CN103501811B - 用于治疗病毒感染的组合物和方法 - Google Patents
用于治疗病毒感染的组合物和方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103501811B CN103501811B CN201280008709.5A CN201280008709A CN103501811B CN 103501811 B CN103501811 B CN 103501811B CN 201280008709 A CN201280008709 A CN 201280008709A CN 103501811 B CN103501811 B CN 103501811B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compositions
- virus
- lipid
- aqueous solution
- vesicle
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0015—Combination vaccines based on measles-mumps-rubella
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
本公开内容提供了可用于治疗病毒感染的组合物和方法。如本文所述,所述组合物和方法基于对包含与非离子表面活性剂囊泡(NISV)组合之减毒或灭活病毒的免疫原性组合物的开发。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2011年1月13日提交的序列号为61/432,567的美国临时专利申请的优先权,其通过引用整体并入本文。
背景技术
麻疹、流行性腮腺炎和风疹是由病毒感染(分别由麻疹病毒(副黏病毒)、流行性腮腺炎病毒(副黏病毒)和风疹病毒(披膜病毒))所造成的三种常见的儿童疾病。麻疹、流行性腮腺炎和风疹感染可导致严重医学并发症,这可引起死亡。麻疹是呼吸系统的感染并且导致包括发热、咳嗽、流鼻涕(runnynose)和一般性皮疹的症状以及一般引起诸如肺炎和脑炎的并发症。流行性腮腺炎是导致包括炎症、发热、头痛和睾丸炎之症状的感染并且可引起诸如无菌性脑膜炎和耳聋的并发症。风疹(常常称为德国麻疹)通常引起温和的症状,但是母体在妊娠期间感染可以是非常严重的。
针对麻疹、流行性腮腺炎和风疹的疫苗从活的减毒病毒(其在细胞基质中增殖)中生产。最初以单价形式制备MMR疫苗的每种组分,之后将其中的每一种混合在一起以产生三价形式,其中病毒群体的组分以十分确定的数量存在,该数量足以在疫苗接受体中诱导有效的免疫应答。市售的MMR疫苗以冻干小瓶存在,根据每个许可标志其在2~8℃下保存不超过3年。然而,包括稳定剂组合物、贮藏条件和残余水分的若干因素可影响冻干疫苗的热稳定性。世界卫生组织(WHO)推荐使用Vero细胞的组织培养感染剂量(TCID50)测定用于评价疫苗中活麻疹病毒的效力。然而,效力测量结果可根据测定方法、实验室和测试时的条件而变化。
WHO已经建立了冷冻干燥形式以及当施用前作为液体溶液而重构时的疫苗稳定的最低要求。在冷冻干燥状态中,目前的麻疹疫苗在暴露于37℃的温度至少一周后每份人剂量必须保持至少3.0log10病毒颗粒的最低效力并且病毒滴度在孵育期间降低不多于1.0log10。然而,重构的麻疹疫苗在暴露于室温时快速地损失效力。在22℃至25℃时,疫苗在一个小时内损失约50%的效力。当温度超过37℃时,疫苗在一个小时内失活(TheImmunologicalBasisforImmunizationSeries,Module7:Measles(WHO/EPI/GEN/93.17))。
目前已有数种减毒的麻疹、流行性腮腺炎和风疹(MMR)疫苗获得批准并且已成功降低了病毒感染的发生率。然而,所有疫苗(包括减毒病毒疫苗)都随着时间损失效力,并且效力损失的速率是温度依赖性的。因此,建立了冷链系统(cold-chainsystem)以确保通过将疫苗贮藏在冷藏条件下(大多数情况下为2℃至8℃)直至使用时,以保持疫苗的效力。建立用于疫苗贮藏和配送的冷链是重大工作并且其维持很困难。还很明显的是,尽管尽最大努力,但是因为若干问题,冷链不一定总能如预期发挥功能,例如:冷冻设备的不恰当维护或过时、断电导致的设备故障、不遵从冷链流程和监控不当。结果是冷链中的疫苗经常遭受温度漂移(temperatureexcursion)(即,温度处于目标范围之外)。
尽管减毒的麻疹、流行性腮腺炎和风疹(MMR)疫苗成功降低了全世界范围内的疾病发生率,但是本领域依然需要当暴露于高温时稳定并且保持效力的改进疫苗。
发明概述
本公开内容提供了可用于治疗病毒感染(例如,由麻疹、流行性腮腺炎或风疹病毒造成的那些)的组合物和方法。如本文所述,所述组合物和方法基于对包含与非离子表面活性剂囊泡(non-ionicsurfactantvesicle,NISV)组合之减毒或灭活病毒的免疫原性组合物的开发。在某些实施方案中,所述组合物中存在的所述病毒抗原的至少一部分与所述NISV物理地相联合。在某些实施方案中,将所述组合物被冻干并且随后在贮藏期后被再水化。在某些实施方案中,所述再水化的组合物与没有所述NISV的其他等价组合物相比展现出更大的效力。在某些实施方案中,在再水化之前将所述冻干组合物贮藏在超过8℃的温度下。在某些实施方案中,所述再水化的组合物与没有所述NISV并且也在再水化之前贮藏在超过8℃温度下的其他等价组合物相比展现出更大的效力。在某些实施方案中,所述病毒抗原从已获批的疫苗中取得并且所述病毒抗原的施用剂量低于所述已获批疫苗的标准人剂量。
附图简述
图1示出了使用在约4℃、约25℃和约40℃下贮藏2周的不同再配制疫苗进行的麻疹效力测定(TCID50)的结果。
图2示出了使用在约4℃和约37℃下贮藏1、2和最多12周的不同再配制疫苗(与25mg/ml脂质配制)进行的麻疹效力测定(TCID50)的示例性结果。
图3示出了使用在约4℃和约37℃下贮藏1、2和最多12周的不同再配制疫苗(与12.5mg/ml配制)进行的麻疹效力测定(TCID50)的示例性结果。
图4示出了使用在约4℃和约37℃下贮藏1、2和最多12周的不同再配制疫苗(与3.125mg/ml配制)进行的麻疹效力测定(TCID50)的示例性结果。
图5示出了使用在约4℃下贮藏4周并且之后重构以及在约37℃下贮藏2、4和最多8小时的不同再配制疫苗进行的麻疹效力测定(TCID50)以测定液体稳定性的示例性结果。
定义
在整个本公开内容中,使用了以下段落中所定义的若干术语。
本文所使用的术语“抗原”或“病毒抗原”是指含有可被抗体识别的一个或更多个表位的物质。在某些实施方案中,抗原可以是病毒。术语“抗原”尤其涵盖减毒的和灭活的病毒。在某些实施方案中,抗原可以是“免疫原”。
本文所使用的术语“免疫应答”是指在动物中激发的应答。免疫应答可以指细胞免疫、体液免疫或者可同时包括这两者。免疫应答还可以限于免疫系统的一部分。例如,在某些实施方案中,免疫原性组合物可以诱导增强的IFNγ应答。在某些实施方案中,免疫原性组合物可以诱导黏膜IgA应答(例如,在鼻和/或直肠冲洗液中所测量的)。在某些实施方案中,免疫原性组合物可以诱导全身性IgG应答(例如,在血清中所测量的)。
本文所使用的术语“免疫原性”意指能够在宿主动物中针对非宿主实体(例如,病毒抗原)产生免疫应答。在某些实施方案中,该免疫应答形成由针对特定感染性生物(例如,病毒)的疫苗所激发之保护性免疫的基础。
本文所使用的术语“治疗有效量”是指在接受治疗的对象中足以显示有意义之益处的量。免疫原性组合物的治疗有效量可根据如下因素变化:期望的生物学终点(biologicalendpoint)、组合物性质、施用途径、被治疗的对象的健康情况、体型大小和/或年龄等。
本文所使用的术语“治疗”是指出于减轻、缓解、改变、改善、改进或影响疾病、疾病的症状或者患病倾向而向患有疾病、具有疾病症状或患病倾向的对象施用组合物。在某些实施方案中,术语“治疗”是指对对象进行免疫接种。
某些实施方案的详述
本公开内容提供了可用于治疗病毒感染(例如,由麻疹、流行性腮腺炎或风疹病毒造成的感染)的组合物和方法。如本文所述,所述组合物和方法基于对包含与非离子表面活性剂囊泡(NISV)组合之减毒或灭活病毒的免疫原性组合物的开发。在某些实施方案中,所述组合物中存在的所述病毒抗原的至少一部分与所述NISV物理地相联合。在某些实施方案中,将所述组合物被冻干并且随后在贮藏期后被再水化。在某些实施方案中,所述再水化的组合物与没有所述NISV的其他等价组合物相比展现出更大的效力。在某些实施方案中,在再水化之前将所述冻干组合物贮藏在超过8℃的温度下。在某些实施方案中,所述再水化的组合物与没有所述NISV并且也在再水化之前贮藏在超过8℃温度下的其他等价组合物相比展现出更大的效力。在某些实施方案中,所述病毒抗原从已获批的疫苗中取得并且所述病毒抗原的施用剂量低于所述已获批疫苗的标准人剂量。
I.病毒抗原
麻疹、流行性腮腺炎、风疹和水痘病毒抗原
在一些实施方案中,本公开内容的组合物和方法可以与批准的或开发中的疫苗中包含的一种或更多种抗原一起使用。表1为用于麻疹、流行性腮腺炎、风疹和水痘感染的批准的或开发中的疫苗的非限制性列表。
表1
在接下来的部分中,我们讨论这些以及其他可在本公开内容的组合物和方法中使用的示例性病毒抗原。
在美国,麻疹、流行性腮腺炎和风疹(MMR)疫苗在1971年首次获得批准,并且在1989年引入了疫苗的第二次剂量。通常,在常规进行童年期MMR免疫接种的国家中,麻疹、流行性腮腺炎和风疹的发生率显著降低(例如,与1941年中的许多情况相比,1995年降低了超过99%)。
目前已有几种减毒的麻疹、流行性腮腺炎和风疹(MMR)疫苗获得批准。例如,是由Merck&Co.,Inc.开发和生产的。包含(1)(活麻疹病毒疫苗)麻疹病毒减毒系、(2)(活流行性腮腺炎病毒疫苗)鸡胚细胞培养物中增殖的流行性腮腺炎病毒毒株、和(3)(活风疹病毒疫苗)风疹病毒的减毒毒株的无菌冻干制备物。每0.5mL剂量包含不低于1,000TCID50(50%组织培养感染剂量)的麻疹病毒、不低于5,000TCID50的流行性腮腺炎病毒和不低于1,000TCID50的风疹病毒。重构之后,(正如其他已获批的MMR疫苗)通常为皮下施用。虽然在超过12月龄的儿童中一个剂量的M-M-R-II通常诱导产生中和抗体,但是在首次给药后一些患者未能发生血清转化(seroconvert)。因此,推荐第二次加强,尤其是在小学入学之前,以使对首次给药没有应答的那些发生血清转化。为了确保不损失疫苗的效力,必须使其在运输期间维持在10℃或更冷的温度下,在贮藏期间维持在2℃至8℃的温度下,并且在重构后8小时内使用。
MMR疫苗的另一个实例(其还包含水痘组分)已获得批准并由Merck在美国销售,但是产品目前被暂停。在超过12月龄的儿童中施用一次,任选地在至少三个月后施用加强剂。
在一个方面中,本申请提供了包含减毒或灭活病毒的免疫原性组合物。应理解,本公开内容提供的免疫原性组合物可包含MMR疫苗的一种或更多种组分(例如,麻疹、流行性腮腺炎或风疹病毒或者其组合)。在一些实施方案中,免疫原性组合物包含水痘病毒组分(例如,单独,例如或与其他病毒组分组合,例如)。
如上所述,所有已知的已获批MMR疫苗包含减毒病毒。应理解,这些已获批疫苗中的任一种可以与本文所述的囊泡相组合,以产生免疫原性组合物。例如,市售的可以以这种方式进行组合,以产生活性免疫原性组合物。在一些实施方案中,首先对已获批的疫苗进行纯化(例如,用以除去疫苗中的明矾佐剂或其他试剂)。在一些实施方案中,在用本文所述的囊泡配制之前,不对已获批疫苗进行纯化。
如本领域公知地,减毒病毒的优点在于具有较强免疫原性的潜力,这是由于其能够在体内复制而不会导致完全感染的能力所致。本领域中已使用的一种制备减毒病毒的方法是病毒适应,其包括使病毒毒株在多种细胞培养物中连续传代。毒株随时间发生突变,随后可对减毒毒株进行鉴定。例如,在制备中,麻疹病毒的减毒毒株在鸡胚细胞培养物中增殖,流行性腮腺炎的B水平毒株在鸡胚细胞培养物中增殖,以及风疹的减毒毒株在人二倍体肺成纤维细胞中增殖。在某些实施方案中,可以使病毒在不同细胞培养物中传代。
应理解的是,可使用任何麻疹、流行性腮腺炎和/或风疹病毒毒株,例如不限于在本领域中已描述的任何下述毒株:
·麻疹病毒Enders减毒Edmonston毒株(AttA)
·麻疹病毒减毒AIK-C毒株
·流行性腮腺炎病毒JerylLynn(B水平)毒株
·流行性腮腺炎病毒LeningradZagreb毒株
·流行性腮腺炎病毒UrabeAm9毒株
·风疹病毒WistarRA27/3毒株
·风疹病毒Giguere;1964美国
·风疹病毒HPV-77;1961美国
·风疹病毒Judith;1963英国利物浦
·风疹病毒KO-1;1967日本高知县
尽管目前所有已获批的MMR疫苗包括减毒病毒,但是根据本发明可使用包括灭活病毒在内的疫苗。在某些实施方案中,免疫原性组合物可包含这种灭活病毒。应理解的是,可以使用任何方法来制备灭活的病毒。一般地,这些方法将涉及在宿主细胞中使病毒增殖,使宿主细胞裂解以释放病毒,分离病毒,然后使其灭活。通常从细胞培养物中收获病毒并且针对感染剂量以及针对没有外源性物质(adventitiousagent)进行筛选。常常通过对病毒进行化学处理(例如,福尔马林、甲醛等)来灭活病毒。但是,应理解,可以使用其他技术,例如用氯处理、暴露于高温等。
其他病毒抗原
表2为已获批或开发中的其他活减毒疫苗的非限制性列表。应理解,由本公开内容提供的免疫原性组合物可包含这些疫苗中的一种或更多种组分。
表2
犬瘟热(caninedistemper)是由通过犬瘟热病毒之病毒感染所造成的疾病,该病毒是与麻疹病毒密切相关的副黏病毒。犬瘟热病毒可引起影响包括狗、鼬鼠(weasel)、臭鼬(skunk)、土狼(hyenas)、浣熊(raccoon)和非家养猫科动物(feline)在内的多种哺乳动物物种的严重医学状况。犬瘟热感染可引起包括发热、厌食、流鼻涕和眼睛分泌物的症状以及一般导致诸如肺炎和脑炎的并发症。减毒的犬瘟热疫苗(包括多价DA2PPC疫苗)已获得批准,其抵御犬瘟热(D)、2型腺病毒(A2)、副流感病毒(P)、犬细小病毒(P)和犬冠状病毒(C)。应理解,本公开内容提供的免疫原性组合物可包含DA2PPC中的一种或更多种组分(例如,犬瘟热病毒抗原)。
轮状病毒感染导致轮状病毒胃肠炎,其在婴儿和幼儿中可尤其地严重。用于治疗轮状病毒感染的已获批的活减毒疫苗包括和用于预防由病毒之G1、G2、G3和G4血清型引起的轮状病毒胃肠炎。向6至32周年龄的婴儿以三次剂量系列口服施用每2ml剂量的包含含有G1、G2、G3、G4和P1A的活重组病毒并且包含最少2.0~2.8×106个感染单位(IU)。用于预防由病毒之G1、G3、G4和G9血清型引起的轮状病毒胃肠炎。向6周龄至24周龄的婴儿以两次剂量系列口服施用每1ml剂量的包含最少106CCID50的活的减毒人G1P轮状病毒。
带状疱疹是神经根的病毒感染,其通常在身体一侧引起疼痛和皮疹。带状疱疹在老年人和具有弱免疫系统的人中最为常见。用于治疗由带状疱疹病毒感染所造成的带状疱疹的已获批病毒为其为活的减毒水痘带状疱疹病毒的Oka/Merck毒株的冻干制剂。用于皮下施用并且用于60岁或更大年龄的个体。每0.65ml剂量的包含至少19,400pfu的活的减毒病毒。
已获批的活减毒疫苗的另一个实例为其为用于治疗天花病毒感染的牛痘病毒的活病毒制剂。由小牛淋巴制备,将其纯化,浓缩,然后通过冻干干燥。已经显示重构疫苗每ml包含不多于200个存活细菌生物体。旨在用于多次穿刺使用,即利用分叉针(bifurcatedneedle)将疫苗施用至皮肤的浅层。通常,采用进行的免疫接种导致病毒倍增、免疫和细胞性超敏反应。当首次免疫接种时,在约第2天至第5天,在免疫接种的位置出现丘疹。其在第5天或第6天变为囊泡,继而变为脓疱,呈脐状,并被红斑围绕,接着硬化。免疫接种后第8天至第12天(一般在第10天)达到红斑最大面积。之后红斑和肿胀消退,并形成痂(crust),在约第14天至第21天痂脱离。在称为Jennerian应答的初级反应的高度,一般有区域性淋巴结病并且可能有发热和不适的全身性表现。已经显示采用以1亿个疱斑形成单位(pock-formingunit,pfu)/ml进行的初级免疫接种通过儿童中主要反应和中和抗体应答二者激发97%应答率。
已获批的活减毒疫苗的另一个实例是用于治疗黄热病病毒感染的通过使黄热病病毒的17D毒株在活的没有禽白血病病毒(avianleukosisvirus)的鸡胚中培养来制备。将冻干并在氮气下密封用于贮藏,以及在使用前立即将其重构。将配制成每0.5ml剂量包含不低于5.04Log10pfu。通常,通过采用首次免疫接种后的第十天产生针对黄热病的免疫。尽管已经证明黄热病疫苗免疫可持续至少30~35年并且在一些情况中持续终身,但是每隔10年需要加强免疫接种以加强抗体效价。
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也称为蓝耳猪病(blue-earpigdisease),是导致称为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪病的病毒。该经济上重要的流行疾病导致种畜繁殖失败和幼猪呼吸道疾病。已经开发了活的减毒疫苗用于预防PRRS。
假狂犬病是一种全世界大部分的地方性的猪病毒性疾病。其由猪疱疹病毒l型(Suidherpesvirus1,SuHV-1)所引起的,也称作假狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)并且又名奥耶斯基氏病(Aujeszky’sdisease),在牛中称为疯瘁病(maditch)。其他家养和野生哺乳动物(例如牛、绵羊、山羊、猫、狗和浣熊)也易受影响,其中该疾病一般是致命的。对于猪中PRV的研究具有采用活的减毒疫苗的领先动物疾病控制。尽管词语“假狂犬病”意指“假的狂犬病”或“狂犬病样”,但是其为用词不当。假狂犬病与疱疹病毒相关,而不是狂犬病病毒。
II.囊泡
通常,本公开内容的免疫原性组合物包含非离子表面活性剂囊泡(NISV)。如本领域所公知的,囊泡通常具有由包含两亲性分子之一个或更多个双层包封的水性区室(aqueouscompartment)。可以使具有适当两亲性特性的任何非离子表面活性剂用于形成这种囊泡。在一些实施方案中,组合物中存在的至少一部分病毒抗原与囊泡关联(即,包封在囊泡的水性核心内和/或与囊泡双层相联合)。这些实施方案涵盖术语“含有抗原的囊泡”。在某些实施方案中,免疫原性组合物还可包含不与囊泡相联合的病毒抗原的量或组分。
不限于此地,合适的表面活性剂的实例包括基于甘油的酯键合表面活性剂(ester-linkedsurfactant)。这样的甘油酯可包含两种高级脂肪族酰基基团的一种,例如每个酰基部分中含有至少十个碳原子。基于这种甘油酯的表面活性剂可包含多于一个甘油单位,例如最多5个甘油单位。可以使用甘油单酯,例如含有C12-C20烷酰基或烯酰基部分(例如己酰基、月桂酰基、肉豆寇酰基、棕榈酰基、油酰基或硬脂酰基)的那些。示例性表面活性剂是1-单棕榈酰基甘油。
还可以使用醚键合表面活性剂(ether-linkedsurfactant)作为非离子表面活性剂。例如,基于甘油或具有最多4个碳原子的低级脂肪族二醇的二醇(如,乙二醇)的醚键合表面活性剂是合适的。基于这种二醇的表面活性剂可包含多于一个二醇单位,例如最多5个二醇单位(例如,二甘醇鲸蜡基醚和/或聚氧乙烯-3-月桂基醚)。可以使用二醇或甘油的单醚,包括含有C12-C20烷基或烯基部分(例如辛基(capryl)、月桂基、肉豆寇基、鲸蜡基、油烯基或硬脂基)的那些。可以使用的环氧乙烷缩合产物包括PCT公开No.WO88/06882中公开的那些(例如,聚氧乙烯高级脂肪族醚和胺表面活性剂)。示例性的醚键合表面活性剂包括1-单鲸蜡基甘油醚和二甘醇鲸蜡基醚。
还应当理解,囊泡还可掺入离子两亲物,例如用以使所述囊泡带负电荷。例如,这可以帮助稳定囊泡并且提供有效的分散。不限于此地,酸性物质(例如高级烷酸和烯酸(例如棕榈酸、油酸)或者含有酸性基团(包括磷酸酯/盐)的其他化合物(例如磷酸二烷基酯(例如磷酸二鲸蜡酯或磷脂酸或磷脂酰丝氨酸)))以及硫酸单酯/硫酸单酯盐(sulfatemonoester)(例如硫酸高级烷基酯(例如硫酸鲸蜡酯))均可用于此目的。离子两亲物(如果存在的话)将通常包含非离子按重量计1%至50%(例如,1~5%、1~10%、1~15%、1~20%、1~25%、1~30%、1~35%、1~40%、1~45%、5~10%、5~15%、5~20%、5~25%、5~30%、5~35%、5~40%、5~45%、5~50%、10~15%、10~20%、10~25%、10~30%、10~35%、10~40%、10~45%、10~50%、15~20%、15~25%、15~30%、15~35%、15~40%、15~45%、15~50%、20~25%、20~30%、20~35%、20~40%、20~45%、20~50%、25~30%、25~35%、25~40%、25~45%、25~50%、30~35%、30~40%、30~45%、30~50%、35~40%、35~45%、35~50%、40~45%、40~50%或45~50%)的非离子表面活性剂。
为了形成囊泡,组分可以与包含分子量较高的、能够形成双层的适当疏水性物质(例如类固醇,如固醇(例如胆固醇))相混合。类固醇的存在可以辅助形成双层,而所述囊泡的物理性质即取决于所述双层。类固醇(如果存在的话)将通常包含非离子按重量计20至120%(例如,20~30%、20~40%、20~50%、20~60%、20~70%、20~80%、20~90%、20~100%、20~110%、30~40%、30~50%、30~60%、30~70%、30~80%、30~90%、30~100%、30~110%、30~120%、40~50%、40~60%、40~70%、40~80%、40~90%、40~100%、40~110%、40~120%、50~60%、50~70%、50~80%、50~90%、50~100%、50~110%、50~120%、60~70%、60~80%、60~90%、60~100%、60~110%、60~120%、70~80%、70~90%、70~100%、70~110%、70~120%、80~90%、80~100%、80~110%、80~120%、90~100%、90~110%、90~120%、100~110%、100~120%或110~120%)的非离子表面活性剂。
在某些实施方案中,所述囊泡包含非离子表面活性剂、离子两亲物和类固醇。在某些实施方案中,所述囊泡包含1-单棕榈酰基甘油、磷酸二鲸蜡酯和胆固醇。
在某些实施方案中,所述囊泡基本上由非离子表面活性剂、离子两亲物和类固醇组成。在某些实施方案中,所述囊泡基本上由1-单棕榈酰基甘油、磷酸二鲸蜡酯和胆固醇组成。
在某些实施方案中,所述囊泡可以不包含有助于将脂质样分子运送穿过黏膜的运送增强分子。在一些实施方案中,所述囊泡不包含“胆汁酸”(例如胆酸和鹅脱氧胆酸)、其与甘氨酸或牛磺酸的缀合产物(例如甘胆酸和牛磺胆酸)、衍生物(包括脱氧胆酸和熊脱氧胆酸)以及这些酸中每一种的盐。在一些实施方案中,所述囊泡可不包含酰氧基化的氨基酸,例如酰基肉碱及其盐以及棕榈酰基肉碱。
制备囊泡的方法
应理解的是,已知制备包含有非离子表面活性剂之囊泡的技术,例如PCT公开No.W093/19781中提到的那些。一个示例性技术是旋转膜蒸发方法,其中通过旋转蒸发由有机溶剂(例如烃或氯代烃溶剂(如氯仿))来制备非离子表面活性剂的膜(例如,见Russell和Alexander,J.Immunol.140:1274,1988)。然后,任选地在病毒抗原的存在下,将所得薄膜在碳酸氢盐缓冲液中再水化。
产生囊泡的另一个方法由Collins等,J.Pharm.Pharmacol.42:53,1990所公开。该方法包括熔化非离子表面活性剂、类固醇(如果使用的话)和离子两亲物(如果使用的话)的混合物以及通过在水性缓冲液的存在下充分混合来水化。
另一方法包括在剪切力的存在下水化。可用于提供这种剪切力的装置是公知的合适设备(参见,例如PCT公开No.WO88/06882)。声处理和超声处理也是形成囊泡或改变其粒径的有效方法。
在某些实施方案中,病毒抗原的至少一部分与脂质囊泡相联合(其中,本文使用的术语“联合”涵盖任何形式的物理相互作用)。在某些实施方案中,至少一部分病毒抗原包封在脂质囊泡内。可通过任何方式实现联合和包封。例如,在旋转膜蒸发技术中,可以在抗原的存在下通过膜的水化来实现。在另一些方法中,可通过脱水-再水化方法使病毒抗原与预形成的囊泡联合,其中通过快速冷冻来包封水相中存在的病毒抗原,然后冻干,例如参见Kirby和Gregoriadis,Biotechnology2:979,1984。或者,可使用冻融技术,其中囊泡与病毒抗原混合并且反复地在液氮中快速冷冻和将温度升高至约例如60℃(即,相关表面活性剂的转变温度(transitiontemperature)之上),例如,见Pick,Arch.Biochem.Biophys.212:195,1981。
在某些实施方案中,根据本发明供使用的囊泡通过包括以下步骤的方法进行制备:将非离子表面活性剂(任选地与类固醇和/或离子两亲物(统称为“脂质”)一起)熔化以产生熔融混合物;将熔融混合物与包含病毒抗原的水溶液组合;以及使所得产物均质化。在某些实施方案中,将熔融混合物添加至包含病毒抗原的水溶液中。在某些实施方案中,将包含病毒抗原的水溶液添加至熔融混合物中。
在某些实施方案中,以在所得产物中实现至少约5mg/ml脂质浓度的相对量和体积来组合熔融混合物和水溶液。实际上,通过实验并且如实施例所述,我们发现当脂质和病毒抗原均质化且脂质浓度超过5mg/ml时,所得组合物趋于比使用较低脂质浓度时的热稳定性更好(见实施例)。因此,在一些实施方案中,本发明提供了包含病毒抗原和囊泡的期望组合物(特别包括热稳定组合物),这些组合物包含有本文确立的特定脂质浓度,以赋予组合物特定性质(例如,改进的热稳定性)。
在某些实施方案中,达到了至少约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95mg/ml的脂质浓度。在某些实施方案中,脂质浓度在约5mg/ml至约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或25mg/ml的范围内。在某些实施方案中,脂质浓度在约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15mg/ml至约30mg/ml的范围内。在某些实施方案中,脂质浓度为约5mg/ml至约50mg/ml、约5mg/ml至约25mg/ml、约10mg/ml至约50mg/ml、约10mg/ml至约30mg/ml或约10mg/ml至约50mg/m。
在一些实施方案中,在范围为120℃至150℃(例如,120℃至125℃、120℃至130℃、120℃至140℃、130℃至140℃、135℃至145℃或140℃至145℃)的温度熔化非离子表面活性剂(任选地与其他组分(例如类固醇和/或离子两亲物)一起)。在某些实施方案中,在约120℃、约125℃、约130℃、约135℃、约140℃、约145℃或约150℃熔化非离子表面活性剂(任选地与其他组分(例如类固醇和/或离子两亲物)一起)。
在一些实施方案中,控制包含病毒抗原的水溶液的温度。在一些实施方案中,在添加步骤期间包含病毒抗原的水溶液保持在低于约50℃的温度(例如,低于约45℃、低于约40℃、低于约35℃、低于约30℃、低于约25℃等)。在一些实施方案中,包含病毒抗原的水溶液保持在约25℃至约50℃之间的温度范围内。在一些实施方案中,包含病毒抗原的水溶液保持在室温。
在某些实施方案中,通过包括以下步骤的方法来制备囊泡:提供冻干的非离子表面活性剂(任选地与其他组分(例如类固醇和/或离子两亲物)一起)和采用包含病毒抗原的水溶液使冻干非离子表面活性剂再水化以形成含有抗原的囊泡。可通过以下步骤来制备冻干的非离子表面活性剂:熔化非离子表面活性剂(任选地与其他组分(例如类固醇和/或离子两亲物)一起)以产生熔融混合物并且随后将所述熔融混合物冻干。
如本文中更详细地描述的,在一些实施方案中,可将与囊泡配制的包含病毒抗原的免疫原性组合物冻干备用并且随后在使用前水化。
囊泡大小和处理
应理解的是,囊泡组合物将通常包含具有一定大小范围的囊泡混合物。应理解,下列直径值相当于混合物内最常见直径。在一些实施方案中,组合物中>90%的囊泡将具有处于最常见值的50%内(例如,1000±500nm)的直径。在一些实施方案中,分布可更窄,例如,组合物中>90%的囊泡可具有处于最常见值的40%、30%、20%、10%或5%内的直径。在一些实施方案中,可使用声处理或超声处理来促进囊泡形成和/或改变囊泡粒径。在一些实施方案中,可使用过滤、透析和/或离心来调节粒径分布。
一般而言,根据本公开方法产生的囊泡可具有任何尺寸。在某些实施方案中,组合物可包含具有范围为约10nm至约10μm直径的囊泡。在某些实施方案中,囊泡具有约100nm至约5μm的直径。在某些实施方案中,囊泡具有约500nm至约2μm的直径。在某些实施方案中,囊泡具有约800nm至约1.5μm的直径。在某些实施方案中,组合物可包含具有范围为约150nm至约15μm直径的囊泡。在某些实施方案中,囊泡具有大于10μm(例如约15μm至约25μm)的直径。在某些实施方案中,囊泡可具有范围为约0.1μm至约20μm、约0.1μm至约15μm、约0.1μm至约10μm、约0.5μm至约20μm、约0.5μm至约15μm、约0.5μm至约10μm、约1μm至约20μm、约1μm至约15μm或约1μm至约10μm的直径。在某些实施方案中,囊泡可具有范围为约2μm至约10μm(例如,约1μm至约4μm)的直径。在某些实施方案中,囊泡具有小于150μm(例如约50nm至约100nm)的直径。
冻干
自从引入疫苗以来,液体疫苗组合物就是默认的存在形式。大多数现有液体疫苗组合物已经被开发为在冷藏下贮藏而不是较高温度贮藏,因此,其稳定性可能并非最佳。在一些情况下,已获批的疫苗目前都作为液体配制和贮藏。在水性环境中,病毒抗原发生物理和化学降解,这可导致失活和效力损失。
如以上所讨论的,本公开内容的方法可包括对非离子表面活性剂(任选地与其他组分(例如类固醇和/或离子两亲物)一起)的冻干步骤。冻干是用于提高产品长期稳定性的成熟方法。据信,提高物理和化学稳定性通过阻止降解和水解来实现。冻干包括将目标制备物冷冻,然后降低环境压力(以及任选地,对制备物进行加热)以使经冷冻的溶剂直接从固相升华为气体(即,干燥阶段)。在某些实施方案中,所述干燥阶段分为初级和次级干燥阶段。
可以通过将制备物置于容器(例如烧瓶、eppendorf管等)中(任选地使容器旋转)同时在通过机械制冷(例如利用干冰和甲醇、液氮等)冷却的浸浴中完成冷冻阶段。在一些实施方案中,冷冻步骤包括使制备物冷却至制备物的低共熔点以下。由于低共熔点出现在制备物的固相和液相能共存的最低温度,因此使所述物质保持于该点以下的温度确保了在随后步骤中将发生升华而非蒸发。
干燥阶段(或者,当使用两个干燥阶段时的初级干燥阶段)包括降低压力以及任选地使制备物加热至溶剂能够升华的点。干燥阶段通常将溶剂中的大部分从制备物中除去。应理解,冷冻和干燥阶段不必是分开的阶段,而是可以以任何方式组合。例如,在某些实施方案中,冷冻和干燥阶段可以重叠。
次级干燥阶段可以任选地用于除去冷冻阶段期间吸收的残留溶剂。不希望受任何理论的束缚,该阶段涉及升高温度以破坏溶剂分子与经冷冻制备物之间形成的任何物理-化学相互作用。干燥阶段一经完成,在任选地将冻干产品密封之前可用惰性气体(例如氮气或氦气)打破真空。
在一些实施方案中,经冻干产物基本上不含有机溶剂。
可使用赋形剂如蔗糖、氨基酸或蛋白质(例如明胶或血清白蛋白)以在干燥处理和贮藏期间保护抗原。在一些实施方案中,可使用冻干保护剂以在冻干期间保护抗原。示例性的冻干保护剂包括蔗糖、海藻糖(trehalose)、聚乙二醇(PEG)、二甲基-琥珀酸盐缓冲液(dimethyl-succinatebuffer,DMS)、牛血清白蛋白(BSA)、甘露醇、山梨醇和葡聚糖。可以使用冻干保护剂的任何合适量和/或组合以保护抗原。例如,如美国专利6,290,967中证明的,二糖(例如,蔗糖)和6-碳多元醇(例如,山梨醇)的双重存在与对照组合物相比提高了疫苗组合物的稳定性。每升疫苗以范围为10至70克的量添加蔗糖,并且每升疫苗以范围为15至90克的量添加山梨醇。
再水化
溶液一经冻干,本公开的方法包括使冻干的产品再水化以形成含有抗原的囊泡的步骤。在一些实施方案中,这通过将冻干的产品与包含病毒抗原的水溶液混合来实现。在一些实施方案中,这包括将水溶液添加至冻干产品中。
在一些实施方案中,所述含有抗原的囊泡包含在再水化步骤中添加的至少约10%的病毒抗原。在一些实施方案中,所述含有抗原的囊泡包含在再水化步骤中添加的至少约20%的病毒抗原。在一些实施方案中,所述含有抗原的囊泡包含在再水化步骤中添加的至少约30%的病毒抗原。在一些实施方案中,所述含有抗原的囊泡包含在再水化步骤中添加的至少约40%的病毒抗原。在一些实施方案中,所述含有抗原的囊泡包含在再水化步骤中添加的至少约50%的病毒抗原。在一些实施方案中,所述含有抗原的囊泡包含在再水化步骤中添加的至少约60%的病毒抗原。在一些实施方案中,所述含有抗原的囊泡包含在再水化步骤中添加的至少约70%的病毒抗原。在一些实施方案中,所述含有抗原的囊泡包含在再水化步骤中添加的至少约80%的病毒抗原。在一些实施方案中,所述含有抗原的囊泡包含在再水化步骤中添加的至少约90%的病毒抗原。
在一些实施方案中,所述水溶液包括缓冲液。所使用的缓冲液将通常取决于水溶液中病毒抗原的性质。例如,不限于此地,可以使用PCB缓冲液、Na2HPO4/NaH2PO4缓冲液、PBS缓冲液、N-二(羟乙基)甘氨酸缓冲液(bicinebuffer)、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPS缓冲液等。PCB缓冲液通过将丙酸钠、二甲胂酸钠(sodiumcacodylate)和双Tris丙烷以2:1:2的摩尔比混合而制备。改变所添加的HC1量可使pH在4~9的范围内缓冲。在一些实施方案中,可以使用碳酸盐缓冲液。
在一些实施方案中,可将含有抗原之囊泡的组合物冻干备用,并随后在使用前进行再水化(例如,使用无菌水或水性缓冲液)。在一些实施方案中,含有抗原之囊泡的组合物在冻干前可贮藏于-80℃。
在某些实施方案中,再水化的免疫原性组合物展现出与该免疫原性组合物在冻干之前基本上一样的效力。
在一些实施方案中,再水化的免疫原性组合物展现出的效力是该免疫原性组合物在冻干之前的至少约50%(例如,至少约55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%)。在一些实施方案中,效力的水平基于使用体外微量滴定测定(TCID50测定)获得的测量结果。在一些实施方案中,效力的水平基于空斑测定的测量结果。
在一些实施方案中,再水化的免疫原性组合物展现出的效力是未与NISV配制的其他等效免疫原性组合物的至少1.5倍(例如,至少约2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍或5倍)。在一些实施方案中,效力的水平基于使用TCID50测定获得的测量结果。在一些实施方案中,效力的水平基于空斑测定的测量结果。
贮藏
在某些实施方案中,冻干的免疫原性组合物可贮藏一段时间(例如,数天、数周或数月),之后再水化并且向有此需要的对象施用。在某些实施方案中,冻干的免疫原性组合物在贮藏期间暴露于超过8℃的温度(例如,超过10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃或40℃的温度,范围为10℃至40℃的温度、范围为20℃至40℃的温度、范围为30℃至40℃的温度、范围为10℃至30℃的温度、范围为20℃至30℃的温度、室温等)。在某些实施方案中,在不控制温度的条件下贮藏冻干的免疫原性组合物。
在某些实施方案中,冻干的免疫原性组合物是热稳定的,其中在贮藏期间尽管暴露于超过8℃的温度(例如,超过10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃或40℃的温度,范围为10℃至40℃的温度、范围为20℃至40℃的温度、范围为30℃至40℃的温度、范围为10℃至30℃的温度、范围为20℃至30℃的温度、37℃、室温等)1至6个月(例如,1、2、3、4、5或6个月,12周等),但是免疫原性组合物的效力保持基本无变化。
在某些实施方案中,与在2℃至8℃贮藏相同时间的等效冻干免疫原性组合物相比,冻干免疫原性组合物在这些升高的温度下的贮藏对病毒抗原通过TCID50测定所测量的效力的破坏低于20%(例如,低于15%、低于10%、低于5%、低于1%)。
在某些实施方案中,贮藏后抗原的效力是在相同的升高的温度下贮藏但是未与NISV配制的其他等效冻干免疫原性组合物的至少1.5倍(例如,至少约2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍或5倍)。在一些实施方案中,效力的水平基于使用TCID50测定获得的测量结果。在一些实施方案中,效力的水平基于空斑测定的测量结果。
在一些实施方案中,当冻干免疫原性组合物在25℃贮藏1、2、3、4、5或6个月后,获得这些效力结果中的一个或更多个。在一些实施方案中,当冻干免疫原性组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃贮藏1个月后,获得这些结果。在一些实施方案中,当冻干免疫原性组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃贮藏2个月后,获得这些结果。在一些实施方案中,当冻干免疫原性组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃贮藏3个月(或12周)后,获得这些结果。在一些实施方案中,当冻干免疫原性组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃贮藏4个月后,获得这些结果。在一些实施方案中,当冻干免疫原性组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃贮藏5个月后,获得这些结果。在一些实施方案中,当冻干免疫原性组合物在15℃、20℃、30℃、35℃、37℃或40℃贮藏6个月后,获得这些结果。在某些实施方案中,这些温度可以允许在一定范围内(例如,±2℃)变化。
IV.剂量和施用
本公开内容的组合物和方法可用于治疗人(包括成人和儿童)病毒感染。但是,一般而言,本公开内容的组合物和方法可用于任何动物。在某些实施方案中,本文的组合物和方法用于兽医应用,例如犬科和猫科应用。如果期望,本文的组合物和方法还可用于家畜,例如羊(ovine)、禽、牛、猪和马品种。
通常将以诱导免疫应答所必需或足够的量和时间施用本文所述的组合物。给药方案可由单次给药或者一段时间内的多次给药组成。待施用免疫原性组合物的确切量可以依对象而变化,并且可取决于若干因素。因此,应理解的是,一般来讲,所使用的精确剂量由处方医师来确定,其将不仅取决于对象的体重和施用途径,还取决于对象年龄以及症状的严重程度和/或感染风险。在某些实施方案中,病毒抗原在免疫原性组合物中的剂量足以产生与在已获批疫苗中的那些相当的TCID50。例如,已获批的疫苗包含至少1000的TCID50麻疹病毒、至少5000的TCID50流行性腮腺炎病毒和至少1000的TCID50风疹病毒。TCID50(50%组织培养感染剂量)对感染50%接种组织培养细胞所需的病毒量进行量化。通常,通过平板接种宿主细胞(例如,Vero细胞)并添加病毒抗原的连续稀释物来测量TCID50值。孵育后,手动观察感染细胞的百分比并记录每个病毒稀释度,结果用于数学计算TCID50,例如,根据法(ArchExpPatholPharmakol162:480-483,1931)。
在某些实施方案中,从已获批人病毒疫苗和免疫原性组合物取得的病毒抗原以低于标准人剂量的剂量(例如,范围为标准人剂量的10~90%、10~80%、10~70%、10~60%、10~50%、10~40%、10~30%、10~20%、20~90%、20~80%、20~70%、20~60%、20~50%、20~40%、20~30%、30~90%、30~80%、30~70%、30~60%、30~50%、30~40%、40~90%、40~80%、40~70%、40~60%、40~50%、50~90%、50~80%、50~70%、50~60%、60~90%、60~80%、60~70%、70~90%、70~80%或80~90%)向人施用。
在某些实施方案中,作为单一剂量施用免疫原性组合物。在某些实施方案中,作为多于一个剂量施用免疫原性组合物(例如,1~3次,间隔1~12个月)。
在某些实施方案中,组合物被配制成用于胃肠外递送,例如,通过注射。在这种实施方案中,施用可以是例如静脉内、肌内、皮内或皮下,或通过灌输或无针注射技术。在某些实施方案中,组合物可被配制成用于肌内递送。在某些实施方案中,组合物可被配制成用于皮下递送。对于这样的胃肠外施用,可制备组合物以及将其维持在常规冻干组合物中并且在施用前用可药用盐水溶液(例如0.9%盐水溶液)重构。如本领域已知的,可利用可药用酸(例如甲磺酸)调节可注射组合物的pH。可以使用的另一些可接受载剂和溶剂包括林格液(Ringer′ssolution)和U.S.P。另外,可常规地使用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮介质。为了该目的,可使用任意温和的不挥发油,包括合成的甘油一酯或甘油二酯。另外,在注射剂的制备中使用脂肪酸,例如油酸。可以在使用前对可注射组合物进行灭菌,例如,通过用截留细菌的滤器过滤、或通过掺入可在无菌水或其他无菌可注射介质中溶解或分散的无菌固体组合物形式的灭菌剂。
实施例
下列实施例描述了制备和实施本文所述之某些组合物的一些示例性方式。应当理解,这些实施例仅用于举例说明的目的,而不意在限制本文所述之组合物和方法的范围。
实施例1:制备含有抗原的囊泡的2步反向熔化法
本实施例描述了用于制备含有病毒抗原的囊泡的两步反向熔化法。
在步骤1中,将5∶4∶1摩尔比的以下脂质置于50ml平底玻璃烧杯中:1-单棕榈酰基甘油(MPG)、胆固醇(CHO)和磷酸二鲸蜡酯(DCP),确保没有粉末沾到玻璃烧杯的侧壁上。在加热的油浴中使脂质于约120℃熔化10分钟,并不时搅动用铝箔覆盖的玻璃烧杯。
在该阶段,疫苗(活的减毒麻疹、流行性腮腺炎和风疹病毒抗原、MerckFrosstStd.)储液在加热的水浴中于约30℃预孵育5分钟。在步骤2中,将所得疫苗储液在适当转速(例如,以8,000rpm)下均质化,将熔融脂质混合物添加到均质化疫苗储液中,并在约30℃下再均质化30秒。所得均质物于约30℃以220rpm振摇30秒。将25mM碳酸氢钠缓冲液(pH9.7)中的相等体积400mM蔗糖溶液添加至经振摇的均质物中,并再使均质物于约30℃以220rpm振摇5分钟。将该混合物分成等量份并于-80℃冷冻,之后冻干,并在使用前用0.5ml注射用无菌水(waterforinjection,WFI)使其重构。制备组合物以给出12.5mg/ml的总脂质浓度。
为了评估再配制疫苗的热稳定性,将冻干等量份在两种不同的热贮藏温度(25℃和40℃)下或者对于未经配制市售疫苗推荐的4℃贮藏温度下贮藏两周(在重构之前)(在每个温度下n=3)。还测试了如上所述制备的但不添加NISV的再配制疫苗。1周和2周后,视觉检查经贮藏样品的冻干饼的外观、颜色和焦糖化程度。以下表3示出了该视觉检查的结果。对于在40℃下贮藏的再配制疫苗的冻干饼而言,观察到外观的一些明显变化,而不论贮藏温度如何,但观察到饼的颜色或焦糖化程度没有变化。
表3
实施例2:麻疹效力测定(TCID50和空斑)
用于对活的病毒疫苗中感染性颗粒数目进行定量的一般测试方法是50%组织培养感染剂量(TCID50)测定。该终点稀释测定量化了杀死50%感染宿主或产生50%经接种组织培养细胞之细胞病变效应所需的病毒量。该测定在临床研究应用中更常见,其中必须测定病毒的致死量或如果病毒不形成空斑(参见下述可替换空斑测定的讨论)。在组织培养的情况中,平板接种宿主细胞并添加病毒的连续稀释物。孵育后,手动观察细胞死亡(即,感染细胞)的百分比并记录每个病毒稀释度,结果用于数学计算TCID50结果。由于测定方法和原理的明显不同,所以TCID50和pfu/ml(空斑测定结果)或其他感染性测定结果不等价。该方法因细胞感染性时间而可能花费一周。
在这些实验中使用Vero细胞用以评估麻疹病毒在再配制疫苗中的效力。根据实施例1制备的再配制疫苗在注射用水中贮藏一段时间后(下文讨论)进行再配制。在96孔板中将Vero细胞培养至80%汇合。将100μl再配制疫苗的十倍稀释物添加至孔中,并且以1/10稀释物开始以及在培养基中进行再配制疫苗的七个额外的10倍连续稀释。病毒滴度量化了产生50%经接种组织培养细胞之细胞病变效应所需的病毒量。为了评估再配制疫苗的热稳定性,在三种不同的温度(4℃、25℃和40℃)下使冻干等量份贮藏2周(在重构之前)。在上述重构之后测定麻疹病毒滴度(TCID50)并且结果示于图1中。对于再配制市售疫苗对照(在蔗糖中均质化并冻干但没有NISV),在40℃下贮藏的等量份与在4℃和25℃下贮藏的等量份相比的病毒滴度显著地下降。NISV配制的疫苗的等量份当在40℃下贮藏后显示出病毒滴度的一些损失,但不与再配制市售疫苗对照的程度相同。
如上所述,用于量化活的病毒疫苗中感染颗粒数目的另一种常见测试方法是空斑测定。该测试方法基于疫苗中病毒对易受影响之细胞系的细胞病变效应并且是疫苗组合物之效力的体外测量(Schalketal.,JournalofVirologicalMethods117:179-187,2004)。
在注射用水中贮藏一段时间(例如,如下讨论的)后将根据实施例1制备的再配制疫苗进行重构。由于疫苗是三价疫苗,所以最初通过添加抗流行性腮腺和抗风疹抗血清然后在4℃下孵育一小时(在添加前使抗血清在56℃下热失活30分钟)来中和疫苗中的流行性腮腺炎和风疹病毒。之后制备培养基中再配制疫苗的100、500、1000、2500和5000倍连续稀释物。在6孔板中将Vero细胞培养至90%汇合。在感染前一天,更新培养基。用200μl每种稀释物(每种稀释物12个孔)感染细胞。在室温下使病毒吸收45分钟后,细胞接受由具有4.7%灭活胎牛血清(Invitrogen)、0.11%NaHCO3和0.33%琼脂之培养基M199(BioWhittakerEurope)组成的4ml琼脂覆层(agar-overlay)。将板反转并在36℃和2.5%CO2下孵育。9天后,移除琼脂-覆层并使细胞在96%乙醇中固定2分钟。随后,使细胞在石炭酸品红(carbolfuchsin)中染色并干燥。通常手动计算空斑,将与用于制备平板的稀释因子组合的结果用于计算每样品单位体积的空斑形成单位的数目(pfu/ml)。pfu/ml结果表示样品内感染性颗粒的数目并且基于这样的假设:所形成的每个空斑代表一个感染性病毒颗粒。
实施例3:含有病毒抗原的囊泡、脂质浓度对热稳定性和体液稳定性的影响
该研究设计用于评价使用如实施例1所述反向熔化法与不同脂质浓度、缓冲液和蔗糖配制的包含活的减毒之非离子表面活性剂囊泡(NISV)的稳定性。使再配制样品贮藏在5±3℃和37±2℃下。市售疫苗用作对比的阳性对照。TCID50用作体外测试(如实施例2所述)以测定贮藏1、2和12周后的疫苗效力。将结果与市售疫苗的表现相比以评价再配制样品的热稳定性益处。
将5∶4∶1摩尔比的脂质:单棕榈酰基甘油(MPG)、胆固醇(CHO)和磷酸二鲸蜡酯(DCP)置于平底玻璃烧杯的底部中。在油浴中使脂质于120℃~122℃熔化,并不时混合。使疫苗(用提供的稀释剂重构)在30℃~32℃下温热5分钟。将疫苗溶液在8,000rpm下均质化,将熔融的脂质立即转移到样品溶液中,并在30℃~32℃下温热。均质化(对于TA1~7和10~12进行30秒)之后,所得混合物于30℃~32℃以220rpm混合30分钟。对于某些样品,随后添加相等体积400mM蔗糖溶液(任选地用25mM碳酸氢盐缓冲液或无菌水制备)。使制备的样品溶液于30℃~32℃以220rpm再混合5分钟。对于TA4,在添加熔融的脂质之前,将浓磷酸盐缓冲液添加至疫苗溶液。将溶液分成1.0mL等量份/小瓶(TA1~4、10、11)和0.5mL(TA5~7和12),然后冻干。将冻干小瓶贮藏于5±3℃和37±2℃。在组织培养感染剂量50(TCID50)分析之前用1.0mL无菌水重构每小瓶冻干样品。该样品的稳定性如以下表4所述。
表4
*在脂质添加之前磷酸盐缓冲液用于缓冲疫苗。
**将25mM碳酸氢钠(pH9.7)用于溶解400mM蔗糖并在冻干之前添加至样品
从恒温箱中收集冻干样品。在测试前将所有样品编号并在4℃下贮藏。采用体外微量滴定测定确定麻疹组分的效力。使用统计学分析的改进终点稀释测定,TCID50测定评估存活病毒。简要地,这些样品的连续稀释和参比标准制备物在微量滴定板的10个孔的排中与使用的Vero细胞(非洲绿猴肾上皮细胞;ATCC-CCL81)一起孵育1、2和12周。Vero细胞系始于正常成年非洲绿猴的肾。将具有50μLVero细胞的微量滴定板在5%CO2/37℃下在24小时中(在这些条件下预期75~80%细胞汇合)孵育以获得4.0×105个细胞/mL滴度。每个样品用1000μl无菌蒸馏水重构,手动混合15秒,然后采用中速(设定5)涡旋45秒。在96孔板上一式四份地将重构样品(每个时间点4小瓶)在5分钟内以未稀释和稀释形式(10-1至10-7)转移至微量滴定板(100μL/孔)。在具有补充5%FBS之IMDM培养基的24孔板中制备10-1至10-7稀释物。包括阳性对照和阴性对照(分别为内部加工的市售疫苗/市售疫苗和细胞)。使板在35℃/5%CO2下孵育5天。在孵育期结束时,对特定病毒细胞病变效应(CPE)进行计数并记录。根据这些标准计算每人剂量的TCID50。TCID50值用于派生统计分析的几何平均滴度。
对于所有样品的统计分析,通过使用用于windows的Prism5(GraphPadSoftware,SanDiego,CA)软件关联经转化的变量以进行双尾非配对t检验并检测组之间的p值。统计显著性表示为0.05至0.01之间的p值并且高统计显著性表示为低于0.01的p值。如果在一组中滴度对于所有实验相同,那么对TCID50值进行操作,使得滴度四舍五入成四位小数,以避免非参数统计分析的软件限制。
图2示出了与25mg/mL脂质配制的样品(TA1、5和8)、加工对照TA10和TA12(暴露于所有加工步骤的、没有脂质、具有和没有蔗糖和缓冲液的市售疫苗)以及市售疫苗(TA13)在5±3℃和37±2℃下的TCID50测定结果。TA1(1mL再配制的提议样品在6cc小瓶中)的容器包封系统和填充体积与TA5(0.5mL填充至2cc小瓶中)的不同,但是所获得的TCID50结果和物理化学表征(数据未显示)相当。在5±3℃和37±2℃下经1、2和12周贮藏的TA1和5的效力比WHO建议的限制(3.0log10)高(图2)。具有25mg/mL脂质的再配制样品在较高温度(37±2℃)下贮藏后经12周未显示效力损失,而市售疫苗效力显著降低(p<0.0001)。脂质的浓度似乎影响TCID50测定的效力读数,尤其是在最高脂质浓度25mg/mL下,如图2、3和4所示。还观察到,包含无脂质的加工对照TA10和TA12不适合用于在较高温度(37±2℃)下贮藏多于一周(图2,TA10)。与市售疫苗(其在37±2℃下最多两周是稳定的,但是12周后显示出减少)相比,TA12没有示出在较高温度下一周后的稳定性。这些结果证明了在升高的温度下具有25mg/mL脂质浓度(具有或没有蔗糖和缓冲液)的热稳定疫苗。在5±3℃下,TA1和5、加工对照(TA10和12)以及市售(TA13)示出经12周贮藏效力没有损失。在37±2℃下贮藏的TA1和5与市售疫苗相比维持较高效力。
图3示出了与12.5mg/mL脂质配制的样品(TA2、4和6)、加工对照(暴露于所有加工步骤的、没有脂质、具有和没有蔗糖和缓冲液的市售疫苗)以及市售疫苗在5±3℃和37±2℃下的TCID50测定结果。TA2(1mL再配制的建议样品在6cc小瓶中)的容器包封系统和填充体积与TA6(0.5mL填充至2cc小瓶中)的不同。在较高温度下TA6的外观在整个贮藏中更加一致。在5±3℃和37±2℃下经1、2和12周贮藏的TA2、4和6的效力比WHO建议的限制(3.0log10)高(图3)。具有12.5mg/mL脂质的再配制样品在较高温度(37±2℃)下经12周贮藏显示没有效力损失,而市售疫苗效力显著降低(p<0.0001)。然而,脂质的浓度似乎影响TCID测定的效力读数。标准反向熔化法(TA2、4和6)显示出相当的TCID结果。还观察到,再配制加工对照样品当在较高温度(37±2℃)下贮藏时不适于多于一周(图3,TA10和TA11)。与市售疫苗(其在37℃下最多两周是稳定的)相比,TA12在较高温度下一周后没有示出效力损失。这些结果证明了在升高的温度下具有12.5mg/mL脂质浓度的热稳定的疫苗(具有或没有蔗糖和缓冲液)。在5±3℃下,样品(TA2、4和6)、加工对照(无脂质)以及市售疫苗示出最多12周的稳定性。在两种温度(5±3℃和37±2℃)下贮藏与NISV配制的样品(TA2、4和6)与放置了2周和12周的市售疫苗相比维持较高效力。
图4示出了与3.125mg/mL脂质配制的样品(TA3和7)、加工对照(暴露于所有加工步骤的、没有脂质、具有和没有蔗糖和缓冲液(如磷酸盐或碳酸氢盐缓冲液)的市售疫苗)以及市售疫苗在5±3℃和37±2℃二者下的TCID50测定结果。TA3(1mL再配制的建议样品在6cc小瓶中)的容器包封系统和填充体积与TA7(0.5mL填充至2cc小瓶中)的不同,但是在较高温度下TA7的外观在整个贮藏中更加一致。在所有的样品中TA3和7包含最低的脂质(3.125mg/mL脂质)并且在37±2℃下甚至贮藏1周后显示出最低的效力,而加工对照TA10和TA11在1周后显示出没有效力损失,同时市售疫苗在37±2℃下经2周贮藏显示出没有效力损失。在37±2℃下经1、2和12周贮藏的TA3和7的效力低于WHO建议的限制(3.0log10)(图4)。具有3.125mg/mL脂质的再配制样品当在较高温度(37±2℃)下贮藏时没有显示出稳定性。还观察到,在具有或没有蔗糖或缓冲液(碳酸氢盐或磷酸盐)下再配制样品当在较高温度(37±2℃)下贮藏时不稳定(图4,TA10、TA12和TA13)。与市售疫苗(其在37±2℃下最多两周是稳定的)相比,TA12在较高温度下一周后没有显示出稳定性。在5±3℃下,提议样品、加工对照和市售疫苗示出最多12周的稳定性。包含3.125mg/mL脂质的样品当在升高温度(37±2℃)下贮藏时不稳定。
为了确定再配制对脂质稳定性的影响,将在4℃下放置四周的样品用于研究在37℃温度条件下最多8小时的重构(脂质)稳定性。用GIBCO水重构样品并在37℃下保持8小时。在0、2、4和8间隔取样用于效力测定。建议重构后应尽可能快地使用重构或重构疫苗应在暗处于2~8℃贮藏在疫苗小瓶中并且如果在8小时内没有使用则丢弃((TheImmunologicalBasisforImmunizationSeries,Module7:Measles(WHO/EPI/GEN/93.17))。WHO已经报道,在室温下重构疫苗在一小时中损失约50%效力并且在37℃下一小时内发生失活。在图5中,示出了具有25mg/mL脂质浓度的重构TA1或具有12.5mg/mL脂质浓度的TA2与市售疫苗相比在37℃下贮藏8小时后具有相当的效力(差异不显著)。液体稳定性(图5)证明了,具有3.125mg/mL脂质浓度的再配制样品与采用25mg/mL或12.5mg/mL脂质配制之样品相比在实验中具有更大的效力损失。TA3和7的TCID50值在37℃下贮藏2小时后降低。
总的来说,通过反向熔化法制备的包含NISV中疫苗的冻干样品(12.5或25mg/mL脂质)在5±3℃和37±2℃下经12周贮藏在效力方面没有变化。所测试的最高脂质浓度(25mg/mL)与包含较低脂质浓度(12.5mg/mL)的样品相比似乎没有在维持效力方面提供任何额外的益处,然而本公开内容涵盖了较高浓度的使用。采用25mg/mL或12.5mg/mL制备的样品在重构后经八小时显示出没有效力损失。蔗糖或缓冲液(磷酸盐或碳酸氢盐)的添加在与25mg/mL或12.5mg/mL脂质配制的样品中在保存效力方面没有显示出任何额外的益处。具有最低脂质浓度(3.125mg/mL)的样品当在37℃下贮藏12周后没有维持效力。
其他实施方案
通过考虑对本文中公开的公开内容的说明书或实践,本公开内容的其他实施方案对于本领域技术人员来说将是显而易见的。认为说明书和实施例旨在仅用于举例,本公开内容的真正范围由所附的权利要求来指明。本文中所引用的任何参考文献的内容均通过引用整体并入本文。
Claims (31)
1.热稳定的冻干免疫原性组合物,其用于用水溶液再水化至所得产物中的脂质浓度为至少9mg/ml,所述组合物包含:
减毒活病毒;和
囊泡,其包含1-单棕榈酰基甘油、磷酸二鲸蜡酯和胆固醇。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中所述减毒活病毒是减毒麻疹病毒、减毒流行性腮腺炎病毒、减毒风疹病毒、减毒水痘病毒、或其组合。
3.根据权利要求1所述的组合物,其中所述减毒活病毒是减毒轮状病毒、减毒带状疱疹病毒、减毒牛痘病毒、减毒黄热病病毒、或其组合。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其中所述组合物不含佐剂。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其中所述病毒的至少一部分与所述囊泡相联合。
6.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其中所述病毒包封在所述囊泡的水性核心内。
7.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其中所述组合物通过包括以下步骤的方法制备:
将包含1-单棕榈酰基甘油、磷酸二鲸蜡酯和胆固醇的脂质熔化以产生熔融脂质;
将所述熔融脂质与包含所述减毒活病毒的水溶液组合;以及
使所得产物均质化,其中以在所述所得产物中实现至少9mg/ml脂质浓度的相对量和体积来组合所述熔融脂质和水溶液。
8.根据权利要求7所述的组合物,其中以在所述所得产物中实现范围为9mg/ml至100mg/ml脂质浓度的相对量和体积来组合所述熔融脂质和水溶液。
9.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其中所述组合物当在37±2℃下贮藏12周时展现出的效力变化如通过TCID50测定所确定的低于50%。
10.根据权利要求9所述的组合物,其中所述组合物展现出的效力变化低于10%。
11.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物,其中所述组合物当在37±2℃下贮藏12周时比没有脂质囊泡的参比组合物更稳定。
12.根据权利要求11所述的组合物,其中稳定性基于如通过TCID50测定所确定的效力。
13.包含减毒活病毒和囊泡的组合物,其中所述囊泡由包含1-单棕榈酰基甘油、磷酸二鲸蜡酯和胆固醇的脂质构成并且所述组合物通过包括以下步骤的方法制备:
将所述脂质熔化以产生熔融脂质;
将所述熔融脂质与包含所述减毒活病毒的水溶液组合;以及
使所得产物均质化,其中以在所述所得产物中实现至少9mg/ml脂质浓度的相对量和体积来组合所述熔融脂质和水溶液。
14.根据权利要求13所述的组合物,其中以在所述所得产物中实现范围为9mg/ml至100mg/ml脂质浓度的相对量和体积来组合所述熔融脂质和水溶液。
15.根据权利要求13或14所述的组合物,其中所述组合物不含佐剂。
16.根据权利要求13或14所述的组合物,其中将所述熔融脂质添加至包含所述减毒活病毒的所述水溶液中。
17.根据权利要求13或14所述的组合物,其中将包含所述减毒活病毒的所述水溶液添加至所述熔融脂质中。
18.制备包含减毒活病毒和囊泡之组合物的方法,其中脂质囊泡由包含1-单棕榈酰基甘油、磷酸二鲸蜡酯和胆固醇的脂质构成,所述方法包括:
将所述脂质熔化以产生熔融脂质;
将所述熔融脂质与包含所述减毒活病毒的水溶液组合;以及
使所得产物均质化,其中以在所述所得产物中实现至少9mg/ml脂质浓度的相对量和体积来组合所述熔融脂质和水溶液。
19.根据权利要求18所述的方法,其中以在所述所得产物中实现范围为9mg/ml至100mg/ml脂质浓度的相对量和体积来组合所述熔融脂质和水溶液。
20.根据权利要求18或19所述的方法,其中所述组合物不含佐剂。
21.根据权利要求18或19所述的方法,其中将所述熔融脂质添加至包含所述减毒活病毒的所述水溶液中。
22.根据权利要求18或19所述的方法,其中将包含所述减毒活病毒的所述水溶液添加至所述熔融脂质中。
23.权利要求1至3中任一项所述的组合物在制备用于治疗遭受来自病毒感染之感染或者处于其风险中之个体的药物中的用途,
其中所述组合物已在超过8℃的温度下贮藏了一段时间;
其中所述组合物配制为用水溶液再水化至所得水化产物中脂质浓度为至少9mg/ml;
其中再水化产物配制为以治疗有效量向个体施用。
24.根据权利要求23所述的用途,其中所述个体遭受来自麻疹病毒、流行性腮腺炎病毒、风疹病毒或水痘病毒的感染或者处于其风险中。
25.根据权利要求23所述的用途,其中所述个体遭受来自轮状病毒、带状疱疹病毒、牛痘病毒或黄热病病毒的感染或者处于其风险中。
26.根据权利要求23所述的用途,其中所述组合物已在超过25℃的温度下贮藏了一段时间。
27.根据权利要求23所述的用途,其中所述组合物已在超过30℃的温度下贮藏了一段时间。
28.根据权利要求23所述的用途,其中所述组合物已在超过35℃的温度下贮藏了一段时间。
29.根据权利要求23至28中任一项所述的用途,其中所述组合物配制为通过肌内注射施用。
30.根据权利要求23至28中任一项所述的用途,其中所述组合物配制为通过皮下注射施用。
31.试剂盒,其包含权利要求1至3中任一项所述的热稳定的冻干免疫原性组合物,以及用水溶液将所述组合物再水化至所得水化产物中脂质浓度为至少9mg/ml的说明书。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161432567P | 2011-01-13 | 2011-01-13 | |
US61/432,567 | 2011-01-13 | ||
PCT/US2012/021388 WO2012097346A1 (en) | 2011-01-13 | 2012-01-13 | Compositions and methods for treating viral infections |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103501811A CN103501811A (zh) | 2014-01-08 |
CN103501811B true CN103501811B (zh) | 2016-03-30 |
Family
ID=46507475
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201280008709.5A Active CN103501811B (zh) | 2011-01-13 | 2012-01-13 | 用于治疗病毒感染的组合物和方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10736844B2 (zh) |
EP (1) | EP2663327A4 (zh) |
CN (1) | CN103501811B (zh) |
BR (1) | BR112013017939B1 (zh) |
CA (1) | CA2862864C (zh) |
MX (1) | MX359103B (zh) |
WO (1) | WO2012097346A1 (zh) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9907746B2 (en) | 2009-07-06 | 2018-03-06 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
EP2451950B9 (en) | 2009-07-06 | 2016-11-23 | Variation Biotechnologies Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
AU2011276223C1 (en) | 2010-07-06 | 2016-05-12 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
US20140356399A1 (en) * | 2012-01-12 | 2014-12-04 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
RU2698906C2 (ru) * | 2012-01-27 | 2019-09-02 | Вэриэйшн Биотекнолоджиз, Инк. | Способы и композиции для терапевтических агентов |
WO2017044940A1 (en) * | 2015-09-10 | 2017-03-16 | Washington State University | Cell membrane-formed nanoscale vesicles and methods of using thereof |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1169161A (zh) * | 1994-10-07 | 1997-12-31 | 东卡罗来纳大学 | 减毒病毒及其制备方法 |
US5876721A (en) * | 1993-10-06 | 1999-03-02 | Proteus Molecular Design Limited | Vaccines |
Family Cites Families (132)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4024241A (en) | 1974-09-27 | 1977-05-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health, Education And Welfare | Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid |
US3952097A (en) | 1974-09-27 | 1976-04-20 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health, Education And Welfare | Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid |
US4349538A (en) | 1979-12-07 | 1982-09-14 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid |
JPS56115727A (en) | 1980-02-19 | 1981-09-11 | Kuraray Co Ltd | Carrier for immobilizing physiologically active substance |
US4537769A (en) | 1982-04-06 | 1985-08-27 | American Cyanamid Company | Stabilization of influenza virus vaccine |
US4894228A (en) | 1982-04-07 | 1990-01-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccine against hepatitis A virus |
US4436727A (en) | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
US4866034A (en) | 1982-05-26 | 1989-09-12 | Ribi Immunochem Research Inc. | Refined detoxified endotoxin |
US4877611A (en) | 1986-04-15 | 1989-10-31 | Ribi Immunochem Research Inc. | Vaccine containing tumor antigens and adjuvants |
US4983387A (en) | 1986-05-19 | 1991-01-08 | Viral Technologies Inc. | HIV related peptides, immunogenic antigens, and use therefor as subunit vaccine for AIDS virus |
WO1988006882A1 (en) | 1987-03-13 | 1988-09-22 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Lipid vesicles formed of surfactants and steroids |
US5057540A (en) | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
US5160669A (en) | 1988-03-03 | 1992-11-03 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Method of making oil filled paucilamellar lipid vesicles |
US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
US4911517A (en) | 1988-09-09 | 1990-03-27 | Square D Company | Means for clamping fiber optical cable |
US5549910A (en) | 1989-03-31 | 1996-08-27 | The Regents Of The University Of California | Preparation of liposome and lipid complex compositions |
US5817318A (en) | 1989-05-03 | 1998-10-06 | Connaught Laboratories Limited | Synthetic peptides for an HIV-1 vaccine |
CN1022331C (zh) | 1989-08-17 | 1993-10-06 | 浙江省医学科学院 | 甲型肝炎减毒活疫苗毒种及其制造方法 |
DE3934366A1 (de) | 1989-10-14 | 1991-04-18 | Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg Speyer Haus | Vakzine zum schutz vor hiv-virusinfektionen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als diagnostikum und immuntherapeutikum |
IT1238343B (it) | 1989-10-16 | 1993-07-13 | Cesalpino Andrea Fond | Procedimento per la preparazione di vaccini capaci di generare non solo la risposta immune dei linfociti t helper,ma anche un'efficace risposta di linfociti t citotossici,e vaccini con queste caratteristiche |
IE904098A1 (en) | 1989-11-13 | 1991-05-22 | Nova Pharm Corp | Lipospheres for controlled delivery of substances |
ES2138588T3 (es) | 1990-06-29 | 2000-01-16 | Chiron Corp | Composiciones de vacunas que contienen liposomas. |
IS1685B (is) | 1990-12-11 | 1998-02-24 | Bracco International B.V. | Aðferð við að búa til fitukúlur (liposomes) sem eru gæddar auknum hæfileika til að draga í sig og halda í sér aðskotaefnum |
US5250236A (en) | 1991-08-05 | 1993-10-05 | Gasco Maria R | Method for producing solid lipid microspheres having a narrow size distribution |
GB9207731D0 (en) | 1992-04-07 | 1992-05-27 | Proteus Molecular Design | Improvements in or relating to vaccines |
CA2139757C (en) | 1992-07-08 | 2009-04-14 | Gunther Maierhofer | Liposomes, method of preparing the same and use thereof in the preparation of drugs |
JP3523646B2 (ja) | 1992-09-18 | 2004-04-26 | スミスクライン・ビーチヤム・バイオロジカルズ・エス・エイ | A型肝炎ワクチン |
US5393527A (en) | 1993-01-04 | 1995-02-28 | Becton, Dickinson And Company | Stabilized microspheres and methods of preparation |
EP0688206B1 (en) | 1993-02-26 | 2000-05-03 | Fountain Pharmaceuticals, Inc. | Vaccine delivery system and shelf-stable precursor solution for remote encapsulation of active ingredients |
US5885486A (en) | 1993-03-05 | 1999-03-23 | Pharmaciaand Upjohn Ab | Solid lipid particles, particles of bioactive agents and methods for the manufacture and use thereof |
EP0706374B1 (en) | 1993-06-30 | 1997-12-10 | Genentech, Inc. | Method for preparing liposomes |
US5762939A (en) | 1993-09-13 | 1998-06-09 | Mg-Pmc, Llc | Method for producing influenza hemagglutinin multivalent vaccines using baculovirus |
HU219810B (hu) | 1993-11-17 | 2001-08-28 | Deutsche Om Arzneimittel Gmbh. | Glükózamin-diszacharidok, eljárás előállításukra és a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények, valamint alkalmazásuk |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
WO1995018861A1 (en) | 1994-01-11 | 1995-07-13 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie | Influenza vaccine |
US5824536A (en) | 1994-08-23 | 1998-10-20 | St. Jude Children's Research Hospital | Influenza virus replicated in mammalian cell culture and vaccine production |
US6235888B1 (en) | 1994-10-05 | 2001-05-22 | The General Hospital Corporation | Hepatitis C virus vaccine |
GB9515868D0 (en) * | 1995-08-02 | 1995-10-04 | Proteus Molecular Design | Therapeutic method |
GB9522351D0 (en) | 1995-11-01 | 1996-01-03 | Medeva Holdings Bv | Vaccine compositions |
US5700679A (en) | 1996-06-07 | 1997-12-23 | Novavax, Inc. | Lipid vesicles having a bilayer containing a surfactant with anti-viral and spermicidal activity |
US5919480A (en) | 1996-06-24 | 1999-07-06 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Liposomal influenza vaccine composition and method |
WO1998001139A1 (en) | 1996-07-03 | 1998-01-15 | Eisai Co., Ltd. | Injections containing lipid a analogues and process for the preparation thereof |
ZA975889B (en) | 1996-07-08 | 1998-02-23 | Genentech Inc | HIV envelope polypeptides and vaccine. |
DE69717661T2 (de) | 1996-09-13 | 2003-09-25 | Lipoxen Technologies Ltd | Liposomenzusammensetzung |
US5910306A (en) | 1996-11-14 | 1999-06-08 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Transdermal delivery system for antigen |
US6290967B1 (en) | 1996-12-20 | 2001-09-18 | Merck & Co., Inc. | Stabilizers for lyophilized vaccines |
FR2760367B1 (fr) | 1997-03-06 | 1999-04-30 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Composition vaccinale destinee a la prevention ou au traitement des hepatites c |
TW570803B (en) | 1997-04-09 | 2004-01-11 | Duphar Int Res | Influenza vaccine |
US6303347B1 (en) | 1997-05-08 | 2001-10-16 | Corixa Corporation | Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors |
US6113918A (en) | 1997-05-08 | 2000-09-05 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors |
US6764840B2 (en) | 1997-05-08 | 2004-07-20 | Corixa Corporation | Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors |
US6080725A (en) | 1997-05-20 | 2000-06-27 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof |
AU732856B2 (en) | 1997-05-20 | 2001-05-03 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Triterpene saponin analogs having adjuvant and immunostimulatory activity |
GB9725084D0 (en) | 1997-11-28 | 1998-01-28 | Medeva Europ Ltd | Vaccine compositions |
WO1999041360A1 (en) | 1998-02-13 | 1999-08-19 | Adan Rios | Method for the development of an hiv vaccine |
US6503753B1 (en) | 1998-02-13 | 2003-01-07 | Adan Rios | Method for the development of an HIV vaccine |
CA2331599C (en) | 1998-05-12 | 2005-11-29 | Genecure Llc | Replication defective hiv vaccine |
US7067134B1 (en) | 1998-08-12 | 2006-06-27 | University Of Western Ontario | HIV vaccine |
AT408615B (de) | 1998-09-15 | 2002-01-25 | Immuno Ag | Neue influenzavirus-impfstoffzusammensetzung |
GB9822714D0 (en) | 1998-10-16 | 1998-12-09 | Smithkline Beecham Sa | Vaccines |
CN1062770C (zh) | 1998-11-12 | 2001-03-07 | 卫生部长春生物制品研究所 | 甲肝-麻疹二联疫苗及其生产方法 |
US6287570B1 (en) | 1998-11-23 | 2001-09-11 | Patricia L. Foley | Vaccine against swine influenza virus |
GB9826069D0 (en) | 1998-11-28 | 1999-01-20 | Univ Leeds | HIV vaccine |
IL127331A0 (en) | 1998-11-30 | 1999-09-22 | Yeda Res & Dev | Peptide-based vaccine for influenza |
US6551600B2 (en) | 1999-02-01 | 2003-04-22 | Eisai Co., Ltd. | Immunological adjuvant compounds compositions and methods of use thereof |
US20040006242A1 (en) | 1999-02-01 | 2004-01-08 | Hawkins Lynn D. | Immunomodulatory compounds and method of use thereof |
AT407958B (de) | 1999-02-11 | 2001-07-25 | Immuno Ag | Inaktivierte influenza-virus-vakzine zur nasalen oder oralen applikation |
US6248363B1 (en) | 1999-11-23 | 2001-06-19 | Lipocine, Inc. | Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions |
NO311807B1 (no) | 1999-03-04 | 2002-01-28 | Bionor Immuno As | HIV-peptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay- testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkalt av HIV |
WO2001002607A1 (en) | 1999-07-06 | 2001-01-11 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus carrying gag gene hiv vaccine |
AU5905400A (en) | 1999-07-14 | 2001-02-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for delivery and retention of active agents to lymph nodes |
EP1196145A1 (en) * | 1999-07-15 | 2002-04-17 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Methods and apparatus for preparation of lipid vesicles |
MXPA02000969A (es) | 1999-07-28 | 2004-04-21 | Smith Stephen | Vacuna de virus de inmuno-deficiencia humana atenuado controlado en forma condicional. |
JP4763197B2 (ja) | 1999-09-24 | 2011-08-31 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 新規ワクチン |
IL150602A0 (en) | 2000-02-15 | 2003-02-12 | Id Biomedical Corp Quebec | Proteosome influenza vaccine |
FR2806912B1 (fr) | 2000-04-04 | 2004-07-23 | Fond Mondiale Rech Et Preventi | UTILISATION DE PROTEINES gp120 ET gp160 MODIFIEES DANS LA BOUCLE V3 DU VIH-1 POUR LA PREPARATION DE COMPOSITIONS VACCINALES ET FORMULATIONS LES CONTENANT |
US20030092145A1 (en) | 2000-08-24 | 2003-05-15 | Vic Jira | Viral vaccine composition, process, and methods of use |
JP5063852B2 (ja) | 2000-09-25 | 2012-10-31 | ポリマン サイエンティフィック イミューンバイオロジッシュ フォーシュング ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ファフツング | 生ワクチン及び製造方法 |
WO2002051390A2 (en) | 2000-12-27 | 2002-07-04 | Ares Trading S.A. | Amphiphilic lipid nanoparticles for peptide and/or protein incorporation |
MY134424A (en) | 2001-05-30 | 2007-12-31 | Saechsisches Serumwerk | Stable influenza virus preparations with low or no amount of thiomersal |
US7361352B2 (en) | 2001-08-15 | 2008-04-22 | Acambis, Inc. | Influenza immunogen and vaccine |
DK1471936T3 (da) | 2002-01-14 | 2010-04-26 | Novartis Vaccines & Diagnostic | HIV-Vaccine og fremgangsmåde til anvendelse |
US7285289B2 (en) | 2002-04-12 | 2007-10-23 | Nagy Jon O | Nanoparticle vaccines |
US20050169979A1 (en) | 2002-07-03 | 2005-08-04 | Dov Michaeli | Liposomal vaccine |
US7604803B2 (en) | 2002-07-05 | 2009-10-20 | Lipoxen Technologies Limited | Method to enhance an immune response of nucleic acid vaccination |
US20040011840A1 (en) | 2002-07-22 | 2004-01-22 | Lovett Terry E. | Rolling motorcycle bag |
KR101251902B1 (ko) | 2003-02-25 | 2013-04-08 | 메디뮨 엘엘씨 | 인플루엔자 백신 조성물의 제조 방법 |
NZ543467A (en) * | 2003-04-10 | 2008-07-31 | Novartis Vaccines & Diagnostic | The severe acute respiratory syndrome coronavirus |
WO2005014778A2 (en) | 2003-05-15 | 2005-02-17 | The Board Of Regents For Oklahoma State University | Dna vaccine expressing ha1 of equine-2 influenza virus |
JP2006527763A (ja) | 2003-06-18 | 2006-12-07 | イッスム・リサーチ・ディベロップメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシティ・オブ・エルサレム | スフィンゴ脂質のポリアルキルアミン抱合体 |
US7368537B2 (en) | 2003-07-15 | 2008-05-06 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Subunit vaccine against respiratory syncytial virus infection |
GB0321615D0 (en) | 2003-09-15 | 2003-10-15 | Glaxo Group Ltd | Improvements in vaccination |
US20050095283A1 (en) * | 2003-09-16 | 2005-05-05 | Aphios Corporation | Compositions and methods for topically treating diseases |
US20080160089A1 (en) | 2003-10-14 | 2008-07-03 | Medivas, Llc | Vaccine delivery compositions and methods of use |
WO2005053727A2 (en) | 2003-11-29 | 2005-06-16 | Sangstat Medical Corporation | Pharmaceutical compositions for bioactive peptide agents |
JP5331340B2 (ja) | 2004-05-18 | 2013-10-30 | バイカル インコーポレイテッド | インフルエンザウィルスワクチン組成物、及びその使用方法 |
CA2568015C (en) | 2004-05-25 | 2013-08-27 | Medimmune Vaccines, Inc. | Influenza hemagglutinin and neuraminidase variants |
CA2565500A1 (en) | 2004-05-28 | 2005-12-15 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine compositions comprising virosomes and a saponin adjuvant |
EP1645283A1 (en) * | 2004-10-08 | 2006-04-12 | Chiron Behring GmbH & Co. KG | Combination vaccine |
JP2008515929A (ja) | 2004-10-08 | 2008-05-15 | アルザ コーポレイション | 脂質連結部分を予備形成した脂質集合体にマイクロ波を使用して挿入する方法 |
AU2005314138B2 (en) | 2004-12-08 | 2011-11-17 | Medimmune, Llc | Methods of producing influenza vaccine compositions |
EP1676569A1 (en) | 2004-12-30 | 2006-07-05 | Pevion Biotech Ltd. | Lyophilization of virosomes |
WO2006092046A1 (en) | 2005-03-01 | 2006-09-08 | Variation Biotechnologies Inc. | Hiv vaccine composition |
US20090028903A1 (en) | 2005-03-23 | 2009-01-29 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Novel use |
US7348011B2 (en) | 2005-06-10 | 2008-03-25 | Sudershan Biotech Ltd. | Hepatitis C virus vaccine |
US20080213461A1 (en) | 2005-06-17 | 2008-09-04 | Georgia Tech Research Corporation | Coated Microstructures and Methods of Manufacture Thereof |
PL1957647T3 (pl) | 2005-11-25 | 2015-07-31 | Zoetis Belgium S A | Oligorybonukleotydy immunostymulujące |
EP2441846A3 (en) | 2006-01-09 | 2012-07-25 | The Regents Of the University of California | Immunostimulatory combinations of TNFRSF, TLR, NLR, RHR, purinergic receptor, and cytokine receptor agoinsts for vaccines and tumor immunotherapy |
EP1988918A4 (en) * | 2006-02-22 | 2010-04-28 | Novavax Inc | ADJUVANZ AND VACCINE COMPOSITIONS |
US8846078B2 (en) | 2006-03-21 | 2014-09-30 | The Secretary Of State For Environment, Food & Rural Affairs Acting Through The Animal Health And Veterinary Laboratories Agency | Brucellosis DNA vaccine |
EP2382987A1 (en) | 2006-03-24 | 2011-11-02 | Novartis Vaccines and Diagnostics GmbH | Storage of influenza vaccines without refrigeration |
US20090202620A1 (en) * | 2006-09-05 | 2009-08-13 | Medivas, Llc | Polymer-stabilized liposomal compositions and methods of use |
EP2068918B1 (en) | 2006-09-26 | 2012-05-02 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
AU2008222523A1 (en) | 2007-03-07 | 2008-09-12 | Nventa Biopharmaceuticals Corporation | Double-stranded locked nucleic acid compositions |
ES2542058T3 (es) | 2007-03-30 | 2015-07-30 | Particle Sciences, Inc. | Formulaciones en forma de partículas y usos de las mismas |
KR101466326B1 (ko) | 2007-06-15 | 2014-12-02 | 주식회사 바이오트라이온 | 약독화된 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 생백신 |
EP2014279A1 (en) | 2007-06-22 | 2009-01-14 | Pevion Biotech AG | Virosomes comprising hemagglutinin derived from an influenza virus produced in a cell line, compositions, methods of manufacturing, use thereof |
SI2192917T1 (sl) | 2007-08-28 | 2014-05-30 | Baxter International Inc. | Postopek za proizvodnjo virusnih cepiv |
WO2009091531A2 (en) | 2008-01-16 | 2009-07-23 | The General Hospital Corporation | Uniform-sized, multi-drug carrying and photosensitive liposomes for advance drug delivery |
CN101574394A (zh) | 2008-05-09 | 2009-11-11 | 北京因科瑞斯医药科技有限公司 | 马钱子生物碱囊泡及其制备方法 |
WO2009155489A2 (en) | 2008-06-19 | 2009-12-23 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
WO2010033812A1 (en) | 2008-09-18 | 2010-03-25 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating hepatitis a. |
US8343497B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics |
US9907746B2 (en) | 2009-07-06 | 2018-03-06 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
EP2451950B9 (en) * | 2009-07-06 | 2016-11-23 | Variation Biotechnologies Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
WO2012006368A2 (en) | 2010-07-06 | 2012-01-12 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
AU2011276223C1 (en) * | 2010-07-06 | 2016-05-12 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
US20130323280A1 (en) | 2011-01-13 | 2013-12-05 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
EA201892619A1 (ru) | 2011-04-29 | 2019-04-30 | Роше Гликарт Аг | Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2 |
US20140356399A1 (en) | 2012-01-12 | 2014-12-04 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
RU2698906C2 (ru) | 2012-01-27 | 2019-09-02 | Вэриэйшн Биотекнолоджиз, Инк. | Способы и композиции для терапевтических агентов |
-
2012
- 2012-01-13 MX MX2013008106A patent/MX359103B/es active IP Right Grant
- 2012-01-13 CN CN201280008709.5A patent/CN103501811B/zh active Active
- 2012-01-13 US US13/979,322 patent/US10736844B2/en active Active
- 2012-01-13 CA CA2862864A patent/CA2862864C/en active Active
- 2012-01-13 BR BR112013017939-2A patent/BR112013017939B1/pt active IP Right Grant
- 2012-01-13 EP EP12734104.8A patent/EP2663327A4/en not_active Withdrawn
- 2012-01-13 WO PCT/US2012/021388 patent/WO2012097346A1/en active Application Filing
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5876721A (en) * | 1993-10-06 | 1999-03-02 | Proteus Molecular Design Limited | Vaccines |
CN1169161A (zh) * | 1994-10-07 | 1997-12-31 | 东卡罗来纳大学 | 减毒病毒及其制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX359103B (es) | 2018-09-14 |
EP2663327A4 (en) | 2015-12-02 |
BR112013017939B1 (pt) | 2022-11-16 |
MX2013008106A (es) | 2013-09-26 |
US10736844B2 (en) | 2020-08-11 |
CN103501811A (zh) | 2014-01-08 |
CA2862864C (en) | 2018-12-11 |
US20130295165A1 (en) | 2013-11-07 |
WO2012097346A1 (en) | 2012-07-19 |
CA2862864A1 (en) | 2012-07-19 |
EP2663327A1 (en) | 2013-11-20 |
BR112013017939A2 (pt) | 2016-10-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103501811B (zh) | 用于治疗病毒感染的组合物和方法 | |
JP6596008B2 (ja) | 液体安定なブタウイルスワクチン | |
RU2641970C2 (ru) | Жидкие стабильные вирусные вакцины | |
CN107296792B (zh) | 囊泡及由其产生之制剂的制备方法 | |
CN104244984B (zh) | 用于治疗剂的方法和组合物 | |
US11167033B2 (en) | Compositions and methods for treating viral infections | |
BR112012000826B1 (pt) | Método para a preparação de vesículas | |
JP2017505807A (ja) | 液体安定である家禽ウイルスワクチン | |
CN103096922A (zh) | 用于治疗流行性感冒的组合物和方法 | |
JP2021508680A (ja) | 生エンベロープウイルスの液体ワクチン | |
ES2305220T3 (es) | Vacuna del herpesvirus equino. | |
RU2754398C1 (ru) | Способ получения четырехвалентной вакцины для профилактики гриппа | |
RU2546247C2 (ru) | Вакцина против чумы, аденовирусных инфекций, парвовирусного и коронавирусного энтеритов, лептоспироза и бешенства собак | |
RU2395299C1 (ru) | Вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и лептоспироза крупного рогатого скота | |
RU2395297C1 (ru) | Вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и лептоспироза крупного рогатого скота | |
ES2744126T3 (es) | Vacuna contra la gripe felina y método de uso | |
Azhar et al. | Opportunities and Challenges of Covid-19 Vaccine Production, A review | |
KR20190020046A (ko) | 완충제를 사용하지 않고 산에 안정적인 저용량의 로타바이러스 백신 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |