ 298697 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Příprava antigenního prostředku viru influenzy za použití α-tokoferolsukcinátu jako stabilizátoru vakcinačního prostředku, který neobsahuje konzervační činidla (vakcinační prostředek se sníženým obsahem thiomersalu).
Monovalentní štěpený vakcinační prostředek se připravil následujícím postupem.
Příprava virového inokula
V den inokulace vajíček obsahujících embryo se připravilo čerstvé inokulum smícháním pracovní očkovací dávky s fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem obsahujícím sulfát gen15 tamycinu v koncentraci 0,5 mg/ml a hydrokortizonu v koncentraci 25 pg/ml (v závislosti na kmenu viru). Virové inokulum se udržovalo při teplotě 2 až 8 °C.
Inokulace vajíček obsahujících embrya
V případě replikace viru se použily dvě až jedenáct dnů staré vajíčka s embryem. Skořápky jsou dekontaminovány. Vajíčka se inokulovala inokulem viru o objemu 0,2 ml. Inokulovaná vajíčka se inkubovala při vhodné teplotě (závislé na virovém kmenu) po dobu 48 až 96 hodin. Nakonec inkubační doby se embrya usmrtila ochlazením a vajíčka se uchovávala po dobu 12 až 60 hodin při teplotě 2 až 8 °C.
Sklizeň
Z ochlazených vajíček s embryi se shromáždila alantoická tekutina. Z jednoho vejce se shromáždí 8 až 10 ml surové alantoické tekutiny.
Koncentrace a čištění celého viru z alantoické tekutiny
1. Čištění
Shromážděná alantoická tekutina se čistila centrifugací při mírné rychlosti (rozmezí 4000 až 14 000 g).
2. Adsorpce
Aby se vytvořil gel CaHPO4 v čištěném shromážděném viru, přidal se 0,5 mol/1 Na2HPO4 a 0,5 mol/1 CaCl2 tak,a by se dosáhlo konečné koncentrace CaHPO4 1,5 g až 3,5 g CaHPO4 najeden litr v závislosti na kmenu viru.
Po sedimentaci trvající alespoň 8 hodin se odstranil supematant a sediment obsahující virus influenzy se rozpustil přidáním roztoku EDTA-Na2 v koncentraci 0,26 mol/1 v závislosti na používaném množství CaHPO4.
3. Filtrace
Resuspendovaný sediment se filtroval před filtrační membránu 6 pm.
-10CZ 298697 B6
4. Centrifugace v sacharidovém gradientu
Koncentrace viru influenzy se zvýšila izopyknickou centrifugací v lineárním sacharózovém gra5 dientu (0,55 % (hmotnost/objem)) obsahujícím 100 pg/ml thiomersalu. Průtoková rychlost je 8 až litrů/hodinu.
Na konci centrifugace se obsah rotoru rozdělil do čtyř různých frakcí (sacharóza se měří refrak-
| tometrem): - frakce 1 | 55 až 52 % sacharóza |
| - frakce 2 | přibližně 52 až 38 % sacharóza |
| - frakce 3 | 38 až 20 % sacharóza* |
| - frakce 4 | 20 až 0 % sacharóza |
* závisí na virovém kmenu: frakce 3 se může redukovat na 15 % sacharózu.
V případě další přípravy vakcinačního prostředku se použily frakce 2 a 3.
Frakce 3 se promyla diafiltrací s fosforečnanovým pufrem za účelem redukovat obsah sacharózy na přibližně 6 %. Virus influenzy přítomný v této ředěné frakci se shromáždil do peletu, aby se odstranily rozpouštěné nečistoty.
Pelet se resuspendoval a dobře se promíchal za účelem získání homogenní suspenze. Frakce 2 se resuspendovaný pelet frakce 3 se shromáždily a přidal se fosforečnanový pufr, aby se dosáhlo konečného objemu 40 litrů. Tento produkt je koncentrát monovalentního celého viru.
5. Centrifugace v sacharidovém gradientu s deoxycholátem sodným
Monovalentní koncentrát celého viru influenzy se aplikoval do ultracentrifugy ENI-MARK II. Rotor K3 obsahuje lineární sacharidový gradient (0,55 % (hmotnost/objem)), který se přelije gradientem deoxycholátu sodného. Během štěpení je přítomen přípravek Tween 80 až do koncentrace 0,1 % (hmotnost/objem) a v případě virů kmene B se přidá tokoferolsukcinát až do koncentrace 0,5 mM. Maximální koncentrace deoxycholátu sodného je 0,7 až 1,5% (hmotnost/objem) a je závislá na kmenu. Průtoková rychlost je 8 až 15 litrů za hodinu.
Na konec centrifugace se obsah rotoru rozdělil do třech různých frakcí (sacharóza se měří refraktometrem). Frakce 2 se požije pro další zpracování. Obsah sacharózy v případě limitu u jednotlivých frakcí kolísá v rozmezí 47 až 18 % podle kmenů a po zhodnocení je konstantní.
6. Sterilní filtrace
Oddělená virová frakce se filtrovala před filtrační membrány končící membránou s velikostí pórů 0,2 μηι. V případě ředění se použil fosforečnanový pufr obsahující 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 20 a (v případě virů kmene B) a (v případě virů kmene B) 0,5 mM tokoferolsukcinát. Konečný objem filtrované frakce 2 je 5-ti násobek počátečního objemu frakce.
8. Deaktivace
Filtrovaný monovalentní materiál se inkuboval při teplotě 22 ± 2 °C po maximální dobu 84 hodin (v závislosti na virových kmenech, tuto inkubaci je možné ztratit). Pak se přidá fosforečnanový pufr obsahující 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 za účelem redukovat celkový obsah proteinu na maximální koncentraci 250 pg/ml. V případě virů kmenů B se aplikoval za účelem ředění fyziologický roztok upravený fosforečnanovým pufrem obsahujícím 0,25% (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 až 0,25 mM tokoferolusukcinát, přičemž se obsah celko-11 CZ 298697 B6 vého proteinu sníží na 250 pg/ml. Přidá se formaldehyd tak, aby konečná koncentrace byla 50 pg/ml a deaktivace probíhá při teplotě 20 ± 2 °C po dobu alespoň 72 hodin.
Koncentrace deaktivovaného materiálu štěpeného viru se zvýšila alespoň dvakrát v ultrafiltrační 5 jednotce vybavené membránami acetátu celulózy s hodnotou MWCO 20 000. Materiál se následně promyl fosforečnanovým pufrem, který obsahuje 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku
Tween 80 a pak fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem, který obsahuje 0,01 % (hmotnost/objem) přípravku Tween. V případě viru kmene B se při promývání používá fyziologický roztok pufrovaný fosforečnanem obsahujícím 0,01 % (hmotnost/objem) přípravku Tween ío 80 a 0,01 mM tokoferolsukcinát.
9. Konečná sterilní filtrace
Materiál po ultrafiltraci se filtroval přes filtrační membrány, které končí membránou s póry 15 0,2 pm. Filtrační membrány se promyly a materiál se ředil tak, aby koncentrace proteinu nepřekročila 500 pg/ml, za použití fyziologického roztoku pufrovaného fosforečnanem, který obsahuje
0,01 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 a (v případě viru kmene B) 0,1 mM tokoferolsukcinát.
10. Uchovávání
Monovalentní konečná dávka se uchovávala při teplotě 2 až 8 °C po maximální dobu 18 měsíců.
Stabilita
Tabulka č.l: Porovnání obsahu HA v závislosti na čase (pg/ml) stanoveném SRD v monovalentních konečných dávkách.
| Kmen | Stabilizát or | Po produkci | 4 týdny při teplotě 30 °C | 6 měsíců při teplotě 2 až 8 °C | 12 měsíců při teplotě 2 až 8 °C |
| B/Yamanas | tokoferols | 169 | 139 | 172 | ND |
| hi/166/98 | ukcinát (zbytková rtuť 3pg/ml) | (82%) | (>100%) | ||
| B/Yamanas | thiomersal | 192 | 160 | 186 | 178 |
| hi/166/98 | (108pg/ml) | (83%) | (97%) | (93%) |
-12CZ 298697 B6
| B/Yamanas hi/166/98 | žádná zbytková rtuť 3pg/ml) | 191 | 122 (60%) | 175 (92%) | 154 (81%) |
| B/Johanne | tokoferols | 166 | 183 | 158 | 179 |
| sburg/5/9 9 | ukcinát (zbytková rtuť 4pg/ml) | (>100%) | (95%) | (>100%) | |
| B/Johanne | tokoferols | 167 | 179 | 158 | 178 |
| sburg/5/9 9 | ukcinát (zbytková rtuť 4pg/ml) | (>100%) | (95%) | (>100%) | |
| B/Johanne | tokoferols | 144 | 151 | 130 | 145 |
| sburg/5/9 9 | ukcinát (zbytková rtuť 3pg/ml) | (>100%) | (90%) | (>100%) | |
| B/Johanne | thiomersal | 159 | ND | 172 | 154 |
| sburg/5/9 9* | (>100%) | (97%) | |||
| B/Johanne | žádný | 169 | 107 | 153 | ON |
| sburg/5/9 9** | (63%) | (90%) |
*připravovaný podle přípravku FLUARIX(tm) z licencí, **připravovaný podle příkladu 1 bez tokoferylsukcinátu
ON probíhající ND nestanoveno
Příklad 2: Příprava vakcinačního prostředku influenzy za použití α-tokoferolsukcinátu jako io stabilizátoru pro vakcinaění prostředek se sníženým obsahem thiomersalu
-13 CZ 298697 B6
Monovalentní konečné dávky třech kmenů A/New Caldonia/20/99 (HlNl)IVR-l 16, A/Panama/2007/99 (H3N2) Resvirl7 a B/Yamanashi/166/98 se připravovaly způsobem popsaným v příkladu 1.
Hromadění
Shromáždilo se vhodné množství monovalentních konečných dávek tak, aby konečná koncentrace HA byla 30 pg/ml v případě A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR-116 respektive A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir-l7 a 39 pg/ml v případě B/Yamanashi/166/98. Přípravky Tween 80 a ío Tween X-100 se upravily tak, aby jejich koncentrace byl 580 pg/ml respektive 90 pg/ml.
Konečný objem se upravil na 3 1 fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem, trivalentní produkt se filtroval nakonec přes membránu tvořenou acetátem celulózy s velikostí pórů 0,8 pm za účelem získání trivalentní konečné dávky. Do každé stříkačky se naplnilo alespoň 0,5 ml trivalentní konečné dávky.
Tabulka č. 2: Porovnání obsahu HA závislém na čase, jak se stanovilo pomocí SRD v trivalentních konečných dávkách, které se získaly z injekčních stříkaček.
| Vakcinační prostředek | kmen | 0 měsíců | 2 měsíce | 4 měsíce | 6 měsíců |
| chřipkový vakcinační prostředek bez stabilizátoru | A/NCal/20/99 | 33(32- 34) | 32(31- 33) | 36(34- 38) | 31(30- 32) |
| A/Pan/2007/99 | 29(27- 31) | 31(28- 34} | 34(32- 36) | 32(31- 33) | |
| B/Yam/166/98 | 36(34- 38) | 33(32- 34) | I o (\) | 31 (29- 33) | |
| chřipkový vakcinační prostředek obsahuj ící stabilizátoru | A/NCal/20/99 | 31 (30- 32) | 32(31- 33) | 36(34- 38) | 32(31- 35) |
| ot— tokoferolsukci nát | A/Pan/2007/99 | 33(30- 36} | 33(30- 36} | 36(35- 37) | 33(31- 35) |
| B/Yam/166/98 | 37(35- 39) | 36(34- 38) | 38 (35- 41) | 36(33- 39) |
- 14CZ 298697 B6
Příklad 3: Způsob SRD používaný k měření obsahu hemaglutininu
Skleněné plotny (12,4 až 10,0 cm) jsou potažené agarózovým gelem obsahujícím koncentraci séra proti HA influenzy, která je doporučena NIBSC. Po vytvoření gelu se vytvoří do agarózy 72 prohlubní určených pro vzorky (průměr prohlubně je 3 mm). Do každé prohlubně se nanese 10 mikrolitrů vhodného ředění referenčního vzorku a ostatních vzorků. Plotny se pak nechají inkubovat po dobu 24 hodin při teplotě místnosti (20 až 25 °C) ve vlhké buňce. Pak se plotny nechají přes noc nasáknout roztokem chloridu sodného a krátce se promyjí destilovanou vodou, ío gel se pak stlačí a vysuší. Když se gel úplně vysuší, destičky se barví v roztoku briliantové modře podle Commassie po dobu 10 minut a dvakrát se odbarvují ve směsi metanolu a kyseliny octové až jasně definované obarvené zóny se stanou viditelné. Po vysušení ploten se měří průměr obarvených zón obklopujících prohlubeň santigenem ve dvou směrech, které svírají pravý úhel.
V jiném případě je možné použít zařízení, které měří povrch. Zkonstruovaly se křivky závislé na dávce, kdy se vyneslo ředění antigenu proti povrchu zón a výsledky se počítaly podle standardních metod popsaných v publikaci Finney, D. J. (1952). Statistical Methods in Biological Assay. London: Griffín, Quoted in: Wood, JM, et al (1977). J. Biol. Standard. 5: 237-247).
Příklad 4: Klinické testy chřipkového vakcinačního prostředku stabilizovaného a-tokoferolem (omezený obsah thiomersalu)
V případě klinického testování se používají injekční stříkačky získané způsobem popsaným v příkladu 2.
H3N2: A/Panama/2007/99 RESVIR-17
H1N1: A/New Caledonia/20/99 (HlNl)IVR-l 16)
B: B/Yamanashi/166/98
Tabulka č. 3
| dospělí 18 až 60 let | |||||||
| thio- red. | thio- plus | ||||||
| H3N2 | H1N1 | B | H3N2 | H1N1 | B | ||
| pre- vakc. | GMT | 47 | 41 | 111 | 55 | 37 | 102 |
| titrdO( %) | 10,3% | 13,8 % | 1,7 % | 5,3 % | 12,3 % | 8,8 % |
-15CZ 298697 B6
| titr Ž40,SPR (%) | 60,3% | 55,2 % | 75,9 % | 70,2 % | 52,6 % | 75,4 % | |
| post- vakc. | stupeň sérokon verze | 10,3% | 13,8 % | 1,7 % | 5,3 % | 12,3 % | 8,8 % |
| podst. zvýšení titru protilát ky | 58, 6% | 74,1 % | 58,6 % | 63,2 % | 73,7 % | 52,6 % | |
| sérokonv erze (%} | 58,6% | 74,1 % | 58,6 % | 63,2 % | 73,7 % | 52,6 % | |
| GMT | 328 | 525 | 766 | 324 | 359 | 588 | |
| násobek GMT | 7,3 | 13,0 | 6,9 | 5,9 | 9,8 | 5,9 | |
| titr^40, SPR (%) | 100 % | 100 % | 100 % | 100 % | 100 % | 100 % |
n.d. = C.I. pro poměr p=n/N není definován, protože p*(l-p)*N<9 n/N = respondéři (n) jako část počtu subjektů (sub)populace (N) to je sérokonverze nebo podstatné zvýšení, také se popisuje v CPMAP/BWP/214/96 12.3.1997, p. 17ff.
GMT = geometrický průměr hodnoty titru, převrácená hodnota 95 % C.I. = 95 % interval spolehlivosti
SPR = stupeň ochrany sérem: podíl subjektů s ochranným titrem před vakcinací nebo po vakciío naci >40 titr = titr Hl-protilátek stupeň sérokonverze = podíl subjektů se zvýšením množství protilátek z hodnoty <10 před vakcinací na hodnotu >40 po vakcinací násobek GMT = násobek zvýšení GMT podstatné zvýšení = podíl subjektů s titrem protilátky >10 před vakcinací a 4 násobné zvýšení množství protilátek po vakcinací req. = požadavky EU
Sérokonverze = negativní nebo pozitivní nebo příklad 4 násobné (negativní: titr <10, pozitivní:
titr >40) — podíl subjektů, kteří vykazují sérokonverzi (<10 až >40) nebo podstatné zvýšení.
-16CZ 298697 B6
Výsledky ukazují, že použitím vakcinačního prostředku je možné dosáhnout ekvivalentní ochrany jako v případě vakcinačního prostředku, který obsahuje thiomersal, jako konzervační činidlo.
Příklad 5a: Příprava antigenního přípravku viru influenzy za použití cc-tokoferolsukcinátu, jako stabilizačního činidla v případě vakcinačního prostředku, který neobsahuje thiomersal
Monovalentní štěpený vakcinační prostředek se připravil podle následujícího prostupu.
Příprava virového inokula
V den inokulace vajíček obsahujících embryo se připravilo čerstvé inokulum smícháním pracovní očkovací dávky s fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem obsahujícím gentamycin15 sulfát v koncentraci 0,5 mg/ml a hydrokortizon v koncentraci 25 pg/ml (v závislosti na kmenu viru). Vírové inokulum se udržovalo při teplotě 2 až 8 °C.
Inokulace vajíček obsahujících embrya
V případě replikace viru se použily devět až jedenáct dnů stará vajíčka s embryem. Skořápky jsou dekontaminovány. Vajíčka se inokulovala inokulem viru o objemu 0,2 ml. 60 000 inokulovaných vajíček se inkubovalo při vhodné teplotě (závislé na virovém kmenu) po dobu 48 až 96 hodin. Nakonec inkubační doby se embrya usmrtila ochlazením a vajíčka se uchovávala po dobu 12 až 60 hodin při teplotě 2 až 8 °C.
Inokulace vajíček obsahujících embrya
V případě replikace viru se použily devět až jedenáct dnů stará vajíčka s embryem. Skořápky jsou dekontaminovány. Vajíčka se inokulovala inokulem viru o objemu 0,2 ml. 60 000 inokulovaných vajíček se inkubovalo při vhodné teplotě (závislé na virovém kmenu) po dobu 48 až 96 hodin. Nakonec inkubační doby se embrya usmrtila ochlazením a vajíčka se uchovávala po dobu 12 až 60 hodin při teplotě 2 až 8 °C.
Hromadění
Z ochlazených vajíček s embryi se shromáždila alantaoická tekutina. Z jednoho vejce se získá 8 až 10 ml surové alantoické tekutiny.
Zvýšení koncentrace a čištění celého viru z alantoické tekutiny
Čiření
Shromážděná alantoická tekutina se čistila centrifugací při mírné rychlosti (rozmezí 4000 až 14 000 g).
Srážení
Saturovaný roztok síranu amonného se přidal do vyčiřeného produktu, aby se dosáhl konečné koncentrace síranu amonného 0,5 mol/1. Po sedimentaci po dobu alespoň jedné hodiny se odstra50 nila sraženina filtrací na filtrech, jejich velikost pórů je v typickém případě 0,5 pm.
Filtrace
Vyčiřený surový celý virus se filtroval přes filtrační membrány končící osvědčenou sterilní mem55 bránou s velikostí pórů 0,2 pm.
- 17CZ 298697 B6
Ultrafiltrace
Sterilní filtrovaný surový monovalentní celý virus se koncentroval na kazetě vybavené membránou BIOMAX(tm) s hodnotou MWCO 1 000 000 alespoň šestkrát. Koncentrovaný roztok se pro5 myl fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem alespoň 1,8 krát.
Centrifugace v sacharidovém gradientu
Koncentrace viru influenzy se zvýšila izopyknickou centrifugací v lineárním sacharózovém graío dientu (0,55 % hmotnost/objem)). Průtoková rychlost je 8 až 15 litrů/hodinu.
Na konci centrifugace se obsah rotoru rozdělil do čtyř různých frakcí (sacharóza se měří refrak-
| tometrem): | |
| - frakce 1 | 55 až 52 % sacharóza |
| - frakce 2 | přibližně 52 až 38 % sacharóza |
| - frakce 3 | 38 až 20 % sacharóza* |
| - frakce 4 | 20 až 0 % sacharóza |
*závisí na virovém kmenu: frakce 3 může být redukována na 15 % sacharózu.
V případě další přípravy vakcinačního prostředku se použila bud’ pouze frakce 2, nebo frakce 2 spolu s další čištěnou frakcí 3.
Frakce 3 se promyla diafiltrací fosforečnanovým pufrem za účelem redukovat obsah sacharózy pod 6 %. Tento krok se může vypustit. Virus influenzy přítomný v této ředěné frakci se shromáž25 díl do peletu, aby se odstranily rozpuštěné nečistoty.
Pelet se resuspendoval a dobře se promíchal za účelem získání homogenní suspenze. Shromáždily se frakce 2 a resuspendovaný pelet frakce 3 a přidal se fosforečnanový pufr, aby se dosáhlo konečného objemu 40 litrů. Tento produkt je monovalentní koncentrát celého viru.
Centrifugace v sacharidovém gradientu s deoxycholátem sodným
Koncentrace monovalentního celého viru influenzy se vnesl do ultracentrifugy ENI-MARK II. Rotor K3 obsahuje lineární sacharidový gradient (0,55 % (hmotnost/objem)), který se přelije gradientem deoxycholátu sodného. Během štěpení je přítomen přípravek Tween 80 až do koncentrace 0,1 % (hmotnost/objem) a v případě virů kmene B se přidá tokoferolsukcinát až do koncentrace 0,5 mM. Maximální koncentrace deoxycholátu sodného je 0,7 až 1,5 % (hmotnost/objem) a je závislá na kmenu. Průtoková rychlost je 8 až 15 litrů za hodinu.
Na konci centrifugace se obsah rotoru rozdělil do třech různých frakcí (sacharóza se měří reflektometrem). Frakce 2 se použije pro další zpracování. Obsah sacharózy v případě limitu u jednotlivých frakcí kolísá v rozmezí 47 až 18 % podle kmenů a po zhodnocení je konstantní.
Sterilní fdtrace
Frakce štěpeného viru se filtrovala na filtračních membránách končících membránou s velikostí pórů 0,2 pm. V případě ředění se použil fosforečnanový pufr obsahující 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 a (v případě virů kmene B) se používá 0,5 mM tokoferylsukcinát. Konečný objem filtrované frakce 2 je 5-ti násobek původního objemu frakce.
Deaktivace
Filtrovaný monovalentní materiál se inkuboval při teplotě 22±2 °C po maximální dobu 84 hodin (v závislosti na virových kmenech, tuto inkubaci je možné zkrátit). Pak se přidá fosforečnanový
-18CZ 298697 B6 pufr obsahující 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 za účelem redukovat celkový obsah proteinu na maximální koncentraci 450 pg/ml. V případě virů kmenů B se aplikoval za účelem ředění fyziologický roztok upravený fosforečnanovým pufrem obsahujícím 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 a 0,25 mM tokoferolusukcinát, přičemž se formaldehyd tak, aby konečná koncentrace byla 100 pg/ml, a deaktivace probíhá při teplotě 20±2 °C po dobu alespoň 72 hodin.
Ultrafiltrace io Koncentrace deaktivovaného štěpeného virového materiálu se zvýšila dvakrát v ultrafiltrační jednotce vybavené membránami z acetátu celulózy s hodnotu MWCO 20 000. Materiál se následně promyje fosforečnanovým pufrem obsahujícím 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 a pak fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem obsahujícím 0,01 % (hmotnost/objem) přípravku Tween. V případě virů kmene B se za účelem promývání použil fyziologický roztok pufrovaný za účelem promývání použil fyziologický roztok pufrovaný fosforečnanem obsahujícím 0,01 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 a 0,1 mM tokoferylsukcinát.
Konečná sterilní filtrace
Materiál po ultrafiltraci se filtroval přes filtrační membrány, které končí membránou s póry 0,2 μιη. Filtrační membrány se promyly a materiál se ředil tak, aby koncentrace proteinu nepřekročila 500 pg/ml, za použití fyziologického roztoku pufrovaného fosforečnanem, který obsahuje 0,01 % (hmotnost/objem) přípravek Tween 80 a specificky v případě viru kmene B 0,1 mM tokoferylsukcinát.
Uchovávání
Monovalentní konečná dávka se uchovávala při teplotě 2 až 8 °C po dobu maximálně 18 měsíců.
Stabilita
Tabulka č. 4: Porovnání obsahu HA (pg/ml) v závislosti na čase stanoveném SRD v monovalentních konečných dávkách
| Kmen | Stabilizátor | Po produkci | 4 týdny při teplotě 30 °C | 6 týdnů při teplotě 2 až 8°C |
| B/Johannes | tokcferolsuk | 214 | 196 | 206 |
| burg/5/99 ---------. | cinát | (92%) | (96%) | |
| B/Johannes | žádný | 169 | 107 | 153 |
| burg/5/99* * | (63%) | (90%) |
**připravovaný podle příkladu 1 bez tokofeiyl sukcinátu
-19CZ 298697 B6
Příklad 5b: Příprava antigenního prostředku viru influenzy za použití α-tokoferolsukcinátu jako stabilizátoru v případě vakcinačního prostředku, který neobsahuje thiomersal
Výhodná odchylka způsobu popsaného v příkladu 5a je následující:
Po shromáždění celého viru následuje srážení (srážení síranem amonným). Pak následuje krok čiření, kde tekutina se čiří centrifugací pří mírné rychlosti (v rozmezí 4000 až 14 000 g). Pořadí kroku srážení a čiření je opačné ve srovnání s příkladem 5a.
Následující kroky sterilní filtrace, ultrafiltrace a ultracentrifugace (centrifugace v sacharózovém gradientu) jako v příkladu 5a. Není nutné opět zpracovávat frakce, které jsou výsledkem kroku ultracentrifugace.
Zbývající kroky postupu se popisují v příkladu 5a.
Pak postup shrnutý v tomto příkladu je následující: hromadění srážení (síranem amonným) čiření sterilní filtrace ultrafiltrace ultracentrifugace štěpení (s výhodou deoxycholátem sodným) sterilní filtrace deaktivace ultrafiltrace konečná sterilní filtrace
Jiná výhodný verze příkladu 5a zahrnuje krok pre-filtrace před první sterilní filtrací. V tomto případě se použije membrána, která není sterilní filtrem, ale která umožňuje odstranění nečistot, například albuminu, před sterilní filtrací. Tento krok umožňuje dosažení lepšího výtěžku. Vhodná membrána pro pre-filtraci je přibližně ta s velikostí pórů 0,8 pm až přibližně 1,8 μιη, například 1,2 μιη. Pre-filtrace se může použít ve schématu příkladu 5a nebo příkladu 5b.
Příklad 6: Příprava vakcinačního prostředku influenzy za použití α-tokoferolsukcinátu jako stabilizátoru v případě vakcinačního prostředku, který neobsahuje thiomersal.
Monovalentní konečné dávky tří kmenů A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR-116, A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir-17 a B/Yamanashi/166/98 se připravovaly způsobem popsaným v příkladu 5.
Hromadění
Vhodné množství monovalentních konečných dávek se shromáždilo tak, aby konečná koncentrace HA byla 30 pg/ml v případě A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR-116, A/Panama/2007/99/(H3N2)Resvir-17 a respektive 36 pg/ml v případě B/Johannesburg/5/97. Koncentrace přípravku Tween 80 a Triton X-100 se upravila na hodnotu 580 pg/ml respektive 90 pg/ml. Konečný objem se upravil na 3 1 fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem. Trivalentní produkt se filtroval přes membrány končící membránou z acetátu celulózy s velikostí pórů 0,8 μιη za účelem získání trivalentní celulózy s velikostí pórů 0,8 μιη za účelem získání trivalentní konečné
-20CZ 298697 B6 dávky. Trivalentní konečná dávka se naplnila do injekčních stříkaček, kdy každá obsahuje alespoň objem 0,5 ml.
Tabulka č. 5: Porovnání obsahu HA (pg/ml) v závislosti na čase stanoveném SRD vtrivalentních konečných dávkách.
| vakcinační prostředek | kmen | 0 měsiců | 4 týdny při teplotě 30 °C | 6 raěsiců při teplotě 2 až 8°C |
| vakcinační prostředek influenzy bez stabilizátoru | A/NCal/20/99 | 31 | 32 | 30 |
| A/Pan/2007/99 | 31 | 34 | 33 | |
| .... | B/Joh/5/99* | 35 | 25 | 31 |
| vakcinační prostředek | A/NCal/20/99 | 34 | 35 | 34 |
| influenzy obsahující a-tokoferolsukcinát | ||||
| A/Pan/2007/99 | 33 | 33 | 34 | |
| B/Joh/5/99** | 29 | 25 | 28 |
ío * Prostředek je založen na cílové koncentraci 39 pg/ml.
**Prostředek je založen na cílové koncentraci 34 pg/ml.
Příklad 7: Příprava antigenního přípravku viru influenzy za použití laurylsulfátu sodného jako stabilizátoru pro vakcinační prostředek bez konzervačních činidel (vakcinační prostředek s omezeným množstvím thiomersalu)
Monovalentní koncentrát celého viru kmene B/Johannesburg/5/99 se získal způsobem popsaným v příkladu 1
Centrifugace v sacharidovém gradientu s deoxycholátem sodným
Koncentrát monovalentního celého viru influenzy se aplikoval do ultracentrifugy ENI-MARK II. Rotor K3 obsahuje lineární sacharidový gradient (0,55 % (hmotnost/objem)), který se přelije gra25 dientem deoxycholátu sodného. Během štěpení je přítomen přípravek Tween 80 až do koncentrace 0,1 % (hmotnost/objem). Maximální koncentrace deoxycholátu sodného (hmotnost/objem). Maximální koncentrace deoxycholátu sodného je 0,7 až 1,5 % (hmotnost/objem) aje závislá na kmenu. Průtoková rychlost je 8 až 15 litrů za hodinu.
-21 CZ 298697 B6
Na konec centrifugace se obsah rotoru rozdělí do třech různých frakcí (sacharóza se měří refraktometrem). Frakce 2 se použije pro další zpracování. Obsah sacharózy v případě limitu u jednotlivých frakcí kolísá v rozmezí 47 až 18 % podle kmenů a po zhodnocení je konstantní.
Sterilní filtrace
Vzorky frakce 2 o objemu 10 ml se použily pro další zpracování. Oddělená virová frakce se filtrovala na filtračních membránách končících membránou s velikostí pórů 0,2 pm. V případě ředění se použil fosforečnanový pufř obsahující 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 až 0,5 mM laurylsulfát sodný. Konečný objem filtrované frakce 2 je 5-ti násobek počátečního objemu frakce.
Deaktivace
Filtrovaný monovalentní materiál se inkuboval při teplotě 22±2 °C po maximální dobu 84 hodin (v závislosti na virových kmenech, tuto inkubaci je možné zkrátit). Pak se přidá fyziologický roztok pufrovaný fosforečnanem obsahující 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 a pak 0,5 mM laurylsulfát sodný za účelem redukovat celkový obsah proteinu na maximální koncentraci 250 pg/ml. Přidá se formaldehyd tak, aby konečná koncentrace byla 50 pg/ml a deakti20 vace probíhá při teplotě 20±2 °C po dobu 72 hodin.
Ultracentrifugace
Koncentrace deaktivovaného štěpeného virového materiálu se zvýšila alespoň dvakrát v ultra25 filtrační jednotce vybavené membránami acetát celulózy s hodnotu MWCO 20 000. Materiál se následně promyl 4 objemy fyziologického roztoku upraveného fosforečnanem, který obsahuje 0,01 % (hmotnost/objem) přípravku Tween a 0,5 mM laurylsulfát sodný.
Konečná sterilní filtrace
Materiál po ultrafiltraci se filtroval přes filtrační membrány, které končí membránou s póry 0,2 pm. Filtrační membrány se promyly a materiál se řídil tak, aby koncentrace proteinu nepřekročila 500 pg/ml, za použití fyziologického roztoku pufrovaného fosforečnanem, který obsahuje 0,01 % (hmotnost/objem) přípravek Tween 80 a 0,5 mM laurylsulfát sodný.
Uchovávání
Monovalentní konečná dávka se uchovávala při teplotě 2 až 8 °C.
Tabulka č. 7: Porovnání obsahu HA v závislosti na čase (pg(/ml) stanoveném SRD v monovalentních konečných dávkách.
| stabilizátor | po produkci | 4 týdny při teplotě 30 °C | |
| B/Johannesburg/5/99 | žádný* | 182 | 139 (77%) |
| B/Johannesburg/5/99 | laurylsulfát sodný | 288 | 264(92%) |
*připravovaný podle příkladu 7 bez přidání laurylsulfátu sodného
-22CZ 298697 B6
Příklad 8: Příprava antigenního prostředku viru influenzy za použití přípravku Plantacare nebo Laureth-9 jako stabilizátoru v případě vakcinačního prostředku bez konzervačních činidel (vakcinační prostředek s omezeným obsahem thiomersalu)
Monovalentní koncentrát celého viru kmene B/Yamanashi/166/98 se získal jak se popisuje v příkladu 1.
Fragmentace
Monovalentní koncentrát celého viru influze se ředil tak, aby koncentrace proteinu byla 1000 pg/ml pomocí íyziologického roztoku upraveného fosforečnanem s hodnotou pH 7,4. Přidal se přípravek Plantacare(R) 2000 UP nebo Laureth-9 v konečné koncentraci 1 % (hmotnost/objem). Materiál se lehce míchal po dobu 30 minut. Pak se materiál nalil na 15 % (hmotnostní) sacharózový polštář. Ultracentrifugace v Beckmanově rotoru SW 28 se provedla po dobu 2 hodin při 25 000 ot./min. a při teplotě 20 °C.
Sterilní filtrace
Supematant se odebral pro další zpracování. Frakce štěpeného viru se filtrovala na filtračních membránách končících membránou o velikosti pórů 0,2 μηι.
Deaktivace
Za účelem snížit celkový obsah proteinu na maximální hodnotu 500 pg/ml se přidal fyziologický roztok pufrovaný fosforečnanem. Formaldehyd se přidal v konečné koncentraci 100pg/mI a deaktivace probíhala při teplotě 20±2 °C alespoň po dobu 6 dní.
Ultrafiltrace
Koncentrace přípravku Tween 80 a Triton X 100 se upravila v deaktivovaném materiálu na hodnotu 0,15% respektive 0,02%. Koncentrace deaktivovaného štěpeného virového materiálu se zvýšila alespoň dvakrát v ultrafiltrační jednotce vybavené acetát celulózovou membránou s hodnotou MWCO 30 000. Materiál se následně promyl 4 objemy fyziologického roztoku puf35 rovaného fosforečnanem.
Konečná sterilní filtrace
Materiál po ultrafiltraci se filtroval přes filtrační membrány, které končí membránou s póry o velikosti 0,2 μηι. Filtrační membrány se promyly a materiál se ředil tak, aby koncentrace proteinu nepřekročila 500 pg/ml, fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem.
Uchovávání
Monovalentní konečná dávka se uchovávala při teplotě 2 až 8 °C.
-23 CZ 298697 B6
Tabulka č. 8: Porovnání obsahu HA v závislosti na čase (pg/ml) stanoveném SRD v monovalentních konečných dávkách.
| stabilizátor | po produkci | 4 týdny při teplotě 30 °C | |
| B/Yamanashi/166 /98 | žádný | 143 | 98 (68%) |
| B/Yamanashi/166 /98 | Plantacare® 2000 UP | 476 | 477 (100 %) |
| B/Yamanashi/166 /98 | Laureth-9 | 468 | 494 (>100%) |
Příklad 9: Klinické testování vakcinačního prostředku influenzy stabilizovaného a-tokoferolem (snížený obsah thiomersalu) u starých lidí prostřednictvím ID a IM aplikace
A. Příprava antigenního přípravku viru influenzy
Monovalentní štěpený vakcinační prostředek se připravil následujícím postupem.
Příprava virového inokula
V den inokulace vajíček obsahujícím embryo se připravilo čerstvé inokulum smícháním pracovní očkovací dávky s fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem obsahujícím sulfát gentamycinu v koncentraci 0,5 mg/ml a hydrokortizon v koncentraci 25 pg/ml v závislosti na kmenu viru). Virové inokulum se udržovalo při teplotě 2 až 8 °C.
Inokulace vajíček obsahujícím embrya
V případě replikace viru se použily devět až jedenáct dnů staré vajíčka s embryem. Skořápky jsou dekontaminovány. Vajíčka se inokulovala inokulem viru o objemu 0,2 ml. Inokulovaná vajíčka se inkubovala při vhodné teplotě (závislé na virovém kmenu) po dobu 48 až 96 hodin. Nakonec inkubační doby se embrya usmrtila ochlazením a vajíčka se uchovávala po dobu 12 až 60 hodin při teplotě 2 až 8 °C.
Hromadění
Z ochlazených vajíček embryi se shromáždila alantaoická tekutina. Z jednoho vejce se shromáždí obvykle 8 až 10 ml surové alantoické tekutiny.
Zvýšení koncentrace a čištění celého viru z alantoické tekutiny
1. Čiření
Shromážděná alantoická tekutina se čistila centrifugací při mírné rychlosti (rozmezí 4000 až 14 000 g).
-24CZ 298697 B6
2. Adsorpce
Aby se vytvořil gen CaHPO4 v čištěném shromážděném viru, přidal se 0,5 mol/1 Na2HPO4 a 0,5 mol/1 roztok CaCl2 tak, aby se dosáhlo konečné koncentrace CAHPO4 1,5 g až 3,5 g CaHPO4 najeden litr v závislosti na kmenu viru.
Po sedimentaci trvající alespoň 8 hodin se odstranil supematant a sediment obsahující virus influenzy se rozpustil přidáním roztoku EDTA-Na2 v koncentraci 0,26 mol/1 v závislosti na používaném množství CaHPO4.
3. Filtrace
Resuspendovaný sediment se filtroval přes filtrační membránu s velikostí pórů 6 μιη.
4. Centrifugace v sacharidovém gradientu
Koncentrace viru influenzy se zvýšila izopyknickou centrifugací v lineárním sacharózovém gradientu (0,55 % (hmotnost/objem)) obsahujícím 100 pg/ml thiomersalu. Průtoková rychlost je 8 až 15 litrů/hodinu.
Na konci centrifugace se obsah rotoru rozdělil do čtyř různých frakcí (sacharóza se měří refrak-
| tometrem): | |
| - frakce 1 | 55 až 52 % sacharóza |
| - frakce 2 | přibližně 52 až 38 % sacharóza |
| - frakce 3 | 38 až 20 % sacharóza* |
| - frakce 4 | 20 až 0 % sacharóza |
*závisí na virovém kmenu: Frakce 3 může být redukována na 15 % sacharózu.
V případě další přípravy vakcinačního prostředku se použily pouze frakce 2 a 3.
Frakce 3 se promyla diafíltrací s fosforečnanovým pufrem za účelem redukovat obsah sacharózy pod hodnotou přibližně 6 %. Virus influenzy přítomný v této ředěné frakci se shromáždil do peletu, aby se odstranily rozpuštěné nečistoty.
Pelet se resuspendoval a dobře se promíchal za účelem získání homogenní suspenze. Shromáždily se frakce 2 a resuspendovaný pelet frakce 3 a přidal se fosforečnanový pufr, aby se dosáhlo konečného objemu 40 litrů. Objem odpovídá 120 000 vajec v sádce. Tento produkt je monovalentní koncentrát celého viru.
5. Centrifugace v sacharidovém gradientu s deoxycholátem sodným
Monovalentního koncentrát celého viru influenzy se aplikoval do ultracentrifugy ENI-MARK II. Rotor K3 obsahuje lineární sacharidový gradient (0,55 % (hmotnost/objem)), který se přelije gradientem deoxycholátu sodného. Během štěpení je přítomen přípravek Tween 80 až do kon45 centrace 0,1 % (hmotnost/objem) a v případě virů kmene B se přidá tokoferolsukcinát až do koncentrace 0,5 mM. Maximální koncentrace deoxycholátu sodného je 0,7 až 1,5 % (hmotnost/objem) a je závislá na kmenu. Průtoková rychlost je 8 až 15 litrů za hodinu.
Na konci centrifugace se obsah rotoru rozdělil do třech různých frakcí (sacharózu se měří refrak50 tometrem). Frakce 2 se použije pro další zpracování. Obsah sacharózy v případě limitu u jednotlivých frakcí kolísá v rozmezí 47 až 18 % podle kmenů a po zhodnocení je konstantní.
-25CZ 298697 B6
6. Sterilní filtrace
Frakce štěpeného viru se filtrovala na filtračních membránách končících membránou s velikostí pórů 0,2 pm. V případě ředění se použil fosforečnanový pufr obsahující 0,025 % (hmotnost/5 objem) přípravku Tween 80 a (v případě virů kmene B) a 0,5 mM tokoferolsukcinát. Konečný objem filtrované frakce 2 je 5-ti násobek počátečního objemu frakce.
7. Deaktivace ío Filtrovaný monovalentní materiál se inkuboval při teplotě 22±2 °C po maximální dobu 84 hodin (v závislosti na virových kmenech, tuto inkubaci je možné zkrátit). Pak se přidá fosforečnanový pufr obsahující 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 za účelem redukovat celkový obsah proteinu na maximální koncentraci 250 pg/ml. V případě virů kmene B se aplikoval za účelem ředění fyziologický roztok upravený fosforečnanem obsahující 0,025 % (hmot15 nost/objem) přípravku Tween 80 a 0,25 mM tokoferolsukcinát, přičemž se obsah celkového proteinu sníží na 250 pg/ml. Přidá se formaldehyd tak, aby konečná koncentrace byla 50 pg/ml a deaktivace probíhá při teplotě 20±2 °C po dobu alespoň 72 hodin.
8. Ultrafiltrace
Koncentrace deaktivovaného materiálu štěpeného viru se zvýšila alespoň dvakrát v ultrafiltrační jednotce vybavené membránami acetátu celulózy s hodnotu MWCO 20 000. Materiál se následně promyl fosforečnanovým pufrem, který obsahuje 0,025 % (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 a pak fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem, který obsahuje 0,01 (hmotnost/25 objem) přípravku Tween. V případě viru kmene B se při promývání používá fyziologický roztok pufrovaný fosforečnanem obsahujícím 0,01% (hmotnost/objem) přípravku Tween 80 a 0,1 mM tokoferolsukcinát.
9. Konečná sterilní filtrace
Materiál po ultrafiltraci se filtroval přes filtrační membrány, které končí membránou s póry 0,2 pm. Filtrační membrány se promyly a materiál se ředil tak, aby koncentrace proteinu nepřekročila 1000 pg/ml, za použití fyziologického roztoku pufrovaného fosforečnanem, který obsahuje 0,01 % (hmotnost/objem) přípravek Tween 80 a (v případě viru kmene B) 0,1 mM toko35 ferolsukcinát.
10. Uchovávání
Monovalentní koncová dávka se uchovávala při teplotě 2 až 8 °C po dobu maximální 18 měsíců.
B. Příprava vakcinačního prostředku viru influenzy
Monovalentní konečná dávka třech kmenů A/New Caldonia/20/00(H1N1)IVR-116, A/Panama/2007/99 (H3N2) Resvir-17 a B/Johannesburg/5/99 se připravily způsobem popsaným v části A shora v textu.
Hromadění
Shromáždilo se vhodné množství monovalentních konečných dávek tak, aby konečná koncent50 race HA byla 60 pg/ml v případě kmenů A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR-116 respektive A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir-17 a 68 pgf(ml v případě B/Johannesburg/5/99. Přípravky Tween 80, Tween X-100 tokoferolsukcinát se upravily tak, aby jejich koncentrace byla 1000 pg/ml, 110 pg/ml respektive 160 pg(ml. Konečný objem se upravil na 3 1 fyziologickým roztokem pufrovaným fosforečnanem. Trivalentní produkt se filtroval nakonec přes membránu
-26CZ 298697 B6 tvořenou acetátem celulózy s velikostí pórů 0,8 pm za účelem získání trivalentní konečná dávka. Do každé injekční stříkačky se naplnilo alespoň 0,5 ml trivalentním konečné dávky.
Aplikace vakcinačního prostředku
Vakcinační prostředek je dostupný v předem naplněné injekční stříkačce a aplikoval se intradermálně do deltové oblasti. Používá se intradermální jehla (ID) popsaná v patentovém dokumentu EP 1092444 s penetračním omezovačem, který zaručuje správnou intradermální aplikaci. Protože tvorba boule v místě aplikace injekce demonstruje správnou aplikaci ID, pak je možné 30 minut ío po aplikaci měřit skutečnou velikost uvedené boule.
Jedna dávka o objemu 100 μΐ obsahovala následující složky:
| hemaglutinin ze tří kmenů influenzy | |||
| A/New Caledonia/20/99 | 6,0 pg |
| A/Panama/2007/99 | 6,0 pg | ||
| B/Johannesburg 5/99 | 6,0 pg | ||
| konzervační činidlo thiomersal | 0,4 pg-0,8 pg |
Shora uvedený vakcinační prostředek se porovnával se standardním trivalentním štěpeným vakcinačním prostředkem influenzy Fluarix(tm). Vakcinační prostředek Fluarix se dodává v předem naplněných injekčních stříkačkách a aplikoval se intramuskulámě do deltového svalu. Použila se jehla o délce alespoň 2,5 cm (23 gauge), aby se zaručila správná intramuskulámí aplikace.
Jedna dávka (0,5 ml) obsahovala následující složky:
| hemaglutinin ze tří kmenů influenzy | |||
| A/New Caledonia/20/99 | 15,0 pg | ||
| A/Panama/2007/99 | 15,0 pg | ||
| B/Johannesburg 5/99 | 15,0 pg | ||
| konzervační činidlo thiomersal | 50,0 pg |
Výsledky
Průměrný věk celkové kohorty v době aplikace vakcinačního prostředku byl 70,4+6,2 let. Poměr žen k mužům byl 1,7:1.
-27CZ 298697 B6
| Výsledky imunogennosti: Analýza proměnných imunogennosti byla následující: | |||||||
| proměnné | Flu-red ID (N=65) | Fluarix(tm| IM (N=65) | |||||
| GMT | GMT | LL | UL | GMT | LL | UL | |
| A/New Caledonia | před | 99,5 | 76,9 | 128,7 | 90,0 | 70,1 | 115,7 |
-28CZ 298697 B6
| po | 165,1 | 129,2 | 211,0 | 174,3 | 133,3 | 227,9 | |
| A/Panama | před | 75,5 | 54,7 | 104,2 | 69,2 | 51, 9 | 92,4 |
| po | 128,6 | 99,1 | 166,8 | 164,3 | 126,0 | 214,1 | |
| B/Johannesburg | před | 236,0 | 187,7 | 296,8 | 222,6 | 176,9 | 280,2 |
| P° | 341,2 | 276,0 | 421,7 | 402,4 | 312,1 | 518,9 | |
| stupeň sérokonverze | % | LL | UL | % | LL | UL | |
| A/New Caledonia | 15, 4 | 7,6 | 26,5 | 18,5 | 9,9 | 30,0 | |
| A/Panama | 20,0 | 11,1 | 31,8 | 29,2 | 18,6 | 41,8 | |
| B/Johannesburg | 9,2 | 3,5 | 19,0 | 16, 9 | 8,8 | 28,3 | |
| Faktor konverze | GMR | LL | UL | GMR | LL | UL | |
| A/New Caledonia | 1,7 | 1,4 | 2,0 | 1,9 | t—1 | 2,3 | |
| A/Panama | 1,7 | 1,4 | 2,1 | 2,4 | 1,9 | 3,0 | |
| B/Johannesburg | 1,4 | 1,2 | 1,7 | 1,8 | 1,5 | 2,1 | |
| stupeň ochrany sérem | % | LL | UL | % | LL | UL | |
| A/New Caledonia | před | 87,7 | 77,2 | 94,5 | 90,8 | 81,0 | 96,5 |
| po | 92,3 | 83,0 | 97,5 | 96, 9 | 89,3 | 99,6 | |
| A/Panama | před | 75,4 | 63,1 | 85,2 | 81, 5 | 70,0 | 90,1 |
| PO | 90,8 | 81,0 | 96,5 | 93,8 | 85, 0 | 98,3 | |
| B/Johannesburg | před | 98,5 | 91,7 | 100,0 | 96,9 | 89,3 | 99, 6 |
| po | 100,0 | 94,5 | 100,0 | 98,5 | 91,7 | 100,0 |
-29CZ 298697 B6
N: počet subjektů s dostupnými výsledky, %: procento subjektů s daným parametrem, LL/UL: nižší a vyšší limit 95% CI, Před: v čase aplikace vakcinačního prostředku, po: 21 dní po vakcinační dávce
Bolest v místě aplikace, zaznamenalo 10 ze 65 (15,4 %) subjektů, byl nejběžnější symptom po 5 IM aplikaci prostředku Fluarix(tm). V ID skupině bolest zaznamenaly 3 z 65 (4,6 %) subjektů.
Tento rozdíl byl statisticky podstatný (p=0,038, Fišerům exaktní test). Výhodné je ID zavedení produktu s omezeným obsahem thiomersalu.
Závěry
100 % ochrany sérem u starých lidí se může dosáhnout jak ID tak IM aplikací vakcinačního prostředku influenzy s redukovaným obsahem thiomersalu.
U jedinců vakcinovaných IM a ID, kde skupině ID se aplikovalo 2,5 krát méně antigenu, se 15 dosáhlo porovnatelné odezvy na vakcinaci, co se týče hodnot geometrického průměru titrů, stupně ochrany sérem, stupně sérokonverze a konverzních faktorů. Neexistuje rozlišitelný rozdíl ve všech výskytech symptomů spojených s vakcinací v obou skupinách.
Příklad 10: Intradermální zavedení vakcinačního prostředku influenzy s omezeným obsahem 20 thiomersalu
Imunogennost vakcinačního prostředku štěpeného viru influenzy s redukovaným obsahem thiomersalu připraveného způsobem popsaným v příkladu 9 (s tou výjimkou , že hromadění se provedlo nezávisle na vakcinační prostředek se naplnil do injekčních stříkaček) se hodnotila ID zavedením do morčat za použití standardní jehly.
Každá skupina obsahující 5 zvířat se primárně imunizovala celým deaktivovaným trivalentním virem influenzy obsahující 5 pg každého HA v celkovém objemu 200 pl. Dvacet osm dní po nebo intramuskulámě. Intradermální dávky obsahující 0,1, 0,3 nebo 1,0 pg trivalentního štěpeného viru influenzy s redukovaným obsahem thiomersalu v 0,1 ml se aplikovaly do zad morčat za použití standardní jehly. Intramuskulámí dávka obsahující 1,0 pg trivalentního štěpeného viru influenzy s omezeným obsahem thiomersalu se aplikovala do zadní nohy morčete v objemu 0,1 ml. Skupiny byly následující:
• Skupina 1: 0,1 pg trivalentního ID štěpeného viru influenzy s redukovaným obsahem thiomersalu • Skupina 2: 0,3 pg trivalentního ID štěpeného viru influenzy s redukovaným obsahem thiomersalu • Skupina 3: 1,0 pg trivalentního ID štěpeného viru influenzy s redukovaným obsahem thiomersalu • Skupina 4: 1,0 pg trivalentního IM štěpeného viru influenzy s redukovaným obsahem thiomersalu
Čtrnáct dní po vakcinaci se zvířata nechala vykrvácet a titry protilátek vyvolaných vakcinací se hodnotily za použití standardního hemaglutinačního inhibičního testu (Hl). Výsledky jsou zobra45 zeny na obrázku č. 1. Vakcinací se vyvolaly silné Hl odezvy na všechny tři kmeny. Není jasná odezva na dávku, což naznačuje, že velmi nízké dávky antigenu s redukovaným množstvím thiomersalu mohou stále vyvolat velmi silnou Hl protilátkovou odezvu, když se aplikují ID způso-30CZ 298697 B6 bem. Neexistuje podstatný rozdíl mezi H1 titry vyvolanými ID nebo IM vakcinací. Pak výsledky získané v případě morčat potvrzují, že antigeny trivalentních štěpených virů influenzy s redukovaným obsahem thiomersalu vyvolávají podobný stupeň HI protilátek u zvířat, když se zavádějí ID způsobem ve srovnání s IM způsobem.
Příklad 11: Intradermální zavedení vakcinačního prostředku influenzy upraveného pomocnou látkou obsahujícího redukované množství thiomersalu ío Protokol
Morčata se primárně intranasálně imunizovala v den 0 pěti mikrogramy trivalentního celého deaktivovaného viru influenzy v objemu 200 pl.
Vakcinace proběhla v den 28 vakcinačním prostředkem obsahujícím 0,1 pg HA jednoho kmene privalentního štěpeného viru influenzy připraveného způsobem popsaným v příkladu 9 (konečná koncentrace každého antigenů v dané dávce 0,1 pg ve 100 pije 1,0 pg/ml ve srovnání s 60 pg/ml uvedenými v příkladu 9). Konečný trivalentní prostředek se aplikoval intradermálně za použití tuberkulinových injekčních stříkaček v objemu 100 pl. Vakcinační prostředek je buď upraven adjuvans, nebo není upraven adjuvans.
Vykrvácení zvířat - den 42.
Účinek úpravy adjuvans se hodnotil měřením proti látkových odezev HI testem (den 0, 28, 42).
Všechny ID experimenty se provedly za použití standardní jehly.
Výsledky
G1 až G5 odpovídá 5-ti skupinám morčat, kdy každá skupina obsahuje 5 zvířat.
G1 štěpený trivalentní vakcinační prostředek s redukovaným množstvím thiomersalu 0,1 pg.
G2 štěpený trivalentní vakcinační prostředek s redukovaným množstvím thiomersalu 0,1 pg + 3D-MPL 50 pg.
G3 štěpený trivalentní vakcinační prostředek s redukovaným množství thiomersalu 0,1 pg + 3D-MPL 10 pg.
G4 štěpený trivalentní vakcinační prostředek s redukovaným množstvím thiomersalu 0,1 pg + 3D-MPLÍ 50 pg + QS21 50 pg.
G5 štěpený trivalentní vakcinační prostředek s redukovaným množstvím thiomersalu 0,1 pg +
3D-MPLin 10 pg + QS21 10 pg.
Poznámka 3D-MPLin+QS21 znamená adjuvantní prostředek, který obsahuje unilamelámí vehikuly obsahující cholesterol, které mají lipidovou dvojvrstvou obsahující dioleylfosfatidylcholin, kde QS21 a 3D-MPL je spojen s lipidovou dvojvrstvou nebo jsou v ní uloženy. Takové adjuvantní prostředky se popisují v patentovém dokumentu EP 0 822 831 B.
HI titry proti kmenu A/New Caledonia/20/99
-31 CZ 298697 B6
| NC | Pre-imunizace | pre-vakcinace | post-vakcinace |
| Gl | 5 | 10 | 92 |
| G2 | 5 | 10 | 70 |
| G3 | 5 | 11 | 121 |
| G4 | 7 | 9 | 368 |
| G5 | 5 | 10 | 243 |
HI titry proti kmenu A/Panama/2007/99
| P | pre-imunizace | pre-vakcinace | pre-vakcinace |
| Gl | 5 | 4 85 | 7760 |
| G2 | 5 | 279 | 7760 |
| G3 | 5 | 485 | 8914 |
| G4 | 7 | 485 | 47051 |
| G5 | 5 | 320 | 17829 |
Hi titry proti kmenu B/Johannesburg/5/99
| J | pre-imunizace | post-vakcinace | post-vakcinace |
| Gl | 5 | 23 | 184 |
| G2 | 5 | 11 | 121 |
| G3 | 5 | 11 | 70 |
| G4 | 6 | 15 | 557 |
| G5 | 5 | 13 | 320 |
Pak uvedený i neupravený trivalentní štěpený vakcinační prostředek influenzy s redukovaným obsahem thiomersalu je silný imunogen a je schopný vyvolat silné HI odezvy, když se aplikuje
-32CZ 298697 B6
ID nebo IM způsobem. Tyto odezvy se jeví být alespoň tak silné, jako jsou odezvy vyvolané standardním vakcinačním prostředkem Fluarix.
Příklad 12: Porovnání vakcinačních prostředků, které obsahují a neobsahují thiomersal, zavedených intradermálně prasatům
Za účelem hodnocení imunogennosti štěpeného vakcinačního prostředku influenzy (obsahující a neobsahující thiomersal) aplikovaného ID způsobem se použil model primárně imunizovaných ío prasat. Velká většina populace už měla zkušenosti alespoň s infekcí viru influenzy, proto vakcinační prostředek musí být schopný zesílit už existující imunitní odezvu. Zvířata jsou proto primárně imunizována, aby se co nejlépe simulovala situace u člověka.
V tomto experimentu se 4 týdny stará selata primárně imunizovala intranasální cestou. Šest sku15 pin, kdy každá obsahuje 5 zvířat, se primárně imunizovalo následujícím způsobem.
Skupina 1 se primárně imunizovala dvakrát v den 0 a 14 trivalentním celým deaktivovaným virem (50 pg každého HA). Skupina 2 se primárně imunizovala dvakrát v den 0 a 14 trivalentním celým deaktivovaným virem (50 pg každého HA). Skupina 3 se primárně imunizovala jednou v den 0 trivalentním celým deaktivovaným virem (50 pg každého HA). Skupina 4 se primárně imunizovala dvakrát v den 0 a 14 trivalentním celým deaktivovaným virem (50 pg každého HA).
dní po konečné primární imunizaci se zvířatům intradermálně aplikoval vakcinační prostředek obsahující 3 pg každého HA trivalentního štěpeného antigenního prostředku (kmeny A/New
Caledonia H1N1, A/Panama H3N2 a B/Johannesburt) ve 100 pl. Skupině 1 se aplikoval standardní vakcinační prostředek Fluarix(tm) obsahující konzervační činidlo hiomersal. Všem ostatním skupinám se aplikoval antigenní prostředek, který neobsahuje konzervační činidlo.
HI výsledky získané v tomto experimentu jsou zobrazeny na Obr. 2 (inhibiční titry proti hema30 glutininu viru influenzy vyvolané u prasat primárně imunizovaných různými dávkami antigenu a vakcinované 3 pg trivalentním antigenním prostředkem influenzy obsahujícím nebo neobsahujícím thiomersal intradermálním způsobem).
HI titry vyvolané v tomto experimentu proti kmenu B jsou relativně nízké a pozadí proti kmenu
A/H3N2 je vysoké. Výhodný účinek, co se týká odezvy na vakcinaci, se pozoroval po snížení dávky primární imunizace. Skoro ve všech případech snížení koncentrace antigenu nebo počtu dávek primární imunizace (ze dvou primárních imunizací 50 pg) vede k zesílení odezvy na vakcinaci. Zatímco odezva zvířat ve skupinách 1 a 2, která se primárně imunizovaly dvakrát dávkou 50 pg, na vakcinaci není tak evidentní, zdá se, že antigenní prostředek neobsahující konzervační činidlo (skupina 2) funguje za uvedených podmínek alespoň stejně dobře jako standardní vakcinační prostředek Fluarix(tm) (skupina 1). Silná odezva na vakcinaci trivalentním antigenním prostředkem influenzy, který neobsahuje konzervační činidlo, aplikovaný ID způsobem u zvířat, která jsou alternativně primárně imunizovány (skupina 3 až 6), je zřejmý a tuto odezvu je možné pozorovat dokonce v případě kmene B, ačkoliv HI titry zůstávají nízké.
Claims (13)
1. Prostředek deaktivovaného viru influenzy pro použití jako vakcína proti chřipce, vyznačující se tím, že obsahuje antigen hemaglutinin stabilizovaný v nepřítomnosti thiomersalu nebo v přítomnosti nejvýš 0,5 pg/ml thiomersalu, kde hemaglutinin se detekuje SRD testem, přičemž prostředek obsahuje množství α-tokoferolsukcinátu, dostatečné pro stabilizaci HA.
2. Prostředek deaktivovaného viru influenzy podle nároku 1,vyznačující se tím, že α-tokoferolsukcinát je přítomen v koncentraci 1 pg/ml až 10 mg/ml.
3. Prostředek deaktivovaného viru influenzy podle nároku 2, v y z n a č u j í c í se tím, že 15 α-tokoferolsukcinát je přítomen v koncentraci 10 až 500 pg/ml.
4. Prostředek deaktivovaného viru influenzy podle libovolného z nároků 1 až 3,vyznačující se tím, že antigenní materiál viru influenzy je vybrán ze skupiny zahrnující štěpené virové antigeny, dílčí antigeny, chemicky nebo jinak deaktivovaný celý virus.
5. Prostředek deaktivovaného viru influenzy podle nároku 4, vyznačující se tím, že antigenní materiál influenzy je štěpený virový antigen.
6. Prostředek deaktivovaného viru influenzy podle libovolného z nároků 1 až 5, vyznaču25 jící se tím, že obsahuje hemaglutinin kmene A a B viru influenzy.
7. Prostředek deaktivovaného viru influenzy podle nároku 6, vyznačující se tím, že jde o trivalentní prostředek viru chřipky.
30
8. Prostředek deaktivovaného viru influenzy podle libovolného z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že obsahuje stabilizovaný HA viru influenzy kmene B.
9. Vakcína proti chřipce, vy z n a č uj í c í se tím, že obsahuje prostředek viru influenzy podle libovolného z nároků 1 až 8.
10. Vakcína proti chřipce podle nároku 9, vyznačující se tím, že koncentrace antigenu hemaglutinin v případě jednoho kmene influenzy nebo každého kmene influenzy je 1 až 1000 pg/ml, jak se stanovilo SRD testem.
40
11. Vakcína proti chřipce podle nároku 9 nebo 10, v y z n a č u j í c í se tím, že navíc obsahuje adjuvans.
12. Způsob přípravy stabilního antigenu hemaglutinin, vyznačující se tím, že zahrnuje čištění antigenu v přítomnosti α-tokoferolu nebo jeho derivátu, jako je a-tokoferolsukcinát.
13. Použití α-tokoferolu nebo jeho sukcinátu jako stabilizátoru hemaglutininu při výrobě vakcíny proti chřipce.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0113083A GB0113083D0 (en) | 2001-05-30 | 2001-05-30 | Novel compounds |
| GB0204116A GB0204116D0 (en) | 2002-02-21 | 2002-02-21 | Novel vaccine composition |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20033253A3 CZ20033253A3 (cs) | 2004-04-14 |
| CZ298697B6 true CZ298697B6 (cs) | 2007-12-27 |
Family
ID=30445235
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20033253A CZ298697B6 (cs) | 2001-05-30 | 2002-05-29 | Prostredek deaktivovaného viru influenzy a vakcína s jeho obsahem |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7316813B2 (cs) |
| EP (3) | EP1407008B1 (cs) |
| JP (1) | JP4074582B2 (cs) |
| KR (1) | KR100871021B1 (cs) |
| CN (2) | CN1279165C (cs) |
| AR (1) | AR036039A1 (cs) |
| AT (1) | ATE420159T1 (cs) |
| AU (2) | AU2002344182C1 (cs) |
| BR (1) | BRPI0210076B8 (cs) |
| CA (1) | CA2448208C (cs) |
| CO (1) | CO5540349A2 (cs) |
| CY (1) | CY1108930T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ298697B6 (cs) |
| DE (1) | DE60230760D1 (cs) |
| DK (1) | DK1407008T3 (cs) |
| ES (1) | ES2318020T3 (cs) |
| FR (1) | FR13C0072I1 (cs) |
| HU (1) | HU229368B1 (cs) |
| IL (2) | IL158931A (cs) |
| MX (1) | MXPA03010944A (cs) |
| MY (1) | MY134424A (cs) |
| NO (1) | NO335212B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ529755A (cs) |
| PL (1) | PL206435B1 (cs) |
| PT (1) | PT1407008E (cs) |
| SI (1) | SI1407008T1 (cs) |
| TW (1) | TWI228420B (cs) |
| WO (1) | WO2002097072A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200309250B (cs) |
Families Citing this family (115)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AR025750A1 (es) * | 1999-09-24 | 2002-12-11 | Smithkline Beecham Biolog | Vacunas |
| GB9923176D0 (en) | 1999-09-30 | 1999-12-01 | Smithkline Beecham Biolog | Novel composition |
| US20100221284A1 (en) * | 2001-05-30 | 2010-09-02 | Saech-Sisches Serumwerk Dresden | Novel vaccine composition |
| TWI228420B (en) * | 2001-05-30 | 2005-03-01 | Smithkline Beecham Pharma Gmbh | Novel vaccine composition |
| US20060110406A1 (en) | 2003-02-25 | 2006-05-25 | Medimmune Vaccines, Inc. | Refrigerator-temperature stable influenza vaccine compositions |
| KR101360300B1 (ko) | 2003-02-25 | 2014-02-13 | 메디뮨 엘엘씨 | 인플루엔자 백신 조성물의 제조 방법 |
| US8119337B2 (en) | 2004-09-09 | 2012-02-21 | Jens-Peter Gregersen | Decreasing potential iatrogenic risks associated with influenza vaccines |
| AU2005294528B2 (en) * | 2004-10-06 | 2011-04-07 | Medimmune, Llc | Refrigerator-temperature stable influenza vaccine compositions |
| WO2006062637A2 (en) | 2004-11-03 | 2006-06-15 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Influenza vaccination |
| US9161905B2 (en) * | 2005-01-12 | 2015-10-20 | Ocular Research Of Boston, Inc. | Dry eye treatment |
| WO2006100111A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Composition |
| EP1909830B1 (en) * | 2005-08-02 | 2011-09-28 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Reducing interference between oil-containing adjuvants and surfactant-containing antigens |
| PL1951296T5 (pl) | 2005-11-01 | 2015-06-30 | Seqirus Uk Ltd | Szczepionki wirusowe otrzymane z komórek o niskim poziomie pozostałości DNA komórkowego poprzez traktowanie beta-propiolaktonem |
| US11707520B2 (en) | 2005-11-03 | 2023-07-25 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
| NZ567978A (en) | 2005-11-04 | 2011-09-30 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Influenza vaccine with reduced amount of oil-in-water emulsion as adjuvant |
| PL1951299T3 (pl) | 2005-11-04 | 2012-07-31 | Novartis Ag | Szczepionki przeciw grypie zawierające kombinacje adiuwantów cząsteczkowych i czynników wzmacniających immunogenność |
| HUE051122T2 (hu) | 2005-11-04 | 2021-03-01 | Seqirus Uk Ltd | Sejttenyészetben növesztett influenzavírusból elõállított nemvirion anti-géneket tartalmazó adjuvált vakcinák |
| EA014028B1 (ru) * | 2005-11-04 | 2010-08-30 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс Срл | Эмульсии, содержащие свободное поверхностно-активное вещество в водной фазе в качестве адъюванта сплит вакцин против гриппа |
| NZ592713A (en) | 2005-11-04 | 2012-12-21 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Adjuvanted influenza vaccines including a cytokine-inducing agents other than an agonist of Toll-Like Receptor 9 |
| TWI457133B (zh) | 2005-12-13 | 2014-10-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 新穎組合物 |
| JP6087041B2 (ja) | 2006-01-27 | 2017-03-08 | ノバルティス アーゲー | 血球凝集素およびマトリックスタンパク質を含むインフルエンザウイルスワクチン |
| EP2382987A1 (en) | 2006-03-24 | 2011-11-02 | Novartis Vaccines and Diagnostics GmbH | Storage of influenza vaccines without refrigeration |
| WO2009030978A2 (en) | 2006-06-09 | 2009-03-12 | Novartis Ag | Conformers of bacterial adhesins |
| PT2043682E (pt) | 2006-07-17 | 2014-07-11 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacina da influenza |
| JP5639760B2 (ja) | 2006-07-17 | 2014-12-10 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | インフルエンザワクチン |
| GB0614460D0 (en) | 2006-07-20 | 2006-08-30 | Novartis Ag | Vaccines |
| AU2007297178B2 (en) | 2006-09-11 | 2014-07-24 | Novartis Ag | Making influenza virus vaccines without using eggs |
| US8080645B2 (en) | 2007-10-01 | 2011-12-20 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Biological specimen collection/transport compositions and methods |
| US9481912B2 (en) | 2006-09-12 | 2016-11-01 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences in biological samples |
| US8652782B2 (en) | 2006-09-12 | 2014-02-18 | Longhorn Vaccines & Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting, identifying and quantitating mycobacterial-specific nucleic acids |
| US8097419B2 (en) | 2006-09-12 | 2012-01-17 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Compositions and method for rapid, real-time detection of influenza A virus (H1N1) swine 2009 |
| US8084443B2 (en) | 2007-10-01 | 2011-12-27 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Biological specimen collection and transport system and methods of use |
| SI2086582T1 (sl) | 2006-10-12 | 2013-02-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Cepivo, ki obsega emulzijo olja v vodi kot adjuvans |
| PT2121011E (pt) | 2006-12-06 | 2014-07-31 | Novartis Ag | Vacinas compreendendo um antigénio a partir de quatro estirpes do vírus da gripe |
| US9452209B2 (en) | 2007-04-20 | 2016-09-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Influenza vaccine |
| DK2185191T3 (da) | 2007-06-27 | 2012-12-03 | Novartis Ag | Influenzavacciner med lavt indhold af tilsætningsstoffer |
| US11041215B2 (en) | 2007-08-24 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | PCR ready compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences |
| US9683256B2 (en) | 2007-10-01 | 2017-06-20 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Biological specimen collection and transport system |
| EP2772267B1 (en) | 2007-08-27 | 2016-04-27 | Longhorn Vaccines and Diagnostics, LLC | Immunogenic compositions and methods |
| US10004799B2 (en) | 2007-08-27 | 2018-06-26 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Composite antigenic sequences and vaccines |
| HRP20140375T1 (hr) * | 2007-08-28 | 2014-06-20 | Baxter International Inc. | Postupak za proizvodnju virusnih cjepiva |
| US11041216B2 (en) | 2007-10-01 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and quantifying nucleic acid sequences in blood samples |
| GB0810305D0 (en) | 2008-06-05 | 2008-07-09 | Novartis Ag | Influenza vaccination |
| GB0818453D0 (en) | 2008-10-08 | 2008-11-12 | Novartis Ag | Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom |
| JP5415449B2 (ja) | 2007-12-24 | 2014-02-12 | ノバルティス アーゲー | 吸着されたインフルエンザワクチンのためのアッセイ |
| US8506966B2 (en) * | 2008-02-22 | 2013-08-13 | Novartis Ag | Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use |
| EP2268309B1 (en) | 2008-03-18 | 2015-01-21 | Novartis AG | Improvements in preparation of influenza virus vaccine antigens |
| PT2271360E (pt) | 2008-04-16 | 2015-12-07 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacina |
| CA2741961A1 (en) | 2008-11-05 | 2010-05-14 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel method |
| CA2752041A1 (en) | 2009-02-10 | 2010-08-19 | Novartis Ag | Influenza vaccines with increased amounts of h3 antigen |
| CN102438651A (zh) | 2009-02-10 | 2012-05-02 | 诺华有限公司 | 用于大流行相关毒株的流感疫苗方案 |
| PL2396032T3 (pl) | 2009-02-10 | 2017-05-31 | Seqirus UK Limited | Szczepionki przeciw grypie o obniżonych zawartościach skwalenu |
| USH2284H1 (en) | 2009-04-27 | 2013-09-03 | Novartis Ag | Vaccines for protecting against influenza |
| CN102597246B (zh) | 2009-05-21 | 2014-02-26 | 诺华股份有限公司 | 使用非内源pol I启动子的反向遗传 |
| CA2803282C (en) | 2009-07-06 | 2018-05-01 | David E. Anderson | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
| MX2012000372A (es) | 2009-07-06 | 2012-02-28 | Variation Biotechnologies Inc | Metodos para preparar vesiculas y formulaciones producidas a partir de las mismas. |
| WO2011012999A1 (en) | 2009-07-31 | 2011-02-03 | Novartis Ag | Reverse genetics systems |
| KR20120081587A (ko) | 2009-09-10 | 2012-07-19 | 노파르티스 아게 | 기도 질병에 대한 조합 백신 |
| ES2454815T3 (es) | 2009-10-20 | 2014-04-11 | Novartis Ag | Métodos mejorados de genética inversa para la recuperación de virus |
| GB0918830D0 (en) * | 2009-10-27 | 2009-12-09 | Glaxosmithkline Biolog Niederl | Process |
| GB0919117D0 (en) | 2009-10-30 | 2009-12-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process |
| DK2356983T3 (da) | 2009-12-03 | 2013-03-11 | Novartis Ag | Cirkulation af bestanddele under homogenisering af emulsioner |
| KR101625623B1 (ko) | 2009-12-03 | 2016-05-31 | 노파르티스 아게 | 백신 보조제 제조 중의 친수성 여과 |
| DE102009056871A1 (de) | 2009-12-03 | 2011-06-22 | Novartis AG, 4056 | Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben |
| SI2380558T2 (sl) | 2009-12-03 | 2019-11-29 | Novartis Ag | Izdelava emulzije z razmestitvijo interakcijske in protitlačne komore za mikrofluidizacijo |
| DE102009056883B4 (de) | 2009-12-03 | 2012-08-16 | Novartis Ag | Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben |
| DE102009056884B4 (de) | 2009-12-03 | 2021-03-18 | Novartis Ag | Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben |
| SG183514A1 (en) | 2010-03-11 | 2012-10-30 | Immune Design Corp | Vaccines for pandemic influenza |
| AU2011249487C1 (en) | 2010-05-06 | 2015-05-14 | Novartis Ag | Organic peroxide compounds for microorganism inactivation |
| EP2620423B2 (en) | 2010-05-12 | 2019-07-31 | Novartis AG | Improved methods for preparing squalene |
| AU2011254204B2 (en) | 2010-05-21 | 2015-08-20 | Seqirus UK Limited | Influenza virus reassortment method |
| EA201291404A1 (ru) | 2010-06-01 | 2013-05-30 | Новартис Аг | Концентрация и лиофилизация вакцинных антигенов гриппа |
| KR102471356B1 (ko) | 2010-06-01 | 2022-11-28 | 노파르티스 아게 | 동결건조하지 않는 인플루엔자 백신 항원의 농축 |
| WO2011154976A2 (en) | 2010-06-08 | 2011-12-15 | Panacea Biotec Limited | Improved influenza vaccine |
| US9610248B2 (en) | 2010-07-06 | 2017-04-04 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
| ES2531577T3 (es) | 2010-08-20 | 2015-03-17 | Novartis Ag | Conjuntos de agujas para la administración de vacuna soluble contra la gripe |
| EP3012330A1 (en) | 2010-09-07 | 2016-04-27 | Novartis AG | Generic assays for detection of mammalian reovirus |
| WO2012055951A2 (en) | 2010-10-27 | 2012-05-03 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
| US10736844B2 (en) | 2011-01-13 | 2020-08-11 | Variation Biotechnologies Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
| EP2663288B1 (en) | 2011-01-13 | 2022-12-21 | Variation Biotechnologies Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
| JP5798356B2 (ja) * | 2011-04-06 | 2015-10-21 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | 新規インフルエンザワクチン安定化剤 |
| GB201216121D0 (en) | 2012-09-10 | 2012-10-24 | Novartis Ag | Sample quantification by disc centrifugation |
| US20140248320A1 (en) | 2011-10-20 | 2014-09-04 | Novartis Ag | Adjuvanted influenza b virus vaccines for pediatric priming |
| WO2013072768A2 (en) | 2011-11-18 | 2013-05-23 | Variation Biotechnologies, Inc. | Synthetic derivatives of mpl and uses thereof |
| CN104302323A (zh) | 2012-01-12 | 2015-01-21 | 变异生物技术公司 | 用于治疗病毒感染的组合物和方法 |
| EP2806890A4 (en) | 2012-01-26 | 2015-09-02 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | COMPOSITIONAL ANTIGEN SEQUENCES AND VACCINES |
| EP2806894A4 (en) | 2012-01-27 | 2015-11-04 | Variation Biotechnologies Inc | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THERAPEUTIC AGENTS |
| JP6054883B2 (ja) | 2012-03-02 | 2016-12-27 | ノバルティス アーゲー | インフルエンザウイルスの再集合 |
| GB201205189D0 (en) | 2012-03-23 | 2012-05-09 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel medical use |
| US20130315955A1 (en) * | 2012-04-13 | 2013-11-28 | Protein Sciences Corporation | Stability and potency of hemagglutinin |
| JP2015526062A (ja) | 2012-06-04 | 2015-09-10 | ノバルティス アーゲー | 改善された安全性試験 |
| GB201218195D0 (en) | 2012-10-10 | 2012-11-21 | Istituto Zooprofilattico Sperimentale Delle Venezie | Composition |
| AU2013354219A1 (en) | 2012-12-03 | 2015-07-02 | Novartis Ag | Reassortant influenza a viren |
| MX2015008847A (es) | 2013-01-10 | 2015-10-30 | Novartis Ag | Composiciones inmunogenicas de virus de influenza y usos de las mismas. |
| WO2014141125A2 (en) | 2013-03-13 | 2014-09-18 | Novartis Ag | Influenza virus reassortment |
| KR20160030097A (ko) | 2013-05-10 | 2016-03-16 | 노파르티스 아게 | 인플루엔자 백신에서 기면증 위험의 방지 |
| DE202013005130U1 (de) | 2013-06-05 | 2013-09-10 | Novartis Ag | Influenza Virus Reassortierung |
| DE202013005100U1 (de) | 2013-06-05 | 2013-08-26 | Novartis Ag | Influenza Virus Reassortierung |
| AU2014276418A1 (en) | 2013-06-06 | 2016-01-21 | Novartis Ag | Influenza virus reassortment |
| CN104436157A (zh) | 2013-09-23 | 2015-03-25 | 恩金生物有限公司 | 流感疫苗和治疗 |
| WO2015079952A1 (ja) | 2013-11-29 | 2015-06-04 | テルモ株式会社 | アジュバント組成物およびこれを含むワクチン組成物、並びにこれらの製造方法 |
| EP3226904B1 (en) | 2014-12-02 | 2019-03-06 | Novartis AG | Manufacture of surfactant-containing compositions |
| CA2985652C (en) | 2015-05-14 | 2020-03-10 | Gerald W. FISHER | Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples |
| WO2016207853A2 (en) | 2015-06-26 | 2016-12-29 | Seqirus UK Limited | Antigenically matched influenza vaccines |
| EP3764098B1 (en) | 2015-07-07 | 2022-11-16 | Seqirus UK Limited | Influenza potency assays |
| WO2017167768A1 (en) | 2016-03-28 | 2017-10-05 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel vaccine composition |
| GB201614799D0 (en) * | 2016-09-01 | 2016-10-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Compositions |
| EP3662065A4 (en) | 2017-08-04 | 2021-04-21 | Syngenta Participations AG | METHODS AND COMPOSITIONS FOR SPECIFIC GENOMIC INSERTION |
| CN111511800B (zh) | 2017-10-30 | 2023-11-28 | 武田药品工业株式会社 | 灭活脂包膜病毒的环境相容性去污剂 |
| US20220080043A1 (en) | 2019-01-30 | 2022-03-17 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Oil/surfactant mixtures for self-emulsification |
| AU2020389047A1 (en) | 2019-11-18 | 2022-06-02 | Seqirus Pty Ltd. | Method for producing reassortant influenza viruses |
| RU2754398C1 (ru) * | 2020-06-25 | 2021-09-01 | Общество с ограниченной ответственностью «ФОРТ» | Способ получения четырехвалентной вакцины для профилактики гриппа |
| AU2021302954A1 (en) | 2020-06-30 | 2023-02-16 | Seqirus UK Limited | Cold filtration of oil-in-water emulsion adjuvants |
| US12409214B2 (en) | 2020-10-20 | 2025-09-09 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Immunogenic antigens |
| WO2025019631A1 (en) | 2023-07-19 | 2025-01-23 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Immunogenic compositions containing inactivated influenza a virus and cpg oligonucleotide adjuvant and uses thereof |
Family Cites Families (71)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US639A (en) | 1838-03-17 | of boston | ||
| US5520A (en) | 1848-04-18 | Oegan-pipb | ||
| US4270537A (en) | 1979-11-19 | 1981-06-02 | Romaine Richard A | Automatic hypodermic syringe |
| DD155875A1 (de) | 1980-12-31 | 1982-07-14 | Willy Nordheim | Verfahren zur herstellung eines ballaststoffarmen inaktivierten influenzaimpfstoffes |
| US4436727A (en) | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
| DD211444A3 (de) | 1982-08-19 | 1984-07-11 | Saechsisches Serumwerk | Verfahren zur herstellung von influenza-impfstoffen |
| SE8205892D0 (sv) | 1982-10-18 | 1982-10-18 | Bror Morein | Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin |
| US4596556A (en) | 1985-03-25 | 1986-06-24 | Bioject, Inc. | Hypodermic injection apparatus |
| DD300833A7 (de) | 1985-10-28 | 1992-08-13 | Saechsische Landesgewerbefoerd | Verfahren zur herstellung von inaktivierten influenza-vollvirusimpfstoffen |
| CA1283827C (en) | 1986-12-18 | 1991-05-07 | Giorgio Cirelli | Appliance for injection of liquid formulations |
| GB8704027D0 (en) | 1987-02-20 | 1987-03-25 | Owen Mumford Ltd | Syringe needle combination |
| US5057540A (en) | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
| CA1331443C (en) | 1987-05-29 | 1994-08-16 | Charlotte A. Kensil | Saponin adjuvant |
| US4940460A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-10 | Bioject, Inc. | Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly |
| US4790824A (en) | 1987-06-19 | 1988-12-13 | Bioject, Inc. | Non-invasive hypodermic injection device |
| US4941880A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-17 | Bioject, Inc. | Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly |
| US5339163A (en) | 1988-03-16 | 1994-08-16 | Canon Kabushiki Kaisha | Automatic exposure control device using plural image plane detection areas |
| US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
| FR2638359A1 (fr) | 1988-11-03 | 1990-05-04 | Tino Dalto | Guide de seringue avec reglage de la profondeur de penetration de l'aiguille dans la peau |
| AU626049B2 (en) * | 1989-05-29 | 1992-07-23 | Lion Corporation | Method for preparing vaccine for dental caries and vaccinal compositions for dental caries used as nasal drop |
| US5064413A (en) | 1989-11-09 | 1991-11-12 | Bioject, Inc. | Needleless hypodermic injection device |
| US5312335A (en) | 1989-11-09 | 1994-05-17 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
| US5190521A (en) | 1990-08-22 | 1993-03-02 | Tecnol Medical Products, Inc. | Apparatus and method for raising a skin wheal and anesthetizing skin |
| US5527288A (en) | 1990-12-13 | 1996-06-18 | Elan Medical Technologies Limited | Intradermal drug delivery device and method for intradermal delivery of drugs |
| GB9118204D0 (en) | 1991-08-23 | 1991-10-09 | Weston Terence E | Needle-less injector |
| SE9102652D0 (sv) | 1991-09-13 | 1991-09-13 | Kabi Pharmacia Ab | Injection needle arrangement |
| CA2085827C (en) | 1991-12-23 | 2003-10-14 | Lucas A. T. Hilgers | Adjuvant composition containing synthetic hydrophobic lipopolysaccharide |
| IL101007A (en) * | 1992-02-18 | 1997-08-14 | Pharmos Ltd | Dry stable compositions prepared by lyophilization |
| US5328483A (en) | 1992-02-27 | 1994-07-12 | Jacoby Richard M | Intradermal injection device with medication and needle guard |
| JP3755890B2 (ja) | 1992-06-25 | 2006-03-15 | スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） | アジュバント含有ワクチン組成物 |
| US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
| US5569189A (en) | 1992-09-28 | 1996-10-29 | Equidyne Systems, Inc. | hypodermic jet injector |
| US5334144A (en) | 1992-10-30 | 1994-08-02 | Becton, Dickinson And Company | Single use disposable needleless injector |
| ES2162139T5 (es) | 1993-03-23 | 2008-05-16 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Composiciones de vacuna que contienen monofosforil-lipido a 3-o-desacilado. |
| AU5543294A (en) | 1993-10-29 | 1995-05-22 | Pharmos Corp. | Submicron emulsions as vaccine adjuvants |
| GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| WO1995024176A1 (en) | 1994-03-07 | 1995-09-14 | Bioject, Inc. | Ampule filling device |
| US5466220A (en) | 1994-03-08 | 1995-11-14 | Bioject, Inc. | Drug vial mixing and transfer device |
| US5616487A (en) * | 1994-09-15 | 1997-04-01 | Aastrom Biosciences, Inc. | Stabilized retrovirus compositions |
| AUPM873294A0 (en) | 1994-10-12 | 1994-11-03 | Csl Limited | Saponin preparations and use thereof in iscoms |
| US5599302A (en) | 1995-01-09 | 1997-02-04 | Medi-Ject Corporation | Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring |
| UA56132C2 (uk) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
| US5730723A (en) | 1995-10-10 | 1998-03-24 | Visionary Medical Products Corporation, Inc. | Gas pressured needle-less injection device and method |
| PT750907E (pt) * | 1995-06-30 | 2002-08-30 | American Cyanamid Co | Formulacoes de vacinas estaveis para administracao parenterica metodo para a sua utilizacao e processo para a sua preparacao |
| US20020165168A1 (en) | 1995-12-16 | 2002-11-07 | Joachim Bunger | Use of sugar derivatives as antimicrobial, antimycotic and/or antiviral active substances |
| US5893397A (en) | 1996-01-12 | 1999-04-13 | Bioject Inc. | Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus |
| GB9607549D0 (en) | 1996-04-11 | 1996-06-12 | Weston Medical Ltd | Spring-powered dispensing device |
| US5919480A (en) * | 1996-06-24 | 1999-07-06 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Liposomal influenza vaccine composition and method |
| US6403098B1 (en) | 1996-09-26 | 2002-06-11 | Merck & Co., Inc. | Rotavirus vaccine formulations |
| DE19649895A1 (de) * | 1996-12-02 | 1998-06-04 | Henkel Kgaa | Schäumende Körperreinigungsmittel |
| CA2277911C (en) * | 1997-01-13 | 2010-09-14 | Emory University | Compounds and their combinations for the treatment of influenza infection |
| GB9705740D0 (en) * | 1997-03-20 | 1997-05-07 | Medeva Europ Ltd | A method of preservation |
| AU743114B2 (en) | 1997-04-01 | 2002-01-17 | Corixa Corporation | Aqueous immunologic adjuvant compositions of monophosphoryl lipid A |
| US5993412A (en) | 1997-05-19 | 1999-11-30 | Bioject, Inc. | Injection apparatus |
| GB9711990D0 (en) * | 1997-06-11 | 1997-08-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| DE69815692T2 (de) * | 1997-09-05 | 2004-04-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Öl in wasser emulsionen mit saponinen |
| IT1298087B1 (it) | 1998-01-08 | 1999-12-20 | Fiderm S R L | Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni |
| PL354714A1 (en) | 1998-04-09 | 2004-02-09 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Adjuvant compositions |
| FR2780278B1 (fr) * | 1998-06-24 | 2001-01-19 | Oreal | Composition conditionnante et detergente et utilisation |
| DE19841796A1 (de) * | 1998-09-12 | 2000-03-16 | Beiersdorf Ag | Kombinationen von Antiadhäsiva (Kohlenhydrate) und Mikrobiziden |
| AU764969B2 (en) * | 1999-04-19 | 2003-09-04 | Smithkline Beecham Biologicals (Sa) | Vaccines |
| AUPQ233799A0 (en) * | 1999-08-19 | 1999-09-09 | Minister For Agriculture, Minister For Land And Water Conservation For And On Behalf Of The State Of New South Wales | Recombinant sub-unit vaccine |
| CN1399539A (zh) * | 1999-09-24 | 2003-02-26 | 史密丝克莱恩比彻姆生物有限公司 | 含有聚氧乙烯烷基醚或聚氧乙烯烷基酯以及至少一种非离子表面活性剂的佐剂 |
| AR025750A1 (es) * | 1999-09-24 | 2002-12-11 | Smithkline Beecham Biolog | Vacunas |
| CA2383413A1 (en) * | 1999-09-24 | 2001-03-29 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Use of combination of polyoxyethylene sorbitan ester and octoxynol as adjuvant and its use in vaccines |
| US6494865B1 (en) | 1999-10-14 | 2002-12-17 | Becton Dickinson And Company | Intradermal delivery device including a needle assembly |
| BR0014778A (pt) * | 1999-10-19 | 2002-07-16 | Procter & Gamble | Composição antimicrobiana, processos para matar bactérias, para desativar vìrus, para aperfeiçoar a saúde global de um mamìfero, para reduzir a ausência de pessoas, utilização de composição, produto antimicrobiano e conjunto de tratamento pessoal antimicrobiano |
| AU1591402A (en) | 2000-10-02 | 2002-04-15 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| WO2002067983A1 (en) * | 2001-02-23 | 2002-09-06 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel vaccine |
| TWI228420B (en) * | 2001-05-30 | 2005-03-01 | Smithkline Beecham Pharma Gmbh | Novel vaccine composition |
| US9856414B2 (en) | 2013-06-10 | 2018-01-02 | Dober Chemical Corp. | Compositions, systems and methods of making coated additive components |
-
2002
- 2002-05-28 TW TW091111304A patent/TWI228420B/zh not_active IP Right Cessation
- 2002-05-28 MY MYPI20021956A patent/MY134424A/en unknown
- 2002-05-29 AT AT02743125T patent/ATE420159T1/de active
- 2002-05-29 EP EP02743125A patent/EP1407008B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-29 SI SI200230806T patent/SI1407008T1/sl unknown
- 2002-05-29 EP EP09100013A patent/EP2039761A1/en not_active Ceased
- 2002-05-29 DE DE60230760T patent/DE60230760D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-29 KR KR1020037015649A patent/KR100871021B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-29 PL PL366990A patent/PL206435B1/pl unknown
- 2002-05-29 DK DK02743125T patent/DK1407008T3/da active
- 2002-05-29 MX MXPA03010944A patent/MXPA03010944A/es active IP Right Grant
- 2002-05-29 CN CNB028146557A patent/CN1279165C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-29 US US10/480,952 patent/US7316813B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-29 EP EP12170561A patent/EP2495314A1/en not_active Withdrawn
- 2002-05-29 JP JP2003500240A patent/JP4074582B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-29 CN CN2006101156101A patent/CN101069744B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-29 AU AU2002344182A patent/AU2002344182C1/en not_active Expired
- 2002-05-29 HU HU0400445A patent/HU229368B1/hu unknown
- 2002-05-29 ES ES02743125T patent/ES2318020T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-29 BR BRPI0210076-2 patent/BRPI0210076B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-05-29 CA CA2448208A patent/CA2448208C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-29 AU AU2006200742A patent/AU2006200742C9/en active Active
- 2002-05-29 NZ NZ529755A patent/NZ529755A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-05-29 PT PT02743125T patent/PT1407008E/pt unknown
- 2002-05-29 CZ CZ20033253A patent/CZ298697B6/cs unknown
- 2002-05-29 WO PCT/EP2002/005883 patent/WO2002097072A2/en not_active Ceased
- 2002-05-30 AR ARP020102018A patent/AR036039A1/es not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-11-18 IL IL158931A patent/IL158931A/en active IP Right Grant
- 2003-11-24 NO NO20035208A patent/NO335212B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-11-27 ZA ZA2003/09250A patent/ZA200309250B/en unknown
- 2003-11-27 CO CO03104769A patent/CO5540349A2/es active IP Right Grant
-
2007
- 2007-10-18 US US11/874,647 patent/US20080181914A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-01-17 IL IL188834A patent/IL188834A/en active IP Right Grant
-
2009
- 2009-03-26 CY CY20091100357T patent/CY1108930T1/el unknown
-
2013
- 2013-12-18 FR FR13C0072C patent/FR13C0072I1/fr active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2002344182C1 (en) | Influenza vaccine composition | |
| JP6211555B2 (ja) | 新規なワクチン | |
| AU2002344182A1 (en) | Influenza vaccine composition | |
| US20040096463A1 (en) | Novel vaccine | |
| JP5813645B2 (ja) | インフルエンザに対する新規ワクチン組成物 | |
| HK1067891B (en) | Influenza vaccine composition |