CN104244984B - 用于治疗剂的方法和组合物 - Google Patents
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Abstract
本公开内容特别地提供了包含治疗剂(例如减毒活病毒抗原、治疗性蛋白质等)和脂质组分的组合物。所述脂质组分可包含由本文描述的不同类型的一种或更多种脂质或者由其组成。在一些实施方案中,所述治疗剂是不耐热的。本公开内容还提供了制备组合物(包括前述组合物)的方法(例如尤其是熔融法和喷雾注射法)。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2012年1月27日提交的美国临时申请序列号61/591,837的优先权,其内容通过引用被整体并入本文。
背景技术
大多数疫苗(包括减毒病毒疫苗)随时间损失效价且效价损失速度是温度依赖的。因此,已经建立了冷链体系来确保疫苗保持效价,其通过将疫苗储存在冷藏条件(大多数情况下2至8℃之间)下直至使用。建立用于疫苗储存和分发的冷链是大工程并且维护困难。即使尽最大努力,也很显然的是,出于许多原因,冷链并不总是如预期那样起作用,这些原因诸如维护不恰当的或者过时的冷藏设备、导致设备故障的电力中断、不严格遵守冷链程序以及监控不足。结果就是冷链中的疫苗经常遭受温度偏移(即目标范围之外的温度)。
其它治疗剂例如某些治疗性蛋白质在暴露于高温时也会损失效价。因此本领域中仍然存在改进组合物和方法以使得这些治疗剂能够在暴露于高温时稳定并且保持效价的需求。
发明概述
本公开内容提供了尤其是包含治疗剂(例如减毒活病毒抗原、治疗性蛋白质等)和脂质组分的组合物。所述脂质组分可包含或者由本文描述的不同类型的一种或更多种脂质组成。在一些实施方案中,所述治疗剂是不耐热的。
在一个方面,所述脂质组分由一种或更多种非离子型表面活性剂组成。在一些实施方案中,这些组合物中的所述脂质组分是单一的非离子型表面活性剂(例如MPG)。
在另一个方面,所述脂质组分由一种或更多种非离子型表面活性剂和类固醇组成。在一些实施方案中,这些组合物中的所述脂质组分由单一的非离子型表面活性剂(例如MPG)和单一的类固醇(例如胆固醇)组成。
在另一个方面,所述脂质组分包含一种或更多种脂质,其合并形成囊泡(vesicle)(即“囊泡组合物”)。在一些实施方案中,所述脂质在不存在治疗剂的情况下被合并形成囊泡,然后与治疗剂混合(即所述组合物包括“预形成的囊泡”)。在这些实施方案的一些中,所述脂质包含非离子型表面活性剂、类固醇和离子型两亲物。根据这些实施方案制备的囊泡组合物可包括任何离子型两亲物,其包括本文描述的任何示例性离子型两亲物。在一些实施方案中,在治疗剂存在的情况下,所述脂质被合并以形成囊泡。根据这些实施方案制备的囊泡组合物可包括本文描述作为离子型两亲物的任何示例性磷脂酰甘油。在一些实施方案中,这些囊泡组合物中的所述脂质组分由单一的非离子型表面活性剂(例如MPG)、单一的类固醇(例如胆固醇)和单一的离子型两亲物(例如DCP或DPPG)组成。在一些实施方案中,这些囊泡组合物中的所述脂质组分由单一的非离子型表面活性剂(例如MPG)、单一的类固醇(例如胆固醇)和单一的离子型两亲物(例如DCP)组成并且所述囊泡是预形成的。在一些实施方案中,这些囊泡组合物中的所述脂质组分由非离子型表面活性剂(例如MPG)、类固醇(例如胆固醇)和作为离子型两亲物的磷脂酰甘油(例如DPPG)组成并且所述囊泡是在治疗剂存在条件下预形成的或者形成的。
本公开内容还提供了制备组合物(包括前述组合物)的方法(例如尤其是熔融法和喷雾注射法)。
附图简要说明
图3显示了得自尺寸排阻色谱法的百分比纯度结果,所述尺寸排阻色谱法是使用重新配制的曲妥珠单抗(trastuzumab)作为示例性治疗性蛋白质(由12.5mg/ml的脂质配制)进行的,所述示例性治疗性蛋白质曾被储存在约4℃和约40℃下4周和多达8周。
图4显示了得自BT-474抗增殖生物学效价测定的效价结果,是使用重配曲妥珠单抗作为示例性治疗性蛋白质(由12.5mg/ml的脂质配制)进行的,其曾被储存在约4℃和约40℃下4周和多达8周。
定义
贯穿本公开内容采用的一些术语在以下段落中进行定义。
本文使用的术语“抗原”或“病毒抗原”是指含有可被抗体识别的一种或更多种表位的物质。在一些实施方案中,抗原可以是病毒。术语“抗原”尤其涵盖减毒的和灭活的病毒。在一些实施方案中,抗原可以是“免疫原”。
本文使用的术语“免疫应答”是指在动物中引发的应答。免疫应答可以指细胞免疫、体液免疫或者可以包括两者。免疫应答也可以限于一部分免疫系统。例如,在一些实施方案中,免疫原性组合物可以诱导增强的IFNγ应答。在一些实施方案中,免疫原性组合物可以诱导粘膜IgA应答(例如在鼻腔和/或直肠冲洗中所测到的)。在一些实施方案中,免疫原组合物可以诱导全身性IgG应答(例如在血清中所测到的)。
本文使用的术语“免疫原性”意为能够在宿主动物中产生针对非宿主个体(例如病毒抗原)的免疫应答。在一些实施方案中,这种免疫应答形成由疫苗引发的针对特定感染性生物体(例如病毒)的保护性免疫的基础。
本文使用的术语“治疗有效量”是指足以在被治疗对象中显示出有意义的益处的量。组合物的治疗有效量可以随以下因素而变化:期望的生物学终点、组合物的性质、施用途径、被治疗对象的健康、尺码和/或年龄等等。
本文使用的术语“治疗”是指为了减轻、缓解、改变、增强、改善或者影响疾病、疾病的症状、或疾病诱因而将组合物施用到具有疾病、疾病症状或者疾病诱因的对象。在一些实施方案中,术语“治疗”是指给对象接种疫苗。
具体实施方式
I.组合物
本公开内容提供了尤其是包含治疗剂和脂质组分的组合物。本文使用的术语“脂质组分”涵盖了组合物中存在的所有脂质。脂质组分可包含由本文描述的不同类型的一种或更多种脂质或由其组成。
脂质组分
在一个方面,所述脂质组分由一种或更多种非离子型表面活性剂组成。在一些实施方案中,脂质组分由单一的非离子型表面活性剂组成。并非限制,合适的非离子型表面活性剂的实例包括以甘油为基础的酯连接的表面活性剂。这样的甘油酯可包含两种高级脂肪族酰基基团之一,例如在每个酰基部分中含有至少十个碳原子。以这样的甘油酯为基础的非离子型表面活性剂可包含多于一个的甘油单元,例如多达5个甘油单元。可以使用甘油单酯,例如含有C12-C20烷酰基(alkanoyl)或烯酰基(alkenoyl)部分(例如己酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、油烯基或硬脂酰基)的甘油单酯,。示例性非离子型表面活性剂是1-单棕榈酸甘油(I-monopalmitoyl glycerol,MPG)。也可以将酯连接的表面活性剂用作非离子型表面活性剂。例如,以甘油或具有多达4个碳原子的低级脂肪族醇的二元醇(诸如乙二醇)为基础的酯连接的表面活性剂是合适的。以这样的二元醇为基础的非离子型表面活性剂可包含多于一个的二元醇单元,例如多达5个二元醇单元(例如二甘醇鲸蜡基醚(diglycolcetyl ether)和/或聚氧乙烯-3-月桂基醚(polyoxyethylene-3-laurylether))。可以使用二元醇或甘油的单酯,包括含有C12-C20烷酰基(alkanyl)或烯酰基(alkenyl)部分(例如己酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、鲸蜡基、油烯基或硬脂酰基)的单酯。可使用的环氧乙烷缩合产物包括PCT公开号WO88/06882中披露的那些(例如聚氧乙烯高级脂肪族醚和胺表面活性剂)。示例性的醚连接的表面活性剂包括1-单鲸蜡基甘油醚和二甘醇鲸蜡基醚。
在另一个方面,脂质组分由一种或更多种非离子型表面活性剂和一种或更多种类固醇(例如诸如胆固醇的甾体)组成。在一些实施方案中,脂质组分由单一的非离子型表面活性剂(例如MPG)和单一的类固醇(例如胆固醇)组成。在一些实施方案中,所述一种或更多种非离子型表面活性剂和一种或更多种类固醇以约6∶4至约4∶4的范围(例如约5∶4)的摩尔比存在于组合物中。
在另一个方面,脂质组分包含一种或更多种脂质,其合并形成囊泡(即“囊泡组合物”)。
在一些实施方案中,在不存在治疗剂的情况下,脂质合并形成囊泡,然后与治疗剂混合(即组合物包括“预形成的囊泡”)。在一些实施方案中,脂质包含非离子型表面活性剂、类固醇(例如诸如胆固醇的甾体)和离子型两亲物。根据这些实施方案制备的囊泡组合物可包括任意离子型两亲物,其包括下文描述的任意示例性离子型两亲物。
在一些实施方案中,在存在治疗剂的情况下,脂质合并形成囊泡。根据这些实施方案制备的囊泡组合物可包括下文描述作为离子型两亲物的任意示例性磷脂酰甘油。
示例性的离子型两亲物可包括但不限于诸如高级链烷酸和链烯酸的酸性物质(例如棕榈酸,油酸),或者诸如二烷基磷酸酯(dialkyl phosphate)的含有包括磷酸酯的酸性基团的其它化合物(例如二鲸蜡基磷酸酯(dicetylphospate)或DCP,或者磷脂酸或磷脂酰丝氨酸)以及诸如高级烷基硫酸酯的硫酸单酯(例如鲸蜡基硫酸酯),其均可用于该目的。
如上所述,在一些实施方案中,磷脂酰甘油(也称为甘油磷酸酯)可用作离子型两亲物。磷脂酰甘油可以是缩醛磷脂,磷脂酸(诸如磷脂酰乙醇胺,磷脂酰胆碱),磷脂酰胆碱,或其类似物。示例性的磷脂酰甘油包括但不限于二磷脂酰甘油(diphosphatidylglycerol,DPPG);1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰-L-丝氨酸(DPPS);1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(DSPC);1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(DSPE);二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)及其衍生物。
在一些实施方案中,这些囊泡组合物中的脂质组分由单一的非离子型表面活性剂(例如MPG)、单一的类固醇(例如胆固醇)和单一的离子型两亲物(例如DCP或DPPG)组成。在一些实施方案中,这些囊泡组合物中的脂质组分由单一的非离子型表面活性剂(例如MPG)、单一的类固醇(例如胆固醇)和单一的离子型两亲物(例如DCP)组成并且囊泡是预形成的。在一些实施方案中,这些囊泡组合物中的脂质组分由非离子型表面活性剂(例如MPG)、类固醇(例如胆固醇)和作为离子型两亲物的磷脂酰甘油(例如DPPG)组成,并且囊泡是在治疗剂存在的情况下预形成或者形成的。
在一些实施方案中,所述一种或更多种非离子型表面活性剂和类固醇在这些囊泡组合物中以约6∶4至约4∶4的范围(例如约5∶4)的摩尔比存在。在一些实施方案中,所述一种或更多种非离子型表面活性剂和离子型两亲物在这些囊泡组合物中以约6∶1至约4∶1的范围(例如约5∶1)的摩尔比存在。在一些实施方案中,类固醇和离子型两亲物在这些囊泡组合物中以约5∶1至约3∶1的范围(例如约4∶1)的摩尔比存在。
在某些实施方案中,达到至少约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95mg/ml的脂质浓度。在某些实施方案中,脂质浓度在约5mg/ml至约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或25mg/ml的范围。在某些实施方案中,脂质浓度在约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15mg/ml至约30mg/ml的范围。在某些实施方案中,脂质浓度在约5mg/ml至约50mg/ml,约5mg/ml至25mg/ml,约10mg/ml至约50mg/ml,约10mg/ml至约30mg/ml,或者约10mg/ml至约50mg/ml的范围。
在一些实施方案中,本文描述的组合物不包含辅助脂质样分子转运通过粘膜的转运增强分子。在一些实施方案中,所述组合物不包含诸如胆酸和鹅去氧胆酸的“胆汁酸”,其与甘氨酸或牛磺酸的缀合产物诸如甘氨胆酸和牛磺胆酸,包括去氧胆酸和熊去氧胆酸的衍生物,以及每种这些酸的盐。在一些实施方案中,所述组合物不包含酰氧化氨基酸诸如酰基肉毒碱及其盐,以及棕榈酰基肉毒碱。
治疗剂
本公开内容涵盖不同类型的治疗剂的使用。在一些实施方案中,这些试剂是不耐热的。本文使用的术语“不耐热试剂”是指试剂在暴露于某些升高的温度时将损失效价。在一些实施方案中,经效价测定(例如基于IC50或者EC50值)测量并与不进行处理的试剂相比较,不耐热试剂暴露于升高的温度时破坏超过20%的抗原效价(例如超过30%,超过40%,超过50%,或者更多)。在一些实施方案中,不耐热抗原在30℃以上(例如35℃以上,40℃以上,45℃以上或者50℃以上)的温度下损失效价。在一些实施方案中,经效价测定(例如基于IC50或者EC50值)测量并与不进行处理的试剂相比较,将不耐热试剂储存在一种这些升高的温度下3分钟以上(例如5分钟,10分钟,15分钟或者更久),将破坏超过20%的效价(例如超过30%,超过40%,超过50%,或者更多)。然而,可以理解的是,本公开内容的方法和组合物不限于不耐热试剂,并且在一些实施方案中,所述方法或组合物也可以涉及包括传统小分子治疗剂的更稳定试剂。
病毒抗原-麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒抗原
麻疹、腮腺炎和风疹是由病毒感染(分别由麻疹病毒(一种副粘病毒)、腮腺炎病毒(一种副粘病毒)和风疹病毒(一种披膜病毒))引起的三种常见儿科疾病。麻疹、腮腺炎和风疹感染可引起严重的可导致死亡的医学并发症。麻疹是呼吸系统感染,引起包括发烧、咳嗽、流鼻涕和全身皮疹症状,通常导致诸如肺炎和脑炎的并发症。腮腺炎感染引起包括炎症、发烧、头疼和睾丸炎的症状,可导致诸如无菌性脑膜炎和耳聋的并发症。风疹通称德国麻疹,一般引发轻度症状,然而母亲在怀孕期间的感染可能是相当严重的。
由已在细胞底物中增殖的减毒活病毒产生了针对麻疹、腮腺炎和风疹的疫苗。MMR疫苗的每种组分最初是以单价(monovalent)形式制备的,然后将每一种混合在一起产生三价形式,其中组分病毒群体是以足以在疫苗受体中诱导有效免疫应答的良好确定量存在的。市售MMR疫苗是以冻干小瓶形式存在的,必须按照许可说明将其保存在2-8℃不多于3年。然而诸多因素可能影响冻干疫苗的热稳定性,包括稳定剂组成、储存条件以及残留水分。世界卫生组织(WHO)建议使用Vero细胞的组织培养感染量(TCID50)测定来评估疫苗中的活麻疹病毒的效价。然而,效价测量结果可能随测定方法、实验室、以及测试时的条件而变化。
WHO已经设定了针对冻干形式以及在施用之前复溶为溶液时的疫苗稳定性的最低要求。在冻干状态下,目前的麻疹疫苗必须在暴露于37℃的温度下至少一周后保持每份人用剂量至少3.0的log10病毒颗粒的最低效价,并且在孵育期间病毒滴度(titre dose)降低不超过1.0的log10。然而,复溶的麻疹疫苗在暴露于室温时迅速损失效价。在22℃至25℃下,疫苗在一小时内失去大约50%的效价。在高于37℃的温度下,疫苗在一小时内失活(TheImmunological Basis for Immunization Series,Module 7:Measles(WHO/EPI/GEN/93.17))。
目前,几种减毒的麻疹、腮腺炎和风疹(MMR)疫苗获得了批准并已经成功降低了病毒感染的发生率,其可以根据本公开内容使用。
在一些实施方案中,本公开内容的组合物和方法可以与包括在已获批准或者仍在研发中的疫苗中的一种或更多种抗原一起使用。表1是针对麻疹、腮腺炎、风疹和水痘感染的已获批准或者仍在研发中的疫苗的非限制性列表。
表1
在以下部分我们将探讨可被用于本公开内容的组合物或方法中的这些以及其它示例性病毒抗原。
在美国,麻疹、腮腺炎和风疹(MMR)疫苗首先在1971年获得批准,并在1989年引入了疫苗的第二剂量。通常来说,在儿童MMR疫苗接种是常规措施的国家中,麻疹、腮腺炎和风疹的发生率已经显著降低(例如与1941年的病例数相比,1995年降低了99%以上)。
几种减毒的麻疹、腮腺炎和风疹(MMR)疫苗目前已被批准。例如,是由Merck&Co.,Inc研发并制造的。含有以下成分的无菌冻干制剂:(1)(麻疹活病毒疫苗),麻疹病毒的减毒系,(2)(腮腺炎活病毒疫苗),在鸡胚细胞培养物中增殖的腮腺炎病毒株,以及(3)(风疹活病毒疫苗),风疹病毒的减毒株。每0.5mL剂量含有不少于1,000TCID50(半数组织培养感染量)的麻疹病毒,不少于5,000TCID50的腮腺炎病毒,以及不少于1,000TCID50的风疹病毒。一经复溶,(如同其它已获批准的MMR疫苗一样)通常经皮下施用。尽管一剂一般能在大于12个月的儿童中诱导中和抗体的产生,但是一些患儿不能在第一剂后发生血清转变。因此,推荐进行第二剂强化(booster),特别是在小学入学之前,以便血清转变那些对第一剂无应答的儿童。为确保疫苗无效价损失,必须将其在运输期间维持在10℃或者更冷的温度下,储存期间以冻干状态维持在2℃至8℃的温度下,并且在复溶后8小时内使用。
在一个方面,本公开内容提供了包括减毒或灭活病毒的免疫原性组合物。能够理解的是,本公开内容提供的免疫原性组合物可包括MMR疫苗的一种或更多种组分(例如麻疹病毒、腮腺炎病毒、或风疹病毒,或其组合)。在一些实施方案中,免疫原性组合物包括水痘病毒组分(例如单独的诸如,或者与其它病毒组分组合,例如与)。
如上所述,所有已知获批的MMR疫苗包括减毒病毒。能够理解的是,这些获批的疫苗的任何一种都可以如本文所述使用以产生免疫原性组合物。例如,可以使用市售来产生免疫原性组合物。在一些实施方案中,首先将获批疫苗进行纯化(例如去除疫苗中的铝佐剂或者其它试剂)。在一些实施方案中,在如本文所述的配制之前不对获批疫苗进行纯化。
如本领域所公知的,减毒病毒的优势在于潜在的更高免疫原性,所述免疫原性源于其进行体内复制但不引起完全感染的能力。现有技术中已被用来制备减毒病毒的一种方法是病毒适应(viral adaption),其包括将病毒株通过多细胞培养连续传代。经过一段时间所述株突变,随后可以鉴别到减毒株。例如,在制备时,麻疹病毒的减毒株在鸡胚细胞培养物中增殖,腮腺炎B级株在鸡胚细胞培养物中增殖,并且风疹减毒株在人二倍体肺成纤维细胞中增殖。在一些实施方案中,病毒可通过不同细胞培养物进行传代。
将理解的是,可以使用任何麻疹、腮腺炎和/或风疹病毒株,例如但不限于现有技术中已经描述的任何下述株:
麻疹病毒Enders’s减毒Edmonston株(AttA)
麻疹病毒减毒AIK-C株
腮腺炎病毒Jeryl Lynn(B级)株
腮腺炎病毒Leningrad Zagreb株
腮腺炎病毒Urabe Am 9株
风疹病毒Wistar RA 27/3株
风疹病毒Giguere;1964美国
风疹病毒HPV-77;1961美国
风疹病毒Judith;1963英国利物浦
风疹病毒KO-1;1967日本Kochi
尽管所有目前已获批的MMR疫苗包括减毒病毒,根据本公开内容可以使用包括灭活病毒的供替代的疫苗。在一些实施方案中,免疫原性组合物可包含这样的灭活病毒。将被理解的是,可以使用任何方法来制备灭活病毒。一般来说,这些方法将包括在宿主细胞中增殖病毒、裂解宿主细胞释放所述病毒,分离然后灭活所述病毒。通常从细胞培养物中收集病毒,并筛选感染剂量以及没有外源因子(adventitious agent)存在。通常对病毒使用化学处理(例如尤其是福尔马林、甲醛)来灭活病毒。然而,能够理解的是,可以使用其它技术,例如用氯气处理、暴露于高温等。
病毒抗原-其它
表2是已获批准或者仍在研发中的其它减毒活疫苗的非限制性列表。能够理解的是,本公开内容提供的组合物可包括这些疫苗的一种或更多种组分。
表2
犬瘟是由犬瘟病毒的病毒感染引起的疾病,犬瘟病毒是与麻疹病毒很接近的副粘病毒。犬瘟病毒可引起严重医学病症,影响各种哺乳类动物包括狗、鼬鼠、臭鼬、鬣狗、浣熊、以及非家养的猫科动物。犬瘟感染可引起包括发烧、厌食、流鼻涕、和眼睛有分泌物症状,通常导致诸如肺炎和脑炎的并发症。减毒犬瘟疫苗已经获批,包括多价DA2PPC疫苗,其预防犬瘟病毒(D)、腺病毒2型(A2)、副流感病毒(P)、犬细小病毒(P)和犬冠状病毒(C)的感染。能够理解的是,本公开内容提供的免疫原性组合物可包括DA2PPC的一种或更多种组分(例如犬瘟病毒抗原)。
轮状病毒导致轮状病毒肠胃炎,其在婴儿和幼儿中可能是特别严重的。获批的用于治疗轮状病毒感染的减毒活疫苗包括和。标明用于预防由G1、G2、G3和G4血清型的病毒引起的轮状病毒肠胃炎。以连续三剂经口施用于6至32周龄的婴儿。每2ml剂量的含有重配活病毒,其含有G1、G2、G3、G4和P1A,并包含至少2.0-2.8×106的感染单位(IU)。标明用于预防由G1、G3、G4和G9血清型的病毒引起的轮状病毒肠胃炎。是以连续两剂经口施用于6周至24周龄的婴儿。每1ml剂量的含有至少106CCID50的活的减毒人G1P轮状病毒。
带状疱疹是神经根的病毒感染,通常会引起身体一侧的疼痛和皮疹。带状疱疹在老人和免疫系统弱的人群中是最普遍的。用于治疗由带状疱疹病毒感染引起的带状疱疹的已获批病毒是,其为减毒的水痘带状疱疹活病毒的Oka/Merck株的冻干制剂。标明用于皮下施用并且标明用于60岁以及更大年纪的个体。每0.65ml剂量的含有至少19,400pfu的减毒活病毒。
获批的减毒活疫苗的另一个实例是,其为用于治疗天花病毒感染的牛痘病毒的活病毒制剂。是由牛痘苗(calf lymph)制备的,将其纯化、浓缩并冻干干燥。复溶疫苗显示出每ml含有不多于200个存活的细菌生物体。旨在用于多次穿刺使用,即,使用分叉针将疫苗施用到皮肤表层。通常,用接种导致病毒增殖、免疫力和细胞超敏性。初次接种后,在约第2天到第5天会在接种部位出现丘疹。在第5天或者第6天其将变成囊泡,其变为脓疱状、呈脐状、并被红斑和硬结包围。红斑的最大面积在接种后第8天和第12天之间(通常是第10天)达到。然后红斑和肿胀消退,并形成痂,在约第14天到第21天痂脱落。在称为Jennerian应答的初级反应的高峰处,一般有区域性淋巴结病并且可能有发烧和不适的全身性表现。已经显示采用效价为1亿个空斑形成单位(pfu)/ml的以进行的初级接种在儿童中通过主要反应和中和抗体应答二者激发97%应答率。
已获批的减毒活疫苗的另一个实例是用于治疗黄热病病毒感染的。是通过在活的没有禽白血病病毒的鸡胚中培养黄热病病毒的17D株来制备。将冻干并在氮气下密封用于储存,并在临近使用前将其复溶。将配制成每0.5ml剂量包含不低于5.04的Log10pfu。通常,在用首次免疫接种后的第十天产生针对黄热病的免疫。尽管已经证明黄热病疫苗免疫可持续至少30-35年并且在一些情况中持续终身,但是每隔10年需要加强免疫接种以加强抗体效价。
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也称为蓝耳猪病,是导致称为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪的疾病的病毒。这种经济上重要的流行性疾病导致种畜繁殖失败和幼猪呼吸道疾病。已经研发了减毒活疫苗来预防PRRS。
伪狂犬病是世界大部分地区的地方性猪病毒性疾病。其由猪疱疹病毒I型(Suidherpesvirus 1,SuHV-I)引起,该病毒也称作伪狂犬病病毒(PRV),这种病又名奥耶斯基氏病(Aujeszky’s disease),在牛中称为疯痒病(mad itch)。其它家养和野生哺乳动物(例如牛、绵羊、山羊、猫、狗和浣熊)也易受影响,其中该疾病通常是致命的。对于猪中PRV的研究开创了采用减毒活疫苗的动物疾病控制。尽管词语“伪狂犬病”意指“假的狂犬病”或“狂犬病样”,但是其为误称。伪狂犬病与疱疹病毒相关而与狂犬病病毒无关。
治疗性蛋白质
许多治疗性蛋白质(包括许多不耐热的治疗性蛋白质)目前已获批或者在研发中,并且可以根据本公开内容使用。
本文使用的术语“蛋白质”是指氨基酸多聚物。在一些实施方案中,蛋白质可以包括氨基酸之外的部分(例如可以是糖蛋白、蛋白聚糖、脂蛋白等)和/或可以进行除此之外的加工或修饰。本领域普通技术人员将会理解,“蛋白质”可以是由细胞产生的完整多肽链(带有或不带信号序列),或者可以是其部分。本领域普通技术人员将会理解,蛋白质有时候可以包括多于一条的多肽链,例如通过一个或更多个二硫键连接或者通过其它方式连接。多肽可以含有L-氨基酸、D-氨基酸、或者两者,并且可以含有任意的现有技术中已知的各种氨基酸修饰或类似物。
治疗性蛋白质是从人体细胞中提取出来的或者是实验室中改造的用于药学用途的蛋白质。大多数治疗性蛋白质是使用非人哺乳动物细胞系制造的重组人蛋白质,所述非人哺乳动物细胞系被改造为表达某些人基因序列以生产特定蛋白质。重组蛋白质是重要类型的治疗剂,其用于例如代替关键造血生长因子的不足并增强免疫系统以抵抗癌症和感染性疾病。治疗性蛋白质也可用于缓解许多病症导致的患者病痛,这些病症包括各种癌症(经单克隆抗体和干扰素治疗)、突发心脏病、中风、囊性纤维化和高歇氏病(Gaucher’sdisease)(经酶和血液因子治疗)、糖尿病(经胰岛素治疗)、贫血(经促红细胞生成素治疗)、以及血友病(经凝血因子治疗)。
FDA已经批准了75种治疗性蛋白质,也称为生物药物,还有超过500种的其它蛋白质在研发中。目前在监管部门审核中的治疗性生物产品包括:单克隆抗体、细胞因子、生长因子、酶、免疫调节剂;以及溶栓剂和从动物或微生物提取的旨在用于治疗用途的蛋白质,包括这些产品的重组蛋白以及其它非疫苗的治疗性免疫疗法。
在一些实施方案中,治疗性蛋白质是抗体。本文使用的术语“抗体”旨在包括免疫球蛋白及其片段,其对指定的蛋白质或肽或其片段特异性地应答。合适的抗体包括但不限于人抗体、灵长目源抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、人源化抗体、缀合抗体(即缀合或融合到其它蛋白质、放射性标记、细胞毒素的抗体)、小型模块化免疫药物(“SMIPsTM”)、单链抗体、骆驼科(cameloid)抗体、抗体样分子以及抗体片段。本文使用的术语“抗体”也包括完整单克隆抗体、多克隆抗体、单结构域抗体(例如鲨鱼单结构域抗体(如IgNAR或其片段))、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(如双特异性抗体)、以及只要其呈现期望的生物活性的抗体片段。抗体可以是任何类型(例如IgA、IgD、IgE、IgG、IgM)。
在一些实施方案中,治疗性蛋白质是抗体片段。本文使用的“抗体片段”包括完整抗体的一部分,例如抗体的抗原结合区或者可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc和Fv片段;三抗体;四抗体;线性抗体;单链抗体分子;以及由抗体片段形成的多特异性抗体。术语“抗体片段”也包括任何的合成或遗传改造的蛋白质,其通过结合到特定抗原形成复合物而如抗体那样起作用。例如,抗体片段包括分离片段、由重链和轻链可变区组成的“Fv”片段、其中轻链和重链可变区由连接肽连接起来的重组单链多肽分子(“ScFv蛋白质”),以及由模拟超变区的氨基酸残基组成的最小识别单元。
根据本公开内容可以使用的一些示例性治疗性蛋白质列举在下表3中。一种示例性治疗性蛋白质是(曲妥珠单抗),一种结合到Her2/neu受体的细胞外组分的人源化单克隆抗体,所述Her2/neu受体为在大约20%至25%的乳腺癌患者中过量表达的185kDa跨膜肿瘤蛋白。抗体和其它生物相似物被设计为表达人Fc-Gamma-1同种型以增强抗体的补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞毒作性(ADCC)的作用。曲妥珠单抗的Fab相关的功能使得其能够高亲和性地结合到Her2/neu受体的细胞外结构域上,其抑制细胞增殖并预防血管生成。
多核苷酸
根据本公开内容也可使用多核苷酸。本文使用的术语“多核苷酸”是指核苷酸的多聚物。所述多聚物可包括天然核苷酸(即腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷、和脱氧胞苷),核苷酸类似物(例如2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C5-溴代尿苷、C5-氟代尿苷、C5-碘代尿苷、C5-丙炔基尿苷、C5-丙炔基胞苷、C5-甲基胞苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O(6)-甲基鸟苷、4-乙酰胞苷、5-(羧基羟甲基)尿苷、二氢尿苷、甲基假尿苷、1-甲基腺苷、1-甲基鸟苷、N6-甲基腺苷、以及2-硫代胞苷),化学修饰的碱基,生物学修饰的碱基(例如甲基化碱基),嵌入碱基,修饰的糖(例如2’-氟代核糖、核糖、2’-脱氧核糖、2’-O-甲基胞苷、阿拉伯糖、以及己糖),或者修饰的磷酸基团(例如硫代磷酸和5’-N-亚磷酰胺连接)。
在一些实施方案中,根据本公开内容所使用的多核苷酸是DNA、RNA、适配体(aptamer)、shRNA、siRNA、miRNA、和/或反义RNA、或者antagomir RNA。
多糖
根据本公开内容也可使用多糖。本文使用的术语“多糖”是指糖的多聚物。所述多聚物可包括天然糖类(例如阿拉伯糖,来苏糖,核糖,木糖,核酮糖,木酮糖,阿洛糖,阿卓糖,半乳糖,葡萄糖,古洛糖,艾杜糖,甘露糖,塔罗糖,果糖,阿洛酮糖,山梨糖,塔格糖,甘露庚酮糖,景天庚酮糖,辛酮糖(octolose),以及斯洛糖(sialose))和/或修饰的糖(例如2’-氟代核糖,2’-脱氧核糖,以及己糖)。
小分子
如前所述,尽管本公开内容的方法和组合物会被认为特别适用于不耐热试剂,但能够理解的是,在一些实施方案中,其也可用于包括传统的小分子治疗剂的更稳定的试剂。已经研发了许多治疗小分子,可根据本公开内容进行使用。本文使用的术语“小分子治疗剂”是指非聚合的治疗分子,其可含有几个碳-碳键并具有小于约1500Da(例如小于约1000Da,小于约500Da或者小于约200Da)的分子量。小分子治疗剂可在实验室中合成(例如通过组合合成,使用改造的微生物,等等)或者在自然界中找到(例如天然产物)。一般来说,小分子治疗剂可改变、抑制、激活、或者以其它方式影响生物学活动。例如,小分子治疗剂可包括但不限于抗AIDS物质,抗癌物质,抗生素,抗糖尿病物质,免疫抑制剂,抗病毒物质,酶抑制剂,神经毒素,阿片样物质,安眠药,抗组胺,润滑剂,安定药,抗惊厥药,肌肉松弛药和抗帕金森物质,抗痉挛和肌肉萎缩药(包括通道阻滞药,缩瞳药和抗胆碱能药),抗青光眼化合物,抗寄生虫药和/或抗原虫化合物,细胞-细胞外基质相互作用的调节剂(包括细胞生长抑制剂和抗粘附分子),血管扩张剂,DNA、RNA或蛋白质合成的抑制剂,抗高血压药,镇痛药,解热药,甾类和非甾类抗炎剂,抗血管生成因子,抗分泌因子,抗凝剂和/或抗血栓剂,局部麻醉药,托吡卡胺(ophthalmics),前列腺素,兴奋剂,抗精神病物质,止吐药,以及显像剂。适合用于本公开内容的方法的示例性小分子的更完整列表可以在以下文献中找到:Pharmaceutical Substances:Syntheses,Patents,Apptications,由Axel Kleemann和JurgenEngel编辑,Thieme medical Publishing,1999;Merck Index:An Encyclopedia ofChemicals,Drugs,and Biologicals,由Susan Budavari等编辑,CRC Press,1996,以及United States Pharmacopeia-25/national formulary-20,由United StatesPharmacopeial Convention,Inc.出版,2001。优选地,尽管不是必要的,小分子是已被合适的政府机构或团体认为是安全和有效使用的。例如,列在FDA的21C.F.R.§§330.5、331到361以及440到460所列的人用药物,列在FDA的21C.F.R.§§500到589所列的兽用药物,其都是被认为可接受用于根据本公开内容的方法的。
示例性治疗剂
表3提供了根据本公开内容可以使用的其它示例性试剂的非限制性列表。
表3
II.制备组合物的方法
在另一方面,本公开内容提供了用于制备包括前述组合物的组合物的方法。所使用的特定方法可取决于治疗剂的性质、脂质组分的性质、是否将形成囊泡、以及是否会在存在或不存在治疗剂时形成这些囊泡。
含预形成的囊泡的组合物
在包含预形成的囊泡的组合物的情况下,可根据任何已知方法制备囊泡,然后与治疗剂合并以产生组合物。例如,示例性技术是旋转膜蒸发方法,其中通过旋转蒸发从有机溶剂例如烃溶剂或氯代烃溶剂(诸如氯仿)来制备形成囊泡的脂质的膜,例如参见Russell和Alexander,J.Immunol.140:1274,1988。然后将所得到的薄膜在碳酸氢盐缓冲液中再水化以产生囊泡。
另一种方法涉及在剪切力存在下的水化。可以用来施加这样的剪切力的设备是公知的,合适的装置(参见例如PCT公开号WO88/06882)。声处理和超声处理也是形成囊泡或者改变其粒径的有效手段。
用于产生囊泡的另一种方法由Collins等披露于J.Pharm.Pharmacol.42:53,1990。该方法涉及熔融形成囊泡的脂质的混合物,并在水性缓冲液存在下用剧烈混合进行水化。
能够理解的是,也可以使用其它方法来制备预形成的囊泡,所述方法包括下面描述的其它熔融法和喷雾注射法。
其它组合物
当在治疗机剂存在下形成囊泡时,优选(但不是必须)通过下述的熔融或喷雾注射法之一来制备它们。也可以这种方式制备不必须含有囊泡的组合物(例如使用脂质组分制备的组合物,所述脂质组分由例如MPG的非离子型表面活性剂或者非离子型表面活性剂和类固醇(诸如MPG/胆固醇)组成),即使它们可以不必须形成囊泡。如其它地方讨论的,这些方法避免了将治疗剂暴露于有机溶剂和高温。不希望受限于任何理论,这些方法因此被认为将由其它配制方法可能导致的对治疗剂的任何破坏(以及由此产生的效价的损失)降到最小。
标准熔融法
在一些实施方案中,本公开内容提供的方法包括熔融脂质组分中的一种或更多种脂质,然后将其与治疗剂混合。在一些实施方案中,这些方法包括以下步骤:提供一种或更多种脂质的熔融混合物,然后将包含治疗剂的水溶液加入到熔融混合物中(标准熔融法)。在一些实施方案中,脂质在加入到水溶液中时形成囊泡。
能够理解的是,可以通过任何方式获得一种或更多种脂质的熔融混合物,例如熔融一种或更多种脂质形成熔融混合物。在一些实施方案中,在120℃和150℃之间(例如120℃和125℃之间,120℃和130℃之间,120℃和140℃之间,130℃和140℃之间,135℃和145℃之间,或者140℃和145℃之间)的温度范围熔融所述一种或更多种脂质。
在一些实施方案中,使通过将抗原溶液添加至一种或更多种脂质的熔融混合物产生的混合物放置在低于60℃例如低于55℃、低于50℃、低于45℃、低于40℃、低于35℃、低于30℃、低于25℃或甚至低于20℃的控温条件下。在一些实施方案中,可以恰好在加入抗原溶液之前将所述一种或更多种脂质的熔融混合物放置在控温条件下(例如使用水浴)。或者,抗原溶液可以被加至所述一种或更多种脂质的熔融混合物,并可以随后将所得到的混合物放置在控温条件下。在一些实施方案中,将通过将抗原溶液添加至所述一种或更多种脂质的熔融混合物产生的混合物放置在20-60℃例如20-50℃、20-40℃、20-30℃、30-60℃、30-50℃、30-40℃、40-60℃、40-50℃或50-60℃的控温条件下。能够理解的是,术语“控温条件”不要求将温度固定在特定温度,而是简单地将温度保持在一定范围(例如,在一些值的±1℃、±2℃、±5℃、±10℃等)内或者将温度保持低于或高于特定温度。
在一些实施方案中,当被添加至熔融的一种或更多种脂质的混合物时,包含抗原的水溶液处于低于50℃的温度,例如低于45℃、低于40℃、低于35℃、低于30℃、低于25℃或甚至低于20℃的温度。在一些实施方案中,当被添加至熔融的一种或更多种脂质的混合物时,包含抗原的水溶液处于20-60℃的范围的温度,例如20-50℃、20-40℃、20-30℃、30-60℃、30-50℃、30-40℃、40-60℃、40-50℃或50-60℃的温度。在一些实施方案中,将包含抗原的水溶液放置在受控温度下,继而添加至熔融的一种或更多种脂质的混合物中。
在一些实施方案中,当添加抗原溶液时,所述一种或更多种脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上50℃的温度。在一些实施方案中,当添加抗原溶液时,所述一种或更多种脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上45℃、40℃、35℃、30℃、25℃、20℃、10℃或5℃的温度。在一些实施方案中,当添加抗原溶液时,所述一种或更多种脂质的熔融脂质混合物处于不高于其熔点以上5-50℃,例如5-40℃、5-30℃、5-20℃、5-10℃、10-50℃、10-40℃、10-30℃或10-20℃的温度。例如,在一些实施方案中,当添加抗原溶液时,所述一种或更多种脂质的熔融脂质混合物处于低于110℃、低于100℃、低于90℃或低于80℃的温度。
反向熔融法
在一些实施方案中,本公开内容提供的了一种方法,其包括熔融脂质组分中的一种或更多种脂质,然后将熔融的所述一种或更多种脂质的混合物添加至包含治疗剂的水溶液(反向熔融法)。在一些实施方案中,脂质在添加至水溶液中时形成囊泡。
在一些实施方案中,在添加熔融脂质混合物的时候,包含治疗剂的水溶液在低于50℃的温度,例如低于45℃、低于40℃、低于35℃、低于30℃、低于25℃或甚至低于20℃的温度。在一些实施方案中,在添加熔融的一种或更多种脂质的混合物的时候,包含预防和/或治疗剂的水溶液在20-60℃例如20-50℃、20-40℃、20-30℃、30-60℃、30-50℃、30-40℃、40-60℃、40-50℃或50-60℃的温度范围。在一些实施方案中,包含治疗剂的水溶液是在受控温度下的。
在一些实施方案中,当添加至水溶液时,所述一种或更多种脂质的熔融混合物处于120℃和150℃之间(例如120℃和125℃之间,120℃和130℃之间,120℃和140℃之间,130℃和140℃之间,135℃和145℃之间,或者140℃和145℃之间)的温度范围。
在一些实施方案中,当添加至水溶液时,所述一种或更多种脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上50℃的温度。在一些实施方案中,当添加至水溶液时,所述一种或更多种脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上45℃、40℃、35℃、30℃、25℃、20℃、10℃或5℃的温度。在一些实施方案中,当添加至水溶液时,所述一种或更多种脂质的熔融混合物处于不高于其熔点以上5-50℃,例如5-40℃、5-30℃、5-20℃、5-10℃、10-50℃、10-40℃、10-30℃或10-20℃的温度。例如,在一些实施方案中,当添加至水溶液时,所述一种或更多种脂质的熔融混合物处于低于120℃、低于110℃、低于100℃、或低于90℃的温度。
溶剂注射方法
在一些实施方案中,可使用溶剂注射方法制备组合物。例如,在一些实施方案中,所述方法可以包括提供一种或更多种脂质的溶液并且将脂质溶液通过注射添加至包含治疗剂的水溶液中。
由于所述一种或更多种脂质可在控温条件下溶于有机溶液,所以溶剂注射方法可提供优于其它制备方法(例如,涉及高温或高压方法的那些方法)的一些优点。而且,使用溶剂注射方法可避免高压均质化。
在一些实施方案中,通过将所述一种或更多种脂质的溶液注射至包含治疗剂的水溶液中产生的混合物被放置在低于55℃例如低于50℃、低于45℃、低于40℃、低于35℃、低于30℃、低于25℃或甚至低于20℃的控温条件下。在一些实施方案中,通过将所述一种或更多种脂质的溶液注射至包含治疗剂的水溶液中产生的混合物被放置在20-55℃例如20-50℃、20-40℃、20-30℃、30-55℃、30-50℃、30-40℃、40-55℃、40-50℃或50-55℃的控温条件下。
在一些实施方案中,在注射所述一种或更多种脂质的溶液之前,使包含预防治疗剂的水溶液处于低于50℃例如低于45℃、低于40℃、低于35℃、低于30℃、低于25℃或甚至低于20℃的温度。在一些实施方案中,在注射所述一种或更多种脂质的溶液之前,使包含治疗剂的水溶液处于20-60℃例如20-50℃、20-40℃、20-30℃、30-60℃、30-50℃、30-40℃、30-35℃、40-60℃或40-50℃的温度范围内。在一些实施方案中,在注射所述一种或更多种脂质的溶液之前,使包含治疗剂的水溶液置于受控温度下。
在一些实施方案中,当注射至包含治疗剂的水溶液中时,所述一种或更多种脂质的溶液处于低于90℃例如低于80℃、低于70℃、低于65℃、低于60℃或低于55℃的温度。在一些实施方案中,当注射至包含治疗剂的水溶液中时,所述一种或更多种脂质的溶液处于50-90℃例如50-80℃、50-70℃、50-65℃、50-60℃、50-55℃、55-80℃、55-70℃、55-65℃或55-60℃的温度范围内。
已经公开了各种溶剂注射方法并且可根据本公开内容进行调整。例如,脂质溶于乙醚的溶剂注射方法讨论于Syan等(Nanoparticle vesicular systems:A versatiletool for drug delivery,J.Chemical and Pharmaceutical Research 2(2):496,2010)中。在另一个实例中,脂质溶于乙醇的溶剂注射方法讨论于Wagner等(LiposomeTechnology for Industrial Purposes,J.Drug Delivery;Volume 2011,Article ID591325)中。在另一个实例中,将叔丁醇用于溶解脂质,如Wang等(Colloids and SurfacesV:Biointerfaces 79:254,2010)描述的。还参见Schubert M.A.等(European Journal ofPharmaceutics and Biopharmaceutics 55:125-131,2003)中的方法。
在一些实施方案中,将所述一种或更多种脂质溶于有机溶剂中。在一些实施方案中,所述溶剂为醚溶剂,例如乙醚。在一些实施方案中,所述溶剂为极性质子水可混溶有机溶剂。质子溶剂为含有可分离质子的溶剂(例如,与如羟基中的氧或如胺基中的氮相结合的氢原子)。在一些实施方案中,极性质子水可混溶有机溶剂为具有2-5个碳原子(例如,2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子或5个碳原子)的脂肪醇。在一些实施方案中,所述溶剂为叔丁醇。在一些实施方案中,所述溶剂为乙醇。
在一些实施方案中,使所述一种或更多种脂质溶于极性质子水可混溶的无任何助溶剂存在的有机溶剂中。在一些实施方案中,使一种或更多种脂质溶于极性质子水可混溶的有一种或更多种助溶剂存在的有机溶剂中。在一些实施方案中,一种或更多种助溶剂也是极性质子水可混溶有机溶剂。在一些实施方案中,所述极性质子水可混溶有机溶剂构成至少70%v/v例如至少75%、80%、90%、95%或99%的溶剂系统。在一些实施方案中,使所述一种或更多种脂质溶于无水溶剂系统中。在一些实施方案中,使所述一种或更多种脂质溶于包括一定量水的溶剂系统中从而不形成囊泡。在一些实施方案中,使一种或更多种脂质溶于包括少于5%v/v例如少于4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的水的溶剂系统。
冻干
在一些实施方案中,可将本公开内容的组合物冻干供将来使用,随后在使用前水化。
冻干包括将组合物冷冻,然后降低环境压力(以及任选地,对制备物进行加热)以使经冷冻的一种或更多种溶剂直接从固相升华为气体(即干燥阶段)。在一些实施方案中,干燥阶段分为初级和次级干燥阶段。
可以通过将组合物置于容器(例如烧瓶、eppendorf管,等等)中并任选地使容器在通过机械制冷(例如使用干冰和甲醇、液氮等)冷却的浴中旋转来完成冷冻阶段。在一些实施方案中,冷冻步骤包括使组合物冷却至组合物的低共熔点以下的温度。由于低共熔点出现在组合物的固相和液相能共存的最低温度,因此使所述物质保持于该点以下的温度确保了在随后步骤中将发生升华而非蒸发。
干燥阶段(或者,当使用两个干燥阶段时的初级干燥阶段)包括降低压力以及任选地将制备物加热至所述一种或更多种溶剂能够升华的点。该干燥阶段通常将所述一种或更多种溶剂中的大部分从组合物中除去。将被理解的是,冷冻和干燥阶段不必是分开的阶段,而是可以以任何方式组合。例如,在一些实施方案中,冷冻和干燥阶段可以重叠。
次级干燥阶段可以任选地用于除去冷冻阶段期间吸收的残留的一种或更多种溶剂。不希望受任何理论约束,该阶段包括升高温度以破坏溶剂分子与冷冻制备物之间已形成的任何物理-化学相互作用。干燥阶段一经完成,在将冻干产品任选地密封之前可用惰性气体(例如氮气或氦气)破坏真空。
在一些实施方案中,冻干产物基本上不含有机溶剂。
可使用如蔗糖、氨基酸或蛋白质(例如明胶或血清白蛋白)的赋形剂在干燥处理和储存期间进一步保护治疗剂。在一些实施方案中,可使用冻干保护剂以在冻干期间保护治疗剂。示例性的冻干保护剂包括蔗糖、海藻糖、聚乙二醇(PEG)、二甲基-琥珀酸盐缓冲液(DMS)、牛血清白蛋白(BSA)、甘露糖醇、山梨糖醇和葡聚糖。可以使用一种或更多种冻干保护剂的任何合适量和/或组合以保护抗原。例如,如美国专利6,290,967中证明的,二糖(例如蔗糖)和6-碳多元醇(例如山梨糖醇)的双重存在与对照组合物相比增强了疫苗组合物的稳定性。每升疫苗以10至70克范围的量添加蔗糖,并且每升疫苗以约15至90克范围的量添加山梨糖醇。
再水化
组合物一经冻干(以及任选被储存),本公开内容的方法可包括使冻干产品再水化的步骤。在一些实施方案中,这通过将冻干产品与水溶液混合来实现。
在一些实施方案中,水溶液包括缓冲液。使用的缓冲液将通常取决于治疗剂的性质。例如,但不限于,可使用PCB缓冲液、Na2HPO4/NaH2PO4缓冲液、PBS缓冲液、二羟乙基甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPS缓冲液等。PCB缓冲液是通过以2∶1∶2的摩尔比混合丙酸钠、甲胂酸钠、以及双-Tris丙烷而产生。改变所加入的HCl的量能够使其在4-9的pH范围内进行缓冲。在一些实施方案中,可以使用碳酸盐缓冲液。
在一些实施方案中,可将组合物冻干供将来使用,随后在使用前水化(例如用无菌水或者含水缓冲液)。在一些实施方案中,可在冻干前将组合物储存在-80℃。
在一些实施方案中,再水化的组合物显示出与冻干前组合物基本相同的效价。
在一些实施方案中,再水化的组合物显示出的效价是该组合物在冻干之前的至少约50%(例如,至少约55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%)。在一些实施方案中,效价水平基于IC50或EC50测量(或者一些其它效价测量,例如在MMR疫苗为基础的组合物的情况下,基于体外微量滴定测定得到的TCID50)。在一些实施方案中,效价水平基于空斑试验的测量结果。
在一些实施方案中,再水化的组合物显示出的效价比未用脂质组分配制的其它等效组合物至少高1.5倍(例如,至少约2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍或5倍)。在一些实施方案中,效价水平基于IC50或EC50测量(或者一些其它效价测量,例如在MMR疫苗为基础的组合物的情况下,基于体外微量滴定测定得到的TCID50)。在一些实施方案中,效价水平基于空斑试验的测量结果。
储存
在一些实施方案中,冻干的组合物可储存一段时间(例如,数天、数周或数月),之后再水化并且向有此需要的对象施用。在一些实施方案中,冻干的组合物在储存期间暴露于超过8℃的温度下(例如,超过10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃或40℃的温度,范围为10℃至40℃的温度、范围为20℃至40℃的温度、范围为30℃至40℃的温度、范围为10℃至30℃的温度、范围为20℃至30℃的温度、室温等)。在一些实施方案中,在不控制温度的条件下储存冻干的组合物。
在一些实施方案中,冻干的组合物是热稳定的,因为在储存期间尽管暴露于超过8℃的温度(例如,超过10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃或40℃的温度,范围为10℃至40℃的温度、范围为20℃至40℃的温度、范围为30℃至40℃的温度、范围为10℃至30℃的温度、范围为20℃至30℃的温度、37℃、室温等)1至6个月(例如,1、2、3、4、5或6个月,12周等)的时期,但是组合物的效价保持基本不变。
在一些实施方案中,与已在2℃至8℃之间储存相同时间段的等效冻干组合物相比,冻干组合物在这些升高的温度下的储存对由效价测定所测得的组合物效价的破坏低于20%(例如,低于15%、低于10%、低于5%、低于1%)。
在一些实施方案中,储存后组合物的效价比在相同的升高温度下储存但是未用脂质组分配制的其它等效冻干组合物至少高1.5倍(例如,至少约2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍或5倍)。在一些实施方案中,效价水平基于IC50或EC50测量(或者一些其它效价测量,例如在以MMR疫苗为基础的组合物的情况下,基于体外微量滴定测定得到的TCID50)。在一些实施方案中,效价水平基于空斑试验的测量结果。
在一些实施方案中,当冻干组合物在25℃储存1、2、3、4、5或6个月后,获得这些效价结果中的一个或更多个。在一些实施方案中,当冻干组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃储存1个月后,获得这些结果。在一些实施方案中,当冻干组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃储存2个月后,获得这些结果。在一些实施方案中,当冻干组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃储存3个月(或12周)后,获得这些结果。在一些实施方案中,当冻干组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃储存4个月后,获得这些结果。在一些实施方案中,当冻干组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃储存5个月后,获得这些结果。在一些实施方案中,当冻干组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃储存6个月后,获得这些结果。在一些实施方案中,这些温度可以允许在一定范围内例如±2℃的范围内变化。
III.剂量和施用
本公开内容的组合物和方法可用于治疗人类,包括成人和儿童。但是,一般而言,本公开内容的组合物和方法可用于任何动物。在一些实施方案中,本文的组合物和方法用于兽医应用,例如犬科和猫科应用。如果期望,本文的组合物和方法还可用于农场动物,例如羊(ovine)、禽、牛、猪和马品种。
通常将以诱导治疗性应答所必需或足够的量和时间施用本文所述的组合物(例如治疗有效量)。给药方案可由单一剂量或者一段时间内的多次剂量构成。待施用组合物的确切量可以依对象而变化,并且可取决于若干因素。因此,应理解的是,一般来讲,所使用的精确剂量将由处方医师来确定,其将不仅取决于对象的体重和施用途径,还取决于对象年龄以及症状的严重程度和/或感染风险。
在一些实施方案中,病毒抗原在免疫原性组合物中的剂量足以产生与在已获批疫苗中的那些相当的TCID50。例如,已获批的疫苗包括至少1000TCID50麻疹病毒、至少5000TCID50腮腺炎病毒和至少1000TCID50风疹病毒。TCID50(半数组织培养感染量)对感染50%被接种的组织培养细胞所需的病毒量进行量化。通常,通过平板培养宿主细胞(例如,Vero细胞)并添加病毒抗原的连续稀释物来测量TCID50值。孵育后,手动观察被感染细胞的百分比并对每个病毒稀释度进行记录,将结果用于数学计算TCID50,例如,根据法(,Arch Exp Pathol Pharmakol 162:480-483,1931)。
在一些实施方案中,从已获批的人用产品(例如药物产品或疫苗)取得治疗剂,并且将组合物以低于标准人用剂量的剂量(例如,范围为标准人用剂量的10-90%、10-80%、10-70%、10-60%、10-50%、10-40%、10-30%、10-20%、20-90%、20-80%、20-70%、20-60%、20-50%、20-40%、20-30%、30-90%、30-80%、30-70%、30-60%、30-50%、30-40%、40-90%、40-80%、40-70%、40-60%、40-50%、50-90%、50-80%、50-70%、50-60%、60-90%、60-80%、60-70%、70-90%、70-80%或80-90%)向人施用。
在一些实施方案中,以单一剂量施用所述组合物。在一些实施方案中,以多于一次剂量施用组合物(例如,1-3次剂量,间隔1-12个月)。
在一些实施方案中,所述组合物可被配制成经胃肠外递送,例如通过注射。在这样的实施方案中,施用可以是例如静脉内、肌内、皮内或皮下,或经由灌输或无针注射技术。在一些实施方案中,所述组合物可被配制成肌内递送。在一些实施方案中,组合物可被配制成皮下递送。对于这样的胃肠外施用,组合物可以以常规冻干组合物被制备并被保持并且在施用前用药学可接受的盐水溶液(例如0.9%盐水溶液)复溶。如现有技术中已知的,可利用药学可接受的酸(例如甲磺酸)调节可注射组合物的pH。可以采用的其它可接受载剂和溶剂,包括林格液(Ringer’s solution)和U.S.P。另外,可常规地采用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮介质。为了该目的,可采用任意温和的不挥发油,包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外,在注射剂的制备中使用脂肪酸,例如油酸。可以在使用前对可注射组合物进行灭菌,例如,通过用保留细菌的滤器过滤、或通过加入可在无菌水或其它无菌可注射介质中溶解或分散的无菌固体组合物形式的灭菌剂。
实施例
下面的实施例描述了制作和实施本文所述之某些组合物的一些示例性方式。应当理解,这些实施例仅用于举例说明目的,而不意在限制本文所述之组合物和方法的范围。
实施例1:两步反向熔融法
本实施例描述了用于制备某些组合物(包括其中在病毒抗原的存在下形成囊泡的组合物)的两步反向熔融法。
在步骤1,将摩尔比为5∶4∶1的下列脂质:1-单棕榈酸甘油(MPG)、胆固醇(CHO)和二鲸蜡基磷酸酯(DCP)放置于平底50ml玻璃烧杯中,确保没有粉末粘在玻璃烧杯侧壁。在约120℃的热油浴中10分钟使脂质熔融,同时在覆盖铝箔的玻璃烧杯中进行偶尔涡动。
在该阶段,将疫苗的原液(减毒的麻疹,腮腺炎和风疹病毒活疫苗,Merck Frosst Std.)在热水浴中以约30℃预孵育5分钟。在步骤2,将所得到的疫苗原液以适当的速度(例如在8000rpm)均质化,将熔融的脂质混合物加入到均质化疫苗原液中,继续在约30℃继续均质化另外30秒。将所得到的匀浆在约30℃以220rpm震荡30分钟。将等体积的在25 mM碳酸氢钠缓冲液(pH 9.7)中的400mM蔗糖溶液加入到震荡过的匀浆中,并在约30℃以220rpm进一步震荡匀浆5分钟。将该混合物等分并在-80℃冷冻,然后冻干并在使用前用0.5ml无菌注射用水(WFI)复溶。
实施例2:麻疹效价测定(TCID50和空斑)
用于定量活病毒疫苗中的感染颗粒数量的常用检测方法是半数组织培养感染量(TCID50)测定。该终点稀释测定定量杀死50%被感染宿主或者在50%的被接种组织培养细胞中产生致细胞病变效果所需的病毒量。在病毒的致死剂量被必需确定或者如果病毒不形成空斑(参见下文备选空斑测定法的探讨)的情况下,该测定法在临床研究应用可能是更为常见。在组织培养的情况下,将宿主细胞铺平板并加入病毒连续稀释物。孵育之后,手动观察并记录每个病毒稀释度的细胞死亡(即被感染细胞)百分比,将结果用于数学计算TCID50结果。由于测定方法和原理的明显差异,TCID50和pfu/ml(空斑测定结果)或者其它感染测定结果并不是等价的。由于细胞感染时间,该方法可能花费多达一周的时间。
将Vero细胞用于这些实验中以评估重配疫苗中麻疹病毒的效价。将根据实施例1制备的重配疫苗在一段时间储存(下文探讨)后复溶到水中用于注射。将Vero细胞在96孔板中生长到80%汇合。将100μl的重配疫苗十倍稀释液加入到孔中,以1/10稀释度开始,在培养基中进行重配疫苗的七次另外的10倍连续稀释。病毒滴度定量在50%的被接种的组织培养细胞中产生致细胞病变所需的病毒量。如上所述复溶后确定麻疹病毒滴度(TCID50)。
如上所述,用于定量活病毒疫苗中的感染颗粒数量的另一种常用检测方法是空斑测定。该检测方法是基于疫苗中的病毒对易感细胞系的致细胞病变效应,并且是一种疫苗组合物效价的体外测量方法(Schalk等,Journal of Virological Methods 117:179-187,2004)。
将根据实施例1制备的重配疫苗在一段时间储存(例如上面所探讨的)后复溶到注射用水中。由于疫苗是三价疫苗,首先加入抗腮腺炎和抗风疹的抗血清中和疫苗中的腮腺炎和风疹病毒,然后在4℃孵育一小时(抗血清在加入之前置于56℃30分钟热灭活)。然后在培养基中制备重配疫苗的100、500、1000、2500和5000倍连续稀释液。在6孔平板中将Vero细胞生长到90%汇合。在感染前一天,更新培养基。用200μl每个稀释度感染细胞(每个稀释度12孔)。让病毒在室温吸收45分钟后,给细胞加入4ml琼脂覆层,其由含4.7%灭活胎牛血清(Invitrogen)、0.11%NaHCO3和0.33%琼脂的培养基M199(BioWhittaker Europe)构成。翻转平板,在36℃和2.5%CO2条件进行培养。9天后,去除琼脂覆层,将细胞在96%乙醇中固定2分钟。接着将细胞在石炭酸品红中染色并干燥。通常手动计数空斑,将结果与用于制备平板的稀释因子结合来计算每样品单位体积的空斑形成单位的数量(pfu/ml)。pfu/ml结果代表了样品中的感染颗粒的数量,并且是基于假设每个形成的空斑代表了一个感染病毒颗粒。
实施例3:含有病毒抗原的囊泡以及与病毒抗原混合的预形成的囊泡的比较:脂质浓度对热稳定性和液体稳定性的影响
本研究被设计来评估使用如实施例1所述反向熔融工艺以不同脂质浓度、缓冲液和蔗糖配制成的含有减毒活的非离子型表面活性剂囊泡(NISVs)的稳定性。该研究也比较了将配制到囊泡中与预形成的囊泡一起配制。将样品储存在5±3℃和37±2℃。使用市售疫苗作为阳性对照进行比较。使用TCID50作为体外测试(如实施例2所述)来确定储存1、2和12周后的疫苗效价。将结果与市售疫苗的表现进行比较以评估复溶样品的热稳定性益处。
将摩尔比为5∶4∶1的单棕榈酸甘油(MPG)、胆固醇(CHO)和二鲸蜡基磷酸酯(DCP)放置在平底玻璃烧杯的底部。在120℃-122℃油浴中熔融所述脂质并不时混合。将疫苗(用提供的稀释剂复溶)在30℃-32℃温热5分钟。以8000rpm均质化疫苗溶液,立即将熔融的脂质转移到疫苗溶液中,并在30℃-32℃温热。均质化(对检品(TA)8和9为10分钟;对检品1-7和10-12为30秒)后,将所得到的混合物在30℃-32℃下以220rpm混合30分钟。对某些样品,随后添加等体积的400mM蔗糖溶液,任选地用25mM碳酸氢盐缓冲液或无菌水制备。将制备好的样品在30℃-32℃下以220rpm再混合5分钟。对于检品4,在加入熔融脂质之前将浓缩的磷酸盐缓冲液加入到疫苗溶液中。将溶液等分为1.0mL份/小瓶(检品1-4,8,9,10,11)和0.5mL(检品5-7和12)中,然后进行冻干。将冻干小瓶储存在5±3℃和37±2℃。在进行半数组织培养感染量(TCID50)测定之前用1.0 mL的无菌水复溶每小瓶冻干样品。用于该稳定性研究的样品如下表4中所描述。
[表4]
**使用pH 9.7的25mM碳酸氢钠溶解400mM蔗糖并在冻干前加入到样品中
从恒温槽中收集冻干样品。将所有样品编码并在测试前储存在4℃。用体外微量滴定测定法确定麻疹组分的效价。TCID50测定使用统计分析过的改进型终点稀释测定估计存活病毒。简要地说,将这些样品的连续稀释液和参考标准制备物与Vero细胞(非洲绿猴肾上皮细胞;ATCC-CCL81)一起接种在每排10孔的微量滴定板中,用于1、2和12周样品。Vero细胞系是从正常成体非洲绿猴的肾建立的。用50μL的Vero细胞接种微量滴定板以在5%CO2/37℃下24小时获得4.0×105细胞/mL的滴度(在这些条件下预期75-80%的细胞汇合)。用1000μl的无菌蒸馏水复溶每个样品,手动混合15秒,然后中速(设定5)涡旋45秒。将复溶样品(每时间点4小瓶)以不稀释和稀释的形式(10-1至10-7)在5分钟内以一式四份转移到96孔板的微量滴定板上(100μL/孔)。在用5%FBS补充的IMDM培养基填充的24孔板中制备稀释液10-1至10-7,以一式四份将100μL加入到单个孔中。包括阳性和阴性对照(分别是经内部处理的市售疫苗/市售疫苗和细胞)。将平板在35℃/5%CO2条件下培养5天。在孵育期结束时,计数并记录特定病毒致细胞病变效果(CPE)的数量。根据这些标准计算每人用剂量的TCID50。使用TCID50值推导统计学分析的几何平均滴度。
为进行所有样品的统计学分析,使用用于Prism 5 for windows(GraphPadSoftware,San Diego,CA)软件将转换的变量关联起来以在各组之间进行双尾不成对t-检验并检测p值。0.05到0.01的p值指示统计学显著性,而小于0.01的p值指示高统计学显著性。如果一组中的所有实验的滴度是相等的,就可以处理TCID50值以便将滴度舍入到第四位小数点以避免对于非参数统计学分析的软件限制。
图1描述了用25mg/mL脂质配制的样品(检品1、5和8)、工艺对照检品10和检品12(将市售疫苗进行所有处理步骤,但是不含脂质,含以及不含蔗糖和缓冲液)以及市售疫苗(,检品13)在5±3℃和37±2℃两种温度时的TCID50测定结果。就容器密封系统和填充体积而言,检品1(1mL重配目的样品在6cc小瓶中)与检品5(0.5mL填充到2cc小瓶中)是不同的,但是获得的TCID50结果和物理化学特征(数据未显示)是相当的。检品1、5和8在5±3℃和37±2℃下储存超过1、2和12周的效价比WHO建议的极限值(3.0log10)高(图1)。用25mg/mL脂质复溶的样品在更高温度(37±2℃)下储存超过12周没有显示效价损失,而市售疫苗效价显著降低(p<0.0001)。加入到预形成的NISV中和经反向熔融法配制的疫苗,显示出相当的TCID50结果。还观察到当储存在更高温度(37±2℃)下超过一周时,不含脂质的工艺对照检品10和检品12是不稳定的(图1,检品10)。检品12在更高温度(37±2℃)下一周后不显示稳定性,相比之下,市售疫苗在37±2℃下稳定达两周但是12周后显示了降低。这些结果证明了在升高的温度下含有25mg/mL脂质浓度的疫苗(含有或不含蔗糖和缓冲液)的热稳定性。在5±3℃时,检品1、5和8、工艺对照(检品10和12)以及市售(检品13)在储存超过12周后没有显示效价损失。与市售疫苗相比,在37±2℃下储存的检品1、5和8保持了更高的效价。
图2显示了用12.5mg/mL脂质配制的样品(检品2、4、6和9)、工艺对照(将市售疫苗进行所有处理步骤,但是不含脂质,含以及不含蔗糖和缓冲液)以及市售疫苗()在5±3℃和37±2℃两种温度时的TCID50测定结果。就容器密封系统和填充体积而言,检品2(1mL重配目的检品在6cc小瓶中)与检品6(0.5mL填充到2cc小瓶中)相比是不同的。在整个更高温度的储存期间,检品6的表现更一致。检品2、4、6和9在5±3℃和37±2℃下储存超过1、2和12周的效价比WHO建议的极限值(3.0log10)高(图2)。含12.5mg/mL脂质重配的样品在更高温度(37±2℃)下储存超过12周没有显示效价损失,而市售疫苗效价显著降低(p<0.0001)。预形成的NISV(检品9)和反向熔融法组合物(检品2、4和6)显示出相当的TCID结果。还观察到的是,当储存在更高温度(37±2℃)下超过一周时,重配工艺对照样品是不稳定的(图2,检品10和检品11)。检品12在更高温度下一周后不显示效价损失,相比之下,市售疫苗在37±2℃下稳定达两周。这些结果证明了含有12.5mg/mL脂质浓度的疫苗的热稳定性。在5±3℃时,样品(检品2、4、6和9)、工艺对照(不含脂质)以及市售疫苗显示了高达12周的稳定性。与储存2和12周的原有市售疫苗相比,在两种温度(5±3℃和37±2℃)下储存的用NISVs配制的样品(检品2、4、6和9)保持了更高的效价。
总而言之,经反向熔融工艺制备的NISVs中(12.5或者25.0mg/mL的脂质)含有疫苗的冻干样品在5±3℃和37±2℃下储存超过12周没有产生效价变化。与含有较低脂质浓度(12.5mg/mL)的样品相比,所检测的25mg/mL最高脂质浓度在保持效价方面看起来似乎并未提供任何额外益处。含有加入到预形成的NISVs中的疫苗的冻干样品在5±3℃和37±2℃下储存超过12周没有效价损失。
实施例4:用不同脂质组分制备的组合物的物理特征
本研究的主要目标是研究1,2-二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)作为备选阴离子表面活性剂代替反向熔融法制备的脂质组合物(如实施例1所述)中的DCP的用途。第二目标是研究排除组合物中的DCP或者DPPG(以及CHO)。
将MPG、CHO和DCP或DPPG以5∶4∶1的摩尔比放置在平底玻璃烧杯的底部。在120℃-122℃油浴(对于含DPPG的样品为140℃)中熔融脂质并不时混合。将疫苗(用提供的稀释剂复溶)在30℃-32℃温热5分钟。以8000rpm均质化疫苗溶液,并立即将熔融的脂质转移到疫苗溶液中,在30℃-32℃温热。均质化30-40秒后,将混合物在30℃-32℃下以220rpm混合30分钟。将溶液等分为0.5mL/小瓶(2cc冻干瓶),然后进行冻干。冻干后将冻干小瓶储存在2-8℃。在分析之前用0.5mL的蒸馏水(GIBCO)复溶每小瓶的冻干样品。工艺对照检品5是通过将水化的市售疫苗在没有脂质的情况下经反向熔融工艺而制备的。市售疫苗对照检品6保持为冻干粉直到进行分析。用于该研究的样品如下表5中所描述。
[表5]
按照以下段落的描述在各种样品上进行的许多生物物理学特征鉴定。经标准方法测量样品的pH。使用电泳光散射分析样品的zeta电位。使用Zetasizer Nano ZS(ModelNo.ZEN3600)经动态光散射分析每个样品的尺寸分布。简要地说,将所有含有脂质的样品在0.2μm滤过的WFI中稀释成50μg/mL脂质。在加样到仪器之前将稀释样品进行剧烈涡旋。将样品的折射率设定为1.45,对每个样品进行三次连续测量。使用40X物镜的光显微镜在t=0对检品1-6进行检测。在冻干后使用Karl Fischer Titrator分析样品的残留水含量。样品的生物物理学特征鉴定结果示于表6中。
[表6]
*基于Karl Fischer Titration对冻干后检品进行计算
**使用Malvern Zetasizer Nano ZS经DLS计算的流体力学直径
***使用Malvern Zetasizer Nauo ZS经电泳光散射计算
所有样品的pH值与市售疫苗对照(检品6)相当。所有样品的残留水含量在3.30-6.29%的范围。其中最低的是含5∶4∶1摩尔脂质比的MPG∶CHO∶DCP的检品1。在检品3(MPG∶CHO;5∶4摩尔脂质比)中观察到了最高的残留水含量。与检品1(MPG∶CHO∶DCP)相比,检品2(含有MPG∶CHO∶DPPG)的Z均值和多分散指数稍高,这暗示了检品2中的颗粒的多分散体系(参见表6)。对于流体力学直径和PI,检品3(803.1nm;PI=0.741)和检品4(707.0nm;PI=0.777)比那些使用离子型表面活性剂制备的检品(检品1和检品2)更高。对于Zeta电位值,含有阴离子表面活性剂的检品1(-48.5mV)和检品2(-38.8mV)具有比那些不含阴离子表面活性剂的以及不含脂质的对照(-5.68到-16.7mV)更高的负值。用显微镜观察到了含有表面活性剂的样品的脂质囊泡颗粒(LPV)(检品1和2,数据未显示)。然而,在不含表面活性剂的样品(检品3和4)中见到了肉眼可见的脂质颗粒聚集体。在不含脂质的对照中(检品5和6)没有见到肉眼可见的脂质颗粒。所有样品均观察到了浅黄色的冻干饼状(参见表6)。
实施例5:阴离子表面活性剂在囊泡中和含示例性治疗性蛋白质的预形成的囊泡中的使用
本研究的主要目标是研究使用1,2-二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)作为备选阴离子表面活性剂代替反向熔融法(如实施例1所述)制备的用示例性治疗性蛋白质(曲妥珠单抗,一种干扰HER2/neu受体的单克隆抗体)的NISV制剂中的DCP。第二目标是研究治疗性蛋白质与预形成的阴离子表面活性剂囊泡的混合是否增强热稳定性。
将MPG、CHO和DPPG以5∶4∶1的摩尔比放置在平底玻璃烧杯的底部。在140℃油浴中熔融脂质并不时混合。将透析的曲妥珠单抗溶液(缓冲液置换为5%蔗糖的25mM Tris和25mM柠檬酸钠缓冲液,pH6.5)在32℃-35℃温热5-10分钟。以8000rpm均质化曲妥珠单抗溶液,并立即将熔融的脂质转移到治疗性蛋白质溶液中,在30℃-32℃温热。均质化2分钟后,在震荡培养箱中300℃-350℃下以220rpm混合脂质体混合物15-30分钟。将溶液等分为0.5mL/小瓶(2cc冻干瓶)中,然后进行冻干。冻干后将冻干小瓶储存在2-8℃。用0.5mL的WFI水复溶每小瓶的冻干检品。类似地制备预形成的囊泡,例外之处是仅用缓冲液进行均质化步骤并在配制后而不是配制期间将曲妥珠单抗混合到预形成的囊泡中。用于该稳定性研究的检品如以下表7中所描述。对于不合LPV的对照(“对照-4”,未配制的曲妥珠单抗),不透析曲妥珠单抗溶液并将其保持在20 mM组氨酸、7%蔗糖、0.01%PS20,pH 6.0的缓冲液中。
表7
实施例6:在阴离子表面活性剂囊泡中或者与预形成的囊泡混合的示例性治疗性蛋白质的热稳定性比较
在两种温度(5℃±3℃和37℃±2℃)下储存8周后,使用尺寸排阻色谱法(SEC)程序对NISV中配制的曲妥珠单抗的纯度和效价进行评估以确定百分比纯度和BT-474抗增殖生物学效价测定。曲妥珠单抗的有效效价测定是BT-474增殖抑制生物测定。该测定测量Fab结合亲和力活性。曲妥珠单抗增殖抑制生物测定的原理是:使用设计来优化受体表达的程序在细胞平板中制备相关靶细胞系,通常是BT-474细胞。然后制备曲妥珠单抗的连续稀释液,将其加入到平板中并使其结合到BT-474细胞一段时间。将样品结果作为细胞生长的抑制百分比或者作为针对参照标准的相对效价测量进行报告。将该结果与未配制的治疗性蛋白质的表现进行比较以评估复溶制剂的热稳定性益处。
图3显示了检品LPV-1(用含有DPPG的囊泡配制的曲妥珠单抗)与不含LPV的对照检品(未配制的曲妥珠单抗)相比较的SEC百分比纯度结果,用来评估在40℃和4℃相比储存8周对热稳定性的影响。在40℃储存8周与在4℃储存8周相比,不含LPV的参考对照显示了百分比纯度损失(通过SEC上的单一主峰所测量)。与不含LPV的对照相比,在4℃或者40℃储存8周,含有脂质的检品(LPV-1)中都没有观察到百分比纯度的差异。
图4显示了检品LPV-1(用含有DPPG的囊泡配制的曲妥珠单抗)与不含LPV的对照检品(未配制的曲妥珠单抗)相比较的BT-474抗增殖生物学效价测定结果,用来评估在40℃和4℃相比储存8周对热稳定性的影响。在40℃储存8周与在4℃储存8周相比,不含LPV的参考对照显示了效价损失(通过UV检测所测量)。与不含LPV的对照相比,在4℃或者40℃储存8周,含有脂质的检品(LPV-1)中都没有观察到百分比纯度的差异。治疗性蛋白质曲妥珠单抗无论是与含有DPPG的囊泡配制还是与预形成的阴离子表面活性剂囊泡混合,都可以观察到相当的结果。
其它实施方案
从本文中公开的说明书或公开内容的实践来考虑,本公开内容的其它实施方案对于本领域技术人员而言将是显而易见的。本说明书和实施例旨在仅被认为用作示例,本公开内容的真实保护范围由以下权利要求表明。本文中提及之任何参考文献的内容均通过引用以其整体并入本文。
Claims (8)
1.一种制备热稳定性冻干组合物的方法,所述方法包括:
通过以下来制备预形成的囊泡:将包含非离子型表面活性剂、类固醇和离子型两亲物的脂质在120℃至140℃下熔融,并且将所熔融的脂质在缓冲液中均质化,以产生预形成的囊泡;
将所述预形成的囊泡与包含不耐热治疗剂的水溶液混合以形成混合物,所述不耐热治疗剂包含减毒病毒或治疗性蛋白质;
均质化所述混合物以形成匀浆;以及
冻干所述匀浆,
其中所述离子型两亲物是二鲸蜡基磷酸酯(DCP)或二磷脂酰甘油(DPPG),所述非离子型表面活性剂是1-单棕榈酸甘油(MPG)并且所述类固醇是胆固醇(CHO)。
2.权利要求1的方法,其中所述离子型两亲物是DCP。
3.权利要求1的方法,其中所述离子型两亲物是DPPG。
4.权利要求1的方法,其中制备所述预形成的囊泡的步骤包括:
(a)熔融所述脂质组分,以及将所述熔融的脂质组分加入到不含所述不耐热的治疗剂的所述水溶液中;或者
(b)熔融所述脂质组分,以及将不含所述不耐热的治疗剂的水溶液加入到所述熔融的脂质组分中。
5.权利要求1-4中任一项的方法,其中所述减毒病毒选自减毒麻疹病毒、减毒腮腺炎病毒、减毒风疹病毒、减毒水痘病毒及其组合。
6.权利要求1-4中任一项的方法,其中所述减毒病毒选自减毒轮状病毒、减毒带状疱疹病毒、减毒牛痘病毒、减毒黄热病毒及其组合。
7.权利要求1-4中任一项的方法,其中所述治疗剂包含治疗性蛋白质。
8.权利要求7的方法,其中所述治疗性蛋白质是抗体。
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Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2767392C (en) | 2009-07-06 | 2017-03-14 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
US9907746B2 (en) | 2009-07-06 | 2018-03-06 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
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MX359103B (es) | 2011-01-13 | 2018-09-14 | Variation Biotechnologies Inc | Composiciones y sus usos en el tratamiento de infecciones virales. |
WO2013104995A2 (en) | 2012-01-12 | 2013-07-18 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
WO2013111012A2 (en) | 2012-01-27 | 2013-08-01 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods and compositions for therapeutic agents |
RU2718554C1 (ru) | 2017-09-25 | 2020-04-08 | Георгий Георгиевич Чумбуридзе | Термостабильная композиция, обладающая антивирусной и антибактериальной активностью и ее использование |
GB201814959D0 (en) * | 2018-09-14 | 2018-10-31 | Secr Defence | Methods for the preparation of a pharmaceutical-vesicle formulation and associated products and uses |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101574394A (zh) * | 2008-05-09 | 2009-11-11 | 北京因科瑞斯医药科技有限公司 | 马钱子生物碱囊泡及其制备方法 |
Family Cites Families (135)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4024241A (en) | 1974-09-27 | 1977-05-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health, Education And Welfare | Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid |
US3952097A (en) | 1974-09-27 | 1976-04-20 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health, Education And Welfare | Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid |
US4349538A (en) | 1979-12-07 | 1982-09-14 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid |
JPS56115727A (en) | 1980-02-19 | 1981-09-11 | Kuraray Co Ltd | Carrier for immobilizing physiologically active substance |
US4537769A (en) | 1982-04-06 | 1985-08-27 | American Cyanamid Company | Stabilization of influenza virus vaccine |
US4894228A (en) | 1982-04-07 | 1990-01-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccine against hepatitis A virus |
US4436727A (en) | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
US4866034A (en) | 1982-05-26 | 1989-09-12 | Ribi Immunochem Research Inc. | Refined detoxified endotoxin |
US4877611A (en) | 1986-04-15 | 1989-10-31 | Ribi Immunochem Research Inc. | Vaccine containing tumor antigens and adjuvants |
US4983387A (en) | 1986-05-19 | 1991-01-08 | Viral Technologies Inc. | HIV related peptides, immunogenic antigens, and use therefor as subunit vaccine for AIDS virus |
AU603659B2 (en) | 1987-03-13 | 1990-11-22 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Lipid vesicles formed of surfactants and steroids |
US5057540A (en) | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
US5160669A (en) | 1988-03-03 | 1992-11-03 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Method of making oil filled paucilamellar lipid vesicles |
US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
US4911517A (en) | 1988-09-09 | 1990-03-27 | Square D Company | Means for clamping fiber optical cable |
US5549910A (en) | 1989-03-31 | 1996-08-27 | The Regents Of The University Of California | Preparation of liposome and lipid complex compositions |
US5817318A (en) | 1989-05-03 | 1998-10-06 | Connaught Laboratories Limited | Synthetic peptides for an HIV-1 vaccine |
CN1022331C (zh) | 1989-08-17 | 1993-10-06 | 浙江省医学科学院 | 甲型肝炎减毒活疫苗毒种及其制造方法 |
DE3934366A1 (de) | 1989-10-14 | 1991-04-18 | Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg Speyer Haus | Vakzine zum schutz vor hiv-virusinfektionen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als diagnostikum und immuntherapeutikum |
IT1238343B (it) | 1989-10-16 | 1993-07-13 | Cesalpino Andrea Fond | Procedimento per la preparazione di vaccini capaci di generare non solo la risposta immune dei linfociti t helper,ma anche un'efficace risposta di linfociti t citotossici,e vaccini con queste caratteristiche |
IE904098A1 (en) | 1989-11-13 | 1991-05-22 | Nova Pharm Corp | Lipospheres for controlled delivery of substances |
CA2086094C (en) | 1990-06-29 | 2000-05-30 | Gail L. Barchfeld | Vaccine compositions containing liposomes |
IS1685B (is) * | 1990-12-11 | 1998-02-24 | Bracco International B.V. | Aðferð við að búa til fitukúlur (liposomes) sem eru gæddar auknum hæfileika til að draga í sig og halda í sér aðskotaefnum |
US5250236A (en) | 1991-08-05 | 1993-10-05 | Gasco Maria R | Method for producing solid lipid microspheres having a narrow size distribution |
GB9207731D0 (en) * | 1992-04-07 | 1992-05-27 | Proteus Molecular Design | Improvements in or relating to vaccines |
DE59307395D1 (de) | 1992-07-08 | 1997-10-23 | Dianorm G Maierhofer Gmbh | Liposomen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur herstellung eines arzneimittels |
SG73999A1 (en) | 1992-09-18 | 2000-07-18 | Us Health | Hepatitis a virus vaccines |
US5393527A (en) | 1993-01-04 | 1995-02-28 | Becton, Dickinson And Company | Stabilized microspheres and methods of preparation |
SG44911A1 (en) | 1993-02-26 | 1997-12-19 | Fountain Pharm Inc | Vaccine delivery system and shelf-stable precursor solution for remote encapsulation of active ingredients |
US5885486A (en) | 1993-03-05 | 1999-03-23 | Pharmaciaand Upjohn Ab | Solid lipid particles, particles of bioactive agents and methods for the manufacture and use thereof |
DE69407292T2 (de) | 1993-06-30 | 1998-06-25 | Genentech Inc | Verfahren zur herstellung von liposomen |
US5762939A (en) | 1993-09-13 | 1998-06-09 | Mg-Pmc, Llc | Method for producing influenza hemagglutinin multivalent vaccines using baculovirus |
GB9320597D0 (en) * | 1993-10-06 | 1993-11-24 | Proteus Molecular Design | Improvements in and realting to vaccines |
EP0729473B1 (en) | 1993-11-17 | 2000-08-23 | OM Pharma | Glucosamine disaccharides, method for their preparation, pharmaceutical composition comprising same, and their use |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
BR9506484A (pt) | 1994-01-11 | 1997-10-07 | Vlaams Interuniv Inst Biotech | Neuraminidase recombinate seu vetor processo para sua manufatura e uso como vacina contra influenza |
US5824536A (en) | 1994-08-23 | 1998-10-20 | St. Jude Children's Research Hospital | Influenza virus replicated in mammalian cell culture and vaccine production |
US6235888B1 (en) | 1994-10-05 | 2001-05-22 | The General Hospital Corporation | Hepatitis C virus vaccine |
US20030104576A1 (en) | 1994-10-07 | 2003-06-05 | Jonathan W. Nyce | Dna construct, composition, formulations & methods for making the construct & for modulating expression |
GB9515868D0 (en) * | 1995-08-02 | 1995-10-04 | Proteus Molecular Design | Therapeutic method |
GB9522351D0 (en) | 1995-11-01 | 1996-01-03 | Medeva Holdings Bv | Vaccine compositions |
US5700679A (en) * | 1996-06-07 | 1997-12-23 | Novavax, Inc. | Lipid vesicles having a bilayer containing a surfactant with anti-viral and spermicidal activity |
US5919480A (en) | 1996-06-24 | 1999-07-06 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Liposomal influenza vaccine composition and method |
ES2242226T3 (es) | 1996-07-03 | 2005-11-01 | Eisai Co., Ltd. | Composiciones que contienen analogos del lipido a y procedimiento parasu preparacion. |
ZA975889B (en) | 1996-07-08 | 1998-02-23 | Genentech Inc | HIV envelope polypeptides and vaccine. |
EP0938298B1 (en) | 1996-09-13 | 2002-12-04 | Lipoxen Technologies Limited | Liposome-based composition |
US5910306A (en) | 1996-11-14 | 1999-06-08 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Transdermal delivery system for antigen |
US6290967B1 (en) | 1996-12-20 | 2001-09-18 | Merck & Co., Inc. | Stabilizers for lyophilized vaccines |
FR2760367B1 (fr) | 1997-03-06 | 1999-04-30 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Composition vaccinale destinee a la prevention ou au traitement des hepatites c |
TW570803B (en) | 1997-04-09 | 2004-01-11 | Duphar Int Res | Influenza vaccine |
US6764840B2 (en) | 1997-05-08 | 2004-07-20 | Corixa Corporation | Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors |
US6303347B1 (en) | 1997-05-08 | 2001-10-16 | Corixa Corporation | Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors |
US6113918A (en) | 1997-05-08 | 2000-09-05 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors |
US6080725A (en) | 1997-05-20 | 2000-06-27 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof |
NZ500779A (en) | 1997-05-20 | 2001-06-29 | Galenica Pharmaceuticals Inc | Triterpene saponin analogs having adjuvant and immunostimulatory activity |
GB9725084D0 (en) | 1997-11-28 | 1998-01-28 | Medeva Europ Ltd | Vaccine compositions |
US6503753B1 (en) | 1998-02-13 | 2003-01-07 | Adan Rios | Method for the development of an HIV vaccine |
DE69936337T2 (de) | 1998-02-13 | 2008-02-21 | Adan Sugar Land Rios | Verfahren zur entwicklung von einem hiv impfstoff |
WO1999058726A1 (en) | 1998-05-12 | 1999-11-18 | Genecure Llc | Replication defective hiv vaccine |
US7067134B1 (en) | 1998-08-12 | 2006-06-27 | University Of Western Ontario | HIV vaccine |
AT408615B (de) | 1998-09-15 | 2002-01-25 | Immuno Ag | Neue influenzavirus-impfstoffzusammensetzung |
GB9822714D0 (en) | 1998-10-16 | 1998-12-09 | Smithkline Beecham Sa | Vaccines |
CN1062770C (zh) | 1998-11-12 | 2001-03-07 | 卫生部长春生物制品研究所 | 甲肝-麻疹二联疫苗及其生产方法 |
US6287570B1 (en) | 1998-11-23 | 2001-09-11 | Patricia L. Foley | Vaccine against swine influenza virus |
GB9826069D0 (en) | 1998-11-28 | 1999-01-20 | Univ Leeds | HIV vaccine |
IL127331A0 (en) | 1998-11-30 | 1999-09-22 | Yeda Res & Dev | Peptide-based vaccine for influenza |
US20040006242A1 (en) | 1999-02-01 | 2004-01-08 | Hawkins Lynn D. | Immunomodulatory compounds and method of use thereof |
US6551600B2 (en) | 1999-02-01 | 2003-04-22 | Eisai Co., Ltd. | Immunological adjuvant compounds compositions and methods of use thereof |
AT407958B (de) | 1999-02-11 | 2001-07-25 | Immuno Ag | Inaktivierte influenza-virus-vakzine zur nasalen oder oralen applikation |
US6248363B1 (en) | 1999-11-23 | 2001-06-19 | Lipocine, Inc. | Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions |
NO311807B1 (no) | 1999-03-04 | 2002-01-28 | Bionor Immuno As | HIV-peptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay- testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkalt av HIV |
EP1200622A4 (en) | 1999-07-06 | 2004-12-22 | Merck & Co Inc | HIV VACCINE COMPRISING A GAG GENE VEHICLE ADENOVIRUS |
WO2001005433A2 (en) | 1999-07-14 | 2001-01-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Delivery and retention of activity agents to lymph nodes |
BR0012624B1 (pt) | 1999-07-15 | 2011-08-09 | métodos para a preparação de agentes terapêuticos envolvidos por lipìdeos. | |
MXPA02000969A (es) | 1999-07-28 | 2004-04-21 | Smith Stephen | Vacuna de virus de inmuno-deficiencia humana atenuado controlado en forma condicional. |
EP1878424A3 (en) | 1999-09-24 | 2008-04-09 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Novel vaccine |
AU2001238478C1 (en) | 2000-02-15 | 2006-11-09 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Proteosome influenza vaccine |
FR2806912B1 (fr) | 2000-04-04 | 2004-07-23 | Fond Mondiale Rech Et Preventi | UTILISATION DE PROTEINES gp120 ET gp160 MODIFIEES DANS LA BOUCLE V3 DU VIH-1 POUR LA PREPARATION DE COMPOSITIONS VACCINALES ET FORMULATIONS LES CONTENANT |
US20030092145A1 (en) * | 2000-08-24 | 2003-05-15 | Vic Jira | Viral vaccine composition, process, and methods of use |
ES2327103T3 (es) | 2000-09-25 | 2009-10-26 | Polymun Scientific Immunbiologische Forschung Gmbh | Vacuna viva de influenzavirus y procedimiento de fabricacion. |
WO2002051390A2 (en) | 2000-12-27 | 2002-07-04 | Ares Trading S.A. | Amphiphilic lipid nanoparticles for peptide and/or protein incorporation |
TWI228420B (en) | 2001-05-30 | 2005-03-01 | Smithkline Beecham Pharma Gmbh | Novel vaccine composition |
US7361352B2 (en) | 2001-08-15 | 2008-04-22 | Acambis, Inc. | Influenza immunogen and vaccine |
ES2339762T3 (es) | 2002-01-14 | 2010-05-25 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Vacuna contra el vih y procedimiento de uso. |
US7285289B2 (en) | 2002-04-12 | 2007-10-23 | Nagy Jon O | Nanoparticle vaccines |
US20050169979A1 (en) | 2002-07-03 | 2005-08-04 | Dov Michaeli | Liposomal vaccine |
ATE348633T1 (de) | 2002-07-05 | 2007-01-15 | Lipoxen Technologies Ltd | Verfahren zur verstärkung einer immunantwort von nukleinsäureimpfungen |
US20040011840A1 (en) | 2002-07-22 | 2004-01-22 | Lovett Terry E. | Rolling motorcycle bag |
EP1597400B8 (en) | 2003-02-25 | 2013-10-09 | MedImmune, LLC | Methods of producing influenza vaccine compositions |
EP1618127B1 (en) | 2003-04-10 | 2014-12-10 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Immunogenic composition comprising a spike protein of the SARS coronavirus |
WO2005014778A2 (en) | 2003-05-15 | 2005-02-17 | The Board Of Regents For Oklahoma State University | Dna vaccine expressing ha1 of equine-2 influenza virus |
AU2004247505B2 (en) | 2003-06-18 | 2010-01-21 | Biolab Ltd. | Sphingolipids' polyalkylamines conjugates |
US7368537B2 (en) | 2003-07-15 | 2008-05-06 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Subunit vaccine against respiratory syncytial virus infection |
GB0321615D0 (en) | 2003-09-15 | 2003-10-15 | Glaxo Group Ltd | Improvements in vaccination |
US20050095283A1 (en) | 2003-09-16 | 2005-05-05 | Aphios Corporation | Compositions and methods for topically treating diseases |
US20080160089A1 (en) | 2003-10-14 | 2008-07-03 | Medivas, Llc | Vaccine delivery compositions and methods of use |
US7498309B2 (en) | 2003-11-29 | 2009-03-03 | Sangstat Medical Corporation | Pharmaceutical compositions for bioactive peptide agents |
US20060024670A1 (en) | 2004-05-18 | 2006-02-02 | Luke Catherine J | Influenza virus vaccine composition and methods of use |
CA2822895A1 (en) | 2004-05-25 | 2005-12-08 | Medimmune, Llc | Influenza hemagglutinin and neuraminidase variants |
CA2565500A1 (en) | 2004-05-28 | 2005-12-15 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine compositions comprising virosomes and a saponin adjuvant |
DE602005008270D1 (de) | 2004-10-08 | 2008-08-28 | Alza Corp | Verfahren zur einführung eines lipid-verknüpften teils in eine vorgeformte lipidanordnung mit mikrowellen |
EP1645283A1 (en) | 2004-10-08 | 2006-04-12 | Chiron Behring GmbH & Co. KG | Combination vaccine |
US7510719B2 (en) | 2004-12-08 | 2009-03-31 | Medimmune, Llc | Methods of producing influenza vaccine compositions |
EP1676569A1 (en) | 2004-12-30 | 2006-07-05 | Pevion Biotech Ltd. | Lyophilization of virosomes |
WO2006092046A1 (en) | 2005-03-01 | 2006-09-08 | Variation Biotechnologies Inc. | Hiv vaccine composition |
US20090028903A1 (en) | 2005-03-23 | 2009-01-29 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Novel use |
US7348011B2 (en) | 2005-06-10 | 2008-03-25 | Sudershan Biotech Ltd. | Hepatitis C virus vaccine |
US20080213461A1 (en) | 2005-06-17 | 2008-09-04 | Georgia Tech Research Corporation | Coated Microstructures and Methods of Manufacture Thereof |
CA2630738C (en) | 2005-11-25 | 2013-09-03 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Immunostimulatory oligoribonucleotides |
WO2007120368A2 (en) | 2006-01-09 | 2007-10-25 | The Regents Of The University Of California | Immunostimulatory combinations for vaccine adjuvants |
US20100226932A1 (en) * | 2006-02-22 | 2010-09-09 | Novavax, Inc. | Adjuvant and Vaccine Compositions |
US8846078B2 (en) | 2006-03-21 | 2014-09-30 | The Secretary Of State For Environment, Food & Rural Affairs Acting Through The Animal Health And Veterinary Laboratories Agency | Brucellosis DNA vaccine |
AU2007231027B2 (en) | 2006-03-24 | 2013-10-03 | Novartis Influenza Vaccines Marburg Gmbh | Storage of influenza vaccines without refrigeration |
JP5072275B2 (ja) | 2006-07-03 | 2012-11-14 | テルモ株式会社 | 閉鎖小胞の分離方法、製剤の製造方法および評価方法 |
EP2068937A2 (en) | 2006-09-05 | 2009-06-17 | Medivas, LLC | Polymer-stabilized liposomal compositions and methods of use |
PT2486938T (pt) | 2006-09-26 | 2018-06-12 | Infectious Disease Res Inst | Composição para vacina contendo adjuvante sintético |
US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
WO2008106803A1 (en) | 2007-03-07 | 2008-09-12 | Nventa Biopharmaceuticals Corporation | Double-stranded locked nucleic acid compositions |
ES2542058T3 (es) | 2007-03-30 | 2015-07-30 | Particle Sciences, Inc. | Formulaciones en forma de partículas y usos de las mismas |
WO2008153236A1 (en) | 2007-06-15 | 2008-12-18 | Protheon Co., Ltd | An attenuated influenza virus and a live vaccine comprising the same |
EP2014279A1 (en) | 2007-06-22 | 2009-01-14 | Pevion Biotech AG | Virosomes comprising hemagglutinin derived from an influenza virus produced in a cell line, compositions, methods of manufacturing, use thereof |
US8497112B2 (en) | 2007-08-28 | 2013-07-30 | Baxter International Inc. | Method for producing viral vaccines |
WO2009091531A2 (en) | 2008-01-16 | 2009-07-23 | The General Hospital Corporation | Uniform-sized, multi-drug carrying and photosensitive liposomes for advance drug delivery |
BRPI0914224A2 (pt) | 2008-06-19 | 2019-09-24 | Variation Biotechnologies Inc | composições e métodos para tratar a gripe |
US20110177163A1 (en) | 2008-09-18 | 2011-07-21 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating hepatitis a |
US8343497B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics |
CA2767392C (en) | 2009-07-06 | 2017-03-14 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
US9907746B2 (en) | 2009-07-06 | 2018-03-06 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
CA2840079C (en) | 2010-07-06 | 2018-07-03 | Variation Biotechnologies Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
WO2012006368A2 (en) * | 2010-07-06 | 2012-01-12 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
US20130323280A1 (en) | 2011-01-13 | 2013-12-05 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
MX359103B (es) | 2011-01-13 | 2018-09-14 | Variation Biotechnologies Inc | Composiciones y sus usos en el tratamiento de infecciones virales. |
EA201892619A1 (ru) | 2011-04-29 | 2019-04-30 | Роше Гликарт Аг | Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2 |
WO2013104995A2 (en) | 2012-01-12 | 2013-07-18 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
WO2013111012A2 (en) | 2012-01-27 | 2013-08-01 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods and compositions for therapeutic agents |
-
2013
- 2013-01-25 WO PCT/IB2013/000454 patent/WO2013111012A2/en active Application Filing
- 2013-01-25 EP EP13741121.1A patent/EP2806894A4/en not_active Withdrawn
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- 2013-01-25 CA CA2894467A patent/CA2894467A1/en not_active Abandoned
- 2013-01-25 US US14/373,930 patent/US20150079077A1/en not_active Abandoned
-
2017
- 2017-12-08 AU AU2017272330A patent/AU2017272330B2/en active Active
-
2018
- 2018-04-18 US US15/956,099 patent/US11167032B2/en active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101574394A (zh) * | 2008-05-09 | 2009-11-11 | 北京因科瑞斯医药科技有限公司 | 马钱子生物碱囊泡及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
"非离子表面活性剂囊泡的研究进展";姜树红等;《中国现代药物应用》;20071231;第1卷(第11期);第98-101页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP4008354A1 (en) | 2022-06-08 |
EP2806894A4 (en) | 2015-11-04 |
US20150079077A1 (en) | 2015-03-19 |
AU2013213345A1 (en) | 2014-08-28 |
RU2698906C2 (ru) | 2019-09-02 |
AU2017272330B2 (en) | 2019-10-03 |
US20180228899A1 (en) | 2018-08-16 |
RU2014133089A (ru) | 2016-03-20 |
EP2806894A2 (en) | 2014-12-03 |
WO2013111012A2 (en) | 2013-08-01 |
WO2013111012A3 (en) | 2013-10-24 |
CA2894467A1 (en) | 2013-08-01 |
US11167032B2 (en) | 2021-11-09 |
AU2017272330A1 (en) | 2018-01-04 |
CN104244984A (zh) | 2014-12-24 |
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CA2862864C (en) | Compositions and methods for treating viral infections |
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