JP5813645B2 - インフルエンザに対する新規ワクチン組成物 - Google Patents
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Description
**コンバージョン係数は、各ワクチン株についてのワクチン接種後に、血清HI幾何平均力価(GMT)の倍の増加と定義される、
***防御率は、(各ワクチン株についての)ワクチン接種後に、1:40に等しいか、またはそれよりも高い血清HI力価を有するワクチン接種者の割合と定義され、通常、防御を示すものとして承認されている。
(I)HO(CH2CH2O)n−A−R
(式中、nは1〜50であり、Aは結合または−C(O)−であり、RはC1−50アルキルまたはフェニルC1−50アルキルである)、およびそれらの2つ以上の組み合わせからなる群より選択される。
Tween80:0.01〜1%、より好ましくは約0.1%(v/v)
TritonX−100:0.001〜0.1(%w/v)、より好ましくは0.005〜0.02%(w/v)。
一価スプリットワクチンを以下の手順に従って調製した。
孵化卵の接種の日に、作業種ロットと、0.5mg/mlにて硫酸ゲンタマイシンおよび25μg/mlにてヒドロコルチゾン(ウイルス株依存性)を含有するリン酸緩衝生理食塩水とを混合することによって新たな接種材料を調製する。ウイルス接種材料を2〜8℃に維持する。
9〜11日齢の孵化卵をウイルス複製のために使用する。殻を除去する。その卵を0.2mlのウイルス接種材料で接種する。接種した卵を48〜96時間、適切な温度(ウイルス株依存性)にてインキュベートする。インキュベーション時間の終わりに、胚を冷却することにより殺傷し、卵を2〜8℃にて12〜60時間保存する。
冷却した孵化卵からの尿膜腔液を収集する。通常、8〜10mlの粗尿膜腔液を1つの卵当たり回収する。
1.清浄化
収集した尿膜腔液を、適度な速度の遠心分離(範囲:4000〜14000g)により清浄化する。
清浄化したウイルスプール中のCaHPO4ゲルを得るために、0.5mol/L Na2HPO4および0.5mol/L CaCl2溶液を加えて、ウイルス株に依存して1.5g〜3.5gCaHPO4/リットルのCaHPO4の最終濃度にする。
再懸濁した沈殿物を6μmのフィルター膜で濾過する。
インフルエンザウイルスを、100μg/mlチオマーサルを含有する線形ショ糖密度勾配(0.55%(w/v))で等密度遠心法により濃縮する。流速は8〜15リットル/時間である。
画分2 約52〜38%ショ糖
画分3 38〜20%ショ糖*
画分4 20〜0%ショ糖
*ウイルス株依存性:画分3は15%ショ糖まで減少し得る。
一価全インフルエンザウイルス濃縮物をENI−MarkII超遠心分離器に適用する。K3ローターは線形ショ糖密度勾配(0.55%(w/v)(ここで、デオキシコール酸ナトリウム勾配がさらに重ね合わせられる)を含有する。Tween80は0.1%(w/v)まで分割(スプリット)中に存在し、トコフェロールコハク酸エステルを0.5mMまでB型株ウイルスに加える。最大デオキシコール酸ナトリウム濃度は0.7〜1.5%(w/v)であり、株依存性である。流速は8〜15リットル/時間である。
スプリットウイルス画分を、0.2μm膜を用いて最後にフィルター膜で濾過する。0.025%(w/v)Tween80および(B型株ウイルスについて)0.5mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝液を希釈に使用する。濾過した画分2の最終体積は元の画分体積の5倍である。
濾過した一価物質を多くても84時間、22±2℃にてインキュベートする(ウイルス株に依存し、このインキュベーションは短縮できる)。次いで、0.025%(w/v)Tween80を含有するリン酸緩衝液を、最大250μg/mlまで全タンパク質含有量を減少させるために加える。B型株ウイルスについて、0.025%(w/v)Tween80および0.25mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝生理食塩水を希釈に適用して、全タンパク質含有量を250μg/mlまで減少させる。ホルムアルデヒドを50μg/mlの最終濃縮物に加えて、不活化を20℃±2℃にて少なくとも72時間行う。
不活化スプリットウイルス物質を、20kDa MWCOを有する酢酸セルロース膜を備えた、限外濾過装置において少なくとも2倍に濃縮する。続いて、その物質を0.025%(w/v)Tween80を含有するリン酸緩衝液、およびその後、0.01%(w/v)Tweenを含有するリン酸緩衝生理食塩水で洗浄する。B型株ウイルスについて、0.01%(w/v)Tween80および0.1mMトコフェロールコハク酸塩を含有するリン酸緩衝生理食塩水を洗浄に使用する。
限外濾過後の物質を、0.2μm膜を用いて最後にフィルター膜で濾過する。フィルター膜をリンスし、必要な場合、タンパク質濃度が500μg/mlを超えないようにその物質を、0.01%(w/v)Tween80および(B型株ウイルスについて)0.1mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝生理食塩水で希釈する。
一価最終バルクを最大18カ月間、2〜8℃にて保存する。
3つの株、A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR−116、A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir−17およびB/Yamanashi/166/98の一価最終バルクを実施例1に記載した方法に従って生成した。
一価最終バルクの適切な量を、A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR−116、A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir−17それぞれについて30μg/ml、およびB/Yamanashi/166/98について39μg/mlの最終HA濃度でプールした。Tween80およびTritonX−100をそれぞれ580μg/mlおよび90μg/mlに調節した。最終体積をリン酸緩衝生理食塩水で3lに調節した。三価プールを0.8μm酢酸セルロース膜で最後に濾過して、三価最終バルクを得た。三価最終バルクを各々少なくとも0.5mLにてシリンジに充填した。
ガラスプレート(12.4−10.0cm)を、NIBSCによって推奨されている抗インフルエンザHA血清の濃度を含有するアガロースゲルでコーティングする。ゲルをセットした後、72サンプルウェル(3mmφ)をアガロース中で穴を開ける。基準物質の10μlの適切な希釈物およびサンプルをウェルに負荷する。湿室内で室温(20〜25℃)にて24時間、プレートをインキュベートする。その後、プレートをNaCl溶液で一晩浸し、蒸留水中で簡単に洗浄する。次いでゲルをプレスし、乾燥させる。完全に乾燥させて、プレートを10分間クマシーブリリアントブルー溶液で染色し、明確に規定された染色領域が目に見えるまで、メタノールと酢酸との混合物中で2回脱染する。プレートを乾燥させた後、抗原ウェル周囲の染色領域の直径を直角で2方向において測定する。代替として、表面を測定する装置を使用してもよい。表面に対する抗原希釈物の用量反応曲線を構築し、結果を標準的な勾配比アッセイ法に従って計算する(Finney,D.J.(1952).Statistical Methods in Biological Assay.London:Griffin,Quoted:Wood,JMら(1977).J.Biol.Standard.5,237−247)。
実施例2に記載したように得たシリンジを臨床検査に使用する:
H3N2:A/Panama/2007/99 RESVIR−17
H1N1:A/New Caledonia/20/99(H1N1) IVR−116
B:B/Yamanashi/166/98。
一価スプリットワクチンを以下の手順に従って調製した。
孵化卵の接種の日に、新しい接種材料を、作業種ロットと、0.5mg/mlにて硫酸ゲンタマイシンおよび25μg/mlにてヒドロコルチゾンを含有するリン酸緩衝生理食塩水とを混合することによって調製する(ウイルス株依存性)。ウイルス接種材料を2〜8℃に維持する。
9〜11日齢の孵化卵をウイルス複製のために使用する。殻を除去する。0.2mlのウイルス接種材料を卵に接種する。60,000個の接種した卵を適切な温度(ウイルス株依存)で48〜96時間インキュベートする。インキュベーション時間の終わりに胚を冷却により殺傷し、卵を2〜8℃にて12〜60時間保存する。
冷却した孵化卵からの尿膜腔液を収集する。通常、8〜10mlの粗尿膜腔液を1個の卵当たり回収する。
清浄化
収集した尿膜腔液を適度な速度の遠心分離(範囲:4000〜14000g)により清浄化する。
飽和硫酸アンモニウム溶液を清浄化したウイルスプールに加えて、0.5mol/Lの最終硫酸アンモニウム濃度に到達させる。少なくとも1時間の沈殿の後、デプスフィルタ(典型的に0.5μm)での濾過により沈殿物を除去する。
清浄化した粗全ウイルスバルクを、有効な滅菌膜(典型的に0.2μm)を用いて最後にフィルター膜で濾過する。
濾過滅菌した粗一価全ウイルスバルクを、1000kDa MWCO BIOMAX(商標)膜を備えたカセットで少なくとも6倍濃縮する。濃縮した残余分をリン酸緩衝生理食塩水で少なくとも1.8回洗浄する。
インフルエンザウイルスを線形ショ糖密度勾配(0.55%(w/v))において等密度遠心法により濃縮する。流速は8〜15リットル/時間である。
画分1 55〜52%ショ糖
画分2 約52〜38%ショ糖
画分3 38〜20%ショ糖*
画分4 20〜0%ショ糖
*ウイルス株依存性:画分3は15%ショ糖まで減少し得る。
一価全インフルエンザウイルス濃縮物をENI−MarkII超遠心分離器に適用する。K3ローターは線形ショ糖密度勾配(0.55%(w/v))(ここでデオキシコール酸ナトリウム勾配をさらに重ね合わせる)を含有する。Tween80は、分割(スプリット)の間、0.1%(w/v)まで存在し、トコフェロールコハク酸エステルをB型株ウイルスについて0.5mMまで加える。最大デオキシコール酸ナトリウム濃度は0.7〜1.5%(w/v)であり、株依存性である。流速は8〜15リットル/時間である。
スプリットウイルス画分を、0.2μm膜を用いて最後にフィルター膜で濾過する。0.025%(w/v)Tween80および(B型株について)0.5mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝液を希釈のために使用する。濾過した画分2の最終体積は元の画分体積の5倍である。
濾過した一価物質を多くても84時間、22±2℃にてインキュベートする(ウイルス株に依存し、このインキュベーションは短縮できる)。次いで全タンパク質含有量を最大450μg/mlまで減少させるために、0.025%(w/v)Tween80を含有するリン酸緩衝液を加える。B型株について、0.025%(w/v)Tween80および0.25mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝生理食塩水を希釈に適用して、全タンパク質含有量を450μg/mlまで減少させる。ホルムアルデヒドを100μg/mlの最終濃縮物に加え、不活化は少なくとも72時間、20℃±2℃にて行う。
不活化スプリットウイルス物質を、20kDa MWCOを有する酢酸セルロース膜を備えた、限外濾過装置で少なくとも2倍に濃縮する。その後、その物質を0.025%(w/v)Tween80を含有するリン酸緩衝液、続いて、0.01%(w/v)Tweenを含有するリン酸緩衝生理食塩水で洗浄する。B型株ウイルスについて、0.01%(w/v)Tween80および0.1mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝生理食塩水を洗浄に使用する。
限外濾過後にその物質を、0.2μm膜を用いて最後にフィルター膜で濾過する。フィルター膜をリンスし、必要な場合、タンパク質濃度が500μg/mlを超えない場合、その物質を、0.01%(w/v)Tween80、およびB型株について特に0.1mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝生理食塩水で希釈する。
一価最終バルクを、最大18ヶ月間、2〜8℃にて保存する。
実施例5aに記載される方法の好ましい変更は以下の通りである:
全ウイルスを収集し、その後、沈殿工程を行う(硫酸アンモニウム沈殿)。この後、清浄化工程を行い、流体を適度な速度の遠心分離(範囲4000〜14000g)により清浄化する。このように沈殿および清浄化工程の順序は実施例5aと比べて逆である。
収集
沈殿(硫酸アンモニウム)
清浄化
濾過滅菌
限外濾過
超遠心分離法
分割(スプリット)(好ましくはデオキシコール酸ナトリウム)
濾過滅菌
不活化
限外濾過
最終濾過滅菌。
3つの株、A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR−116、A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir−17およびB/Yamanashi/166/98の一価最終バルクを、実施例5に記載した方法に従って生成した。
適切な量の一価最終バルクを、A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR−116、A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir−17それぞれについて30μg/ml、およびB/Johannesburg/5/97について36μg/mlの最終HA濃度でプールした。Tween80およびTritonX−100をそれぞれ580μg/mlおよび90μg/mlに調節した。リン酸緩衝生理食塩水で最終体積を3lに調節した。三価プールを、0.8μm酢酸セルロース膜を用いて最後に濾過して、三価最終バルクを得た。三価最終バルクを各々少なくとも0.5mLでシリンジに充填した。
B/Johannesburg/5/99の一価全ウイルス濃縮物を実施例1に記載したように得た。
デオキシコール酸ナトリウムを用いるショ糖密度勾配遠心法
一価全インフルエンザウイルス濃縮物をENI−MarkII超遠心分離器に適用する。K3ローターは、線形ショ糖密度勾配(0.55%(w/v))(ここで、デオキシコール酸ナトリウム勾配がさらに重ね合わされる)を含有する。Tween80は、分割(スプリット)の間、0.1%(w/v)まで存在する。最大デオキシコール酸ナトリウム濃度は0.7〜1.5%(w/v)であり、株依存性である。流速は8〜15リットル/時間である。
画分2の10mlのサンプルをさらなる処理のために取った。スプリットウイルス画分を、0.2μm膜を用いて最後にフィルター膜で濾過する。0.025%(w/v)Tween80および0.5mMラウリル硫酸ナトリウムを含有するリン酸緩衝液を希釈のために使用する。濾過した画分2の最終体積は元の画分体積の5倍である。
濾過した一価物質を多くても84時間、22±2℃にてインキュベートする(ウイルス株に依存し、このインキュベーションは短縮できる)。次いで全タンパク質含有量を最大250μg/mlまで減少させるために、0.025%(w/v)Tween80および0.5mMラウリル硫酸ナトリウムを含有するリン酸緩衝生理食塩水を加える。ホルムアルデヒドを50μg/mlの最終濃縮物に加え、不活化を少なくとも72時間、20℃±2℃で行う。
不活化スプリットウイルス物質を、20kDa MWCOを有する酢酸セルロース膜を備えた、限外濾過装置において少なくとも2倍に濃縮する。続いて、その物質を、0.01%(w/v)Tweenおよび0.5mMラウリル硫酸ナトリウムを含有する4容量のリン酸緩衝生理食塩水で洗浄する。
限外濾過後の物質を、0.2μ膜を用いて最後にフィルター膜で濾過する。濾過膜をリンスし、タンパク質濃度が500μg/mlを超えないことが必要な場合、0.01%(w/v)Tween80および0.5mMラウリル硫酸ナトリウムを含有するリン酸緩衝生理食塩水でその物質を希釈する。
一価最終バルクを2〜8℃で保存する。
B/Yamanashi/166/98の一価全ウイルス濃縮物を実施例1に記載したように得た。
断片化
一価全インフルエンザウイルス濃縮物を、リン酸緩衝生理食塩水(pH7.4)を用いて1,000μg/mlのタンパク質濃度まで希釈する。プランタケア(登録商標)2000UPまたはラウレス−9を1%(w/v)の最終濃縮物に加える。その物質を30分間わずかに混合する。次いでその物質をバケット内のショ糖クッション15%(w/w)で覆う。ローターSW28をスイングするBeckmanにおける超遠心分離を25,000rpmにて2時間、20℃で実施する。
上清をさらなる処理のために取った。スプリットウイルス画分を、0.2μm膜を用いて最後にフィルター膜で濾過する。
必要な場合、全タンパク質含有量を最大500μg/mlまで減少させるために、リン酸緩衝生理食塩水を加える。ホルムアルデヒドを100μg/mlの最終濃縮物に加え、不活化を20℃±2℃にて少なくとも6日間行う。
不活化物質中でTween80およびTritonX100をそれぞれ0.15%および0.02%に調節する。不活化スプリットウイルス物質を、30kDa MWCOを有する酢酸セルロース膜を備えた、限外濾過装置で少なくとも2倍に濃縮する。続いて、その物質を4容量のリン酸緩衝生理食塩水で洗浄する。
限外濾過後の物質を、0.2μm膜を用いて最後にフィルター膜で濾過する。フィルター膜をリンスし、タンパク質濃度が500μg/mlを超えないようにリン酸緩衝生理食塩水で物質を希釈する。
一価最終バルクを2〜8℃に保存する。
A インフルエンザウイルス抗原調製物の調製
一価スプリットワクチンを以下の手順に従って調製した。
孵化卵の接種の日に、新しい接種材料を、作業種ロットと、0.5mg/mlにて硫酸ゲンタマイシンおよび25μg/mlにてヒドロコルチゾン(ウイルス株依存性)を含有するリン酸緩衝生理食塩水とを混合することによって調製する。ウイルス接種材料を2〜8℃に維持する。
9〜11日齢の孵化卵をウイルス複製のために使用する。殻を除去する。0.2mlのウイルス接種材料を卵に接種する。接種した卵を適切な温度(ウイルス株依存性)で48〜96時間インキュベートする。インキュベーション時間の終わりに、胚を冷却により殺傷し、卵を2〜8℃にて12〜60時間保存する。
冷却した孵化卵からの尿膜腔液を収集する。通常、8〜10mlの粗尿膜腔液を1個の卵当たり回収する。
1.清浄化
収集した尿膜腔液を適度な速度の遠心分離(範囲:4000〜14000g)により清浄化する。
清浄化したウイルスプール中のCaHPO4ゲルを得るために、0.5mol/L Na2HPO4および0.5mol/L CaCl2溶液を加えて、ウイルス株に依存して1.5g〜3.5gCaHPO4/リットルのCaHPO4の最終濃度にする。
再懸濁した沈殿物を6μmのフィルター膜で濾過する。
インフルエンザウイルスを、100μg/mlチオマーサルを含有する線形ショ糖密度勾配(0.55%(w/v))で等密度遠心法により濃縮する。流速は8〜15リットル/時間である。
画分1 55〜52%ショ糖
画分2 約52〜38%ショ糖
画分3 38〜20%ショ糖*
画分4 20〜0%スクロール
*ウイルス株依存性:画分3は15%ショ糖まで減少し得る。
一価全インフルエンザウイルス濃縮物をENI−MarkII超遠心分離器に適用する。K3ローターは線形ショ糖密度勾配(0.55%(w/v)(ここで、デオキシコール酸ナトリウム勾配がさらに重ね合わせられる)を含有する。Tween80は0.1%(w/v)まで分割(スプリット)中に存在し、コハク酸トコフェロールをB型株ウイルスについて0.5mMまで加える。最大デオキシコール酸ナトリウム濃度は0.7〜1.5%(w/v)であり、株依存性である。流速は8〜15リットル/時間である。
スプリットウイルス画分を、0.2μm膜を用いて最後にフィルター膜で濾過する。0.025%(w/v)Tween80および(B型株ウイルスについて)0.5mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝液を希釈に使用する。濾過した画分2の最終体積は元の画分体積の5倍である。
濾過した一価物質を多くても84時間、22±2℃にてインキュベートする(ウイルス株に依存し、このインキュベーションは短縮できる)。次いで、0.025%(w/v)Tween80を含有するリン酸緩衝液を、最大250μg/mlまで全タンパク含有量を減少させるために加える。B型株ウイルスについて、0.025%(w/v)Tween80および0.25mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝生理食塩水を希釈に適用して、全タンパク質含有量を250μg/mlまで減少させる。ホルムアルデヒドを50μg/mlの最終濃縮物に加え、不活化を20℃±2℃にて少なくとも72時間行う。
不活化スプリットウイルス物質を、20kDa MWCOを有する酢酸セルロース膜を備えた、限外濾過装置において少なくとも2倍に濃縮する。続いて、その物質を0.025%(w/v)Tween80を含有するリン酸緩衝液、およびその後、0.01%(w/v)Tweenを含有するリン酸緩衝生理食塩水で洗浄する。B型株ウイルスについて、0.01%(w/v)Tween80および0.1mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝生理食塩水を洗浄に使用する。
限外濾過後の物質を、0.2μm膜を用いて最後にフィルター膜で濾過する。フィルター膜をリンスし、必要な場合、タンパク質濃度が1,000μg/mlを超えず、血球凝集素濃度が180μg/mlを超えるように、その物質を0.01%(w/v)Tween80および(B型株ウイルスについて)0.1mMトコフェロールコハク酸エステルを含有するリン酸緩衝生理食塩水で希釈する。
一価最終バルクを最大18カ月間、2〜8℃にて保存する。
3つの株、A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR−116、A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir−17およびB/Johannesburg/5/99の一価最終バルクを、上記のパートAに記載した方法に従って生成した。
適切な量の一価最終バルクを、A/New Caldonia/20/99(H1N1)IVR−116、A/Panama/2007/99(H3N2)Resvir−17それぞれについて60μg/ml、およびB/Johannesburg/5/99について68μg/mlの最終HA濃度でプールした。Tween80、TritonX−100およびトコフェロールコハク酸エステルをそれぞれ1,000μg/ml、110μg/mlおよび160μg/mlに調節した。リン酸緩衝生理食塩水で最終体積を3lに調節した。三価プールを、0.8μm酢酸セルロース膜を用いて最後に濾過して、三価最終バルクを得た。三価最終バルクを各々少なくとも0.165mLでシリンジに充填した。
ワクチンを予め充填したシリンジに供給し、三角筋部に皮内投与した。皮内(ID)ニードルは欧州特許第1092444号に記載されており、適切な皮内注射を確実にするために皮膚浸透制限器を有する。注射部位における腫れ(丘疹)の形成は良質なID投与であると実証されているので、被験体と共に調査員が、ワクチン接種の30分後に腫れの正確なサイズを測定した。
ワクチン投与時における全コホートの平均年齢は70.4±6.2歳の標準偏差(S.D.)であり、女性/男性比は1.7:1であった。
高齢者集団においてチオマーサル減少インフルエンザワクチンのIDおよびIM投与の両方は100%の血清防御を与えることができる。
(プールを独立して行い、ワクチンをシリンジに充填しなかったことを除いて)実施例9に記載したように調製したチオマーサル減少スプリットインフルエンザワクチンの免疫原性を、標準的なニードルを用いてモルモットにおいてID送達により評価した。
群1−0.1μgの三価チオマーサル減少スプリットインフルエンザID、
群2−0.3μgの三価チオマーサル減少スプリットインフルエンザID、
群3−1.0μgの三価チオマーサル減少スプリットインフルエンザID、
群4−1.0μgの三価チオマーサル減少スプリットインフルエンザIM。
プロトコル
0日に、モルモットを200μlにおいて5μgの三価全不活化インフルエンザウイルスにより鼻腔内で抗原刺激した。
アジュバント化の効果を、HIアッセイによる抗体反応(0、28、42日)を測定することによって評価した。
G1〜G5は各群あたり5匹の5群のモルモットを示す。
G2 スプリット三価チオマーサル減少0.1μg+3D−MPL50μg
G3 スプリット三価チオマーサル減少0.1μg+3D−MPL10μg
G4 スプリット三価チオマーサル減少0.1μg+3D−MPLin50μg+QS21 50μg
G5 スプリット三価チオマーサル減少0.1μg+3D−MPLin10μg+QS21 10μg。
ID経路によって投与したスプリットインフルエンザワクチン(プラスおよびマイナスチオマーサル)の免疫原性を評価するために、抗原刺激したブタモデルを使用した。大部分の集団は、インフルエンザによる少なくとも1回の感染を経験しているので、インフルエンザワクチンは、前から存在する免疫反応をブーストできなければならない。従って、ヒトの状況を最適に模倣するように動物を抗原刺激する。
群1 0および14日における三価全不活化ウイルス(50μgの各HA)の2回の抗原刺激;
群2 0および14日における三価全不活化ウイルス(50μgの各HA)の2回の抗原刺激;
群3 0日における三価全不活化ウイルス(50μgの各HA)での1回の抗原刺激;
群4 0および14日における三価全不活化ウイルス(25μgの各HA)の2回の抗原刺激;
群5 0日における三価全不活化ウイルス(25μgの各HA)の1回の抗原刺激;
群6 0および14日における三価全不活化ウイルス(12.5μgの各HA)の2回の抗原刺激。
13.1 方法
13.1.1. 研究設計
基礎慢性疾患を有するかまたは有さず、インフルエンザに対して以前にワクチン接種を受けていない6ヶ月〜6歳未満の小児をこの研究に含めた。
免疫化前(0日)、2回目のワクチン接種の21日後(49±2日)、2回目のワクチン接種の3ヶ月後(118日/4ヶ月)および2回目のワクチン接種の6ヶ月後(208日/7ヶ月)に血清サンプルを回収した。標準的な手順に従って、HA阻害(HI)検査によって血清を分析した。検査に使用した抗原はワクチン製剤に含まれているものと同じであった(A/New Caledonia/20/99(IVR−116)[H1N1]、A/Panama/2007/99(RESVIR−17)[H3N2]およびB/Shangdong/7/97)。各血清を1:10の開始希釈にて試験した。幾何平均力価(GMT)、SPR(すなわち、ワクチン接種後、血清HI力価≧1:40を有する被験体の割合)、SCR(すなわち、ワクチン接種前のHI力価<1:10およびワクチン接種後の力価≧1:40またはワクチン接種前の力価≧1:10およびワクチン接種後の力価の少なくとも4倍増加のいずれかを有する被験体の割合)、およびSCF(すなわち、0日と比較したワクチン接種後のHI GMTの倍率増加)を計算した。小児におけるインフルエンザワクチンの免疫原性評価についての指針はまだ確立されていないので、18〜60歳の成人におけるインフルエンザワクチンの評価に関するCHMP基準に従って血清学の結果を評価した:SPR>70%、SCR>40%およびSCF>2.5を、ワクチン免疫原性のカットオフレベルとみなした。加えて、血清防御力(SPP;すなわち2回目のワクチン接種後に≧1:40の血清防御力価を示したワクチン接種前に血清防御されていない被験体[0日に力価<1:40]の割合)をさらなる誘導パラメーターとして計算した。
13.2.1 反応原性および安全性
両方のワクチンは有益な安全性プロファイルを示した。
各年齢およびワクチン群についての免疫原性の結果を表9および表10にまとめる。全ての3つのワクチン株についてのワクチン接種前のGMTは2つのワクチン群において同じ範囲内であった。TF群において2回目のワクチン接種から21日後、GMTは、6〜35ヶ月齢の小児に関して71.3から283.0の間、および36ヶ月〜6歳未満の小児に関して180.3から712.7の間の範囲であった。対照群において、GMTは、6〜35ヶ月齢の小児に関して31.3〜111.2の範囲であり、36ヶ月〜6歳未満の小児に関して165.1〜529.8の範囲であった。2用量の後、成人におけるインフルエンザワクチンの免疫原性評価に関するCHMP基準は、TF群において6〜35ヶ月齢の小児および36ヶ月〜6歳未満の小児の両方について満たした(表9および表10)。対照群において、両方の年齢群についてSCRおよびSCF基準のみが満たされた。SPRは、年長児(36ヶ月〜6歳未満)において全ての3つの株に関して70%より高かったが、低年齢の小児(6〜35ヶ月齢)において3つの株のいずれも65.9%を超えなかった。
Fluarix(商標)の新規のチオマーサルを含まない製剤およびチオマーサル減少Fluarix(商標)(対照)の両方は免疫原性であり、良好な安全性プロファイルを示した。TFワクチンは、6〜35ヶ月齢の小児および36〜6歳未満の小児の両方でかつ3つ全ての株に関して、成人について規定された3つ全てのCHMP基準を満たすことが示された。免疫原性は、2用量の対照ワクチンを受けている小児と比べて、2用量のTFワクチンを受けている3歳より低年齢の小児において、より高くなることが示された。
以下、本発明の実施形態を示す。
(1)ヒト被験体において免疫反応を上昇させる方法であって、前記ヒト被験体に、血球凝集素(HA)と、前記HAを安定化させるのに十分な量のα−トコフェロールまたはその誘導体のうちの少なくとも1つとを含む水性不活化インフルエンザウイルス調製物を含む、水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物を投与する工程を含む方法。
(2)前記ヒト被験体は、小児である、(1)に記載の方法。
(3)SRDアッセイによって検出可能な量のHAの存在により決定されるように、前記α−トコフェロールまたはその誘導体のうちの少なくとも1つは、前記調製物のHAが、前記調製物が生成された後少なくとも6ヶ月間、安定なままであるような量で存在する、(1)に記載の方法。
(4)前記調製物は、α−トコフェロールを含む、(1)に記載の方法。
(5)前記調製物は、α−トコフェロールコハク酸エステルを含む、(1)に記載の方法。
(6)前記α−トコフェロールコハク酸エステルは、1μg/mlから10mg/mlの間の濃度で存在する、(5)に記載の方法。
(7)前記α−トコフェロールコハク酸エステルは、10から500μg/mlの間の濃度で存在する、(5)に記載の方法。
(8)インフルエンザウイルス抗原調製物は、スプリットウイルス抗原調製物、サブユニット抗原、および化学的にまたは他の方法で不活化された全ウイルスからなる群より選択される、(1)に記載の方法。
(9)前記不活化インフルエンザウイルス調製物は、スプリットまたはサブユニットウイルス抗原調製物である、(8)に記載の方法。
(10)前記不活化インフルエンザウイルス調製物は、A型株およびB型株の両方のHAを含む、(1)に記載の方法。
(11)前記調製物は、2つのA型株および1つのB型株のHAを含む、三価インフルエンザウイルス調製物である、(10)に記載の方法。
(12)前記調製物は、2つのA型株および2つのB型株のHAを含む、四価インフルエンザウイルス調製物である、(10)に記載の方法。
(13)インフルエンザの各株についてのHA抗原の濃度は、SRDアッセイにより測定すると、1〜100μg/mlである、(10)に記載の方法。
(14)インフルエンザの各株についてのHA抗原の濃度は、SRDアッセイにより測定すると、約15μg/mlである、(10)に記載の方法。
(15)インフルエンザの各株についてのHA抗原の濃度は、SRDアッセイにより測定すると、15μg/ml未満である、(10)に記載の方法。
(16)インフルエンザの各株についてのHA抗原の量は、SRDアッセイにより測定すると、6〜9μg/用量の間である、(15)に記載の方法。
(17)前記免疫原性組成物は、アジュバントをさらに含む、(1)に記載の方法。
(18)前記アジュバントは、水中油型エマルションを含む、(17)に記載の方法。
(19)前記アジュバントは、スクアレンを含む、(18)に記載の方法。
(20)前記アジュバントは、トコフェロールなどのトコールを含む、(17)に記載の方法。
(21)小児は、9歳以下または6歳以下である、(1)に記載の方法。
(22)前記小児は、6ヶ月から6歳未満の間である、(21)に記載の方法。
(23)前記小児は、6ヶ月から36ヶ月未満の間である、(21)に記載の方法。
(24)前記小児は、36ヶ月から6歳未満の間である、(21)に記載の方法。
(25)前記免疫原性組成物は、約0.5mlまたは約0.25mlの用量体積を有する、(1)に記載の方法。
(26)前記免疫原性組成物は、0.2から0.45mlの間の用量体積を有する、(1)に記載の方法。
(27)前記免疫原性組成物の送達は、皮内、鼻腔内、筋肉内、経口または皮下経路による、(1)に記載の方法。
(28)血球凝集素(HA)と、前記HAを安定化させるのに十分な量のα−トコフェロールまたはその誘導体のうちの少なくとも1つとを含む水性不活化インフルエンザウイルス調製物を含む、水銀防腐剤を含まない小児用ワクチンであって、用量体積が0.2〜0.45mlの間である、前記水銀防腐剤を含まない小児用ワクチン。
(29)小児を免疫化するのに使用するための水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物であって、前記組成物は、血球凝集素(HA)と、前記HAを安定化させるのに十分な量のα−トコフェロールまたはその誘導体のうちの少なくとも1つとを含む水性不活化インフルエンザウイルス調製物を含む、前記水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(30)SRDアッセイによって検出可能な量のHAの存在により決定されるように、前記α−トコフェロールまたはその誘導体のうちの少なくとも1つは、前記調製物のHAが、前記調製物が生成された後少なくとも6ヶ月間、安定なままであるような量で存在する、(29)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(31)前記調製物は、α−トコフェロールコハク酸エステルを含む、(29)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(32)前記α−トコフェロールコハク酸エステルは、1μg/mlから10mg/mlの間の濃度で存在する、(31)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(33)前記α−トコフェロールコハク酸エステルは、10〜500μg/mlの間の濃度で存在する、(32)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(34)インフルエンザウイルス抗原調製物は、スプリットウイルス抗原調製物、サブユニット抗原、および化学的にまたは他の方法で不活化された全ウイルスからなる群より選択される、(29)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(35)不活化インフルエンザウイルス調製物は、スプリットまたはサブユニットウイルス抗原調製物である、(34)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(36)不活化インフルエンザウイルス調製物は、A型株およびB型株の両方のHAを含む、(29)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(37)前記調製物は、2つのA型株および1つのB型株のHAを含む三価インフルエンザウイルス調製物である、(36)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(38)前記調製物は、2つのA型株および2つのB型株のHAを含む四価インフルエンザウイルス調製物である、(36)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(39)インフルエンザの各株についてのHA抗原の濃度は、SRDアッセイにより測定すると、1〜100μg/mlである、(36)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(40)インフルエンザの各株についてのHA抗原の濃度は、SRDアッセイにより測定すると、約15μg/mlである、(36)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(41)インフルエンザの各株についてのHA抗原の濃度は、SRDアッセイにより測定すると、15μg/ml未満である、(36)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(42)インフルエンザの各株についてのHA抗原の量は、SRDアッセイにより測定すると、6〜9μg/用量の間である、(41)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(43)前記免疫原性組成物は、アジュバントをさらに含む、(29)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(44)前記アジュバントは、水中油型エマルションを含む、(43)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(45)前記アジュバントは、スクアレンを含む、(44)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(46)前記アジュバントは、トコフェロールなどのトコールを含む、(43)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(47)前記小児は、9歳以下または6歳以下である、(29)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(48)前記小児は、6ヶ月から6歳未満の間である、(47)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(49)前記小児は、6ヶ月から36ヶ月未満の間である、(47)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(50)前記小児は、36ヶ月から6歳未満の間である、(47)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(51)前記免疫原性組成物は、約0.5mlまたは約0.25mlの用量体積を有する、(29)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
(52)前記免疫原性組成物は、0.2から0.45mlの間の用量体積を有する、(29)に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
Claims (6)
- 2つのA型株及び異なる系統の2つのB型株由来の血球凝集素(HA)と、前記HAを安定化させるのに十分な量のα-トコフェロールコハク酸エステルとを含む四価水性不活化インフルエンザウイルス調製物を含む、6ヶ月齢〜36ヶ月齢の小児の免疫化に使用するための、水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物であって、インフルエンザの各株についてのHA抗原量は、SRDアッセイにより測定すると、約15μg/用量である、前記免疫原性組成物。
- SRDアッセイによって検出可能な量のHAの存在により決定されるように、前記α-トコフェロールコハク酸エステルは、前記調製物のHAが、前記調製物が生成された後少なくとも6ヶ月間、安定なままであるような量で存在する、請求項1に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
- インフルエンザウイルス抗原調製物は、スプリットウイルス抗原調製物、サブユニット抗原、及び化学的に又は他の方法で不活化された全ウイルスから成る群より選択される、請求項1に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物は、アジュバントをさらに含む、請求項1に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物は、約0.5ml又は約0.25mlの用量体積を有する、請求項1に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物は、0.2〜0.45mlの用量体積を有する、請求項1に記載の水銀防腐剤を含まない免疫原性組成物。
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