CN107296792B - 囊泡及由其产生之制剂的制备方法 - Google Patents
囊泡及由其产生之制剂的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107296792B CN107296792B CN201710129675.XA CN201710129675A CN107296792B CN 107296792 B CN107296792 B CN 107296792B CN 201710129675 A CN201710129675 A CN 201710129675A CN 107296792 B CN107296792 B CN 107296792B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antigen
- vesicle
- virus
- mixture
- forming lipids
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 313
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 255
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title claims description 132
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 261
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 261
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 261
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 200
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 77
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 51
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 100
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 80
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 56
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 52
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 46
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 46
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 46
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 46
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 39
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 35
- RNPXCFINMKSQPQ-UHFFFAOYSA-N dicetyl hydrogen phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOP(O)(=O)OCCCCCCCCCCCCCCCC RNPXCFINMKSQPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 229940093541 dicetylphosphate Drugs 0.000 claims description 30
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 26
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 18
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 claims description 16
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 claims description 16
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 15
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 15
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 claims description 12
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 claims description 11
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 11
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 claims description 10
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 7
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 claims description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 7
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 5
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 claims description 5
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 claims description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HSVDYEDYDOKETI-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)octadecan-3-one Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)C(O)(CO)CO HSVDYEDYDOKETI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 4
- MUXOBHXGJLMRAB-UHFFFAOYSA-N Dimethyl succinate Chemical compound COC(=O)CCC(=O)OC MUXOBHXGJLMRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 4
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 4
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 29
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 29
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 54
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 46
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 46
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 44
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 44
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 44
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 44
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 44
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 40
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 40
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 37
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 30
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 29
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 28
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 27
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 25
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 24
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 24
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 23
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 23
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 22
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 22
- 230000008569 process Effects 0.000 description 21
- 229940107161 cholesterol Drugs 0.000 description 20
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 19
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 19
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 15
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 14
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 14
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 14
- -1 octulose Chemical compound 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 14
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 13
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 13
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 12
- QHZLMUACJMDIAE-UHFFFAOYSA-N 1-monopalmitoylglycerol Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO QHZLMUACJMDIAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 11
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 11
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 11
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 10
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 10
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 10
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 9
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 9
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 9
- 108010007979 Glycocholic Acid Proteins 0.000 description 8
- RFDAIACWWDREDC-UHFFFAOYSA-N Na salt-Glycocholic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 RFDAIACWWDREDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 8
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 8
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 8
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 8
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 8
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 8
- RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N glycocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N 0.000 description 8
- 229940099347 glycocholic acid Drugs 0.000 description 8
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- 229940115272 polyinosinic:polycytidylic acid Drugs 0.000 description 8
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 8
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- WBWWGRHZICKQGZ-UHFFFAOYSA-N Taurocholic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)C1(C)C(O)C2 WBWWGRHZICKQGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 7
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 7
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 7
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 7
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 7
- WBWWGRHZICKQGZ-GIHLXUJPSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2O)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-GIHLXUJPSA-N 0.000 description 7
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 6
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 6
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 6
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 6
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 6
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 6
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 6
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 6
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 6
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 description 6
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 6
- XOMRRQXKHMYMOC-NRFANRHFSA-N (3s)-3-hexadecanoyloxy-4-(trimethylazaniumyl)butanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C XOMRRQXKHMYMOC-NRFANRHFSA-N 0.000 description 5
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 208000014058 canine distemper Diseases 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 5
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 5
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 5
- 229940031418 trivalent vaccine Drugs 0.000 description 5
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- NMSBTWLFBGNKON-UHFFFAOYSA-N 2-(2-hexadecoxyethoxy)ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOCCOCCO NMSBTWLFBGNKON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 4
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 4
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 4
- 238000000604 cryogenic transmission electron microscopy Methods 0.000 description 4
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N dimethyl(dioctadecyl)azanium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 4
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 4
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M sodium bicarbonate Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 230000007332 vesicle formation Effects 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical group C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 3
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 3
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 3
- 206010017913 Gastroenteritis rotavirus Diseases 0.000 description 3
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 3
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 3
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 229940080284 cetyl sulfate Drugs 0.000 description 3
- GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N diglycerol Chemical compound OCC(O)COCC(O)CO GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000007499 fusion processing Methods 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- LPTIRUACFKQDHZ-UHFFFAOYSA-N hexadecyl sulfate;hydron Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O LPTIRUACFKQDHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 3
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 3
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 3
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 2
- CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 2'‐deoxycytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO)C=C1 HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N Deoxycytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1OC(CO)C(O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N Dimethyl dicarbonate Chemical compound COC(=O)OC(=O)OC GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 2
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 2
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 206010067470 Rotavirus infection Diseases 0.000 description 2
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003716 cholic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 239000008380 degradant Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000001938 differential scanning calorimetry curve Methods 0.000 description 2
- BPHQZTVXXXJVHI-UHFFFAOYSA-N dimyristoyl phosphatidylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC BPHQZTVXXXJVHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000005496 eutectics Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N icosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 2
- 238000010309 melting process Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 2
- 239000003865 nucleic acid synthesis inhibitor Substances 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 2
- SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N palmitoleic acid Chemical compound CCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 2
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 2
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 2
- WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N (-)-D-erythro-Sphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCC=CC(O)C(N)CO WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- IXOXBSCIXZEQEQ-KQYNXXCUSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-(2-amino-6-methoxypurin-9-yl)-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C1=NC=2C(OC)=NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O IXOXBSCIXZEQEQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- RIFDKYBNWNPCQK-IOSLPCCCSA-N (2r,3s,4r,5r)-2-(hydroxymethyl)-5-(6-imino-3-methylpurin-9-yl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C1=2N(C)C=NC(=N)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O RIFDKYBNWNPCQK-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical group CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 description 1
- DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichloro-1,1,2,2-tetrafluoroethane Chemical compound FC(F)(Cl)C(F)(F)Cl DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKSLVDIXBGWPIS-UAKXSSHOSA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-iodopyrimidine-2,4-dione Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 RKSLVDIXBGWPIS-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- QLOCVMVCRJOTTM-TURQNECASA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-prop-1-ynylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C#CC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 QLOCVMVCRJOTTM-TURQNECASA-N 0.000 description 1
- PISWNSOQFZRVJK-XLPZGREQSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methyl-2-sulfanylidenepyrimidin-4-one Chemical compound S=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 PISWNSOQFZRVJK-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFYLSDSUCHVORB-IOSLPCCCSA-N 1-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(=N)N(C)C=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O GFYLSDSUCHVORB-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- UTAIYTHAJQNQDW-KQYNXXCUSA-N 1-methylguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)N(C)C(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O UTAIYTHAJQNQDW-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- RFCQJGFZUQFYRF-UHFFFAOYSA-N 2'-O-Methylcytidine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RFCQJGFZUQFYRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 2'-O-methyl uridine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFCQJGFZUQFYRF-ZOQUXTDFSA-N 2'-O-methylcytidine Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RFCQJGFZUQFYRF-ZOQUXTDFSA-N 0.000 description 1
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDTFMPXQUSBYRL-UUOKFMHZSA-N 2-Aminoadenosine Chemical compound C12=NC(N)=NC(N)=C2N=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O ZDTFMPXQUSBYRL-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- JRYMOPZHXMVHTA-DAGMQNCNSA-N 2-amino-7-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-one Chemical compound C1=CC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O JRYMOPZHXMVHTA-DAGMQNCNSA-N 0.000 description 1
- RHFUOMFWUGWKKO-XVFCMESISA-N 2-thiocytidine Chemical compound S=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 RHFUOMFWUGWKKO-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BCZUPRDAAVVBSO-MJXNYTJMSA-N 4-acetylcytidine Chemical compound C1=CC(C(=O)C)(N)NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 BCZUPRDAAVVBSO-MJXNYTJMSA-N 0.000 description 1
- XXSIICQLPUAUDF-TURQNECASA-N 4-amino-1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-prop-1-ynylpyrimidin-2-one Chemical compound O=C1N=C(N)C(C#CC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 XXSIICQLPUAUDF-TURQNECASA-N 0.000 description 1
- UVGCZRPOXXYZKH-QADQDURISA-N 5-(carboxyhydroxymethyl)uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C(O)C(O)=O)=C1 UVGCZRPOXXYZKH-QADQDURISA-N 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 5-Methylcytidine Natural products O=C1N=C(N)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGFIRQJZCNVMCW-UAKXSSHOSA-N 5-bromouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 AGFIRQJZCNVMCW-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- FHIDNBAQOFJWCA-UAKXSSHOSA-N 5-fluorouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(F)=C1 FHIDNBAQOFJWCA-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- KDOPAZIWBAHVJB-UHFFFAOYSA-N 5h-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine Chemical compound C1=NC=C2NC=CC2=N1 KDOPAZIWBAHVJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UEHOMUNTZPIBIL-UUOKFMHZSA-N 6-amino-9-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7h-purin-8-one Chemical compound O=C1NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O UEHOMUNTZPIBIL-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- HCAJQHYUCKICQH-VPENINKCSA-N 8-Oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2NC(=O)N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HCAJQHYUCKICQH-VPENINKCSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 9beta-Ribofuranosyl-7-deazaadenin Natural products C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- NEZONWMXZKDMKF-JTQLQIEISA-N Alkannin Chemical class C1=CC(O)=C2C(=O)C([C@@H](O)CC=C(C)C)=CC(=O)C2=C1O NEZONWMXZKDMKF-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 1
- 239000007989 BIS-Tris Propane buffer Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108020004513 Bacterial RNA Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000711506 Canine coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000282461 Canis lupus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-CBPJZXOFSA-N D-Gulose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-CBPJZXOFSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-WHZQZERISA-N D-aldose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-WHZQZERISA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-IVMDWMLBSA-N D-allopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-JDJSBBGDSA-N D-allulose Chemical compound OCC1(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O LKDRXBCSQODPBY-JDJSBBGDSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSNZZMHEPUFJNZ-QMTIVRBISA-N D-keto-manno-heptulose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(=O)CO HSNZZMHEPUFJNZ-QMTIVRBISA-N 0.000 description 1
- HAIWUXASLYEWLM-UHFFFAOYSA-N D-manno-Heptulose Natural products OCC1OC(O)(CO)C(O)C(O)C1O HAIWUXASLYEWLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- ZAQJHHRNXZUBTE-NQXXGFSBSA-N D-ribulose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)CO ZAQJHHRNXZUBTE-NQXXGFSBSA-N 0.000 description 1
- ZAQJHHRNXZUBTE-UHFFFAOYSA-N D-threo-2-Pentulose Natural products OCC(O)C(O)C(=O)CO ZAQJHHRNXZUBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAQJHHRNXZUBTE-WUJLRWPWSA-N D-xylulose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO ZAQJHHRNXZUBTE-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- 239000004338 Dichlorodifluoromethane Substances 0.000 description 1
- 241001454374 Drosophila <fruit fly, subgenus> Species 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 229940124894 Fluzone Drugs 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010084884 GDP-mannose transporter Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 241000941423 Grom virus Species 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VSOAQEOCSA-N L-altropyranose Chemical compound OC[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VSOAQEOCSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- HSNZZMHEPUFJNZ-UHFFFAOYSA-N L-galacto-2-Heptulose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(=O)CO HSNZZMHEPUFJNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910025794 LaB6 Inorganic materials 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 241000266847 Mephitidae Species 0.000 description 1
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N N(6)-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N NSC 29409 Natural products C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004108 Neurotransmitter Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000590 Neurotransmitter Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 235000021319 Palmitoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 241000282335 Procyon Species 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 229940123573 Protein synthesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 229940123752 RNA synthesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010037888 Rash pustular Diseases 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 229940124968 Rubella virus vaccine Drugs 0.000 description 1
- HAIWUXASLYEWLM-AZEWMMITSA-N Sedoheptulose Natural products OC[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@](O)(CO)O1 HAIWUXASLYEWLM-AZEWMMITSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004147 Sorbitan trioleate Substances 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004775 Tyvek Substances 0.000 description 1
- 229920000690 Tyvek Polymers 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 108010093857 Viral Hemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 239000003732 agents acting on the eye Substances 0.000 description 1
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical group 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 125000005466 alkylenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-STGXQOJASA-N alpha-D-lyxopyranose Chemical compound O[C@@H]1CO[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-STGXQOJASA-N 0.000 description 1
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003474 anti-emetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001384 anti-glaucoma Effects 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 230000000648 anti-parkinson Effects 0.000 description 1
- 230000000842 anti-protozoal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001754 anti-pyretic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001262 anti-secretory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000002921 anti-spasmodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940065524 anticholinergics inhalants for obstructive airway diseases Drugs 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229940125681 anticonvulsant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 229940125683 antiemetic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002111 antiemetic agent Substances 0.000 description 1
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 229940030600 antihypertensive agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Chemical class 0.000 description 1
- 239000000939 antiparkinson agent Substances 0.000 description 1
- 239000003904 antiprotozoal agent Chemical class 0.000 description 1
- 239000000164 antipsychotic agent Substances 0.000 description 1
- 229940005529 antipsychotics Drugs 0.000 description 1
- 239000002221 antipyretic Substances 0.000 description 1
- 229940125716 antipyretic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940124575 antispasmodic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960004676 antithrombotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- HHKZCCWKTZRCCL-UHFFFAOYSA-N bis-tris propane Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCCNC(CO)(CO)CO HHKZCCWKTZRCCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- QXJJQWWVWRCVQT-UHFFFAOYSA-K calcium;sodium;phosphate Chemical compound [Na+].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O QXJJQWWVWRCVQT-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012710 chemistry, manufacturing and control Methods 0.000 description 1
- 150000001801 chenodeoxycholic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001842 cholic acids Chemical class 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 239000000812 cholinergic antagonist Substances 0.000 description 1
- SECPZKHBENQXJG-UHFFFAOYSA-N cis-palmitoleic acid Natural products CCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 1
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019404 dichlorodifluoromethane Nutrition 0.000 description 1
- 229940042935 dichlorodifluoromethane Drugs 0.000 description 1
- 229940087091 dichlorotetrafluoroethane Drugs 0.000 description 1
- ZPTBLXKRQACLCR-XVFCMESISA-N dihydrouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)CC1 ZPTBLXKRQACLCR-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000004980 dosimetry Methods 0.000 description 1
- 229940112141 dry powder inhaler Drugs 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000005247 gettering Methods 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 239000008236 heating water Substances 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 125000000268 heptanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 150000005828 hydrofluoroalkanes Chemical class 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000003326 hypnotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000147 hypnotic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002454 idoses Chemical class 0.000 description 1
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- BJHIKXHVCXFQLS-PQLUHFTBSA-N keto-D-tagatose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-PQLUHFTBSA-N 0.000 description 1
- BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N keto-neuraminic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical class O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 229960001201 live attenuated varicella Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000003547 miosis Effects 0.000 description 1
- 239000003604 miotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- NJTGANWAUPEOAX-UHFFFAOYSA-N molport-023-220-454 Chemical compound OCC(O)CO.OCC(O)CO NJTGANWAUPEOAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229940035363 muscle relaxants Drugs 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000003158 myorelaxant agent Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002114 octoxynol-9 Polymers 0.000 description 1
- 229940098514 octoxynol-9 Drugs 0.000 description 1
- 229960002969 oleic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940125702 ophthalmic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940005483 opioid analgesics Drugs 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 239000000007 protein synthesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 description 1
- 208000029561 pustule Diseases 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- RHFUOMFWUGWKKO-UHFFFAOYSA-N s2C Natural products S=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 RHFUOMFWUGWKKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- HSNZZMHEPUFJNZ-SHUUEZRQSA-N sedoheptulose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO HSNZZMHEPUFJNZ-SHUUEZRQSA-N 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007781 signaling event Effects 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- IHQKEDIOMGYHEB-UHFFFAOYSA-M sodium dimethylarsinate Chemical compound [Na+].C[As](C)([O-])=O IHQKEDIOMGYHEB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M sodium propionate Chemical compound [Na+].CCC([O-])=O JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004324 sodium propionate Substances 0.000 description 1
- 229960003212 sodium propionate Drugs 0.000 description 1
- 235000010334 sodium propionate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019337 sorbitan trioleate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000391 sorbitan trioleate Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N sphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)CO WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000003206 sterilizing agent Substances 0.000 description 1
- 239000002294 steroidal antiinflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003470 sulfuric acid monoesters Chemical class 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 239000003204 tranquilizing agent Substances 0.000 description 1
- 230000002936 tranquilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N trichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)(Cl)Cl CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029284 trichlorofluoromethane Drugs 0.000 description 1
- 150000005691 triesters Chemical class 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960000172 trivalent influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N tubercidin Chemical compound C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 229930195735 unsaturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 150000003674 ursodeoxycholic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 125000003774 valeryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 229960001515 yellow fever vaccine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本公开内容提供了用于制备囊泡的方法。在一个方面中,本方法涉及提供形成囊泡之脂质的熔融混合物以及将所述形成囊泡之脂质的熔融混合物添加至包含抗原的水溶液中以形成含有抗原的囊泡,其中在所述添加步骤中所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于低于120℃的温度。在另一个方面中,本方法涉及提供形成囊泡之脂质的熔融混合物以及将包含抗原的水溶液添加至所述形成囊泡之脂质的熔融混合物中以形成含有抗原的囊泡,其中将所得混合物放置在低于60℃的控温条件下。在另一个方面中,本方法涉及提供形成囊泡之脂质的溶液以及通过注射将所述形成囊泡之脂质的溶液添加至包含抗原的水溶液中以形成含有抗原的囊泡。
Description
本申请是申请日为2012年1月13日、申请号为“201280008692.3”、发明名称为“囊泡及由其产生之制剂的制备方法”的中国专利申请的分案申请,原申请是国际申请PCT/US2012/021389的中国国家阶段申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求2011年1月13日提交的序列号为61/432,569的美国临时专利申请的优先权;其整体通过引用并入本文。
技术领域
本申请涉及囊泡及由其产生之制剂的制备方法。
背景技术
囊泡作为细胞膜的模型首次描述于二十世纪六十年代(参见 Bangham等,J.Mol.Biol.13:238-252,1965)。已发现囊泡在递送小分子药物、疫苗佐剂(vaccineadjuvancy)、基因转移和诊断成像方面具有许多应用(例如,参见Liposome Technology,第3版,Gregory Gregoriadis 编,Informa HealthCare,2006以及Liposomes:A PracticalApproach(The Practical Approach Series,264),第2版,Vladimir Torchilin和VolkmarWeissig编,Oxford University Press,USA,2003)。
已描述了制备囊泡的多种方法(例如,参见上文引用的参考文献以及 Walde和Ichikawa,Biomol.Eng.,18:143-177,2001)。但是,本领域中仍需要可用于将物质包封在囊泡内的方法。
本领域已描述的一种方法是所谓的熔化法。首先将形成囊泡的脂质在高温(例如,120℃)下熔化。第二步中,通过将水性缓冲剂(例如碳酸氢盐缓冲剂)添加至熔融脂质中以产生乳剂。最后,在降低的温度(例如, 50℃)下使待包封的物质与乳剂组分均质化,继而冻干。或者,将来自乳剂的囊泡冻干,随后在待包封物质存在下使其重溶。
尽管例如该方法可非常适于包封可经受高温的物质和/或能够迅速扩散到空囊泡中的小分子,但是我们已发现其不适于包封疫苗中常常涉及的抗原类型(例如多肽、病毒等)。特别地,我们已发现这些方法产生低包封效率,并且可显著地降低相关抗原的活性(例如,如通过免疫应答测量的)。因此,本领域中需要能够包封抗原同时使对抗原活性之影响最小化的囊泡的制备方法。
发明内容
本公开内容提供了囊泡的制备方法。在一个方面中,本方法涉及提供形成囊泡之脂质的熔融混合物以及将所述形成囊泡之脂质的熔融混合物添加至包含抗原的水溶液中以形成含有抗原的囊泡,其中在所述添加步骤中所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于低于120℃的温度。在另一个方面中,本方法涉及提供形成囊泡之脂质的熔融混合物以及将包含抗原的水溶液添加至所述形成囊泡之脂质的熔融混合物中以形成含有抗原的囊泡,其中使所得混合物放置在低于60℃的控温条件下。在另一个方面中,本方法涉及提供形成囊泡之脂质的溶液以及通过注射将所述形成囊泡之脂质的溶液添加至包含抗原的水溶液中以形成含有抗原的囊泡。本公开内容还提供了使用这些方法制备的含有抗原的囊泡制剂及其用途。
附图说明
图1示出了DCP、MPG和CHO(胆固醇)的DSC热谱图。其熔化发生转变在单一扫描上重叠。还示出了这些脂质混合物的DSC热谱图。
图2示出了NISV的冷冻断裂(freeze fracture)图像,其显示在未受影响囊泡上的大的切片囊泡。左下角的比例尺表示0.5μm。
图3示出了朗格缪尔(Langmuir)单层等温线,其表示作为代表单种表面活性剂与以比为5∶4∶1之MPG∶CHO∶DCP的混合制剂的平均分子面积之函数的表面压力。
图4A和4B示出了胰蛋白酶消化对由四种不同方法配制之放射性标记H1N1抗原的NISV保留的作用。
图5示出了通过由四种不同方法配制之NISV的低温-TEM (cryo-TEM)的显微镜分析。(A)反向熔化法(inverted melt method); (B)熔化法;(C)熔化法-低温抗原添加(lower temperature of antigen addition);和(D)脂质体氯仿法(liposomalchloroform method)。
定义
在整个本公开内容中,使用了以下段落中所定义的若干术语。
本文所使用的术语“抗原”是指含有能被抗体识别的一个或更多个表位(线性表位、构象表位、或二者皆有)的物质。在某些实施方案中,抗原可以是病毒、多肽、多核苷酸、多糖等。术语“抗原”既指亚单位抗原(即,与完整生物体分开和分离的抗原,其中所述抗原与所述生物体天然相关联)也指死的、减毒的或灭活的细菌、病毒、真菌、寄生物或其他微生物。在某些实施方案中,抗原可以是“免疫原”。
本文所使用的术语“包封(entrapping)”是指物质和囊泡之间任何类型的物理缔合,所述缔合例如封装(encapsulation)、粘附(至囊泡的内壁或外壁)或包埋入壁,具有或不具有物质的挤出。该术语与术语“加载 (loading)”和“含有”可互换使用。
本文所使用的术语“免疫应答”是指在动物中激发的应答。免疫应答可以指细胞免疫、体液免疫或者可包括这两者。免疫应答还可以限于免疫系统的一部分。例如,在某些实施方案中,免疫原性制剂可以诱导增强的 IFNγ应答。在某些实施方案中,免疫原性制剂可以诱导粘膜IgA应答(例如,如在鼻和/或直肠清洗物中测量的)。在某些实施方案中,免疫原性制剂可以诱导全身性IgG应答(例如,如在血清中测量的)。
本文所使用的术语“免疫原性”意指能够在宿主动物中针对非宿主实体(例如,流感病毒)产生免疫应答。在某些实施方案中,该免疫应答形成由针对特定感染性生物(例如,流感病毒)的疫苗所激发之保护性免疫的基础。“免疫原”是免疫原性物质。
本文所使用的术语“治疗有效量”是指在接受治疗的患者中足以显示有意义之益处的量。免疫原性制剂的治疗有效量可根据如下因素变化,例如期望的生物学终点(biological endpoint)、制剂性质、施用途径、接受治疗的患者的健康情况、体型和/或年龄等。
本文所使用的术语“多肽”或“蛋白质”是指氨基酸的聚合物。在一些实施方案中,多肽可包含除氨基酸之外的部分(例如,可以是糖蛋白、蛋白聚糖、脂蛋白等)和/或可以进行另外的加工或修饰。本领域普通技术人员应领会,“蛋白质”可以是如细胞所产生的完整多肽链(具有或不具有信号序列),或者可以是其一部分。本领域普通技术人员应领会,蛋白质有时可包含多于一条多肽链,例如通过一个或更多个二硫键连接或者通过其他方式相缔合。多肽可以包含L-氨基酸、D-氨基酸或者二者皆有,并且可以包含任何本领域已知的多种氨基酸修饰或类似物。可用的修饰包括例如末端乙酰化、酰胺化等。在一些实施方案中,多肽可以包含天然氨基酸、非天然氨基酸、合成氨基酸及其组合。在某些实施方案中,多肽可包含至少50个氨基酸、至少75个氨基酸、至少100个氨基酸、至少150个氨基酸、至少250个氨基酸或至少500个氨基酸。
本文所使用的术语“多糖”是指糖的多聚物。所述多聚物可包括天然糖类(例如,阿拉伯糖、来苏糖、核糖、木糖、核酮糖、木酮糖、阿洛糖、阿卓糖、半乳糖、葡萄糖、古洛糖、艾杜糖、甘露糖、塔洛糖、果糖、阿洛酮糖、山梨糖、塔格糖、甘露庚酮糖、景天庚酮糖、辛酮糖(octolose) 和神经氨酸(sialose))和/或经修饰的糖(例如,2’-氟代核糖、2’-脱氧核糖和己糖)。示例性多糖包括淀粉、糖原、葡聚糖、纤维素等。
本文所使用的术语“多核苷酸”是指核苷酸的聚合物。所述聚合物可以包括天然核苷(即,腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)、核苷类似物(例如,2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-丙炔基-尿苷、C5-丙炔基-胞苷、C5-甲基胞苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O(6)-甲基鸟苷、4-乙酰基胞苷、5-(羧基羟基甲基)尿苷、二氢尿苷、甲基假尿苷、1-甲基腺苷、 1-甲基鸟苷、N6-甲基腺苷和2-硫代胞苷)、经化学修饰的碱基、经生物学修饰的碱基(例如,甲基化的碱基)、经嵌入的碱基、经修饰的糖类(例如,2’-氟核糖、核糖、2’-脱氧核糖、2’-O-甲基胞苷、阿拉伯糖和己糖) 或者经修饰的磷酸酯基团(例如,硫代磷酸酯和5’-N-亚磷酰胺连接)。
本文所使用的术语“小分子治疗物”是指非聚合的治疗性分子,其可以包含若干个碳-碳键,并且具有小于约1500Da(例如,小于约1000Da、小于约500Da或者小于约200Da)的分子量。小分子治疗物可以在实验室中合成(例如,通过组合合成,使用工程化微生物等)或者可以天然存在(例如,天然产品)。一般来说,小分子治疗物可以改变、抑制、活化或以其他方式影响生物学事件。例如,小分子治疗物可以包括但不限于抗 AIDS物质、抗癌物质、抗生素、抗糖尿病物质、免疫抑制剂、抗病毒物质、酶抑制剂、神经毒素、阿片样物质、催眠剂、抗组胺剂、润滑剂、镇定剂、抗惊厥剂、肌肉松弛剂以及抗帕金森物质、抗痉挛剂和肌肉收缩剂(包括通道阻断剂、缩瞳剂和抗胆碱能剂)、抗青光眼化合物、抗寄生物和/或抗原生动物化合物、细胞-细胞外基质相互作用的调节剂(包括细胞生长抑制剂和抗粘附分子)、血管舒张剂、DNA、RNA或蛋白质合成抑制剂、抗高血压剂、镇痛剂、解热剂、甾体和非甾体的抗炎剂、抗血管生成因子、抗分泌因子、抗凝血剂和/或抗血栓形成剂、局部麻醉剂、眼科制剂、前列腺素、抗抑郁剂、抗精神病物质、镇吐剂和成像剂。适用于本公开内容的方法中的示例性小分子的更完整列表可以见于在 Pharmaceutical Substances:Syntheses,Patents,Applications,Axel Kleemann和Jurgen Engel编,Thieme Medical Publishing,1999;Merck Index:An Encyclopedia of Chemicals,Drugs,and Biologicals,Susan Budavari等编,CRC Press,1996以及the United States Pharmacopeia-25/Nationalformulary-20,the United States Pharmacopeial Convention,Inc.出版,2001。尽管不是必需的,但是优选所述小分子是有关政府部门或机构已认定的安全和有效使用的小分子。例如,FDA根据 21C.F.R.§§330.5、331至361和440至460列出的人用药物以及FDA根据21C.F.R.§§500至589列出的兽用药物均被认为是根据本公开内容的方法可使用的。
本文所使用的术语“治疗”是指出于减轻、缓解、改变、改善、改进或影响疾病、疾病的症状或者患病倾向而向患有疾病、具有疾病症状或患病倾向的患者施用制剂。在某些实施方案中,术语“治疗”是指对患者进行免疫接种。
具体实施方式
I.囊泡的制备方法-反向熔化
本公开内容提供了囊泡的制备方法。囊泡一般具有由一个或更多个包含脂质(任选地,具有其他分子)的双分子层所包封的水性区室(aqueous compartment)。例如,如下文更详细讨论的,在一些实施方案中,本公开内容的囊泡包含有助于将脂质运送穿过粘膜的运送增强分子(例如胆汁酸或其盐)。
在一个方面中,本方法涉及提供形成囊泡之脂质的熔融混合物以及随后将包含抗原的水溶液添加至形成囊泡之脂质的熔融混合物中以形成含有抗原之囊泡的步骤。值得注意的,使所得混合物放置在低于60℃的控温条件下。在某些实施方案中,可使形成囊泡之脂质的熔融混合物放置在低于60℃的控温条件下(例如,使用水浴),继而添加抗原溶液。或者,可将抗原溶液添加至形成囊泡之脂质的熔融混合物中,然后可使所得混合物放置在低于60℃的控温条件下。
在某些实施方案中,使通过将抗原溶液添加至熔融的形成囊泡之脂质中所产生的混合物放置在低于55℃例如低于50℃、低于45℃、低于40 ℃、低于35℃、低于30℃、低于25℃或甚至低于20℃的控温条件下。在某些实施方案中,使通过将抗原溶液添加至熔融的形成囊泡之脂质中所产生的混合物放置在20~60℃例如20~50℃、20~40℃、20~30℃、30~60℃、 30~50℃、30~40℃、40~60℃、40~50℃或50~60℃的控温条件下。应理解,术语“控温条件”不要求将温度固定在特定温度,而是简单地将温度保持在一定范围(例如,一些值的±1℃、±2℃、±5℃、±10℃等)内或者将温度保持低于或高于特定温度。
在某些实施方案中,当被添加至熔融的形成囊泡之脂质的混合物时,包含抗原的水溶液处于低于50℃的温度,例如低于45℃、低于40℃、低于35℃、低于30℃、低于25℃或甚至低于20℃的温度。在某些实施方案中,当被添加至熔融的形成囊泡之脂质的混合物时,包含抗原的水溶液处于20~60℃的温度,例如20~50℃、20~40℃、20~30℃、30~60℃、30~50 ℃、30~40℃、40~60℃、40~50℃或50~60℃的温度。在某些实施方案中,使包含抗原的水溶液放置在温度受控下,继而添加至熔融的形成囊泡之脂质的混合物。
在某些实施方案中,当添加抗原溶液时,形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上50℃的温度。在某些实施方案中,当添加抗原溶液时,形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上45℃、40 ℃、35℃、30℃、25℃、20℃、10℃或5℃的温度。在某些实施方案中,当添加抗原溶液时,形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上5~50℃,例如5~40℃、5~30℃、5~20℃、5~10℃、10~50℃、10~40℃、 10~30℃或10~20℃的温度。例如,在某些实施方案中,当添加抗原溶液时,形成囊泡之脂质的熔融混合物处于低于110℃、低于100℃、低于90 ℃或低于80℃的温度。
在另一个方面中,本方法涉及提供形成囊泡之脂质的熔融混合物以及随后将熔融混合物添加至包含抗原的水溶液中以形成含有抗原之囊泡的步骤。在这些方法中,形成囊泡之脂质的熔融混合物处于低于120℃的温度。
在某些实施方案中,当添加至抗原溶液时,形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上50℃的温度。在某些实施方案中,当添加至抗原溶液时,形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上45℃、 40℃、35℃、30℃、25℃、20℃、10℃或5℃的温度。在某些实施方案中,当添加至抗原溶液时,形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上5~50℃,例如5~40℃、5~30℃、5~20℃、5~10℃、10~50℃、10~40℃、 10~30℃或10~20℃的温度。例如,在某些实施方案中,当添加至抗原溶液时,形成囊泡之脂质的熔融混合物处于低于110℃、低于100℃、低于 90℃或低于80℃的温度。
在某些实施方案中,当添加熔融的形成囊泡之脂质的混合物时,包含抗原的水溶液处于低于50℃例如低于45℃、低于40℃、低于35℃、低于 30℃、低于25℃或甚至低于20℃的温度。在某些实施方案中,当添加熔融的形成囊泡之脂质的混合物时,包含抗原的水溶液处于20~60℃例如 20~50℃、20~40℃、20~30℃、30~60℃、30~50℃、30~40℃、40~60℃、 40~50℃或50~60℃的温度。在某些实施方案中,包含抗原的水溶液在温度受控下。
本公开内容的方法避免了使抗原暴露于有机溶剂和高温。不希望受任何理论的束缚,这可以解释所得制剂中被包封抗原的高活性(即,抗原性和/或免疫原性)。
形成囊泡的脂质
脂质是有机分子,其一般不溶于水但是可溶于非极性有机溶剂(例如,乙醚、氯仿、丙酮、苯等)。脂肪酸是一类脂质,其包含与饱和或不饱和烃链连接的酸部分。具体实例包括月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸等。脂肪酸的碱金属盐一般比酸本身更易溶于水。包含具有八个或更多个碳之烃链的脂肪酸及其盐常常表现出两亲性质,这是由于在同一分子中同时存在亲水性(头部)和疏水性(尾部)区域。包含极性头部基团的非离子型脂质也可表现出两亲性 (即,表面活性剂)的性质。脂肪酸与甘油(1,2,3-三羟基丙烷)的三酯构成另一类脂质,称为甘油三酯,其常见于动物脂肪和植物油中。脂肪酸与长链单羟基醇的酯形成发现于蜡中的另一类脂质。磷脂是另一类脂质。其为甘油或神经鞘氨醇与脂肪酸和磷酸的酯或酰胺衍生物,这一点与甘油三酯类似。所得磷脂酸的磷酸基团可以与磷脂本身的乙醇胺、胆碱或丝氨酸进一步酯化。应理解,所述方法可以利用能够形成囊泡的任何脂质(包括现有技术中描述的任何脂质,例如在LiposomeTechnology,第3版, Gregory Gregoriadis编,Informa HealthCare,2006以及Liposomes:A Practical Approach(The Practical Approach Series,264),第2版,VladimirTorchilin和Volkmar Weissig编,Oxford University Press,USA,2003中)。
在一些实施方案中,所述形成囊泡的脂质是磷脂。可以使用任何天然存在或合成的磷脂。不具限制地,具体磷脂的实例为L-α-(二硬脂酰基) 卵磷脂、L-α-(二棕榈酰基)卵磷脂、L-α-磷脂酸、L-α-(二月桂酰基)-磷脂酸、L-α-(二肉豆寇酰基)磷脂酸、L-α-(二油酰基)磷脂酸、DL-α-(二棕榈酰基)磷脂酸、L-α-(二硬脂酰基)磷脂酸以及由脑、肝、卵黄、心脏、大豆等制备或合成制备的多种类型的L-α-磷脂酰胆碱及其盐。
在一些实施方案中,所述形成囊泡的脂质是非离子型表面活性剂。在本文中,非离子型表面活性剂囊泡称为“NISV”。不具限制地,合适的非离子型表面活性剂的实例包括基于甘油的酯连接型表面活性剂 (ester-linked surfactant)。这样的甘油酯可以包含两种高级脂肪族酰基基团中的一种,例如每个酰基部分中含有至少十个碳原子。基于这样的甘油酯的表面活性剂可以包含多于一个甘油单位,例如多至5个甘油单位。可以使用甘油单酯,例如含有C12-C20烷酰基或烯酰基部分(例如己酰基、月桂酰基、肉豆寇酰基、棕榈酰基、油烯基(oleyl)或硬脂酰基)的那些。示例性的非离子型表面活性剂是1-单棕榈酰基甘油。
在一些实施方案中,还可以使用醚连接型表面活性剂(ether-linkedsurfactant)作为非离子型表面活性剂。例如,基于甘油或具有多至4个碳原子的低级脂肪族二元醇的二元醇(如,乙二醇)的醚连接型表面活性剂是合适的。基于这样的二元醇的表面活性剂可以包含多于一个二元醇单位,例如多至5个二元醇单位(例如,二甘醇鲸蜡基醚和/或聚氧乙烯-3- 月桂基醚)。可以使用二元醇或甘油的单醚,包括含有C12-C20烷基或烯基部分(例如己酰基、月桂酰基、肉豆寇酰基、鲸蜡基、油烯基或硬脂酰基) 的那些。可使用的环氧乙烷缩合产物包括PCT公开No.WO 88/06882中公开的那些(例如,聚氧乙烯高级脂肪族醚和胺表面活性剂)。示例性的醚连接型表面活性剂包括1-单鲸蜡基甘油醚和二甘醇鲸蜡基醚。
其他组分
在一些实施方案中,所述囊泡可以包含其他脂质和非脂质组分,只要其不妨碍囊泡形成即可。应理解,这些组分可以与形成囊泡的脂质共混合和/或可以与抗原共混合。在一些实施方案中,我们已发现将这些组分与形成囊泡的脂质共混合是有利的。
在一些实施方案中,所述囊泡可以包含有助于将脂质运送穿过粘膜的运送增强分子。如美国专利No.5,876,721中所述,多种分子可以用作运送增强剂。例如,侧链C23碳原子携带羧酸的胆固醇衍生物和/或其衍生物可以用作运送增强剂。这样的衍生物包括,但不限于“胆汁酸”,胆酸和鹅脱氧胆酸、其与甘氨酸或牛磺酸的缀合产物(例如甘胆酸(glycocholic acid)和牛磺胆酸)、衍生物(包括脱氧胆酸和熊脱氧胆酸)以及这些酸各自的盐。还包含胆汁酸或盐的NISV在本文中称为“胆汁酸体 (bilosome)”。在一些实施方案中,运送增强剂包括酰氧基化的氨基酸,例如酰基肉毒碱及其盐。例如,含有C6-20烷酰基或烯酰基部分的酰基肉毒碱(例如棕榈酰基肉毒碱)可以用作运送增强剂。本文所使用的术语“酰氧基化的氨基酸”旨在涵盖伯、仲和叔氨基酸以及α、β和γ氨基酸。酰基肉毒碱是酰氧基化的γ氨基酸的实例。应理解,囊泡可以包含多于一种类型的运送增强剂,例如一种或更多种不同的胆汁盐以及一种或更多种酰基肉毒碱。运送增强剂(如果存在的话)通常包含按重量计形成囊泡之脂质(例如,非离子型表面活性剂)的1至400%。在一些实施方案中,运送增强剂(如果存在的话)将包含按重量计形成囊泡之脂质的1至40%(例如,按重量计1至20%、按重量计1至25%、按重量计1至30%、按重量计 1至35%、按重量计2至25%、按重量计2至30%或者按重量计2至35%)。
在某些实施方案中,所述囊泡可以不含运送增强分子。在一些实施方案中,所述囊泡可以不含“胆汁酸”例如胆酸和鹅脱氧胆酸、其与甘氨酸或牛磺酸的缀合产物(例如甘胆酸和牛磺胆酸)、衍生物(包括脱氧胆酸和熊脱氧胆酸)以及这些酸各自的盐。在一些实施方案中,所述囊泡可以不含酰氧基化的氨基酸,例如酰基肉毒碱及其盐以及棕榈酰基肉毒碱。
在一些实施方案中,所述囊泡可以包含离子型表面活性剂,例如用以使囊泡带负电荷。例如,这可以帮助使囊泡稳定以及提供有效的分散。不具限制地,酸性物质(例如高级烷酸和烯酸(例如,棕榈酸、油酸)或者含有酸性基团(包括磷酸酯)的其他化合物(例如,二烷基磷酸酯/盐(例如,二鲸蜡基磷酸酯/盐或磷脂酸或磷脂酰丝氨酸)))以及硫酸单酯/硫酸单酯盐(例如高级烷基硫酸酯/盐(例如,鲸蜡基硫酸酯/盐))均可用于该目的。离子型表面活性剂(如果存在的话)通常包含按重量计形成囊泡之脂质(例如,非离子型表面活性剂)的1至50%。例如,离子型表面活性剂(如果存在的话)可包含按重量计形成囊泡之脂质(例如,非离子型表面活性剂)的1~5%、1~10%、1~15%、1~20、1~25%、1~30%、1~35%、1~40%、1~45%、5~10%、5~15%、5~20%、5~25%、5~30%、5~35%、 5~40%、5~45%、5~50%、10~15%、10~20%、10~25%、10~30%、10~35%、 10~40%、10~45%、10~50%、15~20%、15~25%、15~30%、15~35%、 15~40%、15~45%、15~50%、20~25%、20~30%、20~35%、20~40%、 20~45%、20~50%、25~30%、25~35%、25~40%、25~45%、25~50%、30~35%、30~40%、30~45%、30~50%、35~40%、35~45%、35~50%、 40~45%、40~50%或45~50%。
在一些实施方案中,所述囊泡可以包含分子量较高的、有助于形成双层的合适的疏水性物质(例如类固醇,如固醇(例如胆固醇))。在一些实施方案中,类固醇的存在可以辅助形成双层,所述囊泡的物理性质取决于所述双层。类固醇(如果存在的话)通常包含按重量计形成囊泡之脂质(例如,非离子型表面活性剂)的20至120%(例如,20~30%、20~40%、 20~50%、20~60%、20~70%、20~80%、20~90%、20~100%、20~110%、 30~40%、30~50%、30~60%、30~70%、30~80%、30~90%、30~100%、 30~110%、30~120%、40~50%、40~60%、40~70%、40~80%、40~90%、 40~100%、40~110%、40~120%、50~60%、50~70%、50~80%、50~90%、 50~100%、50~110%、50~120%、60~70%、60~80%、60~90%、60~100%、 60~110%、60~120%、70~80%、70~90%、70~100%、70~110%、70~120%、 80~90%、80~100%、80~110%、80~120%、90~100%、90~110%、90~120%、 100~110%、100~120%或110~120%)。
在一些实施方案中,在冻干之前任何溶液或混合物中可包含冻干保护剂。示例性的冻干保护剂包括蔗糖、海藻糖、聚乙二醇(PEG)、二甲基- 琥珀酸盐缓冲剂(DMS)、牛血清白蛋白(BSA)、甘露醇和葡聚糖。
在一些实施方案中,本公开内容的囊泡是还包含离子型表面活性剂或类固醇的胆汁酸体。在一些实施方案中,所述胆汁酸体可以包含离子型表面活性剂和类固醇二者。
在一些实施方案中,本公开内容的囊泡是不含运送增强分子并且还包含离子型表面活性剂或类固醇的非离子型表面活性剂囊泡(non-ionic surfactant vesicle,NISV)。在一些实施方案中,所述囊泡可以不含“胆汁酸”例如胆酸和鹅脱氧胆酸、其与甘氨酸或牛磺酸的缀合产物(例如甘胆酸和牛磺胆酸)、衍生物(包括脱氧胆酸和熊脱氧胆酸)以及这些酸各自的盐。在一些实施方案中,所述囊泡可以不含酰氧基化的氨基酸,例如酰基肉毒碱及其盐以及棕榈酰基肉毒碱。在一些实施方案中,NISV可以不含运送增强分子(例如,任何前述分子)并且包含离子型表面活性剂和类固醇二者。
冻干
如本文中所讨论的,在一些实施方案中,本公开内容的方法包括冻干步骤。冻干包括将目标制备物冷冻,然后降低环境压力(以及任选地,对制备物进行加热)以使得经冷冻的溶剂直接从固相升华为气体(即,干燥阶段)。在某些实施方案中,所述干燥阶段分为初级和次级干燥阶段。
可以通过将制备物置于容器(例如,烧瓶、eppendorf管等)中并任选地使容器在通过机械制冷(例如,利用干冰和甲醇、液氮等)冷却的浴中旋转来进行冷冻阶段。在一些实施方案中,所述冷冻步骤包括使制备物冷却至制备物的低共熔点以下的温度。由于低共熔点出现在制备物的固相和液相可共存的最低温度,因此使所述物质保持于该点以下的温度确保了在随后步骤中将发生升华而非蒸发。
干燥阶段(或当使用两个干燥阶段时的初级干燥阶段)包括降低压力以及任选地使制备物加热至溶剂能够升华的点。干燥阶段通常将大部分溶剂从制备物中除去。应领会,冷冻和干燥阶段不必是分开的阶段,而可以是以任何方式组合。例如,在某些实施方案中,冷冻和干燥阶段可以重叠。
次级干燥阶段可以任选地用于除去冷冻阶段期间吸收的残留溶剂。不希望受任何理论的束缚,该阶段涉及升高温度以破坏溶剂分子与经冷冻制备物之间形成的任何物理-化学相互作用。干燥阶段一经完成,在任选地将冻干产品密封之前可以用惰性气体(例如,氮气或氦气)打破真空状态。
再水化
如本文中所讨论的,在一些实施方案中,本公开内容的方法包括使冻干的制备物再水化的步骤。这通常通过将冻干的制备物与水溶液混合来实现。在一些实施方案中,这涉及将水溶液添加至冻干的制备物中。
在一些实施方案中,所述水溶液包括缓冲剂。例如,不限于,可以使用PCB缓冲剂、Na2HPO4/NaH2PO4缓冲剂、PBS缓冲剂、N,N-二羟乙基甘氨酸缓冲剂(bicine buffer)、Tris缓冲剂、HEPES缓冲剂、MOPS缓冲剂等。PCB缓冲剂通过将丙酸钠、二甲胂酸钠(sodiumcacodylate)和双Tris丙烷以2∶1∶2的摩尔比混合而产生。改变所加入的HCl量可使pH 在4~9的范围内缓冲。在一些实施方案中,可以使用碳酸盐缓冲剂。在一些实施方案中,所述水溶液为无菌注射用水(water for injection,WFI)。
在一些实施方案中,可以使通过上述任意方法制备的含有抗原的囊泡制剂冻干备用,并随后在使用前进行再水化(例如,用无菌水或水性缓冲剂)。在一些实施方案中,可以在该再水化步骤期间添加佐剂(例如,通过掺入无菌水或水性缓冲剂中)。在一些实施方案中,含有抗原的囊泡制剂在冻干前可贮存于-80℃。在一些实施方案中,冻干制剂可贮存于-20℃至10℃(例如,-5℃至10℃、0℃至5℃或2℃至8℃)的温度范围。
囊泡大小和加工
应领会,囊泡制剂通常将包含具有一定大小的囊泡混合物。应理解,以下所列的直径数值对应于混合物内最常见的直径。在一些实施方案中,制剂中>90%的囊泡将具有最常见数值的上下50%范围内的直径(例如, 1000±500nm)。在一些实施方案中,该分布可以更窄,例如,制剂中>90%的囊泡可以具有最常见数值的上下40%、30%、20%、10%或5%范围内的直径。在一些实施方案中,可以利用声处理或超声处理促进囊泡形成和 /或改变囊泡粒径。在一些实施方案中,可以利用过滤、透析和/或离心来调整囊泡大小分布。
在某些实施方案中,所述制剂可包含直径范围约10nm至约10μm 的囊泡。在某些实施方案中,囊泡具有约100nm至约5μm的直径。在某些实施方案中,囊泡具有约500nm至约2μm的直径。在某些实施方案中,囊泡具有约800nm至约1.5μm的直径。在一些实施方案中,所述制剂可包含直径范围约150nm至约15μm的囊泡。在某些实施方案中,所述囊泡可具有大于10μm(例如,约15μm至约25μm)的直径。在某些实施方案中,所述囊泡可具有约0.1μm至约20μm、约0.1μm至约15 μm、约0.1μm至约10μm、约0.5μm至约20μm、约0.5μm至约15μm、约0.5μm至约10μm、约1μm至约20μm、约1μm至约15μm或者约 1μm至约10μm的直径。在某些实施方案中,所述囊泡可具有约2μm 至约10μm(例如,约1μm至约4μm)的直径。在某些实施方案中,所述囊泡可具有小于150nm(例如,约50nm至约100nm)的直径。
抗原
一般地,应理解,可以利用本公开内容的方法包封任何抗原。如前文所讨论的,抗原可以以任何方式与囊泡缔合。在一些实施方案中,抗原可以存在于囊泡的水性核中。但是,根据其疏水性,抗原还可以部分地或完全地与双分子层相缔合。一般地,还应理解,在一些实施方案中,囊泡制剂可包含不与囊泡相缔合之一种或更多种抗原的量。
在一些实施方案中,可使用本公开内容的方法包封疫苗中包含的一种或更多种抗原。表1是合适疫苗的非限制性列表。
表1
在以下部分中,我们讨论一些可使用的示例性抗原。
流感抗原
流感是常见的呼吸系统感染性疾病,其与正粘病毒科 (Orthomyxoviridae)病毒家族相关。A和B型流感是导致人类流行性疾病的两种流感病毒类型。基于两种表面抗原:血凝素(HA)和神经氨酸酶(N),可将A型流感病毒进一步分类为亚型。未对B型流感病毒进行亚型分类。对于处于由流感感染引起的严重疾病和相关并发症的高风险中的那些来说,免疫接种被认为是预防或减轻流感的唯一最有效方式。接种由灭活的流感病毒制备的抗原刺激产生特异性抗体。一般来说,保护作用仅仅针对用于制备疫苗的病毒毒株或者密切相关的毒株。
所有种类的流感疫苗通常是三价疫苗。它们一般包含来源于两种A 型流感病毒毒株和一种B型流感毒株的抗原。每个季节待掺入流感疫苗的流感病毒毒株由世界卫生组织(WHO)以及国家卫生机构和疫苗生产商共同确定。应理解,根据本公开内容,可使用任何流感病毒毒株,并且基于WHO的建议,每年的流感病毒毒株将有所差异。
还涵盖可用于例如大流行性情况中的单价疫苗。单价的大流行性流感疫苗将最有可能包含来自单一A毒株的流感抗原。在一些实施方案中,流感抗原来源于大流行性流感毒株。例如,在一些实施方案中,流感抗原是A型流感(猪源H1N1)病毒抗原。
全球范围内主要使用3类灭活疫苗来抵御流感:全病毒疫苗、含有病毒之外部和内部组分的裂解病毒疫苗以及仅由病毒之外部组分(血凝素和神经氨酸酶)构成的亚单位疫苗。不希望受任何理论的束缚,认为亚单位疫苗的较高纯度应当使其致反应性(reactogenic)较低且耐受性较好。相反,认为全病毒和裂解病毒疫苗包含更多表位并因此具有更高的免疫原性。
在一些实施方案中,流感抗原基于亚单位疫苗。一般地,亚单位疫苗仅包含流感病毒中对于有效免疫接种(例如,激发保护性免疫应答)来说所需的那些部分。在一些实施方案中,由病毒颗粒制备亚单位流感抗原(例如,对病毒之特定组分的纯化)。在一些实施方案中,通过重组方法制备亚单位流感抗原(例如,在细胞培养物中表达)。例如,美国专利No.5,858,368描述了利用重组DNA技术制备重组流感疫苗的方法。所得三价流感疫苗是基于从具有流行可能性的流感病毒克隆的重组血凝素抗原的混合物。重组血凝素抗原是全长的、未断裂的糖蛋白,其由杆状病毒表达载体在培养的昆虫细胞中产生并在非变性条件下纯化。在一些实施方案中,亚单位流感抗原通过合成方法(例如,肽合成)产生。亚单位疫苗可包含从由WHO确定的所选毒株中制备的经纯化的表面抗原、血凝素抗原和神经氨酸酶抗原。不希望受任何理论的束缚,认为表面抗原、血凝素抗原和神经氨酸酶抗原在免疫接种后激发产生病毒中和抗体中发挥重要作用。
在一些实施方案中,流感抗原是裂解病毒抗原。利用裂解病毒抗原制备的疫苗通常含有较高浓度的病毒最具免疫原性的部分(例如,血凝素和神经氨酸酶),同时降低免疫原性较弱的病毒蛋白以及卵(用于产生病毒) 中存在的非病毒蛋白或外来剂(extraneousagent)(例如,禽白血病(avian leukosis)病毒、其他微生物和细胞碎片)的浓度。一般地,通过物理方法制备裂解病毒抗原,所述方法包括破坏病毒颗粒(一般用有机溶剂或去污剂(例如,Triton X-100))以及分离或纯化病毒蛋白至不同程度(例如通过经蔗糖梯度的离心或使尿囊液(allantoic fluid)经过色谱柱)。在一些实施方案中,破坏和分离病毒颗粒后进行透析或超滤。裂解的病毒抗原通常包含大部分或全部的病毒结构蛋白,但是与它们在全病毒中的比例未必一致。病毒裂解的方法以及合适的裂解试剂是本领域已知的(参见,例如美国专利公开No.20090155309)。在一些实施方案中,使用本领域已知的方法(例如,ELISA)对裂解病毒抗原的最终抗原浓度(例如血凝素和 /或神经氨酸酶抗原的浓度)进行标准化。
在一些实施方案中,流感抗原是全病毒抗原。认为在未被免疫的个体中,用全病毒抗原制备的疫苗可具有更强的免疫原性并且可以以低于其他制剂(例如,亚单位或裂解病毒抗原)的抗原剂量诱导更强的保护性抗体应答。但是,包含全病毒抗原的流感疫苗比起其他制剂可产生更多的副作用。
本文所述的免疫原性制剂中存在的流感病毒抗原可以是感染性的、灭活的或减毒的。
在某些实施方案中,免疫原性制剂可以包含灭活的病毒抗原。应领会,可以使用任何方法来制备灭活的流感病毒抗原。WO 09/029695描述了用于生产灭活型全病毒疫苗的示例性方法。一般地,这些方法将涉及在宿主细胞中使流感病毒增殖,任选地使宿主细胞裂解以释放病毒,将病毒抗原分离然后灭活。常常使用对病毒的化学处理(例如,福尔马林、甲醛等) 来灭活用于疫苗制剂的病毒。但是,应理解,可以使用其他技术,例如用氯处理、暴露于高温等。在这些处理中,通常使病毒颗粒的外壳保持完整,而使其复制功能受损。优选地,非复制型病毒疫苗包含比能够在宿主中复制的活疫苗更多的抗原。
在某些实施方案中,免疫原性制剂可以包含减毒的病毒抗原。如本领域所公知的,用减毒的病毒抗原制备的疫苗的一个优势在于较高免疫原性的潜力,这是由于其能够在体内复制而不会引起完全感染的能力。优选地,由减毒的毒株制备的活病毒疫苗不具有致病性,但是仍能在宿主中复制。本领域中已使用的一种制备减毒流感病毒抗原的方法是病毒适应,其包括使病毒毒株在多种细胞培养物中连续传代。毒株随时间发生突变,随后可对减毒毒株进行鉴定。在某些实施方案中,可以使病毒在不同细胞培养物中传代。在某些实施方案中,可证明在降低的温度下进行一个或更多个细胞培养步骤是有利的。
目前几种流感疫苗已获得批准(见表1)。例如,一种裂解细胞灭活型流感疫苗,其由Sanofi Pasteur,Inc.开发和生产并且可以根据本公开内容使用。包含由在有胚的鸡蛋中增殖的流感病毒制备的无菌混悬剂。收集含有病毒的流体,并用甲醛灭活。使流感病毒浓缩,并使用连续流动离心机在线性蔗糖密度梯度溶液中进行纯化。然后使用非离子型表面活性剂辛苯昔醇-9(octoxinol-9)(X-100)对病毒进行化学破坏,从而产生裂解病毒抗原。然后通过化学方法对裂解病毒进行进一步纯化,并悬浮于磷酸钠盐缓冲的等渗氯化钠溶液中。然后根据流感季节的需要对疫苗进行标准化,并配制成每0.5mL剂量含有45μg 血凝素(HA),针对三种原型毒株各自的推荐比例是15μg HA(例如,由A/所罗门群岛/3/2006(H1N1)、A/威斯康星/67/2005(H3N2)和B/马来西亚/2506/2004毒株制备的2007-2008疫苗)。疫苗配制用于肌内注射。
可根据本公开内容使用的经批准的流感疫苗的另一实例是其为裂解细胞灭活型流感疫苗,也是由Sanofi Pasteur,Inc.开发和生产的。以与上述对于的方法类似的方式制备,并且类似地配制以用于肌内注射。
可根据本公开内容使用的经批准的流感疫苗的又一实例是 是一种活的减毒三价疫苗,其通过鼻内喷雾施用。中的流感病毒毒株具有3处导致温度限制性生长和减毒表型的遗传突变。抗原性质和经遗传修饰之流感病毒的累积效果是其能够在鼻咽中复制并诱导保护性免疫。为了生产用每种适当的病毒毒株接种无特定病原体(specific pathogen-free,SPF)的卵并孵育以使得疫苗病毒复制。收集这些卵的尿囊液,合并在一起,然后通过过滤进行澄清化。通过超速离心使病毒浓缩,用稳定缓冲剂稀释以获得最终的蔗糖和磷酸钾浓度。然后,对病毒收集物进行无菌过滤,以产生单价物块(monovalent bulk)。继而将来自三种毒株的单价物混合并用稳定缓冲剂进行获得期望效力所需的稀释,以产生三价物块疫苗。然后,将物块疫苗直接填装入用于经鼻施用的单个喷雾器中。每个经预填装的冷冻喷雾器包含0.2ml单次剂量。每0.2ml剂量包含106.5 -7.5FFU的3种适当病毒毒株中各自的减毒活流感病毒重组株(reassortant)。
如上文所述,目前几种流感疫苗获得批准。应理解,这些经批准的流感疫苗中的任一种或其组合可以与本文所述的囊泡相组合,以产生免疫原性制剂。例如,市售的和/或可以以该方式组合,以产生活性免疫原性制剂。在一些实施方案中,首先对经批准的流感疫苗进行纯化(例如,用以除去疫苗中的明矾佐剂或其他试剂)。在一些实施方案中,在用本文所述的囊泡配制之前,不对经批准的流感疫苗进行纯化。
PCT专利申请No.PCT/US09/47911描述了可用于本公开内容的方法和制剂中的另一些示例性流感抗原。示例性流感抗原还描述于美国专利 No.7,527,800;7,537,768;7,514,086;7,510,719;7,494,659;7,468,259; 7,399,840;7,361,352;7,316,813;7,262,045;7,244,435;7,192,595;7,052,701; 6,861,244;6,743,900;6,740,325;6,635,246;6,605,457;6,534,065;6,372,223; 6,344,354;6,287,570;6,136,606;5,962,298;5,948,410和5,919,480中。
麻疹、流行性腮腺炎、风疹和水痘抗原
目前几种减毒的麻疹、流行性腮腺炎和风疹(measles,mumps and rubella,MMR)疫苗获得批准。例如,是由Merck&Co.,Inc. 开发和生产的。包含以下的无菌冻干制备物:(1) (麻疹病毒活疫苗),麻疹病毒减毒系;(2)(流行性腮腺炎病毒活疫苗),鸡胚细胞培养物中增殖的流行性腮腺炎病毒毒株;和(3) Meruvax(风疹病毒活疫苗),风疹病毒的减毒毒株。每0.5mL剂量包含不低于1,000TCID50(50%组织培养感染剂量)的麻疹病毒、不低于 5,000TCID50的流行性腮腺炎病毒和不低于1,000TCID50的风疹病毒。重溶之后,(正如其他经批准的MMR疫苗)通常为皮下施用。虽然在超过12月龄的儿童中一个剂量的通常诱导产生中和抗体,但是在首次给药后一些患者未能发生血清转化。因此,推荐第二次加强,尤其是在小学入学之前,以使对首次给药没有应答的那些发生血清转化。
应理解,本公开内容提供的免疫原性组合物可包含MMR疫苗的一种或更多种抗原(例如,麻疹、流行性腮腺炎或风疹病毒或者其组合)。在一些实施方案中,免疫原性组合物包含水痘病毒(例如单独、例如与或与其他病毒(例如)组合)。
如本领域公知的,使用减毒病毒的优点在于具有较高免疫原性的潜力,这是由于其能够在体内复制而不会引起完全感染的能力。本领域中已使用的一种制备减毒病毒的方法是病毒适应,其包括使病毒毒株在多种细胞培养物中连续传代。毒株随时间发生突变,随后可对减毒毒株进行鉴定。例如,在制备中,麻疹病毒的减毒毒株在鸡胚细胞培养物中增殖,流行性腮腺炎的B级毒株在鸡胚细胞培养物中增殖,以及风疹的减毒毒株在人二倍体肺成纤维细胞中增殖。在某些实施方案中,可以使病毒在不同细胞培养物中传代。
应领会,可使用任何麻疹、流行性腮腺炎或风疹病毒毒株,例如不限于在本领域中已描述的任何下述毒株:
·麻疹病毒Enders’减毒Edmonston毒株(AttA)
·麻疹病毒减毒AIK-C毒株
·流行性腮腺炎病毒Jeryl Lynn(B级)毒株
·流行性腮腺炎病毒Leningrad Zagreb毒株
·流行性腮腺炎病毒Urabe Am 9毒株
·风疹病毒Wistar RA 27/3毒株
·风疹病毒Giguere;1964美国
·风疹病毒HPV-77;1961美国
·风疹病毒Judith;1963英国利物浦
·风疹病毒KO-1;1967日本高知县
尽管目前所有经批准的MMR疫苗包括减毒病毒,但是根据本公开还可使用包括灭活病毒的替选疫苗。在某些实施方案中,免疫原性组合物可包含该灭活病毒。应领会,可以使用任何方法来制备灭活的病毒。一般地,这些方法将涉及在宿主细胞中使病毒增殖,使宿主细胞裂解以释放病毒,分离然后灭活病毒。通常从细胞培养物中收集病毒并且对于感染剂量以及对于没有外来剂进行筛选。常常使用对病毒的化学处理(例如,福尔马林、甲醛等)来灭活病毒。但是,应理解,可以使用其他技术,例如用氯处理、暴露于高温等。
其他抗原
犬瘟热(canine distemper)是由犬瘟热病毒之病毒感染引起的疾病,该病毒是与麻疹病毒密切相关的副粘病毒。犬瘟热病毒可引起影响包括狗、鼬鼠、臭鼬、土狼、浣熊和野生猫科动物在内的多种哺乳动物物种的严重医学状况。犬瘟热感染可引起包括发热、厌食、流鼻涕和眼分泌物的症状,常常导致诸如肺炎和脑炎的并发症。减毒的犬瘟热疫苗(包括多价 DA2PPC疫苗)已获得批准,其抵御犬瘟热(distemper,D)、2型腺病毒(adenovirus type2,A2)、副流感(parainfluenza,P)、犬细小病毒 (parvovirus,P)和犬冠状病毒(coronavirus,C)。应理解,本公开内容提供的免疫原性组合物可包含DA2PPC中的一种或更多种组分(例如,犬瘟热病毒抗原)。
轮状病毒感染导致轮状病毒肠胃炎,在婴儿和幼儿中可尤其严重。用于治疗轮状病毒感染的经批准的活减毒疫苗包括和 用于预防由病毒之G1、G2、G3和G4血清型引起的轮状病毒肠胃炎。向6至32周龄的婴儿以三次剂量系列口服施用每2ml 剂量的包含含有G1、G2、G3、G4和P1A的活重组病毒,并且包含最少2.0~2.8×106个感染单位(infectious unit,IU)。用于预防由病毒之G1、G3、G4和G9血清型引起的轮状病毒肠胃炎。向6 周龄至24周龄的婴儿以两次剂量系列口服施用每1ml剂量的包含最少106CCID50的活减毒人G1P轮状病毒。
带状疱疹是神经根的病毒性感染,其通常在身体一侧引起疼痛和皮疹。带状疱疹在老年人和具有弱免疫系统的人中最为常见。用于治疗由带状疱疹病毒感染引起的带状疱疹的经批准病毒为其为活的减毒水痘带状疱疹病毒的Oka/Merck毒株的冻干制剂。用于皮下施用并且用于60岁或更高年龄的个体。每0.65ml剂量的包含至少19,400pfu的活减毒病毒。
经批准的活减毒疫苗的另一个实例为其为用于治疗天花病毒感染的牛痘病毒的活病毒制剂。从牛淋巴液制备,将其纯化,浓缩,然后通过冻干干燥。已经显示重溶疫苗每ml包含不多于200 个有活力的细菌生物体。旨在用于多次穿刺使用,即使用分叉针将疫苗施用至皮肤的浅层。通常,用进行的免疫接种导致病毒增殖(viral multiplication)、免疫和细胞超敏反应。随着首次免疫接种,在约第2天至第5天,在免疫接种的位置出现丘疹。其在第5天或第6 天变为囊泡,继而变为脓疱,呈脐状,并被红斑和硬结(induration)围绕。免疫接种后第8天至第12天(一般在第10天)达到红斑最大面积。之后红斑和肿胀消退,并形成痂,在约第14天至第21天痂脱离。在称为Jennerian应答的初级反应的高度,通常有区域性淋巴结病并且可能有全身性发热和不适的表现。已经显示用1亿疱痕形成单位(pock-forming unit,pfu)/ml效价的进行的初级免疫接种通过儿童中主要反应与中和抗体应答二者激发97%的应答速率。
经批准的活减毒疫苗的另一个实例是用于治疗黄热病病毒感染的通过使黄热病病毒的17D毒株在活的无禽白血病病毒的鸡胚中培养来制备。将冻干并在氮下密封用于贮存,并且在使用前立即将其重溶。将配制成每0.5ml剂量包含不低于5.04 Log10 pfu。通常,最迟在用首次免疫接种后的第十天产生针对黄热病的免疫。尽管已经证明黄热病疫苗免疫可持续至少30~35年并且在一些情况中持续终身,但是每隔10年需要需要加强免疫接种以加强抗体效价。
在某些实施方案中,根据本公开内容的方法制备的免疫原性制剂可以包含不耐热的抗原。本文所使用的术语“不耐热的抗原”是指当暴露于某些升高的温度时丧失抗原完整性(antigenic integrity)的抗原。在一些实施方案中,如抗原完整性测定(例如,ELISA)中所测量的,与未经操作的抗原相比,不耐热的抗原暴露于升高的温度时破坏抗原之抗原完整性的超过20%(例如,超过30%、超过40%、超过50%或更多)。在某些实施方案中,不耐热的抗原在30℃以上(例如,35℃以上、40℃以上、45℃以上或50℃以上)的温度下丧失抗原完整性。在一些实施方案中,如抗原完整性测定(例如,ELISA)中所测量的,与未经操作的抗原相比,不耐热的抗原在这些升高的温度之一中贮存超过3分钟(例如,5分钟、10 分钟、15分钟或更久)破坏抗原之抗原完整性的超过20%(例如,超过 30%、超过40%、超过50%或更多)。如本文中所讨论的,本公开内容的方法特别对不耐热的抗原有益,这是因为其可以使用较低温度的抗原溶液和/或形成囊泡的脂质,使得更好地保留抗原完整性。
应理解,本公开内容不限于抗原,并且一般来说,所述方法可用于包封任何抗原性或非抗原性物质。因此,在一些实施方案中,本公开内容的方法可用于包封可具有或不具有抗原性的一种或更多种多肽、多核苷酸或多糖。特定类型的物质包括但不限于佐剂、酶、受体、神经递质、激素、细胞因子、细胞应答调节剂(例如生长因子和趋化因子)、抗体、半抗原、毒素、干扰素、核酶、反义试剂、质粒、DNA和RNA。在一些实施方案中,多肽可以是抗体或抗体片段,例如人源化抗体。在一些实施方案中,这些物质是不耐热的,其在上述参考文献中涉及抗原的条件下转化成为降解物。
此外,尽管认为本公开内容的方法特别适用于对其化学和/或物理环境敏感的不耐热物质(例如,生物物质如微生物、多肽、多核苷酸、多糖等),但是应理解,在一些实施方案中,所述方法还可用于包封较稳定的物质(包括传统的小分子治疗剂)。
佐剂
在某些实施方案中,本公开内容的方法还可包括将一种或更多种佐剂添加至囊泡制剂中的步骤。如本领域所公知地,佐剂是增强免疫应答的试剂。佐剂是本领域公知的(例如,参见″Vaccine Design:The Subunit and Adjuvant Approach″,PharmaceuticalBiotechnology,卷6,Powell和 Newman编,Plenum Press,New York and London,1995)。在一些实施方案中,可在囊泡制剂(包封有抗原)制备后添加佐剂。在一些实施方案中,可在制备囊泡制剂的过程期间添加佐剂(例如,与形成囊泡的脂质或其他囊泡组分一起,与抗原一起,或者在单独的步骤中)。
在某些实施方案中,在添加抗原前添加佐剂。在一些实施方案中,将佐剂与形成囊泡的脂质共熔化。在一些实施方案中,将TLR-3或TLR-4 激动剂佐剂(下文有描述)与形成囊泡的脂质共熔化。在某些实施方案中,在添加抗原后添加佐剂。在一些实施方案中,在添加抗原后,佐剂与冻干保护剂一起添加。在一些实施方案中,在添加抗原后,将TLR-3或TLR-4激动剂佐剂(下文有描述)与冻干保护剂一起添加。在一些实施方案中,所述冻干保护剂是蔗糖。
示例性佐剂包括弗氏完全佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)、弗氏不完全佐剂(incomplete Freund′s adjuvant,IFA)、角鲨烯、角鲨烷和明矾(氢氧化铝),这些是本领域公知的材料并且可以从多种来源购得。在某些实施方案中,铝盐或钙盐(例如,氢氧化物或磷酸盐)可以用作佐剂。明矾(氢氧化铝)已用于多种现有疫苗中。当IM给药时,每份剂量通常包含约40至约700μg的铝。例如,每份剂量的包含500μg 铝。
在多个实施方案中,水包油型乳剂或油包水型乳剂也可以用作佐剂。例如,油相可以包含角鲨烯或角鲨烷以及表面活性剂。在多个实施方案中,可以使用非离子型表面活性剂,例如山梨聚糖和二缩甘露醇的单-和二 -C12-C24-脂肪酸酯。优选地,油相包含按重量计约0.2%至约15%(例如,约0.2%至1%)的免疫原性制剂。PCT公开No.WO 95/17210描述了示例性乳剂。
命名为QS21的佐剂是免疫活性的皂苷级分,其具有佐剂活性,来源于南美树种石碱木(Quillaja Saponaria Molina)的树皮,其生产方法公开于美国专利No.5,057,540中。石碱木皂苷的半合成和合成衍生物也是可用的,例如描述于美国专利No.5,977,081和6,080,725中的那些。
TLR是与果蝇(Drosophila)Toll受体同源的蛋白质家族,其识别与病原体相关的分子模式,因而帮助机体区分自身和非自身分子。病毒病原体中共有的物质作为病原体相关分子模式被TLR识别。例如,TLR-3识别双链RNA中的模式,TLR-4识别脂多糖中的模式,而TLR-7/8识别病毒和细菌RNA和DNA中含有腺苷的模式。当TLR被这种模式识别激活时,发生一系列信号传导事件,导致炎症以及固有性和适应性免疫应答的活化。含有被多种TLR识别之分子模式的多种合成配体正被开发作为佐剂,其可以包含在本文所述的免疫原性制剂内。
例如,聚肌苷酸-聚胞苷酸(或聚(I:C))(可从InvivoGen of San Diego, CA获得)是双链RNA(与病毒感染相关的分子模式)的合成类似物和 TLR-3之激动剂的示例性佐剂(例如,参见Field等,Proc.Natl.Acad.Sci. USA 58:1004(1967)以及Levy等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 62:357 (1969))。在一些实施方案中,聚(I:C)可以与其他试剂相组合以提高稳定性(例如,通过作用于RNA酶活性而减少降解)。例如,美国专利No. 3,952,097、4,024,241和4,349,538描述了聚(I:C)与聚-L-赖氨酸的复合物。还显示,向聚(I:C)中加入聚-精氨酸会也通过作用于RNA酶活性而减少降解。聚(IC:LC)是用聚-L-赖氨酸羧甲基纤维素稳定的合成双链聚(I:C)。美国专利公开No.20090041809描述了具有一个或多于一个锁核酸(locked nucleic acid,LNA)核苷的双链核酸,其可充当TLR-3激动剂。本领域技术人员将能够鉴定其他合适的TLR-3激动剂佐剂。
TLR-4之激动剂的示例性佐剂是减毒的脂质A衍生物(attenuated lipid Aderivative,ALD),例如单磷酰脂质A(MPL)和3-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)。ALD是脂质A样分子,其已被改变或构建从而使该分子表现出少于或不同于脂质A的不良反应。这些不良反应包括致热 (pyrogenicity)、局部许瓦茨曼反应性(local Shwarzman reactivity)以及在鸡胚50%致死剂量测定(CELD50)中评估的毒性。MPL和3D-MPL 分别描述于美国专利No.4,436,727和4,912,094中。MPL最初来源于脂质A(肠细菌脂多糖(LPS)的组分),其是强效但具有高毒性的免疫系统调节剂。3D-MPL与MPL的不同在于,与还原末端的葡萄糖胺在第3 位以酯键连接的酰基已被选择性地除去。应理解,MPL和3D-MPL可包括多种脂肪酸取代模式(即具有不同脂肪酸链长度的庚酰基、己酰基、戊酰基等)的混合物。因此,本公开内容涵盖了多种形式的MPL和3D-MPL,包括其混合物。
在一些实施方案中,这些ALD可以与海藻糖二霉菌酸酯 (trehalosedimycolate,TDM)和细胞壁骨架(cell wall skeleton,CWS) 相组合,例如在2%角鲨烯/TweenTM 80乳剂中(例如,参见英国专利No. 2122204)。MPL可以作为PHAD(磷酸化六酰基二糖)从Alabaster,AL 的Avanti Polar Lipids,Inc.获得。本领域技术人员将能够鉴定其他合适的 TLR-4激动剂佐剂。例如,另一些脂多糖已描述于PCT公开No.WO 98/01139、美国专利No.6,005,099和欧洲专利No.729473中。
II.囊泡的制备方法-溶剂注射
在另一个方面中,本发明提供了用于利用溶剂注射来制备囊泡的方法。例如,在一些实施方案中,所述方法涉及提供形成囊泡之脂质的溶液并且将形成囊泡之脂质的溶液通过注射添加至包含抗原的水溶液以形成含有抗原的囊泡。
由于脂质可在控温条件下溶于有机溶液,所以溶剂注射法可提供优于其他囊泡制备方法(例如,涉及高温或压力方法的那些方法)的一些优点。使用溶剂注射法还可避免高压均质化。事实上,已经研究了用于制备囊泡的多种溶剂注射方法并且已经显示这些方法在将包含脂质的溶液添加至水溶液期间不需要高温。
通常应理解,对于囊泡形成之反向熔化法而言,这些溶剂注射方法可利用上述任何形成囊泡的脂质、抗原和佐剂。还应理解,对于囊泡形成之反向熔化法而言,包含抗原之囊泡的组合物通过溶剂注射法一经制备,所述组合物还可通过上述冻干法、再水化法、囊泡大小和加工法中任一种而进一步加工。
在某些实施方案中,使通过将形成囊泡之脂质的溶液注射至包含抗原的水溶液中来制备的混合物放置在低于55℃例如低于50℃、低于45℃、低于40℃、低于35℃、低于30℃、低于25℃或甚至低于20℃的控温条件下。在某些实施方案中,使通过将形成囊泡之脂质的溶液注射至包含抗原的水溶液中来制备的混合物放置在20~55℃例如20~50℃、20~40℃、 20~30℃、30~55℃、30~50℃、30~40℃、40~55℃、40~50℃或50~55℃的控温条件下。应理解,术语“控温条件”不要求将温度固定在特定温度,而是简单地将温度保持在一定范围(例如,一些值的±1℃、±2℃、±5℃、±10℃等)内或者将温度保持低于或高于特定温度。
在某些实施方案中,在注射形成囊泡之脂质的溶液之前,使包含抗原的水溶液处于低于50℃例如低于45℃、低于40℃、低于35℃、低于30 ℃、低于25℃或甚至低于20℃的温度。在某些实施方案中,在注射形成囊泡之脂质的溶液之前,使包含抗原的水溶液处于20~60℃例如20~50℃、 20~40℃、20~30℃、30~60℃、30~50℃、30~40℃、30~35℃、40~60℃或 40~50℃的温度。在某些实施方案中,在注射形成囊泡之脂质的溶液之前,使包含抗原的水溶液置于温度受控下。
在某些实施方案中,当注射至包含抗原的水溶液中时,形成囊泡之脂质的溶液处于低于90℃例如低于80℃、低于70℃、低于65℃、低于60 ℃或低于55℃的温度。在某些实施方案中,当注射至包含抗原的水溶液中时,形成囊泡之脂质的溶液处于50~90℃例如50~80℃、50~70℃、50~65 ℃、50~60℃、50~55℃、55~80℃、55~70℃、55~65℃或55~60℃的温度。
已经公开了多种溶剂注射法并且可根据本公开内容进行适应。例如,脂质溶于乙醚的溶剂注射法讨论于Syan等(Nanoparticle vesicular systems:A versatile toolfor drug delivery,J.Chemical and Pharmaceutical Research 2(2):496,2010)中。在另一个实例中,脂质溶于乙醇的溶剂注射法讨论于Wagner等(Liposome Technology forIndustrial Purposes,J.Drug Delivery;Volume 2011,Article ID 591325)中。在另一个实例中,将叔丁醇用于溶解脂质,如Wang等(Colloids and Surfaces V: Biointerfaces79:254,2010)描述的。还参见Schubert M.A.等(European Journal of Pharmaceuticsand Biopharmaceutics 55:125-131,2003)中的方法。
通常通过将脂质溶于有机溶剂来制备形成囊泡的脂质。在一些实施方案中,所述溶剂为醚溶剂,例如乙醚。在一些实施方案中,所述溶剂为极性质子水可混溶有机溶剂。质子溶剂为包含可分离质子的溶剂(例如,与如羟基中的氧或如胺基中的氮相结合的氢原子)。在一些实施方案中,极性质子水可混溶有机溶剂为具有2~5个碳原子(例如,2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子或5个碳原子)的脂肪醇。在一些实施方案中,所述溶剂为叔丁醇。在一些实施方案中,所述溶剂为乙醇。
在一些实施方案中,使形成囊泡的脂质溶于极性质子水可混溶的不含任何共溶剂的有机溶剂中。在一些实施方案中,使形成囊泡的脂质溶于极性质子水可混溶的含有一种或更多种共溶剂的有机溶剂中。在一些实施方案中,一种或更多种共溶剂也是极性质子水可混溶有机溶剂。在一些实施方案中,所述极性质子水可混溶有机溶剂构成至少70%v/v例如至少 75%、80%、90%、95%或99%的溶剂系统。在一些实施方案中,使所述形成囊泡的脂质溶于无水溶剂系统。在一些实施方案中,使所述形成囊泡的脂质溶于包含一定量水的溶剂系统从而不形成囊泡。在一些实施方案中,使形成囊泡的脂质溶于包含少于5%v/v例如少于4%、3%、2%、 1%、0.5%或0.1%的水的溶剂系统。
III.囊泡制剂
在另一方面中,本公开内容提供了使用这些方法制备的含有抗原的囊泡制剂。
免疫原性囊泡制剂可用于治疗人类(包括成人和儿童)的许多疾病。然而,一般而言,其可用于任何动物。在某些实施方案中,本文中的方法可用于兽医应用,例如犬科动物和猫科动物应用。如需要,本文中的方法还可用于家畜中,例如绵羊(ovine)、禽、牛、猪和马。
一般地,以诱导免疫应答所必需或足够的量和时间施用本文所述的免疫原性囊泡制剂。给药方案可由单次给药或者一段时间内的多次给药组成。待施用抗原的确切量可因患者而变化,并且可取决于若干因素。因此应领会,一般来讲,所使用的精确剂量由处方医师来确定,其将不仅取决于患者的重量和施用途径,还取决于给药频率、患者年龄以及症状的严重程度和/或感染风险。当使用佐剂时,较低剂量的抗原可以是足够的。当口服给药时(尤其是无佐剂时),较高剂量可以更有用。
一般地,可以通过任何途径向患者施用所述制剂。在某些实施方案中,所述免疫原性制剂可以口服(包括经口腔、舌下以及通过胃灌洗(gastric lavage)或其他人工喂食方法)施用。这样的口服递送可以使用固体或液体制剂实现,例如以片剂、胶囊剂、多微粒剂(multi-particulate)、凝胶剂、膜剂、卵状剂(ovule)、酏剂、溶液剂、混悬液等形式。在某些实施方案中,当使用液体制剂时,所述制剂可以与碱性制剂(例如碳酸氢盐溶液)联合施用,从而中和胃pH。在某些实施方案中,所述碱性制剂可以在免疫原性制剂施用之前和/或之后施用。在某些实施方案中,可以在施用前将所述碱性制剂与免疫原性制剂相组合,或者将所述碱性制剂与免疫原性制剂同时施用。在某些实施方案中,本公开内容的口服施用制剂的囊泡可以是胆汁酸体。在某些实施方案中,本公开内容的口服施用制剂可以包含TLR-3或TLR-4激动剂佐剂。
在某些实施方案中,免疫原性制剂还可以配制用于肠胃外递送,例如通过注射。在这样的实施方案中,施用可以是例如静脉内、肌内、皮内或皮下施用,或者通过输注或无针注射技术。对于这样的肠胃外施用,所述免疫原性制剂可以制备并保存为常规冻干制剂,并在施用前使用可药用的盐溶液(例如0.9%的盐溶液)重溶。如本领域已知,可以用可药用的酸 (例如甲磺酸)调整注射用制剂的pH值。可使用的其他可接受的载剂和溶剂包括林格液(Ringer’s solution)和U.S.P.。此外,常规地使用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为了该目的,可以使用任何温和的不挥发性油,包括合成的单-或二甘油酯。此外,使用脂肪酸(例如油酸)制备可注射制剂。可以例如通过经滞留细菌的过滤器过滤或通过掺入无菌固体制剂形式的除菌试剂(使用前可以将其溶解或分散于无菌水或其他无菌注射用介质中)来对可注射制剂除菌。
所述免疫原性制剂还可通过鼻内或通过吸入方式施用,即以干粉吸入剂或气溶胶喷雾形式(其来自加压容器、泵、喷洒器(spray)、雾化器 (atomiser)或喷雾器(nebuliser),在使用或不使用合适抛射剂(例如,二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟烷烃、二氧化碳或者其他合适的气体)的情形下)便利地递送。在加压气溶胶的情形下,可以通过提供阀来确定剂量单位以递送计数量。所述加压容器、泵、喷洒器、雾化器或喷雾器可以含有抗体溶液或悬液,例如使用乙醇和抛射剂的混合物作为溶剂,所述溶剂还可额外地含有润滑剂(例如脱水山梨醇三油酸酯)。用于吸入器或吹药器中的胶囊和药筒(例如由明胶制成)可以配制成含有免疫原性制剂和合适粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
优选地,用于直肠施用的制剂是栓剂,其可以通过将所述免疫原性制剂与合适的无刺激性赋形剂或载体(例如可可豆脂、聚乙二醇或栓剂蜡,其在环境温度下呈固态,在体温下呈液态,因而在直肠道中熔化并释放抗体)混合而制备。还可以使用本领域已知的保留灌肠和直肠导管。增强粘稠度的载体(例如羟丙基纤维素)也是本公开内容用于直肠施用的某些载体,因为其有助于使制剂滞留在直肠内。一般地,选择向制剂中添加的载体体积以最大程度地使制剂滞留。特别地,所述体积不应大到损害所施用制剂在直肠道中的滞留。
示例性制剂
在一些实施方案中,本公开内容提供了包含抗原、TLR-3激动剂佐剂和囊泡的免疫原性制剂,所述囊泡包含非离子型表面活性剂和有助于将脂质样分子运送穿过粘膜的运送增强剂。在一些实施方案中,这些制剂可以口服施用。在一些实施方案中,所述TLR-3激动剂佐剂包含聚(I:C)。在一些实施方案中,所述TLR-3激动剂佐剂包含聚(IC:LC)。在一些实施方案中,所述运送增强剂是胆汁酸、其衍生物或者这些中任一种的盐(例如,脱氧胆酸钠)。在一些实施方案中,所述非离子型表面活性剂是甘油酯(例如,1-单棕榈酰基甘油)。在一些实施方案中,所述囊泡还包含离子型两亲物(例如,二鲸蜡基磷酸酯/盐)。在一些实施方案中,所述囊泡还包含类固醇(例如,胆固醇)。在一些实施方案中,所述囊泡包含1-单棕榈酰基甘油、二鲸蜡基磷酸酯/盐、胆固醇和脱氧胆酸钠。
在一些实施方案中,本公开内容提供了包含抗原、TLR-3激动剂佐剂和囊泡的免疫原性制剂,所述囊泡包含非离子型表面活性剂。在一些实施方案中,这些制剂可以肠胃外施用(例如,通过肌内注射)。在一些实施方案中,所述TLR-3激动剂佐剂包含聚(I:C)。在一些实施方案中,所述TLR-3激动剂佐剂包含聚(IC:LC)。在一些实施方案中,非离子型表面活性剂是甘油酯(例如,1-单棕榈酰基甘油)。在一些实施方案中,所述囊泡还包含离子型两亲性分子(例如,二鲸蜡基磷酸酯/盐)。在一些实施方案中,所述囊泡还包含类固醇(例如,胆固醇)。在一些实施方案中,所述囊泡包含1-单棕榈酰基甘油、二鲸蜡基磷酸酯/盐和胆固醇。在一些实施方案中,所述囊泡可以不含运送增强分子。在一些实施方案中,所述囊泡可以不含“胆汁酸”例如胆酸和鹅脱氧胆酸、其与甘氨酸或牛磺酸的缀合产物(例如甘胆酸和牛磺胆酸)、衍生物(包括脱氧胆酸和熊脱氧胆酸) 以及这些酸各自的盐。在一些实施方案中,所述囊泡可以不含酰氧基化的氨基酸,例如酰基肉毒碱及其盐以及棕榈酰基肉毒碱。
在一些实施方案中,本公开内容提供了包含抗原、TLR-4激动剂佐剂和囊泡的免疫原性制剂,所述囊泡包含非离子型表面活性剂和有助于脂质样分子运送穿过粘膜的运送增强剂。在一些实施方案中,这些制剂可以口服施用。在一些实施方案中,所述TLR-4激动剂佐剂包含单磷酰脂质A 或3-脱酰基单磷酰脂质A。在一些实施方案中,所述运送增强剂是胆汁酸、其衍生物或者这些中任一种的盐(例如脱氧胆酸钠)。在一些实施方案中,所述非离子型表面活性剂是甘油酯(例如1-单棕榈酰基甘油)。在一些实施方案中,所述囊泡还包含离子型两亲物(例如二鲸蜡基磷酸酯/盐)。在一些实施方案中,所述囊泡还包含类固醇(例如胆固醇)。在一些实施方案中,所述囊泡包含1-单棕榈酰基甘油、二鲸蜡基磷酸酯/盐、胆固醇和脱氧胆酸钠。
在一些实施方案中,本公开内容提供了包含抗原、TLR-4激动剂佐剂和囊泡的免疫原性制剂,所述囊泡包含非离子型表面活性剂。在一些实施方案中,这些制剂可以肠胃外施用(例如通过肌内注射)。在一些实施方案中,所述TLR-4激动剂佐剂包含单磷酰脂质A或3-脱酰基单磷酰脂质 A。在一些实施方案中,所述非离子型表面活性剂是甘油酯(例如1-单棕榈酰基甘油)。在一些实施方案中,所述囊泡还包含离子型两亲物(例如二鲸蜡基磷酸酯/盐)。在一些实施方案中,所述囊泡还包含类固醇(例如胆固醇)。在一些实施方案中,所述囊泡包含1-单棕榈酰基甘油、二鲸蜡基磷酸酯/盐和胆固醇。在一些实施方案中,所述囊泡可以不含运送增强分子。在一些实施方案中,所述囊泡可以不含“胆汁酸”例如胆酸和鹅脱氧胆酸、其与甘氨酸或牛磺酸的缀合产物(例如甘胆酸和牛磺胆酸)、衍生物(包括脱氧胆酸和熊脱氧胆酸)以及这些酸各自的盐。在一些实施方案中,所述囊泡可以不含酰氧基化的氨基酸,例如酰基肉毒碱及其盐以及棕榈酰基肉毒碱。
IV.药盒
在另一个方面中,本公开内容提供了药盒,其包含第一容器中本公开内容之任何冻干的、含有抗原的囊泡制剂和第二容器中的水溶液(任选地含有佐剂)。在一些实施方案中,所述药盒还包含将所述两个容器中的内含物混合以使含有抗原的囊泡制剂再水化的说明书。
在一些实施方案中,所述药盒可包含额外的组分,例如用于将含有抗原的囊泡制剂注射至患者中的注射器。
实施例
下列实施例描述了制备和实施本文所述之某些制剂的一些示例性方式。应当理解,这些实施例仅用于举例说明目的,而不意在限制本文所述之制剂和方法的范围。
实施例1:冻干的流感制剂
本实施例描述了用于制备用于通过肌内(IM)注射进行免疫原性测试之冻干流感制剂的不同方法。
脂质体氯仿法
下述实施例所使用的脂质体氯仿(CHCl3)法(描述于Alving等的美国专利No.5,910,306中)涉及下述步骤。将9∶7.5∶1摩尔比的脂质(1,2- 二-十四烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DMPC)、胆固醇(CHO)和1,2-二 -十四烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1′-rac-甘油)(DMPG))放置于圆底玻璃烧瓶的底部(170.09mg DMPC、81.74mg CHO、19.64mg DMPG)。添加四至十毫升氯仿以溶解脂质并且偶尔涡动(swirl)10~20分钟。使用另外的氯仿(1mL)以冲洗容器。将烧瓶放置在旋转蒸发器中以80rpm于45 ℃旋转48至120分钟。通过使用真空泵除去溶剂直到形成覆盖圆底烧瓶底部的干燥脂质薄膜。蒸发后,从旋转蒸发器中移出圆底烧瓶,用棉纸 (tissue paper)覆盖,然后使用最大真空压在干燥器中放置至少18小时。从干燥器中移出具有干燥薄膜的烧瓶。在30℃~35℃的热水浴中一起添加(2009-2010季)(Sanofi Pasteur)和浓磷酸盐缓冲剂(15ml 和0.289ml磷酸盐缓冲剂),保持5分钟。(2009-2010 季)(Sanofi Pasteur)为灭活的三价A型和B型疫苗(裂解病毒体),其中每0.5ml剂量包含下述流感病毒毒株各自的15μg HA抗原:H1N1, A/布里斯班/59/2007;H3N2,A/乌拉圭/716/2007(A/布里斯班/10/2007样毒株)和B/布里斯班/60/2008。将溶液和10~15个玻璃球添加至烧瓶中。通过使混合物以220rpm和在30℃~35℃下振摇/孵育8小时来形成脂质体混合物。将相等体积的400mM蔗糖溶液(用无菌水制备)添加至脂质体混合物中并在30℃~35℃下以220rpm再振摇5分钟。以1.50ml 份/瓶等分所得溶液,在-80℃下冷冻过夜并冻干。在使用前,将冻干瓶在 4℃下贮存3周。在免疫前用0.75ml注射用(WFI)水重溶每瓶冻干的脂质体配制的
熔化法
下述实施例所使用的熔化法(描述于Alexander等的美国专利 5,679,355中)涉及下列步骤。将5∶4∶1摩尔比的脂质(单棕榈酰基甘油、胆固醇和二鲸蜡基磷酸酯/盐)放置于平底玻璃烧杯的底部(119.29mg MPG、112.20mg CHO、39.02mg DCP)。在120℃~125℃下加热的油浴中使脂质熔化并且将烧杯偶尔涡动。在60℃的热水浴中一起添加 (2009-2010季)(Sanofi Pasteur)和浓磷酸盐缓冲剂(15ml和 0.289ml磷酸盐缓冲剂),保持5分钟。将熔化的脂质混合物(仍在烧杯中)从120℃~125℃的油浴转移至60℃的水浴中,然后将预先加热(60 ℃)的溶液立即添加至熔化的脂质中并在60℃以8000rpm均质化10分钟。之后,在30℃~35℃下以220rpm使NISV混合物振摇2小时。添加相等体积的400mM蔗糖溶液(用无菌水制备)并在30 ℃~35℃以220rpm使混合物再振摇另外的5分钟。以1.50ml份/瓶等分所得溶液,在-80℃下冷冻过夜并冻干。在使用前,将冻干瓶在4℃下贮存 3周。在免疫前用0.75ml WFI无菌水重溶每瓶冻干的NISV配制的
熔化法-低温抗原添加
下述实施例所使用的用低温抗原添加的熔化法涉及下列步骤。将 5∶4∶1摩尔比的脂质(单棕榈酰基甘油(MPG)、胆固醇(CHO)和二鲸蜡基磷酸酯/盐(DCP))放置于平底玻璃烧杯的底部(119.00mg MPG、 112.64mg CHO、39.13mg DCP)。在加热的油浴中在120℃~125℃下使脂质熔化并且将烧杯偶尔涡动。在30℃的加热水浴中一起添加 (2009-2010季)(Sanofi Pasteur)和浓磷酸盐缓冲剂(15ml和 0.289ml磷酸盐缓冲剂),保持5分钟。将熔化的脂质混合物(仍在烧杯中)从120℃~125℃的油浴转移至30℃的水浴,然后将预先加热(30℃) 的溶液立即添加至熔化的脂质中并在30℃以8000rpm均质化10分钟。之后,在30℃~35℃下以220rpm使NISV混合物振摇 2小时。添加相等体积的400mM蔗糖溶液(用无菌水制备)并在30℃~35 ℃以220rpm使混合物再振摇另外的5分钟。以1.50ml份/瓶等分所得溶液,在-80℃下冷冻过夜并冻干。在使用前,将冻干瓶在4℃下贮存3周。在免疫前用0.75ml WFI无菌水重溶每瓶冻干的NISV配制的
反向熔化法
下述实施例所使用的反向熔化法涉及下列步骤。将5∶4∶1摩尔比的脂质(单棕榈酰基甘油(MPG)、胆固醇(CHO)和二鲸蜡基磷酸酯/盐(DCP)) 放置于平底玻璃烧杯的底部(119.14mg MPG、112.46mg CHO、39.67mg DCP)。在120℃~125℃下加热的油浴中使脂质熔化并且将烧杯偶尔涡动。在30℃~35℃下加热的水浴中一起添加(2009-2010季)(Sanofi Pasteur)和浓磷酸盐缓冲剂(15ml和0.289ml磷酸盐缓冲剂),保持5分钟。使均质机以8000rpm开始对疫苗均质化,之后将熔化的脂质立即转移至均质化的中并在30℃~35℃下继续均质化 10分钟。在30℃~35℃下以220rpm将NISV混合物振摇2小时。添加相等体积的400mM蔗糖溶液(用无菌水制备)并在30℃~35℃以220 rpm使混合物再振摇另外的5分钟。以1.50ml份/瓶等分所得溶液,在-80℃下冷冻过夜并冻干。在使用前,将冻干瓶在4℃下贮存3周。在免疫前用0.75ml WFI无菌水重溶每瓶冻干的NISV配制的
溶剂注射法
在实施例中,溶剂注射法涉及将包含形成囊泡之脂质的温热溶剂溶液 (55~65℃)注射至水性的包含抗原的溶液(30~35℃)中。研究溶剂注射法作为替选方法用于制备在将熔化的脂质添加至抗原水溶液期间不需要高温的囊泡。形成囊泡的脂质和抗原的量与在反向熔化法中所使用的量类似;但是,不是在加热的油浴中使脂质熔化,而是在叔丁醇(TBA)的温热溶剂溶液中使脂质熔化并且之后将其分散至水性的含抗原溶液中,同时均质化或搅拌。
实施例2:用流感制剂免疫小鼠
在6~8周龄的雌性BALB/C小鼠(每个测试组最少8只动物)中测试通过如实施例1中描述的不同方法制备的流感制剂,将未配制的市售(2009-2010季)(SanofiPasteur)(组5)充当阳性对照。在第 0天用50μl再水化制剂肌内(IM)免疫小鼠一次。在免疫前和免疫后(免疫后14天)从研究组的所有小鼠中收集血液,以评估体液免疫应答。具有多种测试制剂的研究设计示于表2中。
表2
*每50μl小鼠剂量的含量(小鼠接受人剂量(2009-2010季) (SanofiPasteur)的1/10)。(2009-2010季)(Sanofi Pasteur) 为灭活的三价A型和B型流感疫苗(裂解病毒体)。每0.5ml人剂量的(2009-2010季)包含下述流感病毒毒株各自的15μg HA抗原: H1N1,A/布里斯班/59/2007;H3N2,A/乌拉圭/716/2007(A/布里斯班 /10/2007样毒株);和B/布里斯班/60/2008。
实施例3:流感制剂的HA含量的sELISA
通过基于密度的离心将每个测试物质分成两部分来制备实施例2的测试物质以用于ELISA分析。简要地,在4900μl NaHCO3(pH 7.6)中稀释100μl一式两份的样品(duplicatesample)。使用固定角转子50.4Ti 以24K使溶液在4℃下离心10分钟。之后将沉淀物(pellet)和上清液中的抗原经受抗原提取程序。用25%Triton X-100直接提取上清液中的抗原,而使沉淀物重悬于NaHCO3缓冲剂(pH 7.6)中,之后用25%Triton X-100提取抗原。将提取的样品在室温下旋转30分钟,声处理5秒,之后在室温下再旋转10分钟。使该程序再重复两次,然后将样品用于ELISA 分析。如上所述还一式两份地制备了市售疫苗的阳性对照,并且在没有提取过程的情况下分析市售疫苗中的一个样品。
之后如下地通过夹心ELISA(sELISA)分析测试物质和对照的抗原含量。在4℃下用捕获抗体的包被溶液(碳酸盐-碳酸氢盐缓冲剂(pH 9.7) 中1/500稀释的抗A/布里斯班H1N1HA血清)包被96孔ELISA板过夜。第二天早上将包被溶液从板中除去,之后添加封闭溶液(ELISA洗涤缓冲剂(PBS中的0.05%Tween 20)中的5%FBS)并将板在37℃下封闭 1~3小时。孵育后,用ELISA洗涤缓冲剂(PBS中的0.05%Tween 20) 洗涤板。制备样品在ELISA洗涤缓冲剂(PBS中的0.05%Tween 20)中 5%FBS的起始稀释液并且进行7个连续的2倍稀释。将样品和标准物添加至96孔ELISA板中并在37℃下孵育1.5小时。在洗涤缓冲剂中将板洗涤6次并且与作为一抗的针对流感H1N1 HA的兔多克隆抗体的1/500稀释液在37℃下孵育1.0小时。在洗涤缓冲剂中将板洗涤六次并且与山羊抗兔IgG-Fc HRP缀合二抗(Bethyl)的1/10000稀释液在37℃下孵育1.0 小时。将板洗涤六次并且用100μl TMB底物处理8分钟。添加100μl TMB 终止液以终止反应。用ELISA板阅读器(Bio-Rad)在450nm下读取吸光度。确定OD450读数并且使用板阅读软件(soft Max)分析结果(原始数据)。使用标准曲线的值计算每个样品中HA的浓度。对于每个流感毒株相关蛋白而言,标准曲线的线性部分在0.1-7.5ng/ml。对于每个样品而言,使用给定标准曲线线性部分范围之浓度的稀释以计算原始样品浓度。通过将上清液和沉淀物中HA含量相加来推算总HA含量。
实施例2的测试物质的总HA含量(H1N1毒株)示于表3中。
表3
反向熔化法产生了所有测试物质中最高的总HA(H1N1毒株)。在反向熔化法中将熔化的脂质混合物添加至抗原溶液中,而在两种其他的 NISV配制方法中将抗原溶液添加至熔化的脂质混合物中。反向熔化法的反向性质提高了总HA含量。结果还显示出抗原添加的温度是配制方法的一个重要变量。事实上,在熔化法中降低抗原添加的温度导致了较高的总 HA含量(63%相对于38%)。
实施例4:流感制剂的效能的血凝素抑制测定
对于效能测试,血凝素抑制(Hemagglutinin Inhibition,HAI)测定用于测量动物中的免疫学应答。HAI测定是用于检测由感染或免疫接种流感病毒所造成之血清中HA抗体的血清学技术,并且HAI效价与在人中抵御流感有关。在结合至并阻断病毒血凝素之抗体的存在下不会发生血细胞凝集。将在孔中引起所有红细胞(RBC)之血细胞凝集的最少量的病毒称为一个血细胞凝集单位(hemagglutinating unit,HAU)。如果针对给定数目的HAU滴定抗血清,那么可确定血细胞凝集抑制(HAI)效价和抗血清的特异性。另外,如果将已知特异性的抗血清用于抑制血细胞凝集,那么可确定未知病毒的抗原类型。当病毒体凝集(附着)于RBC从而引起晶格形成时,则发生血细胞凝集。如果没有发生血细胞凝集,那么 RBC将沉淀在孔的底部并形成点。HAI效价表示为使用四个血细胞凝集单位显示完全血细胞凝集之最大血清稀释的倒数。认为1∶40或更高的HAI 效价是血清保护性的,并且免疫接种之后与之前的所取得的样品中HAI 效价的四倍增加是认为对血清转化之分类所必须的最小增加。结果表示为 HAI效价和几何平均(geometric mean,GMT)HAI效价的倒数。如下进行HAI测定。简要地,在96孔V底板中制备来自经免疫小鼠之血清的 PBS中的一系列2倍稀释并且将其与50μl四个血细胞凝集单位的A/布里斯班/59/07(H1N1)或A/布里斯班/10/2007(H3N2)在室温下孵育30分钟。接下来,将50μl鸡RBC(0.5%v/v稀释)(Canadian Food InspectionAgency,Ottawa,Canada)添加至板上的所有孔中并且在室温下孵育30 分钟。之后确定能够凝集鸡RBC的最大稀释度。
在该小鼠研究中,我们评估了实施例2的表2中同一制剂的效能。表 4示出了在首次免疫后14天(PlVd14)针对H1N1 A/布里斯班/59/07或 H3N2 A/布里斯班/10/2007的HAI效价的GMT。
表4
对于用通过反向熔化法配制成NISV的处理的组而言针对 H1N1的HAI效价等于市售的疫苗对照(42)并且高于用通过两种熔化法各自配制成NISV的处理的组(34和31),且还高于通过氯仿法配制的脂质体(28)。对于用通过反向熔化法配制成NISV的处理的组而言针对H3N2的HAI效价(48)显著地高于用通过熔化法配制成NISV的处理的组(10)并且还高于通过氯仿法配制的脂质体(32)。对于用通过以低温抗原添加之熔化法配制成NISV的处理的组而言针对H3N2的HAI效价(50)与用通过反向熔化法配制成 NISV的处理的组(48)相当。这些结果还确证了配制方法的重要性并且表明三价疫苗中的一些HA毒株(H3N2)比其他的更加不耐热,因此其对所用配制方法更敏感。
实施例5:热稳定性冻干流感制剂的稳定性测试
在两种贮存温度条件(5℃±3℃和40℃±2℃)下对冻干流感制剂(NISV 和脂质体)(例如,如通过实施例1中描述的多种方法所制备)的稳定性评估长达7.5个月。没有描述生物产品之稳定性特征的单一表明稳定性的测定或参数。如FDA所定义的(FDA Guidancefor Industry.Content and Format of Chemistry,Manufacturing and ControlsInformation and Establishment Description Information for a Vaccine orRelated Product),疫苗的稳定性研究通常应测试:效能;表明稳定性的物理化学测量值;水分含量(如果被冻干);pH;灭菌或控制生物负荷;热原性和一般安全性。因此,使用许多测定的表明稳定性的谱为检测产品之同一性、纯度和效能中的变化提供了保障。
效能是产品实现其预期作用的特定能力并且通过合适的体内或体外定量方法进行测定。药物产品的效能测定应是敏感的和特异的。体内小鼠效能测定用于评估贮存的经配制和未经配制免疫原性制剂随时间的效能。通过肌内途径向小鼠施用制剂并且使用实施例4中描述的HAI测定来确定其免疫应答。还使用物理化学、生物化学和免疫化学分析方法表征抗原的变化(例如,分子大小、电荷、疏水性)并检测任何降解物。还可用水重溶制剂并测试外观(颜色和不透明性)、溶解时间、粒度分布(PSD)、 pH和ζ电势(zeta potential)。重溶后经4~6小时测试重溶材料的稳定性。在特定的时间点,使用HPLC对冻干制剂中的赋形剂(脂质)分析纯度和相关化合物。使用Karl Fischer测定评估冻干制剂中的水分含量。用于稳定性研究的制剂不是无菌的。但是,制剂涉及使脂质赋形剂加热至>100 ℃并且将熔化的脂质添加至包含无菌市售疫苗产品的经无菌过滤的缓冲溶液中。在低生物负荷条件下(例如在层流罩中)进行配制过程,并且在冻干期间使用Tyvek无菌袋并使用无菌氮回填。可使用合适的方法在稳定性时间点开始和结束时评估微生物含量。
在进行稳定性研究(后文称为研究)期间ICH Harmonized TripartiteGuideline:Stability Testing of New Drug Substances and Products. Q1A(R2)中所述的一般建议如下。表5中列出了提出的冻干热稳定流感制剂的表明稳定性的测试和温度方案。
表5
*月约为4周;T=3和T=6表示提出的日期。
X-所需测试;O-任选测试
表6中示出了在4℃和40℃下贮存7.5个月后实施例2中描述的测试物质的总HA含量(H1N1毒株)(如实施例3中描述所测定的HA含量)。
表6
反向熔化法、低温抗原添加的熔化法和脂质体氯仿法均产生了具有相当的高总HA(H1N1毒株)含量的测试物质。熔化法产生了具有显著较低总HA(H1N1毒株)含量的制剂。这些结果是针对在4℃下贮存7.5个月的测试物质并且与在t=0时获得且示于表3中的结果相当。在反向熔化法中,将熔化的脂质混合物添加至抗原溶液中,而在两种其他的NISV制剂熔化法中将抗原溶液添加至熔化的脂质混合物中。反向熔化法的反向性质与熔化法相比提高了总HA含量。结果还示出了抗原添加的温度是配制方法的重要变量。事实上,在熔化法中降低抗原添加的温度导致了较高的总HA含量(63.95%相对于36.82%)。在脂质氯仿法中消除作为变量的温度也导致了较高的总HA含量(71.95%)。当测试物质在40℃下贮存 7.5个月时,与市售疫苗(其显示出总HA含量降低了约50%)相比,所有测试物质均保留其总HA含量,这表明所有的包含脂质之制剂关于HA 含量均具有相等的热稳定性。
表7示出了在4℃和40℃下贮存7.5个月后表6的制剂的效能(如实施例4中描述所测定的HAI效价)。表7示出了在如实施例2中描述的小鼠研究中首次免疫后十四天(P1Vd14)针对H1N1 A/布里斯班/59/07或 H3N2 A/布里斯班/10/2007的HAI效价的GMT。
表7
对于用通过反向熔化法配制成NISV的处理的组而言针对 H1N1的HAI效价(48)高于市售疫苗对照(31)并且高于用通过两种熔化法各自配制成NISV的处理的组(34和22)且还高于通过氯仿法配制的脂质体(14)。对于用通过反向熔化法配制成NISV的处理的组而言针对H3N2的HAI效价(22)等同于市售疫苗(20) 并且高于用通过熔化法配制成NISV的处理的组(10)且还高于通过氯仿法配制的脂质体(11)。对于用通过低温抗原添加的熔化法配制成NISV的处理的组而言针对H3N2的HAI效价(17)略低于用通过反向熔化法配制成NISV的处理的组(22)。这些结果针对在4℃下贮存7.5个月的测试物质并且还确证了配制方法的重要性且表明三价疫苗中的一些HA毒株(H3N2)比其他的更加不耐热,因此其对所用配制方法更敏感。当测试物质在40℃下贮存7.5个月时,与市售疫苗 (其显示出针对H1N1和针对H3N2的HAI效价降低了约50%)相比,所有的测试物质均保留其针对H1N1和针对H3N2的HAI效价,表明所有的包含脂质之制剂关于效能均具有相等的热稳定性。
表8示出了与反向熔化法相比(如实施例3中描述所测定的HA含量),通过作为替选方法的实施例1中描述的溶剂注射法制备的测试物质在4℃和40℃下贮存3个月后的总HA含量(H1N1毒株)。
表8
反向熔化法和溶剂注射法(研究作为用于制备在将熔化的脂质添加至抗原水溶液期间不需要高温的脂质体的替选方法)均产生了具有相当的高总HA(H1N1毒株)含量的测试物质。这些结果针对在4℃下贮存3个月的测试物质并且与在t=0时获得的结果相当(数据未示出)。在反向熔化法中将熔融的脂质混合物添加至抗原溶液中,而在溶剂注射法中使脂质溶于溶剂中(与脂质体氯仿法类似)并分散至抗原水溶液中。当测试物质在40℃贮存3个月时,与市售疫苗(其显示出总HA含量降低了约70%) 相比,这两种制剂均保留其总HA含量,表明两种制剂关于HA含量均具有相等的热稳定性。
表9示出了如表8中的相同制剂在4℃和40℃下贮存3个月后的效能 (如实施例4中描述所测定的HAI效价)。如实施例2中描述的测定效能,除了在第14天给出了第二次免疫。表9示出了在第二次免疫后十四天 (P2Vd14)针对H1N1A/加利福尼亚/7/2009或H3N2A/珀斯/16/2009的 HAI效价的GMT。
表9
对于用通过反向熔化法配制成NISV的处理的组而言针对 H1N1的HAI效价(483)等同于市售疫苗对照(488)并且高于用通过溶剂注射法制备的配制成NISV的处理的组(202)。对于用通过反向熔化法配制成NISV的处理的组而言针对H3N2的HAI效价 (250)略高于市售疫苗(164)并且高于用通过溶剂注射法制备的配制成NISV的处理的组(136)。这些结果针对在4℃下贮存3个月的测试物质并且还确证了配制方法的重要性。这些结果表明三价疫苗中的一些HA毒株(H3N2)比其他的更加不耐热,因此其对所用的配制方法更敏感。当测试物质在40℃下贮存3个月时,与市售疫苗(其显示出针对 H1N1和针对H3N2的HAI效价显著降低了约90%)相比,反向熔化法和溶剂注射法测试物质保留其针对H1N1和针对H3N2的HAI效价,表明包含脂质的制剂关于效能具有相等的热稳定性。
实施例6:NISV的差示扫描量热法分析
差示扫描量热法(differential Scanning Calorimetry,DSC)在研究材料的热特性中是广泛使用的应用。通过材料的DSC所获得的数据可给出一系列热特性,包括相变和热容变化,这些是药物递送制剂加工的关键因素,该加工使得针对待研究之特定材料的温度变化及其对随后制剂的影响。DSC针对在相同的程序和大气条件下测量样品盘与参照盘的热能差异的原则而工作。最初,在固体阶段使用TA仪器Q200热分析DSC单独地分析脂质组分(MPG、CHO和DCP)。将单种脂质放置在铝盘中,确保样品的重量保持恒定,以确保精确的焓数据。各脂质测试后,还测试以适当比率的脂质(5∶4∶1)制备的粉末共混物,以观察脂质在一起的总体熔化温度。用于DSC的方法在0~160℃的温度范围内具有10℃/分钟的加热速率。为了制备双层囊泡,以适当比率混合粉末形式的脂质组分(如实施例1描述的,低温抗原添加的熔化法但使用模拟抗原溶液)并且在油浴中熔化,同时维持熔融的脂质混合物。通过添加6ml 25mM碳酸氢钠缓冲剂pH 7.6(30℃)并均质化10分钟来产生乳剂。没有抗原存在。冷却后,使NISV制剂孵育2小时并以220rpm温和振摇。
图1示出了在混合之前固体状态的单种组分的DSC扫描。可看到每种脂质的宽熔化范围,具有最低熔点的MPG在69.98℃,随后的DCP在 75.85℃以及CHO(胆固醇)的最高熔化开始点为148.75℃。这些与之前报道的由制造商所述的组分的熔点一致。该初始信息表明为了实现熔融状态,脂质需要加热至约150℃。但是,之前的方案(例如,实施例1描述的熔化法)表明可通过仅加热至120或140℃(其低于胆固醇熔点)来熔化这些脂质。但是,在该温度下,这些脂质这样的条件下的热重量分析研究导致了2.1%的重量损失,表明使这些脂质加热至这样的高温是有害的。为了调查脂质的粉末共混物是否具有与单种组分类似的性质,还类似地分析了脂质混合物。从图1可以看出,在组合中,所有三种脂质一起熔化,在相当于MGP熔点的69.98℃具有单一的主要转变。这些结果表明高熔点胆固醇可与其他两种脂质互相交错,使得当从DSC提高质量时粉末共混物可在约95℃的温度下熔化,即显著地低于之前所报道的。
从NISV制剂还得到冷冻断裂图像,从而分析NISV的物理外观。将样品的小滴放置在有脊状线的金样本上或夹在两个铜板支持物之间,并且在液氮下立即冷冻。在-115℃的温度下在Balzers装置上进行断裂。之后在透射电子显微镜下筛选产生的蚀刻。图2显示了NISV的冷冻断裂图像,其示出大的切片囊泡和其下的较小未受影响的囊泡。左下角的比例尺表示 0.5μm。图2确证了双层的存在;可看到所产生的NISV为球形和多层状,在较大的囊泡中可看见层。
实施例7:使用MPG、CHO和DCP的单层研究
使用在隔离区中装配铂Wilhelmy板的KSV mini trough Langmuir 系统(KSVInstruments Ltd,Helsinki,Finland)进行单种脂质(MPG、 CHO和DCP)和5∶4∶1比例之MPG∶CHO∶DCP的脂质混合物的单层研究。合成的胆固醇SynthecolTM用于CHO组分。过滤的双蒸水形成用于这些研究的亚相并且使用外部水循环系统使水槽的温度在20±1℃保持恒定。在氯仿中以0.5mg/mL制备单种脂质的贮存溶液并且也在氯仿中以设定比率制备混合物。使用精确至±0.2μl的玻璃Hamilton注射器将20μl 脂质贮存溶液涂在空气/水界面上。在将样品涂在界面上之后,留下氯仿以蒸发并且亲水性障碍以10mm/分钟的设定关闭,以形成单层等温线。每个样品被运作一次直至坍塌点,之后采用新鲜样品进行样品的三次重复。根据KSV仪器软件分析数据。来自单种单层研究的结果(表3)表明,5∶4∶1(MPG∶CHO∶DCP)的理论脂质混合物可导致29.2A2/分子的平均分子面积(表10)。表10显示出混合单层和纯单层在MPG、CHO、 DCP和比率5∶4∶1(MPG∶CHO∶DCP)之混合物的空气/水界面的实验和理论推测的平均分子面积以及表面面积压缩压力(n=3)。所获得的实验值导致28.3A2/分子的平均分子面积,示出与理论值的最小0.9%偏差。这些数据表明单层内没有更有优势的脂质并且均一的单层倾向脂质的平均分布。
表10
实施例8:NISV的胰蛋白酶消化研究
由如实施例1描述的四种不同方法制备了NISV制剂。将作为放射性示踪剂的经放射性标记的I125H1N1添加至Fluzone溶液中。随后使制剂与胰蛋白酶(1∶2的抗原∶胰蛋白酶重量比)在37℃下孵育0、15、30和 60分钟。之后在双蒸水中使制剂离心两次(100,000rpm进行40分钟) 以使未并入的抗原与缔合/并入的抗原相分离。在离心和胰蛋白酶消化之前和之后对于放射性分析所得沉淀物(缔合/并入的抗原)。
图4示出了对由四种不同方法(即,反向熔化法、熔化法、熔化法- 低温抗原添加和脂质体氯仿法)制备的NISV的胰蛋白酶消化研究的结果。在图4A中,在时间0(即,胰蛋白酶消化之前)和胰蛋白酶消化15、 30或60分钟后显示出通过NISV的百分比抗原包封/缔合(经洗涤的沉淀物中的放射性)。反向熔化法在时间0时相比于其他两种熔化法似乎具有约2~2.5的更高的包封/缔合抗原并且相比于脂质氯仿法具有几乎10倍的更高的包封/缔合抗原。基于初步研究,推断包封的抗原应不易受胰蛋白酶消化的影响,而缔合的抗原应易受胰蛋白酶消化的影响。图4B示出了与图4A相同的数据,只是在时间0时将值归一化为百分比。这使得在与胰蛋白酶孵育后抗原的百分比保留更易可视化。如所示,对于反向熔化法制剂而言对百分比抗原保留没有影响,这表明抗原大部分被包封,不仅仅是缔合,缔合时易受胰蛋白酶消化的影响。熔化法显示出了百分比抗原保留的约50%降低,这表明50%抗原被缔合并且易受胰蛋白酶消化的影响以及50%抗原被包封并且不易受胰蛋白酶消化的影响。熔化法-低温抗原添加和脂质体氯仿法显示出了对抗原保留之百分比的中介效应(intermediate effect),表明使用这两种配制方法包封了抗原的主要部分,具有较少的缔合且易受胰蛋白酶消化之影响的量。
实施例9:NISV的低温透射电子显微镜分析
低温透射电子显微镜(低温-TEM)用于分析如实施例1中描述所制备的NISV制剂。用于低温-TEM的样品制备如下:从贮存器(2~8℃) 中取出冷冻干燥的制剂并用750μl蒸馏水重溶,振摇45秒,之后剧烈涡旋1分钟以完成重悬。将15μl经重悬的制剂应用至在使用前已被辉光放电的琼脂科学莱西碳网(agar scientific lacey carbon grid)的两侧。通过用滤纸从网格吸除(blot)过量制剂。紧接吸除之后,将网格在液体氮/ 乙烷混合物中浸没/淬灭10秒并保持在液氮中直到将网格放置在Gatan 655系列低温固定器(cryo holder)(70度倾斜模型,也在液氮条件下保持浸没)上。之后通过用具有Gatan Ultrascan 1000照相机的Jeol 2011 LaB6显微镜分析网格上的制剂。
图5显示了通过(A)反向熔化法、(B)熔化法、(C)熔化法-低温抗原添加、和(D)脂质体氯仿法制备的囊泡的低温-TEM图像。通常,在所有的四种制剂中均有大量的囊泡穿过网格。低温-TEM图像中的深色区表示密集的球形囊泡。囊泡内的深色阴影由囊泡的球形性质所造成;因此,较大的囊泡趋于具有较大的曲率和较深的着色。低温-TEM的限制是,在吸除阶段期间,较大的囊泡趋于从网格除去至吸除纸(blotter)上,因此没有表现出来。该人工制品(artifact)施用至制剂制备物的所有四种方法。在图5A中,具有10分钟均质化的反向熔化法(如实施例1中描述的) 产生相对均一的较小囊泡群体;整体上所形成的囊泡较少为多层的并且在形状和大小上更均一。在图5B中,熔化法产生了整体上较少的囊泡并且与反向熔化制剂囊泡群体相比没有均一的囊泡群体。在图5C中,低温抗原添加的熔化法产生低于1μm的囊泡选择。与反向熔化法类似,与熔化法制剂相比,图像中明显有更多的囊泡。在图5D中,脂质氯仿法产生了在大小为200nm至最多约1微米的多个囊泡。该配制方法产生了大囊泡,与其他三种制剂方法相比时,在形状上不均一。
通过引用的并入
本文中提及之任何参考文献的内容均通过引用以其整体并入本文。
其他实施方案
本说明书和实施例旨在仅被认为用作示例。考虑到本文中公开的说明书或所述方法的实施、制剂和药盒,其他实施方案对于本领域技术人员而言将是显而易见的。
以下内容对应于原申请的权利要求书:
1.方法,其包括:
提供形成囊泡之脂质的熔融混合物;以及
将所述形成囊泡之脂质的熔融混合物添加至包含抗原的水溶液中以形成含有抗原的囊泡,其中在所述添加步骤中所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于低于120℃的温度。
2.方法,其包括:
提供形成囊泡之脂质的熔融混合物;以及
将包含抗原的水溶液添加至所述形成囊泡之脂质的熔融混合物中以形成含有抗原的囊泡,其中将所得混合物放置在低于60℃的控温条件下。
3.根据实施方案2所述的方法,其中在添加步骤之前将所述形成囊泡之脂质的熔融混合物放置在低于60℃的控温条件下。
4.根据实施方案2所述的方法,其中在所述添加步骤之前不将所述形成囊泡之脂质的熔融混合物放置在低于60℃的控温条件下。
5.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤中所述包含抗原的水溶液处于低于约50℃的温度。
6.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述包含抗原的水溶液处于低于约40℃的温度。
7.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述包含抗原的水溶液处于低于约30℃的温度。
8.根据实施方案1所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述包含抗原的水溶液的温度是受控的。
9.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上50℃的温度。
10.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上40℃的温度。
11.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上30℃的温度。
12.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上20℃的温度。
13.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上10℃的温度。
14.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上5℃的温度。
15.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于低于约110℃的温度。
16.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于低于约100℃的温度。
17.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于低于约90℃的温度。
18.根据实施方案1或2所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述形成囊泡之脂质的熔融混合物处于低于约80℃的温度。
19.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡的脂质包含磷脂。
20.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡的脂质包含非离子型表面活性剂。
21.根据实施方案20所述的方法,其中所述非离子型表面活性剂为甘油酯。
22.根据实施方案20所述的方法,其中所述非离子型表面活性剂为二醇或二醇醚。
23.根据实施方案20所述的方法,其中所述非离子型表面活性剂为 1-单棕榈酰基甘油。
24.根据实施方案20所述的方法,其中所述非离子型表面活性剂为 1-单鲸蜡基甘油醚或二甘醇鲸蜡基醚。
25.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的熔融混合物还包含有助于将脂质运送穿过粘膜的运送增强剂。
26.根据实施方案25所述的方法,其中所述运送增强剂为胆固醇衍生物,其中侧链的C23碳原子携带羧酸。
27.根据实施方案25所述的方法,其中所述运送增强剂为胆酸、鹅脱氧胆酸或其盐。
28.根据实施方案25所述的方法,其中所述运送增强剂为甘胆酸、牛磺胆酸、脱氧胆酸、熊脱氧胆酸或其盐。
29.根据实施方案25所述的方法,其中所述运送增强剂为酰氧基化的氨基酸或其盐。
30.根据实施方案25所述的方法,其中所述运送增强剂为含有C6-20烷酰基或烯酰基部分的酰基肉毒碱或其盐。
31.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的熔融混合物不包含有助于将脂质运送穿过粘膜的运送增强剂。
32.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的熔融混合物还包含离子型表面活性剂。
33.根据实施方案32所述的方法,其中所述离子型表面活性剂为烷酸或烯酸。
34.根据实施方案32所述的方法,其中所述离子型表面活性剂为磷酸酯/盐。
35.根据实施方案32所述的方法,其中所述离子型表面活性剂为二鲸蜡基磷酸酯/盐、磷脂酸或磷脂酰丝氨酸。
36.根据实施方案32所述的方法,其中所述离子型表面活性剂为硫酸单酯/硫酸单酯盐。
37.根据实施方案32所述的方法,其中所述离子型表面活性剂为鲸蜡基硫酸酯/盐。
38.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的熔融混合物还包含类固醇。
39.根据实施方案38所述的方法,其中所述类固醇为胆固醇。
40.根据实施方案1至39中任一项所述的方法,其中所述抗原水溶液还包含冻干保护剂。
41.根据实施方案40所述的方法,其中所述冻干保护剂选自蔗糖、海藻糖、聚乙二醇(PEG)、二甲基-琥珀酸盐缓冲剂(DMS)、牛血清白蛋白(BSA)、甘露醇和葡聚糖。
42.根据实施方案40所述的方法,其中所述冻干保护剂为蔗糖。
43.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述抗原为病毒。
44.根据实施方案43所述的方法,其中所述病毒为减毒病毒。
45.根据实施方案43所述的方法,其中所述病毒为灭活病毒。
46.根据实施方案43至45中任一项所述的方法,其中所述病毒为流感病毒。
47.根据实施方案43至45中任一项所述的方法,其中所述病毒为麻疹病毒、流行性腮腺炎病毒、风疹病毒、水痘病毒或其组合。
48.根据实施方案43至45中任一项所述的方法,其中所述病毒选自轮状病毒、带状疱疹病毒、牛痘病毒、黄热病病毒及其组合。
49.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述抗原为多肽。
50.根据实施方案49所述的方法,其中所述多肽为病毒多肽。
51.根据实施方案50所述的方法,其中所述多肽为流感多肽。
52.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述抗原是不耐热的。
53.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述水溶液包含抗原混合物。
54.根据实施方案53所述的方法,其中所述水溶液包含多肽混合物。
55.根据实施方案54所述的方法,其中所述多肽混合物包含来自同一病毒的多肽的混合物。
56.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述抗原为多核苷酸。
57.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述抗原为多糖。
58.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其还包括在形成所述含有抗原的囊泡之后添加佐剂的步骤。
59.根据实施方案58所述的方法,其中所述佐剂为TLR-3或TLR-4 激动剂。
60.根据实施方案1至18中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的熔融混合物包含佐剂。
61.根据实施方案60所述的方法,其中所述佐剂为TLR-3或TLR-4 激动剂。
62.根据实施方案1至61中任一项所述的方法,其还包括将包含所述含有抗原之囊泡的制剂冻干的步骤。
63.根据实施方案62所述的方法,其还包括使所述含有抗原的囊泡在其被冻干之后再水化的步骤。
64.方法,其包括:
提供有机溶剂中的形成囊泡之脂质的溶液;以及
通过注射将所述形成囊泡之脂质的溶液添加至包含抗原的水溶液中以形成含有抗原的囊泡。
65.根据实施方案64所述的方法,其还包括通过使形成囊泡的脂质溶于所述有机溶剂来制备所述有机溶剂中的所述形成囊泡之脂质的溶液。
66.根据实施方案65所述的方法,其中使所述形成囊泡的脂质溶于不含任何共溶剂的有机溶剂中。
67.根据实施方案65所述的方法,其中使所述形成囊泡的脂质溶于含有一种或更多种共溶剂的有机溶剂中。
68.根据实施方案65所述的方法,其中使所述形成囊泡的脂质溶于无水溶剂系统中。
69.根据实施方案64至68中任一项所述的方法,其中所述有机溶剂为水可混溶溶剂。
71.根据实施方案64至69中任一项所述的方法,其中所述有机溶剂为极性质子有机溶剂。
72.根据实施方案71所述的方法,其中所述极性质子有机溶剂为具有2至5个碳原子的脂肪醇。
73.根据实施方案71所述的方法,其中所述极性质子有机溶剂为具有4个碳原子的脂肪醇。
74.根据实施方案71所述的方法,其中所述极性质子有机溶剂为叔丁醇。
75.根据实施方案71所述的方法,其中所述极性质子有机溶剂为乙醇。
76.根据实施方案64至69中任一项所述的方法,其中所述有机溶剂为乙醚。
77.根据实施方案64至76中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡的脂质包含磷脂。
78.根据实施方案64至77中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡的脂质包含非离子型表面活性剂。
79.根据实施方案78所述的方法,其中所述非离子型表面活性剂为甘油酯。
80.根据实施方案78所述的方法,其中所述非离子型表面活性剂为二元醇或二元醇醚。
81.根据实施方案78所述的方法,其中所述非离子型表面活性剂为 1-单棕榈酰基甘油。
82.根据实施方案78所述的方法,其中所述非离子型表面活性剂为 1-单鲸蜡基甘油醚或二甘醇鲸蜡基醚。
83.根据实施方案64至82中任一项所述的方法,其中在所述添加步骤中所述形成囊泡之脂质的溶液处于低于90℃的温度。
84.根据实施方案64至82中任一项所述的方法,其中在所述添加步骤中所述形成囊泡之脂质的溶液处于低于70℃的温度。
85.根据实施方案64至82中任一项所述的方法,其中在所述添加步骤中所述形成囊泡之脂质的溶液处于55℃至65℃的温度。
86.根据实施方案64至82中任一项所述的方法,其中在所述添加步骤中所述包含抗原的水溶液处于低于50℃的温度。
87.根据实施方案64至82中任一项所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述包含抗原的水溶液处于低于40℃的温度。
88.根据实施方案64至82中任一项所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述包含抗原的水溶液处于30℃至35℃的温度。
89.根据实施方案64所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述包含抗原的水溶液的温度是受控的。
90.根据实施方案64至89中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的溶液还包含有助于将脂质运送穿过粘膜的运送增强剂。
91.根据实施方案90所述的方法,其中所述运送增强剂为胆固醇衍生物,其中侧链的C23碳原子携带羧酸。
92.根据实施方案90所述的方法,其中所述运送增强剂为胆酸、鹅脱氧胆酸或其盐。
93.根据实施方案90所述的方法,其中所述运送增强剂为甘胆酸、牛磺胆酸、脱氧胆酸、熊脱氧胆酸或其盐。
94.根据实施方案90所述的方法,其中所述运送增强剂为酰氧基化的氨基酸或其盐。
95.根据实施方案90所述的方法,其中所述运送增强剂为含有C6-20烷酰基或烯酰基部分的酰基肉毒碱或其盐。
96.根据实施方案64至95中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的溶液不包含有助于将脂质运送穿过粘膜的运送增强剂。
97.根据实施方案64至96中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的溶液还包含离子型表面活性剂。
98.根据实施方案97所述的方法,其中所述离子型表面活性剂为烷酸或烯酸。
99.根据实施方案97所述的方法,其中所述离子型表面活性剂为磷酸酯/盐。
100.根据实施方案97所述的方法,其中所述离子型表面活性剂为二鲸蜡基磷酸酯/盐、磷脂酸或磷脂酰丝氨酸。
101.根据实施方案97所述的方法,其中所述离子型表面活性剂为硫酸单酯/硫酸单酯盐。
102.根据实施方案97所述的方法,其中所述离子型表面活性剂为鲸蜡基硫酸酯/盐。
103.根据实施方案64至102中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的溶液还包含类固醇。
104.根据实施方案103所述的方法,其中所述类固醇为胆固醇。
105.根据实施方案64至104中任一项所述的方法,其中所述抗原水溶液还包含冻干保护剂。
106.根据实施方案105所述的方法,其中所述冻干保护剂选自蔗糖、海藻糖、聚乙二醇(PEG)、二甲基-琥珀酸盐缓冲剂(DMS)、牛血清白蛋白(BSA)、甘露醇和葡聚糖。
107.根据实施方案105所述的方法,其中所述冻干保护剂为蔗糖。
108.根据实施方案64至107中任一项所述的方法,其中所述抗原为病毒。
109.根据实施方案108所述的方法,其中所述病毒为减毒病毒。
110.根据实施方案108所述的方法,其中所述病毒为灭活病毒。
111.根据实施方案108至110中任一项所述的方法,其中所述病毒为流感病毒。
112.根据实施方案108至110中任一项所述的方法,其中所述病毒为麻疹病毒、流行性腮腺炎病毒、风疹病毒、水痘病毒或其组合。
113.根据实施方案108至110中任一项所述的方法,其中所述病毒选自轮状病毒、带状疱疹病毒、牛痘病毒、黄热病病毒及其组合。
114.根据实施方案64至107中任一项所述的方法,其中所述抗原为多肽。
115.根据实施方案114所述的方法,其中所述多肽为病毒多肽。
116.根据实施方案115所述的方法,其中所述多肽为流感多肽。
117.根据实施方案64至116中任一项所述的方法,其中所述抗原是不耐热的。
118.根据实施方案64至116中任一项所述的方法,其中所述水溶液包含抗原混合物。
119.根据实施方案118所述的方法,其中所述水溶液包含多肽混合物。
120.根据实施方案119所述的方法,其中所述多肽混合物包含来自同一病毒的多肽的混合物。
121.根据实施方案64至107中任一项所述的方法,其中所述抗原为多核苷酸。
122.根据实施方案64至107中任一项所述的方法,其中所述抗原为多糖。
123.根据实施方案64至122中任一项所述的方法,其还包括在形成所述含有抗原的囊泡之后添加佐剂的步骤。
124.根据实施方案123所述的方法,其中所述佐剂为TLR-3或TLR-4 激动剂。
125.根据实施方案64至122中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的溶液包含佐剂。
126.根据实施方案125所述的方法,其中所述佐剂为TLR-3或TLR-4 激动剂。
127.根据实施方案64至126中任一项所述的方法,其还包括将包含所述含有抗原之囊泡的制剂冻干的步骤。
128.根据实施方案127所述的方法,其还包括使所述含有抗原的囊泡在其被冻干之后再水化的步骤。
129.制剂,其包含根据实施方案1至128中任一项所述的方法制备的含有抗原的囊泡。
130.方法,包括将实施方案129所述的制剂施用于有此需要的患者。
131.药盒,其包含
第一容器,其包含根据实施方案62或实施方案127所述的方法制备的冻干的含有抗原的囊泡制剂;以及
第二容器,其包含水溶液,从而当所述第二容器的内含物与所述第一容器的内含物混合时,使所述含有抗原的囊泡再水化。
132.根据实施方案131所述的药盒,其还包含:
说明书,其用于使所述第一容器的内含物和所述第二容器的内含物混合从而使所述含有抗原的囊泡再水化。
Claims (23)
1.方法,其包括:
在80℃至95℃的温度下熔融形成囊泡之脂质的混合物以形成熔融混合物,所述形成囊泡之脂质的混合物包含摩尔比为5∶4∶1的单棕榈酰基甘油、胆固醇和二鲸蜡基磷酸酯/盐;以及
将所述形成囊泡之脂质的熔融混合物添加至包含抗原的水溶液中以形成含有抗原的囊泡,其中添加所述形成囊泡之脂质的熔融混合物的步骤在低于120℃的温度下进行,并且其中在所述添加步骤中所述抗原处于低于60℃的温度。
2.根据权利要求1所述的方法,其中在所述添加步骤期间所述包含抗原的水溶液的温度是受控的。
3.根据权利要求1所述的方法,其中在所述添加步骤中所述包含抗原的水溶液处于低于50℃的温度。
4.根据权利要求1所述的方法,其中在所述添加步骤中所述包含抗原的水溶液处于低于40℃的温度。
5.根据权利要求1所述的方法,其中在所述添加步骤中所述包含抗原的水溶液处于低于30℃的温度。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中所述抗原水溶液还包含冻干保护剂。
7.根据权利要求6所述的方法,其中所述冻干保护剂选自蔗糖、海藻糖、聚乙二醇、二甲基-琥珀酸盐缓冲剂、牛血清白蛋白、甘露醇和葡聚糖。
8.根据权利要求7所述的方法,其中所述冻干保护剂为蔗糖。
9.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中所述抗原为病毒。
10.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中所述抗原为多肽,并且所述多肽为病毒多肽。
11.根据权利要求10所述的方法,其中所述病毒多肽为流感多肽。
12.根据权利要求10所述的方法,其中所述病毒多肽为麻疹病毒多肽、流行性腮腺炎病毒多肽、风疹病毒多肽、水痘病毒多肽或其组合。
13.根据权利要求10所述的方法,其中所述病毒多肽为轮状病毒多肽、带状疱疹病毒多肽、牛痘病毒多肽、黄热病病毒多肽或其组合。
14.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中所述抗原是不耐热的。
15.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中所述水溶液包含抗原混合物。
16.根据权利要求15所述的方法,其中所述抗原混合物为病毒多肽混合物。
17.根据权利要求16所述的方法,其中所述病毒多肽混合物包含来自同一病毒的多肽的混合物。
18.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其还包括在形成所述含有抗原的囊泡之后添加佐剂的步骤。
19.根据权利要求18所述的方法,其中所述佐剂为TLR-3激动剂或TLR-4激动剂。
20.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中所述形成囊泡之脂质的混合物包含佐剂。
21.根据权利要求20所述的方法,其中所述佐剂为TLR-3激动剂或TLR-4激动剂。
22.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其还包括将包含所述含有抗原之囊泡的制剂冻干的步骤。
23.根据权利要求22所述的方法,其还包括使所述含有抗原的囊泡在其被冻干之后再水化的步骤。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161432569P | 2011-01-13 | 2011-01-13 | |
US61/432,569 | 2011-01-13 | ||
CN201280008692.3A CN103533923A (zh) | 2011-01-13 | 2012-01-13 | 囊泡及由其产生之制剂的制备方法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201280008692.3A Division CN103533923A (zh) | 2011-01-13 | 2012-01-13 | 囊泡及由其产生之制剂的制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107296792A CN107296792A (zh) | 2017-10-27 |
CN107296792B true CN107296792B (zh) | 2021-07-27 |
Family
ID=46507476
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201280008692.3A Pending CN103533923A (zh) | 2011-01-13 | 2012-01-13 | 囊泡及由其产生之制剂的制备方法 |
CN201710129675.XA Active CN107296792B (zh) | 2011-01-13 | 2012-01-13 | 囊泡及由其产生之制剂的制备方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201280008692.3A Pending CN103533923A (zh) | 2011-01-13 | 2012-01-13 | 囊泡及由其产生之制剂的制备方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20130323280A1 (zh) |
EP (1) | EP2663288B1 (zh) |
CN (2) | CN103533923A (zh) |
AU (1) | AU2012205315B2 (zh) |
BR (1) | BR112013018074A2 (zh) |
CA (1) | CA2862871C (zh) |
MX (1) | MX357319B (zh) |
WO (1) | WO2012097347A1 (zh) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2010270722B2 (en) | 2009-07-06 | 2015-06-04 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
CA2803282C (en) | 2009-07-06 | 2018-05-01 | David E. Anderson | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
EP2590674B1 (en) | 2010-07-06 | 2017-02-22 | Variation Biotechnologies Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
EP2663327A4 (en) | 2011-01-13 | 2015-12-02 | Variation Biotechnologies Inc | COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTIONS |
CN104302323A (zh) * | 2012-01-12 | 2015-01-21 | 变异生物技术公司 | 用于治疗病毒感染的组合物和方法 |
AU2013213345A1 (en) * | 2012-01-27 | 2014-08-28 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods and compositions for therapeutic agents |
EP2958551B1 (en) * | 2013-02-25 | 2020-08-05 | Particle Sciences, Inc. | Particle formulations for delivery of tlr agonists and antigens |
US9017698B2 (en) | 2013-09-25 | 2015-04-28 | Sequoia Sciences, Inc. | Compositions of vaccines and adjuvants and methods for the treatment of urinary tract infections |
US9149522B2 (en) | 2013-09-25 | 2015-10-06 | Sequoia Sciences, Inc. | Compositions of vaccines and adjuvants and methods for the treatment of urinary tract infections |
US9504743B2 (en) | 2013-09-25 | 2016-11-29 | Sequoia Sciences, Inc | Compositions of vaccines and adjuvants and methods for the treatment of urinary tract infections |
US9149521B2 (en) | 2013-09-25 | 2015-10-06 | Sequoia Sciences, Inc. | Compositions of vaccines and adjuvants and methods for the treatment of urinary tract infections |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1988006882A1 (en) * | 1987-03-13 | 1988-09-22 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Lipid vesicles formed of surfactants and steroids |
WO2010033812A1 (en) * | 2008-09-18 | 2010-03-25 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating hepatitis a. |
Family Cites Families (50)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4024241A (en) | 1974-09-27 | 1977-05-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health, Education And Welfare | Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid |
US3952097A (en) | 1974-09-27 | 1976-04-20 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health, Education And Welfare | Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid |
US4349538A (en) | 1979-12-07 | 1982-09-14 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid |
US4436727A (en) | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
US5057540A (en) | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
US5160669A (en) * | 1988-03-03 | 1992-11-03 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Method of making oil filled paucilamellar lipid vesicles |
US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
US5549910A (en) * | 1989-03-31 | 1996-08-27 | The Regents Of The University Of California | Preparation of liposome and lipid complex compositions |
IE904098A1 (en) * | 1989-11-13 | 1991-05-22 | Nova Pharm Corp | Lipospheres for controlled delivery of substances |
US5250236A (en) * | 1991-08-05 | 1993-10-05 | Gasco Maria R | Method for producing solid lipid microspheres having a narrow size distribution |
GB9207731D0 (en) * | 1992-04-07 | 1992-05-27 | Proteus Molecular Design | Improvements in or relating to vaccines |
US5393527A (en) * | 1993-01-04 | 1995-02-28 | Becton, Dickinson And Company | Stabilized microspheres and methods of preparation |
ES2145132T3 (es) * | 1993-02-26 | 2000-07-01 | Fountain Pharm Inc | Sistema de suministro de vacunas y solucion precursora estable en almacenamiento para la encapsulacion a distancia de ingredientes activos. |
EP0706374B1 (en) * | 1993-06-30 | 1997-12-10 | Genentech, Inc. | Method for preparing liposomes |
US5762939A (en) | 1993-09-13 | 1998-06-09 | Mg-Pmc, Llc | Method for producing influenza hemagglutinin multivalent vaccines using baculovirus |
GB9320597D0 (en) | 1993-10-06 | 1993-11-24 | Proteus Molecular Design | Improvements in and realting to vaccines |
WO1995014026A1 (en) | 1993-11-17 | 1995-05-26 | Laboratoires Om S.A. | Glucosamine disaccharides, method for their preparation, pharmaceutical composition comprising same, and their use |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
CN1149888A (zh) | 1994-01-11 | 1997-05-14 | 福拉姆斯大学生物技术研究所 | 流感疫苗 |
US5824536A (en) | 1994-08-23 | 1998-10-20 | St. Jude Children's Research Hospital | Influenza virus replicated in mammalian cell culture and vaccine production |
GB9522351D0 (en) | 1995-11-01 | 1996-01-03 | Medeva Holdings Bv | Vaccine compositions |
US5919480A (en) | 1996-06-24 | 1999-07-06 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Liposomal influenza vaccine composition and method |
WO1998001139A1 (en) | 1996-07-03 | 1998-01-15 | Eisai Co., Ltd. | Injections containing lipid a analogues and process for the preparation thereof |
US5910306A (en) | 1996-11-14 | 1999-06-08 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Transdermal delivery system for antigen |
TW570803B (en) | 1997-04-09 | 2004-01-11 | Duphar Int Res | Influenza vaccine |
US5977081A (en) | 1997-05-20 | 1999-11-02 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Triterpene saponin analogs having adjuvant and immunostimulatory activity |
US6080725A (en) | 1997-05-20 | 2000-06-27 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof |
GB9725084D0 (en) | 1997-11-28 | 1998-01-28 | Medeva Europ Ltd | Vaccine compositions |
AT408615B (de) | 1998-09-15 | 2002-01-25 | Immuno Ag | Neue influenzavirus-impfstoffzusammensetzung |
US6287570B1 (en) | 1998-11-23 | 2001-09-11 | Patricia L. Foley | Vaccine against swine influenza virus |
IL127331A0 (en) | 1998-11-30 | 1999-09-22 | Yeda Res & Dev | Peptide-based vaccine for influenza |
AT407958B (de) | 1999-02-11 | 2001-07-25 | Immuno Ag | Inaktivierte influenza-virus-vakzine zur nasalen oder oralen applikation |
CA2383105C (en) | 1999-09-24 | 2010-01-26 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Intranasal influenza virus vaccine |
EP1255561B1 (en) | 2000-02-15 | 2006-06-28 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Proteosome influenza vaccine |
KR20030061810A (ko) | 2000-09-25 | 2003-07-22 | 폴리문 사이언티픽 임무노이비오로기쉐 포르슝 게엠베하 | 생균 백신과 제조 방법 |
PT1345597E (pt) * | 2000-12-27 | 2007-10-29 | Ares Trading Sa | Nanopartículas lipídicas anfifílicas para incorporação de péptidos e/ou proteínas |
MY134424A (en) | 2001-05-30 | 2007-12-31 | Saechsisches Serumwerk | Stable influenza virus preparations with low or no amount of thiomersal |
US7361352B2 (en) | 2001-08-15 | 2008-04-22 | Acambis, Inc. | Influenza immunogen and vaccine |
JP4617300B2 (ja) | 2003-02-25 | 2011-01-19 | メディミューン,エルエルシー | インフルエンザワクチン組成物を生成する方法 |
MXPA05012199A (es) | 2003-05-15 | 2006-02-10 | Univ Oklahoma State | Vacuna de dna que expresa ha1 del virus de influenza equina-2. |
US7368537B2 (en) * | 2003-07-15 | 2008-05-06 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Subunit vaccine against respiratory syncytial virus infection |
AU2005248361B2 (en) | 2004-05-18 | 2010-03-11 | Vical Incorporated | Influenza virus vaccine composition and methods of use |
EP1771552B1 (en) | 2004-05-25 | 2012-08-01 | MedImmune Vaccines, Inc. | Influenza hemagglutinin and neuraminidase variants |
RU2007103343A (ru) * | 2004-06-30 | 2008-08-10 | АйДи БАЙОМЕДИКАЛ КОРПОРЕЙШН ОФ КВЕБЕК (CA) | Вакцинная композиция и способы лечения коронавирусной инфекции |
CN101128598B (zh) | 2004-12-08 | 2013-04-24 | 米迪缪尼有限公司 | 生产流感疫苗组合物的方法 |
US20090028903A1 (en) * | 2005-03-23 | 2009-01-29 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Novel use |
CA2612005C (en) * | 2005-06-17 | 2013-10-29 | Georgia Tech Research Corporation | Coated microstructures and method of manufacture thereof |
WO2007098186A2 (en) * | 2006-02-22 | 2007-08-30 | Novavax, Inc. | Adjuvant and vaccine compositions |
MX2009009530A (es) | 2007-03-07 | 2010-05-19 | Nventa Biopharmaceuticals Corp | Composiciones de acidos nucleicos cerrados bicatenarios. |
RU2496519C2 (ru) | 2007-08-28 | 2013-10-27 | Бакстер Интернэшнл Инк. | Способ получения препарата, содержащего вирусные антигены, и применение препарата |
-
2012
- 2012-01-13 AU AU2012205315A patent/AU2012205315B2/en active Active
- 2012-01-13 US US13/979,317 patent/US20130323280A1/en not_active Abandoned
- 2012-01-13 EP EP12733900.0A patent/EP2663288B1/en active Active
- 2012-01-13 BR BR112013018074-9A patent/BR112013018074A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2012-01-13 MX MX2013008104A patent/MX357319B/es active IP Right Grant
- 2012-01-13 CN CN201280008692.3A patent/CN103533923A/zh active Pending
- 2012-01-13 WO PCT/US2012/021389 patent/WO2012097347A1/en active Application Filing
- 2012-01-13 CN CN201710129675.XA patent/CN107296792B/zh active Active
- 2012-01-13 CA CA2862871A patent/CA2862871C/en active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1988006882A1 (en) * | 1987-03-13 | 1988-09-22 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Lipid vesicles formed of surfactants and steroids |
WO2010033812A1 (en) * | 2008-09-18 | 2010-03-25 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating hepatitis a. |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2663288B1 (en) | 2022-12-21 |
AU2012205315A1 (en) | 2013-08-22 |
CN103533923A (zh) | 2014-01-22 |
US20130323280A1 (en) | 2013-12-05 |
MX357319B (es) | 2018-07-04 |
EP2663288A1 (en) | 2013-11-20 |
BR112013018074A2 (pt) | 2020-12-01 |
MX2013008104A (es) | 2013-12-06 |
WO2012097347A1 (en) | 2012-07-19 |
AU2012205315B2 (en) | 2017-05-04 |
CA2862871C (en) | 2020-09-22 |
CA2862871A1 (en) | 2012-07-19 |
CN107296792A (zh) | 2017-10-27 |
EP2663288A4 (en) | 2015-04-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107296792B (zh) | 囊泡及由其产生之制剂的制备方法 | |
CN107029229B (zh) | 制备囊泡的方法和由其产生的制剂 | |
AU2011276223B2 (en) | Compositions and methods for treating influenza | |
JP2008500984A (ja) | ヴィロソームとサポニンアジュバントを含むワクチン組成物 | |
CN104244984B (zh) | 用于治疗剂的方法和组合物 | |
CA2894442C (en) | Compositions and methods for treating viral infections | |
WO2011005772A1 (en) | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom | |
CN107073105A (zh) | 用于提供含佐剂病毒体的方法及由此可获得的含佐剂病毒体 | |
US10736844B2 (en) | Compositions and methods for treating viral infections | |
WO2012006368A2 (en) | Compositions and methods for treating influenza | |
US10806779B2 (en) | Method for preparing virosomes | |
US20160151479A1 (en) | Method for preparing virosomes |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
CB02 | Change of applicant information |
Address after: Ontario, Canada Applicant after: VARIATION BIOTECHNOLOGIES, Inc. Address before: Kaisan ohokkatsu Applicant before: VARIATION BIOTECHNOLOGIES, Inc. |
|
CB02 | Change of applicant information | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |