RU2496519C2 - Способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, и применение препарата - Google Patents
Способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, и применение препарата Download PDFInfo
- Publication number
- RU2496519C2 RU2496519C2 RU2010111747/10A RU2010111747A RU2496519C2 RU 2496519 C2 RU2496519 C2 RU 2496519C2 RU 2010111747/10 A RU2010111747/10 A RU 2010111747/10A RU 2010111747 A RU2010111747 A RU 2010111747A RU 2496519 C2 RU2496519 C2 RU 2496519C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- specified
- cells
- inactivation
- viral antigens
- Prior art date
Links
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title claims abstract description 63
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 55
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 55
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 171
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 45
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 35
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 93
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 34
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 22
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 22
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 10
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims description 8
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 claims description 8
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 8
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 8
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 29
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 12
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract description 9
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 14
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 14
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 14
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 14
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 13
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 12
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 12
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 11
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 7
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 7
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 7
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 7
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 7
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 6
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 6
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 6
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 238000011085 pressure filtration Methods 0.000 description 5
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 5
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 5
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 5
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 4
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 3
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 3
- 241000710942 Ross River virus Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 description 2
- 229920002884 Laureth 4 Polymers 0.000 description 2
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 2
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004006 Tick-borne encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229940062711 laureth-9 Drugs 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 2
- ONJQDTZCDSESIW-UHFFFAOYSA-N polidocanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO ONJQDTZCDSESIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 2
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 2
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 2
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 2
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 2
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- WSVLPVUVIUVCRA-KPKNDVKVSA-N Alpha-lactose monohydrate Chemical compound O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WSVLPVUVIUVCRA-KPKNDVKVSA-N 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 1
- 206010066919 Epidemic polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 208000025174 PANDAS Diseases 0.000 description 1
- 208000021155 Paediatric autoimmune neuropsychiatric disorders associated with streptococcal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000845082 Panama Species 0.000 description 1
- 240000004718 Panda Species 0.000 description 1
- 235000016496 Panda oleosa Nutrition 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 238000003450 affinity purification method Methods 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000000305 astragalus gummifer gum Substances 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-M deoxycholate Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-M 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 244000309457 enveloped RNA virus Species 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- -1 for example Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 208000037799 influenza C Diseases 0.000 description 1
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 1
- 229960001021 lactose monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 101150028395 perC gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011020 pilot scale process Methods 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000011172 small scale experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000012905 visible particle Substances 0.000 description 1
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
- C12N7/06—Inactivation or attenuation by chemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16151—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16161—Methods of inactivation or attenuation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16251—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16261—Methods of inactivation or attenuation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области молекулярной биологии, генной инженерии и вирусологии. Предложен способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, включающий а) инокуляцию клеток инфекционным вирусом в жидкости, b) репродукцию указанного вируса в указанных клетках, с) сбор указанного репродуцированного вируса, d) инактивацию указанного собранного вируса, и е) обработку указанного инактивированного вируса детергентом, приводящий к получению препарата, содержащего вирусные антигены. Способ может быть использован в медицине и фармакологии при получении вакцин. 3 н. и 18 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл., 3 пр.
Description
Область техники
Данное изобретение относится к способам получения противовирусных вакцин.
Вакцина представляет собой иммуногенную композицию антигенного вещества, например, (неинфекционного) патогена, такого как вирус, его оболочки, частицы или их белковых антигенов. Введение или вакцинация приводит к иммунизации субъекта, например, млекопитающего, такого как человек или птица. Вакцинация может вызвать специфическую реакцию на вакцину и некоторое незначительное воспаление, что, однако, как правило, существенно менее вредно, чем инфекция, вызванная полноценным жизнеспособным вирусом, для предупреждения которой и предназначена вакцина. Иммунная система субъектов может адаптироваться к специфическому узнаванию антигенов вакцины и быстро инактивировать патоген после дополнительного воздействия патогена на субъект. Так, через вакцинацию развивается повышенная резистентность к патогену.
С целью приготовления вакцины, вирус обычно культивируют на соответствующей клеточной культуре или, как правило, на клеточном субстрате. В случае гриппа, обычно используют оплодотворенные куриные яйца. “Урожай” инфекционного вируса собирают и очищают, удаляя нежелательные невирусные составляющие клеток. В частности, в случае вакцин, полученных из куриных субстратов, у некоторых восприимчивых индивидуумов возможна аллергическая реакция на белки куриных яиц.
Определяющей стадией в получении противовирусных вакцин является инактивация инфекционных вирусов. При получении вакцин наиболее часто используемым инактивирующим средством является формалин (водный раствор формальдегида). Его обычно используют в виде насыщенного водного раствора при концентрации формальдегида около 37%. Формальдегид инактивирует вирус путем необратимого сшивания первичных аминогрупп в поверхностных белках с другими близлежащими атомами азота в белке или ДНК посредством -CH2-связи. В частности, эти поперечные связи могут привести к образованию связей с невирусными веществами и, поэтому, необходимо осуществление некоторой предварительной очистки на живом инфекционном вирусе, поскольку инактивация до очистки может вызвать образование большого количества необратимых химических мостиковых связей между вирусными белками и примесями, которые наносят ущерб эффективности проведения операций очистки и качеству продукта. По этой причине, согласно прототипу живые инфекционные вирусы сначала, по крайней мере, частично очищают, например, посредством зонального ультрацентрифугирования, и затем инактивируют (патент США 6048537). Стадия инактивации обработкой формалином была подтверждена устоявшимися аналитическими методами.
В дополнение к обработке формалином, для интеграции в производственный процесс предусматривалась инактивация ультрафиолетовыми лучами. Использование инактивации облучением ультрафиолетовыми лучами для человеческих вакцин было продемонстрировано ранее для безоболочечного и имеющего оболочку вируса (патент США 2006/0270017). Поскольку вирусный геном более чувствителен к УФ-поражению, чем вирусные поверхностные антигены, то УФ-инактивация, как было показано, почти не оказывает негативного действия на биохимические характеристики или иммуногенность продукта. Мишенями для УФ-инактивации являются, в основном, нуклеиновые кислоты, в противоположность белкам, которые являются мишенями формалина.
Путем комбинирования инактиваций обработкой формалина и УФ-облучением, исследователи пытались преодолеть ограничения, сопутствующие раздельному использованию УФ-инактивации или инактивации обработкой формалином, соответственно, при инактивировании, в частности, семейств упругих (resilient) вирусов.
Альтернативно, многие производители используют технологическую операцию, базирующуюся на обработке детергентом, как для инактивации живого вируса, так и для модификации вируса. Эти способы с использованием обработки детергентом разрушают липидную оболочку вирусов гриппа, что приводит к получению либо расщепленного (частично разрушенного), либо субъединичного (полностью разрушенного) антигена, используемого для приготовления вакцины. Обработка детергентом часто снижает реакционную способность вирусного антигена, и тем самым снижает проявление нежелательных побочных действий во время вакцинации. Вирус, обработанный детергентом, может быть дополнительно инактивирован, например, обработкой формалином. Примеры этих способов можно найти в патенте США 6048573, патенте США 4522809, и WO 02/09702. Недостаток этого подхода заключается в том, что вирус подвергается различным стадиям очистки до стадии разрушения и, поэтому, производственному персоналу приходится манипулировать с живым инфекционным вирусом на нескольких стадиях. Это особенно важно, когда получают вакцину против, главным образом, вирулентных форм гриппа, таких как штаммы H5N1.
Краткое изложение сущности изобретения
Целью настоящего изобретения является разработка способа получения противовирусных вакцин с меньшим числом стадий, требующих манипулирования с инфекционным материалом, при продуцировании вирусных антигенов с пониженной реакционной способностью.
Поэтому, настоящее изобретение предлагает способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, включающий
а) инокуляцию клеток инфекционным вирусом в жидкости,
b) репродукцию указанного вируса в указанных клетках,
c) сбор указанного репродуцированного вируса в супернатанте клеточной культуры,
d) инактивацию указанного собранного вируса, и
e) обработку указанного инактивированного вируса детергентом, приводящий к получению препарата, содержащего вирусные антигены.
Во втором аспекте предлагается способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, включающий
a) получение жидкости, содержащей инфекционный вирус,
b) полную инактивацию указанного собранного вируса,
c) обработку указанного инактивированного вируса детергентом, и
d) очистку указанного инактивированного вируса, приводящую к получению препарата, содержащего вирусные антигены.
Другие аспекты данного изобретения предусматривают вакцинные препараты, полученные из вирусных антигенов, продуцированных согласно способам данного изобретения.
В другом аспекте настоящего изобретения, предлагается способ повышения резистентности к вирусной инфекции у субъекта, включающий получение препарата, содержащего вирусные антигены, и введение указанного препарата субъекту.
Краткое описание чертежей
Фиг.1a - схема производственного процесса заявляемого способа от сбора вируса после репродуцирования до сбора “урожая” инактивированного вируса.
Фиг.1b - продолжение производственного процесса заявляемого способа от сбора “урожая” инактивированного вируса инактивированного сбора до получения моновалентного исходного препарата.
Подробное описание изобретения
Предлагается способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, включающий
а) инокуляцию клеток инфекционным вирусом в жидкости,
b) репродукцию указанного вируса в указанных клетках,
c) сбор указанного репродуцированного вируса в супернатанте клеточной культуры,
d) полную инактивацию указанного собранного вируса, и
e) обработку указанного инактивированного вируса детергентом, приводящую к получению препарата, содержащего вирусные антигены.
Главным в этом способе является то, что удается уменьшить число стадий, осуществляемых на активном вирусе, и, соответственно, вирус инактивируют после первичного сбора “урожая” до обработки детергентом и/или необязательных стадий очистки.
Термин "вирусный антиген" согласно данному изобретению представляет собой вирус или часть вируса, который может индуцировать у субъекта иммунную реакцию на указанный антиген. Абсолютного успеха, в смысле достижения у субъекта полной иммунизации, не требуется, однако, должен быть очевиден успех в смысле повышения иммунной защиты или иммунной реакции в ответ на введение указанного вируса, что снижает риск развития заболевания, связанного с указанным вирусом, после (его) последующего воздействия. Такой вирусный антиген может, например, представлять собой полный инактивированный вирус, расщепленный вирус, модифицированный вирус, вирусные белки, в частности, поверхностные белки, подобные гемагглютинину или нейраминидазе. Термин "вакцина" представляет собой препарат указанного вирусного антигена в конкретной форме для введения, такой как, препарат для инъекции, назального или трансдермального введения. "Очистка" согласно данному изобретению относится к стадиям удаления невирусных составляющих жидкости, содержащей “урожай” (репродуцированного вируса). Содержащая “урожай” жидкость, получаемая после стадии сбора, представляет собой предпочтительно осветвленный супернатант, из которого твердые или крупные частицы примесей, например, оставшиеся интактные клетки или дебрис, содержащий продукты распада инфицированных клеток, которые разрушаются во время репродуцирования вируса, удалены осаждением, например, посредством центрифугирования. Поэтому, "сбор" относится к любым стадиям, которые дают полноценные инфекционные вирусы в жидкости, в частности, прозрачную жидкость. Помимо удаления дебриса, содержащего продукты распада клеток, стадия сбора может также включать стадии для удаления других твердых составляющих среды или субстрата для культивирования клеток, например, любой тип субстрата, на котором культивируют клетки. Репродуцированный полноценный вирус выделяется в указанный супернатант клеточной культуры, из которого его можно собрать. Поэтому, в конкретном варианте данного изобретения, стадия сбора репродуцированного вируса включает отделение вируса от клеток и/или продуктов распада указанных клеток после инфицирования. Этому разделению может способствовать, например, центрифугирование с низкими скоростями в диапазоне динамических перегрузок от около 2000 g до 3000 g, вплоть 5000 g, 10000 g, 15000 g или 20000 g, которое позволяет отделить видимые частицы от жидкости. Альтернативно, разделение может быть осуществлено фильтрацией. В конкретных предпочтительных вариантах, указанная жидкость, по существу, не содержит аллантоина, коллагена и/или альбумина, такого как овальбумин, например, благодаря выбору клеток, используемых для репродуцирования вируса, например, клеточных культур, относящихся к млекопитающим, птицам или насекомым, вместо яйцеклеток эмбрионов. В конкретных вариантах данного изобретения, для репродуцирования вируса используют клетки почек африканской зеленой мартышки (VERO).
После стадии сбора вирус инактивируют любым известным способом для инактивации вируса, например, способом, раскрытым в публикации патента США 2006/0270017 A1, которая входит в настоящее описание в виде ссылки. В частности, инактивация может быть осуществлена обработкой формальдегидом и/или Уф-облучением, в одиночку или в комбинации. Используемый в этой заявке термин "полная инактивация" или "полностью инактивированный", при упоминании его в связи с вирусным препаратом, означает, что вирусный препарат не содержит бляшкообразующих единиц (pfu), определяемых при культивировании вирусного препарата на фибробластах куриных эмбрионов (CEF) или VERO клетках.
Одним из положительных результатов способов по данному изобретению является снижение числа стадий, которые осуществляют с участием среды инфекционного вируса, для чего требуется соблюдение особых мер безопасности. При современном уровне в данной области техники, считается необходимым осуществление стадии очистки после первичного сбора “урожая” (вируса) для удаления или снижения в значительной степени содержания невирусных белков или нуклеиновых кислот, которые могут взаимодействовать с вирусом с образованием межмолекулярных связей во время обработки формалином. Нанесение такого ущерба было преодолено настоящим изобретением, которое показало, что, в действительности, возможно и даже полезно проведение инактивации сразу после сбора вируса до его очистки. Для того, чтобы избежать протекания вышеупомянутой неблагоприятной реакции во время инактивации, вирус-содержащую жидкость, или ее невирусные составляющие, предпочтительно дополнительно не концентрируют или концентрируют на фактор ниже 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 или 2 во время или после стадии сбора. Предпочтительно концентрацию невирусного белка и/или ДНК нативного супернатанта из клеточной культуры сохраняют до стадии инактивации. В конкретных вариантах, концентрация цельного белка или невирусного белка в жидкости во время инактивации или после сбора вируса находится в диапазоне, выраженном в мкг/мл, таком как ниже 950 мкг/мл, 900 мкг/мл, 850 мкг/мл, 800 мкг/мл, 700 мкг/мл, 650 мкг/мл, 600 мкг/мл, 550 мкг/мл, 500 мкг/мл, 450 мкг/мл, 400 мкг/мл, 350 мкг/мл, 300 мкг/мл, 250 мкг/мл, 200 мкг/мл, 150 мкг/мл, 100 мкг/мл, 80 мкг/мл, 60 мкг/мл, 40 мкг/мл, 30 мкг/мл, 20 мкг/мл, 10 мкг/мл, 8 мкг/мл, 6 мкг/мл, 4 мкг/мл, 3 мкг/мл, 2 мкг/мл или ниже 1 мкг/мл.
Для инактивирования может быть выбрано любое количество формальдегида или любая доза ультрафиолетового облучения, которые будут эффективными для инактивации вируса, по одиночке, или в комбинации. В предпочтительном варианте настоящей заявки, снижение титра вируса вследствие инактивации вируса в образце составляет, по крайней мере, около 1×105, в более предпочтительном варианте, по крайней мере, около 1×107, в более предпочтительном варианте, по крайней мере, около 1×1010, и в наиболее предпочтительном варианте, по крайней мере, около 1×1014.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения, образец обрабатывают эффективной концентрацией формалина в течение периода времени от около 12 до около 96 часов. В более предпочтительных вариантах, образец обрабатывают эффективной концентрацией формалина в течение периода времени от около 24 до около 48 часов, и более предпочтительно на протяжении периода времени от около 24 до около 30 часов. В особенно предпочтительном варианте настоящего изобретения, образец обрабатывают эффективной концентрацией формалина на протяжении периода времени от около 24 до около 24,5 часов. Специалистам в области вакцин очевидно, что для осуществления полной инактивации, либо только обработкой формалином, либо в комбинации с воздействием УФ-лучей, для каждого конкретного штамма обрабатываемого вируса может потребоваться оптимизация параметров обработки, таких как концентрация формалина и время обработки. В дополнительном варианте, стадию обработки образца эффективной концентрацией формалина осуществляют при температуре в диапазоне от около 10 до около 40°C. В особенно предпочтительном варианте настоящей заявки, стадию обработки образца эффективной концентрацией формалина осуществляют при температуре около 32°C.
Предпочтительный вариант настоящего изобретения включает обработку образца эффективной концентрацией формалина, и эта эффективная концентрация формалина изменяется предпочтительно в диапазоне от около 0,01% до около 1% (мас./мас.), предпочтительно от около 0,01% до около 0,1%, более предпочтительно между около 0,025% и около 0,1%, что соответствует около 92 мг/л и около 368 мг/л формалина, соответственно, при использовании 37% раствора формалина для установления эффективной концентрации.
В настоящей заявке термин "УФ-излучение" означает ультрафиолетовое излучение, имеющее длины волн от 100 до 400 нм. Уф-излучение может быть выбрано из группы, состоящей из УФ C (диапазон длин волн от 100 до 280 нм), УФ B (280 до 320 нм) и УФ A (320 до 400 нм). Фотосенсибилизирующие средства, подобные фотосенсибилизаторам, которые встраивают в ДНК и активируются под воздействием Уф-излучения, например, псоралены, могут быть использованы для усиления инактивирующего действия ультрафиолетового излучения. В предпочтительном варианте настоящего изобретения, УФ-излучение представляет собой диапазон УФ С, имеющий длину волны от около 100 до около 280 нм. В более предпочтительном варианте настоящего изобретения, Уф-излучение имеет длину волны от около 240 до около 290 нм. В особенно предпочтительном варианте настоящего изобретения, около 85% или больше УФ-излучения имеют длину волны около 254 нм.
Уф-излучение может быть непрерывной формой ультрафиолетового излучения, например, при использовании ртутной лампы, или импульсной формой ультрафиолетового излучения, например, при использовании лазера монохроматического излучения. Требуемая интенсивность Уф-излучения может быть генерирована комбинированием двух или большего числа ламп. Предмет изобретения охватывает любую эффективную дозу ультрафиолетового излучения, т.е., любую дозу Уф-излучения, которая надежно и безопасно инактивирует заданный вирус, предпочтительно при комбинировании с обработкой формалином. Специалистам в области вакцин очевидно, что для осуществления полной инактивации, либо только воздействием Уф-лучей, либо в комбинации с обработкой формалином, для каждого конкретного штамма обрабатываемого вируса может потребоваться оптимизация параметров обработки, таких как длины волны и продолжительность действия Уф-излучения. Эффективная доза может зависеть от ряда факторов, которые общеизвестны в данной области, например, физические параметры Уф-инактивационных камер, такие как размер и диаметр лампы и камеры, расстояние между вирус-содержащей средой и источником Уф-излучения, светопоглощающие и светоотражающие характеристики материала, из которого изготовлена камера. Справедливо и то, что длина волны и интенсивность УФ-излучения в диапазоне С, а также время контакта, на протяжении которого вирус подвергается воздействию УФ-излучения, также являются определяющими при выборе эффективной дозы. Кроме того, на выбор эффективной дозы оказывает влияние вирус, сам по себе; среда, содержащая вирус, и их светопоглощающие характеристики. Предпочтительно, эффективной дозой является доза, достаточная для инактивирования, по крайней мере, 99,99% вируса, содержащегося в образце, более предпочтительно для инактивирования вируса до уровня, при котором в тесте с использованием клеточной культуры, относящейся к птицам или млекопитающим, активный вирус не детектируется, или он полностью инактивирован. В предпочтительном варианте, используя УФ-излучение в диапазоне С, образец, содержащий вирус, подвергают воздействию эффективной дозы в диапазоне от около 5 до около 200 мДж/см2. В предпочтительном варианте, эффективная доза находится в диапазоне в диапазоне от около 20 до около 100 мДж/см2, и в других предпочтительных вариантах, эффективная доза находится в диапазоне от около 40 до около 90 мДж/см2. В предпочтительном варианте, эффективная доза снижает первоначальный титр вируса в 1×105. При инактивации исходной вакцины в объеме, эффективная доза должна быть достаточной для устранения любого остаточного живого вируса, который может присутствовать после стадии химической инактивации (формалином). Как иллюстрировано в примерах, это может быть определено с помощью очень чувствительных тестов на инфективность с использованием клеточной среды, относящейся к млекопитающим, таким как тест с использованием культуры Vero клеток, описанный в Примере 1.3.
После инактивации, вирусные антигены очищают.Очистку предпочтительно осуществляют ультрацентрифугированием при динамических перегрузках, например, около 100000 g, а именно, по крайней мере, 50000 g, 60000 g, 70000 g, 80000 g, или 90000 g, или вплоть до 200000 g, 180000 g, 160000 g, 140000 g, 120000 g или 110000 g. Способ центрифугирования является общеизвестным в данной области и его используют в стандартном получении противовирусных вакцин, описанном, например, в патенте 6048537, который, поэтому, входит в настоящее описание в виде ссылки. Предпочтительно, ультрацентрифугирование осуществляют в градиенте плотности сахарозы, который устанавливается во время центрифугирования. В конкретных предпочтительных вариантах, градиент сахарозы получают, используя раствор сахарозы с концентрацией от около 42% до 55% (мас./мас.%) (или любой другой адекватный углевод или сахар, известный в данной области). Для ультрацентрифугирования может быть использована проточная центрифуга. Параметры для фракционирования после ультрацентрифугирования зависят от характеристик используемых штаммов вируса. Параметры для сбора фракций максимального пула оценивают и определяют индивидуально для каждого штамма вируса, и они находятся в диапазоне концентраций сахарозы от около 46-50% до 34-38%. Предпочтительно, невирусное вещество (например, на этой стадии полный инактивированный вирус) удаляют путем разделения по плотности. Фрагменты клеточной мембраны, включая липосомы и белки, каждый, имеют характерную плотность. Вирусы, которые имеют характерный состав белков, нуклеиновых кислот и в случае вирусов, имеющих оболочку, также мембрану, могут быть очищены от невирусного вещества, используя их различие в характерной плотности. В частности, цельные вирусные антигены могут быть очищены от частей неполноценного вируса, или наоборот.
Эта стадия очищения инактивированного вируса включает, по крайней мере, частично отделение растворимого невирусного вещества от вируса. В частности, растворимое невирусное вещество включает клеточные белки и клеточные нуклеиновые кислоты из клеток исходной клеточной среды или культуры. Количество невирусного вещества, включая части неполноценного вируса, предпочтительно снижается во время очистки на, по крайней мере, 20%, предпочтительно на 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или, по крайней мере, 90%.
В конкретных предпочтительных вариантах, собранную жидкость обрабатывают нуклеазой для того, чтобы деградировать нуклеиновые кислоты клеток-хозяев. Такой нуклеазой может быть, например, бензоназа.
В дополнительном варианте настоящего изобретения, клетки, используемые для культивирования клеток и репродуцирования вируса, могут представлять собой эмбриональные клетки или любую культивируемую клеточную линию, подходящие для продуцирования вируса. Примеры клеток, которые могут быть использованы, включают клетки, относящиеся к млекопитающим (например, клетки CHO, BHK, VERO, HELA, или perC6), клетки, относящиеся к птицам (например, куриные эмбриональные фибробласты, или стабильные клеточные линии от птиц) и клетки, относящиеся к насекомым (например, клетки Sf9). В конкретных предпочтительных вариантах, клетки находятся в форме клеточной культуры. Заявляемый способ позволяет обеспечить эффективную очистку, включая расщепление материала, несмотря на потенциал сшивающей способности предшествующих инактивационных реагентов. В отличие от вируса, культивированного на куриных эмбрионах, вирус, культивированный на клеточной культуре, обладает более высокой исходной чистотой и свободен от альбумина и коллагенов, что является важным преимуществом для очистки обработанного формалином сбора “урожая”. Новаторский состав полученного продукта свободен от хлопьеобразования без необходимости присутствия стабилизаторов, таких как токоферол или laureth-9.
В настоящем изобретении, вирусы, подлежащие инактивации, выбирают из имеющих оболочку ДНК- или РНК-содержащих вирусов, с геномами, представленными одноцепочечной или двухцепочечной ДНК, смысловых или антисмысловых, непрерывных или сегментированных. В предпочтительных вариантах данного изобретения, вирусы выбирают из группы, состоящей из имеющих оболочку (каспидных) вирусов, включая флавивирусы, тогавирусы, ретровирусы, коронавирусы, филовирусы, рабдовирусы, буньявирусы, ортомиксовирусы, парамиксовирусы, ареновирусы, гепаднавирусы, вирусы герпеса, и поксвирусы. В других предпочтительных вариантах, вирусы представляют собой флавивирусы, коронавирусы, ортомиксовирусы, или тогавирусы. Особенно предпочтительными являются имеющие оболочку вирусы, такие как вирусы гриппа, включая штаммы гриппа A, B или C, вирус Западного Нила, и вирус реки Росс (RRV.) В других предпочтительных вариантах данного изобретения, вирусы выбирают из группы имеющих оболочку РНК-содержащих вирусов, включая, флавивирусы, тогавирусы, ретровирусы, коронавирусы, филовирусы, рабдовирусы, буньявирусы, ортомиксовирусы, парамиксовирусы, и ареновирусы. В одном особенно предпочтительном варианте, вирус выбран из ортомиксовирусов, например, штамма вируса гриппа: штаммы вируса гриппа могут содержать изменяющиеся комбинации поверхностных белков, гемагглютинина и нейраминидазы. В другом особенно предпочтительном примере, вирус выбран из тогавирусов, например, альфавирусов, такого как RRV. Другой предпочтительной группой вирусов для использования в виде исходного раствора вирусов, являются коронавирусы, включая вирус, связанный с тяжелым острым респираторным синдромом (SARS). Другой группой предпочтительных вирусов являются флавивирусы, включая японский энцефалит, клещевой энцефалит (TBE), вирус тропической лихорадки, вирус желтой лихорадки, вирус Западного Нила и вирус геморрагической лихорадки. Другой предпочтительной группой вирусов являются поксвирусы, включая ортопоксвирусы (такие как вирус вакцинии или модифицированный вирус вакцинии Ankara), и авипоксвирусы.
В дополнительных вариантах, очищенный вирус подвергают дополнительной обработке. После очистки, дополнительные стадии могут включать разбавление очищенного вируса, в частности, после ультрацентрифугирования в градиенте сахарозы, для разбавления вязкой фракции максимального пула, которая, как предполагают, содержит около 40% сахарозы. Очищенный вирус может быть гомогенизирован, дополнительно обработан нуклеазой, подвергнут фильтрованию под давлением и/или ультра/диафильтрации.
В вариантах данного изобретения, вирус модифицируют обработкой детергентом с получением вакцины на основе модифицированного цельного вируса или расщепленного инактивированного вируса. Модификацию липидной оболочки вируса осуществляют путем солюбилизации с помощью детергента, такого как Тритон X100 при концентрации, подходящей для дестабилизации или дезинтеграции вируса, в частности, мембраны липидной оболочки вируса. Обработка детергентом может, по крайней мере, частично удалить мембрану указанного вируса. Предпочтительно, избыточный детергент удаляют, например, диафильтрацией или хроматографическими способами. Детергенты для использования на стадии обработки детергентом включают ионогенные детергенты (катионного, анионного, цвиттер-ионного типа) или неионогенные детергенты. Подходящие детергенты включают группу детергентов типа Tween (например, Твин 80), и группу детергентов типа Triton (например, Тритон 100).
Необязательно, препарат, содержащий вирусный антиген, дополнительно стабилизируют дополнительной обработкой формальдегидом или добавлением стабилизатора, как например, путем использования детергентов, раскрытых в WO 02/097072 A2, содержание которой входит в настоящее описание в виде ссылки. Такие детергенты представляют собой, например, детергенты, подходящие для стабилизации 11A белка, такие как Твин 80, Тритон X100, дезоксихолат, laureth-9 и токоферол. Считают, что поверхностные белки остаются в солюбилизированном состоянии благодаря многослойным мицеллам составляющих мембраны и детергентам.
В конкретных предпочтительных вариантах, вирус подвергают дополнительной обработке, превращая его в расщепленный вирус, и эта обработка включает любую одну из нижеприведенных стадий разбавления, гомогенизации, обработки нуклеазой, фильтрации под давлением, ультра/диафильтрации, солюбилизации, диафильтрации, стабилизации путем обработки формальдегидом, разбавления, ультра/диафильтрации, добавления стабилизатора (детергента), второй гомогенизации и стерильной фильтрации.
В других конкретных предпочтительных вариантах, вирус подвергают дополнительной обработке, превращая в препарат, содержащий модифицированный вирус, и эта обработка включает любую одну из нижеследующих стадий разбавления, гомогенизации, обработки нуклеазой, фильтрацией под давлением, ультра/диафильтрации, солюбилизации, обработки детергентом, добавления стабилизатора, второй гомогенизации и стерильной фильтрации. В частности, стабилизацию детергентом осуществляют, вводя детергент в мембрану вируса в случае имеющего оболочку вируса, для повышения стабильности полноценного вируса, который тем самым модифицируют.
В дополнительных вариантах, вирус подвергают обработке с получением субъединичной вакцины, включая выделение отдельных вирусных субъединиц или вирусных белков, в частности, поверхностных белков, подобных гемагглютинину и нейраминидазе. Выделение может, например, осуществляться методами аффинной очистки и/или хроматографическими методами, таким как ионообменная хроматография.
Неожиданно, способ по данному изобретению оказался пригодным для производства в промышленном масштабе вакцин, содержащих вирусные антигены. Поэтому, предпочтительно инактивацию или любую другую стадию, такую как инокуляция, репродуцирование, сбор или очистка, осуществляют при использовании жидкости, содержащей вирус или вирусный антиген, в исходных количествах или количествах, отвечающих выходу продукции, равных, по крайней мере, 0,5 л, 1 л, 2 л, 3 л, 4 л, 5 л, 6 л, 7 л, 8 л, 9 л, 10 л, 12 л, 14 л, 16 л, 18 л, 20 л, 25 л, 30 л, 35 л, 40 л, 60 л, 80 л, 100 л, 120 л, 140 л, 160 л, 180 л, 200 л жидкости, содержащей вирус или вирусный антиген.
В дополнительном аспекте, данное изобретение также предлагает способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, включающий
а) получение жидкости, содержащей инфекционный вирус,
b) полное инактивирование указанного собранного вируса,
c) обработку указанного инактивированного вируса детергентом,
d) очистку указанного инактивированного вируса, что приводит к получению препарата, содержащего вирусные антигены.
Конечно, можно также использовать содержащие инфекционный вирус жидкости, как таковые, которые могут представлять собой любой клеточный супернатант, описанный выше, для инактивации, обработки детергентом и очистки. Предпочтительно, указанную жидкость, содержащую инфекционный вирус, получают из клеточной культуры.
В конкретных предпочтительных вариантах, вирусные антигены, в частности, антигены расщепленного вируса или модифицированного вируса, стабилизируют добавлением эффективного количества Твина 80, в частности, предпочтительно при концентрации около 0,125%, например, выше 0,01%, 0,05% или 0,4%, и ниже 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3% или 0,2%. Поэтому, настоящее изобретение предлагает в дополнительном аспекте способ стабилизации вирусных антигенов добавлением Твина 80. Согласно настоящему изобретению было обнаружено, что Твин 80, в качестве детергента, является менее эффективным для солюбилизации вирусных мембран, чем Тритон Х100, но значительно более биосовместим и, поэтому, может присутствовать в вакцинном препарате. Эффективное количество для стабилизации вирусных антигенов предпочтительно ниже, чем количество, необходимое для солюбилизации вирусных мембран, как в способе солюбилизации расщепленного вируса, использующем высокие концентрации Тритона Х100, например, 0,5%. В других вариантах, вирусные антигены свободны от стабилизаторов. В конкретных вариантах, предлагается получение расщепленной инактивированной вакцины способом, в котором вирусный ”урожай” полностью инактивируют до расщепления и очистки. Неожиданно оказалось, что способ инактивации обработкой формалином и Уф-обработкой не мешает последующей обработке детергентом и способам очистки.
В дополнительных вариантах, предлагается вакцина или фармацевтическая композиция, которая содержит один или несколько вирусных антигенов. Такая фармацевтическая композиция может, кроме того, содержать фармацевтический носитель и/или вспомогательное вещество. Такими фармацевтические носителями являются, например, стабилизирующие соли, эмульгирующие средства, солюбилизаторы или средства, регулирующие осмотическое давление; суспендирующие средства, загустители, окислительно-восстановительные компоненты, поддерживающие физиологический окислительно-восстановительный потенциал. Предпочтительные вспомогательные вещества включают соли алюминия, микроэмульсии, липидные частицы, и/или олигонуклеотиды, используемые для повышения иммунной реакции. Дополнительным аспектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция или препарат в виде вакцины, содержащей антиген. Вакцина может быть использована, например, для инъекции как профилактическое средство против заболевания, связанного с вирусом. В конкретных предпочтительных вариантах, композиция или вакцина содержит более чем один антиген, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, в частности, различных вирусных штаммов, подтипов или типов, таких как грипп типа A и грипп типа B, в частности, выбранных из одного или нескольких из человеческих подтипов H1N1, H2N2, H3N2, H5N1, H7N7, H1N2, H9N2, H7N2, H7N3, H10N7, подтипов H1N1, H1N2, H3N1 и H3N2 свиного гриппа, подтипов H7N7, H3N8 собачьего или лошадиного гриппа или подтипов H5N1, H7N2, H1N7, H7N3, H13N6, H5N9, H11N6, H3N8, H9N2, H5N2, H4N8, H10N7, H2N2, H8N4, H14N5, H6N5, H12N5 птичьего гриппа.
Подходящие вспомогательные вещества могут быть выбраны из минеральных гелей, гидроксида алюминия, поверхностно-активных веществ, лизолецитина, плюроникполиолов, полианионов или масляных эмульсий, таких как вода-в-масле или масло-в-воде, или их комбинаций. Конечно, выбор вспомогательного вещества зависит от использования по назначению. Например, токсичность может зависеть от предполагаемого предметного организма и может варьироваться в диапазоне от отсутствия токсичности до высокой токсичности.
Другой предпочтительный вариант композиции или вакцины по данному изобретению дополнительно включает буферные вещества. Буферные вещества могут быть подобраны специалистом в данной области так, чтобы состояние раствора композиции по данному изобретению отвечало физиологическому. Характеристики, подобные pH и ионной силе, а также содержание ионов, могут быть выбраны, по желанию.
Дополнительная предпочтительная композиция или вакцина по данному изобретению содержит фармацевтически приемлемый носитель.
Термин "носитель" относится к разбавителю, например, вода, физиологический раствор, наполнитель, или среде-наполнителю, с которым можно вводить композицию. В случае твердой композиции, носители для фармацевтических композиций могут включать связующее, такое как микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон (поливидон или повидон), трагакантовая камедь, желатин, крахмал, лактоза или моногидрат лактозы; дезинтегрирующее средство, такое как альгиновая кислота, кукурузный крахмал и т.п.; смазку или поверхностно-активное вещество, такое как стеарат магния или лаурилсульфат натрия; скользящее средство, такое как коллоидный диоксид кремния; подслащивающее вещество, такое как сахароза или сахарин.
Кроме того, предлагается способ повышения резистентности к вирусной инфекции у субъекта, включающий получение препарата, содержащего один или несколько различных вирусных антигенов, и введение субъекту указанного препарата, содержащего один или несколько различных вирусных антигенов, описанных выше. Препарат представляет собой предпочтительно вакцину. Рассматривается также разработка вирусных антигенов, получаемых согласно данному изобретению, в качестве вакцины или для повышения резистентности к вирусной инфекции у субъекта путем введения указанных вирусных антигенов.
Примеры
Пример 1: Инактивация инфекционного вируса
Три различных штамма гриппа, два A-штамма Hiroshima (HR, H3N2), New Caledonia (NC, H1N1) и B-штамм, Malaysia (MA), продуцируют в культурах Vero клеток. После репродукции вируса “урожай” инфекционного вируса инактивируют до очистки, как представлено на схеме производственного процесса Фиг.1а.
1.1. Инактивация формалином
Первую стадию инактивации обработкой формалином осуществляют на бесклеточном, инфекционном моновалентном вирусном “урожае” т.е., “урожае” биореактора, после осветления посредством центрифугированием. После сбора при температуре в диапазоне от 30 до 34°C, моновалентный вирусный “урожай” обрабатывают бензоназой при концентрации от около 0,9 до около 1,1 Е/мл при температуре от 30 до 34°C в течение периода времени от 4 до 8 часов. Затем его обрабатывают формалином с концентрацией=92 мг/л в течение периода времени от 24 до 24,5 часов при температуре 32+/-2°C.
1.2. УФ-Инактивация
Ряд инактивационных экспериментов с формалин-инактивированными вирусами осуществляют, используя инактивационную камеру с ультрафиолетовой лампой мощности 65в и камеру для тонкослойной инактивации. Хотя полная инактивация моновалентного вирусного “урожая” может быть достигнута при использовании скоростей потока 100 литров в час в течение трех циклов, эта установка не позволяла провести измерение УФ-сигнала в режиме онлайн. Культурная среда Vero клеток, используемая для продуцирования вируса гриппа, содержит различные органические соединения, ответственные за абсорбцию УФ-сигнала. Поэтому, систему снабжают лампой мощности 110в, что позволяет осуществлять мониторинг контроль УФ-сигнала во время обработки моновалентного вирусного “урожая”.
Обработанный формалином “урожай” моновалентного вируса гриппа Panama используют в качестве модельного субстрата для инактивации. Для непрерывной инактивации с использованием техники тонкослойной УФ-инактивации используют WEDECO VISA систему (Германия), снабженную VISA лампой (110 в). Камера для тонкослойной УФ-инактивации представляет собой устройство из нержавеющей стали 1.4435 с кварцевой трубкой диаметром 30 мм. Калиброванный УФ-датчик позволяет осуществлять контроль за УФ-сигналом в режиме онлайн. Камера для тонкослойной УФ-инактивации функционирует при скорости потока 240+/-10 литров в час при температуре окружающей среды. Режим скорости подачи потока контролируют калиброванным расходометром. Моновалентный “урожай” подвергают воздействию 10 УФ-циклов. После каждого цикла, 20 литров УФ-обработанного моновалентного “урожая” удаляют и дополнительно очищают очисткой в градиенте сахарозы, используя ультрацентрифугирование в непрерывном потоке.
1.3. Испытание на безопасность
Обычный тест на безопасность с использованием Vero клеток является весьма строгим качественный тест на остаточную инфективность инактивированных штаммов гриппа. Данное испытание применимо также и для других вирусов. Моновалентный исходный продукт, т.е., очищенный вирусный антиген после центрифугирования в градиенте сахарозы и ультра-диафильтрации добавляют в 5 матрасов Ру (4 мл/матрас). После инкубирования в течение 7 дней при 32°C в культурной среде Vero клеток, клеточные культуры собирают, объединяют и добавляют в 5 матрасов Ру (10 мл/матрас). После еще одной стадии инкубации в течение 7 дней при 32°C, клеточные культуры собирают, объединяют и тестируют на гемагглютинин (11A).
11A-тест основан на том факте, что вирусы гриппа могут связывать эритроциты, используя свой поверхностный белок, гемагглютинин. Тест осуществляют в стерильной среде. Суспензия вирусов гриппа с установленным титром 11A служит в качестве позитивного контроля и 0,9% раствор NaCl служит в качестве негативного контроля. 50 мкл 1:2 разведения образца, подлежащего испытанию, в 0,9% NaCl, добавляют в одну лунку 96-луночного планшета. В каждую лунку добавляют 50 мкл раствора, содержащего куриные эритроциты. Впоследствии, планшеты инкубируют в течение периода времени от 30 до 45 минут при комнатной температуре. Затем визуально определяют гемагглютинин, при этом, если пять лунок, содержащих один и тот же образец, не показывают никакого наличия гемагглютинина, считают, что образец прошел 11A-тест.
Пример 2: Очистка ультрацентрифугированием
Во время очистки вирусного антигена гриппа, моновалентный “урожай” (MVH) концентрируют центрифугированием. Метод центрифугирования в непрерывном потоке может быть применен для получения противовирусной вакцины, приготовленной культивированием вируса на культуре Vero клеток, метод базируется на использовании градиента сахарозы, образованном, используя водный раствор сахарозы. Используемая модель центрифуги снабжена оборудованием для осуществления предварительного осветления. Мелкомасштабные эксперименты с градиентом плотности, образованным, используя приблизительно 42% и 55% (мас./мас.) раствор сахарозы в 20 мМ Трис-буфере, осуществляют в различных условиях центрифугирования. Кроме того, ультрацентрифугирование без оборудования для предварительного осветления, но с повышенными динамическими перегрузками, как оказалось, является ценным инструментом для улучшения выхода.
“Урожаи” моновалентного вируса гриппа (MVH) используют для сравнительных исследований. MVH очищают ультрацентрифугированием в непрерывном потоке с помощью лабораторной центрифуги модель RK-6 при 35000 оборотов в минуту.
Пример 3: Очистка/Обработка
В качестве кандидата вакцины против гриппа, три различных штамма гриппа очищают и собирают ультрацентрифугированием, как описано в примере 2. Выходы антигенов различны в максимальных пулах. Штамм New Caledonia гриппа имеет наименьший выход антигена, за которым следует Hiroshima и, наконец, Malaysia. Содержание белка оказалось наибольшим в Malaysia и наименьшим в Hiroshima. Отношения SRD (анализ методом одномерной радиальной иммунодиффузии (11A-количественное определение)) к общему белку были соизмеримыми для максимальных пулов от Malaysia и New Caledonia, но более высокими для Hiroshima (Таблица 1).
Таблица 1 | |||
Аналитические результаты максимальных пулов | |||
Штамм гриппа | HR05/61 Hiroshima |
MA04/61 Malaysia |
NC99/51 New Caledonia |
Количество (мл (г)) | 840,4 (1000) | 420,2 (500,1) | 420,2 (500) |
SRD (мкг/мл) | 246,2 | 426,6 | 194,9 |
Конц. белка (мкг/мл) согласно Bradford | 487 | 1495 | 764 |
Отношение SRD/белок | 0,51 | 0,28 | 0,26 |
Конц. Vero белка (мкг/мл) согласно ELISA | 6,2 | 19,7 | 18,9 |
Дополнительную обработку проводят в соответствии с нижеследующим общим представлением:
3.1. Разбавление максимальных пулов
Максимальные пулы разбавляют в 3 раза TBS-буфером для уменьшения концентрации сахарозы и тем самым снижения вязкости.
3.2. Первая гомогенизация максимального пула
Разбавленный максимальный пул подвергают обработке в гомогенизаторе высокого давления модели "NS 1001L Panda" (Niro Soavi S.p.A.). Суспензию вируса пропускают через гомогенизатор 3 раза при давлении 800 бар. Это давление достаточно для улучшения проведения последующих стадий обработки тем, что разрушает агрегаты вируса.
3.3. Добавление бензоназы
Бензоназу, рекомбинантную нуклеазу, продуцированную в E.coli, добавляют в суспензию вируса при конечной концентрации 3Е/мл для деградации ДНК клеточной культуры.
3.4. Фильтрация под давлением
После добавления бензоназы, осуществляют фильтрацию под давлением, используя 0,22 мкм ультратонкий фильтр, для поддержания суспензии вируса в состоянии, свободном от побочных организмов, таких как бактерии, во время последующего периода инкубации. Инкубацию проводят при 32°C на протяжении ночи.
3.5. Ультра/Диафильтрация
После завершения инкубации с бензоназой, осуществляют ультра/диафильтрацию, используя ультрафильтрационную мембрану (Pall) с каналами для суспендированных (микро)частиц массой 30 кДа, при общей площади фильтрации 0,1 м2 при проведении эксперимента в малом масштабе и 0,5 м2 в случае пилотного масштаба. Ультраретентат диафильтруют, используя TBS (физиологический раствор, забуференный Трис) +0,008% Тритон X100 (мас./мас.) в 10-кратном объеме относительно ретентата.
3.6. Добавление Тритона X100 для солюбилизации и инкубации.
Для расщепления вируса, Тритон X100 добавляют до конечной концентрации 0,5% (мас./мас.) и инкубируют на протяжении ночи при комнатной температуре.
3.7. Диафильтрация II
Для удаления высокой концентрации Тритона X100, осуществляют диафильтрацию, используя ультрафильтрационную мембрану (Pall) с каналами для суспендированных (микро)частиц массой 30 кДа. Ультраретентат диафильтруют, используя TBS (физиологический раствор, забуференный Трис) в 15-кратном объеме относительно ретентата.
3.8. Добавление формальдегида и инкубация
Формалин добавляют в ультра/диаретентат до конечной концентрации 0,025% для стабилизации антигена. Инкубацию осуществляют в течение 18-24 часов при комнатной температуре. Формалин представляет собой насыщенный водный раствор ~36-37% газа-формальдегида.
3.9. Определение концентрации Тритона X100 методом ВЭЖХ
Последующие стадии обработки состоят из стадии разбавления и дополнительной ультра/диафильтрации. Чтобы сделать возможным разбавление UDR (ультрадиаретентат) ниже CMC для Тритона X100 (TX 100, ~0,015%, 250 мкМ, в водном растворе), для определения концентрации TX 100 вводят стадию аналитического определения TX 100. Фактор разбавления зависит от этой концентрации TX 100.
3.10. Разбавление UDR ниже критической концентрации мицеллообразования для TX 100
Ультра/Диаретентат, содержащий остаточное количество TX 100 около 0,1-0,2% (определенное методом ВЭЖХ), разбавляют TBS до конечной концентрации TX100 0,008%, концентрация несомненно ниже CMC (Критическая концентрация мицеллообразования).
3.11. Ультра/Диафильтрация III
Ультра/диафильтрацию осуществляют, используя идентичную ультрафильтрационную мембрану (Pall) с каналами для суспендированных (микро)частиц массой 30 кДа. Ультраретентат диафильтруют, используя TBS (физиологический раствор, забуференный Трис)+5 VC TBS+0,008% Тритон X100 (мас./мас.) в 5-кратном объеме относительно ретентата.
3.12. Стабилизация детергентом
После снижения концентрации TX 100 до заданного уровня, в суспензию добавляют Твин 80 до конечной концентрации 0,125%±0,025% для дальнейшей стабилизации вирусного антигена. Это позволяет избежать повторной агрегации антигена вследствие слишком низкой концентрации TX 100.
3.13. Вторая гомогенизация
Вторую стадию гомогенизации при высоком давлении осуществляют, чтобы сохранить потерю в антигене низкой на стадии фильтрации с использованием 0,22 мкм ультратонкого фильтра. Используют такой же гомогенизатор с такими же установочными параметрами, как описан в разделе 3.2.
3.14. Стерильная фильтрация
После 2-ой стадии гомогенизации осуществляют стерильную фильтрацию, используя 0,22 мкм ультратонкие фильтры. Стерильный фильтрованный исходный продукт называют моновалентный исходный продукт (MVB).
Пример 4: Результаты
Общее содержание SRD в MVB составляет 73 мг. Уровни общего Vero белка снизились от 5,2 мг до 1 мг, снижение 80,8%. Общее содержание Vero ДНК снизилось до 0,28 мкг в MVB. Содержание общего белка снизилось от 487 мг до 212 мг, что составляет снижение 56,5%.
Аналогичные результаты получают для Malaysia штамма: Содержание общего Vero белка может быть снижено от 8,3 мг до 2,4 мг, что составляет снижение приблизительно 67,5% от его содержания в максимальном пуле до MVB, т.е., после дополнительной обработки после очистки. Содержание Vero ДНК в MVB составляет 1,8 мкг. Снижение содержания общего белка во время очистки составляет 58,6%, а именно, от 748 мг до 310 мг.
Для New Caledonia штамма в конце очистки, содержание общего Vero белка может быть снижено от 8 мг в максимальном пуле до 2 мг в MVB, что составляет снижение 75%. Содержание общей Vero ДНК в MVB составляет 0,27 мкг. Содержание общего белка снизилось от 382 мг в максимальном пуле до 162 мг в MVB, что составляет снижение 57,6%.
Способ очистки является очень согласованным и надежным. Получение высокоочищенного вирусного препарата является результатом осуществления эффективного снижения в его составе содержания белка и ДНК клеток-хозяев, а также химикатов, задействованных в способе, подобных бензоназе, сахарозе, формальдегиду и Тритону X100, а также отсутствия эндотоксинов. Все препараты являются стерильными после их получения. Отношения SRD к белку во всех трех MVB соответствуют спецификации данного типа препаратов.
Claims (21)
1. Способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, включающий
a) инокуляцию клеток инфекционным вирусом, где указанные клетки выбраны из группы, состоящей из клеток млекопитающих, птиц и насекомых,
b) репродукцию указанного вируса в указанной культуре клеток,
c) сбор супернатанта, содержащего указанный вирус, репродуцированный в указанной культуре клеток,
d) полную инактивацию указанного вируса, собранного из указанной культуры клеток, и
e) обработку указанного вируса детергентом в условиях, эффективных для расщепления вируса, приводящую к получению препарата, содержащего вирусные антигены, где вирус очищают после стадии инактивации.
a) инокуляцию клеток инфекционным вирусом, где указанные клетки выбраны из группы, состоящей из клеток млекопитающих, птиц и насекомых,
b) репродукцию указанного вируса в указанной культуре клеток,
c) сбор супернатанта, содержащего указанный вирус, репродуцированный в указанной культуре клеток,
d) полную инактивацию указанного вируса, собранного из указанной культуры клеток, и
e) обработку указанного вируса детергентом в условиях, эффективных для расщепления вируса, приводящую к получению препарата, содержащего вирусные антигены, где вирус очищают после стадии инактивации.
2. Способ по п.1, где стадия сбора указанного репродуцированного вируса включает отделение вируса от клеток и/или продуктов распада культуры указанных клеток после инфицирования.
3. Способ по п.1, где указанную инактивацию осуществляют путем добавления формальдегида.
4. Способ по п.1, где указанную инактивацию осуществляют путем облучения ультрафиолетовыми лучами.
5. Способ по п.1, где указанный вирус, репродуцируемый в культуре клеток, выделяется в указанный супернатант.
6. Способ по п.1, где после сбора собранный супернатант обрабатывают нуклеазой.
7. Способ по п.6, где указанная нуклеаза представляет собой бензоназу.
8. Способ по п.1, где указанные клетки находятся в форме клеточной культуры во время репродукции указанного вируса.
9. Способ по п.1, где указанные клетки являются эпителиальными клетками.
10. Способ по п.8, где указанные клетки представляют собой клетки Vero.
11. Способ по п.1, где указанный вирус представляет собой вирус, имеющий оболочку.
12. Способ по п.11, где указанный вирус представляет собой ортомиксовирус.
13. Способ по п.12, где указанный вирус представляет собой вирус гриппа.
14. Способ по п.1, где концентрация невирусного белка во время указанной инактивации ниже 350 мкг/мл.
15. Способ по п.1, где указанное получение осуществляют в количествах промышленного масштаба, равных по меньшей мере 0,5 л.
16. Способ по п.15, где указанную инактивацию осуществляют на вируссодержащей жидкости в объеме, по крайней мере, 1 л.
17. Способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, включающий
a) получение супернатанта из культуры клеток, содержащей инфекционный вирус,
b) инактивацию указанного вируса, полученного на стадии (а),
c) обработку указанного вируса детергентом в условиях, эффективных для расщепления вируса, и
d) очистку указанного расщепленного вируса, приводящую к получению препарата, содержащего вирусные антигены.
a) получение супернатанта из культуры клеток, содержащей инфекционный вирус,
b) инактивацию указанного вируса, полученного на стадии (а),
c) обработку указанного вируса детергентом в условиях, эффективных для расщепления вируса, и
d) очистку указанного расщепленного вируса, приводящую к получению препарата, содержащего вирусные антигены.
18. Способ по п.17, дополнительно включающий стадию стабилизации указанных вирусных антигенов.
19. Способ по п.18, где указанные вирусные антигены стабилизируют путем добавления эффективного количества Твин 80.
20. Способ по п.19, где Твин 80 находится в количестве около 0,125%.
21. Применение препарата, полученного способом по любому из пп.1-20, для получения фармацевтической композиции для повышения резистентности к вирусной инфекции у субъекта.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US96672407P | 2007-08-28 | 2007-08-28 | |
US60/966,724 | 2007-08-28 | ||
PCT/US2008/074559 WO2009029695A1 (en) | 2007-08-28 | 2008-08-28 | Method for producing viral vaccines |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010111747A RU2010111747A (ru) | 2011-10-10 |
RU2496519C2 true RU2496519C2 (ru) | 2013-10-27 |
Family
ID=39947984
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010111747/10A RU2496519C2 (ru) | 2007-08-28 | 2008-08-28 | Способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, и применение препарата |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8497112B2 (ru) |
EP (1) | EP2192917B1 (ru) |
JP (1) | JP5535910B2 (ru) |
KR (1) | KR101760844B1 (ru) |
CN (1) | CN101790381B (ru) |
AU (1) | AU2008293513B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0816130A2 (ru) |
CA (1) | CA2696090C (ru) |
ES (1) | ES2459166T3 (ru) |
HK (1) | HK1143328A1 (ru) |
HR (1) | HRP20140375T1 (ru) |
IL (1) | IL203869A (ru) |
PL (1) | PL2192917T3 (ru) |
RU (1) | RU2496519C2 (ru) |
SG (1) | SG10201404101RA (ru) |
SI (1) | SI2192917T1 (ru) |
WO (1) | WO2009029695A1 (ru) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11707520B2 (en) | 2005-11-03 | 2023-07-25 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
WO2007052061A2 (en) * | 2005-11-04 | 2007-05-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics Srl | Emulsions with free aqueous-phase surfactant as adjuvants for split influenza vaccines |
DK2185191T3 (da) * | 2007-06-27 | 2012-12-03 | Novartis Ag | Influenzavacciner med lavt indhold af tilsætningsstoffer |
JP5642712B2 (ja) | 2009-02-10 | 2014-12-17 | ノバルティス アーゲー | 少ない量のスクアレンを含むインフルエンザワクチン |
BR112012000826B1 (pt) | 2009-07-06 | 2022-07-26 | Variation Biotechnologies Inc | Método para a preparação de vesículas |
US9907746B2 (en) | 2009-07-06 | 2018-03-06 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
GB0918830D0 (en) * | 2009-10-27 | 2009-12-09 | Glaxosmithkline Biolog Niederl | Process |
CA2797059A1 (en) * | 2010-05-03 | 2011-11-10 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel method |
US9610248B2 (en) | 2010-07-06 | 2017-04-04 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
CN107296792B (zh) | 2011-01-13 | 2021-07-27 | 变异生物技术公司 | 囊泡及由其产生之制剂的制备方法 |
CN103501811B (zh) | 2011-01-13 | 2016-03-30 | 变异生物技术公司 | 用于治疗病毒感染的组合物和方法 |
MX2014000753A (es) * | 2011-07-20 | 2014-05-07 | Abbott Biologicals Bv | Procedimiento para producir antigeno viral y vacunas. |
DK2737060T3 (da) * | 2011-07-27 | 2019-05-27 | Flash Therapeutics | Fremgangsmåde til fremstilling af retrovirale partikler, der er nyttige for transduktion af eukaryotiske celler |
WO2013072768A2 (en) | 2011-11-18 | 2013-05-23 | Variation Biotechnologies, Inc. | Synthetic derivatives of mpl and uses thereof |
CN104302323A (zh) | 2012-01-12 | 2015-01-21 | 变异生物技术公司 | 用于治疗病毒感染的组合物和方法 |
RU2698906C2 (ru) | 2012-01-27 | 2019-09-02 | Вэриэйшн Биотекнолоджиз, Инк. | Способы и композиции для терапевтических агентов |
WO2015059065A1 (en) * | 2013-10-22 | 2015-04-30 | Roche Diagnostics Gmbh | Methods for measuring cell-free virus particles from dried blood spots |
FR3025107B1 (fr) | 2014-08-29 | 2018-10-05 | Calixar | Procede de preparation d'un antigene vaccinal, antigene vaccinal obtenu et utilisations |
CN111979120B (zh) * | 2019-05-23 | 2022-09-27 | 比欧联科供应链管理(北京)有限公司 | 一种狂犬疫苗核酸消化去除装置及实验方法 |
RU2754398C1 (ru) * | 2020-06-25 | 2021-09-01 | Общество с ограниченной ответственностью «ФОРТ» | Способ получения четырехвалентной вакцины для профилактики гриппа |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1498261A (en) * | 1974-01-14 | 1978-01-18 | Sandoz Ltd | Influenza vaccines |
EP0105788A1 (fr) * | 1982-09-28 | 1984-04-18 | "DEGREMONT" Société dite: | Procédé et appareil de traitement anaérobie d'eaux résiduaires dans un filtre à remplissage de matériau granulaire |
EP0172433A2 (en) * | 1984-08-02 | 1986-02-26 | Tektronix, Inc. | Display method and apparatus employing cursor panning |
EP0514199A2 (en) * | 1991-05-17 | 1992-11-19 | Retroscreen Limited | Vaccines and methods for their production |
RU2082433C1 (ru) * | 1992-07-13 | 1997-06-27 | Николай Владимирович Костючек | Способ вакцинопрофилактики гриппа |
RU2195959C1 (ru) * | 2001-11-02 | 2003-01-10 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Инактивированная вакцина против синдрома гидроперикардита кур |
RU2261111C1 (ru) * | 2004-04-08 | 2005-09-27 | Сергеев Виталий Александрович | Инактивированная вакцина против вирусных пневмогастроэнтеритов крупного рогатого скота и телят и способ профилактики вирусных пневмогастроэнтеритов |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2475572A1 (fr) | 1980-02-11 | 1981-08-14 | Pasteur Institut | Procede pour l'obtention de fragments de virus a enveloppe lipidique, en particulier d'antigenes utilisables comme vaccins, produits obtenus et applications |
FR2723740B1 (fr) | 1994-08-16 | 1996-11-08 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Procede de preparation d'antigenes du virus grippal, antigenes obtenus et leurs applications |
CN1223589A (zh) * | 1996-05-06 | 1999-07-21 | 美国拜尔公司 | 包含鹦鹉热衣原体的猫疫苗及其制备方法 |
AT405939B (de) * | 1997-02-24 | 1999-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von lipidumhüllten viren |
CN1618464A (zh) | 1998-10-05 | 2005-05-25 | 财团法人阪大微生物病研究会 | 用于抗日本脑炎病毒感染的灭活疫苗的增强免疫原及其生产方法 |
MXPA01006214A (es) * | 1998-12-17 | 2004-09-06 | Aventis Pasteur | Composicion inmunogenica multivalente que contiene una preparacion de virus de influenza y una composicion de subunidad del virus sincicial respiratorio. |
US7521220B2 (en) * | 1999-11-26 | 2009-04-21 | Crucell Holland B.V. | Production of vaccines |
CA2417489A1 (en) | 2000-07-28 | 2002-02-07 | Maria A. Peral | Use of indole derivatives for the manufacture of a medicament for reducing intracular pressure |
GB0024089D0 (en) * | 2000-10-02 | 2000-11-15 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
MY134424A (en) * | 2001-05-30 | 2007-12-31 | Saechsisches Serumwerk | Stable influenza virus preparations with low or no amount of thiomersal |
US8703467B2 (en) | 2004-05-27 | 2014-04-22 | Baxter International Inc. | Inactivation of a pathogen in a sample by a treatment with formalin and UV light |
CN1647822A (zh) * | 2005-02-06 | 2005-08-03 | 北京生物制品研究所 | 脊髓灰质炎灭活疫苗及其制备方法 |
EP1724338A1 (en) * | 2005-05-19 | 2006-11-22 | Crucell Holland B.V. | Methods for the production of a whole-inactivated West Nile Virus vaccine |
-
2008
- 2008-08-28 EP EP08828326.2A patent/EP2192917B1/en active Active
- 2008-08-28 CN CN200880105185.5A patent/CN101790381B/zh active Active
- 2008-08-28 BR BRPI0816130-5A2A patent/BRPI0816130A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-08-28 RU RU2010111747/10A patent/RU2496519C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-08-28 SI SI200831190T patent/SI2192917T1/sl unknown
- 2008-08-28 KR KR1020107006633A patent/KR101760844B1/ko active IP Right Grant
- 2008-08-28 ES ES08828326.2T patent/ES2459166T3/es active Active
- 2008-08-28 AU AU2008293513A patent/AU2008293513B2/en active Active
- 2008-08-28 US US12/199,977 patent/US8497112B2/en active Active
- 2008-08-28 CA CA2696090A patent/CA2696090C/en active Active
- 2008-08-28 JP JP2010523124A patent/JP5535910B2/ja active Active
- 2008-08-28 PL PL08828326T patent/PL2192917T3/pl unknown
- 2008-08-28 WO PCT/US2008/074559 patent/WO2009029695A1/en active Application Filing
- 2008-08-28 SG SG10201404101RA patent/SG10201404101RA/en unknown
-
2010
- 2010-02-10 IL IL203869A patent/IL203869A/en active IP Right Grant
- 2010-10-20 HK HK10109953.4A patent/HK1143328A1/xx unknown
-
2013
- 2013-06-26 US US13/928,094 patent/US20130287811A1/en not_active Abandoned
-
2014
- 2014-04-23 HR HRP20140375AT patent/HRP20140375T1/hr unknown
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1498261A (en) * | 1974-01-14 | 1978-01-18 | Sandoz Ltd | Influenza vaccines |
EP0105788A1 (fr) * | 1982-09-28 | 1984-04-18 | "DEGREMONT" Société dite: | Procédé et appareil de traitement anaérobie d'eaux résiduaires dans un filtre à remplissage de matériau granulaire |
EP0172433A2 (en) * | 1984-08-02 | 1986-02-26 | Tektronix, Inc. | Display method and apparatus employing cursor panning |
EP0514199A2 (en) * | 1991-05-17 | 1992-11-19 | Retroscreen Limited | Vaccines and methods for their production |
RU2082433C1 (ru) * | 1992-07-13 | 1997-06-27 | Николай Владимирович Костючек | Способ вакцинопрофилактики гриппа |
RU2195959C1 (ru) * | 2001-11-02 | 2003-01-10 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Инактивированная вакцина против синдрома гидроперикардита кур |
RU2261111C1 (ru) * | 2004-04-08 | 2005-09-27 | Сергеев Виталий Александрович | Инактивированная вакцина против вирусных пневмогастроэнтеритов крупного рогатого скота и телят и способ профилактики вирусных пневмогастроэнтеритов |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101790381B (zh) | 2014-08-27 |
CA2696090C (en) | 2017-06-13 |
JP5535910B2 (ja) | 2014-07-02 |
EP2192917A1 (en) | 2010-06-09 |
CN101790381A (zh) | 2010-07-28 |
AU2008293513B2 (en) | 2013-11-21 |
US20130287811A1 (en) | 2013-10-31 |
EP2192917B1 (en) | 2014-01-29 |
SG10201404101RA (en) | 2014-09-26 |
PL2192917T3 (pl) | 2014-06-30 |
US20090060950A1 (en) | 2009-03-05 |
CA2696090A1 (en) | 2009-03-05 |
KR101760844B1 (ko) | 2017-07-24 |
AU2008293513A1 (en) | 2009-03-05 |
JP2010537641A (ja) | 2010-12-09 |
ES2459166T3 (es) | 2014-05-08 |
US8497112B2 (en) | 2013-07-30 |
HK1143328A1 (en) | 2010-12-31 |
RU2010111747A (ru) | 2011-10-10 |
HRP20140375T1 (hr) | 2014-06-20 |
WO2009029695A1 (en) | 2009-03-05 |
SI2192917T1 (sl) | 2014-05-30 |
KR20100075865A (ko) | 2010-07-05 |
BRPI0816130A2 (pt) | 2015-02-24 |
IL203869A (en) | 2016-05-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2496519C2 (ru) | Способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, и применение препарата | |
US11466257B2 (en) | Cell-derived viral vaccines with low levels of residual cell DNA | |
RU2197264C2 (ru) | Способ получения поверхностных антигенных белков из вирусов гриппа, противогриппозная вакцина | |
US4522809A (en) | Process for obtaining lipid envelope virus sub-units, notably antigens for use as vaccines, the products obtained and their applications | |
RU2565827C2 (ru) | Способ получения вирусного антигена и вакцин | |
KR20110099810A (ko) | 포르말린 및 uv광으로의 처리에 의한 샘플 중 병원균의 불활성화 | |
JP2012507272A (ja) | 新規な方法 | |
US20120058145A1 (en) | Method for producing virus from cell culture involving homogenization | |
JP5843615B2 (ja) | 密度勾配超遠心分離によるウイルスまたはウイルス抗原の精製 | |
EP3234113B1 (en) | A method for a large scale virus purification | |
AU2004249802B2 (en) | Improvements in virus production | |
JP6200805B2 (ja) | 新規な方法 | |
RU2523614C1 (ru) | Вакцина против гриппа и способ ее получения | |
RU2604414C2 (ru) | Живая вакцина для профилактики гриппа и способ ее получения | |
WO2022051327A1 (en) | Hemagglutinin modifications for improved influenza vaccine production | |
KR20070030852A (ko) | 포르말린 및 uv광으로의 처리에 의한 샘플 중 병원균의불활성화 | |
AU2007221746A1 (en) | Improvements in virus production |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170829 |