CN110709100A - Trem2抗原结合蛋白及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及特异性结合并活化骨髓细胞上表达的人类触发受体‑2(TREM2)的抗原结合蛋白，例如单克隆抗体，以及包含此类抗原结合蛋白的药物组合物。本发明的激动剂抗原结合蛋白(例如抗体)能够在不存在Fc介导的这些抗原结合蛋白交联的情况下活化骨髓细胞中的TREM2/DAP12信号传导。还描述了使用这些抗原结合蛋白治疗或预防与TREM2功能丧失相关的病症，例如阿尔茨海默病和多发性硬化的方法。

Description

TREM2抗原结合蛋白及其用途
技术领域
本发明涉及生物制药领域。特定地，本发明涉及特异性结合并活化骨髓细胞上表达的人类触发受体-2(TREM2)的抗原结合蛋白，例如抗体；包含这些抗原结合蛋白的药物组合物；以及制备和使用此类抗原结合蛋白的方法。
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背景技术
TREM2是在包括巨噬细胞、树突状细胞和小胶质细胞在内的髓系细胞上表达的Ig受体超家族的成员(Schmid等人，Journal of Neurochemistry[神经化学杂志]，第83卷：1309-1320,2002；Colonna,Nature Reviews Immunology[自然免疫学综述]，第3卷：445-453,2003；Kiialainen等人，Neurobiology of Disease[疾病神经生物学]，第18卷：314-322,2005)。TREM2是具有短细胞内结构域的孤儿免疫受体，且通过经衔接体蛋白质DAP12中包含ITAM基序的胞质结构域信号传导起作用(Bouchon等人，The Journal ofExperimental Medicine[实验性医学学报]，第194卷：1111-1122,2001)。在TREM2活化后，在DAP12中的ITAM基序内的酪氨酸残基经Src家族激酶磷酸化，由此经由其SH2结构域为酪氨酸激酶ζ-链相关蛋白70(ZAP70)和脾酪氨酸激酶(Syk)提供对接位点(Colonna,NatureReviews Immunology[自然免疫学综述]，第3卷：445-453,2003；Ulrich和Holtzman,ACSChem.Neurosci.[ACS化学神经科学]，第7卷：420-427,2016)。ZAP70和Syk激酶诱导若干下游信号传导级联，包括磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶C(PKC)、细胞外调控激酶(ERK)的活化和细胞内钙增多(Colonna,Nature Reviews Immunology[自然免疫学综述]，第3卷：445-453,2003；Ulrich和Holtzman,ACS Chem.Neurosci.[ACS化学神经科学]，第7卷：420-427,2016)。
TREM2涉及若干骨髓细胞过程，包括吞噬作用、增殖、存活和炎性细胞因子产生的调控(Ulrich和Holtzman,ACS Chem.Neurosci.[ACS化学神经科学]，第7卷：420-427,2016)。在过去数年里，TREM2已经与若干疾病相关联。例如，TREM2和DAP12二者的突变与常染色体隐性障碍纳哈氏病(Nasu-Hakola disease)相关，该疾病是以骨囊肿、肌肉消耗和脱髓鞘表型为特征(Guerreiro等人，New England Journal of Medicine[新英格兰医学杂志]，第368卷：117-127,2013)。近来，TREM2基因的变体与患阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)和包括额颞叶痴呆在内的其他形式的痴呆的风险增加有关(Jonsson等人，NewEngland Journal of Medicine[新英格兰医学杂志]，第368卷：107-116,2013；Guerreiro等人，JAMANeurology[JAMA神经病学]，第70卷：78-84,2013；Jay等人，Journal ofExperimental Medicine[实验性医学学报]，第212卷：287-295,2015)。特定地，在全基因组研究中鉴别出R47H变体与晚发性AD的风险增加有关且总量调整的机率比(对于所有年龄段的群体)为2.3，仅次于ApoE与阿尔茨海默病的较强基因相关性。R47H突变存在于TREM2蛋白质的细胞外Ig V组结构域上，并且已显示该突变影响凋亡细胞和Aβ的脂质结合和吸收(Wang等人，Cell[细胞]，第160卷：1061-1071,2015；Yeh等人，Neuron[神经元]，第91卷：328-340,2016)，提示疾病相关功能丧失。此外，存在与不存在R47H突变的AD患者脑的死后比较支持突变携带者的新颖小胶质细胞屏障功能损失，且据推测，R47H携带者小胶质细胞展示压紧斑块且限制其扩散的能力减退(Yuan等人，Neuron[神经元]，第90卷：724-739,2016)。在朊病毒病(prion disease)、多发性硬化和中风的动物模型中有报导小胶质细胞增生的减少，表明TREM2可能在支持小胶质细胞响应于中枢神经系统的病变或损伤而增生方面起到重要作用(Ulrich和Holtzman,ACS Chem.Neurosci.[ACS化学神经科学]，第7卷：420-427,2016)。
鉴于数据指示TREM2活性缺乏会影响巨噬细胞和小胶质细胞功能且与某些神经退行性障碍相关，所以本领域中需要可以诱导或增强TREM2介导的功能的治疗性分子。
发明内容
本发明部分基于设计和产生特异性结合并活化人类TREM2的抗原结合蛋白(例如抗体)，无需额外交联。本发明的激动剂抗原结合蛋白能够在不存在聚集、群集和/或Fc介导的抗原结合蛋白交联的情况下活化骨髓细胞中的TREM2/DAP12信号传导。因此，在某些实施例中，本发明提供特异性结合至人类TREM2且诱导或活化一种或多种TREM2介导的功能的经分离的激动剂抗原结合蛋白。
在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下增加表达TREM2的细胞中的磷酸化Syk(pSyk)含量。这些细胞可以为髓系细胞，包括单核细胞、树突状细胞、小胶质细胞和巨噬细胞。在某些实施例中，如通过基于细胞的pSyk测定所测量，TREM2激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下，以小于500pM的EC50增加TREM2表达细胞中的pSyk含量。在其他实施例中，如通过基于细胞的pSyk测定所测量，TREM2激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下，以小于300pM的EC50增加TREM2表达细胞中的pSyk含量。在又其他实施例中，如通过基于细胞的pSyk测定所测量，TREM2激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下，以约150pM至约500pM的EC50增加TREM2表达细胞中的pSyk含量。
TREM2激动剂抗原结合蛋白例如以小于50nM、小于25nM、小于10nM或小于5nM的平衡解离常数(KD)特异性结合至人类TREM2(SEQ ID NO:1)或人类TREM2的细胞外结构域(ECD)(例如SEQ ID NO:2中所列的ECD组)。在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白不与其他TREM蛋白，例如人类TREM1交叉反应。因此，在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白不特异性结合至人类TREM1(SEQ ID NO:4)。
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可以与本文所描述的抗TREM2抗体(例如表1A、1B、2A、2B、3A和3B中所列抗体)中的任一种竞争结合至人类TREM2。在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含SEQID NO:61的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:124的序列的重链可变区。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含SEQID NO:62的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:125的序列的重链可变区。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含SEQID NO:52的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:115的序列的重链可变区。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含SEQID NO:56的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:119的序列的重链可变区。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包括含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，以及含互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区。轻链可变区和重链可变区或CDR可以来自本文所描述的抗TREM2抗体中的任一种或其变体。例如，在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含选自SEQ ID NO:5-18或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRL1；含选自SEQ ID NO:19-30或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRL2；含选自SEQ ID NO:31-45或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRL3；含选自SEQ ID NO:77-86或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRH1；含选自SEQ ID NO:87-94或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRH2；和含选自SEQ IDNO:95-109或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRH3。
在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含选自SEQ ID NO:46-63的序列的轻链可变区，和含选自SEQ ID NO:110-126的序列的重链可变区。在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:54的序列的轻链可变区，和含SEQ ID NO:117的序列的重链可变区。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:55的序列的轻链可变区，和含SEQ ID NO:118的序列的重链可变区。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:60的序列的轻链可变区，和含SEQ ID NO:123的序列的重链可变区。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:61的序列的轻链可变区，和含SEQ ID NO:124的序列的重链可变区。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区，和含SEQ ID NO:125的序列的重链可变区。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:52的序列的轻链可变区，和含SEQ ID NO:115的序列的重链可变区。
在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来源于本文所描述的抗TREM2抗体中的任一种的轻链可变区的轻链可变区。因此，在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白的轻链可变区包含与选自SEQ ID NO:46-63的序列至少90％一致、至少91％一致、至少92％一致、至少93％一致、至少94％一致或至少95％一致的序列。例如，TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含来自表13-18中所列的经工程化的抗TREM2抗体变体中的任一种的轻链可变区。在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:54的序列且在一个或多个氨基酸位置64、79、80、85、94和/或100处具有突变的轻链可变区。在一些此类实施例中，该突变是V64G、V64A、Q79E、Q79D、S80P、S80A、F85V、F85L、F85A、F85D、F85I、F85L、F85M、F85T、W94F、W94Y、W94S、W94T、W94A、W94H、W94I、W94Q、P100R、P100Q、P100G或其组合。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:55的序列且在一个或多个氨基酸位置64、79、80、94和/或100处具有突变的轻链可变区。此类突变可包括V64G、V64A、Q79E、Q79D、S80P、S80A、W94F、W94Y、W94S、W94T、W94A、W94H、W94I、W94Q、P100R、P100Q、P100G或其组合。在某些实施例中，该突变是V64G、V64A、Q79E、S80P、S80A、W94Y、W94S、P100R、P100Q或其组合。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:60的序列且在一个或多个氨基酸位置60、92和/或93处具有突变的轻链可变区。在此类实施例中，该突变可以选自L60S、L60P、L60D、L60A、D92E、D92Q、D92T、D92N、S93A、S93N、S93Q、S93V或其组合。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:61的序列且在一个或多个氨基酸位置56、57、92和/或93处具有突变的轻链可变区。在此类实施例中，该突变可以为N56S、N56T、N56Q、N56E、G57A、G57V、D92E、D92Q、D92T、D92N、S93A、S93N、S93Q、S93V或其组合。在某些实施例中，该突变是N56S、N56Q、G57A、D92E、D92Q、S93A或其组合。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:62的序列且在一个或多个氨基酸位置36、46、61和/或100处具有突变的轻链可变区。此类突变可包括F36Y、S46L、S46R、S46V、S46F、K61R、P100Q、P100G、P100R或其组合。在特定实施例中，该突变是F36Y、K61R、P100Q或其组合。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:52的序列且在氨基酸位置91处具有突变的轻链可变区，该突变可以选自F91V、F91I、F91T、F91L或F91D。在一个实施例中，该突变是F91V。
在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来源于本文所描述的抗TREM2抗体中的任一种的重链可变区的重链可变区。因此，在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白的重链可变区包含与选自SEQ ID NO:110-126的序列至少90％一致、至少91％一致、至少92％一致、至少93％一致、至少94％一致或至少95％一致的序列。例如，TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含来自表13-18中所列的经工程化的抗TREM2抗体变体中的任一种的重链可变区。在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:117的序列且在一个或多个氨基酸位置19、55、56、57、58和/或104处具有突变的重链可变区。在一些此类实施例中，该突变是M19K、M19R、M19T、M19E、M19N、M19Q、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、W104F、W104Y、W104T、W104S、W104A、W104H、W104I、W104Q或其组合。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:118的序列且在一个或多个氨基酸位置19、55、56、57、58和/或104处具有突变的重链可变区。此类突变可包括M19K、M19R、M19T、M19E、M19N、M19Q、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、W104F、W104Y、W104T、W104S、W104A、W104H、W104I、W104Q或其组合。在某些实施例中，该突变是M19K、D55E、S56A、D57E、T58A、W104Y、W104T或其组合。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:123的序列且在一个或多个氨基酸位置27、55、56、57、58、105和/或106处具有突变的重链可变区。在一些实施例中，该突变选自H27Y、H27D、H27F、H27N、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、D105E、D105Q、D105T、D105N、D105G、S106A、S106Q、S106V、S106T或其组合。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:124的序列且在一个或多个氨基酸位置55、56、57、58、105和/或106处具有突变的重链可变区。在此类实施例中，该突变可以选自D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、D105E、D105Q、D105T、D105N、D105G、S106A、S106Q、S106V、S106T或其组合。在某些实施例中，该突变是D55E、D55Q、S56A、D57E、T58A、D105E、D105N、S106A或其组合。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:125的序列且在一个或多个氨基酸位置43、76、85、99、100和/或116处具有突变的重链可变区。此类突变可包括L43Q、L43K、L43H、I76T、R85S、R85G、R85N、R85D、D99E、D99Q、D99S、D99T、G100A、G100Y、G100V、T116L、T116M、T116P、T116R或其组合。在某些实施例中，该突变是L43Q、R85S、D99E、G100A、G100Y、T116L或其组合。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:115的序列且在氨基酸位置62和/或63处具有突变的重链可变区。在此类实施例中，该突变可以选自D62E、D62Q、D62T、D62N、S63A、S63Q、S63V或其组合。在一些实施例中，该突变是D62E、D62Q、S63A或其组合。
在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含本文所描述的抗TREM2抗体的变体的一个或多个CDR。例如，TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含表2A、2B、3A、3B和19中所列的抗TREM2抗体变体的一个或多个CDR。在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含结合亲和力改善的抗TREM2抗体变体的一个或多个CDR。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:16的序列的CDRL1；含CDRL2共有序列的CDRL2；含CDRL3共有序列的CDRL3；含SEQ ID NO:85的序列的CDRH1；含CDRH2共有序列的CDRH2；和含CDRH3共有序列的CDRH3。在一个实施例中，CDRL2共有序列是X1ASSX2QX3(SEQ ID NO:139)，其中X1是A或G；X2是L或R；且X3是N、K、R、L或T。在相关实施例中，CDRL3共有序列是X1QADX2X3PX4T(SEQID NO:140)，其中X1是Q或G；X2是S或R；X3是F、L或Y；且X4是R或H。在这些和其他实施例中，CDRH2共有序列是X1IYPGDSDX2RX3X4PX5FQX6(SEQ ID NO:141)，其中X1是I或T；X2是T或V；X3是Y或L；X4是S或A；X5是S、G或E；且X6是G或D。CDRH3共有序列可以为X1RTFYYDSSDYX2DY(SEQ IDNO:142)，其中X1是Q、G、S或M；且X2是F或S。在其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的CDRL2可包含选自SEQ ID NO:26和143-147的序列。在又其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的CDRL3可包含选自SEQ ID NO:43和148-152的序列。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的CDRH2可包含选自SEQ ID NO:91和170-175的序列。在其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的CDRH3可包含选自SEQ IDNO:176-179的序列。
在其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含结合亲和力降低的抗TREM2抗体变体的一个或多个CDR。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1共有序列的CDRL1；含CDRL2共有序列的CDRL2；含CDRL3共有序列的CDRL3；含CDRH1共有序列的CDRH1；含CDRH2共有序列的CDRH2；和含CDRH3共有序列的CDRH3。在一个实施例中，CDRL1共有序列是X1ASQGISX2WLA(SEQ ID NO:284)，其中X1是R或A；且X2是S或R。在相关实施例中，CDRL2共有序列是X1AX2SLQN(SEQ ID NO:285)，其中X1是A或S；且X2是S或G。在其他相关实施例中，CDRL3共有序列是QQAX1SFPX2T(SEQ ID NO:286)，其中X1是D或V；且X2是R或L。在这些和其他实施例中，CDRH1共有序列是SX1WIA(SEQ ID NO:287)，其中X1是Y或E。在相关实施例中，CDRH2共有序列是IIYPX1DSDTRYSPSFQG(SEQ ID NO:288)，其中X1是G或S。CDRH3共有序列可以为QRX1FX2X3DSSDYFDY(SEQ ID NO:289)，其中X1是T或G；X2是Y或R；且X3是Y或G。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的CDRL1可包含选自SEQ ID NO:16、290和291的序列。在其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的CDRL2可包含选自SEQID NO:28、292和293的序列。在又其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的CDRL3可包含选自SEQ ID NO:43、294和271的序列。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的CDRH1可包含SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:302的序列。在其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的CDRH2可包含SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:303的序列。在又其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的CDRH3可包含选自SEQ ID NO:107和304-306的序列。
在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自表2A、2B、3A、3B和19中所列的抗TREM2变体抗体中的任一种的轻链可变区和/或重链可变区。因此，在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白的轻链可变区包含与选自SEQ ID NO:61、153-162和295-300的序列至少90％一致、至少91％一致、至少92％一致、至少93％一致、至少94％一致或至少95％一致的序列。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白的重链可变区包含与选自SEQ ID NO:124、180-190和307-312的序列至少90％一致、至少91％一致、至少92％一致、至少93％一致、至少94％一致或至少95％一致的序列。
在包括上述实施例在内的本文所描述的实施例中的任一个中，TREM2激动剂抗原结合蛋白是抗体或其结合片段，优选为单克隆抗体或其结合片段。在一些实施例中，该单克隆抗体或其结合片段是嵌合抗体或其结合片段。在其他实施例中，该单克隆抗体或其结合片段是人源化抗体或其结合片段。在又其他实施例中，该单克隆抗体或其结合片段是完全人类抗体或其结合片段。该单克隆抗体可以属于任何同种型，例如人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一个特定实施例中，该单克隆抗体是人类IgG1抗体。在另一特定实施例中，该单克隆抗体是人类IgG2抗体。
在TREM2激动剂抗原结合蛋白是抗体(例如单克隆抗体)的某些实施例中，该抗体可以含有一个或多个影响该抗体的糖基化的修饰。在一些实施例中，该抗体包含一个或多个减少或消除糖基化的突变。在此类实施例中，无糖基化抗体可在其重链中氨基酸位置N297(根据EU编号方案)处包含突变，例如N297G突变。无糖基化抗体可包含用于使抗体结构稳定的其他突变。此类突变可包括数对半胱氨酸取代，例如A287C与L306C、V259C与L306C、R292C与V302C以及V323C与I332C(氨基酸位置是根据EU编号方案)。在一个实施例中，无糖基化抗体在其重链中包含R292C和V302C突变(根据EU编号方案)。在某些实施例中，无糖基化抗TREM2激动剂抗体包括含氨基酸序列SEQ ID NO:202或SEQ ID NO:203的氨基酸序列的重链恒定区。
在TREM2激动剂抗原结合蛋白是人类IgG2抗体(例如单克隆抗体)或包含来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区的其他实施例中，该抗体可以含有一个或多个影响该抗体的铰链结构的修饰。在一个此类实施例中，抗TREM2激动剂抗体在其重链中包含C131S突变(根据EU编号方案)。在另一实施例中，抗TREM2激动剂抗体在其轻链中包含C214S突变(根据EU编号方案)和在其重链中包含C219S突变(根据EU编号方案)。在另一实施例中，抗TREM2激动剂抗体在其轻链中包含C214S突变(根据EU编号方案)和在其重链中包含C220S突变(根据EU编号方案)。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区(例如SEQ ID NO:207的氨基酸)和来自人类IgG1抗体的Fc区。在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区(例如SEQ ID NO:207的氨基酸序列)和来自人类IgG1抗体的Fc区，其中该Fc区包含SEQ ID NO:281的氨基酸序列。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含轻链可变区的轻链和含重链可变区的重链，其中：(a)轻链可变区具有SEQ ID NO:326的氨基酸序列，且重链可变区具有SEQ ID NO:327的氨基酸序列；(b)轻链可变区具有SEQ ID NO:328的氨基酸序列，且重链可变区具有SEQ ID NO:329的氨基酸序列；(c)轻链可变区具有SEQ ID NO:330的氨基酸序列，且重链可变区具有SEQ ID NO:331的氨基酸序列；或(d)轻链可变区具有SEQ IDNO:332的氨基酸序列，且重链可变区具有SEQ ID NO:333的氨基酸序列。在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链和重链，其中：(a)该轻链具有SEQ ID NO:334的氨基酸序列且该重链具有SEQ ID NO:335的氨基酸序列；(b)该轻链具有SEQ ID NO:334的氨基酸序列且该重链具有SEQ ID NO:336的氨基酸序列；(c)该轻链具有SEQ ID NO:337的氨基酸序列且该重链具有SEQ ID NO:338的氨基酸序列；(d)该轻链具有SEQ ID NO:339的氨基酸序列且该重链具有SEQ ID NO:340的氨基酸序列；或(e)轻链具有SEQ ID NO:341的氨基酸序列，且重链具有SEQ ID NO:342的氨基酸序列。
本发明还提供编码本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白的多核苷酸和表达载体，以及包含编码多核苷酸和表达载体的宿主细胞，例如CHO细胞。在某些实施例中，本发明包括用于制备TREM2激动剂抗原结合蛋白(包括抗TREM2激动剂单克隆抗体及其结合片段)的方法。在一个实施例中，该方法包括在允许该抗原结合蛋白表达的条件下，培养包含编码该抗原结合蛋白的表达载体的宿主细胞，和自培养基或宿主细胞回收该抗原结合蛋白。
本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白可以用于制造供治疗或预防与TREM2缺乏或TREM2生物活性丧失相关的病症，例如阿尔茨海默病、纳哈氏病、额颞叶痴呆、多发性硬化、朊病毒病或中风用的药物组合物或药物。因此，本发明还提供一种药物组合物，其包含本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白和药学上可接受的赋形剂。
在某些实施例中，本发明提供用于治疗、预防有需要的患者的与TREM2缺乏或TREM2生物活性丧失相关的病症，或降低其风险的方法。在一个实施例中，该方法包括向该患者施用有效量的本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白中的任一种。在一些实施例中，待治疗、预防或改善的病症是阿尔茨海默病。在其他实施例中，待治疗、预防或改善的病症是多发性硬化。需要治疗的患者可以经确定具有一种或多种与发展可以根据本发明方法治疗的疾病或病症的风险增加相关的基因型。例如，在一些实施例中，该患者具有与发展阿尔茨海默病的风险增加相关的基因型，例如本文所描述的基因型。在其他实施例中，该患者可以确定携带编码与发展阿尔茨海默病的风险增加相关的TREM2变体的等位基因。此类变体可包括R47H TREM2变体和R62H TREM2变体。
本发明还包括增加有需要的患者的骨髓细胞，例如巨噬细胞、小胶质细胞和树突状细胞的存活或增殖的方法。在一个实施例中，该方法包括向该患者施用有效量的本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白中的任一种。在一些实施例中，需要治疗的患者有患有神经退行性障碍，例如阿尔茨海默病的风险，或已诊断患有神经退行性障碍。在其他实施例中，需要治疗的患者有患有自身免疫性障碍，例如多发性硬化的风险，或已诊断患有自身免疫性障碍。
附图说明
图1A描绘自收集物1纯化的单克隆人类抗TREM2抗体的激动剂活性的剂量-反应曲线。绘制表达人类TREM2/DAP12的HEK293T细胞中磷酸化Syk(pSyk)含量的增加倍数随人类抗TREM2抗体的浓度变化的图。包括可商购的大鼠抗人类/小鼠TREM2抗体(mAb17291；“R&DmAb”或“抗体1”)的激动剂活性作为比较。使用人类IgG2和大鼠IgG2b同种型抗体作为对照。
图1B描绘来自收集物3、4和5的杂交瘤上清液的未纯化的单克隆人类抗TREM2抗体的激动剂活性的剂量-反应曲线。绘制表达人类TREM2/DAP12的HEK293T细胞中pSyk含量的增加倍数随人类抗TREM2抗体的浓度变化的图。使用人类IgG2同种型抗体作为对照。
图2A和2B是示例性抗TREM2抗体的κ轻链可变区与原始种系序列的序列比对。图2B是图2A中序列的接续。
图3A和3B是示例性抗TREM2抗体的λ轻链可变区与原始种系序列的序列比对。图3B是图3A中序列的接续。
图4A和4B是示例性抗TREM2抗体的重链可变区与原始种系序列的序列比对。图4B是图4A中序列的接续。
图5是在虚线指示的时间(“第1次Ab捕捉”)，结合信号随装载有6E7抗体的抗人类Fc动力学传感器(
Figure BDA0002295171410000121
HTX仪器；佛特比奥公司(Pall ForteBio))的时间变化的曲线。第一条实线表示不相关的人类IgG2抗体添加至传感器以减少非特异性结合事件(“传感器用G2阻断”)的时间。第二条实线表示靶抗原(可溶性人类TREM2)添加至传感器以与捕捉的6E7抗体相互作用的时间。最后一条实线指示夹心抗体(5E3、6E7或对照IgG2抗体)添加至传感器的时间。当添加5E3抗体时观察到结合增加，表明5E3抗体结合至人类TREM2上与6E7抗体所结合的表位不同的表位。
图6描绘在分化的THP-1细胞中单克隆人类抗TREM2抗体(4C5、4G10、5E3、6E7、10E3、13E7、24G6、16B8、25F12、26F2、32E3和33B12)的激动剂活性的剂量-反应曲线。绘制磷酸化Syk(pSyk)含量相对于基线的增加倍数随人类抗TREM2抗体的浓度变化的图。使用人类IgG2(HuIgG)和大鼠IgG2b(RtIgG)同种型抗体作为对照。包括可商购的大鼠抗人类/小鼠TREM2抗体(mAb17291；“RnD”)的激动剂活性作为比较。
图7描绘呈IgG2(“G2”)、IgG1(“G1”)或无糖基化IgG1(“SEFL2”)形式的纯化的6E7和5E3人类抗TREM2抗体的激动剂活性的剂量-反应曲线。绘制表达人类TREM2/DAP12的HEK293T细胞中磷酸化Syk(pSyk)含量相对于相应同种型对照的增加倍数随人类抗TREM2抗体的浓度变化的图。来自IgG2同种型的6E7和5E3抗体向IgG1同种型的转化引起激动剂活性的部分损失。
图8A是在限制CSF-1的条件下培养的不同时间，来源于野生型(TREM+/+)和TREM2-/-小鼠的骨髓源性巨噬细胞(BMDM)的数量的柱形图。TREM2-/-BMDM展现在这些培养条件中的存活缺陷。
图8B是在限制CSF-1的条件下培养的不同时间点，来源于野生型(TREM+/+)和TREM2-/-小鼠的成年小鼠小胶质细胞的细胞汇合百分比的柱形图。TREM2-/-成年小鼠小胶质细胞展现在这些培养条件中的存活缺陷。
图8C是在限制CSF-1的条件下培养的不同时间点，来源于野生型(TREM+/+)和TREM2-/-小鼠的新生小鼠小胶质细胞的细胞汇合百分比的柱形图。新生TREM2-/-小胶质细胞随时间展现存活缺陷。
图8D是在限制CSF-1的条件下培养的不同时间，来源于野生型(TREM+/+)和TREM2R47H小鼠的BMDM的数量的柱形图。TREM2R47H小鼠BMDM展现在这些培养条件中的存活缺陷。
图8E是在限制CSF-1的条件下培养的不同时间点，来源于野生型(TREM+/+)和TREM2R47H小鼠的成年小鼠小胶质细胞的细胞汇合百分比的柱形图。TREM2R47H小鼠小胶质细胞展现在这些培养条件中的存活缺陷。
图8F是在限制CSF-1的条件下培养的不同时间点，来源于野生型(TREM+/+)和TREM2R47H小鼠的新生小鼠小胶质细胞的细胞汇合百分比的柱形图。新生TREM2R47H小胶质细胞展现随时间增加的存活缺陷。
图9A是用抗TREM2抗体或同种型对照处理的TREM2R47H和野生型(TREM+/+)BMDM的细胞溶解产物的蛋白质印迹。如由pSyk含量增加所指示，抗TREM2抗体使两种类型的巨噬细胞中TREM2/DAP12的信号传导活化。
图9B是用抗TREM2抗体或同种型对照处理的TREM2-/-和野生型(TREM+/+)BMDM的细胞溶解产物的蛋白质印迹。抗TREM2抗体不增加TREM2-/-BMDM中的pSyk含量，由此证实该效应是TREM2特异性的。
图10A是描绘如通过实时细胞汇合测定所测量的用同种型对照抗体或抗TREM2激动剂抗体处理的TREM2R47H BMDM随时间变化的细胞汇合百分比的图。数据绘制为平均值+/-s.d.且来自单一代表性实验。该实验独立进行两次(n＝2且一式三份测定)。
图10B是描绘如通过实时细胞汇合测定所测量的用同种型对照抗体或抗TREM2激动剂抗体处理的野生型(TREM2+/+)BMDM随时间变化的细胞汇合百分比的图。数据绘制为平均值+/-s.d.且来自单一代表性实验。该实验独立进行两次(n＝2且一式三份测定)。
图10C是描绘如通过CellTiter Glo ATP检测测定所测量的用媒剂、同种型对照或抗TREM2激动剂抗体处理14天的TREM2R47H和TREM2+/-BMDM的细胞活力的柱形图。
图10D是描绘在特定培养时间，用同种型对照抗体或抗TREM2激动剂抗体处理的TREM2R47H成年小鼠小胶质细胞的细胞汇合百分比的柱形图。用抗TREM2激动剂抗体处理观察到TREM2R47H小胶质细胞的存活率增加。
图10E是描绘如通过实时细胞汇合测定所测量的自用同种型对照抗体或本发明的抗TREM2激动剂抗体(下文称为“抗体2”)处理的一定年龄(18月龄)野生型(TREM2+/+)小鼠(n＝3只动物)收集的BMDM随时间变化的细胞汇合百分比的图。数据绘制为平均值+/-s.d.且来自单一代表性实验。****p<.0001，利用双因素ANOVA加Sidak校正进行多重比较。图10F是描绘如通过实时细胞汇合测定所测量的自用同种型对照抗体或抗TREM2激动剂抗体(抗体2)处理的一定年龄(18月龄)TREM2R47H小鼠(n＝3只动物，例外是在基因敲除实验中为野生型年龄相配的同窝仔畜对照第6天的样品)收集的BMDM随时间变化的细胞汇合百分比的图。数据绘制为平均值+/-s.d.且来自单一代表性实验。****p<.0001，利用双因素ANOVA加Sidak校正进行多重比较。用抗TREM2激动剂抗体处理观察到野生型和TREM2R47H巨噬细胞的存活率增加。
图11A是描绘如通过实时细胞汇合测定所测量的用同种型对照抗体或抗TREM2激动剂抗体(抗体1)处理的野生型(TREM2+/+)BMDM在迁移测定中的培养区室中随时间变化的细胞汇合百分比的图。抗TREM2激动剂抗体在此测定中对野生型BMDM的迁移具有极小影响。
图11B是描绘如通过实时细胞汇合测定所测量的用同种型对照抗体或抗TREM2激动剂抗体(抗体1)处理的TREM2R47H BMDM在迁移测定中的培养区室中随时间变化的细胞汇合百分比的图。抗TREM2激动剂抗体在此测定中引起TREM2R47H BMDM的较小但统计学显著的迁移减少。
图11C是描绘如通过实时细胞汇合测定所测量的用同种型对照抗体或抗TREM2激动剂抗体(抗体1)处理的TREM2-/-BMDM在迁移测定中的培养区室中随时间变化的细胞汇合百分比的图。抗TREM2激动剂抗体在此测定中对TREM2-/-BMDM的迁移无影响。
图11D和图11E是描绘如通过实时细胞汇合测定所测量的分别用同种型对照抗体或抗TREM2激动剂抗体(抗体2)处理的野生型(TREM2+/+)和TREM2R47H BMDM在迁移测定中的培养区室中随时间变化的细胞汇合百分比的图。抗TREM2激动剂抗体处理在此测定中对野生型和TREM2R47H BMDM的迁移无影响。
图12A显示如通过qPCR所测量，在第5天和第6天时野生型(TREM2+/+)、TREM2R47H和TREM2-/-巨噬细胞中CDC20转录物的调控差异。
图12B显示如通过qPCR所测量，在第5天和第6天时野生型(TREM2+/+)、TREM2R47H和TREM2-/-巨噬细胞中PKB转录物的调控差异。
图12C显示如通过qPCR所测量，在第5天和第6天时野生型(TREM2+/+)、TREM2R47H和TREM2-/-巨噬细胞中NDC80转录物的调控差异。
图12D显示如通过qPCR所测量，在第5天和第6天时野生型(TREM2+/+)、TREM2R47H和TREM2-/-巨噬细胞中CCR2转录物的调控差异。
图13A描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、杂合(TREM2+/-)和基因敲除(TREM2-/-)的巨噬细胞中ApoE转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13B描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、R47H杂合(TREM2R47H/+)和R47H纯合(TREM2R47H)的巨噬细胞中ApoE转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13C描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、杂合(TREM2+/-)和基因敲除(TREM2-/-)的巨噬细胞中IL-1a转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13D描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、R47H杂合(TREM2R47H/+)和R47H纯合(TREM2R47H)的巨噬细胞中IL-1a转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13E描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、杂合(TREM2+/-)和基因敲除(TREM2-/-)的巨噬细胞中CX3CR1转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13F描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、R47H杂合(TREM2R47H/+)和R47H纯合(TREM2R47H)的巨噬细胞中CX3CR1转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13G描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、杂合(TREM2+/-)和基因敲除(TREM2-/-)的巨噬细胞中FLT1转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13H描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、R47H杂合(TREM2R47H/+)和R47H纯合(TREM2R47H)的巨噬细胞中FLT1转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13I和13J描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、R47H杂合(TREM2R47H+/-)和R47H纯合(TREM2R47H)的巨噬细胞中C1qa转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13K和13L描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、R47H杂合(TREM2R47H+/-和TREM2+/-)和R47H纯合(TREM2R47H和TREM2-/-)的巨噬细胞中Ccl5转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13M和13N描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、R47H杂合(TREM2R47H+/-和TREM2+/-)和R47H纯合(TREM2R47H和TREM2-/-)的巨噬细胞中Ccl22转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图13O和13P描绘如通过qPCR所测量，在培养的不同时间点时野生型(TREM2+/+)、R47H杂合(TREM2R47H+/-和TREM2+/-)和R47H纯合(TREM2R47H和TREM2-/-)的巨噬细胞中C3转录物的调控差异。所有基因表达水平均针对培养第4天的野生型对照巨噬细胞归一化。
图14A是描绘如通过实时细胞汇合测定所测量的野生型(TREM2+/+)和基因敲除(TREM2-/-)BMDM在迁移测定中的培养区室中随时间变化的细胞汇合百分比的图。相较于野生型巨噬细胞，TREM2基因敲除的巨噬细胞在此体外测定中展现迁移缺陷。
图14B是描绘如通过实时细胞汇合测定所测量的野生型(TREM2+/+)和TREM2R47HBMDM在迁移测定中的培养区室中随时间变化的细胞汇合百分比的图。相较于野生型巨噬细胞，TREM2R47H巨噬细胞在此体外测定中展现迁移缺陷。
图15A显示如通过ELISA所测量，来自TREM2R47H和TREM2-/-巨噬细胞的分泌型CCL2蛋白相较于野生型(TREM2+/+)巨噬细胞减少。
图15B描绘如通过ELISA所测量的用抗TREM2激动剂抗体或同种型对照处理的TREM2R47H和野生型TREM2+/+巨噬细胞中分泌型CCL2蛋白的含量。抗TREM2激动剂抗体处理使TREM2R47H巨噬细胞中的分泌型CCL2蛋白含量恢复。
图16A显示在TREM2R47H巨噬细胞中经抗TREM2激动剂抗体处理调控的基因的路径分析结果。受调节的基因包括参与骨髓细胞迁移、增殖、细胞周期和存活调控的基因。
图16B显示比较在限制CSF-1条件下第7天时野生型(TREM2+/+)、基因敲除(TREM2-/-)和TREM2R47H巨噬细胞的RNA-Seq分析。路径分析(WGCNA)鉴别出基因敲除和TREM2R47H巨噬细胞相较于野生型存在调控差异的5个模块/基因网络。结果表明TREM2在细胞周期/增殖和存活、免疫反应和迁移以及脂质与胆固醇稳态中的作用。
图16C显示如通过qPCR所测量的在用抗TREM2激动剂抗体(抗体1)或同种型对照处理的野生型(TREM2+/+)和TREM2R47H巨噬细胞中UBE2C、MELK和MMP14转录物的调控差异。数据显示，在R47H巨噬细胞中MMP14酶的表达上调，而UBE2C和MELK酶的表达下调，但这些变化可以用抗TREM2激动剂抗体处理来恢复。
图17显示，抗体处理使WT和R47H KI小胶质细胞、单独WT小胶质细胞和单独R47HKI小胶质细胞(A、B和C)中稳态的小胶质细胞基因(P2ry12、Tmem119)的表达增加。抗体处理还减少促炎性趋化因子和细胞因子例如Ccl3、Ccl4、Ccl5、Il12b(D、E和F)的表达。所有统计均是Wilcoxon秩评分。表示为ln(计数+1)。
图18显示，小胶质细胞浸润群中骨髓和炎性基因的表达增加且稳态的小胶质细胞基因的表达略有减少(A和B)，且施用Trem2抗体使来自WT和R47H KI小鼠、单独WT小鼠和单独R47HKI小鼠(C、D和E)的浸润小胶质细胞中促炎性趋化因子和细胞因子减少。所有统计均是Wilcoxon秩评分。表示为针对umi计数调整的ln(计数+1)。
具体实施方式
本发明涉及特异性结合至TREM2，特别是人类TREM2的经分离的抗原结合蛋白。在人类中，TREM2基因位于染色体6p21.1处的TREM基因簇上。TREM基因簇编码四种TREM蛋白(TREM1、TREM2、TREM4和TREM5)以及两种TREM样蛋白(TLT-1和TLT-2)。TREM2基因编码有230个氨基酸的蛋白质，该蛋白质由细胞外结构域、跨膜区和短细胞质尾组成(Paradowska-Gorycka等人，Human Immunology[人类免疫学]，第74卷：730-737,2013)。细胞外区域含有单一类型的V Ig超家族结构域，具有三个潜在N-糖基化位点。野生型人类TREM2氨基酸序列(NCBI参考序列：NP_061838.1)以SEQ ID NO:1提供于下。
Figure BDA0002295171410000181
野生型人类TREM2蛋白质(SEQ ID NO:1)的氨基酸1至18是信号肽，该信号肽一般自成熟蛋白质中移除。成熟人类TREM2蛋白质包含在SEQ ID NO:1的氨基酸19-174处的细胞外结构域、在SEQ ID NO:1的氨基酸175-195处的跨膜结构域和在SEQ ID NO:1的氨基酸196-230处的胞质结构域。人类TREM2的细胞外结构域(包括信号肽)的氨基酸序列以SEQ IDNO:2提供于下。
Figure BDA0002295171410000191
术语“在骨髓细胞上表达的人类触发受体-2”或“人类TREM2”可以指SEQ ID NO:1的多肽、SEQ ID NO:2的多肽、SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2减去信号肽(氨基酸1-18)的多肽、人类TREM2的等位基因变体或人类TREM2的剪接变体。在一些实施例中，术语“人类TREM2”包括TREM2的天然存在的变体，例如突变R47H、Q33X(X是终止密码子)、Y38C、T66M、D87N、H157Y、R98W和S116C。
由于TREM2的胞质结构域缺乏信号传导能力，所以其必须与其他蛋白质相互作用来转导TREM2活化信号。一种此类蛋白质是12kDa的DNAX活化蛋白(DAP12)。DAP12又称为杀手细胞活化受体相关蛋白(KARAP)和酪氨酸激酶结合蛋白(TYROBP)。DAP12是在其胞质结构域中包含ITAM基序的I型跨膜衔接体蛋白质。ITAM基序通过ZAP70和Syk酪氨酸激酶活化来介导信号传播，而该信号传播又活化若干下游信号传导级联，包括PI3K、PKC、ERK，和细胞内钙升高(Colonna,Nature Reviews Immunology[自然免疫学综述]，第3卷：445-453,2003；Ulrich和Holtzman,ACS Chem.Neurosci.[ACS化学神经科学]，第7卷：420-427,2016)。DAP12和TREM2经由其跨膜结构域缔合；TREM2的跨膜结构域内带电的赖氨酸残基与DAP12跨膜结构域内带电的天冬氨酸残基相互作用。
人类DAP12是由位于染色体19q13.1上的TYROBP基因编码。该人类蛋白质是113个氨基酸长度且包含前导序列(SEQ ID NO:3的氨基酸1-27)、短细胞外区域(SEQ ID NO:3的氨基酸28-41)、跨膜结构域(SEQ ID NO:3的氨基酸42-65)和胞质区段(SEQ ID NO:3的氨基酸66-113)(Paradowska-Gorycka等人，Human Immunology[人类免疫学]，第74卷：730-737,2013)。DAP12经由短细胞外结构域中的两个半胱氨酸残基形成同二聚体。野生型人类DAP12氨基酸序列(NCBI参考序列：NP_003323.1)以SEQ ID NO:3提供于下。
1MGGLEPCSRLLLLPLLLAVSGLRPVQAQAQSDCSCSTVSPGVLAGIVMGDLVLTVLIALA60
61VYFLGRLVPRGRGAAEAATRKQRITETESPYQELQGQRSDVYSDLNTQRPYYK 113
术语“人类DAP12”可以指SEQ ID NO:3的多肽、不含前导肽(氨基酸1-27)的SEQ IDNO:3的多肽、人类DAP12的等位基因变体或人类DAP12的剪接变体。
在一些实施例中，本发明提供特异性结合至人类TREM2的经分离的抗原结合蛋白。如本文所使用，术语“抗原结合蛋白”是指特异性结合至一个或多个靶抗原的蛋白质。抗原结合蛋白典型地包含特异性结合至抗原的抗原结合片段，且任选地包含使该抗原结合片段呈现促进该抗原结合蛋白结合至抗原的构型的支架或构架部分。“抗原结合片段”与“结合片段”或“片段”在本文中可互换使用，指抗体中不含全长重链和/或轻链中存在的氨基酸的至少一部分，但仍能够特异性结合至抗原的部分。抗原结合片段包括但不限于，单链可变片段(scFv)、纳米抗体(例如骆驼重链抗体的VH结构域；VHH片段，参见Cortez-Retamozo等人，Cancer Research[癌症研究]，第64卷：2853-57,2004)、Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、Fd片段和互补决定区(CDR)片段，且可以来源于任何哺乳动物来源，例如人类、小鼠、大鼠、兔或骆驼。抗原结合片段可以与完整抗体竞争结合靶抗原且这些片段可以通过修饰完整抗体(例如酶或化学裂解)或使用重组DNA技术或肽合成从头合成获得。在一些实施例中，抗原结合片段包含至少一个来自结合至抗原的抗体的CDR，例如来自结合至抗原的抗体的重链CDR3。在其他实施例中，抗原结合片段包含来自结合至抗原的抗体的重链的全部三个CDR或来自结合至抗原的抗体的轻链的全部三个CDR。在又其他实施例中，抗原结合片段包含来自结合至抗原的抗体的全部六个CDR(三个来自重链且三个来自轻链)。在某些实施例中，抗原结合蛋白是抗体或其结合片段。
抗原结合蛋白还可包括含一个或多个抗原结合片段并入单一多肽链中或并入多个多肽链中的蛋白质。例如，抗原结合蛋白可包括但不限于，双链抗体(参见例如，EP 404,097；WO 93/11161和Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]，第90卷：6444-6448，1993)；内抗体；结构域抗体(单VL或VH结构域或者通过肽接头接合的两个或多个VH结构域；参见Ward等人，Nature[自然]，第341卷：544-546,1989)；大分子抗体(2个scFv与Fc区的融合物，参见Fredericks等人，Protein Engineering[蛋白质工程化],Design&Selection[设计和选择]，第17卷：95-106,2004；和Powers等人，Journal ofImmunological Methods[免疫法杂志]，第251卷：123-135,2001)；三链抗体；四链抗体；微型抗体(scFv与CH3结构域的融合物；参见Olafsen等人，Protein Eng Des Sel.[蛋白质工程设计与选择]，第17卷：315-23,2004)；肽抗体(一个或多个肽附接至Fc区，参见WO 00/24782)；线性抗体(一对串联的Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)，其与互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区，参见Zapata等人，Protein Eng.[蛋白质工程化]，第8卷：1057-1062,1995)；小模块免疫药物(small modular immunopharmaceutical)(参见美国专利公开号20030133939)；和免疫球蛋白融合蛋白(例如IgG-scFv、IgG-Fab、2scFv-IgG、4scFv-IgG、VH-IgG、IgG-VH和Fab-scFv-Fc；参见例如，Spiess等人，Mol.Immunol.[分子免疫学]，第67卷(2Pt A):95-106,2015)。
术语“经分离分子”(在该分子是例如多肽、多核苷酸、抗原结合蛋白或抗体的情况下)是这样一种分子，根据其起源或衍生来源，其(1)不与在其天然状态下伴随其的天然相关的组分相连；(2)基本上不含来自相同物种的其他分子；(3)由不同物种的细胞表达；或(4)不存在于自然界中。因此，化学合成或在与作为其天然来源的细胞不同的细胞系统中合成的分子将与其天然相关的组分“分离”。还可使用本领域中熟知的纯化技术，通过分离使分子基本上不含天然相关的组分。分子纯度或均质性可以通过本领域中熟知的多种方式测定。例如，多肽样品的纯度可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳并使用本领域中熟知的技术对该凝胶染色以显现该多肽进行测定。出于某些目的，可以使用HPLC或本领域中熟知的其他纯化方式提供更高分辨率。
在本发明的某些实施例中，抗原结合蛋白特异性结合至人类TREM2。当抗原结合蛋白在类似结合测定条件下对靶抗原的结合亲和力明显高于其对其他不相关蛋白质的亲和力且因此能够相区分时，该抗原结合蛋白“特异性结合至”该抗原。特异性结合抗原的抗原结合蛋白可具有的平衡解离常数(KD)≤1×10-6M。当KD≤1×10-8M时，该抗原结合蛋白以“高亲和力”特异性结合抗原。在一个实施例中，本发明的抗原结合蛋白以KD≤5×10-7M结合至人类TREM2。在另一实施例中，本发明的抗原结合蛋白以KD≤1×10-7M结合至人类TREM2。在又一实施例中，本发明的抗原结合蛋白以KD≤5×10-8M结合至人类TREM2。在另一实施例中，本发明的抗原结合蛋白以KD≤1×10-8M结合至人类TREM2。在某些实施例中，本发明的抗原结合蛋白以KD≤5×10-9M结合至人类TREM2。在其他实施例中，本发明的抗原结合蛋白以KD≤1×10-9M结合至人类TREM2。在某些实施例中，本发明的抗原结合蛋白以KD≤5×10-10M结合至人类TREM2。在另一特定实施例中，本发明的抗原结合蛋白以KD≤1×10-10M结合至人类TREM2。
使用多种技术，例如亲和ELISA测定确定亲和力。在各种实施例中，通过表面等离激元共振测定(例如基于
Figure BDA0002295171410000221
的测定)确定亲和力。使用此技术，可以测量出缔合速率常数(ka，以M-1s-1表示)和解离速率常数(kd，以s-1表示)。平衡解离常数(KD，以M表示)则可以由动力学速率常数的比率(kd/ka)计算。在一些实施例中，通过动力学方法，例如Rathanaswami等人，Analytical Biochemistry[分析生物化学]，第373卷：52-60,2008中所描述的动力学排除测定(KinExA)确定亲和力。使用KinExA测定，可以测量出平衡解离常数(KD，以M表示)和缔合速率常数(ka，以M-1s-1表示)。解离速率常数(kd，以s-1表示)可以由这些值计算(KD x ka)。在其他实施例中，通过生物膜层干涉法，例如Kumaraswamy等人，MethodsMol.Biol.[分子生物学方法]，第1278卷：165-82,2015中所描述且用于
Figure BDA0002295171410000222
系统(佛特比奥公司(Pall ForteBio))中的方法确定亲和力。动力学常数(ka和kd)和亲和力常数(KD)可以使用生物膜层干涉法实时计算。在一些实施例中，本文所描述的抗原结合蛋白展现所需特征，例如以约10-2、10-3、10-4、10-5、10-6s-1或更低kd(解离速率常数)度量的针对人类TREM2的结合亲合力(较低值指示较高结合亲合力)，和/或以约10-8、10-9、10-10、10-11M或更低KD(平衡解离常数)测量的针对人类TREM2的结合亲和力(较低值指示较高结合亲和力)。
在某些实施例中，如在25℃下，通过生物膜层干涉法所测量，本发明的抗原结合蛋白以约1pM至约100nM的KD特异性结合至人类TREM2。例如，在一些实施例中，如在25℃下，通过生物膜层干涉法所测量，本发明的抗原结合蛋白以小于100nM的KD特异性结合至人类TREM2。在其他实施例中，如在25℃下，通过生物膜层干涉法所测量，本发明的抗原结合蛋白以小于50nM的KD特异性结合至人类TREM2。在又其他实施例中，如在25℃下，通过生物膜层干涉法所测量，本发明的抗原结合蛋白以小于25nM的KD特异性结合至人类TREM2。在一个特定实施例中，如在25℃下，通过生物膜层干涉法所测量，本发明的抗原结合蛋白以小于10nM的KD特异性结合至人类TREM2。在另一特定实施例中，如在25℃下，通过生物膜层干涉法所测量，本发明的抗原结合蛋白以小于5nM的KD特异性结合至人类TREM2。在另一特定实施例中，如在25℃下，通过生物膜层干涉法所测量，本发明的抗原结合蛋白以小于1nM的KD特异性结合至人类TREM2。
在一些实施例中，本发明的抗原结合蛋白可以结合至人类TREM2的特定区域或表位。如本文所使用，“表位”是指能够经抗原结合蛋白，例如抗体或其片段特异性结合的任何决定子。表位是抗原中经靶向该抗原的抗原结合蛋白结合或与该抗原结合蛋白相互作用的区域，且当该抗原是蛋白质时，其包括直接接触抗原结合蛋白或与抗原结合蛋白相互作用的特定氨基酸。表位可以由因蛋白质三级折叠而并置的相邻氨基酸或不相邻氨基酸形成。“线性表位”是其中氨基酸一级序列包含识别的表位的表位。线性表位典型地在唯一序列中包括至少3或4个氨基酸，且更通常包括至少5个、至少6个或至少7个氨基酸，例如约8至约10个氨基酸。相对于线性表位，“构型表位”是一组不连续氨基酸(例如在多肽中，在多肽一级序列中不相邻但在多肽三级和四级结构情况下彼此足够接近以由抗原结合蛋白结合的氨基酸残基)。表位决定子可包括具化学活性的表面分子群，例如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，且可以具有特定三维结构特征和/或特定电荷特征。一般而言，对特定靶分子具有特异性的抗原结合蛋白将优先识别在蛋白质和/或大分子的复杂混合物中的靶抗原上的表位。在一些实施例中，抗原结合蛋白结合至人类TREM2中在人类TREM2细胞外结构域SEQ IDNO:2内的表位。在相关实施例中，抗原结合蛋白结合至人类TREM2中在SEQ ID NO:1的氨基酸19-174内的表位。在某些实施例中，抗原结合蛋白结合至人类TREM2中在SEQ ID NO:1的氨基酸23-128内的表位。
在某些实施例中，本发明的抗原结合蛋白不特异性结合至人类TREM1。与TREM2相同，TREM1是在骨髓细胞上表达的跨膜糖蛋白且经由DAP12传导信号。TREM1信号传导的活化引起炎性事件，例如促炎性细胞因子产生、中性粒细胞脱粒和吞噬作用(Arts等人，Journalof Leukocyte Biology[白细胞生物学杂志]，第93卷：209-215,2013)。如上文所论述，TREM1是由TREM1基因编码，该基因与TREM2基因一起位于染色体6p21.1处的TREM基因簇上。野生型人类TREM1氨基酸序列(NCBI参考序列：NP_061113.1)以SEQ ID NO:4提供于下。
Figure BDA0002295171410000241
术语“人类TREM1”可以指SEQ ID NO:4的多肽、不含前导肽(氨基酸1-20)的SEQ IDNO:4的多肽、人类TREM1的等位基因变体或人类TREM1的剪接变体。若本发明的抗原结合蛋白对于人类TREM1的结合亲和力与其对不相关人类抗原蛋白的结合亲和力相当或小于该结合亲和力，则该抗原结合蛋白“不特异性结合”至人类TREM1。通过如本文所描述的用于测量亲和力的任何方法所确定，不特异性结合至人类TREM1的抗原结合蛋白对人类TREM1可以具有的KD≥1×10-5M、≥1×10-4M或≥1×10-3M。如通过本领域中已知的任何方法，例如实例2中所描述的FACS结合法所测量，若本发明的抗原结合蛋白同人类TREM1的结合与同种型对照抗体同人类TREM1的结合相当或更低，则可以认为该抗原结合蛋白不特异性结合人类TREM1。
在某些实施例中，本发明的抗原结合蛋白是激动剂抗原结合蛋白。“激动剂抗原结合蛋白”或“活化抗原结合蛋白”是结合至并诱导或增加一种或多种TREM2介导的功能或活性的抗原结合蛋白(例如抗体)。TREM2介导的功能或活性包括但不限于，DAP12磷酸化(例如在DAP12胞质结构域内的ITAM基序内的酪氨酸磷酸化)；Syk磷酸化；Src磷酸化/活化；细胞外调控激酶(ERK1/2)的活化/磷酸化；活化的磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)易位至膜中；蛋白质激酶B(PKB，又称为Akt)的活化；NF-κB和NF-κB介导的转录的活化；活化T细胞核因子(NFAT)介导的转录的活化；蛋白激酶C(PKC)的活化；细胞内肌醇(1,4,5)-三磷酸(IP3)的升高；细胞内钙含量升高；骨髓细胞，例如巨噬细胞、小胶质细胞和树突状细胞的存活或增殖增加；骨髓细胞，例如巨噬细胞、小胶质细胞和树突状细胞的凋亡减少；巨噬细胞中CCL2蛋白的表达增加；骨髓细胞(例如巨噬细胞)中炎性细胞因子(例如TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12p70和IFN-γ)的产生减少，和巨噬细胞和小胶质细胞对坏死和/或凋亡细胞(例如神经元细胞)、细胞碎片和错误折叠的肽的吞噬作用增加。
本发明的激动剂TREM2抗原结合蛋白能够在不存在聚集、群集和/或Fc介导的抗原结合蛋白交联的情况下诱导或活化TREM2介导的功能。因此，在体外，抗原结合蛋白的激动剂活性可以用呈可溶性(即，不结合至固体支持体)、单体、二价形式的抗原结合蛋白或抗体检测。在体内，本发明的抗原结合蛋白的激动剂活性可以在不存在抗原结合蛋白结合至相邻细胞上的受体(例如Fc受体)以群集或聚集抗原结合蛋白的情况下发生。因此，在一些实施例中，本文所描述的抗原结合蛋白的激动剂活性与抗原结合蛋白结合至Fc受体或与Fc受体相互作用的能力无关。在抗原结合蛋白包含Fc区(例如抗体)的实施例中，这些抗原结合蛋白保持TREM2激动剂活性，但不与Fcγ受体，例如FcγRIIB受体结合或相互作用。本发明的激动剂抗原结合蛋白不依赖交联的性质有利于这些抗原结合蛋白的治疗应用，因为这些抗原结合蛋白的激动剂活性不会随Fcγ受体表达或与治疗作用部位的可接近性而变化。
TREM2激动剂活性对于抗原结合蛋白的交联、聚集和/或群集的依赖性可以通过测量本文所描述的TREM2介导的功能中的任一种在不存在交联剂的情况下的活化或诱导来评估。交联剂可以为在除抗原结合位点外的位点处与抗原结合蛋白相互作用以将两个或多个抗原结合蛋白群集在一起的任何试剂。在抗原结合蛋白包含Fc区(例如抗体)的实施例中，交联剂可以为与Fc区，例如蛋白质A、蛋白质G、抗Fc抗体或Fcγ受体结合或相互作用的蛋白质。
在一些实施例中，相对于在不存在抗原结合蛋白的情况下的磷酸化Syk(pSyk)含量或相对于在对照存在下的pSyk含量，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白使表达TREM2蛋白(例如人类TREM2蛋白)的细胞中的pSyk含量增加。这些细胞可以为髓系细胞，包括但不限于，单核细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、树突状细胞、破骨细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨核细胞和血小板。在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白以小于约100nM、小于约80nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约1nM、小于约500pM、小于约300pM或小于约100pM的EC50增加pSyk含量。在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白以约1pm至约100nM、约10pM至约50nM、约50pM至约5nM、约100pM至约1nM，或约150pM至约500pM的EC50增加pSyk含量。“EC50”或“半数最大有效浓度”是对于抗原结合蛋白效力的度量且指在特定暴露期后诱导介于基线与最大反应之间的半数反应所需抗原结合蛋白的浓度。任何特定激动剂的EC50可以通过构造剂量-反应曲线且检查不同浓度的激动剂在特定功能测定(例如pSyk含量)中诱导活性的作用来确定。EC50是观察到50％最大作用的激动剂浓度。由本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白所诱导的细胞内pSyk含量增加可以通过各种方法，例如实例2和6中所描述的基于细胞的测定评估。例如，使表达TREM2(例如人类TREM2)的细胞与一种或多种浓度的激动剂抗原结合蛋白接触，溶解细胞，并通过例如蛋白质印迹、基于FRET的测定或化学发光测定(例如基于AlphaLISA的测定)评估细胞溶解产物中的pSyk含量。在基于细胞的测定中的细胞可以为重组表达TREM2(例如人类TREM2)的细胞，例如HEK293T细胞或CHO细胞。可替代地，在基于细胞的测定中的细胞是天然表达TREM2(例如人类TREM2)的细胞，例如THP-1细胞、巨噬细胞、小胶质细胞或树突状细胞。
在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白诱导或增加表达TREM2(例如人类TREM2)的细胞中的pSyk含量的效力在不存在交联剂的情况下得以保持。例如，在一些实施例中，如通过基于细胞的pSyk测定所测量，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下以约1pM至约100nM、约10pM至约50nM、约50pM至约5nM、约100pM至约1nM，或约150pM至约500pM的EC50增加pSyk含量。在一个实施例中，如通过基于细胞的pSyk测定所测量，TREM2激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下以小于5nM的EC50增加pSyk含量。在另一实施例中，如通过基于细胞的pSyk测定所测量，TREM2激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下以小于1nM的EC50增加pSyk含量。在另一实施例中，如通过基于细胞的pSyk测定所测量，TREM2激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下以小于500pM的EC50增加pSyk含量。在又一实施例中，如通过基于细胞的pSyk测定所测量，TREM2激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下以小于300pM的EC50增加pSyk含量。在又一实施例中，如通过基于细胞的pSyk测定所测量，TREM2激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下，以小于100pM的EC50增加pSyk含量。
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含一个或多个来自如本文所描述的特异性结合至人类TREM2的抗体的轻链和重链可变区的互补决定区(CDR)。术语“CDR”是指抗体可变序列内的互补决定区(又称为“最小识别单元”或“高变区”)。有三个重链可变区CDR(CDRH1、CDRH2和CDRH3)和三个轻链可变区CDR(CDRL1、CDRL2和CDRL3)。如本文所使用，术语“CDR区”是指存在于单一可变区中的一组三个CDR(即，三个轻链CDR或三个重链CDR)。该两条链各自的CDR典型地通过构架区(FR)比对形成特异性结合靶蛋白(例如人类TREM2)上的特定表位或结构域的结构。自N末端至C末端，天然存在的轻链和重链可变区典型地遵循这些组件的以下次序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。编号系统是将编号指派给在这些结构域的每一个中占据位置的氨基酸来获得。此编号系统是根据Kabat Sequences ofProteins of Immunological Interest[免疫相关蛋白质的Kabat序列](1987和1991,NIH[国立卫生研究院],Bethesda[贝塞斯达],MD[马里兰州])，或Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]196:901-917；Chothia等人，1989,Nature[自然]342:878-883定义。给定抗体的互补决定区(CDR)和构架区(FR)可以使用此系统标识。用于免疫球蛋白链中的氨基酸的其他编号系统包括
Figure BDA0002295171410000271
(国际ImMunoGeneTics信息系统；Lefranc等人，Dev.Comp.Immunol.[发展与比较免疫学]29:185-203；2005)和AHo(Honegger和Pluckthun,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]309(3):657-670；2001)。可以将一个或多个CDR共价或非共价并入分子中以使其成为抗原结合蛋白。
在一些实施例中，本发明的抗原结合蛋白可以作为较大多肽链的一部分并入CDR，可以将CDR共价连接至另一多肽链，或者可以非共价并入CDR。抗原结合蛋白可包含并入生物相容性构架结构中的本文所描述的CDR中的至少一个。在一个实例中，生物相容性构架结构包含足以形成构型稳定的结构支持体的多肽或其部分、构架或支架，其能够展示一个或多个结合至局部表面区域中的抗原(例如CDR、可变区等)的氨基酸序列。此类结构可以为天然存在的多肽或多肽“折叠”(结构基序)，或者可以相对于天然存在的多肽或折叠具有一个或多个修饰，例如氨基酸的添加、缺失或取代。这些支架可以来源于任一物种(或超过一个物种)，例如人类、其他哺乳动物、其他脊椎动物、非脊椎动物、植物、细菌或病毒的多肽。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括来自本文所描述的抗TREM2激动剂抗体的至少一个含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，和至少一个含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区。示例性人类抗TREM2抗体的轻链和重链可变区以及相关CDR分别陈述于下表1A和1B中。
表1A.示例性抗人类TREM2抗体轻链可变区氨基酸序列
Figure BDA0002295171410000291
Figure BDA0002295171410000301
表1B.示例性抗人类TREM2抗体重链可变区氨基酸序列
Figure BDA0002295171410000321
Figure BDA0002295171410000341
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含表1A(轻链CDR；即，CDRL)和表1B(重链CDR；即，CDRH)中提供的一个或多个CDR。例如，在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含一个或多个选自以下的轻链CDR：(i)选自SEQ ID NO:5至18的CDRL1；(ii)选自SEQ IDNO:19至30的CDRL2；和(iii)选自SEQ ID NO:31至45的CDRL3；以及(iv)含有一个或多个，例如一个、两个、三个、四个或更多个不超过五个、四个、三个、两个或一个氨基酸的氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)、缺失或插入的(i)、(ii)和(iii)的CDRL。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含一个或多个选自以下的重链CDR：(i)选自SEQ ID NO:77至86的CDRH1；(ii)选自SEQ ID NO:87至94的CDRH2；和(iii)选自SEQ ID NO:95至109的CDRH3；以及(iv)含有一个或多个，例如一个、两个、三个、四个或更多个不超过五个、四个、三个、两个或一个氨基酸的氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)、缺失或插入的(i)、(ii)和(iii)的CDRH。
在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含表1A和1B中所列CDR的1、2、3、4、5或6种变体形式，其各自与表1A和1B中所列CDR序列具有至少80％、85％、90％或95％序列一致性。在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括表1A和1B中所列CDR中的1、2、3、4、5或6种，其各自与这些表中所列CDR有不超过1、2、3、4或5个氨基酸的差异。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含选自SEQ ID NO:5-18或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRL1；含选自SEQ ID NO:19-30或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRL2；含选自SEQ ID NO:31-45或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRL3；含选自SEQ ID NO:77-86或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRH1；含选自SEQ ID NO:87-94或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRH2；和含选自SEQ ID NO:95-109或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列的CDRH3。在其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含选自SEQ ID NO:5-18的序列的CDRL1；含选自SEQ IDNO:19-30的序列的CDRL2；含选自SEQ ID NO:31-45的序列的CDRL3；含选自SEQ ID NO:77-86的序列的CDRH1；含选自SEQ ID NO:87-94的序列的CDRH2；和含选自SEQ ID NO:95-109的序列的CDRH3。
在特定实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中：(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:5、19和31的序列；(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和32的序列；(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、21和33的序列；(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和33的序列；(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:7、22和34的序列；(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:8、22和35的序列；(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ IDNO:9、22和36的序列；(h)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和37的序列；(i)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:11、23和38的序列；(j)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:12、24和39的序列；(k)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:13、25和40的序列；(l)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:14、26和41的序列；(m)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:15、27和42的序列；(n)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列；(o)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:17、29和44的序列；或(p)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:18、30和45的序列。
在其他特定实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中：(a)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、87和95的序列；(b)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、88和96的序列；(c)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、88和97的序列；(d)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ IDNO:78、89和96的序列；(e)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、90和98的序列；(f)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:79、90和99的序列；(g)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:80、91和100的序列；(h)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和101的序列；(i)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:82、92和102的序列；(j)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和103的序列；(k)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和104的序列；(l)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:83、93和105的序列；(m)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:84、91和106的序列；(n)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；(o)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ IDNO:86、94和108的序列；或(p)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和109的序列。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，以及含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中：
(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:5、19和31的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、87和95的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和32的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、88和96的序列；
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、21和33的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、88和97的序列；
(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和33的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、88和97的序列；
(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和33的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、89和96的序列；
(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:7、22和34的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、87和95的序列；
(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:8、22和35的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、90和98的序列；
(h)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:9、22和36的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:79、90和99的序列；
(i)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和37的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:80、91和100的序列；
(j)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和37的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和101的序列；
(k)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:11、23和38的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:82、92和102的序列；
(l)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:12、24和39的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和103的序列；
(m)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:13、25和40的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和104的序列；
(n)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:14、26和41的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:83、93和105的序列；
(o)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:15、27和42的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:84、91和106的序列；
(p)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(q)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:17、29和44的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:86、94和108的序列；或
(r)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:18、30和45的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和109的序列。
在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区和含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ IDNO:10、23和37的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:80、91和100的序列。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区和含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和37的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和101的序列。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区和含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:15、27和42的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:84、91和106的序列。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区和含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列。在一个特定实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区和含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:17、29和44的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:86、94和108的序列。在另一特定实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区和含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:8、22和35的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、90和98的序列。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自特异性结合至人类TREM2的抗体，例如本文所描述的抗体的免疫球蛋白重链可变区(VH)和免疫球蛋白轻链可变区(VL)。“可变区”在本文中与“可变结构域”可互换使用(轻链可变区(VL)、重链可变区(VH))，直接参与抗体与抗原的结合的轻链和重链免疫球蛋白各自的区域。如上文所论述，可变轻链和重链的区域具有相同的一般结构且各区域包含由三个CDR连接的四个构架(FR)区，其序列高度保守。构架区呈β-折叠构形且CDR可以形成连接该β-折叠结构的环。各链中的CDR通过构架区保持其三维结构，且与来自另一链的CDR一起形成抗原结合位点。
在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含选自如表1A中所示的LV-01、LV-02、LV-03、LV-04、LV-05、LV-06、LV-07、LV-08、LV-09、LV-10、LV-11、LV-12、LV-13、LV-14、LV-15、LV-16、LV-17和LV-18的轻链可变区，和/或选自如表1B中所示的HV-01、HV-02、HV-03、HV-04、HV-05、HV-06、HV-07、HV-08、HV-09、HV-10、HV-11、HV-12、HV-13、HV-14、HV-15、HV-16和HV-17的重链可变区，以及这些轻链和重链可变区的功能片段、衍生物、突变蛋白和变体。
表1A中所列轻链可变区各自可以与表1B中所列重链可变区中的任一个组合形成本发明的抗原结合蛋白的抗TREM2结合结构域。此类组合的实例包括但不限于：LV-01(SEQID NO:46)与HV-01(SEQ ID NO:110)；LV-02(SEQ ID NO:47)与HV-02(SEQ ID NO:111)；LV-03(SEQ ID NO:48)与HV-03(SEQ ID NO:112)；LV-04(SEQ ID NO:49)与HV-04(SEQ ID NO:113)；LV-05(SEQ ID NO:50)与HV-05(SEQ ID NO:114)；LV-06(SEQ ID NO:51)与HV-01(SEQID NO:110)；LV-07(SEQ ID NO:52)与HV-06(SEQ ID NO:115)；LV-08(SEQ ID NO:53)与HV-07(SEQ ID NO:116)；LV-09(SEQ ID NO:54)与HV-08(SEQ ID NO:117)；LV-10(SEQ ID NO:55)与HV-09(SEQ ID NO:118)；LV-11(SEQ ID NO:56)与HV-10(SEQ ID NO:119)；LV-12(SEQID NO:57)与HV-11(SEQ ID NO:120)；LV-13(SEQ ID NO:58)与HV-12(SEQ ID NO:121)；LV-14(SEQ ID NO:59)与HV-13(SEQ ID NO:122)；LV-15(SEQ ID NO:60)与HV-14(SEQ ID NO:123)；LV-16(SEQ ID NO:61)与HV-15(SEQ ID NO:124)；LV-17(SEQ ID NO:62)与HV-16(SEQID NO:125)；和LV-18(SEQ ID NO:63)与HV-17(SEQ ID NO:126)。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含LV-09(SEQ ID NO:54)的序列的轻链可变区，和含HV-08(SEQ ID NO:117)的序列的重链可变区。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含LV-10(SEQ ID NO:55)的序列的轻链可变区，和含HV-09(SEQ ID NO:118)的序列的重链可变区。在其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含LV-15(SEQ ID NO:60)的序列的轻链可变区，和含HV-14(SEQ IDNO:123)的序列的重链可变区。在又其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含LV-16(SEQ ID NO:61)的序列的轻链可变区，和含HV-15(SEQ ID NO:124)的序列的重链可变区。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含LV-17(SEQ ID NO:62)的序列的轻链可变区，和含HV-16(SEQ ID NO:125)的序列的重链可变区。在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含LV-07(SEQ ID NO:52)的序列的轻链可变区，和含HV-06(SEQ ID NO:115)的序列的重链可变区。
在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含与表1A中的轻链可变区序列，即，选自LV-01、LV-02、LV-03、LV-04、LV-05、LV-06、LV-07、LV-08、LV-09、LV-10、LV-11、LV-12、LV-13、LV-14、LV-15、LV-16、LV-17或LV-18的VL在仅1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基处不同的由连续氨基酸形成的序列的轻链可变区，其中此类序列差异各自独立地为一个氨基酸的缺失、插入或取代，且这些缺失、插入和/或取代相对于前述可变结构域序列引起不超过15个氨基酸变化。一些TREM2激动剂抗原结合蛋白中的轻链可变区包含与SEQ ID NO:46-63(即，表1A中的轻链可变区)的氨基酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％序列一致性的氨基酸序列。在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含与选自SEQ ID NO:46-63的序列至少90％一致的序列的轻链可变区。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含与选自SEQ ID NO:46-63的序列至少95％一致的序列的轻链可变区。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含选自SEQ ID NO:46-63的序列的轻链可变区。在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:54的序列的轻链可变区。在其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:55的序列的轻链可变区。在又其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:60的序列的轻链可变区。在又其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:61的序列的轻链可变区。在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区。在其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:52的序列的轻链可变区。
在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含与表1B中的重链可变区序列，即，选自HV-01,HV-02,HV-03,HV-04,HV-05,HV-06,HV-07,HV-08,HV-09,HV-10,HV-11,HV-12,HV-13,HV-14,HV-15,HV-16或HV-17的VH在仅1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基处不同的由连续氨基酸形成的序列的重链可变区，其中此类序列差异各自独立地为一个氨基酸的缺失、插入或取代，且这些缺失、插入和/或取代相对于前述可变结构域序列引起不超过15个氨基酸变化。一些TREM2激动剂抗原结合蛋白中的重链可变区包含与SEQ ID NO:110-126(即，表1B中的重链可变区)的氨基酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％序列一致性的氨基酸序列。在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含与选自SEQ ID NO:110-126的序列至少90％一致的序列的重链可变区。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含与选自SEQ ID NO:110-126的序列至少95％一致的序列的重链可变区。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含选自SEQ ID NO:110-126的序列的重链可变区。在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:117的序列的重链可变区。在其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:118的序列的重链可变区。在又其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:123的序列的重链可变区。在又其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:124的序列的重链可变区。在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:125的序列的重链可变区。在其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:115的序列的重链可变区。
如本文所使用，术语“一致性”是指如通过比对并比较两个或两个以上多肽分子或者两个或多个核酸分子的序列所确定的这些序列之间的关系。如本文所使用，“一致性百分比”意谓在所比较的分子中氨基酸或核苷酸之间一致残基的百分比，且以所比较的最小分子的大小为基准计算。对于这些计算，须利用特定数学模型或计算器程序(即，“算法”)解决比对中的空位(若存在的话)。可以用于计算所比对的核酸或多肽的一致性的方法包括以下中所描述的方法：Computational Molecular Biology[计算分子生物学],(Lesk,A.M.编辑),1988,New York:Oxford University Press[纽约：牛津大学出版社]；BiocomputingInformatics and Genome Projects[生物计算信息学和基因组计划],(Smith,D.W.编辑),1993,New York:Academic Press[纽约：学术出版社]；Computer Analysis of SequenceData[序列数据的计算机分析],Part I[第I部分],(Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编辑),1994,New Jersey:Humana Press；von Heinje[新泽西：胡玛纳出版社],von Heinje,G.,1987,Sequence Analysis in Molecular Biology[分子生物学中的序列分析],New York:Academic Press[纽约：学术出版社]；Sequence Analysis Primer[序列分析入门],(Gribskov,M.和Devereux,J.编辑),1991,New York:M.Stockton Press[纽约：M.Stockton出版社]；以及Carillo等人,1988,SIAM J.Applied Math.[工业与应用数学学会]48:1073。例如，可以通过常用于比较两个多肽的氨基酸位置相似性的标准方法确定序列一致性。使用计算器程序，例如BLAST或FASTA，将两个多肽或两个多核苷酸比对以实现其各自残基的最佳匹配(沿一个或两个序列的全长，或沿一个或两个序列的预定部分)。这些程序提供默认开放罚分和默认空位罚分，和评分矩阵，例如PAM 250(Dayhoff等人，Atlas of ProteinSequence and Structure[蛋白质序列和结构图集]，第5卷，第3增刊,1978)，或者可以将BLOSUM62(Henikoff等人，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国科学院院报]89:10915-10919)与计算器程序结合使用。例如，一致性百分比接着可以计算如下：一致匹配的总数乘以100且接着除以匹配范围内较长序列的长度与引入这些较长序列中以便比对两个序列的空位数量的总和。在计算一致性百分比时，以实现各序列间最大匹配的方式比对所比较的序列。
GCG程序包是可以用于测定一致性百分比的计算器程序，该程序包包括GAP(Devereux等人，1984,Nucl.Acid Res.[核酸研究]12:387；Genetics Computer Group[遗传学计算机组],University of Wisconsin[威斯康星大学],Madison[麦迪逊],WI[威斯康星洲])。计算器算法GAP是用于比对待确定序列一致性百分比的两个多肽或两个多核苷酸。这些序列经比对用于最佳匹配其各自氨基酸或核苷酸(如由算法所确定的“匹配范围”)。空位开放罚分(以3x对角线平均值计算，其中「对角线平均值」是所用比较矩阵的对角线的平均值；「对角线」是由特定比较矩阵赋予每个完美氨基酸匹配的评分或数字)和空位延伸罚分(通常为空位开放罚分的1/10倍)以及比较矩阵，例如PAM 250或BLOSUM 62，是与该算法结合使用。在某些实施例中，该算法还使用标准比较矩阵(有关PAM 250比较矩阵，参见Dayhoff等人，1978,Atlas of Protein Sequence and Structure[蛋白质序列和结构图集]5:345-352；有关BLOSUM 62比较矩阵，参见Henikoff等人，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国科学院院报]89:10915-10919)。
使用GAP程序测定多肽或核苷酸序列的一致性百分比的推荐参数包括以下：
算法：Needleman等人，1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453；
比较矩阵：来自Henikoff等人，1992,同上文的BLOSUM 62；
空位罚分：12(但末端空位不罚分)
空位长度罚分：4
相似性临限值：0
用于比对两个氨基酸序列的某些比对方案可以使该两个序列中仅较短区域匹配，且此较小比对区可以具有极高序列一致性，即使该两个全长序列之间并无明显关系。因此，必要时，可以调整所选比对方法(GAP程序)以在靶多肽的至少50个连续氨基酸范围内进行比对。
本文所描述的抗TREM2抗体的变体可以如实例7中所描述，通过取代轻链或重链可变区中的一个或多个氨基酸以解决化学易感性(例如天冬氨酸异构化、天冬酰胺脱酰胺、色氨酸和甲硫氨酸氧化)或校正协方差违反(covariance violation)(参见WO2012/125495，通过引用以其整体特此并入)而产生。相较于亲本抗体，此类变体可以具有改善的生物物理、表达和/或稳定特性。因此，在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含具有一个或多个表13-18中的任一个中所列的氨基酸取代的轻链可变区和/或重链可变区。
除非另外参照具体序列指示，否则在本说明书和申请专利范围通篇，免疫球蛋白重链或轻链中的氨基酸残基编号是根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest[具有免疫学意义的蛋白质序列]，第5版，US Department ofHealth and Human Services[美国卫生与公共服务部],NIH出版号91-3242，第662,680,689页(1991)和Edelman等人，Proc.Natl.Acad.USA[美国科学院院报]，第63卷：78-85(1969)中所描述的Kabat-EU编号。当提及可变区内的氨基酸位置时，典型地使用Kabat编号方案，而当提及免疫球蛋白恒定区内的氨基酸位置时，一般使用EU编号方案。概述Kabat和EU编号方案与其他编号方案之间的对应性的图表可见于
Figure BDA0002295171410000431
网站(国际ImMunoGeneTics信息系统)。
氨基酸序列中的氨基酸取代在本文中典型地以特定位置中氨基酸残基的单字母缩写，后接相对于感兴趣的原始序列的氨基酸位置编号，再接取代的氨基酸残基的单字母缩写命名。例如，“T30D”以符号表示相对于感兴趣的原始序列在氨基酸位置30处的苏氨酸残基经天冬氨酸残基取代。另例如，“S218G”以符号表示相对于感兴趣的原始氨基酸序列在氨基酸位置218处的丝氨酸残基经甘氨酸残基取代。
在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:54的序列且在一个或多个氨基酸位置64、79、80、85、94和/或100处具有突变的轻链可变区。这些突变可包括V64G、V64A、Q79E、Q79D、S80P、S80A、F85V、F85L、F85A、F85D、F85I、F85L、F85M、F85T、W94F、W94Y、W94S、W94T、W94A、W94H、W94I、W94Q、P100R、P100Q、P100G或其组合。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:117的序列且在一个或多个氨基酸位置19、55、56、57、58和/或104处具有突变的重链可变区。在某些实施例中，该突变选自M19K、M19R、M19T、M19E、M19N、M19Q、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、W104F、W104Y、W104T、W104S、W104A、W104H、W104I、W104Q或其组合。
在其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:55的序列且在一个或多个氨基酸位置64、79、80、94和/或100处具有突变的轻链可变区。在一些实施例中，该突变选自V64G、V64A、Q79E、Q79D、S80P、S80A、W94F、W94Y、W94S、W94T、W94A、W94H、W94I、W94Q、P100R、P100Q、P100G或其组合。在某些实施例中，该突变选自V64G、V64A、Q79E、S80P、S80A、W94Y、W94S、P100R、P100Q或其组合。例如，在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:55的序列且具有一个或多个选自V64G、Q79E、S80P、W94Y和P100Q的突变的轻链可变区。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:118的序列且在一个或多个氨基酸位置19、55、56、57、58和/或104处具有突变的重链可变区。此类突变可包括M19K、M19R、M19T、M19E、M19N、M19Q、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、W104F、W104Y、W104T、W104S、W104A、W104H、W104I、W104Q或其组合。在某些实施例中，该突变选自M19K、D55E、S56A、D57E、T58A、W104Y、W104T或其组合。
在某些其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:60的序列且在一个或多个氨基酸位置60、92和/或93处具有突变的轻链可变区。该突变可以选自L60S、L60P、L60D、L60A、D92E、D92Q、D92T、D92N、S93A、S93N、S93Q、S93V或其组合。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:123的序列且在一个或多个氨基酸位置27、55、56、57、58、105和/或106处具有突变的重链可变区。在一些实施例中，该突变选自H27Y、H27D、H27F、H27N、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、D105E、D105Q、D105T、D105N、D105G、S106A、S106Q、S106V、S106T或其组合。
在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:61的序列且在一个或多个氨基酸位置56、57、92和/或93处具有突变的轻链可变区。在某些实施例中，该突变选自N56S、N56T、N56Q、N56E、G57A、G57V、D92E、D92Q、D92T、D92N、S93A、S93N、S93Q、S93V或其组合。在一些实施例中，该突变选自N56S、N56Q、G57A、D92E、D92Q、S93A或其组合。在特定实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:61的序列且具有一个或多个选自N56S、D92E和S93A的突变的轻链可变区。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:124的序列且在一个或多个氨基酸位置55、56、57、58、105和/或106处具有突变的重链可变区。该突变可以选自D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、D105E、D105Q、D105T、D105N、D105G、S106A、S106Q、S106V、S106T或其组合。在某些实施例中，该突变是D55E、D55Q、S56A、D57E、T58A、D105E、D105N、S106A或其组合。在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:124的序列且具有一个或多个选自D55E、S56A、D57E、D105E和S106A的突变的重链可变区。
在其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:62的序列且在一个或多个氨基酸位置36、46、61和/或100处具有突变的轻链可变区。在特定实施例中，该突变选自F36Y、S46L、S46R、S46V、S46F、K61R、P100Q、P100G、P100R或其组合。在一些实施例中，该突变是F36Y、K61R、P100Q或其组合。在一些实施例中，该突变是S46L、P100Q或其组合。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:125的序列且在一个或多个氨基酸位置43、76、85、99、100和/或116处具有突变的重链可变区。该突变可以选自L43Q、L43K、L43H、I76T、R85S、R85G、R85N、R85D、D99E、D99Q、D99S、D99T、G100A、G100Y、G100V、T116L、T116M、T116P、T116R或其组合。在某些实施例中，该突变是L43Q、I76T、R85S、D99E、G100A、G100Y、T116L或其组合。
在又其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:52的序列且在氨基酸位置91处具有突变的轻链可变区。该突变可以选自F91V、F91I、F91T、F91L或F91D。在一个实施例中，该突变是F91V。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:115的序列且在氨基酸位置62和/或63处具有突变的重链可变区。在特定实施例中，该突变选自D62E、D62Q、D62T、D62N、S63A、S63Q、S63V或其组合。在一些实施例中，该突变选自D62E、D62Q、S63A或其组合。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:326的氨基酸序列的轻链可变区，和含SEQ ID NO:327的氨基酸序列的重链可变区。在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链可变区，和含SEQ ID NO:329的氨基酸序列的重链可变区。在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:330的氨基酸序列的轻链可变区，和含SEQ ID NO:331的氨基酸序列的重链可变区。在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:332的氨基酸序列的轻链可变区，和含SEQ ID NO:333的氨基酸序列的重链可变区。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含由以下组成或基本上由以下组成的轻链可变区：SEQ ID NO:326、328、330或332的氨基酸序列。在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含由以下组成或基本上由以下组成的重链可变区：SEQ ID NO:327、329、331或333的氨基酸序列。在一个特定实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，其中该轻链可变区由或基本上由SEQ ID NO:326的氨基酸序列组成且该重链可变区由或基本上由SEQ ID NO:327的氨基酸序列组成。在一个特定实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，其中该轻链可变区由或基本上由SEQ ID NO:328的氨基酸序列组成且该重链可变区由或基本上由SEQ ID NO:329的氨基酸序列组成。在一个特定实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，其中该轻链可变区由或基本上由SEQ ID NO:330的氨基酸序列组成且该重链可变区由或基本上由SEQ ID NO:331的氨基酸序列组成。在一个特定实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，其中该轻链可变区由或基本上由SEQ ID NO:332的氨基酸序列组成且该重链可变区由或基本上由SEQ ID NO:333的氨基酸序列组成。
本文所描述的抗TREM2抗体的其他变体可以通过亲和力调节本文所描述的抗TREM2抗体中的任一种来产生。“亲和力调节的抗体”是在轻链可变区序列和/或重链可变区序列中包含一个或多个氨基酸取代的抗体，相较于不含氨基酸取代的亲本抗体，该一个或多个氨基酸取代使抗体对靶抗原的亲和力增加或降低。抗体亲和力调节方法是本领域普通技术人员已知的且可包括CDR步行诱变(CDR walking mutagenesis)(Yang等人，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],254,392-403,1995)、链改组(Marks等人，Bio/Technology[生物/技术],10,779-783,1992)、使用大肠杆菌(E.coli)突变菌株(Low等人，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],250,350-368,1996)、DNA改组(Patten等人，Curr.Opin.Biotechnol.[生物技术现状],8,724-733,1997)、噬菌体展示(Thompson等人，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],256,7-88,1996)、PCR技术(Crameri等人，Nature[自然],391,288-291,1998)及其他诱变策略(Barbas等人，Proc Nat.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]91:3809-3813,1994；Schier等人，Gene[基因]169:147-155,1995；Yelton等人，J.Immunol.[免疫学杂志]155:1994-2004,1995；Jackson等人，J.Immunol.[免疫学杂志]154(7):3310-9,1995；和Hawkins等人，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]226:889-896,1992)。亲和力调节方法论述于Hoogenboom,Trends in Biotechnology[生物技术的发展趋势]，第15卷：62-70,1995和Vaughan等人，Nature Biotechnology[自然生物技术],16:535-539,1998中。用于产生本文所描述的抗TREM2抗体的亲和力调节的变体的一种特定方法是使用如实例8中所描述的酵母展示Fab诱变文库。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自6E7抗体的亲和力调节变体(实例8)的轻链可变区和/或重链可变区。例如，在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含具有一个或多个表23中所列的氨基酸取代的轻链可变区和/或重链可变区。在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:61的序列且在一个或多个氨基酸位置24、31、50、52、54、56、89、92、93、94和/或96处具有突变的轻链可变区。在某些实施例中，该突变选自R24A、S31R、A50S、A50G、S52G、L54R、N56K、N56R、N56L、N56T、Q89G、D92V、S93R、F94Y、F94L、R96H、R96L或其组合。在这些和其他实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:124的序列且在一个或多个氨基酸位置27、28、30、32、50、54、58、60、61、63、66、99、101、103、104和/或110处具有突变的重链可变区。在一些实施例中，该突变选自Y27S、S28G、S28H、T30N、T30G、T30E、T30A、Y32E、I50T、G54S、T58V、Y60L、S61A、S63G、S63E、G66D、Q99G、Q99S、Q99M、T101G、Y103R、Y104G、F110S或其组合。亲和力改善的示例性6E7抗体变体的轻链和重链可变区以及相关CDR的氨基酸序列分别陈述于下表2A和2B中。亲和力降低的示例性6E7抗体变体的轻链和重链可变区以及相关CDR的氨基酸序列分别陈述于下表3A和3B中。列出6E7抗体的相应序列供比较。
表2A.亲和力改善的TREM2抗体的轻链可变区氨基酸序列
Figure BDA0002295171410000481
Figure BDA0002295171410000491
表2B.亲和力改善的TREM2抗体的重链可变区氨基酸序列
Figure BDA0002295171410000492
Figure BDA0002295171410000501
Figure BDA0002295171410000521
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含来自表2A(轻链CDR；即，CDRL)和表2B(重链CDR；即，CDRH)中提供的亲和力改善的变体的一个或多个CDR。在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来源于亲和力改善的变体的共有CDR序列。例如，在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL2共有序列X1ASSX2QX3(SEQ ID NO:139)，其中X1是A或G；X2是L或R；且X3是N、K、R、L或T。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL3共有序列X1QADX2X3PX4T(SEQ ID NO:140)，其中X1是Q或G；X2是S或R；X3是F、L或Y；且X4是R或H。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRH2共有序列X1IYPGDSDX2RX3X4PX5FQX6(SEQ ID NO:141)，其中X1是I或T；X2是T或V；X3是Y或L；X4是S或A；X5是S、G或E；且X6是G或D。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRH3共有序列X1RTFYYDSSDYX2DY(SEQ ID NO:142)，其中X1是Q、G、S或M；且X2是F或S。在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，以及含互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1包含SEQ ID NO:16的序列；CDRL2包含SEQ ID NO:139的共有序列；CDRL3包含SEQ ID NO:140的共有序列；CDRH1包含SEQ ID NO:85的序列；CDRH2包含SEQ ID NO:141的共有序列；且CDRH3包含SEQ ID NO:142的共有序列。
在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:16的序列的CDRL1；含选自SEQ ID NO:26和143-147的序列的CDRL2；含选自SEQ ID NO:43和148-152的序列的CDRL3；含SEQ ID NO:85的序列的CDRH1；含选自SEQ ID NO:91和170-175的序列的CDRH2；和含选自SEQ ID NO:176-179的序列的CDRH3。
在特定实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中：(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、143和148的序列；(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、144和149的序列；(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和43的序列；(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ IDNO:16、146和148的序列；(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、26和150的序列；(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、143和151的序列；(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和148的序列；(h)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ IDNO:16、145和152的序列；(i)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、144和43的序列；或(j)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、147和43的序列。
在相关实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中：(a)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、170和176的序列；(b)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和177的序列；(c)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、172和177的序列；(d)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ IDNO:85、171和178的序列；(e)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和179的序列；(f)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、173和177的序列；(g)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和176的序列；(h)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ IDNO:85、174和176的序列；(i)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、175和178的序列；或(j)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和178的序列。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，以及含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中：
(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、143和148的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、170和176的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、144和149的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和177的序列；
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、172和177的序列；
(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、146和148的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和178的序列；
(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、26和150的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和179的序列；
(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、143和151的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、173和177的序列；
(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和148的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和176的序列；
(h)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和152的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和178的序列；
(i)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、143和151的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、174和176的序列；
(j)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、144和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、175和178的序列；或
(k)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、147和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和178的序列。
在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含选自如表2A中所示的LV-101、LV-102、LV-103、LV-104、LV-105、LV-106、LV-107、LV-108、LV-109和LV-110的轻链可变区，和/或选自如表2B中所示的HV-101、HV-102、HV-103、HV-104、HV-105、HV-106、HV-107、HV-108、HV-109、HV-110和HV-111的重链可变区，或与表2A和2B中的序列中的任一个至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致或至少95％一致的序列。例如，在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含(i)与选自SEQ ID NO:153-162的序列至少90％一致的序列；(ii)与选自SEQ ID NO:153-162的序列至少95％一致的序列；或(iii)选自SEQ ID NO:153-162的序列的轻链可变区。在相关实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含(i)与选自SEQ ID NO:180-190的序列至少90％一致的序列；(ii)与选自SEQ ID NO:180-190的序列至少95％一致的序列；或(iii)选自SEQ ID NO:180-190的序列的重链可变区。
表2A中所列轻链可变区各自可以与表2B中所列重链可变区中的任一个组合形成本发明的抗原结合蛋白的抗TREM2结合结构域。此类组合的实例包括但不限于：LV-101(SEQID NO:153)与HV-101(SEQ ID NO:180)；LV-102(SEQ ID NO:154)与HV-102(SEQ ID NO:181)；LV-103(SEQ ID NO:155)与HV-103(SEQ ID NO:182)；LV-104(SEQ ID NO:156)与HV-104(SEQ ID NO:183)；LV-105(SEQ ID NO:157)与HV-105(SEQ ID NO:184)；LV-106(SEQ IDNO:158)与HV-106(SEQ ID NO:185)；LV-107(SEQ ID NO:159)与HV-107(SEQ ID NO:186)；LV-108(SEQ ID NO:160)与HV-108(SEQ ID NO:187)；LV-106(SEQ ID NO:158)与HV-109(SEQ ID NO:188)；LV-109(SEQ ID NO:161)与HV-110(SEQ ID NO:189)；和LV-110(SEQ IDNO:162)与HV-111(SEQ ID NO:190)。
表3A.亲和力降低的TREM2抗体的轻链可变区氨基酸序列
Figure BDA0002295171410000561
表3B.亲和力降低的TREM2抗体的重链可变区氨基酸序列
Figure BDA0002295171410000572
Figure BDA0002295171410000581
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含来自表3A(轻链CDR；即，CDRL)和表3B(重链CDR；即，CDRH)中提供的亲和力降低的变体的一个或多个CDR。在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来源于亲和力降低的变体的共有CDR序列。例如，在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL1共有序列X1ASQGISX2WLA(SEQ ID NO:284)，其中X1是R或A；且X2是S或R。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL2共有序列X1AX2SLQN(SEQ ID NO:285)，其中X1是A或S；且X2是S或G。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL3共有序列QQAX1SFPX2T(SEQ ID NO:286)，其中X1是D或V；且X2是R或L。在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRH1共有序列SX1WIA(SEQ ID NO:287)，其中X1是Y或E。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRH2共有序列IIYPX1DSDTRYSPSFQG(SEQ ID NO:288)，其中X1是G或S。在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRH3共有序列QRX1FX2X3DSSDYFDY(SEQ ID NO:289)，其中X1是T或G；X2是Y或R；且X3是Y或G。在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，以及含互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1包含SEQ ID NO:284的序列；CDRL2包含SEQ ID NO:285的共有序列；CDRL3包含SEQ IDNO:286的共有序列；CDRH1包含SEQ ID NO:287的序列；CDRH2包含SEQ ID NO:288的共有序列；且CDRH3包含SEQ ID NO:289的共有序列。
在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含选自SEQ ID NO:16、290和291的序列的CDRL1；含选自SEQ ID NO:28、292和293的序列的CDRL2；含选自SEQ IDNO:43、294和271的序列的CDRL3；含SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:302的序列的CDRH1；含SEQID NO:91或SEQ ID NO:303的序列的CDRH2；和含选自SEQ ID NO:107和304-306的序列的CDRH3。
在特定实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中：(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列；(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、292和43的序列；(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和294的序列；(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ IDNO:290、28和43的序列；(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、293和43的序列；(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和271的序列；或(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:291、28和43的序列。
在相关实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中：(a)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和304的序列；(b)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；(c)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和305的序列；(d)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ IDNO:85、303和107的序列；(e)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和306的序列；或(f)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:302、91和107的序列。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，以及含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中：
(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和304的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、292和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和294的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和305的序列；
(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、303和107的序列；
(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:290、28和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(h)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和306的序列；
(i)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、293和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(j)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和271的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；或
(k)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:291、28和43的序列，且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:302、91和107的序列。
在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含选自如表3A中所示的LV-16、LV-201、LV-202、LV-203、LV-204、LV-205和LV-206的轻链可变区，和/或选自如表3B中所示的HV-15、HV-201、HV-202、HV-203、HV-204、HV-205和HV-206的重链可变区，或与表3A和3B中的序列中的任一个至少80％一致、至少85％一致、至少90％一致或至少95％一致的序列。例如，在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含(i)与选自SEQ ID NO:61和295-300的序列至少90％一致的序列；(ii)与选自SEQ ID NO:61和295-300的序列至少95％一致的序列；或(iii)选自SEQ ID NO:61和295-300的序列的轻链可变区。在相关实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含(i)与选自SEQ ID NO:124和307-312的序列至少90％一致的序列；(ii)与选自SEQ ID NO:124和307-312的序列至少95％一致的序列；或(iii)选自SEQ ID NO:124和307-312的序列的重链可变区。
表3A中所列轻链可变区各自可以与表3B中所列重链可变区中的任一个组合形成本发明的抗原结合蛋白的抗TREM2结合结构域。此类组合的实例包括但不限于：LV-16(SEQID NO:61)与HV-201(SEQ ID NO:307)；LV-201(SEQ ID NO:295)与HV-15(SEQ ID NO:124)；LV-202(SEQ ID NO:296)与HV-15(SEQ ID NO:124)；LV-16(SEQ ID NO:61)与HV-202(SEQID NO:308)；LV-16(SEQ ID NO:61)与HV-203(SEQ ID NO:309)；LV-16(SEQ ID NO:61)与HV-204(SEQ ID NO:310)；LV-203(SEQ ID NO:297)与HV-15(SEQ ID NO:124)；LV-16(SEQID NO:61)与HV-205(SEQ ID NO:311)；LV-204(SEQ ID NO:298)与HV-15(SEQ ID NO:124)；LV-205(SEQ ID NO:299)与HV-15(SEQ ID NO:124)；和LV-206(SEQ ID NO:300)与HV-206(SEQ ID NO:312)。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白是抗TREM2激动剂抗体或其结合片段。如本文所使用，术语“抗体”是指包含两个轻链多肽(各自约25kDa)和两个重链多肽(各自约50-70kDa)的四聚体免疫球蛋白。“抗体”是抗原结合蛋白的一个物种。术语“轻链”或“免疫球蛋白轻链”是指自氨基末端至羧基末端包含单一免疫球蛋白轻链可变区(VL)和单一免疫球蛋白轻链恒定结构域(CL)的多肽。免疫球蛋白轻链恒定结构域(CL)可以为人类κ或人类λ恒定结构域。术语“重链”或“免疫球蛋白重链”是指自氨基末端至羧基末端包含单一免疫球蛋白重链可变区(VH)、免疫球蛋白重链恒定结构域1(CH1)、免疫球蛋白铰链区、免疫球蛋白重链恒定结构域2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定结构域3(CH3)和任选地免疫球蛋白重链恒定结构域4(CH4)的多肽。重链分类为μ、Δ、γ、α或ε链，且其分别将抗体同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG类别和IgA类别的抗体进一步细分为数个亚类，即分别为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2。IgG、IgA和IgD抗体中的重链具有三个结构域(CH1、CH2和CH3)，而IgM和IgE抗体中的重链具有四个结构域(CH1、CH2、CH3和CH4)。免疫球蛋白重链恒定结构域可以来自任何免疫球蛋白同种型，包括亚型。抗体链是经由在CL结构域与CH1结构域之间(即，在轻链与重链之间)和在抗体重链的铰链区之间的多肽间二硫键连接在一起。
本发明的抗TREM2抗体可包含任何免疫球蛋白恒定区。如本文所使用，术语“恒定区”是指抗体中除可变区外的所有结构域。恒定区不直接参与抗原的结合，但展现各种效应子功能。如以上所描述，抗体取决于其重链恒定区的氨基酸序列而分为特定同种型(IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)和亚型(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2)。轻链恒定区可以为例如见于全部五个抗体同种型中的κ型或λ型轻链恒定区，例如人类κ型或λ型轻链恒定区。人类免疫球蛋白轻链恒定区序列的实例显示于下表中。
表4.示例性人类免疫球蛋白轻链恒定区
Figure BDA0002295171410000631
本发明的抗TREM2抗体的重链恒定区可以为例如α、Δ、ε、γ或μ型重链恒定区，例如人类α、Δ、ε、γ或μ型重链恒定区。在一些实施例中，抗TREM2抗体包含来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4免疫球蛋白的重链恒定区。在一个实施例中，抗TREM2抗体包含来自人类IgG1免疫球蛋白的重链恒定区。在此类实施例中，人类IgG1免疫球蛋白恒定区可包含一个或多个防止抗体糖基化的突变，本文将更详细地描述。在另一实施例中，抗TREM2抗体包含来自人类IgG2免疫球蛋白的重链恒定区。在又一实施例中，抗TREM2抗体包含来自人类IgG4免疫球蛋白的重链恒定区。人类IgG1、IgG2和IgG4重链恒定区序列的实例显示于下表5中。
表5.示例性人类免疫球蛋白重链恒定区
Figure BDA0002295171410000632
Figure BDA0002295171410000641
Figure BDA0002295171410000651
表1A、2A和3A中所披露的轻链可变区中的每一个以及表1B、2B和3B中所披露的重链可变区中的每一个可以分别附接至以上轻链恒定区(表4)和重链恒定区(表5)以形成完整抗体轻链和重链。此外，由此产生的重链和轻链序列各自可以组合形成完整抗体结构。应理解，本文所提供的重链和轻链可变区还可附接至具有与以上所列示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可以为本文所披露的抗TREM2抗体中的任一种。例如，在某些实施例中，抗TREM2激动剂抗原结合蛋白是选自抗体12G10、26A10、26C10、26F2、33B12、24C12、24G6、24A10、10E3、13E7、14C12、25F12、32E3、24F4、16B8、4C5、6E7、5E3和4G10(其可变区和CDR序列在表1A和1B中列出)的抗TREM2抗体。在一些实施例中，抗TREM2激动剂抗原结合蛋白是选自抗体24G6、10E3、13E7、4C5、6E7和5E3的抗TREM2抗体。在其他实施例中，抗TREM2激动剂抗原结合蛋白是选自抗体V3、V24、V27、V40、V48、V49、V52、V60、V73、V76和V84(其可变区和CDR序列在表2A和2B中列出)的抗TREM2抗体。在某些其他实施例中，抗TREM2激动剂抗原结合蛋白是选自抗体V9、V10、V23、V30、V33、V44、V57、V68、V70、V83和V90(其可变区和CDR序列在表3A和3B中列出)的抗TREM2抗体。
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可以为单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体或多特异性抗体。在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白是单克隆抗体。在此类实施例中，抗TREM2抗体可以为嵌合抗体、人源化抗体或具有人类免疫球蛋白恒定结构域的完全人类抗体。在这些和其他实施例中，抗TREM2抗体是人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。因此，在一些实施例中，抗TREM2抗体可以具有人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定结构域。在一个实施例中，抗TREM2抗体是单克隆人类IgG1抗体。在另一实施例中，抗TREM2抗体是单克隆人类IgG2抗体。在又一实施例中，抗TREM2抗体是单克隆人类IgG4抗体。
如本文所使用，术语“单克隆抗体”(或“mAb”)是指自基本上同源的抗体群获得的一种抗体，即，构成该群体的个别抗体除以微量存在的可能天然存在的突变外为一致的。相对于典型地包括针对不同表位的不同抗体的多克隆抗体制剂，单克隆抗体针对个别抗原位点或表位具有高度特异性。单克隆抗体可以使用本领域中已知的任何技术，例如通过在完成免疫接种方案后，使自动物收集的脾细胞永生化来产生。可以使用本领域中已知的任何技术，例如通过使脾细胞与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤来使脾细胞永生化。参见例如，Antibodies[抗体]；Harlow和Lane,Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社]，第1版，例如来自1988年版，或第2版，例如来自2014年版。用于产生杂交瘤的融合程序中的骨髓瘤细胞优选不产生抗体，具有高融合效率且具有使其无法在仅支持所需融合细胞(杂交瘤)生长的某些选择性培养基中生长的酶缺陷。适用于与小鼠细胞融合的细胞系的实例包括但不限于，Sp-20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NS1/1.Ag 4 1、Sp210-Ag14、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG 1.7和S194/5XXO Bul。适用于与大鼠细胞融合的细胞系的实例包括但不限于，R210.RCY3、Y3-Ag 1.2.3、IR983F和4B210。可用于细胞融合的其他细胞系是U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON-HMy2和UC729-6。
在一些情况下，杂交瘤细胞系是通过以下方式制备：用TREM2免疫原(例如实例1中所描述的免疫原)使动物(例如兔、大鼠、小鼠或具有人类免疫球蛋白序列的转基因动物)免疫；自经免疫动物收集脾细胞；使收集的脾细胞与骨髓瘤细胞系融合，由此产生杂交瘤细胞；由这些杂交瘤细胞产生杂交瘤细胞系；以及鉴别产生结合至人类TREM2的抗体的杂交瘤细胞系。另一可用于产生单克隆抗体的方法是Babcook等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]，第93卷：7843-7848,1996中所描述的SLAM方法。
由杂交瘤细胞系分泌的单克隆抗体可以使用本领域中已知的任何技术，例如蛋白质A-琼脂糖凝胶、羟磷灰石层析法、凝胶电泳、透析或亲和层析法纯化。杂交瘤上清液或mAb可以经进一步筛选以鉴别具有特定特性的mAb，这些特性例如结合人类TREM2能力、与来自其他物种的TREM2蛋白(例如小鼠TREM2、大鼠TREM2和食蟹猕猴TREM2)的交叉反应性、与其他TREM家族成员(例如人类TREM1)的交叉反应性、诱导或增加TREM2介导的信号传导(例如使用如本文所描述的pSyk测定)的能力，或诱导或增加如本文所描述的TREM2介导的功能或活性的能力(例如TREM2表达性骨髓细胞的增殖或存活)。
在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白是基于本文所描述的抗TREM2抗体的CDR和可变区序列的嵌合或人源化抗体。嵌合抗体是由来自不同抗体的蛋白质区段共价接合以产生功能性免疫球蛋白轻链或重链或结合片段构成的抗体。一般而言，重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定抗体种类或亚类的抗体中的相应序列一致或同源，而该(等)链的其余部分与来源于另一物种或属于另一抗体种类或亚类的抗体中的相应序列一致或同源。有关涉及嵌合抗体的方法，参见例如美国专利4,816,567；以及Morrison等人，1985,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]81:6851-6855，都通过引用以其整体特此并入。
一般而言，制备嵌合抗体的目的是产生嵌合体，其中使来自预定物种的氨基酸数量最大。一个实例是“CDR移植”的抗体，其中该抗体包含一个或多个来自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的CDR，而该(等)抗体链的其余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列一致或同源。CDR移植描述于例如美国专利号6,180,370、5,693,762、5,693,761、5,585,089和5,530,101中。对用于人类，通常将来自啮齿动物或兔抗体的可变区或选择的CDR移植至人类抗体中，替代人类抗体的天然存在的可变区或CDR。
嵌合抗体的一种有用类型是“人源化”抗体。一般而言，人源化抗体是由最初在非人类动物，例如啮齿动物或兔中产生的单克隆抗体制备。该单克隆抗体中的某些氨基酸残基，典型地来自抗体的非抗原识别部分的氨基酸残基经修饰成与相应同种型的人类抗体中的相应残基同源。人源化可以例如使用各种方法，通过用至少一部分啮齿动物或兔可变区取代人类抗体的相应区域来进行(参见例如，美国专利号5,585,089和5,693,762；Jones等人，1986,Nature[自然]321:522-525；Riechmann等人，1988,Nature[自然]332:323-27；Verhoeyen等人，1988,Science[科学]239:1534-1536)。
在一个方面中，将本文所提供的抗体的轻链和重链可变区(参见表1A、1B、2A、2B、3A和3B)的CDR移植至来自相同或不同系统发生物种的抗体的构架区(FR)。例如，表1A、1B、2A、2B、3A和3B中所列重链和轻链可变区的CDR可以移植至共有人类FR中。为了确定共有人类FR，可以比对来自若干人类重链或轻链氨基酸序列的FR以鉴别共有氨基酸序列。可替代地，可以将来自一条重链或轻链的经移植可变区与不同于本文所披露的特定重链或轻链的恒定区的恒定区一起使用。在其他实施例中，经移植的可变区是单链Fv抗体的一部分。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白是完全人类抗体。特异性结合至人类TREM2的完全人类抗体可以使用本文所描述的免疫原或其片段，例如由SEQ IDNO:1和2的序列组成的多肽或实例1中所描述的免疫原产生。“完全人类抗体”是包含来源于或指示人类生殖是免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。提供的用于产生完全人类抗体的一种特定方式是小鼠体液免疫系统的“人源化”。将人类免疫球蛋白(Ig)基因座引入内源性Ig基因失活的小鼠中是在小鼠中产生完全人类单克隆抗体(mAb)的一种方式，小鼠是可以免疫接种任何所需抗原的动物。使用完全人类抗体可以使免疫原性和过敏性反应减到最少，这些反应有时是由向人类施用小鼠或小鼠源性mAb作为治疗剂而引起。
可以通过对在不产生内源性免疫球蛋白情况下，能够产生人类抗体谱系的转基因动物(通常为小鼠)免疫接种来产生完全人类抗体。用于此目的的抗原典型地具有六个或更多个连续氨基酸，且任选地与运载体，例如半抗原结合。参见例如，Jakobovits等人，1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]90:2551-2555；Jakobovits等人，1993,Nature[自然]362:255-258；和Bruggermann等人，1993,Year in Immunol.[免疫学年评]7:33。在此类方法的一个实例中，通过使编码小鼠重链和轻链免疫球蛋白链的内源小鼠免疫球蛋白基因座失去能力，并将含有编码人类重链和轻链蛋白质的含人类基因组DNA的基因座的较大片段插入小鼠基因组中来产生转基因动物。接着对具有少于人类免疫球蛋白基因座完全补体的部分修饰的动物进行杂交繁育，以获得具有全部所需免疫系统修饰的动物。当施用免疫原时，这些转基因动物产生对该免疫原具有免疫特异性，同时具有人类而非鼠类氨基酸序列，包括可变区的抗体。有关此类方法的进一步细节，参见例如WO 96/33735和WO 94/02602。有关用于制备人类抗体的转基因小鼠的其他方法描述于美国专利号5,545,807、6,713,610、6,673,986、6,162,963、5,939,598、5,545,807、6,300,129、6,255,458、5,877,397、5,874,299和5,545,806；以及PCT公开WO 91/10741、WO 90/04036、WO 94/02602、WO96/30498、WO 98/24893；以及EP 546073B1和EP 546073A1中。
上述转基因小鼠在本文中称为“HuMab”小鼠，含有编码未重排人类重链(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列以及使内源μ和κ链基因座失活的靶突变的人类免疫球蛋白基因微型基因座(Lonberg等人，1994,Nature[自然]368:856-859)。因此，小鼠展现较低的小鼠IgM和κ表达且对免疫起反应，引入的人类重链和轻链转基因经历类别转换和体细胞突变以产生高亲和力人类IgGκ单克隆抗体(Lonberg和Huszar,1995,Intern.Rev.Immunol.[国际免疫学综述]13:65-93；Harding和Lonberg,1995,Ann.N.Y Acad.Sci.[纽约科学院年鉴]764:536-546)。HuMab小鼠的制备详细描述于以下中：Taylor等人，1992,Nucleic AcidsResearch[核酸研究]20:6287-6295；Chen等人，1993,International Immunology[国际免疫学]5:647-656；Tuaillon等人，1994,J.Immunol.[免疫学杂志]152:2912-2920；Lonberg等人，1994,Nature[自然]368:856-859；Lonberg,1994,Handbook of Exp.Pharmacology[实验药理学手册]113:49-101；Taylor等人，1994,International Immunology[国际免疫学]6:579-591；Lonberg和Huszar,1995,Intern.Rev.Immunol.[国际免疫学综述]13:65-93；Harding和Lonberg,1995,Ann.N.Y Acad.Sci.[纽约科学院年鉴]764:536-546；Fishwild等人，1996,Nature Biotechnology[自然生物技术]14:845-851；前述参考文献通过引用以其整体特此并入，用于所有目的。另参见美国专利号5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,789,650、5,877,397、5,661,016、5,814,318、5,874,299和5,770,429；以及美国专利号5,545,807；国际公开号WO 93/1227、WO 92/22646和WO 92/03918，所有文献的披露内容都通过引用以其整体特此并入，用于所有目的。用于在这些转基因小鼠中产生人类抗体的技术还披露于WO 98/24893和Mendez等人，1997,Nature Genetics[自然遗传学]15:146-156中，其通过引用并入本文中。例如，可以使用HCo7和HCo12转基因小鼠品系产生完全人类抗TREM2抗体。适于产生完全人类抗TREM抗体的一种特定转基因小鼠系是
Figure BDA0002295171410000691
转基因小鼠，描述于实例1和美国专利号6,114,598、6,162,963、6,833,268、7,049,426、7,064,244；Green等人，1994,Nature Genetics[自然遗传学]7:13-21；Mendez等人，1997,Nature Genetics[自然遗传学]15:146-156；Green和Jakobovitis,1998,J.Ex.Med[实验医学杂志],188:483-495；Green,1999,Journal of ImmunologicalMethods[免疫法杂志]231:11-23；Kellerman和Green,Current Opinion inBiotechnology[生物技术新观点]13,593-597,2002，所有文献都通过引用以其整体特此并入。
人类来源的抗体还可使用噬菌体展示技术产生。噬菌体展示描述于例如Dower等人，WO 91/17271；McCafferty等人，WO 92/01047；以及Caton和Koprowski,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报],87:6450-6454(1990)中，其各自通过引用以其整体并入本文中。由噬菌体技术产生的抗体通常在细菌中是以抗原结合片段，例如Fv或Fab片段形式产生，且因此缺乏效应子功能。效应子功能可以通过以下两种策略之一引入：必要时，可以将这些片段工程化成完整抗体以在哺乳动物细胞中表达，或工程化成具有能够触发效应子功能的第二结合位点的双特异性抗体片段。典型地，利用PCR分开克隆抗体的Fd片段(VH-CH1)和轻链(VL-CL)并在组合噬菌体展示文库中随机重组，接着可以针对与特定抗原的结合进行选择。在噬菌体表面上表达这些抗体片段，并利用抗原结合，经数轮抗原结合和再扩增来选择Fv或Fab(且因此选择含有编码该抗体片段的DNA的噬菌体)，此程序称为淘选(panning)。对于抗原具有特异性的抗体片段富集且最终经分离。噬菌体展示技术还可用于使啮齿动物单克隆抗体人源化的方法中，称为“导向选择”(参见Jespers,L.S.,等人，Bio/Technology[生物/技术]12、899-903(1994))。为此，可以将小鼠单克隆抗体的Fd片段与人类轻链文库组合展示，且接着可以用抗原选出由此获得的杂交Fab文库。小鼠Fd片段由此提供导向选择的模板。随后，将所选人类轻链与人类Fd片段文库组合。所得文库的选择获得完全人类Fab。
在使用上述免疫接种及其他技术中的任一种获得产生根据本发明的抗TREM2抗体的细胞后，可以根据如本文所描述的标准程序，通过自其中分离DNA或mRNA并扩增来克隆特定抗体基因。由此产生的抗体可以进行测序并鉴别出CDR，且可以如本文所描述操作编码这些CDR的DNA以产生根据本发明的其他TREM2激动剂抗原结合蛋白或抗体。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白(例如单克隆抗体或其结合片段)与参考抗体，例如本文所描述的抗TREM2抗体中的一种或多种竞争结合至人类TREM2(SEQ ID NO:1)或人类TREM2的细胞外结构域(SEQ ID NO:2)。术语“竞争”是指抗体或其他抗原结合蛋白干扰其他抗体或结合片段与靶(例如人类TREM2)的结合的能力。抗体或结合片段能够干扰另一抗体或结合片段与靶(例如人类TREM2)的结合的程度且因此其是否能称为竞争，可以使用竞争结合测定确定。可以使用多种类型的竞争性结合测定，包括例如：直接或间接固相放射免疫测定(RIA)、直接或间接固相酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见例如Stahli等人，1983,Methods in Enzymology[酶学方法]9:242-253)；直接固相生物素-抗生物蛋白EIA(参见例如Kirkland等人，1986,J.Immunol.[免疫学杂志]137:3614-3619)；直接固相标记测定、直接固相标记夹心测定(参见例如Harlow和Lane,1988,Antibodies,ALaboratory Manual[抗体，实验室手册],Cold Spring Harbor Press[冷泉港出版社])；使用I-125标记的直接固相标记RIA(参见例如Morel等人，1988,Molec.Immunol.[分子免疫学]25:7-15)；直接固相生物素-抗生物素蛋白EIA(参见例如Cheung等人，1990,Virology[病毒学]176:546-552)；基于表面等离激元共振的测定(例如使用
Figure BDA0002295171410000712
系统)；基于生物膜层干涉法的测定(例如使用
Figure BDA0002295171410000711
系统)；和直接标记的RIA(Moldenhauer等人，1990,Scand.J.Immunol.[斯堪的纳维亚免疫学杂志]32:77-82)。典型地，竞争性结合测定涉及使用结合至固体表面的经纯化抗原或带有该抗原的细胞、未标记的测试抗体或其他抗原结合蛋白以及经标记的参考抗体或其他抗原结合蛋白。通过在测试抗体或其他抗原结合蛋白存在下，测定结合至固体表面或细胞的标记的量来测量竞争性抑制。通常，测试抗体或其他抗原结合蛋白是过量存在。由竞争测定鉴别的抗体或其他抗原结合蛋白(即，竞争性抗体和抗原结合蛋白)包括结合至与参考抗体或抗原结合蛋白相同的表位的抗体和抗原结合蛋白。通常，当竞争性抗体或其他抗原结合蛋白过量存在时，其将使参考抗体或其他抗原结合蛋白与靶抗原的特异性结合抑制至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％。在一些情况下，使参考抗体或其他抗原结合蛋白的结合抑制至少80％、85％、90％、95％或97％或更高百分比。在一些实施例中，竞争性抗原结合蛋白(例如抗体或其结合片段)使参考抗体与人类TREM2的结合减少在约40％与约100％之间，例如在约60％与约100％之间，具体地在约70％与约100％之间，且更具体地在约80％与约100％之间。
特别适合检测竞争性结合和的定量测定使用
Figure BDA0002295171410000721
机器，利用表面等离激元共振技术来测量相互作用的程度。示例性的基于
Figure BDA0002295171410000722
的竞争性结合测定涉及将参考抗体固定于传感器芯片。接着，使靶抗原与传感器芯片接触，在该芯片中，靶抗原经固定的参考抗体捕捉。随后，将测试抗体注射至捕捉的靶抗原上。若注射的测试抗体识别的表位不同于固定抗体所识别的表位，则观察到第二结合事件且认为测试抗体不与参考抗体竞争结合至靶抗原。
另一特别适合检测竞争性结合的测定采用与
Figure BDA0002295171410000723
系统(佛特比奥公司(PallForteBio))结合使用的动力学传感器，其使用生物膜层干涉法测量结合相互作用。此类测定描述于实例4中，其中评价了本文所描述的十六种抗TREM2抗体各自相互竞争结合至人类TREM2的能力。表9中提供的分析结果显示，该十六种不同抗体可以分成四个不同的表位分组。即，一组抗体(抗体10E3、13E7、24F4、4C5、4G10、32E3和6E7)彼此竞争结合至人类TREM2，指示其共享人类TREM2上相同或类似的表位。抗体16B8、26A10、26C10、26F2、33B12和5E3彼此竞争结合TREM2，但不与第一组中的抗体或抗体24A10、24G6或25F12竞争，指示此第二组抗体结合至人类TREM2上的不同表位。抗体24A10和24G6共享人类TREM2上的类似表位，因为该两个抗体彼此竞争结合人类TREM2，但不与任何其他抗体竞争。抗体25F12不与任何其他测试抗体竞争结合人类TREM2，指示此抗体结合至又一表位。
在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含选自SEQ ID NO:46-63的序列的轻链可变区和含选自SEQID NO:110-126的序列的重链可变区。在其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含选自SEQ ID NO:153-162的序列的轻链可变区和含选自SEQ ID NO:180-190的序列的重链可变区。在又其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含选自SEQ ID NO:61和295-300的序列的轻链可变区和含选自SEQ ID NO:124和307-312的序列的重链可变区。在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白与一种或多种本文所描述的抗TREM2抗体(包括12G10、26A10、26C10、26F2、33B12、24C12、24G6、24A10、10E3、13E7、14C12、25F12、32E3、24F4、16B8、4C5、6E7、5E3、4G10、V3、V9、V10、V23、V24、V27、V30、V33、V40、V44、V48、V49、V52、V57、V60、V68、V70、V73、V76、V83、V84和V90)竞争结合至人类TREM2。
在一个实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含SEQ ID NO:61的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:124的序列的重链可变区。在此类实施例中，与该参考抗体竞争结合至人类TREM2的抗原结合蛋白将结合与抗体6E7或实例4中所描述的表位分组A中的任何其他抗体(例如10E3、13E7、24F4、4C5、4G10、32E3)相同或类似的表位。
在另一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:125的序列的重链可变区。在此类实施例中，与该参考抗体竞争结合至人类TREM2的抗原结合蛋白将结合与抗体5E3或实例4中所描述的表位分组B中的任何其他抗体(例如16B8、26A10、26C10、26F2、33B12)相同或类似的表位。
在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含SEQ ID NO:52的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:115的序列的重链可变区。在此类实施例中，与该参考抗体竞争结合至人类TREM2的抗原结合蛋白将结合与抗体24G6或抗体24A10(如实例4中所描述的表位分组C)相同或类似的表位。
在又一实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括含SEQ ID NO:56的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:119的序列的重链可变区。在此类实施例中，与该参考抗体竞争结合至人类TREM2的抗原结合蛋白将结合与抗体25F12(如实例4中所描述的表位分组D)相同或类似的表位。
在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含恒定区的一个或多个突变或修饰。例如，在TREM2激动剂抗原结合蛋白包含Fc区(例如单克隆抗体)的实施例中，这些抗原结合蛋白(例如单克隆抗体)的重链恒定区或Fc区可包含一个或多个影响该抗原结合蛋白的糖基化、效应子功能和/或Fcγ受体结合的氨基酸取代。
术语“Fc区”是指免疫球蛋白重链的C末端区域，其可通过木瓜蛋白酶消化完整抗体产生。免疫球蛋白的Fc区一般包含两个恒定结构域，即CH2结构域和CH3结构域，且任选地包含CH4结构域。在某些实施例中，Fc区是来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4免疫球蛋白的Fc区。在一些实施例中，Fc区包含来自人类IgG1或人类IgG2免疫球蛋白的CH2和CH3结构域。Fc区可以保持效应子功能，例如C1q结合、补体依赖性细胞毒性(CDC)、Fc受体结合、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和吞噬作用。在其他实施例中，Fc区可以修饰成降低或消除效应子功能，如以下更详细地描述。
免疫球蛋白Fc区的功能之一是当免疫球蛋白结合其靶时与免疫系统通信。此通常称为“效应子功能”。通信引起ADCC、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和/或CDC。ADCC和ADCP是经由Fc区结合至免疫系统细胞表面上的Fc受体介导。CDC是经由Fc与补体系统，例如C1q的蛋白质结合所介导。在一些实施例中，本发明的抗原结合蛋白，例如单克隆抗体在Fc区中包含一个或多个增强该抗原结合蛋白的效应子功能，包括ADCC活性、CDC活性、ADCP活性和/或清除率或半衰期的氨基酸取代。可以增强效应子功能的示例性氨基酸取代(根据EU编号方案)包括但不限于，E233L、L234I、L234Y、L235S、G236A、S239D、F243L、F243V、P247I、D280H、K290S、K290E、K290N、K290Y、R292P、E294L、Y296W、S298A、S298D、S298V、S298G、S298T、T299A、Y300L、V305I、Q311M、K326A、K326E、K326W、A330S、A330L、A330M、A330F、I332E、D333A、E333S、E333A、K334A、K334V、A339D、A339Q、P396L或前述任一种的组合。
在其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白(例如单克隆抗体)在重链恒定区中包含一个或多个降低效应子功能的氨基酸取代。可以降低效应子功能的示例性氨基酸取代(根据EU编号方案)包括但不限于，C220S、C226S、C229S、E233P、L234A、L234V、V234A、L234F、L235A、L235E、G237A、P238S、S267E、H268Q、N297A、N297G、V309L、E318A、L328F、A330S、A331S、P331S或前述任一种的组合。
糖基化可以促进抗体，特别是IgG1抗体的效应子功能。因此，在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含一个或多个影响结合蛋白糖基化的水平或类型的氨基酸取代。多肽的糖基化典型地是N-连接或O-连接的。N-连接是指碳水化合物部分附接至天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸)是将碳水化合物部分经酶附接至天冬酰胺侧链的识别序列。因此，在多肽中这些三肽序列中任一种的存在产生潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化是指糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附接至羟基氨基酸，最常见为丝氨酸或苏氨酸，不过还可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。
在某些实施例中，通过向例如本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白的Fc区中添加一个或多个糖基化位点来增加该结合蛋白的糖基化。在抗原结合蛋白中添加糖基化位点通常可以通过改变氨基酸序列，以使其含有上述三肽序列(对于N-连接的糖基化位点)中的一个或多个来实现。还可通过起始序列中一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基的添加或取代来进行改变(对于O-连接的糖基化位点)。为便利起见，可以通过在DNA层面上的变化，特别是通过使编码靶多肽的DNA在预先选择的碱基处突变，由此产生会翻译成所需氨基酸的密码子，来改变抗原结合蛋白的氨基酸序列。
本发明还涵盖产生具有改变的碳水化合物结构而引起效应子活性改变的TREM2抗原结合蛋白分子，包括岩藻糖基化不存在或减少的展现改善的ADCC活性的抗原结合蛋白。本领域中已知各种减少或消除岩藻糖基化的方法。例如，通过使抗体分子与FcγRIII受体结合来介导ADCC效应子活性，经显示此取决于在CH2结构域N297残基处N-连接的糖基化的碳水化合物结构。相较于天然、岩藻糖基化抗体，非岩藻糖基化抗体以增加的亲和力结合此受体且更有效地触发FcγRIII介导的效应子功能。例如，在α-1,6-岩藻糖基转移酶已敲除的CHO细胞中重组产生非岩藻糖基化抗体使抗体具有100倍增加的ADCC活性(参见Yamane-Ohnuki等人，Biotechnol Bioeng.[生物技术及生物工程]87(5):614-22,2004)。通过降低α-1,6-岩藻糖基转移酶或岩藻糖基化路径中的其他酶的活性，例如通过siRNA或反义RNA处理，将细胞系工程化成敲除酶，或与选择性糖基化抑制剂一起培养可以实现类似作用(参见Rothman等人，Mol Immunol.[分子免疫学]26(12):1113-23,1989)。一些宿主细胞系，例如Lec13或大鼠杂交瘤YB2/0细胞系天然地产生岩藻糖基化程度较低的抗体(参见Shields等人，J Biol Chem.[生物化学杂志]277(30):26733-40,2002；以及Shinkawa等人，J BiolChem.[生物化学杂志]278(5):3466-73,2003)。还已确定例如经由在过度表达GnTIII酶的细胞中重组产生抗体以增加等分碳水化合物的含量，可增加ADCC活性(参见Umana等人，NatBiotechnol.[自然生物技术]17(2):176-80,1999)。
在其他实施例中，通过例如自本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白的Fc区移除一个或多个糖基化位点来减少或消除该结合蛋白的糖基化。在一些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白是无糖基化的人类单克隆抗体，例如无糖基化的人类IgG1单克隆抗体。消除或改变N-连接的糖基化位点的氨基酸取代可以减少或消除抗原结合蛋白的N-连接的糖基化。在某些实施例中，本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含在位置N297(根据EU编号方案)处的突变，例如N297Q、N297A或N297G。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自人类IgG1抗体的在位置N297处具有突变的Fc区。在一个特定实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自人类IgG1抗体的具有N297G突变的Fc区。例如，在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:202的序列的重链恒定区。
为了改善含N297突变的分子的稳定性，可以对TREM2激动剂抗原结合蛋白的Fc区进行进一步工程化。例如，在一些实施例中，Fc区中的一个或多个氨基酸经半胱氨酸取代以促进二聚体状态下二硫键的形成。对应于IgG1 Fc区的V259、A287、R292、V302、L306、V323或I332(根据EU编号方案)的残基因此可以经半胱氨酸取代。优选地，特定残基对经半胱氨酸取代以使其优先彼此形成二硫键，由此限制或防止二硫键混乱。优选对包括但不限于，A287C与L306C、V259C与L306C、R292C与V302C，以及V323C与I332C。在某些实施例中，本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自人类IgG1抗体的具有R292C和V302C突变的Fc区。在此类实施例中，Fc区还可包含N297突变，例如N297G突变。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:203的序列的重链恒定区。
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白(例如单克隆抗体)的铰链区和/或重链CH1结构域和/或轻链恒定区可以经修饰以减少或消除二硫键异质性。已经观察到IgG2抗体的结构异质性，其中IgG2抗体铰链区和CH1区中的二硫键可经改组而产生不同结构的二硫键同功型(IgG2A、IgG2B和IgG2A-B)，这些同功型可以具有不同的活性程度。参见例如Dillon等人，J.Biol.Chem.[生物化学杂志]，第283卷：16206-16215；Martinez等人，Biochemistry[生物化学]，第47卷：7496-7508,2008；和White等人，Cancer Cell[癌症细胞]，第27卷：138-148,2015。可以在铰链区、CH1结构域和/或轻链恒定区中进行氨基酸取代以促进单个二硫键同功型的形成或将抗原结合蛋白(例如单克隆抗体)锁定在特定二硫键同功型(例如IgG2A或IgG2B)。此类突变在WO 2009/036209和White等人,Cancer Cell,第27卷:138-148,2015中有描述，二者通过引用以其整体特此并入，且包括在重链中的C131S、C219S和C220S(根据EU编号方案)突变和在轻链中的C214S(根据EU编号方案)突变。在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白是人类IgG2抗TREM2激动剂抗体。在一些此类实施例中，TREM2激动剂抗体在其重链中包含C131S突变(根据EU编号方案)。在其他实施例中，TREM2激动剂抗体在其轻链中包含C214S突变(根据EU编号方案)和在其重链中包含C220S突变(根据EU编号方案)。在又其他实施例中，TREM2激动剂抗体在其轻链中包含C214S突变(根据EU编号方案)和在其重链中包含C219S突变(根据EU编号方案)。
在其他实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白是包含来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人类IgG1抗体的Fc区的抗TREM2激动剂抗体。据报导，IgG2抗体铰链区中二硫键的独特布置使某些抗癌抗体具有增强的刺激性活性(White等人，CancerCell[癌症细胞]，第27卷：138-148,2015)。此增强的活性可以通过将IgG1抗体的CH1和铰链区替换成IgG2抗体中的CH1和铰链区而转移至IgG1型抗体(White等人，2015)。IgG2铰链区包括氨基酸序列ERKCCVECPPCP(SEQ ID NO:206)。来自人类IgG2抗体的CH1和铰链区的氨基酸序列可包含氨基酸序列ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP(SEQ ID NO:207)。因此，在一些实施例中，抗TREM2激动剂抗体包含SEQ ID NO:207的序列与来自人类IgG1抗体的Fc区的组合。在此类实施例中，抗TREM2抗体可包含以上描述的突变中的一种或多种以将抗TREM2抗体锁定于特定二硫键同功型。例如，在一个实施例中，抗TREM2抗体包含来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人类IgG1抗体的Fc区，且在其重链中包含C131S突变(根据EU编号方案)。在另一实施例中，抗TREM2抗体包含来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人类IgG1抗体的Fc区，且在其轻链中包含C214S突变(根据EU编号方案)并在其重链中包含C220S突变(根据EU编号方案)。在又一实施例中，抗TREM2抗体包含来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人类IgG1抗体的Fc区，且在其轻链中包含C214S突变(根据EU编号方案)并在其重链中包含C219S突变(根据EU编号方案)。
在抗TREM2抗体包含来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人类IgG1抗体的Fc区的实施例中，这些抗TREM2抗体可以在Fc区中包含上述突变中的任一种以调节抗体的糖基化。例如，此类抗TREM2抗体的人类IgG1 Fc区可在其重链氨基酸位置N297(根据EU编号方案)处包含突变。在一个特定实施例中，N297突变是N297G突变。在某些实施例中，Fc区还可在其重链中包含R292C和V302C突变(根据EU编号方案)。
在某些实施例中，本发明的抗TREM2抗体包含来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人类IgG1抗体的Fc区，其中该Fc区包含以下氨基酸序列：
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWY
VDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS
NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN
VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:281)。
在其他实施例中，本发明的抗TREM2抗体包含来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人类IgG1抗体的Fc区，其中该Fc区包含以下氨基酸序列：
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWY
VDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS
NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN
VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:282)。
还可能希望对本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白进行修饰以增加血清半衰期，例如通过并入或添加补救受体结合表位(例如通过使适当区域突变或通过将该表位并入肽标签中，接着使其与抗原结合蛋白在任一端或在中间融合，例如通过DNA或肽合成；参见例如WO 96/32478)或添加例如PEG或其他水溶性聚合物的分子，包括多糖聚合物。该补救受体结合表位优选构成这样一种区域，其中来自Fc区中一个或两个环的任一个或多个氨基酸残基转移至抗原结合蛋白中的类似位置。甚至更优选地，来自Fc区中一个或两个环的三个或更多个氨基酸残基经转移。又更优选地，自Fc区(例如IgG Fc区)的CH2结构域取得表位并将其转移至抗原结合蛋白的CH1、CH3或VH区，或超过一个此类区域。可替代地，自Fc区的CH2结构域取得表位并将其转移至抗原结合蛋白的CL区或VL区，或这两个区域。有关Fc变体及其与补救受体相互作用的说明，参见国际公开WO 97/34631和WO 96/32478。
在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:334的序列的轻链，和含SEQ ID NO:335的序列的重链。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:334的序列的轻链，和含SEQ ID NO:336的序列的重链。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:337的序列的轻链，和含SEQ ID NO:338的序列的重链。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:339的序列的轻链，和含SEQ ID NO:340的序列的重链。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包括含SEQ ID NO:341的序列的轻链，和含SEQ ID NO:342的序列的重链。
在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含由以下组成或基本上由以下组成的轻链：SEQ ID NO:334、337、339或341的氨基酸序列。在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含由以下组成或基本上由以下组成的重链：SEQ ID NO:335、336、338、340或342的氨基酸序列。在一个特定实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链和重链，其中(a)轻链由SEQ ID NO:334的氨基酸序列组成或基本上由其组成且重链由SEQ ID NO:335的氨基酸序列组成或基本上由其组成；(b)轻链由SEQ ID NO:334的氨基酸序列组成或基本上由其组成且重链由SEQ ID NO:336的氨基酸序列组成或基本上由其组成；(c)轻链由SEQ ID NO:337的氨基酸序列组成或基本上由其组成且重链由SEQ ID NO:338的氨基酸序列组成或基本上由其组成；(d)轻链由SEQ ID NO:339的氨基酸序列组成或基本上由其组成且重链由SEQ ID NO:340的氨基酸序列组成或基本上由其组成；或(e)轻链由SEQ ID NO:341的氨基酸序列组成或基本上由其组成且重链由SEQ ID NO:342的氨基酸序列组成或基本上由其组成。
在一些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白是“双特异性的”，意味着这些抗原结合蛋白能够特异性结合至两个不同的抗原，即人类TREM2和第二抗原。在某些实施例中，该第二抗原是有助于跨血脑屏障转运的蛋白质，例如介导血脑屏障转运的受体。此类受体包括但不限于，胰岛素受体、运铁蛋白受体、瘦素受体、胰岛素样生长因子(IGF)受体、低密度脂蛋白受体(例如低密度脂蛋白受体相关蛋白质8(LRP8)、低密度脂蛋白受体相关蛋白质1(LRP1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白质2(LRP2))、肝素结合的表皮生长因子样生长因子、CD98重链(CD98hc)、基础免疫球蛋白、人类跨膜蛋白30A(TMEM30A)和1型葡萄糖转运蛋白(Glut1)。在一个实施例中，第二抗原是人类胰岛素受体。在一个实施例中，第二抗原是人类胰岛素样生长受体。在另一实施例中，第二抗原是人类运铁蛋白受体。在一个实施例中，第二抗原是TMEM30A。在这些实例中的任一个中，人类TREM2结合结构域可以在多价双特异性抗体(IgG-Fab、IgG-scFv)的N末端或C末端处，或以多特异性结合形式表达，如Spiess,C.等人，Molecular Immunology[分子免疫学]67,95-106(2015)和Brinkman,U.等人，MABS 9(2)182-212(2017)中所描述。
在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白是多价的。该结合蛋白的价态表示该结合蛋白内个别抗原结合结构域的数量。例如，关于本发明的抗原结合蛋白的术语“单价”、“二价”和“四价”分别是指具有一个、两个和四个抗原结合结构域的结合蛋白。因此，多价抗原结合蛋白包含两个或多个抗原结合结构域。在一些实施例中，本发明的双特异性抗原结合蛋白是二价的。因此，此类双特异性二价抗原结合蛋白含有两个抗原结合结构域：一个抗原结合结构域结合至人类TREM2且一个抗原结合结构域结合至第二抗原，例如有助于跨血脑屏障转运的抗原。在其他实施例中，双特异性抗原结合蛋白是多价的。例如，在某些实施例中，双特异性抗原结合蛋白是三价或四价的，包含三个或四个抗原结合结构域：一个或两个抗原结合结构域结合至人类TREM2且一个或两个抗原结合结构域结合至第二抗原，例如有助于跨血脑屏障转运的抗原。
术语“抗原结合结构域”与“结合结构域”可互换使用，是指抗原结合蛋白中含有与抗原相互作用的氨基酸残基且赋予抗原结合蛋白对抗原的特异性和亲和力的区域。结合结构域可以来源于抗体或其特异性结合至抗原的功能片段。在某些实施例中，本发明的双特异性抗原结合蛋白包含一个结合至人类TREM2的抗原结合结构域和一个结合至人胰岛素样受体的抗原结合结构域。在其他实施例中，本发明的双特异性抗原结合蛋白包含一个结合至人类TREM2的抗原结合结构域和一个结合至人类运铁蛋白受体的抗原结合结构域。在一些实施例中，本发明的双特异性抗原结合蛋白包含两个结合至人类TREM2的抗原结合结构域和两个结合至人胰岛素样受体的抗原结合结构域。在其他实施例中，本发明的双特异性抗原结合蛋白包含两个结合至人类TREM2的抗原结合结构域和两个结合至人类运铁蛋白受体的抗原结合结构域。在一个实施例中，本发明的双特异性抗原结合蛋白包含一个或两个结合至人类TREM2的抗原结合结构域和一个或两个结合至人类胰岛素样生长受体的抗原结合结构域。在一个实施例中，本发明的双特异性抗原结合蛋白包含一个或两个结合至人类TREM2的抗原结合结构域和一个或两个结合至TMEM30A的抗原结合结构域。双特异性TREM2激动剂抗原结合蛋白的结合至人类TREM2的抗原结合结构域可以来源于本文所描述的抗TREM2激动剂抗体中的任一种。结合至人类胰岛素受体、人类胰岛素样生长受体、TMEM30A或人类运铁蛋白受体的抗原结合结构域可以来源于本领域中已知的针对这些受体的单克隆抗体，例如美国专利号7,388,079、美国专利号8,663,598；以及美国专利公开号2015/0110791，Abulrob,A.等人，J.Neurochem.[神经化学杂志]95,1201–1214(2005)和Muruganandam,A.等人，FASEB J.16,240–242(2002)中所描述的这些单克隆抗体。在某些实施例中，结合至人类胰岛素受体、人类胰岛素样生长受体、TMEM30A或人类运铁蛋白受体的抗原结合结构域是单结构域抗体。在某些实施例中，人类TREM2结合结构域是在多价双特异性抗体(IgG-Fab、IgG-scFv)的N末端或C末端处，或以本领域中已知的多特异性结合形式表达，如Spiess,C.等人，Molecular Immunology[分子免疫学]67,95-106(2015)和Brinkman,U.等人，MABS 9(2)182-212(2017)中所描述的这些形式。
制备双特异性抗体的方法是本领域中已知的。一种制备“双特异性”抗原结合蛋白或抗体的此类方法涉及杂交瘤融合或Fab’片段连接。参见例如Songsivilai和Lachmann,1990,Clin.Exp.Immunol.[临床与实验免疫学]79:315-321；Kostelny等人，1992,J.Immunol.[免疫学杂志]148:1547-1553。另一种方法涉及对重链Fc部分进行工程化，例如以产生“节”和“孔”，由此当在细胞中共表达时，有助于形成重链异二聚体。参见例如WO 96/027011。又一种方法还涉及对重链Fc部分进行工程化但使用静电转向技术以当在细胞中共表达时促进重链异二聚体的形成，同时阻止同二聚体的形成。参见例如WO 2009089004和WO2014081955。
本发明包括一个或多个编码本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白，例如抗TREM2激动剂单克隆抗体的经分离的多核苷酸或经分离的核酸。此外，本发明涵盖包含这些核酸的载体、包含这些核酸的宿主细胞或细胞系，和制备本发明的抗原结合蛋白的方法。这些核酸包含例如编码抗原结合蛋白的全部或一部分，例如本发明抗体的一条或两条链，或其片段、衍生物、突变蛋白或变体的多核苷酸；足以用作杂交探针的多核苷酸；用于对编码多肽的多核苷酸进行鉴别、分析、突变或扩增的PCR引物或测序引物；用于抑制多核苷酸表达的反义寡核苷酸；以及前述的互补序列。适当时，这些核酸可以为任何长度以用于所需用途或功能，且可包含一个或多个额外序列，例如调控序列，和/或作为较长核酸，例如载体的一部分。本发明的核酸分子包括呈单链和双链形式的DNA和RNA，以及相应互补序列。DNA包括例如cDNA、基因组DNA、化学合成的DNA、通过PCR扩增的DNA及其组合。本发明的核酸分子包括全长基因或cDNA分子，以及其片段组合。本发明的核酸可以来源于人类来源以及非人类物种。
来自免疫球蛋白或其区域(例如可变区、Fc区等)的相关氨基酸序列或感兴趣的多肽可以通过直接蛋白质测序确定，且适合编码核苷酸序列可以根据通用密码子表设计。可替代地，可以使用常规程序，例如实例3中所描述的方法，自产生本发明的单克隆抗体的细胞(例如杂交瘤)分离出编码此类抗体或结合片段的基因组或cDNA并测序。
“经分离的核酸”在本文中与“经分离的多核苷酸”可互换使用，在自天然存在的来源分离核酸的情况下，是指已与分离出核酸的生物体基因组中存在的相邻基因序列分离的核酸。在由模板酶法合成或化学合成核酸，例如PCR产物、cDNA分子或寡核苷酸的情况下，应理解，由此类方法获得的核酸是经分离的核酸。经分离的核酸分子是指呈独立片段形式或作为较大核酸构建体的一种组分的核酸分子。在一个优选实施例中，核酸基本上不含污染性内源物质。该核酸分子优选来源于基本上纯的形式和能够利用标准生物化学方法(例如Sambrook等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory[冷泉港实验室],Cold Spring Harbor[冷泉港],NY[纽约州](1989)中概述的方法)鉴别、操作和回收其组分核苷酸序列的量或浓度分离至少一次的DNA或RNA。此类序列优选是以不含典型地存在于真核基因中的内部非翻译序列或内含子的可读框形式提供和/或构建。非翻译DNA序列可以存在于可读框的5'或3'处，其中这些序列不干扰编码区的操作或表达。除非另外说明，否则本文所论述的任何单链多核苷酸序列的左手端是5’端；双链多核苷酸序列的左手方向称为5’。新生RNA转录物的5'至3'添加方向称为转录方向；在序列与RNA转录物相同的DNA链上作为RNA转录物5'端的5'端的序列区称为“上游序列”；在序列与RNA转录物相同的DNA链上作为RNA转录物3'端的3'端的序列区称为“下游序列”。
本发明还包括在中等严格度条件下，且更优选在高严格度条件下与编码如本文所描述的多肽的核酸杂交的核酸。影响杂交条件选择的基本参数以及有关设计适合条件的指导例如陈述于以下中：Sambrook,Fritsch和Maniatis(1989,Molecular Cloning:ALaboratory Manual[分子克隆：实验室手册],Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社],Cold Spring Harbor[冷泉港],N.Y.[纽约州]，第9和11章；和CurrentProtocols in Molecular Biology[当前分子生物学技术],1995,Ausubel等人编辑，JohnWiley&Sons,Inc.[约翰威立父子有限公司]，第2.10和6.3-6.4部分)，且可以由本领域普通技术人员基于例如DNA的长度和/或碱基组成容易地确定。实现中等严格度杂交条件的一种方式涉及使用一种含5×SSC、0.5％SDS、1.0mM EDTA(pH 8.0)的预洗涤溶液、含约50％甲酰胺、6×SSC的杂交缓冲液和约55℃杂交温度(或其他类似的杂交溶液，例如含有约50％甲酰胺的杂交溶液，和约42℃杂交温度)，以及约60℃和0.5×SSC、0.1％SDS的洗涤条件。一般而言，高严格度条件定义为如上所述的杂交条件，但利用在约68℃下0.2×SSC、0.1％SDS的洗涤条件。SSPE(1×SSPE是0.15M NaCl、10mM NaH2PO4和1.25mM EDTA，pH 7.4)可以取代杂交和洗涤缓冲液中的SSC(1×SSC是0.15M NaCl和15mM柠檬酸钠)；洗涤是在杂交完成之后进行，持续15分钟。应理解，必要时，可以通过应用本领域普通技术人员所知和以下进一步描述的管理杂交反应和双链体稳定性的基本原理调整洗涤温度和洗涤液盐浓度以达到所需的严格度(参见例如Sambrook等人，1989)。
当核酸与未知序列的靶核酸杂交时，假定杂交体长度是杂交核酸的长度。当序列已知的核酸杂交时，杂交体长度可以通过比对核酸序列并鉴别序列互补性最佳的一个或多个区域来确定。预期长度小于50个碱基对的杂交体的杂交温度应比杂交体的熔融温度(Tm)低5℃至10℃，其中Tm是根据以下等式确定。对于长度小于18个碱基对的杂交体，Tm(℃)＝2(A+T碱基的数量)+4(G+C碱基的数量)。对于长度超过18个碱基对的杂交体，Tm(℃)＝81.5+16.6(log10[Na+])+0.41(％G+C)-(600/N)，其中N是杂交体中碱基的数量，且[Na+]是杂交缓冲液中钠离子的浓度(对于1×SSC，[Na+]＝0.165M)。优选地，每个此类杂交核酸的长度为至少15个核苷酸(或更优选地，至少18个核苷酸，或至少20个核苷酸，或至少25个核苷酸，或至少30个核苷酸，或至少40个核苷酸，或最优选地至少50个核苷酸)，或为其所杂交的本发明的核酸长度的至少25％(更优选至少50％，或至少60％，或至少70％且最优选地至少80％)，且与其所杂交的本发明的核酸具有至少60％(更优选至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％且最优选地至少99.5％)序列一致性，其中序列一致性是当如以下更详细地描述，比对达到最大重叠和一致性，同时序列空位最少时通过比较杂交核酸的序列来确定。
如本文所概述，可以通过使用盒式或PCR诱变，或本领域中熟知的其他技术对编码多肽的DNA中的核苷酸进行位点特异性诱变，以产生编码变体的DNA，且随后在细胞培养中表达重组DNA来制备抗原结合蛋白的变体，包括本文所描述的变体。不过，还可使用确定的技术，通过体外合成制备包含具有多达约100-150个残基的变体CDR的抗原结合蛋白。这些变体典型地展现与天然存在的类似物相同的定性生物活性，例如结合至抗原。此类变体包括例如在抗原结合蛋白的氨基酸序列内残基的缺失和/或插入和/或取代。进行缺失、插入和取代的任何组合以获得最终构建体，只要最终构建体具有所需的特征。氨基酸变化还可能改变抗原结合蛋白的翻译后加工，例如改变糖基化位点的数目或位置。在某些实施例中，抗原结合蛋白变体的制备意图修饰直接参与表位结合的氨基酸残基。在其他实施例中，出于本文所论述的目的，需要对不直接参与表位结合的残基或不以任何方式参与表位结合的残基进行修饰。还涵盖在CDR区、构架区和/或恒定区中的任一个内进行的诱变。本领域普通技术人员可以采用协方差分析设计抗原结合蛋白的氨基酸序列中的有用修饰。参见例如，Choulier等人，Proteins[蛋白质]41:475-484,2000；Demarest等人，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]335:41-48,2004；Hugo等人，Protein Engineering[蛋白质工程化]16(5):381-86,2003；Aurora等人，美国专利公开号2008/0318207A1；Glaser等人，美国专利公开号2009/0048122A1；Urech等人，WO 2008/110348A1；Borras等人，WO 2009/000099A2。由协方差分析确定的此类修饰可以改善抗原结合蛋白的效力、药物代谢动力学、药效学和/或可制造特征。
表6显示编码本文所描述的抗TREM2抗体的轻链和重链可变区的示例性核酸序列。可以使用编码抗TREM2抗体可变区的多核苷酸构建本文所描述的抗原结合蛋白。
表6.示例性抗TREM2抗体可变区核酸序列
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编码本发明抗原结合蛋白的抗TREM2结合结构域的经分离核酸可包含与表6中所列核苷酸序列中的任一个至少80％一致、至少90％一致、至少95％一致或至少98％一致的核苷酸序列。在一些实施例中，编码抗TREM2抗体轻链可变区的经分离核酸包含与选自SEQID NO:208-236和313-318的序列至少80％一致、至少90％一致、至少95％一致或至少98％一致的序列。在某些实施例中，编码抗TREM2抗体轻链可变区的经分离核酸包含选自SEQ IDNO:208-236和313-318的序列。在相关实施例中，编码抗TREM2抗体重链可变区的经分离核酸包含与选自SEQ ID NO:237-264和319-325的序列至少80％一致、至少90％一致、至少95％一致或至少98％一致的序列。在其他相关实施例中，编码抗TREM2抗体重链可变区的经分离核酸包含选自SEQ ID NO:237-264和319-325的序列。
表6中所提供的核酸序列仅为示例性的。本领域普通技术人员应理解，由于遗传密码的简并性，所以可能获得极大数量的核酸，其全部编码本文所描述的抗原结合蛋白的CDR、可变区以及重链和轻链或其他组分。因此，通过以不改变编码蛋白的氨基酸序列的方式简单地修饰一个或多个密码子序列来标识特定氨基酸序列，本领域普通技术人员可以制得多种不同的核酸。
本发明还包括载体，其包含一个或多个编码本发明抗原结合蛋白的一种或多种组分(例如可变区、轻链和重链)的核酸。术语“载体”是指用于将蛋白质编码信息转移至宿主细胞中的任何分子或实体(例如核酸、质粒、噬菌体或病毒)。载体的实例包括但不限于，质粒、病毒载体、非游离型哺乳动物载体和表达载体，例如重组表达载体。如本文所使用，术语“表达载体”或“表达构建体”是指含有所需编码序列和在特定宿主细胞中表达可操作地连接的编码序列所需的适当核酸控制序列的重组DNA分子。表达载体可包括但不限于，影响或控制转录、翻译且在存在内含子时，影响与其可操作地连接的编码区的RNA剪接的序列。在原核生物中表达所需的核酸序列包括启动子、任选地操作子序列、核糖体结合位点和可能地存在的其他序列。已知真核细胞可利用启动子、增强子以及终止和聚腺苷酸化信号。可操作地连接至感兴趣的编码序列的分泌信号肽序列还可任选地由表达载体编码，由此使表达的多肽可以由重组宿主细胞分泌，使得在需要时，更容易自细胞中分离出感兴趣的多肽。例如，在一些实施例中，信号肽序列可以与表1A、1B、2A、2B、3A和3B中所列可变区多肽序列中的任一个的氨基末端附接/融合。在某些实施例中，具有氨基酸序列MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC(SEQ ID NO:265)的信号肽与表1A、1B、2A、2B、3A和3B中的可变区多肽序列中的任一个的氨基末端融合。在其他实施例中，具有氨基酸序列MAWALLLLTLLTQGTGSWA(SEQ ID NO:266)的信号肽与表1A、1B、2A、2B、3A和3B中的可变区多肽序列中的任一个的氨基末端融合。在又其他实施例中，具有氨基酸序列MTCSPLLLTLLIHCTGSWA(SEQ ID NO:267)的信号肽与表1A、1B、2A、2B、3A和3B中的可变区多肽序列中的任一个的氨基末端融合。可以与本文所描述的可变区多肽序列中的任一个的氨基末端融合的其他适合信号肽序列包括：MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG(SEQ ID NO:268)、MEWTWRVLFLVAAATGAHS(SEQ ID NO:269)、METPAQLLFLLLLWLPDTTG(SEQ ID NO:270)、MKHLWFFLLLVAAPRWVLS(SEQ ID NO:272)、MEWSWVFLFFLSVTTGVHS(SEQ ID NO:273)、MDIRAPTQLLGLLLLWLPGAKC(SEQ ID NO:274)、MDIRAPTQLLGLLLLWLPGARC(SEQ ID NO:275)、MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATF(SEQ ID NO:276)、MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARC(SEQ ID NO:277)、METGLRWLLLVAVLKGVQC(SEQ ID NO:278)、METGLRWLLLVAVLKGVQCQE(SEQ ID NO:279)、和MDMRAPTQLLGLLLLWLPGARC(SEQ ID NO:280)。其他信号或分泌肽是本领域普通技术人员已知的且可以与表1A、1B、2A、2B、3A和3B中所列可变区多肽链中的任一个融合，例如以促进或优化在特定宿主细胞中的表达。
典型地，用于宿主细胞中以产生本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的表达载体将含有用于质粒维持以及用于克隆和表达编码抗原结合蛋白各组分的外源核苷酸序列的序列。在某些实施例中，统称为“侧接序列”，典型地将包括以下核苷酸序列中的一个或多个：启动子、一个或多个增强子序列、复制起点、转录终止序列、含有供体和受体剪接位点的完整内含子序列、编码用于多肽分泌的前导序列的序列、核糖体结合位点、聚腺苷酸化序列、用于插入编码待表达的多肽的核酸的多接头区和可选择标记物组件。这些序列分别于下文论述。
任选地，载体可以含有“标签”编码序列，即，位于多肽编码序列的5'或3'端的寡核苷酸分子；该寡核苷酸标签序列编码聚组氨酸(例如六组氨酸)、FLAG、HA(血凝素流感病毒)、myc或现有可商购抗体所针对的另一“标签”分子。该标签典型地在多肽表达时与该抗体融合，且可以用作一种自宿主细胞亲和纯化或检测多肽的方式。亲和纯化可以通过例如柱层析法，使用针对标签的抗体作为亲和基质来实现。任选地，随后可以通过各种方式，例如使用某些肽酶裂解，自纯化的多肽移除标签。
侧接序列可以为同源的(即，来自与宿主细胞相同的物种和/或品系)、异源的(即，来自与宿主细胞物种或品系不同的物种)、混合的(即，来自超过一种来源的侧接序列的组合)、合成的或天然的。因此，侧接序列的来源可以为任何原核或真核生物体、任何脊椎动物或非脊椎动物生物体，或任何植物，只要该侧接序列在宿主细胞机器中起作用且可以经宿主细胞机器活化。
可用于本发明载体中的侧接序列可以通过本领域中熟知的若干方法中的任一种获得。典型地，可用于本文中的侧接序列将预先通过定位和/或通过限制性核酸内切酶消化鉴别且因此可以使用适当限制性核酸内切酶自适当组织来源分离。在一些情况下，侧接序列的完全核苷酸序列可能为已知的。此处，侧接序列可以使用常规核酸合成或克隆方法合成。
无论已知侧接序列的全部抑或仅一部分，其均可使用聚合酶链反应(PCR)和/或通过用适合探针，例如来自相同或另一物种的寡核苷酸和/或侧接序列片段筛选基因组文库来获得。若侧接序列未知，则可以自可能含有例如编码序列或甚至另外一个或多个基因的较大DNA片段分离含有侧接序列的DNA片段。可以通过限制性核酸内切酶消化产生适当DNA片段，随后使用琼脂糖凝胶纯化、
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柱层析法(加利福尼亚州查茨沃斯(Chatsworth,CA))或熟练技术人员已知的其他方法分离来实现分离。本领域普通技术人员将易于了解实现此目的的适合酶的选择。
复制起点典型地是可商购的原核表达载体的一部分，且该起点有助于在宿主细胞中扩增载体。若所选载体不含复制起点，则可以基于已知序列以化学方式合成，并将其连接至载体中。例如，来自质粒pBR322(马萨诸塞州贝弗利的新英格兰生物实验室(New EnglandBiolabs,Beverly,MA))的复制起点适合大多数革兰氏阴性细菌，且各种病毒起点(例如SV40、多瘤病毒、腺病毒、水疱性口炎病毒(VSV)，或乳头瘤病毒，例如HPV或BPV)可用于在哺乳动物细胞中克隆载体。一般而言，哺乳动物表达载体不需要复制起点组分(例如，通常仅使用SV40起点，因为其还含有病毒早期启动子)。
转录终止序列典型地位于多肽编码区3'端且用于终止转录。通常，原核细胞中的转录终止序列是富含G-C的片段，后接聚T序列。尽管该序列易于自文库克隆或甚至作为载体的一部分商购获得，但其还可使用核酸合成方法容易地合成。
可选择标记物基因编码使选择性培养基中生长的宿主细胞存活和生长所需的蛋白质。典型的选择标记物基因编码的蛋白质(a)赋予原核宿主细胞对抗生素或其他毒素，例如氨苄青霉素(ampicillin)、四环素或卡那霉素(kanamycin)的抗性；(b)补充细胞的营养缺陷；或(c)供应无法自复合物培养基或成分确定的培养基获得的必要养分。特定可选择标记物是卡那霉素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因。有利的是，还可使用新霉素抗性基因在原核和真核宿主细胞中进行选择。
可以使用其他可选择基因扩增有待表达的基因。扩增是使生长或细胞存活必要的蛋白质产生所需的基因在连续数代重组细胞的染色体内串联性复制的过程。适用于哺乳动物细胞的可选择标记物的实例包括二氢叶酸还原酶(DHFR)和无启动子胸苷激酶基因。使哺乳动物细胞转化株处于选择压力下，其中由于载体中存在可选择基因，所以仅转化株唯一适于存活。选择压力是通过在连续地增加培养基中选择剂的浓度的条件下培养经转化细胞，由此使可选择基因和编码另一基因，例如本文所描述的抗原结合蛋白的一种或多种组分的DNA扩增来施加。因此，由扩增的DNA合成较多量的多肽。
核糖体结合位点通常是mRNA翻译起始所必需的，且以Shine-Dalgarno序列(原核生物)或Kozak序列(真核生物)表征。该组件典型地位于启动子的3'端且在待表达的多肽编码序列的5'端。在某些实施例中，一个或多个编码区可以可操作地连接至内部核糖体结合位点(IRES)，由此允许自单一RNA转录物翻译两个可读框。
在一些情况下，例如在真核宿主细胞表达系统中需要糖基化的情况下，可以操作各种前序列或原序列以改善糖基化或产率。例如，可以改变特定信号肽的肽酶裂解位点，或添加原序列，这些序列还可影响糖基化。最终蛋白质产物可以在位置-1(相对于成熟蛋白质的第一个氨基酸)具有一个或多个易于表达的另外的氨基酸，这些氨基酸可能未完全移除。例如，最终蛋白质产物可能具有一个或两个在肽酶裂解位点中发现的氨基酸残基附接至氨基末端。可替代地，当酶在成熟多肽内的此类区域切割时，使用一些酶裂解位点可能产生所需多肽的略微截短的形式。
本发明的表达和克隆载体典型地将含有由宿主生物体识别且可操作地连接至编码多肽的分子的启动子。如本文所使用，术语“可操作地连接”是指两个或多个核酸序列以使得产生能够引导给定基因的转录和/或所需蛋白质分子的合成的核酸分子的方式连接。例如，载体中“可操作地连接”至蛋白质编码序列的控制序列是与该编码序列连接以使得在与控制序列的转录活性相适应的条件下实现该蛋白质编码序列的表达。更具体地，若启动子和/或增强子序列(包括顺式作用转录控制组件的任何组合)在适合宿主细胞或其他表达系统中刺激或调节编码序列的转录，则其可操作地连接至该编码序列。
启动子是位于结构基因的起始密码子上游(即，5')(一般在约100至1000bp内)的非转录序列，其控制结构基因的转录。启动子按照惯例分为以下两类之一：诱导性启动子和组成性启动子。诱导性启动子起始处于其控制下的DNA响应于培养条件的某种变化，例如养分的存在或不存在，或者温度变化以较高水平转录。另一方面，组成性启动子一致地转录其可操作地连接的基因，即，对基因表达具有极小或无控制。由多种潜在宿主细胞识别的多种启动子是熟知的。通过限制性酶消化移除源DNA启动子，并将所需启动子序列插入载体中，将适合启动子可操作地连接至编码例如本发明抗原结合蛋白的重链、轻链或其他组分的DNA。
适用于酵母宿主的适合启动子还是本领域中熟知的。酵母增强子宜与酵母启动子一起使用。适用于哺乳动物宿主细胞的启动子是熟知的且包括但不限于，自病毒，例如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(例如腺病毒血清型2、8或9)、牛乳头瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、B型肝炎病毒和猿猴病毒40(SV40)的基因组获得的启动子。其他适合的哺乳动物启动子包括异源哺乳动物启动子，例如热休克启动子和肌动蛋白启动子。
其他感兴趣的启动子包括但不限于：SV40早期启动子(Benoist和Chambon,1981,Nature[自然]290:304-310)；CMV启动子(Thornsen等人，1984,Proc.Natl.Acad.U.S.A.[美国科学院院报]81:659-663)；劳斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)的3'长末端重复序列中所含的启动子(Yamamoto等人，1980,Cell[细胞]22:787-797)；疱疹胸苷激酶启动子(Wagner等人，1981,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国科学院院报]78:1444-1445)；来自金属硫蛋白基因的启动子和调控序列(Prinster等人，1982,Nature[自然]296:39-42)；和原核启动子，例如β-内酰胺酶启动子(Villa-Kamaroff等人，1978,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国科学院院报]75:3727-3731)；或tac启动子(DeBoer等人，1983,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国科学院院报]80:21-25)。还感兴趣的是以下展现组织特异性且用于转基因动物中的动物转录控制区：在胰脏腺泡细胞中具有活性的弹性蛋白酶I基因控制区(Swift等人，1984,Cell[细胞]38:639-646；Ornitz等人，1986,ColdSpring Harbor Symp.Quant.Biol.[冷泉港数量生物学研讨会]50:399-409；MacDonald,1987,Hepatology[肝脏病学]7:425-515)；在胰脏β细胞中具有活性的胰岛素基因控制区(Hanahan,1985,Nature[自然]315:115-122)；在淋巴细胞中具有活性的免疫球蛋白基因控制区(Grosschedl等人，1984,Cell[细胞]38:647-658；Adames等人，1985,Nature[自然]318:533-538；Alexander等人，1987,Mol.Cell.Biol.[分子细胞生物学]7:1436-1444)；在睪丸、乳房、淋巴和肥大细胞中具有活性的小鼠乳房肿瘤病毒控制区(Leder等人，1986,Cell[细胞]45:485-495)；在肝中具有活性的白蛋白基因控制区(Pinkert等人，1987,Genesand Devel.[基因与发育]1:268-276)；在肝中具有活性的α-胎蛋白基因控制区(Krumlauf等人，1985,Mol.Cell.Biol.[分子细胞生物学]5:1639-1648；Hammer等人，1987,Science[科学]253:53-58)；在肝中具有活性的α1-抗胰蛋白酶基因控制区(Kelsey等人，1987,Genes and Devel.[基因与发育]1:161-171)；在骨髓细胞中具有活性的β-球蛋白基因控制区(Mogram等人，1985,Nature[自然]315:338-340；Kollias等人，1986,Cell[细胞]46:89-94)；在脑中的寡树突细胞中具有活性的髓磷脂碱性蛋白基因控制区(Readhead等人，1987,Cell[细胞]48:703-712)；在骨骼肌中具有活性的肌球蛋白轻链-2基因控制区(Sani,1985,Nature[自然]314:283-286)；和在下丘脑中具有活性的促性腺激素释放激素基因控制区(Mason等人，1986,Science[科学]234:1372-1378)。
可以将增强子序列插入载体中以增加高等真核细胞中编码抗原结合蛋白的组分(例如轻链、重链或可变区)的DNA的转录。增强子是顺式作用DNA组件，通常为约10-300bp长度，作用于启动子以增加转录。增强子相对独立于取向和位置，见于在转录单元的5'和3'端的位置处。已知可得自哺乳动物基因(例如球蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白和胰岛素)的若干增强子序列。然而，典型地使用来自病毒的增强子。本领域中已知的SV40增强子、巨细胞病毒早期启动子增强子、多瘤增强子和腺病毒增强子是用于活化真核启动子的示例性强化组件。尽管增强子可以定位于载体中编码序列的5'或3'端，但其典型地位于启动子5'端的位点处。编码适当天然或异源信号序列(前导序列或信号肽)的序列可以并入表达载体中，以促进抗原结合蛋白的细胞外分泌。信号肽或前导序列的选择取决于待产生抗原结合蛋白的宿主细胞的类型，且异源信号序列可以替代天然信号序列。信号肽的实例在上文有描述。在哺乳动物宿主细胞中起作用的其他信号肽包括美国专利号4,965,195中所述的白细胞介素-7(IL-7)的信号序列；Cosman等人,1984,Nature[自然]312:768中所述的白细胞介素-2受体的信号序列；EP专利号0367 566中所述的白细胞介素-4受体信号肽；美国专利号4,968,607中所述的I型白细胞介素-1受体信号肽；EP专利号0 460 846中所述的II型白细胞介素-1受体信号肽。
表达载体可以由起始载体，例如可商购的载体构建。这些载体可含有或可不含所有所需侧接序列。在载体中不存在一个或多个本文所描述的侧接序列的情况下，其可以独立地获得且连接至载体中。用于获得各侧接序列的方法是本领域普通技术人员熟知的。可以将表达载体引入宿主细胞中，由此产生由如本文所描述的核酸所编码的蛋白质，包括融合蛋白。
在某些实施例中，可以将编码本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的不同组分的核酸插入相同表达载体中。例如，可以将编码抗TREM2抗体轻链或可变区的核酸克隆至与编码抗TREM2抗体重链或可变区的核酸相同的载体中。在此类实施例中，该两个核酸可以由内部核糖体进入位点(IRES)隔开且处于单一启动子控制下，由此使轻链和重链由相同mRNA转录物表达。可替代地，该两个核酸可以处于两个独立启动子控制下，由此使轻链和重链由两个独立的mRNA转录物表达。在一些实施例中，将编码抗TREM2抗体轻链或可变区的核酸克隆至一个表达载体中且将编码抗TREM2抗体重链或可变区的核酸克隆至第二表达载体中。在此类实施例中，可以用两个表达载体共转染宿主细胞以产生完整的本发明的抗原结合蛋白。
在构建出载体并将编码本文所描述的抗原结合蛋白各组分的一个或多个核酸分子插入一个或多个载体的适当位点中之后，可以将完整载体插入适当宿主细胞中以进行扩增和/或多肽表达。因此，本发明涵盖经分离的宿主细胞或细胞系，其包含编码本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白各组分的一个或多个表达载体。如本文所使用，术语“宿主细胞”是指经核酸转化或能够经核酸转化且由此表达感兴趣的基因的细胞。该术语包括亲本细胞的子代，无论该子代是否在形态或遗传组成上与原始亲本细胞一致，只要存在该感兴趣的基因即可。包含本发明的经分离核酸优选可操作地连接到至少一个表达控制序列(例如启动子或增强子)的宿主细胞是“重组宿主细胞”。
可以通过熟知方法，包括转染、感染、磷酸钙共沉淀、电穿孔、显微注射、脂质体转染、DEAE-葡聚糖介导的转染或其他已知技术将抗原结合蛋白的表达载体转化至所选宿主细胞中。所选方法将部分随所用宿主细胞的类型而变化。这些方法及其他适合方法是熟练技术人员熟知的，且陈述于例如Sambrook等人，2001中。
宿主细胞当在适当条件下培养时合成抗原结合蛋白，该抗原结合蛋白随后可以自培养基收集(若宿主细胞将其分泌至培养基中)或直接由产生该抗原结合蛋白的宿主细胞收集(若其并非分泌的)。适当宿主细胞的选择将取决于各种因素，例如所需表达水平、活性所需或必需的多肽修饰(例如糖基化或磷酸化)和折叠成生物活性分子的容易性。
示例性宿主细胞包括原核细胞、酵母或高等真核细胞。原核宿主细胞包括真细菌，例如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如，肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，例如埃希氏菌属(Escherichia)(例如大肠杆菌(E.coli))、肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、克氏杆菌属(Klebsiella)、变形杆菌属(Proteus)、沙门氏菌属(Salmonella)(例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium))、沙雷氏菌属(Serratia)(例如黏质沙雷氏菌(Serratia marcescans))和志贺氏菌属(Shigella)，以及芽孢杆菌属(Bacillus)，例如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)，假单胞菌属(Pseudomonas)和链霉菌属(Streptomyces)。真核微生物，例如丝状真菌或酵母是适用于重组多肽的克隆或表达宿主。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或常称为烘焙酵母，是低等真核宿主微生物中最常用的。不过，多种其他属、种和菌株是常用的且可用于本文中，例如毕赤酵母属(Pichia)，例如巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)、裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)；克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、耶氏酵母属(Yarrowia)；念珠菌属(Candida)；里氏木霉(Trichoderma reesia)；粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)；许旺酵母属(Schwanniomyces)，例如西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)；和丝状真菌，例如脉孢菌属(Neurospora)、青霉菌属(Penicillium)、木霉菌属(Tolypocladium)和曲霉属(Aspergillus)宿主，例如构巢曲霉(A.nidulans)和黑曲霉(A.niger)。
用于表达糖基化抗原结合蛋白的宿主细胞可以来源于多细胞生物体。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已鉴别出来自宿主的多种杆状病毒株和变种以及相应容许的昆虫宿主细胞，例如草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)(毛虫)、埃及伊蚊(Aedesaegypti)(蚊子)、白纹伊蚊(Aedes albopictus)(蚊子)、黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)(苍蝇)和家蚕(Bombyx mori)。用于转染此类细胞的多种病毒株是公开可得的，例如苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)NPV的L-1病毒株和家蚕NPV的Bm-5病毒株。
脊椎动物宿主细胞还为适合宿主，且由此类细胞重组产生抗原结合蛋白已成为常规程序。可用作表达宿主的哺乳动物细胞系是本领域中熟知的且包括但不限于，可得自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)的永生化细胞系，包括但不限于中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary；CHO)细胞，包括CHOK1细胞(ATCCCCL61)、DXB-11、DG-44和中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR(CHO，Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]77:4216,1980)；经SV40转化的猴肾CV1细胞细(COS-7，ATCC CRL 1651)；人胎肾细胞系(293或亚克隆用于以悬浮培养方式生长的293细胞(Graham等人，J.Gen Virol.[普通病毒学杂志]36:59,1977)；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL10)；小鼠赛托利细胞(sertoli cell)(TM4，Mather,Biol.Reprod.[生殖生物学]23:243-251,1980)；猴肾细胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人子宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝细胞瘤细胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI细胞(Mather等人，Annals N.YAcad.Sci.[纽约科学院年鉴]383:44-68,1982)；MRC 5细胞或FS4细胞；哺乳动物骨髓瘤细胞和多种其他细胞系。在某些实施例中，可以经由确定具有高表达水平且组成性产生具有人类TREM2结合特性的抗原结合蛋白的细胞系来选择细胞系。在另一实施例中，可以自B细胞谱系是选择不产生自身抗体但能够制备并分泌异源抗体的细胞系。在一些实施例中，CHO细胞是用于表达本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白的优选宿主细胞。
宿主细胞用上述核酸或载体转化或转染以产生TREM2激动剂抗原结合蛋白且在经适当改善的常规营养培养基中培养以诱导启动子、选择转化株或扩增编码所需序列的基因。此外，具有由选择性标记物隔开的多个转录单元拷贝的新颖载体和经转染细胞系特别是用于表达抗原结合蛋白。因此，本发明还提供一种用于产生本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白，例如抗TREM2激动剂单克隆抗体或其结合片段的方法，其包括在培养基中在允许表达由一个或多个本文所描述的表达载体编码的抗原结合蛋白的条件下培养包含该一个或多个表达载体的宿主细胞；和自培养基或宿主细胞回收该抗原结合蛋白。
用于产生本发明的抗原结合蛋白的宿主细胞可以在多种培养基中培养。可商购的培养基，例如汉氏F10(Ham's F10；西格玛公司(Sigma))、最低必需培养基(MEM，西格玛公司(Sigma))、RPMI-1640(西格玛公司(Sigma))和杜贝卡氏改善型伊格氏培养基(Dulbecco'sModified Eagle's Medium，DMEM；西格玛公司(Sigma))适于培养宿主细胞。此外，Ham等人，Meth.Enz.[酶法]58:44,1979；Barnes等人，Anal.Biochem.[分析生物化学]102:255,1980；美国专利号4,767,704、4,657,866、4,927,762、4,560,655、或5,122,469、WO 90103430、WO87/00195或美国再版专利号30,985中所描述的任何培养基还可用作宿主细胞培养基。必要时，这些培养基中的任一种可以补充有激素和/或其他生长因子(例如胰岛素、运铁蛋白或表皮生长因子)、盐(例如氯化钠、钙、镁和磷酸盐)、缓冲剂(例如HEPES)、核苷酸(例如腺苷和胸苷)、抗生素(例如健他霉素(GentamycinTM)药物)、微量元素(定义为通常以在微摩尔浓度范围内的最终浓度存在的无机化合物)和葡萄糖或等效能量来源。还可包括适当浓度的本领域普通技术人员已知的任何其他必要补充物。培养条件，例如温度、pH和类似条件是先前用于选择用于表达的宿主细胞的条件，且对于本领域普通技术人员将为显而易见的。
在培养宿主细胞时，抗原结合蛋白可以在细胞内、周质空间中产生或直接分泌至培养基中。若在细胞内产生抗原结合蛋白，则作为第一个步骤，例如通过离心或超滤来移除宿主细胞或溶解片段的颗粒状碎片。抗原结合蛋白可以使用例如羟磷灰石层析法、阳离子或阴离子交换层析法、尺寸排阻层析法，或优选亲和层析法，使用感兴趣的抗原或蛋白质A或蛋白质G作为亲和配体进行纯化。蛋白质A可以用于纯化基于人类免疫球蛋白γ1、γ2或γ4重链的多肽(Lindmark等人，J.Immunol.Meth.[免疫学方法杂志]62:1-13,1983)。蛋白质G被推荐用于所有小鼠同种型和人类免疫球蛋白γ3(Guss等人，EMBO J.[欧洲分子生物学杂志]5:15671575,1986)。亲和配体所附接的基质最常见为琼脂糖，但其他基质还是可用的。相较于用琼脂糖，机械稳定的基质，例如可控孔度玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基_)苯可以提高流动速率和缩短加工时间。在蛋白质包含CH3结构域的情况下，Bakerbond ABXTM树脂(J.T.Baker,Phillipsburg,N.J.[新泽西州菲利普斯堡])可用于纯化。依据待回收的特定抗原结合蛋白，还可采用其他蛋白质纯化技术，例如乙醇沉淀法、逆相HPLC、层析聚焦法、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀法。
在某些实施例中，本发明提供一种组合物(例如药物组合物)，其包含一种或复数种本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白(例如抗TREM2激动剂单克隆抗体或其结合片段)以及药学上可接受的稀释剂、运载体、赋形剂、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。本发明的药物组合物包括但不限于，液体、冷冻和冻干的组合物。“药学上可接受”是指当施用至人类时，在所用剂量和浓度下对人类接受者无毒和/或不会产生过敏或不良反应的分子、化合物和组合物。在一些实施例中，药物组合物可以含有用于改变、维持或保留例如该组合物的pH、摩尔渗透压浓度、黏度、澄清度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、解离或释放速率、吸附或渗透性的配制材料。在此类实施例中，适合配制材料包括但不限于，氨基酸(例如甘氨酸、谷酰氨酸、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)；抗微生物剂；抗氧化剂(例如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠)；缓冲剂(例如硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐或其他有机酸)；增积剂(例如甘露糖醇或甘氨酸)；螯合剂(例如乙二胺四乙酸(EDTA))；络合剂(例如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精)；填充剂；单糖；二糖；及其他碳水化合物(例如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白质(例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；着色剂、调味剂和稀释剂；乳化剂；亲水性聚合物(例如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成盐平衡离子(例如钠)；防腐剂(例如苯扎氯胺、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或过氧化氢)；溶剂(例如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(例如甘露糖醇或山梨糖醇)；悬浮剂；表面活性剂或润湿剂(例如普流尼克(pluronics)；PEG；脱水山梨糖醇酯；聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80；曲通(triton)；缓血酸胺；卵磷脂；胆固醇；泰洛沙伯(tyloxapal))；稳定性增强剂(例如蔗糖或山梨糖醇)；张力增强剂(例如碱金属卤化物，优选为氯化钠或氯化钾；甘露糖醇、山梨糖醇)；递送媒剂；稀释剂；赋形剂和/或药物佐剂。用于配制适于治疗使用的分子的方法和适合材料是制药领域中已知的且描述于例如REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES[雷明顿的药物科学],第18版(A.R.Genrmo编辑),1990,Mack Publishing Company[马克出版公司]中。
在一些实施例中，本发明的药物组合物包含标准药物运载体，例如无菌磷酸盐缓冲生理盐水溶液、抑菌水和类似物。可以使用多种水性运载体，例如水、缓冲水、0.4％生理盐水、0.3％甘油和类似物，且其可包括对于温和化学修饰或类似情形具有较强稳定性的其他蛋白质，例如白蛋白、脂蛋白、球蛋白等。
配制品中抗原结合蛋白的示例性浓度范围可以为约0.1mg/ml至约200mg/ml，或约0.1mg/mL至约50mg/mL，或约0.5mg/mL至约25mg/mL，或者约2mg/mL至约10mg/mL。抗原结合蛋白的水性配制品可以在pH缓冲溶液中制备，例如pH值范围为约4.5至约6.5，或约4.8至约5.5，或可替代地为约5.0。适于在此范围内的pH值的缓冲剂的实例包括乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐及其他有机酸缓冲剂。取决于例如缓冲剂和所需配制品等渗性，缓冲剂浓度可以为约1mM至约200mM，或约10mM至约60mM。
配制品中可包括张力剂，其还可使抗原结合蛋白稳定。示例性张力剂包括多元醇，例如甘露糖醇、蔗糖或海藻糖。优选地，水性配制品是等渗的，不过高渗或低渗溶液还可为适合的。配制品中多元醇的示例性浓度可以在约1％至约15％w/v范围内。
还可将表面活性剂添加至抗原结合蛋白配制品中以减少所配制的抗原结合蛋白的聚集和/或使配制品中颗粒状物的形成减到最少和/或减少吸附。示例性表面活性剂包括非离子型表面活性剂，例如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)或泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛沙姆188)。表面活性剂的示例性浓度可以在约0.001％至约0.5％，或约0.005％至约0.2％，或可替代地约0.004％至约0.01％w/v的范围内。
在一个实施例中，配制品含有以上标识的试剂(即，抗原结合蛋白、缓冲剂、多元醇和表面活性剂)且基本上不含一种或多种防腐剂，例如苯甲醇、苯酚、间甲酚、氯丁醇和苄索氯胺。在另一实施例中，配制品中可包括例如浓度在约0.1％至约2％，或可替代地约0.5％至约1％范围内的防腐剂。配制品中可包括一种或多种药学上可接受的运载体、赋形剂或稳定剂，例如REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES[雷明顿的药物科学]，第18版，(A.R.Genrmo编辑)，1990,Mack Publishing Company[马克出版公司]中所描述的那些，只要其不会不利地影响所需配制品特征即可。
抗原结合蛋白的治疗性配制品是通过将具有所需纯度的抗原结合蛋白与可选的生理学上可接受的运载体、赋形剂或稳定剂(REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES[雷明顿的药物科学]，第18版，(A.R.Genrmo编辑)，1990,Mack Publishing Company[马克出版公司])混合来制备，以冻干配制品或水溶液形式储存。可接受的运载体、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒，并且包括缓冲剂(例如磷酸盐、柠檬酸盐及其他有机酸)；抗氧化剂(例如抗坏血酸和甲硫氨酸)；防腐剂(例如十八烷基二甲基苯甲基氯化铵；氯化六羟季铵(hexamethonium chloride)；氯化苯甲烃铵(benzalkonium chloride)；苄索氯铵；苯酚；丁醇或苯甲醇)；对羟基苯甲酸烷酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、儿茶酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质(例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；亲水性聚合物(例如聚乙烯吡咯烷酮)；氨基酸(例如甘氨酸、谷酰氨酸、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸)；单糖、双糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐平衡离子，例如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，例如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；或聚乙二醇(PEG)。
在一个实施例中，所要求的发明的适合配制品含有等渗缓冲剂例如磷酸盐、乙酸盐或TRIS缓冲剂与张力剂例如多元醇、山梨糖醇、蔗糖或氯化钠的组合，其调节张力且稳定。此类张力剂的一个实例是5％山梨糖醇或蔗糖。此外，配制品可以任选地包括0.01％至0.02％wt/vol的表面活性剂，例如以防止聚集或改善稳定性。配制品的pH值可以在4.5至6.5或4.5至5.5范围内。有关抗原结合蛋白的药物配制品的其他示例性描述可以见于美国专利公开号2003/0113316和美国专利号6,171,586中，其各自通过引用以其整体特此并入。
还涵盖抗原结合蛋白的悬浮液和晶体形式。制备悬浮液和晶体形式的方法是本领域普通技术人员所知的。
待用于体内施用的配制品必须为无菌的。本发明的组合物可以通过常规、熟知的灭菌技术来灭菌。例如，灭菌易于通过滤过无菌过滤膜实现。所得溶液可包装待用或在无菌条件下过滤并冻干，冻干制剂将在施用之前与无菌溶液组合。
通常采用冷冻干燥方法使多肽稳定较长储存期，特别是当该多肽在液体组合物中相对不稳定时。冻干循环通常由三个步骤构成：冷冻、初次干燥和二次干燥(参见Williams和Polli,Journal of Parenteral Science and Technology[肠外科学与技术杂志]，第38卷，第2期，第48-59页,1984)。在冷冻步骤中，将溶液冷却直至其充分冷冻。在此阶段，溶液中的整体水形成冰。冰在初次干燥阶段升华，该初次干燥阶段是通过使用真空将腔室压力降低至小于冰的蒸汽压来进行。最后，在二次干燥阶段，在降低的腔室压力和升高的货架温度下，吸收或结合的水经移除。该过程产生称为冻干饼的物质。之后，该饼可以在使用前复原。
有关冻干物质的标准复原实践是加回一定体积纯水(典型地等于在冻干期间移除的体积)，不过在制备供肠胃外施用的药物时，有时会使用抗细菌剂的稀溶液(参见Chen,Drug Development and Industrial Pharmacy[药物开发与工业制药]，第18卷：1311-1354,1992)。
已注意到，在一些情况下，赋形剂充当冷冻干燥的产物的稳定剂(参见Carpenter等人，第74卷：225-239,1991)。例如，已知的赋形剂包括多元醇(包括甘露糖醇、山梨糖醇和甘油)、糖(包括葡萄糖和蔗糖)；和氨基酸(包括丙氨酸、甘氨酸和谷氨酸)。
此外，通常还使用多元醇和糖保护多肽免受冷冻和干燥诱导的损害且增强在以干燥状态储存期间的稳定性。一般而言，糖，尤其双糖在冷冻干燥过程中和储存期间有效。另据报导，其他类别的分子，包括单糖和双糖以及例如PVP之类聚合物可作为冻干产物的稳定剂。
对于注射，药物配制品和/或药剂可以为适于用如上文所描述的适当溶液复原的粉末。这些粉末的实例包括但不限于，冷冻干燥、旋转干燥或喷雾干燥的粉末、无定形粉末、颗粒、沉淀物或颗粒状物。对于注射，这些配制品可以任选地含有稳定剂、pH调节剂、表面活性剂、生物利用率调节剂及其组合。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的适合实例包括含有抗原结合蛋白的由固体疏水聚合物构成的半渗透性基质，这些基质呈成形物品，例如薄膜或微囊形式。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(美国专利号3,773,919)、L-谷氨酸与L-谷氨酸γ乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如Lupron DepotTM(由乳酸-乙醇酸共聚物与乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)构成的可注射微球体))和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。聚合物，例如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸能够在100天内释放分子，而某些水凝胶在更短时间段内释放蛋白质。当囊封的多肽在体内保持较长时间，其可能由于在37℃下暴露于水分而变性或聚集，由此导致生物活性丧失和可能的免疫原性变化。取决于所涉及的机制，可以设计合理的策略实现稳定。举例来说，若发现聚集机制是经由硫醇-二硫化物交换而形成分子间S--S键，则可以通过修饰硫氢基残基、自酸性溶液冻干、控制水分含量、使用适当添加剂和产生特定聚合物基质组合物来实现稳定。
本发明的配制品可以设计成短效、快速释放、长效或持续释放的。因此，药物配制品还可配制用于控制释放或缓慢释放。
具体剂量可以取决于待治疗的疾病、障碍或病症(例如阿尔茨海默病、多发性硬化、额颞叶痴呆或纳哈氏病)；个体受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；剂量间隔；施用途径；排泄速率；以及药物组合进行调整。
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可以通过任何适合方式，包括肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、鞘内、脑内、脑室内和鼻内，以及必要时用于局部治疗、病灶内施用进行施用。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮内或皮下施用。此外，抗原结合蛋白宜通过脉冲输注，特别是以递减剂量的抗原结合蛋白施用。部分取决于施用是短期或长期的，优选通过注射，最优选地通过静脉内或皮下注射给药。涵盖其他施用方法，包括表面，特别是经皮、经黏膜、直肠、经口或例如经由置放于希望部位附近的导管局部施用。在某些实施例中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白是于生理溶液中以范围介于0.01mg/kg至100mg/kg之间的剂量且以范围自每天至每周乃至每月(例如每天、隔天、每三天或每周2、3、4、5或6次)的频率，优选以范围自0.1至45mg/kg、0.1至15mg/kg或0.1至10mg/kg的剂量且以每周一次、每两周一次或每月一次的频率经静脉内或皮下施用。
本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白(例如抗TREM2激动剂单克隆抗体及其结合片段)可用于预防、治疗或改善有需要的患者的与TREM2缺乏或TREM2生物功能丧失相关的病症。如本文所使用，术语“治疗(treating/treatment)”是所进行的旨在预防障碍的发展或改变障碍的病理学的干预。因此，“治疗”是指治疗性治疗和预防性或防治性措施。需要治疗的患者包括已诊断患有或患有该障碍或病症的患者，以及待预防该障碍或病症的患者，例如基于例如遗传标记物，由发展该障碍或病症的风险的患者。“治疗”包括成功改善损伤、病变或病症的任何指标，包括任何客观或主观参数，例如症状的消除、缓解、减轻，或使患者更能忍受损伤、病变或病症；减慢退化或恶化的速率；使退化终点不会造成虚弱；或改善患者的身体或心理健康。症状的治疗或改善可以基于客观或主观参数，包括体检结果、患者的自陈、认知测试、运动功能测试、神经精神检查和/或精神评价。
TREM2生物活性涉及各种生理学过程，包括骨髓细胞过程，例如吞噬作用、增殖、存活和炎性细胞因子产生的调控；破骨细胞形成；破骨细胞分化；自身免疫的负调控；炎性反应；骨重塑和修复；骨再吸收；组织修复；小胶质细胞增生；以及脑稳态。参见例如，Colonna,Nature Reviews Immunology[自然免疫学综述]，第3卷：445-453,2003；Paradowska-Gorycka等人，Human Immunology[人类免疫学]，第74卷：730-737,2013；以及Ulrich和Holtzman,ACS Chem.Neurosci.[ACS化学神经科学]，第7卷：420-427,2016。TREM2功能的丧失或TREM2缺乏与若干障碍和疾病关联，包括脂膜样多囊性骨发育不良伴硬化性白质脑病(polycystic lipomembranous osteodysplasia with sclerosingleukoencephalopathy，PLOSL；还称为纳哈氏病)、阿尔茨海默病、额颞叶痴呆、多发性硬化、朊病毒病、中风、骨质疏松症和骨硬化症。参见例如，Jonsson等人，New England Journalof Medicine[新英格兰医学杂志]，第368卷：107-116,2013；Guerreiro等人，New EnglandJournal of Medicine[新英格兰医学杂志]，第368卷：117-127,2013；Paradowska-Gorycka等人，Human Immunology[人类免疫学]，第74卷：730-737,2013；以及Ulrich和Holtzman,ACS Chem.Neurosci.[ACS化学神经科学]，第7卷：420-427,2016。因此，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可以施用至患者以预防、改善或治疗这些疾病或障碍，或与TREM2缺乏或TREM2生物功能或活性丧失相关的其他病症中的任一种。在某些实施例中，本发明提供用于预防、治疗或改善有需要的患者的与TREM2缺乏或TREM2功能丧失相关的病症的方法，这些方法包括向患者施用有效量的本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白。在某些实施例中，TREM2激动剂抗原结合蛋白是抗TREM2激动剂单克隆抗体或其结合片段。术语“患者”包括人类患者且与术语“受试者”可互换。
“有效量”一般是足以降低症状的严重程度和/或频率，消除症状和/或潜在病因，预防症状和/或其潜在病因的发生，和/或改善或治愈由特定病症引起或与之相关的损伤的量。在一些实施例中，有效量是治疗有效量或预防有效量。“治疗有效量”是足以治疗疾病症态或症状，特别是与疾病症态相关的状态或症状，或以其他方式预防、阻滞、延迟或逆转疾病症态或以任何方式(即，提供“治疗功效”的方式)与该疾病相关的任何其他不希望症状的进展的量。“预防有效量”是当施用至受试者时将具有长期预防作用，例如预防或延迟病症的发作(或再发生)，或降低病症发作(或再发生)的可能性的抗原结合蛋白的量。施用一次剂量未必会出现完全治疗或预防作用，且可能仅在施用一系列剂量之后才发生。因此，治疗或预防有效量可以一次或多次施用进行施用。
可以根据本发明的方法预防、治疗或改善的与TREM2缺乏或TREM2功能丧失相关的病症或障碍包括但不限于，纳哈氏病、阿尔茨海默病、额颞叶痴呆、多发性硬化、格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome)、肌萎缩性侧索硬化、帕金森氏病、创伤性脑损伤、脊髓损伤、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、朊病毒病、中风、骨质疏松症、骨硬化症和骨硬化。在某些实施例中，待根据本发明的方法预防、治疗或改善的病症或障碍是阿尔茨海默病、纳哈氏病、额颞叶痴呆、多发性硬化、朊病毒病或中风。
在一个实施例中，本发明提供一种用于预防、治疗或改善有需要的患者的阿尔茨海默病的方法，其包括向患者施用有效量的本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白。在某些实施例中，施用至患者的TREM2激动剂抗原结合蛋白是抗TREM2激动剂单克隆抗体，例如可变区和CDR序列如表1A、1B、2A、2B、3A和3B中所列的抗体。在一些实施例中，待施用TREM2激动剂抗原结合蛋白的患者是有发展阿尔茨海默病风险的患者。例如，在一个实施例中，确定患者具有至少一个在TREM2基因中含rs75932628-T突变的等位基因，例如患者在rs75932628处具有CT基因型。在相关实施例中，有发展阿尔茨海默病风险的患者是确定带有TREM2变体等位基因的患者，这些位基因编码组氨酸替代SEQ ID NO:1中位置47处的精氨酸。在其他实施例中，确定患者具有至少一个在TREM2基因中含rs143332484-T突变的等位基因，例如患者在rs143332484处具有CT基因型。在相关实施例中，有发展阿尔茨海默病风险的患者是确定带有TREM2变体等位基因的患者，这些位基因编码组氨酸替代SEQ ID NO:1中位置62处的精氨酸。在一些实施例中，确定有发展阿尔茨海默病风险的患者具有至少一个在TREM1基因中含rs6910730-G突变的等位基因、至少一个在TREM2基因的上游含有rs7759295-C突变的等位基因和/或至少一个APOE基因的ε4等位基因。
在另一实施例中，本发明提供一种用于预防、治疗或改善有需要的患者的额颞叶痴呆或纳哈氏病的方法，其包括向患者施用有效量的本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白。在某些实施例中，施用至患者的TREM2激动剂抗原结合蛋白是抗TREM2激动剂单克隆抗体，例如可变区和CDR序列如表1A、1B、2A、2B、3A和3B中所列的抗体。在一些实施例中，待施用TREM2激动剂抗原结合蛋白的患者是有发展额颞叶痴呆或纳哈氏病风险的患者。例如，在一个实施例中，确定患者具有至少一个在TREM2基因中含rs104894002-A突变的等位基因，例如患者在rs104894002处具有GA或AA基因型。在相关实施例中，有发展额颞叶痴呆或纳哈氏病风险的患者是确定带有TREM2变体等位基因的患者，这些位基因由于终止密码子替代SEQ ID NO:1中位置33处的谷酰氨酸的取代而编码截短的TREM2蛋白。在另一实施例中，确定患者具有至少一个在TREM2基因中含rs201258663-A突变的等位基因，例如患者在rs201258663处具有GA或AA基因型。在相关实施例中，有发展额颞叶痴呆或纳哈氏病风险的患者是确定带有TREM2变体等位基因的患者，这些位基因编码甲硫氨酸替代SEQ ID NO:1中位置66处的苏氨酸。在一些实施例中，有发展额颞叶痴呆或纳哈氏病风险的患者是确定带有TREM2变体等位基因的患者，这些位基因编码半胱氨酸替代SEQ ID NO:1中位置38处的酪氨酸。
在又一实施例中，本发明提供一种用于预防、治疗或改善有需要的患者的多发性硬化的方法，其包括向患者施用有效量的本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白。在某些实施例中，施用至患者的TREM2激动剂抗原结合蛋白是抗TREM2激动剂单克隆抗体，例如可变区和CDR序列如表1A、1B、2A、2B、3A和3B中所列的抗体。在一些实施例中，待施用TREM2激动剂抗原结合蛋白的患者是有发展多发性硬化风险的患者。
如实例9和10中所描述，如通过pSyk含量增加所测量，能够活化TREM2/DAP12信号传导的激动剂抗TREM2抗体矫正由TREM2突变引起的功能丧失导致的巨噬细胞和小胶质细胞存活缺陷且恢复TREM2缺陷型巨噬细胞的CCL2分泌。这些结果指示，用激动剂抗TREM2抗体活化TREM2/DAP12信号传导可以增强巨噬细胞/小胶质细胞功能，而巨噬细胞/小胶质细胞功能增强又可以治疗与巨噬细胞/小胶质细胞功能不足相关的病症。因此，在某些实施例中，本发明包括一种增加有需要的患者中骨髓细胞，例如小胶质细胞、巨噬细胞或树突状细胞的存活或增殖的方法，其包括向患者施用有效量的本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白。在某些实施例中，施用至患者的TREM2激动剂抗原结合蛋白是抗TREM2激动剂单克隆抗体，例如可变区和CDR序列如表1A、1B、2A、2B、3A和3B中所列的抗体。在一些实施例中，需要治疗的患者有患神经退行性病症的风险、患有神经退行性病症或已诊断患有神经退行性障碍。在一个实施例中，该神经退行性障碍是阿尔茨海默病。在一些实施例中，需要治疗的患者有患自身免疫性障碍的风险、患有自身免疫性障碍或已诊断患有自身免疫性障碍。在一个实施例中，该自身免疫性障碍是多发性硬化。
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白还可用于检测生物样品中的人类TREM2和鉴别表达人类TREM2的细胞或组织。例如，抗原结合蛋白可以用于诊断测定，例如免疫测定中以检测和/或定量组织或细胞(巨噬细胞或小胶质细胞)中表达的TREM2或体液，例如脑脊髓液、血液、血清或血浆中可溶形式TREM2的存在。此外，本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白可以用于活化骨髓细胞中的TREM2/DAP12信号传导，由此调节这些细胞的生物活性。此类生物活性包括细胞因子释放、吞噬作用和小胶质细胞增殖。
本文所描述的TREM2激动剂抗原结合蛋白可以用于诊断目的以检测、诊断或监测与TREM2功能障碍相关的病症，例如神经退行性疾病(例如阿尔茨海默病、帕金森氏病)、中枢神经系统损伤(创伤性脑损伤、脊髓损伤、中风)、自身免疫性疾病(多发性硬化、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮)、额颞叶痴呆、纳哈氏病和骨障碍(例如骨质疏松症、骨硬化症、骨硬化)。例如，在多发性硬化患者中观察到脑脊髓液中可溶形式的TREM2含量升高(Piccio等人，Brain[大脑]，第131卷：3081-3091,2008)。还提供使用本领域普通技术人员已知的经典免疫组织化学方法检测样品中TREM2存在的方法(例如Tijssen,1993,Practice andTheory of Enzyme Immunoassays[酶免疫分析的实践与理论]，第15卷(R.H.Burdon和P.H.van Knippenberg编辑，Elsevier[爱思唯尔出版社],Amsterdam[阿姆斯特丹])；Zola,1987,Monoclonal Antibodies:A Manual of Techniques[单克隆抗体：技术手册]，第147-158页(CRC Press,Inc.[CRC出版社有限公司])；Jalkanen等人，1985,J.Cell.Biol.[细胞生物学杂志]101:976-985；Jalkanen等人，1987,J.Cell Biol.[细胞生物学杂志]105:3087-3096)。可用于检测TREM2存在的方法的实例包括使用本文所描述的抗原结合蛋白进行的免疫测定，例如酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和放射免疫测定(RIA)。TREM2的检测可以在体内或体外进行。
对于诊断应用，抗原结合蛋白可以用可检测标记基团标记。适合标记基团包括但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、荧光基团(例如FITC、若丹明(rhodamine)、镧是元素磷光体)、酶基团(例如辣根过氧化酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)、化学发光基团、生物素基团，或由第二报导子识别的预定多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、二次抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)。在一些实施例中，标记基团经由各种长度的间隔子臂偶合至抗原结合蛋白以减小潜在空间位阻。用于标记多肽的各种方法是本领域中已知的且均可以使用。
在另一实施例中，本文所描述的抗原结合蛋白可以用于鉴别表达TREM2的一个或多个细胞。在一个特定实施例中，抗原结合蛋白用标记基团标记且检测标记的抗原结合蛋白与TREM2的结合。抗原结合蛋白还可用于生物样品的免疫沉淀测定。在另一具体实施例中，在体内检测抗原结合蛋白与TREM2的结合。在另一具体实施例中，使用本领域中已知的技术分离和测量该抗原结合蛋白。参见例如，Harlow和Lane,1988,Antibodies:ALaboratory Manual[抗体：实验室手册],New York:Cold Spring Harbor[纽约：冷泉港](1991版和定期补充版)；John E.Coligan编辑，1993,Current Protocols In Immunology[当前免疫学协议]New York:John Wiley&Sons[纽约：约翰威立父子公司]。
提供以下实例，包括进行的实验和获得的结果，仅出于说明的目的且不应解释为限制所附权利要求的范畴。
实例
实例1.产生人类抗TREM2抗体
免疫接种
通过对
Figure BDA0002295171410001155
转基因小鼠进行免疫接种来产生针对人类TREM2的完全人类抗体。这些转基因小鼠携带人类免疫球蛋白转基因，由此允许在免疫接种后产生抗原特异性完全人类抗体。参见例如，美国专利号6,114,598、6,162,963、6,833,268、7,049,426、7,064,244；Green等人，1994,Nature Genetics[自然遗传学]7:13-21；Mendez等人，1997,Nature Genetics[自然遗传学]15:146-156；Green和Jakobovitis,1998,J.Ex.Med[实验医学杂志],188:483-495；Green,1999,Journal of Immunological Methods[免疫法杂志]231:11-23；Kellerman和Green,Current Opinion in Biotechnology[生物技术新观点]13,593-597,2002，所有文献都通过引用以其整体特此并入。来自XMG2-K、XMG2-KL、XMG4-K和XMG4-KL
Figure BDA0002295171410001151
品系的动物用于免疫接种。
Figure BDA0002295171410001152
品系XMG2-K和XMG2-KL的小鼠产生具有κ轻链(XMG2-K)或同时具有κ和λ轻链(XMG2-KL)的完全人类IgG2抗体。
Figure BDA0002295171410001153
品系XMG4-K和XMG4-KL的小鼠产生具有κ轻链(XMG4-K)或同时具有κ和λ轻链(XMG4-KL)的完全人类IgG4抗体。
使用多种免疫原和免疫接种途径在品系中产生针对人类TREM2的免疫反应。对于可溶性重组蛋白质免疫接种，用可溶性TREM2蛋白对小鼠进行免疫接种，该蛋白质是包含人类TREM2的细胞外结构域(ECD)(氨基酸1-174；SEQ ID NO:2)经由Gly-Ser-Ser接头与人类IgG1 Fc区的N末端融合的融合蛋白。使用皮下注射，用可溶性TREM2蛋白与CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)或CpG-ODN和聚肌苷酸:聚胞苷酸(Poly I:C)和QS-21佐剂的混合物对动物进行免疫接种8-12次，历时4-8周。初次追加剂含有10μg蛋白质，而随后的追加剂含有5μg蛋白质。
通过用小鼠GM-CSF、CpG-ODN和编码野生型人类TREM2(SEQ ID NO:1)和野生型人类DAP12(SEQ ID NO:3)的表达载体包覆金珠粒(加利福尼亚州赫拉克勒斯的伯乐公司(BioRad,Hercules,California))，产生用于基因免疫接种的免疫原。使用Helios基因枪系统，根据制造商的说明书(加利福尼亚州赫拉克勒斯的伯乐公司)，将基因免疫原递送至剃毛小鼠腹部的上皮中。用基因免疫原对小鼠进行免疫接种12-16次，历时6-8周。
通过在Accuri或FacsCalibur(BD生物科学公司(BD Bioscience))流式细胞仪上进行活细胞FACS分析或通过TREM2特异性ELISA监测人类TREM2特异性血清效价。将四份独立收集物中针对人类TREM2具有最高血清天然效价的动物处死并用于产生杂交瘤。下表7提供有关各收集物组的说明。
表7.TREM2免疫接种组
Figure BDA0002295171410001161
单克隆抗体的制备
鉴别展现出适合抗原特异性血清效价的动物并自脾和/或引流淋巴结获得淋巴细胞。通过在适合培养基(例如杜贝卡氏改善型伊格氏培养基(Dulbecco’s Modified EagleMedium，DMEM)；加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(Invitrogen,Carlsbad,CA))中研磨，将汇集的淋巴细胞(来自各收集物)自淋巴组织解离。使用标准方法选择和/或扩增B细胞，并使用常规技术将其与适合的融合搭配物(例如非分泌型骨髓瘤P3X63Ag8.653细胞)融合。
对于收集物1，将来自所选免疫组织收集物的融合的杂交瘤池作为多集落孔涂盘，耗尽以产生条件培养基，且接着针对与可溶性人类TREM2蛋白(以上描述的融合蛋白)的结合进行筛选。汇集来自此涂盘的匹配且接着进行集落FACS分选以获得每孔一个活细胞。对于收集物3、4和5，使用来自所选免疫组织的融合的杂交瘤池作为基于FACS富集材料的来源。具体地，将杂交瘤细胞解冻并在DMEM选择培养基中培养3-4天。在整体分选前一天，将培养基更换成BDQY杂交瘤培养基。在10mL无菌FACS缓冲液中洗涤细胞且接着将其与1mL反应体积浓度为2至5μg/mL的生物素化可溶性TREM2蛋白一起在4℃下孵育1小时。对于用可溶性TREM2蛋白免疫接种的收集物3组，此步骤是在100μg/mL多克隆人类IgG(杰克逊免疫研究(Jackson ImmunoResearch))存在下进行以阻断Fc区的任何结合物。对于收集物4和5，省略多克隆人类IgG阻断步骤，因为这些收集物是来自经遗传性免疫接种的动物。
在10mL FACS缓冲液中进行一次稀释洗涤之后，向细胞中添加含有AlexaFluor488偶联的山羊抗人类IgG(杰克逊免疫研究)和Alexa Fluor 647偶联的抗生蛋白链菌素(杰克逊免疫研究)各5μg/mL的1mL抗体混合液。接着在4℃下孵育细胞30分钟。孵育后，在10mL FACS缓冲液中洗涤细胞，将其再悬浮于2mL含有5μL 7-AAD(BD Pharmingen公司，目录号：559925)的BDQY杂交瘤培养基中，接着使其通过40微米细胞滤网以移除任何团块。在BD FACSAria上，通过选通对Alexa Fluor488和Alexa Fluor 647荧光信号呈双阳性的活细胞群来对细胞进行整体分选。
将分选的细胞转移至24孔组织培养盘中并培养数天，随后对其计数，并使用上述方法再次染色以检查抗原特异性细胞的富集情况。接着，将这些细胞单细胞分选至含有BDQY杂交瘤培养基的384孔微量滴定盘中并培养长达2周，随后收集上清液进行筛选。
实例2.选择TREM2特异性结合抗体
针对与人类TREM2的结合、人类TREM2的激动剂活性和与其他TREM蛋白的交叉反应性筛选由实例1中所述的杂交瘤产生的抗体。这些筛选的方法和结果描述于下。
初次TREM2结合筛选
利用ELISA测试耗尽的杂交瘤上清液与人类TREM2的结合。简言之，通过将384孔Corning测定盘3702与在1X PBS中10μg/mL的中性抗生物素蛋白(Thermo3100B)(每孔40μL)一起在4℃下孵育隔夜来产生中性抗生物素蛋白盘。使用Biotek盘洗涤器，用1X PBS洗涤各盘且接着在室温(RT)下用1％牛奶/1X PBS(每孔90μL)阻断30分钟。接着，再次使用该盘洗涤器，用1X PBS洗涤各盘。捕捉样品是生物素化的可溶性人类TREM2蛋白(TREM2 ECD-huIgG1 Fc融合蛋白)并以于1％牛奶/1X PBS中0.5μg/mL添加，体积为每孔40μL。接着在室温下孵育各盘1小时以将TREM2蛋白固定于各盘的孔中。孵育后，再次使用该盘洗涤器，用1XPBS洗涤各盘。向各盘的孔中添加10μL待测试的各杂交瘤上清液和40μL 1％牛奶/1X PBS(1:5稀释)并在室温下孵育1小时。再次使用该盘洗涤器，用1X PBS洗涤各盘。向各盘(每孔40μl)中添加一起在1％牛奶/1X PBS中1:2000稀释的山羊抗人类κ-HRP(南方生物技术公司(Southern Biotech)，2060-05)和山羊抗人类λ-HRP(南方生物技术公司，2070-05)或在1％牛奶/1X PBS中1:4000稀释的山羊抗人类IgG Fc POD并在室温下孵育各盘1小时。使用盘洗涤器，用1X PBS洗涤各盘后，向各盘中添加每孔40μL TMB底物(Neogen公司，批号150114)并在室温下孵育各盘30分钟。在孵育期后，用1N盐酸(每孔40μL)淬灭反应。用盘读取器获得在450nm下的OD读数。
初次ELISA筛选自四个独立的收集物组中鉴别出2,523种对TREM2结合呈阳性的抗体。将这些鉴别的抗体用于功能测定筛选中。
TREM2功能测定筛选
在基于细胞的磷酸化Syk(pSyk)信号传导测定中，评价在ELISA测定中测试的对TREM2结合呈阳性的抗体针对人类TREM2的激动剂活性。跨膜糖蛋白人类TREM2与衔接体蛋白质DAP12偶合以经由募集酪氨酸激酶ζ链相关蛋白70(ZAP70)和脾酪氨酸激酶(Syk)进行信号传导并发挥作用(Colonna,Nature Reviews Immunology[自然免疫学综述]，第3卷：445-453,2003)。Syk的磷酸化形式指示TREM2/DAP12信号传导的活化。因此，开发出基于细胞的AlphaLISA(珀金埃尔默公司(Perkins Elmer))测定来检测响应于TREM2/DAP12调节的Syk磷酸化形式。该测定采用兔抗pSyk抗体、生物素化小鼠抗完全Syk抗体、受体珠粒与抗兔IgG抗体的偶联物和涂覆抗生蛋白链菌素的供体珠粒。细胞溶解产物中存在的磷酸化形式的Syk经兔抗pSyk抗体和小鼠抗完全Syk抗体结合。受体珠粒与抗兔IgG抗体的偶联物结合至兔抗pSyk抗体且涂覆抗生蛋白链菌素的供体珠粒结合至生物素化小鼠抗完全Syk抗体。在680nm波长下激发供体珠粒引起单线态氧的释放，而单线态氧的释放又在受体珠粒中产生放大的荧光信号，由此在615nm下产生发射。若供体珠粒和受体珠粒彼此不紧密邻近(即，受体珠粒未募集至复合物，因为Syk未磷酸化且因此未经兔抗pSyk抗体结合)，则不会检测到在615nm下的发射。因此，在615nm下发射的光量与细胞溶解产物中存在的磷酸化Syk的量成比例，而磷酸化Syk的量又指示抗TREM2抗体对TREM2/DAP12信号传导的活化。
将稳定表达人类TREM2和人类DAP12的HEK293T细胞(G13细胞系)以每孔40,000个细胞(于90或80μL中)涂铺于组织培养物处理的半面96孔盘或以每孔50,000个细胞(于200μL中)涂铺于聚D-赖氨酸涂覆的盘中的生长培养基中。在37℃和5％CO2下孵育细胞隔夜。添加单一浓度(对于初始单点筛选)或一系列浓度(对于效力测试)的抗人类TREM2抗体。在室温下孵育细胞和抗体30至40分钟之后，完全移除培养基。在冰上，用20μL(对于40,000个细胞)或25μL(对于50,000个细胞)的含有蛋白酶/磷酸酶抑制剂的溶解缓冲液溶解细胞，历时45至60分钟。将细胞溶解产物(5μL)转移至含有兔抗pSyk抗体(最终浓度：1nM)、生物素化小鼠抗Syk抗体(最终浓度：1nM)和受体珠粒与抗兔IgG抗体的偶联物(最终浓度：10μg/mL)的15μL混合物的384孔白色测定盘的适当孔中。接着在冰上孵育测定盘2小时。随后，向各孔中添加涂有抗生蛋白链菌素(5μL)的供体珠粒(最终浓度：40μg/mL)并在室温下于暗处孵育测定盘1小时。利用EnVision多标记读取器测量AlphaLISA信号(计数)。抗体激动剂活性报导为相对于对照的倍数(S/B)：S/B＝样品pSyk信号(计数)/基础pSyk信号(同种型对照pSyk信号计数)。
在pSyk测定中先测试单一浓度的对TREM2结合测试呈阳性的来自杂交瘤上清液的抗体。对于此单点筛选，基于体积(对于收集物1为10μL，1:10稀释)或浓度(20μL预先针对10μg/mL收集物3、4和5归一化的ESN，1:5稀释)，向细胞中添加含有抗huTREM2抗体的耗尽的杂交瘤上清液(ESN)。在来自四组独立收集物的对TREM2结合呈阳性的2,523种抗体中，有140种抗体在单一浓度下在pSyk测定中展现活性。将这些抗体用于效力筛选。
最初针对未纯化、经定量的集落杂交瘤源性抗TREM2抗体且随后针对经纯化的杂交瘤源性和/或重组单克隆抗体进行效力筛选。对于收集物1，自100μg/mL至0.005μg/mL对于抗TREM2抗体进行3倍连续滴定，并向细胞中添加10μL各稀释液(最终抗体浓度自10μg/mL至0.0005μg/mL、66.67nM至0.003nM)。对于收集物3、4和5的效力筛选，将培养基自细胞完全移除。在生长培养基中自2μg/mL至0.003μg/mL，3倍连续滴定抗TREM2抗体并向细胞中添加50μL各稀释液(最终抗体浓度自13.33nM至0.02nM)。利用6.07版GraphPad Prism的四参数逻辑斯蒂拟合模型(four-parameter logistic fit model)，由10点剂量-反应曲线确定各抗TREM2抗体的EC50值。
在筛选效力的140种抗体中，选出93种抗体用于进一步筛选和表征。图1A显示来自收集物1之前几种激动剂抗TREM2抗体的剂量-反应曲线，而图1B显示来自收集物3、4和5之前几种激动剂抗TREM2抗体的剂量-反应曲线。来自全部四种收集物之前18种抗体的EC50值提供于下表8中。自较低的奈摩尔浓度或亚奈摩尔浓度EC50值显而易见，大部分抗TREM2抗体是有效的TREM2/DAP12信号传导激动剂。相较于在本测定中EC50值是0.50nM且Emax是13.8的可商购的大鼠抗人类/小鼠TREM2抗体(mAb17291；大鼠IgG2b克隆#237920,研究开发系统(R&D Systems))，若干抗体更有效且产生较高水平的TREM2/DAP12信号传导最大活化。重要的是，在不存在交联剂(例如蛋白质G、蛋白质A或抗人类二次抗体)或抗体固定(例如盘结合的抗体)的情况下观察到抗TREM2抗体的激动剂活性，表明这些抗体可以有效接合并活化呈可溶性单体形式的人类TREM2。对于许多激动剂抗体而言，需要其Fc区交联来群集这些抗体，从而有效活化靶受体。参见例如，Natoni等人，British Journal of Haematology[英国血液学杂志]，第139卷：568–577,2007；Vonderheide和Glennie,Clin.Cancer Res.[临床癌症研究]，第19卷：1035-1043,2013。已观察到实现对其他TREM2抗体的激动剂活性还存在此类交联需求。参见例如美国专利号8,981,061和WO 2016/023019。本文所描述的TREM2抗体相对于这些其他TREM2抗体的优势在于，其是不依赖于交联的人类TREM2激动剂(例如其不需要经由其Fc结构域交联或寡聚化来实现激动剂活性)。
TREM2抗体的选择性和交叉反应性
进一步评价在效力筛选中展示激动剂活性的抗TREM2抗体与小鼠和食蟹猕猴TREM2的交叉反应性以及与人类TREM1蛋白的交叉反应性。对于物种交叉反应性筛选，用包含小鼠TREM2和小鼠DAP12 cDNA或食蟹猕猴TREM2和食蟹猕猴DAP12 cDNA的表达载体、GibcoTM
Figure BDA0002295171410001212
培养基(Gibco公司，目录号31985088)和293FectinTM试剂(英杰公司，目录号12347019)，遵循制造商陈述的方案转染HEK293细胞。使用稳定表达人类TREM1/DAP12的细胞系评估TREM1交叉反应性。通过将杂交瘤上清液放于各转染细胞上孵育1小时，随后进行洗涤步骤，来筛选这些上清液中结合至人类TREM1、小鼠TREM2或食蟹猕猴TREM2的单克隆抗体的存在。接着，将细胞与偶联至Alexa Fluor 647(杰克逊免疫化学(JacksonImmunochemicals)109-605-098)的山羊抗人类Fc抗体一起孵育15分钟。使用带Intellicyt自动取样器的Accuri FACS机器，通过FACS检测结合。在FACS分析中包括不相关同种型对照抗体。数据报导为相对于不相关对照抗体结合的几何平均值(GM)倍数。在来自交叉反应性筛选的四种收集物的93种抗体中，有50种抗体与食蟹猕猴TREM2交叉反应且有9种抗体与小鼠TREM2交叉反应。所有测试抗体均不与人类TREM1交叉反应。由来自全部四种收集物的前18种抗TREM2单克隆抗体的所有筛选获得的数据概述于下表8中。
表8.来自杂交瘤筛选的前几种抗TREM2单克隆抗体的数据概述
Figure BDA0002295171410001221
实例3.人类抗TREM2激动剂抗体的测序
使用Qiagen RNeasy微型试剂盒或Invitrogen mRNA catcher plus试剂盒，自含有产生TREM2激动剂抗体的杂交瘤细胞的孔纯化出RNA(总RNA或mRNA)。使用纯化的RNA，使用通过反转录的cDNA合成，随后聚合酶链反应(RT-PCR)扩增抗体重链和轻链可变区(V)基因。使用Qiagen一步逆转录酶PCR试剂盒(Qiagen One Step Reverse Transcriptase PCRkit，凯杰公司(Qiagen))获得完全人类抗体γ重链。使用该试剂盒，由RNA模板产生第一链cDNA，且接着使用多重PCR扩增γ重链的可变区。5'γ链特异性引物与抗体重链的信号序列黏结，而3'引物与γ恒定结构域的区域黏结。使用Qiagen一步逆转录酶PCR试剂盒(凯杰公司(Qiagen))获得完全人类抗体κ轻链。使用该试剂盒，由RNA模板产生第一链cDNA，且接着使用多重PCR扩增κ轻链的可变区。5'κ轻链特异性引物与抗体轻链的信号序列黏结，而3'引物与κ恒定结构域的区域黏结。使用Qiagen一步逆转录酶PCR试剂盒(凯杰公司(Qiagen))获得完全人类抗体λ轻链。使用该试剂盒，由RNA模板产生第一链cDNA，且接着使用多重PCR扩增λ轻链的可变区。5'λ轻链特异性引物与轻链的信号序列黏结，而3'引物与λ恒定结构域的区域黏结。
使用核酸外切酶I和碱性磷酸酶以酶法纯化扩增的cDNA并对纯化的PCR产物直接测序。由相应核酸序列，以生物信息学方式推导氨基酸序列。对于各杂交瘤样品再完成两个独立的RT-PCR扩增和测序循环以便确定所观察到的任何突变并非由PCR引起。示例性抗体的轻链可变区和相关CDR的氨基酸序列提供于表1A中，而抗体重链可变区和相关CDR的氨基酸序列提供于表1B中。表6提供编码示例性抗体的轻链和重链可变区的核酸序列。
接着分析所获得的各轻链和重链可变区的氨基酸序列以确定这些抗体的种系序列来源并鉴别与种系序列的差别。各轻链和重链可变区序列与其原始种系序列的比较显示于图2A-4B中。种系基因的属性紧接着各抗体克隆编号指示。将对应于经测序抗体的CDR的氨基酸序列进行比对且使用这些比对，根据相似性对克隆进行分组。
实例4.激动剂抗TREM2抗体的表位分组分析
在
Figure BDA0002295171410001231
HTX仪器(佛特比奥公司(Pall ForteBio))上使用抗人类Fc(动力学公司(Kinetic))传感器(18-5090)确定激动剂抗人类TREM2抗体的子集的表位分组。分别对由杂交瘤产生的十六种不同的抗TREM2抗体进行定量并将其以5μg/mL装载至抗人类Fc传感器之一上，保持2分钟(“装载抗体”)。接着用100μg/mL不相关人类IgG2抗体阻断传感器5分钟。向传感器中添加4μg/mL重组可溶性TREM2蛋白(偶合至Flag/His标签的人类TREM2细胞外结构域(氨基酸1-174)(人类TREM2ECD-FlagHis))，保持5分钟以允许可溶性TREM2蛋白结合至装载抗体。接下来，将5μg/mL十六种不同抗TREM2抗体(“夹心抗体”)分别添加至传感器中并使其结合5分钟。所有测定缓冲液均含有10mM Tris(pH 7.6)、0.1％Triton X-100、150mMNaCl、1mM CaCl2和1mg/mL BSA。测定是在25℃下进行。将实验动力学结果与1:1结合模型拟合。
若装载抗体和夹心抗体结合至人类TREM2上的类似表位，则将夹心抗体添加至传感器中将不会引起结合事件。不过，若添加夹心抗体引起结合事件，则夹心抗体结合至人类TREM2上不同于装载抗体的表位且该两个抗体归类于不同表位分组。图5描绘由装载有6E7抗体且暴露于作为夹心抗体的5E3抗体或6E7抗体的传感器获得的结合数据。正如预期，通过添加可溶性人类TREM2蛋白观察到结合增加，指示6E7抗体特异性结合人类TREM2上的表位。当添加6E7作为夹心抗体时，由于传感器固定的6E7抗体已结合至人类TREM2上的此特定表位，所以未观察到进一步结合。不过，当添加5E3抗体作为夹心抗体时，观察到结合增加，指示5E3抗体结合至人类TREM2上不同于6E7抗体的表位。
有关十六种不同抗TREM2抗体的表位分组数据的概述显示于下表9中。基于结合数据，这些抗体可以分成四个不同的表位分组。抗体10E3、13E7、24F4、4C5、4G10、32E3和6E7看来共享类似表位(分组A)，该表位不同于抗体16B8、26A10、26C10、26F2、33B12和5E3所结合的表位(分组B)。抗体24A10和24G6共享人类TREM2上的类似表位(分组C)，而抗体25F12具有与任何其他测试抗体不同的结合表位(分组D)。
表9.表位分组分析概述
Figure BDA0002295171410001241
实例5.激动剂抗TREM2抗体的结合亲和力测定
为了定量激动剂抗体对人类TREM2的结合亲和力，在
Figure BDA0002295171410001242
HTX仪器(佛特比奥公司(Pall ForteBio))上使用抗人类Fc(动力学公司)传感器确定缔合和解离速率常数以及平衡解离常数。将250μL的10μg/mL激动剂抗TREM2抗体放入DMEM空白培养基(null media)中。接着，将250uL测定缓冲液(10mM Tris(pH 7.6)、0.1％Triton X-100、150mM NaCl、1mMCaCl2和1mg/mL BSA)添加至抗体溶液中达到500μL最终体积和5μg/mL最终抗体浓度。在200μL测定缓冲液中预孵育抗人类Fc传感器最少10分钟。接着在10mM甘氨酸pH 1.5中使传感器再生5秒。将测试激动剂抗TREM2抗体装载至传感器上，保持2分钟，并取得基线测量值，历时2分钟。装载抗体的传感器结合至以100nM起始经6点连续稀释的重组可溶性人类TREM2蛋白(偶合至Flag/His标签的人类TREM2细胞外结构域(氨基酸1-174)(人类TREM2 ECD-FlagHis))或重组可溶性食蟹猕猴TREM2蛋白(偶合至Flag/His标签的食蟹猕猴TREM2细胞外结构域)的2倍连续稀释液系列。使重组TREM2蛋白与装载抗体的传感器缔合，保持10分钟，且接着测量解离，保持10分钟。测定是在25℃下进行。将实验动力学结果与1:1结合模型整体拟合以便测定缔合和解离速率常数以及平衡解离常数。表10提供有关所选抗体对人类TREM2的结合亲和力测定的结果，且表11提供有关所选抗体对食蟹猕猴TREM2的结合亲和力测定的结果。
表10.对人类TREM2的结合亲和力
抗体ID K<sub>D</sub>(M) k<sub>a</sub>(M<sup>-1</sup>s<sup>-1</sup>) k<sub>d</sub>(s<sup>-1</sup>)
4C5 3.1E-09 1.6E+05 4.9E-04
4G10 3.3E-09 3.0E+05 9.8E-04
5E3 2.1E-09 2.5E+05 5.3E-04
6E7 2.6E-09 2.7E+05 6.9E-04
10E3 1.03E-08 1.77E+05 1.82E-03
13E7 1.10E-08 1.44E+05 1.58E-03
24G6 3.13E-09 2.20E+05 6.88E-04
表11.对食蟹猕猴TREM2的结合亲和力
抗体ID K<sub>D</sub>(M) k<sub>a</sub>(M<sup>-1</sup>s<sup>-1</sup>) k<sub>d</sub>(s<sup>-1</sup>)
4C5 3.6E-09 3.3E+05 1.2E-03
4G10 1.7E-09 5.6E+05 9.6E-04
5E3 1.6E-09 7.0E+05 1.1E-03
6E7 2.5E-09 4.6E+05 1.1E-03
10E3 1.13E-08 3.24E+05 3.66E-03
13E7 8.71E-09 2.72E+05 2.37E-03
24G6 1.99E-08 4.86E+05 9.65E-03
实例6.抗TREM2抗体在THP-1细胞中的激动剂活性
评价所选抗TREM2抗体活化THP-1细胞中人类TREM2/DAP12信号传导的能力。THP-1细胞系是人白血病单核细胞系，常用作人类单核细胞和巨噬细胞功能的体外模型(Chanput等人，International Immunopharmacology[国际免疫药理学]，第23卷：37-45,2014)。
THP-1细胞悬浮液(1×106个细胞/mL)通过在37℃/5％CO2下于含有20nM佛波醇12-棕榈酸酯13-乙酸酯(PMA)的生长培养基(RPMI、10％FBS(热灭活)、1％Glutamax、1％Hepes、1％Pen/Strep)中孵育72小时来实现分化。72小时刺激后，细胞附着至组织培养物处理的培养皿的表面。用PBS轻柔地洗掉PMA，并在含有10ng/mL IL-4的新鲜生长培养基中进行补充。在37℃/5％CO2下继续孵育细胞72小时。第6天(细胞分化结束时)，用非酶细胞解离缓冲液或细胞剥离剂收集细胞并将其以每孔100,000个细胞涂铺于组织培养物处理的96孔盘中的生长培养基中。在37℃/5％CO2下孵育细胞隔夜。
次日，在室温下用抗人类TREM2抗体处理细胞10分钟，且随后移除培养基。在冰上，用30μl溶解缓冲液溶解细胞，保持45至60分钟。将细胞溶解产物(5μL)转移至384孔盘上，使用实例2中所描述的AlphaLISA测定来确定磷酸化Syk(pSyk)含量。利用6.07版GraphPadPrism的四参数逻辑斯蒂拟合模型，由剂量反应曲线确定各抗TREM2抗体的EC50值。
实验结果显示于图6和表12中。所有测试抗TREM2抗体在分化的THP-1细胞中以剂量依赖性方式诱导pSyk含量。所有抗TREM2抗体引起的Syk活化均高于mAB17291(“RnD”)，即一种市售大鼠抗人类/小鼠抗体(大鼠IgG2b克隆#237920，研究开发系统(R&D Systems))，其中有十种抗体引起的最大活化是市售抗体的2倍或更高倍数。抗体10E3和13E7展现最大Emax值，这些值是市售抗体的Emax值的约4.5倍。
表12.抗TREM2抗体对THP-1细胞中TREM2/DAP12信号传导的活化情况
抗体ID EC50(nM) Emax*
4C5 1.715 265.4
4G10 0.5791 235.7
5E3 0.5935 194.8
6E7 0.8989 273.4
10E3 1.004 456.5
13E7 0.4617 459.6
16B8 0.4176 139.8
24G6 0.6622 221.1
25F12 1.048 121.5
26F2 0.07778 207.4
32E3 1.246 196.6
33B12 2.845 245.7
RnD 0.3834 100*
*Emax＝抗体相较于RnD抗体(固定为100％)的最大活化百分比
实例7.激动剂抗TREM2抗体的工程化
选择抗TREM2抗体的子集进行随后的工程化以改善抗体的生物物理、表达和/或稳定特性。分析抗体10E3、13E7、4C5、6E7、5E3和24G6的轻链和重链可变区序列中的潜在化学热点(例如天冬氨酸异构化、天冬酰胺脱酰胺和色氨酸氧化)和协方差违反情况。协方差违反的校正可以改善抗体的热稳定性、表达和生物物理特性(参见例如WO 2012/125495)。下表13-18概括了六种抗体各自的序列分析结果且标识出重链和轻链可变区内特定位置处可以改善抗体的稳定性、表达和/或生物物理特性的特定突变。还指示序列内的特定区域(例如构架区1、2、3或4(FR1、FR2、FR3或FR4)或互补决定区1、2或3(CDR1、CDR2或CDR3))。
表13.工程化的10E3抗体变体
Figure BDA0002295171410001271
表14.工程化的13E7抗体变体
Figure BDA0002295171410001281
表15.工程化的4C5抗体变体
Figure BDA0002295171410001282
表16.工程化的6E7抗体变体
Figure BDA0002295171410001283
表17.工程化的5E3抗体变体
Figure BDA0002295171410001292
表18.工程化的24G6抗体变体
Figure BDA0002295171410001293
表19.工程化的抗体的示例性可变区氨基酸序列
Figure BDA0002295171410001301
表20.工程化的抗体的示例性可变区核苷酸序列
Figure BDA0002295171410001302
Figure BDA0002295171410001311
Figure BDA0002295171410001321
通过将抗体可变区转移至人类IgG1恒定区上，将自杂交瘤分离的作为人类IgG2抗体的所选抗TREM2抗体转化成人类IgG1抗体或人类IgG1抗体的无糖基化变体(根据EU编号，突变N297G、R292C、V302C)。使用实例2中所描述的AlphaLISA pSyk活化测定评价IgG1型抗体的激动剂活性。意外的是，来自IgG2同种型的这些所选抗体向IgG1同种型的转化引起激动剂活性的部分损失(图7)。
据报导，IgG2抗体铰链区中二硫键的独特布置使某些抗癌抗体具有增强的刺激性活性(White等人，Cancer Cell[癌症细胞]，第27卷：138-148,2015)。此增强的活性可以通过将IgG1抗体的CH1和铰链区替换成IgG2抗体中的CH1和铰链区而转移至IgG1型抗体(White等人，2015)。
为了评价24G6、6E7和5E3抗TREM2 IgG2抗体当转化成IgG1同种型时是否能增强或保持其激动剂活性，制备将分别来自24G6、6E7和5E3抗体的重链可变区序列同框插入编码来自人类IgG2抗体CH1和铰链区的序列和编码来自无糖基化人类IgG1抗体Fc区(CH2和CH3区)的序列。无糖基化人类IgG1抗体Fc区包含根据EU编号具有N297G、R292C和V302C突变的人类IgG1z Fc区的序列(SEQ ID NO:282)。
除用来自IgG2抗体的CH1和铰链区置换IgG1抗体的CH1和铰链区外，在铰链区和CH1区内的特定残基处还进行点突变以将这些抗体锁定于特定二硫键构型。据报导，IgG2抗体铰链区和CH1区中的二硫键可以经改组而产生不同结构的二硫键同功型(IgG2A、IgG2B和IgG2A-B)，且这些不同的二硫键同功型可以具有不同的活性水平。参见例如Dillon等人，J.Biol.Chem.[生物化学杂志]，第283卷：16206-16215；Martinez等人，Biochemistry[生物化学]，第47卷：7496-7508,2008；和White等人，Cancer Cell[癌症细胞]，第27卷：138-148,2015。为了将铰链区修饰的IgG1抗体锁定于IgG2B二硫键构型，进行两组点突变：(1)重链中根据Kabat编号的C127S突变(根据EU编号的C131S)；以及(2)轻链中的C214S突变与重链中的C233S突变的组合，二者均根据Kabat编号(根据EU编号的C214S和C220S)。参见例如WO2009/036209，其通过引用以其整体特此并入。预期含有其他点突变的6E7和5E3抗体的IgG2铰链区修饰的IgG1形式在AlphaLISA pSyk活化测定中显示与亲本IgG2分子相当或更优选的激动剂活性。
表21.示例性抗体的轻链和重链氨基酸序列
Figure BDA0002295171410001331
Figure BDA0002295171410001341
Figure BDA0002295171410001351
表22.示例性抗体的轻链和重链核苷酸序列
Figure BDA0002295171410001352
Figure BDA0002295171410001361
Figure BDA0002295171410001371
Figure BDA0002295171410001391
Figure BDA0002295171410001401
实例8.激动剂抗TREM2抗体的亲和力调节
为了产生对人类TREM2具有增加或降低的亲和力的抗体变体，使用酵母展示Fab文库的荧光活化细胞分选(FACS)对6E7激动剂抗TREM2单克隆抗体进行亲和力调节。使用无偏差文库构建策略，其中对各轻链和重链CDR的每个氨基酸残基进行NNK饱和诱变以产生点突变。产生各CDR的独立Fab文库。使用FACS对六个酵母展示的Fab文库分别进行分选并筛选与人类TREM2的结合增加和减少的变体。还构建经由CDR和链改组而组合了富集结合的突变的第二文库，进行分选和筛选。有关6E7变体的流式细胞术筛选数据显示于下表19中。6E7重链和轻链可变区的指定区域中点突变的氨基酸位置是关于6E7重链可变区序列(SEQ ID NO:124)和6E7轻链可变区序列(SEQ ID NO:61)编号。选出二十二个变体进行进一步评价和表征。相对于6E7抗体具有增加的结合亲和力的所选变体的完整重链和轻链可变区序列以及相关CDR提供于表2A和2B中，而相对于6E7抗体具有降低的结合亲和力的所选变体的完整重链和轻链可变区序列以及相关CDR提供于表3A和3B中。
表23. 6E7抗体亲和力调节变体
Figure BDA0002295171410001411
Figure BDA0002295171410001421
Figure BDA0002295171410001431
Figure BDA0002295171410001441
a带*标记的结合信号值是在110nM Ab浓度下获得，而该栏中的其他值是在10nMAb浓度下获得。
实例9.利用激动剂抗TREM2抗体挽救巨噬细胞和小胶质细胞存活缺陷
人类TREM2的R47H变体与晚期发作型阿尔茨海默病的风险增加有关(Jonsson等人，New England Journal of Medicine[新英格兰医学杂志]，第368卷：107-116,2013)。为了特异性靶向Trem2基因而不干扰其他调控组件，使用基于基因编辑的方法产生Trem2-/-或Trem2R47H小鼠。通过使Trem2基因的外显子1有5bp或11bp缺失来产生Trem2-/-品系，且通过在小鼠Trem2基因中的残基47处工程化与人类变体类似的点突变来产生Trem2R47H品系。有关来自Trem2-/-和Trem2R47H小鼠的脑匀浆的详细qPCR分析确定在这些基因敲除小鼠中存在该基因的损失且TremR47H小鼠的Trem2表达与野生型年龄相配对照组相当(数据未示出)。在野生型、Trem2-/-或Trem2R47H小鼠中，在基础或LPS刺激条件下未观察到基因座中其他TREM基因(Trem1、TremL1和TremL2)的显著差异(数据未示出)。
为了解TREM2改变对骨髓细胞的影响，在限制性CSF-1条件下，比较TREM2-/-骨髓源性巨噬细胞(BMDM)以及成年和新生儿小胶质细胞与野生型巨噬细胞和小胶质细胞的特性。与当前有关在较低CSF-1含量下经历存活缺陷的TREM2-/-小胶质细胞和巨噬细胞的研究(Wang等人，Cell，第160卷；1061-1071,2015；Wu等人，Journal of Experimental Medicine[实验性医学学报]，第212卷：681-697,2015)相符，还观察到自TREM2-/-小鼠分离的BMDM和小胶质细胞的存活率降低，证实这些细胞展示在其他TREM2-/-模型中所报导的TREM2依赖性行为(图8A-8C)。为了确定R47H突变是否影响骨髓细胞在激发条件下存活的能力，对TREM2R47H BMDM和小胶质细胞进行类似研究。值得关注的是，TREM2R47H BMDM和小胶质细胞在类似培养条件下还展现较差的存活情况，与TREM2-/-BMDM和小胶质细胞极其类似(图8D-8F)。不过，TREM2R47H BMDM和小胶质细胞的存活缺陷不如TREM2-/-BMDM和小胶质细胞的存活缺陷明显。还观察到基因对TREM2R47H和TREM2-/-骨髓细胞的剂量依赖性影响，其中这些影响在基因敲除细胞中比在变体细胞中要明显得多(数据未示出)。尽管TREM2R47H巨噬细胞表型遵循与TREM2-/-巨噬细胞相同的倾向，但这些表型不能简单地通过细胞表面R47H TREM2的表达减少来解释，因为野生型与TREM2R47H BMDM看来具有相当的表面TREM2表达水平(数据未示出)。总体而言，这些实验的结果证实R47H变体存在功能损失，该变体模拟TREM2蛋白的损失情况，不过具有不如基因敲除明显的表型。
接下来，评估TREM2R47H BMDM中TREM2的活化情况。如通过蛋白质印迹所测量，可商购的大鼠抗人类/小鼠TREM2抗体(mAb17291；大鼠IgG2b克隆#237920，研究开发系统(R&DSystems))使R47H和野生型BMDM中pSyk的含量增加，且该增加作用在野生型BMDM中较为明显(图9A)。这些抗体对TREM2-/-巨噬细胞无影响，表明TREM2特异性活化作用(图9B)。为了确定巨噬细胞中TREM2/DAP12介导的Syk信号传导的活化是否能改善更下游的生物表型，包括降低的存活率，用抗TREM2激动剂抗体(mAb17291抗体)或同种型对照处理TREM2R47H BMDM并使用Incucyte Xoom成像系统监测细胞汇合情况。意外的是当用抗TREM2激动剂抗体处理巨噬细胞时，观察到TREM2R47H BMDM的细胞存活挽救，且几乎完全恢复到野生型水平(图10A-10C)。在实时成像(图10A和10B)和终点细胞活力(ATP积累)测定(图10C)中均观察到细胞存活率的显著增大。当用同种型对照抗体处理BMDM时，未观察到相当的细胞存活挽救作用(图10A-10C)。观察到纯合TREM2基因敲除巨噬细胞的存活率无增加，证实该抗体的作用对TREM2活化具有特异性(数据未示出)。成年TREM2R47H小胶质细胞当用该抗TREM2激动剂抗体处理时观察到类似的细胞存活挽救作用，而当用同种型对照抗体处理这些小胶质细胞时未观察到相当的细胞存活挽救作用(图10D)。
此外，活化Syk信号传导但不与市售抗体竞争的抗TREM2激动剂抗体(抗体2)使得自老年(18月龄)野生型和R47H动物收集的巨噬细胞的存活率增加(图10E和10F)，而当用同种型对照抗体处理小胶质细胞时未观察到相当的细胞存活挽救作用(图10E和10F)。
为了评价抗TREM2激动剂抗体处理对野生型、TREM2基因敲除和TREM2R47H骨髓细胞迁移的影响，在迁移测定中评估自具有各不同基因型的小鼠分离的骨髓源性巨噬细胞。第5天，自TREM2+/+、TREM2R47H和TREM2-/-小鼠收集BMDM，并接种于RadiusTM96孔迁移测定盘(细胞生物实验室(Cell Biolabs))中补充有50ng/ml M-CSF的完全RPMI培养基中。用抗TREM2激动剂抗体(抗体1或抗体2)、同种型对照抗体或媒剂处理细胞24小时。次日，根据制造商的方案，洗涤细胞以移除生物相容性凝胶层并暴露出无细胞区域以供迁移。用补充有50ng/mlM-CSF以及上述抗TREM2激动剂抗体、同种型对照抗体或媒剂对照的新鲜生长培养基更换培养基。使用Incucyte Zoom成像系统监测细胞汇合情况并以汇合百分比对数据作图。值得关注的是，用抗体1处理引起较小但统计显著的TREM2R47H巨噬细胞增殖/迁移减少(图11B)且对野生型局势不(TREM2+/+)具有极小影响(图11A)且对来自基因敲除小鼠(TREM2-/-)的巨噬细胞无影响(图11C)。用抗体2处理对野生型(TREM2+/+)或TREM2R47H巨噬细胞的迁移无影响(图11D和11E)。
在分子层面上，此巨噬细胞迁移减少是由在抗TREM2激动剂抗体处理(同时用和不用脂多糖处理)后TREM2R47H和野生型巨噬细胞中的细胞表面FLT1减少反映，而在所选研究时间点，未观察到其他趋化因子/趋化因子受体(例如CCR5)的显著差异(数据未示出)。不同基因型的迁移与FLT1之间以及与抗体的药理学操纵作用的一致相关性提出TREM2与FLT1之间的新颖关联，该关联有待进一步研究。不过，同样值得关注的是，观察到活化TREM2/DAP12信号传导的抗体在近端可能对存活和迁移具有相反作用；不同抗体(取决于这些抗体结合的位置及其与内源性配体相互作用的方式)可能会具有不同的近端和远程活性形式。
这些实验的结果证实，能够活化TREM2/DAP12信号传导的抗体可以挽救由TREM2突变引起的功能丧失导致的巨噬细胞和小胶质细胞的存活缺陷。结果表明，可以活化TREM2并增强巨噬细胞/小胶质细胞活性的激动剂抗体可以作为阿尔茨海默病和与TREM2功能丧失相关的其他病症的治疗剂。
实例10.巨噬细胞中激动剂抗TREM2抗体的基因调控
为了在转录物组层面上了解来源于实例9中所述TREM2-/-和TREM2R47H小鼠的巨噬细胞表型改变的基础，在第7天，在限制性CSF-1条件下进行RNA-Seq分析以比较野生型、TREM2-/-和TREM2R47H巨噬细胞。收集第7天的BMDM并使用Rneasy Mini Kit(凯杰公司(Qiagen))，根据制造商的方案分离总RNA。
使用1-2μg自骨髓源性离体巨噬细胞纯化的总RNA，通过使用基于IlluminaTruseq RNA样品制备试剂盒(加利福尼亚州圣地亚哥的依诺米那公司(Illumina,SanDiego,CA))的改善方案和公开的有关链特异性RNA-Seq的方法(Perkins,T.T.等人，PLoSgenetics[PLoS遗传学]，第5卷：e1000569,2009；Parkhomchuk,D.等人，Nucleic acidsresearch[核酸研究]，第37卷：e123,2009)制备cDNA文库。在聚腺苷酸选择、断裂和引发后，在RNaseOut(加利福尼亚州卡尔斯巴德的生命技术公司(Life Technologies,Carlsbad,CA))和放线菌素-D(加利福尼亚州圣安娜的MP生物医学公司(MP Biomedicals,Santa Ana,CA))存在下，进行反转录以合成第一链cDNA。通过使用AMPure RNAClean珠粒(加利福尼亚州帕萨迪纳的贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter,Pasadena,CA))，遵循商品说明书进一步纯化所合成的cDNA。准备通过并入dUTP代替dTTP的改善方法并用于第二链合成(Perkins等人，PLoS genetics[PLoS遗传学]，第5卷，e1000569,2009；Parkhomchuk等人，NucleicAcids Research[核酸研究]，第37卷，e123,2009)。在AMPure XP珠粒纯化(贝克曼库尔特(Beckman Coulter))后，遵循依诺米那公司(Illumina)推荐的标准方法，依序进行末端修复、腺苷酸尾添加和连接索引接头蛋白以产生cDNA文库。在使用Pippen Prep(马萨诸塞州贝弗利的SAGE生物科学公司(SAGE Biosciences,Beverly,MA))，根据尺寸选择文库之后，通过USER酶(马萨诸塞州伊普斯维奇的新英格兰生物实验室(New England Biolabs,Ipswich,MA))消化，随后进行PCR富集步骤引入链特异性，来破坏含dUTP的cDNA链。提纯后，在Agilent生物分析仪中分析富集的cDNA文库并通过Quant-iTTM Pico-Green分析(生命技术公司(Life Technologies))定量，随后在Illumina HiSeq平台上测序。每个文库产生至少3500万个75bp配对末端读段进行下游分析。
使用嵌入Omicsoft ArrayStudio管线(美国Omicsoft有限公司(Omicsoft Inc.,USA))中的OSA比对仪(Hu等人，Bioinformatics[生物信息学]，第28卷：1933-1934,2012)比对RNA-seq测序读段。在比对和定量中使用小鼠基因组版本的GRCm38和UCSC基因注释。基于RSEM，对基因和转录物含量进行定量(Li等人，BMC Bioinformatics[BMC生物信息学]，第12卷：323,2011)。利用每百万条读段每千碱基长度的片段数(FPKM)来计算正规化的基因表达水平，接着相对于10在70％处百分位归一化(FPKQ)。只有具有至少一个以FPKQ≥1表示的样品的基因用于以下统计分析中。使用R Bioconductor软件包DESeq2，遵循负二项分布来比较由所选基因获得的原始读段计数(Love等人，Genome Biology[基因组生物学]，第15卷：550,2014)。选择BH校正的p值<0.05且倍数变化≥1.5或≤2/3的基因作为表达存在显著差异的基因。使用Ingenuity路径分析(IPA，凯杰公司(QIAGEN)，美国红木城(Redwood City,USA))进行路径分析。
与在TREM2-/-、TREM2R47H和野生型巨噬细胞中所观察到的表型严重程度等级一致，在差别调控的转录物中观察到类似倾向，且作用幅度在TREM2-/-巨噬细胞中最高且TREM2R47H巨噬细胞在野生型与TREM2-/-巨噬细胞之间。利用qPCR在独立实验中基因的子集中证实此差别调控(图12A-12D)。路径分析针对TREM2在细胞周期、细胞存活、细胞增殖和迁移中的作用以及推定地补体路径、脂质稳态以及趋化因子/受体和迁移因子之间的相互影响(数据未显示)。
利用qPCR证实若干基因的转录物调控随时间的差异，包括与阿尔茨海默病有关的一些已知遗传因子，例如ApoE(图13A和13B)、促炎性细胞因子，如Il-1a(图13C和13D)，和大量趋化因子/趋化因子受体，包括Cx3cr1(图13E和13F)、Ccl5(图13K和13L)、Ccl22(图13M和13N)、Ccr5、Ccr2和Ccl3，以及补体基因，包括C1qa(图13I和13J)和C3(图13O和13P)。在各情况下，在TREM2-/-巨噬细胞中的作用要比在TREM2R47H巨噬细胞中的作用要明显得多。首次观察到TREM2与促血管生成受体Vegfr1(Flt1)之间的关联，且在TREM2-/-和TREM2R47H巨噬细胞中Flt1减少(图13G和13H)。另外，还观察到TREM2-/-和TREM2R47H巨噬细胞中VEGF-a增加，与可供结合的受体缺乏一致(数据未示出)。多个迁移因子的减少使得TREM2-/-和TREM2R47H巨噬细胞的迁移/移动减少(图14A和14B)。近期的研究报导，在TREM2基因敲除物中斑块和凋亡细胞周围区域中小胶质细胞的数量/迁移减少(Mazaheri等人，EMBO reports[欧洲分子生物学报告],e201743922,2017；Wang等人，Cell[细胞]，第160卷：1061-1071,2015)。
与RNA seq.数据一致，还观察到TREM2-/-和TREM2R47H巨噬细胞分泌的趋化因子MCP-1/CCL2减少(图15A)。在激发条件下TREM2R47H巨噬细胞的MCP-1/CCL2分泌减少可以通过用激动剂抗TREM2抗体(mAb17291抗体)处理恢复(图15B)。激动剂抗TREM2抗体增加MCP-1/CCL2以及改善骨髓存活(实例9)的能力是值得关注的且涉及利用激动剂抗体处理使骨髓细胞功能的不同方面的总体改善。另外，当用Aβ寡聚物处理TREM2R47H巨噬细胞时，观察到MCP-1/CCL2的增加，在用激动剂抗TREM2抗体处理后，该增加进一步增大(数据未示出)。
激动剂抗TREM2抗体处理TREM2R47H巨噬细胞还以与基因型影响相对的方向调节基因表达，且包括参与骨髓细胞迁移、增殖、细胞周期和存活的调控的基因(图16A和16B)。针对差别调控的基因的路径分析披露出TREM2在激发条件下在调节骨髓细胞生物学的不同方面的推定作用，包括DNA复制、细胞周期调控、增殖、细胞死亡和趋化因子/细胞因子调节。在阿尔茨海默病病因学的情况下，这些转基因数据证实以下假说：呈功能丧失变体形式或在细胞表面表达减少形式的TREM2缺陷引起基础增殖/存活缺陷，由此导致随后不能针对斑块/凋亡细胞的吞噬作用、细胞因子调节或可能存在的新颖屏障功能有效发挥作用。另外，针对迁移性趋化因子如CCL2和CCR2的分泌减少的直接作用还可能减弱巨噬细胞/小胶质细胞朝向凋亡细胞和斑块有效迁移的能力且可能在病程早期进一步引起斑块负荷的增加。增加近端信号传导的抗体还挽救存活缺陷且恢复趋化因子含量的能力优选地展示近端功能与较远程生物学之间的相关性且有力地支持可以潜在地增强巨噬细胞/小胶质细胞活性且改善疾病的治疗性抗体策略。
实例11.激动剂抗TREM2抗体在多发性硬化的EAE模型中的功效
在多发性硬化的实验性自身免疫性脑炎(EAE)模型中评价本文所描述的激动剂抗TREM2抗体在改善多发性硬化的症状和/或疾病进展方面的功效。如先前在Feinstein等人，Ann.Neurol.[神经病学纪事]，第51卷：694-702,2002中所描述，利用髓磷脂寡树突细胞糖蛋白(MOG)和百日咳毒素在动物中诱发EAE。简言之，对数组7-9周龄的雌性TREM2野生型(C57BL/6品系)、TREM2-/-和TREM2R47H小鼠皮下注射100μg在含有4mg/mL结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)H37RA的弗氏完全佐剂(complete Freund’s adjuvant)中乳化的MOG肽35-55(MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK(SEQ ID NO:283))。在第0天和第2天，向每只小鼠腹膜内注射于200μL生理盐水中的200ng百日咳毒素。在第0天、第7天和第14天给药抗TREM2抗体(30mg/kg和100mg/kg)以确定在疾病进展的不同时间点时抗体治疗的效果。测量周围、CNS和CSF中的多种细胞因子和炎症终点，包括可溶性TREM2、MCP-1/2、MIP1a与b、CCL2、CCR2及其他趋化因子/细胞因子以评估抗TREM2抗体的作用。此外，利用临床评分评价动物的神经损伤情况如下：0分，无EAE的临床病征；1分，拖尾；2分，尾无力和异常步态(共济失调和/或后肢麻痹)；3分，严重后肢麻痹；4分，后体完全麻痹；和5分，濒死或死亡。
实例12.激动剂抗TREM2抗体在腹膜炎和败血症动物模型中的功效
在腹膜炎和败血症动物模型中评价本文所描述的激动剂抗TREM2抗体在调节剂型发炎性反应中的作用。可以将酵母多糖(一种来源于酿酒酵母的多糖细胞壁组分)注射至动物的腹腔中以重现与腹膜炎相关的发炎性反应(参见Cash等人，Methods in Enzymology[酶学方法]，第461卷：379-396,2009)。酵母多糖(1mg/kg)是在施用抗TREM2抗体(20mg/kg)、同种型对照抗体或媒剂的同时或之后24小时经腹膜内施用。在治疗后4小时和24小时收集血浆、CSF、CNS和腹腔灌洗液以及巨噬细胞。测量周围、CNS和CSF中的多种细胞因子和炎症终点，包括定量评估不同骨髓细胞类型，以及可溶性TREM2、MCP-1/2、MIP1a与b、CCL2、CCR2及其他趋化因子/细胞因子以评估抗TREM2抗体对炎性反应的作用。
在一系列独立实验中，在革兰氏阴性细菌性败血症的脂多糖(LPS)模型中评价激动剂抗TREM2抗体的作用。LPS(1mg/kg)是在施用抗TREM2抗体(20mg/kg)、同种型对照抗体或媒剂之后24小时经腹膜内施用。在治疗后4小时和24小时，收集血浆、CSF和CNS样品。测量周围、CNS和CSF中的多种细胞因子和炎症终点，包括定量评估不同骨髓细胞类型，以及可溶性TREM2、MCP-1/2、MIP1a与b、CCL2、CCR2及其他趋化因子/细胞因子以评估抗TREM2抗体对炎性反应的作用。
实例13.抗TREM2抗体的表位定位
用于抗TREM2抗体表位定位的免疫印迹法
设计针对人类可溶性Trem2的PepSpot肽(JPT肽科技公司(JPT PeptideTechnologies))，使其覆盖整个细胞外结构域(自组氨酸21开始)，产生74×10聚体线性肽，包括另外6个对照肽，每个纤维素膜总计80个pepspot。通过沿蛋白质步行2个氨基酸选择10聚体肽序列，引起8个氨基酸的重叠。在轻柔振荡下，在室温下用40ml 100％甲醇洗涤膜10分钟，随后立即用40ml TBST(TBS+0.05％Tween 20)洗涤3次，每次10分钟。在轻柔振荡下，在室温下用未稀释的LICOR阻断缓冲液(阻断缓冲液927-40000)阻断膜隔夜，并在轻柔振荡下，在4℃下将其与1μg/ml 24G6(PL-52705,生产日期2.24.2017，[hu抗-<huTrem2>21-191_24G6 VK4(1-242)VL]::huKLC-CL+[hu抗-<huTrem2>21-191_24G6 VH3(1-471)VH]::huIgG1zSEFL2-2(单克隆抗体)、iPS:536553、SS-28346)一起在含有1％Tween20的Licor阻断缓冲液中孵育隔夜。次日，用TBST缓冲液(Tris缓冲生理盐水+0.05％Tween20)洗涤印迹4次，每次15分钟，并用在含1％Tween 20和0.1％SDS的Licor阻断缓冲液中1:20,000稀释的二次抗体(Licor目录号925-32232
Figure BDA0002295171410001512
800CW山羊抗人类批号C70419-05)探测。在轻柔振荡下，在室温下避光孵育印迹1小时，随后在TBST中再洗涤4次并在室温下干燥1小时。使用Licor Odyssey红外荧光成像仪，在800信道上扫描蛋白质印迹。
用于抗TREM2抗体表位定位的MSD法
合成在人类可溶性Trem2的N末端(西格玛公司(Sigma))具有生物素的肽(如先前所述设计的序列)并在100％DMSO中归一化至20mg/ml。用每孔50μl总体积的在2X PBS(-ca/-mg)pH 7.8-7.9中5μg/ml的生物素化肽涂覆MSD GOLD 96孔小点抗生蛋白链菌素SECTOR盘(MSD#L45SA)并在轻柔振荡下，在室温下孵育2小时。使用自动盘洗涤器，用每孔150μl TBST缓冲液(Tris缓冲生理盐水+0.05％Tween-20,pH 7.2)洗涤盘3次。根据制造商的SOP，用MSD磺基标签标记单克隆抗体24G6.1(PL-51585，生产日期12/9/2016,hu抗-<huTrem2>IgG2)以用作检测试剂并以每孔25μl总体积以于MSD稀释剂100(#R50AA-3)中的1μg/ml量添加。在轻柔振荡下，在室温下孵育盘1小时，接着使用自动盘洗涤器，用每孔150μlTBST缓冲液(Tris缓冲生理盐水+0.05％Tween-20，pH 7.2)洗涤3次，轻敲且再洗涤3次。通过用H2O稀释至1X并以每孔150μl总体积添加来制备MSD读取缓冲液T+表面活性剂4x储备液(#R92TC-3)。立即在MSD Sector 6000读取器上读取盘。
结果
已发现24G6抗体结合至以下肽(HRDAGDLWFP(SEQ ID NO:360)、AGDLWFPGE(SEQ IDNO:361)和GDLWFPGESE(SEQ ID NO:362))。由此提供24G6识别TREM2中的以下肽(HRDAGDLWFPGESE(SEQ ID NO:363))的数据。还对略微较长的肽PLDHRDAGDLWFPGESE(SEQID NO:364)进行丙氨酸扫描以鉴别关键接触位点。发现24G6显示与两个丙氨酸扫描肽(PLDHRDAGDAWFPGESE(SEQ ID NO:365)；PLDHRDAGDLWAPGESE(SEQ ID NO:366)(带下划线的氨基酸))极少结合，甚至不结合，表明这些接触残基是其识别此肽必需的。本研究有助于确定此抗体识别人类TREM2的最小肽为GDLWFP(SEQ ID NO:367)。此抗体还展示与食蟹猕猴TREM2的较低亲和力。对于含有相应食蟹猕猴TREM2序列的肽观察到类似数据。对于其他抗TREM2抗体(6E7、5E3和13E7)，使用所述方法未鉴别到有助于说明肽表位的特定肽。
实例14.激动剂抗TREM2抗体对小胶质细胞的周围调节作用
为了解药理学治疗对整个转录物组的影响，对自WT和给药无效应物形式的这些激动剂TREM2抗体之一的R47H TREM2小鼠分离的CNS驻留型Cd11b+细胞进行sc RNA-Seq研究。使用TREM2+/+、TREM2-/-和TREM2R47H雄性B6小鼠(60-67天大)进行单细胞RNA-seq研究。通过以5ml/kg静脉内注射30mg/kg剂量，用抗鼠类TREM2稳定无效应子功能(stable effectorfunctionless，SEFL)抗体或抗人类Her同种型对照进行抗体治疗。在急性炎症模型中，在抗体治疗后16小时，向抗体治疗的动物以5ml/kg腹膜内给与5mg/kg LPS(<来源>)，并用LPS刺激4小时。同时对基因型相配、年龄相配且性别相配的同窝小鼠对照给药同种型对照抗体。
在CO2窒息后，自经治疗消除收集脑并使用针对小鼠和大鼠的Miltenyi成年脑解离试剂盒(美天旎生物技术(Miltenyi Biotec)130-107-677)，根据制造商的标准方案解离组织。使用微珠(美天旎生物技术(Miltenyi Biotec)130-049-601)富集阳性CD11b+细胞，在新鲜制备的冰冷PBS+0.04％BSA中洗涤两次并在>70％存活下，将其以500-1000个细胞/微升再悬浮于新鲜PBS+0.04％BSA中。收集脑并使用先前公开的美天旎(Miltenyi)Cd11b分离试剂盒分离小胶质细胞。如根据10x Chromium制造商的指导原则制备NGS文库。根据制造商的方案进行反转录、总cDNA扩增和文库构建。使用带有V2化学试剂的Chromium SingleCell 3’组(10x Genomics公司)进行单细胞RNA测序。将富集的CD11b+细胞装载并封装于Chromium Single Cell芯片A(10x Genomics公司)上以达到每份样品5,000个细胞的细胞回收率。实现超过Keren-Shaul等人的研究2倍的测序读段深度，且每个细胞鉴别出约2095个基因和每个细胞xUMI。应用T分布邻域嵌入(T-distributed stochastic neighborembedding，t-SNE)观测单细胞基因表达形式并使用dbscan群集将细胞分入各细胞类型组中。
总计鉴别出十一个不同群体。最主要的细胞簇是如由Trem2+、Tmem119+、P2ry12+、Hexb+、Lyz2-基因特征确定的小胶质细胞，其中小胶质细胞占所有治疗组和基因型中所分析的细胞总数的60％。还鉴别出由磁性富集后仍存在的内皮细胞、星形细胞、NK细胞和寡树突细胞构成的少量残余群。基于LPS处理，主要小胶质细胞簇明显分成两组，即较为稳态的小胶质细胞簇和活化的小胶质细胞簇。在LPS活化状态下，观察到基因型差异(WT相对于R47H)和抗体治疗在WT和R47H组中具有微小影响。甚至在仅观察到小胶质细胞簇时，这些模式仍保持。还观察到带有小胶质细胞基因标志以及经典浸润标记物的其他少量骨髓细胞簇。
有关抗体治疗对小胶质细胞簇的细致分析披露，抗体治疗具有较少的独特生物作用。首先，抗体治疗使WT和R47H小胶质细胞、仅WT小胶质细胞和仅R47H小胶质细胞中包括Cx3cr1、Tmem119、Ctsd和P2ry12在内的稳态的基因的含量升高(图17A、B和C)。其次，抗体治疗使包括Il1a、Il1b、Il27、Il12b、Ccr7、Ccl2、Ccl3、Ccl4和Ccl5的促炎性趋化因子的转录物含量降低(图17D、E和F)。再次，抗体治疗调节包括若干DUSP(调控Src激酶的磷酸酶)在内的参与Syk信号传导的若干基因以及MAPK信号传导路径中的基因。据观察，自未激发的正常7周龄小鼠分离的WT与R47H小胶质细胞之间存在极小差异。
在无干扰状态下检查WT与R47H小胶质细胞之间的差异以及确定抗体治疗的作用时，注意到在LPS/抗体治疗的动物中，约15％的群集而具有较为传统的小胶质细胞组的细胞带有独特基因标志且来自R47H基因型的表示较高。细致分析披露，这些细胞先群集较大的小胶质细胞组，因为其是Trem2+、Tmem119+、Cx3cr1+和Hexb+，即用于确定稳态的小胶质细胞的经典标记物。又，相较于较大、较为经典的小胶质细胞簇，这些细胞还在WT和R47H群中富集如S100a8、Lcn2、S100a9、Camp、Hp、Cxcr2和Il1r2之类基因。当对于在此细胞簇中优先表达之前几个基因进行路径分析时，发现这些匹配与单核细胞和中性粒细胞功能相关(图18A和B)。该组浸润物/小胶质细胞还对抗体治疗起反应且下调WT和R47H KI、仅WT和仅R47HKi小鼠中的促炎性趋化因子和细胞因子(图18C、D和E)。
数据显示，在LPS激发模型中急性给与本发明的激动剂抗体适于以组成性基因过度表达在如AD之类慢性适应症中所遵循的方式正调控小胶质细胞功能。此外，本发明的激动剂抗体对TREM2的特异性活化影响LPS治疗模式中的多种稳态的基因并使其总体恢复较为稳定的状态。
本文所论述和引用的所有出版物、专利和专利申请都通过引用以其整体特此并入。应了解，所披露的发明不限于所描述的特定方法、方案和材料，因为这些可以变化。还应了解，本文所使用的术语仅仅出于描述特定实施例的目的，且不旨在限制所附权利要求的范畴。
本领域普通技术人员将认识到，或能够仅使用常规试验确定本文所描述的本发明的具体实施例的许多等效内容。预期这些等效内容还涵盖在所附权利要求中。
序列表
<110> 安进公司
<120> TREM2抗原结合蛋白及其用途
<130> A-2129-WO-PCT
<140> PCT/US XX/XXXXXX
<141> 2018-04-18
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<151> 2017-04-21
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<151> 2017-07-10
<150> 62/580,400
<151> 2017-11-01
<160> 367
<170> PatentIn3.5版
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser His Asn Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 54
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID 10E3
<400> 54
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Val
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Phe Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 55
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID 13E7 14C12
<400> 55
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Val
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID 25F12
<400> 56
Glu Lys Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Asn Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Arg
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 57
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID 25F12
<400> 57
Glu Phe Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ile Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
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Ile Thr Phe Gly Arg Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 58
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID 24F4
<400> 58
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
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50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105
<210> 59
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID 16B8
<400> 59
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 60
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID 4C5
<400> 60
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID 6E7
<400> 61
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID 5E3
<400> 62
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
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Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 63
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性抗人TREM2抗体轻链可变区氨基酸序列 - VL氨基酸序列
<400> 63
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Pro Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Thr
100 105
<210> 64
<211> 113
<212> PRT
<213> 智人
<400> 64
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Lys
<210> 65
<211> 113
<212> PRT
<213> 智人
<400> 65
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
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Lys
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<211> 113
<212> PRT
<213> 智人
<400> 66
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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100 105 110
Lys
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<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 67
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
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<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 68
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<211> 108
<212> PRT
<213> 智人
<400> 69
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 70
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人
<400> 70
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 71
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 71
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 72
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 72
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 73
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 73
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 74
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 75
<211> 116
<212> PRT
<213> 智人
<400> 75
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Ala Ser Leu Thr Cys Thr Leu Arg Ser Gly Ile Asn Val Gly Thr
20 25 30
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100 105 110
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<210> 76
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 76
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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<210> 77
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性抗人TREM2抗体重链可变区氨基酸序列 - CDRH1
<400> 77
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1 5
<210> 78
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1抗体ID 26A10
<400> 78
Ser Phe Gly Met Ser
1 5
<210> 79
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1抗体ID 24A10
<400> 79
Asn Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 80
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1抗体ID 10E3
<400> 80
Asn Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 81
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1抗体ID 13E7 14C12
<400> 81
Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 82
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1抗体ID 25F12
<400> 82
Ser Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 83
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1抗体16B8
<400> 83
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1抗体ID 4C5
<400> 84
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1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1抗体ID 6E7
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Ser Tyr Trp Ile Ala
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1抗体ID 5E3
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Gly Tyr Tyr Ile His
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID 12G10 24C12
<400> 87
Ala Ile Gly Gly Gly Gly Val Ser Thr Tyr Cys Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 88
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性抗人TREM2抗体重链可变区氨基酸序列 - CDRH2
<400> 88
Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Phe Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 89
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体26A10
<400> 89
Tyr Ile Ser Lys Ser Ser Phe Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 90
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID24G6
<400> 90
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 91
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID 10E3
<400> 91
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 92
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID 25F12
<400> 92
Glu Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 93
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID 16B8
<400> 93
Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 94
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体4C5
<400> 94
Trp Ile Asn Pro Tyr Ser Gly Gly Thr Thr Ser Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 95
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3抗体12G10 24C12
<400> 95
Phe Tyr Ile Ala Val Ala Gly Ser His Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 96
<211> 17
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<213> 人工序列
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Val
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Val
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Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Ala Ile Gly Gly Gly Gly Val Ser Thr Tyr Cys Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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<220>
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<400> 111
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Arg Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Phe Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Phe Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Leu Thr Met Val Arg Gly Val Ser Ser Tyr Gly
100 105 110
Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 26C10
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Phe Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Phe Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
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100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 126
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<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 26F2
<400> 113
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Phe Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Phe Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
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Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<211> 126
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<213> 人工序列
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<223> VH氨基酸序列抗体ID 33B12
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Lys Ser Ser Phe Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Phe Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 24G6
<400> 115
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 24A10
<400> 116
Glu Val Gln Val Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Gly Gly Trp Glu Leu Phe Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 117
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 10E3
<400> 117
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Met Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
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Ala Arg Arg Arg Gln Gly Ile Trp Gly Asp Ala Leu Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 13E7 14C12
<400> 118
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Met Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Gln Gly Ile Trp Gly Asp Ala Leu Asp Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 119
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 25F12
<400> 119
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr His Asp Ala Phe Asp
100 105 110
Ile Trp Asp Gln Gly Thr Met Val Thr Val Phe Ser
115 120
<210> 120
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 32E3
<400> 120
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Thr Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
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Ala Arg His Asp Ile Ile Pro Ala Ala Pro Gly Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 121
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 24F4
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Gln Ala Ile Ala Val Thr Gly Leu Gly Gly Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 122
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 16B8
<400> 122
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
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Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
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Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 123
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 4C5
<400> 123
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly His Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 124
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 6E7
<400> 124
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
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Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 125
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 5E3
<400> 125
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Leu Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Ile Asn Pro Tyr Ser Gly Gly Thr Thr Ser Ala Gln Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Ser Ala Tyr
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100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 126
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID 4G10
<400> 126
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Ser Tyr
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Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
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Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Phe
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Leu Lys Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
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Ala Arg Gln Gly Ile Glu Val Thr Gly Thr Gly Gly Leu Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 127
<211> 125
<212> PRT
<213> 智人
<400> 127
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Tyr Tyr Asp Tyr Val Trp Gly Ser Tyr Arg Tyr Thr Tyr Phe
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 128
<211> 121
<212> PRT
<213> 智人
<400> 128
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Ala Arg Leu Thr Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 129
<211> 122
<212> PRT
<213> 智人
<400> 129
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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<210> 130
<211> 120
<212> PRT
<213> 智人
<400> 130
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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35 40 45
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<211> 118
<212> PRT
<213> 智人
<400> 131
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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<210> 132
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<212> PRT
<213> 智人
<400> 132
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Asn Trp Asn Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 133
<211> 121
<212> PRT
<213> 智人
<400> 133
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asp Ile Val Ala Thr Ile Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 134
<211> 121
<212> PRT
<213> 智人
<400> 134
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asp Ile Val Ala Thr Ile Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 135
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人
<400> 135
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 136
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人
<400> 136
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 137
<211> 123
<212> PRT
<213> 智人
<400> 137
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 138
<211> 125
<212> PRT
<213> 智人
<400> 138
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asp Ile Val Ala Thr Ile Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6E7的亲和力改良变体的CDRL2共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> X是A或G
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(5)
<223> X是L或R
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> X是N, K, R, L,或T
<400> 139
Xaa Ala Ser Ser Xaa Gln Xaa
1 5
<210> 140
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6E7的亲和力改良变体的CDRL3共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> X是Q或G
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(5)
<223> X是S或R
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> X是F, L或Y
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> X是R或H
<400> 140
Xaa Gln Ala Asp Xaa Xaa Pro Xaa Thr
1 5
<210> 141
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6E7的亲和力改良变体的CDRH2共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> X是I或T
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> X是T或V
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> X是Y或L
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(12)
<223> X是S或A
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> X是S, G,或E
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(17)
<223> X是G或D
<400> 141
Xaa Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Xaa Arg Xaa Xaa Pro Xaa Phe Gln
1 5 10 15
Xaa
<210> 142
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6E7的亲和力改良变体的CDRH3共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> X是Q, G, S,或M
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(12)
<223> X是F或S
<400> 142
Xaa Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Xaa Asp Tyr
1 5 10
<210> 143
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2抗体ID V3
<400> 143
Ala Ala Ser Ser Arg Gln Asn
1 5
<210> 144
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2抗体ID V24 C01
<400> 144
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Lys
1 5
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2抗体ID V27 C04
<400> 145
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg
1 5
<210> 146
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2抗体ID V40 D05
<400> 146
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Leu
1 5
<210> 147
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2抗体ID V84 H01
<400> 147
Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asn
1 5
<210> 148
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3抗体ID V40 D05
<400> 148
Gln Gln Ala Asp Arg Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 149
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3抗体ID V24 C01
<400> 149
Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro His Thr
1 5
<210> 150
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3抗体ID V48 E01
<400> 150
Gln Gln Ala Asp Ser Leu Pro Arg Thr
1 5
<210> 151
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3抗体ID V49 E02 V73 G02
<400> 151
Gln Gln Ala Asp Ser Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 152
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3抗体ID V60 F01
<400> 152
Gly Gln Ala Asp Ser Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 153
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V3
<400> 153
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Arg Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 154
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V24 C01
<400> 154
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro His
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 155
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V27 C04
<400> 155
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 156
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V40 D05
<400> 156
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Leu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Arg Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 157
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V48 E01
<400> 157
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Leu Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 158
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V49 E02 V73 G02
<400> 158
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 159
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V52 E05
<400> 159
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Arg Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 160
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V60 F01
<400> 160
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gly Gln Ala Asp Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 161
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V76 G05
<400> 161
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 162
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V84 H01
<400> 162
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 163
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1/CDRH1边界抗体ID 6E7
<400> 163
Tyr Ser Phe Thr
1
<210> 164
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 亲和力降低的TREM2抗体的重链可变区氨基酸序列- FR1/CDRH1边界
<400> 164
Tyr Ser Phe Ala
1
<210> 165
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1/CDRH1边界抗体ID V3 A04
<400> 165
Tyr Ser Phe Gly
1
<210> 166
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1/CDRH1边界抗体ID V49 E02
<400> 166
Tyr Ser Phe Asn
1
<210> 167
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1/CDRH1边界抗体ID V52 E05
<400> 167
Tyr Ser Phe Glu
1
<210> 168
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1/CDRH1边界抗体ID V60 F01
<400> 168
Tyr His Phe Thr
1
<210> 169
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1/CDRH1边界抗体ID V76 G05 V84 H01
<400> 169
Tyr Gly Phe Thr
1
<210> 170
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID 6E7 V3 A04
<400> 170
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Asp
<210> 171
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID V24 C01
<400> 171
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Val Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 172
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID V27 C04
<400> 172
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ala Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 173
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID V49 E02
<400> 173
Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Leu Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 174
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID V73 G02
<400> 174
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Gly Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 175
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID V76 G05
<400> 175
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Glu Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 176
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3抗体ID V3 A04
<400> 176
Gly Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 177
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3抗体ID V24 C01
<400> 177
Ser Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 178
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3抗体ID V60 F01
<400> 178
Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Ser Asp Tyr
1 5 10
<210> 179
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3抗体ID V48 E01
<400> 179
Met Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 180
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V3 A04
<400> 180
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Asp Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 181
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V24 C01
<400> 181
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Val Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 182
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V27 C04
<400> 182
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ala Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Ser Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 183
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V40 D05
<400> 183
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Gly Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Val Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Ser Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 184
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V48 E01
<400> 184
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Gly Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Val Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Met Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 185
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 亲和力改良的TREM2抗体的重链可变区氨基酸序列- VH氨基酸序列
<400> 185
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Asn Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Leu Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 186
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V49 E02
<400> 186
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Glu Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 187
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V60 F01
<400> 187
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr His Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Val Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Ser Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 188
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V73 G02
<400> 188
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Gly Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Gly Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 189
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V76 G05
<400> 189
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Gly Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Glu Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Ser Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 190
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V84 H01
<400> 190
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Ser Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 191
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 191
Gly Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 192
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 192
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 193
<211> 105
<212> PRT
<213> 智人
<400> 193
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
20 25 30
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
35 40 45
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
50 55 60
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
65 70 75 80
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
85 90 95
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 194
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 194
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 195
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 195
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Val Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro
35 40 45
Val Lys Val Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Arg Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
100 105
<210> 196
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 196
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 197
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 197
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 198
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 198
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 199
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 199
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 200
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 200
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 201
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 201
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 202
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 202
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 203
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 203
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 204
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人
<400> 204
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 205
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 205
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 206
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<400> 206
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 207
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人
<400> 207
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
100 105 110
<210> 208
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 12G10
<400> 208
caggctgtgc cgactcagcc gtcttccctc tctgcatctc ctggagtatt agccagtctc 60
acctgcacct tacgcagtgg catcaatgtt ggtacctaca ggatatactg gtaccagcag 120
aagccaggga gtcctcccca gtatctcctg aggtacaaat cagactcaga taagcagcag 180
ggctctggag tccccagccg cttctctgga tccaaggatg cttcggccaa tgcagggatt 240
ttactcatct ctgggctcca gtctgaggat gaggctgact attactgtat gatttggtac 300
agcagtgctg tggtattcgg cggagggacc aaactgaccg tccta 345
<210> 209
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 26A10
<400> 209
tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccagcatc 60
acctgctctg gagataaatt gggagataag tatgtttgct ggtatcagca gaagccaggc 120
cagtcccctg tgctggtcat ctatcaagat agcaagcggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg 240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagtaaca ctgtggtatt cggcggaggg 300
accaagctga ccgtccta 318
<210> 210
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV 抗体ID 26C10
<400> 210
tcctttgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccagcatc 60
acctgctctg gagataaatt gggggataag tatgtttgct ggtatcagca gaagccaggc 120
cagtccccta tgttggtcat ctatcaagat accaagcggc cctcagggat ccctgaacga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg 240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagcagca ctgtggtctt cggcggaggg 300
accaagctga ccgtccta 318
<210> 211
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 26F2
<400> 211
tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccagcatc 60
acctgctctg gagataaatt gggggataag tatgtttgct ggtatcagca gaagccaggc 120
cagtcccctg tgttggtcat ctttcaagat agcaagcggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg 240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagcagca ctgtggtatt cggcggaggg 300
accaagctga ccgtccta 318
<210> 212
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 33B12
<400> 212
tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccagcatc 60
acctgctctg gagataaatt gggggataag tatgtttgct ggtatcagca gaagccaggc 120
cagtcccctg tgttggtcat ctatcaagat agcaagcggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg 240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagtagca ctgtggtatt cggcggaggg 300
accaagctga ccgtccta 318
<210> 213
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 24C12
<400> 213
ggcatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagccg gagtgttttg tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aaggtgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttataact gtcagcaata ttatattact 300
ccgatcacct tcggccaagg gacacgactg gagattaaa 339
<210> 214
<211> 339
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 24G6
<400> 214
Gly Ala Cys Ala Thr Cys Gly Thr Gly Ala Thr Gly Ala Cys Cys Cys
1 5 10 15
Ala Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Cys Thr Cys Cys Cys Thr
20 25 30
Gly Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Cys Thr Cys Thr Gly Gly Gly Cys
35 40 45
Gly Ala Gly Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala
50 55 60
Ala Cys Thr Gly Cys Ala Ala Gly Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Ala
65 70 75 80
Gly Ala Gly Thr Gly Thr Thr Thr Thr Ala Thr Ala Cys Ala Gly Cys
85 90 95
Thr Cys Cys Ala Ala Cys Ala Ala Thr Ala Ala Gly Cys Ala Cys Thr
100 105 110
Thr Cys Thr Thr Ala Gly Cys Thr Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys Ala
115 120 125
Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly
130 135 140
Cys Cys Thr Cys Cys Thr Ala Ala Gly Cys Thr Gly Cys Thr Cys Ala
145 150 155 160
Thr Thr Thr Ala Cys Thr Gly Gly Gly Cys Ala Thr Cys Thr Ala Cys
165 170 175
Cys Cys Gly Gly Gly Ala Gly Thr Cys Cys Gly Gly Gly Gly Thr Cys
180 185 190
Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly Ala Thr Thr Cys Ala Gly Thr Gly
195 200 205
Gly Cys Ala Gly Cys Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys
210 215 220
Ala Gly Ala Thr Thr Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys Cys
225 230 235 240
Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Gly
245 250 255
Cys Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Gly Thr Gly Gly Cys Ala Thr Thr
260 265 270
Thr Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Ala
275 280 285
Thr Ala Thr Thr Ala Thr Ala Gly Thr Ala Cys Thr Cys Cys Gly Cys
290 295 300
Thr Cys Ala Cys Thr Thr Thr Cys Gly Gly Cys Gly Gly Ala Gly Gly
305 310 315 320
Gly Ala Cys Cys Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys
325 330 335
Ala Ala Ala
<210> 215
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体24A10
<400> 215
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcacctgca agtccagcca caatgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtatcagc agaaaccagg acagcctcct aaactgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcaccaata ttatagtact 300
ccgtgcagtt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaa 339
<210> 216
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 10E3
<400> 216
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggttcca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcttccacca gggccactgg tattccagcc 180
aggttcagtg tcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cattttatta ctgtctgcag gataataatt ggcctcccac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 217
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 13E7
<400> 217
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggttcca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcttccacca gggccactgg tattccagcc 180
aggttcagtg tcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtctgcag gataataatt ggcctcccac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 218
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 25F12
<400> 218
gaaaaagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttaac aacaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctcggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 219
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 32E3
<400> 219
gaatttgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccggggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gattattagc agcaactact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat agtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtttgata gctcaccgat caccttcggc 300
cgagggacac gactggacat taaa 324
<210> 220
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 24F4
<400> 220
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcactgta ttactgtcag cagtatgata cctcaccatt cactttcggc 300
cctgggacca aagtggatat caaa 324
<210> 221
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 16B8
<400> 221
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
gtcacttgtc gggcgagtca ggatattaac agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatcctctt tgcaaactgg ggtcccttca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactc ttgtcaacag tctaacagtt tcccgatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa a 321
<210> 222
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 4C5
<400> 222
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc aactggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaagttgg ggtcccatta 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctgacagtt tccctcgcaa ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 223
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 6E7 V9 A10 V30 C07 V33 C10 V44 D09V68 F09
<400> 223
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 224
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV -抗体ID 5E3
<400> 224
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggcattagc aattatttag cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaatccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tatagtactt acccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 225
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID 4G10
<400> 225
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcataaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120
gggaatgccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgccaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggccagaa ttcactctca caatcagcag tctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt acccgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcac a 321
<210> 226
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V3 A04
<400> 226
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagta ggcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacaggt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 227
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V24 C01
<400> 227
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaaaggg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tccctcatac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 228
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V27
<400> 228
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 229
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V40 D05
<400> 229
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaacttgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgaccgtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 230
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V48 E01
<400> 230
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaacggg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tgcctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 231
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V49 E02
<400> 231
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtc ggcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt atcctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 232
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V52 E05
<400> 232
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagggg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgaccgtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 233
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V60 F01
<400> 233
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagggg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtgggcag gctgacagtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 234
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V73 G02
<400> 234
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtc gtcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt atcctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 235
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V76 G05
<400> 235
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaaaggg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggagagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 236
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V84 H01
<400> 236
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcatccagtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tcccgcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 237
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 12G10
24C12
<400> 237
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attggtggtg gtggtgttag cacatactgc 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa tacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaattttat 300
atagcagtgg ctggttctca ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 238
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 26A10
<400> 238
gaggtgcaac tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ggggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctagatt caccttcagt agctttggca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagttttac catatattac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ttcattctat 240
ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagagggg 300
ggtcttacta tggttcgggg agtctcttcc tacggtttgg acgtctgggg ccaagggacc 360
acggtcaccg tctcctca 378
<210> 239
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV 26C10
<400> 239
gaggtgcaac tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctttggca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagttttac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ttcgttctat 240
ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt atttctgtgt gagagagggg 300
ggtataacta tggttcgggg agtctcttcc tacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc 360
acggtcaccg tctcctca 378
<210> 240
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 26F2
<400> 240
gaggtgcaac tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctttggca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatttcatac attagtagta gtagttttac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ttcattctat 240
ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt atttctgtgc gagagagggg 300
ggtattacta tggttcgggg agtctcttcc tacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc 360
acggtcaccg tctcctca 378
<210> 241
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 33B12
<400> 241
gaggtgcaac tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctttggca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtttcatac attagtaaaa gtagttttac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ttcattctat 240
ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagagggg 300
ggtcttacta tggttcgggg agtctcttcc tacggtttgg acgtctgggg ccaagggacc 360
acggtcaccg tctcctca 378
<210> 242
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 24G6
<400> 242
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gactggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaggcgtat 300
acacctatgg cattctttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 243
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 24A10
<400> 243
gaggtgcagg tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aactatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggaggg 300
tgggagctat tttactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348
<210> 244
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 10E3
<400> 244
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgatgatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc aactactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gagactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacggaga 300
caggggatct ggggtgatgc tcttgatatc tggggccaag ggacattggt caccgtctct 360
tca 363
<210> 245
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 13E7
<400> 245
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgatgatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gagactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacggaga 300
caggggatct ggggtgatgc tcttgatttc tggggccaag ggacattggt caccgtctct 360
tca 363
<210> 246
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 25F12
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (366)..(366)
<223> n是a, c, g,或t
<400> 246
caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt agttactact ggagctggat ccgccagccc 120
ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaaacac caactacaac 180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agaggggtat 300
tacgatatct tgactggtta tcatgatgct tttgatattt gggaccaagg gacaatggtc 360
accgtntttt ca 372
<210> 247
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 32E3
<400> 247
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcaccctgaa ggcctcggac accgccatat attactgtgc gcgacatgac 300
attataccag cagcccctgg tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360
tcttca 366
<210> 248
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 24F4
<400> 248
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cacctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagtcgaca agtccagcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatat attactgtac gagacaggcc 300
atagcagtga ctggtttggg gggtttcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 249
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 16B8
<400> 249
caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc aactatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180
gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag tacagtctac 240
atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagacgggga 300
tacagctatg gttcctttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 250
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 4C5
<400> 250
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagaa gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggaca cagttttacc aactactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccgtgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttact atgatagtag tggttatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 251
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 6E7
<400> 251
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 252
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 5E3
<400> 252
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctactata tacactgggt gcgacaggcc 120
cctggactag ggcttgagtg gatgggatgg atcaaccctt acagtggtgg cacaacctct 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag ctcagcctac 240
atggaactga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatgga 300
ggctacctgg ccctctacgg tacggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 253
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID 4G10
<400> 253
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttccc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgccttt 240
ttgaagtgga gtagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gcgacagggt 300
atagaagtga ctggtacggg aggtttggac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 254
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V3 A04
<400> 254
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttgcg agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaagatca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagagggagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 255
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V24 C01
<400> 255
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttacc agctactgga ttgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga tgtgagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagatctagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 256
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V27 C04
<400> 256
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
gctccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgt gagaagtagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 257
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V40 D05
<400> 257
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttggg agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga tgttagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattattcg gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 258
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V48 E01
<400> 258
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttggt agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga tgtgagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagaatgagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 259
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V49 E02
<400> 259
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttaat agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggacg atctatcctg gtgactctga taccagactg 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagaagtagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 260
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V52 E05
<400> 260
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttgag agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagagggagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 261
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V60 F01
<400> 261
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata ccattttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga tgtgagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatagt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 262
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V73 G02
<400> 262
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttggt agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccggggt tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagagggagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 263
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V76 G05
<400> 263
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttggg agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccggagt tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatagt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 264
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V84 H01
<400> 264
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cgggtttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgacagtga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattattcg gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 265
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #1
<400> 265
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys
20
<210> 266
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #2
<400> 266
Met Ala Trp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gln Gly Thr Gly
1 5 10 15
Ser Trp Ala
<210> 267
<400> 267
000
<210> 268
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #4
<400> 268
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly
20
<210> 269
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #5
<400> 269
Met Glu Trp Thr Trp Arg Val Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser
<210> 270
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #6
<400> 270
Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly
20
<210> 271
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3抗体ID V83
<400> 271
Gln Gln Ala Val Ser Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 272
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #8
<400> 272
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser
<210> 273
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #9
<400> 273
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser
<210> 274
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #10
<400> 274
Met Asp Ile Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Lys Cys
20
<210> 275
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #11
<400> 275
Met Asp Ile Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Arg Cys
20
<210> 276
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #12
<400> 276
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe
20
<210> 277
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #13
<400> 277
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Arg Cys
20
<210> 278
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #14
<400> 278
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys
<210> 279
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #15
<400> 279
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Glu
20
<210> 280
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 分泌肽 #16
<400> 280
Met Asp Met Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Arg Cys
20
<210> 281
<211> 217
<212> PRT
<213> 智人
<400> 281
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 282
<211> 217
<212> PRT
<213> 智人
<400> 282
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 283
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MOG肽35-55
<400> 283
Met Glu Val Gly Trp Tyr Arg Ser Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu
1 5 10 15
Tyr Arg Asn Gly Lys
20
<210> 284
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6E7的亲和力降低变体的CDRL1共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> X是R或A
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> X是S或R
<400> 284
Xaa Ala Ser Gln Gly Ile Ser Xaa Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 285
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6E7的亲和力降低变体的CDRL2共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> X是A或S
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (3)..(3)
<223> X是S或G
<400> 285
Xaa Ala Xaa Ser Leu Gln Asn
1 5
<210> 286
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6E7的亲和力降低变体的CDRL3共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> X是D或V
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> X是R或L
<400> 286
Gln Gln Ala Xaa Ser Phe Pro Xaa Thr
1 5
<210> 287
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6E7的亲和力降低变体的CDRH1共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> X是Y或E
<400> 287
Ser Xaa Trp Ile Ala
1 5
<210> 288
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6E7的亲和力降低变体的CDRH2共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(5)
<223> X是G或S
<400> 288
Ile Ile Tyr Pro Xaa Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 289
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6E7的亲和力降低变体的CDRH3共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (3)..(3)
<223> X是T或G
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(5)
<223> X是Y或R
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> X是Y或G
<400> 289
Gln Arg Xaa Phe Xaa Xaa Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 290
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1抗体ID V57 E10
<400> 290
Ala Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 291
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1抗体ID V90 H07
<400> 291
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 292
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2抗体ID V10 A11
<400> 292
Ser Ala Ser Ser Leu Gln Asn
1 5
<210> 293
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2抗体ID V70 F11
<400> 293
Ala Ala Gly Ser Leu Gln Asn
1 5
<210> 294
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2抗体ID V23 B12
<400> 294
Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 295
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V10 A11
<400> 295
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 296
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V23 B12
<400> 296
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 297
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V57 E10
<400> 297
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ala Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 298
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V70 F11
<400> 298
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Gly Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 299
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V83 G12
<400> 299
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Val Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 300
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL氨基酸序列抗体ID V90 H07
<400> 300
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 301
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1/
CDRH1边界抗体ID V30 C07
<400> 301
Ser Ser Phe Thr
1
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1抗体ID V90 H07
<400> 302
Ser Glu Trp Ile Ala
1 5
<210> 303
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2抗体ID V44 D09
<400> 303
Ile Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 304
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3抗体ID V9 A10
<400> 304
Gln Arg Gly Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 305
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3抗体ID V33 C10
<400> 305
Gln Arg Thr Phe Tyr Gly Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 306
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3抗体ID V68 F09
<400> 306
Gln Arg Thr Phe Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 307
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V9 A10
<400> 307
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Gly Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 308
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V30 C07
<400> 308
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Ser Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 309
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V33 C10
<400> 309
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Gly Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 310
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V44 D09
<400> 310
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 311
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V68 F09
<400> 311
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 312
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH氨基酸序列抗体ID V90 H07
<400> 312
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Glu
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 313
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V10 A11
<400> 313
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctattct gcatccagtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 314
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V23 B12
<400> 314
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tccctcttac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 315
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V57 E10
<400> 315
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtg cggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 316
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V70 F11
<400> 316
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcagggagtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 317
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V83
<400> 317
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgtgagtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 318
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - LV抗体ID V90 H07
<400> 318
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agatggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacagtt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 319
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V9 A10
<400> 319
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
gggttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 320
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V10 A11
V23 B12 V57 E10 V70 F11 V83 G12
<400> 320
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 321
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V30 C07
<400> 321
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggatc gagttttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
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gtgtcctca 369
<210> 322
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V33 C10
<400> 322
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttatg gggatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 323
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V44 D09
<400> 323
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatccta gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 324
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V68 F09
<400> 324
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgtttaggt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 325
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TREM2抗体可变区核酸 - HV抗体ID V90 H07
<400> 325
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttacc agcgagtgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 326
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LC可变区序列24G6
<400> 326
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys His Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 327
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HC可变区序列24G6
<400> 327
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ala Tyr Thr Pro Met Ala Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LC可变区序列6E7
<400> 328
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asp Ala Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HC可变区序列6E7
<400> 329
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ala Asp Ala Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Arg Thr Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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1 5 10 15
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20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Asn Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
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<220>
<223> HC可变区序列13E7
<400> 331
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1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ala Asp Ala Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Gln Gly Ile Phe Gly Asp Ala Leu Asp Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HC可变区序列5E3
<400> 333
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Tyr Ser Gly Gly Thr Thr Ser Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Ser Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Gly Tyr Leu Ala Leu Tyr Gly Thr Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser
20 25 30
Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys His Phe Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser
65 70 75 80
Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
130 135 140
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
145 150 155 160
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
165 170 175
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180 185 190
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
195 200 205
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
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Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
225 230 235 240
Glu Cys
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<213> 人工序列
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Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
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Leu Arg Gly Ala Arg Cys Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly
20 25 30
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
35 40 45
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
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100 105 110
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Ala Tyr Thr Pro Met Ala Phe Phe
115 120 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145 150 155 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195 200 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210 215 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225 230 235 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
245 250 255
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
260 265 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
290 295 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr
305 310 315 320
Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
325 330 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
340 345 350
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
355 360 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
370 375 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385 390 395 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
420 425 430
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
435 440 445
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450 455 460
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
35 40 45
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
50 55 60
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
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100 105 110
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Ala Tyr Thr Pro Met Ala Phe Phe
115 120 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg Ser Thr Ser
145 150 155 160
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195 200 205
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210 215 220
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Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
245 250 255
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
260 265 270
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
275 280 285
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290 295 300
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr
305 310 315 320
Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
325 330 335
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
340 345 350
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
355 360 365
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
370 375 380
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
385 390 395 400
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
405 410 415
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
420 425 430
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
435 440 445
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
450 455 460
Ser Pro Gly Lys
465
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<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 337
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
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Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln
100 105 110
Ala Asp Ala Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
130 135 140
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
145 150 155 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
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Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
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Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
195 200 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
210 215 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 236
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<213> 人工序列
<220>
<223> AA序列LC SST29857
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Leu Arg Gly Ala Arg Cys Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr
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Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln
50 55 60
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile
65 70 75 80
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln
100 105 110
Asp Asn Asn Phe Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile
115 120 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
130 135 140
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
145 150 155 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
165 170 175
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
180 185 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
195 200 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
210 215 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
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<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AA序列LC SST202443
<400> 339
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
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Leu Arg Gly Ala Arg Cys Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr
20 25 30
Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln
50 55 60
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile
65 70 75 80
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln
100 105 110
Asp Asn Asn Phe Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile
115 120 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
130 135 140
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
145 150 155 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
165 170 175
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
180 185 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
195 200 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
210 215 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 340
<211> 473
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AA序列HC SST202443
<400> 340
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu
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35 40 45
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50 55 60
Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ala Asp Ala
65 70 75 80
Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys
85 90 95
Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp
100 105 110
Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Arg Gln Gly Ile Phe Gly Asp
115 120 125
Ala Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
130 135 140
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
145 150 155 160
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
165 170 175
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
180 185 190
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
195 200 205
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
210 215 220
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
225 230 235 240
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
260 265 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
275 280 285
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
290 295 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu
305 310 315 320
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
325 330 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
340 345 350
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
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420 425 430
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
435 440 445
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<213> 人工序列
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195 200 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
210 215 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AA序列HC SST29825
<400> 342
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1 5 10 15
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35 40 45
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50 55 60
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100 105 110
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115 120 125
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Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr
210 215 220
Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr
225 230 235 240
Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 343
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> LC可变区序列SST28347和SST204812
<400> 343
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagca cttcttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gagtccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300
ccgctcactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaa 339
<210> 344
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HC可变区序列SST28347和SST204812
<400> 344
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gactggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagaatccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaggcgtat 300
acacctatgg cattctttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 345
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> LC可变区序列SST29857
<400> 345
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctgacgctt tccctcgcac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 346
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HC可变区序列SST29857
<400> 346
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagttttacc agctactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgacgctga tgccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctacagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagacaaagg 300
acgttttatt atgatagtag tgattatttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtgtcctca 369
<210> 347
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> LC可变区序列SST202443
<400> 347
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggttcca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcttccacca gggccactgg tattccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtctgcag gataataatt tccctcccac tttcggccaa 300
gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 348
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HC可变区序列SST202443
<400> 348
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gagatgctga tgccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gaggcggaga 300
caggggatct tcggtgatgc tcttgatttc tggggccaag ggacattggt caccgtgtct 360
tca 363
<210> 349
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> LC可变区序列SST29825
<400> 349
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggcattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaatccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tatagtactt acccattcac tttcggccaa 300
gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 350
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HC可变区序列SST29825
<400> 350
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtg 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctactata tccactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaaccctt acagtggtgg cacaacctct 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccaccag ctcagcctac 240
atggaactga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatgca 300
ggctacctgg ccctctacgg tacggacgtc tggggccaag ggaccttggt caccgtgtcc 360
tca 363
<210> 351
<211> 726
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NA序列LC SST28347
<400> 351
atggacatga gggtgcccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcg 60
cgctgtgaca tcgtgatgac ccagtctcca gactccctgg ctgtgtctct gggcgagagg 120
gccaccatca actgcaagtc cagccagagt gttttataca gctccaacaa taagcacttc 180
ttagcttggt accagcagaa accaggacag cctcctaagc tgctcattta ctgggcatct 240
acccgggagt ccggggtccc tgaccgattc agtggcagcg ggtctgggac agatttcact 300
ctcaccatca gcagcctgca ggctgaagat gtggcagttt attactgtca gcaatattat 360
agtactccgc tcactttcgg cggagggacc aaggtggaga tcaaacgaac ggtggctgca 420
ccatctgtct tcatcttccc gccatctgat gagcagttga aatctggaac tgcctctgtt 480
gtgtgcctgc tgaataactt ctatcccaga gaggccaaag tacagtggaa ggtggataac 540
gccctccaat cgggtaactc ccaggagagt gtcacagagc aggacagcaa ggacagcacc 600
tacagcctca gcagcaccct gacgctgagc aaagcagact acgagaaaca caaagtctac 660
gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga 720
gagtgt 726
<210> 352
<211> 1413
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NA序列HC SST28347
<400> 352
atggacatga gggtgcccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcg 60
cgctgtgagg tgcagctgtt ggagtctggg ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg 120
agactctcct gtgcagcctc tggattcacc tttagcagct atgccatgag ctgggtccgc 180
caggctccag ggaagggact ggagtgggtc tcagctatta gtggtagtgg tggtagcaca 240
tactacgcag aatccgtgaa gggccggttc accatctcca gagacaattc caagaacacg 300
ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg ccgtatatta ctgtgcgaag 360
gcgtatacac ctatggcatt ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 420
tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 480
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 540
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 600
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 660
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 720
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 780
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 840
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 900
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgtgcga ggagcagtac 960
ggcagcacgt accgttgcgt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 1020
aaggagtaca agtgcaaggt gtccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1080
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1140
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1200
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1260
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1320
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1380
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggc aaa 1413
<210> 353
<211> 1404
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NA序列HC SST204812
<400> 353
atggacatga gggtgcccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcg 60
cgctgtgagg tgcagctgtt ggagtctggg ggaggcttgg tacagcctgg ggggtccctg 120
agactctcct gtgcagcctc tggattcacc tttagcagct atgccatgag ctgggtccgc 180
caggctccag ggaagggact ggagtgggtg tcagctatta gtggtagtgg tggtagcaca 240
tactacgcag aatccgtgaa gggccggttc accatctcca gagacaattc caagaacacg 300
ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg ccgtatatta ctgtgcgaag 360
gcgtatacac ctatggcatt ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtgtcc 420
tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc ccagctccag gagcacctcc 480
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 540
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 600
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 660
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 720
cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgtgcg aggagcagta cggcagcacg 960
taccgttgcg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020
aagtgcaagg tgtccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1140
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260
tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380
agcctctccc tgtctccggg caaa 1404
<210> 354
<211> 708
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NA序列LC SST29857
<400> 354
atggacatga gggtgcccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcg 60
cgctgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcttccgtgt ctgcatctgt aggagacaga 120
gtcaccatca cttgtcgggc gagtcagggt attagcagct ggttagcctg gtatcagcag 180
aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc tatgctgcat ccagtttgca aagtggggtc 240
ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300
cagcctgaag attttgcaac ttacttttgt caacaggctg acgctttccc tcgcactttt 360
ggccagggga ccaagctgga gatcaaacga acggtggctg caccatctgt cttcatcttc 420
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480
ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660
cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 708
<210> 355
<211> 1416
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NA序列HC SST29857
<400> 355
atggacatga gggtgcccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcg 60
cgctgtgagg tgcagctggt gcagtctgga gcagaggtga aaaagcccgg ggagtctctg 120
aagatctcct gtaagggttc tggatacagt tttaccagct actggatcgc ctgggtgcgc 180
cagatgcccg ggaaaggcct ggagtggatg gggatcatct atcctggtga cgctgatgcc 240
agatacagcc cgtccttcca aggccaggtc accatctcag ccgacaagtc catcagcacc 300
gcctacctac agtggagcag cctgaaggcc tcggacaccg ccatgtattt ctgtgcgaga 360
caaaggacgt tttattatga tagtagtgat tattttgact actggggcca gggaaccctg 420
gtcaccgtgt cctcagcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc gcccagctcc 480
aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 540
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct 600
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac 660
ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 720
aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 780
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgtg cgaggagcag 960
tacggcagca cgtaccgttg cgtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtgtccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1200
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctatagca agctcaccgt ggacaagagc 1320
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggcaaa 1416
<210> 356
<211> 708
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NA序列LC SST202443
<400> 356
atggacatga gggtgcccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcg 60
cgctgtgaaa tagtgatgac gcagtctcca gccaccctgt ctgtgtctcc aggggaaaga 120
gccaccctct cctgcagggc cagtcagagt gttagcagca acttagcctg gttccagcag 180
aaacctggcc aggctcccag gctcctcatc tatggtgctt ccaccagggc cactggtatt 240
ccagccaggt tcagtggcag tgggtctggg acagagttca ctctcaccat cagcagcctg 300
cagcctgaag attttgcagt ttattactgt ctgcaggata ataatttccc tcccactttc 360
ggccaaggga ccaaagtgga tatcaaacga acggtggctg caccatctgt cttcatcttc 420
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480
ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660
cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 708
<210> 357
<211> 1419
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NA序列HC SST202443
<400> 357
atggacatga gggtgcccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcg 60
cgctgtgagg tgcagctggt gcagtctgga gcagaggtga aaaagcccgg ggagtctctg 120
aagatctcct gtaagggttc tggatacagc tttaccagct actggatcgg ctgggtgcgc 180
cagatgcccg ggaaaggcct ggagtggatg gggatcatct atcctggaga tgctgatgcc 240
agatacagcc cgtccttcca aggccaggtc accatctcag ccgacaagtc catcagcacc 300
gcctacctgc agtggagcag cctgaaggcc tcggacaccg ccatgtattt ctgtgcgagg 360
cggagacagg ggatcttcgg tgatgctctt gatttctggg gccaagggac attggtcacc 420
gtgtcttcag cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 480
acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 540
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 600
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 660
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaaa 720
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 780
ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 840
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 900
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gtgcgaggag 960
cagtacggca gcacgtaccg ttgcgtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 1020
aatggcaagg agtacaagtg caaggtgtcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1080
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1140
cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1200
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1260
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctata gcaagctcac cgtggacaag 1320
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1380
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggcaaa 1419
<210> 358
<211> 708
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NA序列LC SST29825
<400> 358
atggacatga gggtgcccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcg 60
cgctgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctcactgt ctgcatctgt aggagacaga 120
gtcaccatca cttgtcgggc gagtcagggc attagcaatt atttagcctg gtatcagcag 180
aaaccaggga aagcccctaa atccctgatc tatgctgcat ccagtttgca aagtggggtc 240
ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300
cagcctgaag attttgcaac ttattactgc caacagtata gtacttaccc attcactttc 360
ggccaaggga ccaaagtgga tatcaaacga acggtggctg caccatctgt cttcatcttc 420
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480
ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660
cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 708
<210> 359
<211> 1410
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NA序列HC SST29825
<400> 359
atggacatga gggtgcccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcg 60
cgctgtcagg tgcagctggt gcagtctggg gctgaggtga agaagcctgg ggcctcagtg 120
aaggtgtcct gcaaggcttc tggatacacc ttcaccggct actatatcca ctgggtgcga 180
caggcccctg gacaagggct tgagtggatg ggatggatca acccttacag tggtggcaca 240
acctctgcac agaagtttca gggcagggtc accatgacca gggacacgtc caccagctca 300
gcctacatgg aactgagcag gctgagatct gacgacacgg ccgtgtatta ctgtgcgaga 360
gatgcaggct acctggccct ctacggtacg gacgtctggg gccaagggac cttggtcacc 420
gtgtcctcag cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgcccag ctccaggagc 480
acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 540
acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta 600
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc 660
acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca 720
gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 780
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 900
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgtgcgagga gcagtacggc 960
agcacgtacc gttgcgtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1020
gagtacaagt gcaaggtgtc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1200
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1260
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380
cagaagagcc tctccctgtc tccgggcaaa 1410
<210> 360
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自表位定位实验的肽
<400> 360
His Arg Asp Ala Gly Asp Leu Trp Phe Pro
1 5 10
<210> 361
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自表位定位实验的肽
<400> 361
Ala Gly Asp Leu Trp Phe Pro Gly Glu
1 5
<210> 362
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自表位定位实验的肽
<400> 362
Gly Asp Leu Trp Phe Pro Gly Glu Ser Glu
1 5 10
<210> 363
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自表位定位实验的肽
<400> 363
His Arg Asp Ala Gly Asp Leu Trp Phe Pro Gly Glu Ser Glu
1 5 10
<210> 364
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自表位定位实验的肽
<400> 364
Pro Leu Asp His Arg Asp Ala Gly Asp Leu Trp Phe Pro Gly Glu Ser
1 5 10 15
Glu
<210> 365
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自表位定位实验的肽
<400> 365
Pro Leu Asp His Arg Asp Ala Gly Asp Ala Trp Phe Pro Gly Glu Ser
1 5 10 15
Glu
<210> 366
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自表位定位实验的肽
<400> 366
Pro Leu Asp His Arg Asp Ala Gly Asp Leu Trp Ala Pro Gly Glu Ser
1 5 10 15
Glu
<210> 367
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自表位定位实验的肽
<400> 367
Gly Asp Leu Trp Phe Pro
1 5

Claims (78)

1.一种经分离的激动剂抗原结合蛋白，该经分离的激动剂抗原结合蛋白特异性结合至人类TREM2，其中如通过基于细胞的pSyk测定所测量，该激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下以小于500pM的EC50增加TREM2介导的pSyk含量。
2.如权利要求1所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中如通过基于细胞的pSyk测定所测量，该激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下以小于300pM的EC50增加TREM2介导的pSyk含量。
3.如权利要求1所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中如通过基于细胞的pSyk测定所测量，该激动剂抗原结合蛋白在不存在交联剂的情况下以约150pM至约500pM的EC50增加TREM2介导的pSyk含量。
4.如权利要求1至3中任一项所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该激动剂抗原结合蛋白以小于50nM的KD特异性结合至人类TREM2。
5.如权利要求1至3中任一项所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该激动剂抗原结合蛋白以小于10nM的KD特异性结合至人类TREM2。
6.如权利要求1至5中任一项所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该激动剂抗原结合蛋白不特异性结合至人类TREM1。
7.如权利要求1至6中任一项所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合至人类TREM2，其中该参考抗体包括：
(a)含SEQ ID NO:61的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:124的序列的重链可变区；
(b)含SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:125的序列的重链可变区；
(c)含SEQ ID NO:52的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:115的序列的重链可变区；或
(d)含SEQ ID NO:56的序列的轻链可变区和含SEQ ID NO:119的序列的重链可变区。
8.一种经分离的激动剂抗原结合蛋白，该经分离的激动剂抗原结合蛋白特异性结合至人类TREM2，其中该激动剂抗原结合蛋白包括含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，以及含互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1包含选自SEQ IDNO:5-18或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列；CDRL2包含选自SEQ IDNO:19-30或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列；CDRL3包含选自SEQID NO:31-45或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列；CDRH1包含选自SEQ ID NO:77-86或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列；CDRH2包含选自SEQ ID NO:87-94或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列；并且CDRH3包含选自SEQ ID NO:95-109或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的序列。
9.如权利要求8所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中CDRL1包含选自SEQ ID NO:5-18的序列；CDRL2包含选自SEQ ID NO:19-30的序列；CDRL3包含选自SEQ ID NO:31-45的序列；CDRH1包含选自SEQ ID NO:77-86的序列；CDRH2包含选自SEQ ID NO:87-94的序列；且CDRH3包含选自SEQ ID NO:95-109的序列。
10.如权利要求8或9所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该轻链可变区包含(i)与选自SEQ ID NO:46-63的序列至少90％一致的序列；(ii)与选自SEQ ID NO:46-63的序列至少95％一致的序列；或(iii)选自SEQ ID NO:46-63的序列。
11.如权利要求10所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该轻链可变区包含SEQID NO:54的序列或在一个或多个氨基酸位置64、79、80、85、94和/或100处具有突变的SEQID NO:54的序列。
12.如权利要求11所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是V64G、V64A、Q79E、Q79D、S80P、S80A、F85V、F85L、F85A、F85D、F85I、F85L、F85M、F85T、W94F、W94Y、W94S、W94T、W94A、W94H、W94I、W94Q、P100R、P100Q、P100G或其组合。
13.如权利要求10所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该轻链可变区包含SEQID NO:55的序列或在一个或多个氨基酸位置64、79、80、94和/或100处具有突变的SEQ IDNO:55的序列。
14.如权利要求13所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是V64G、V64A、Q79E、Q79D、S80P、S80A、W94F、W94Y、W94S、W94T、W94A、W94H、W94I、W94Q、P100R、P100Q、P100G或其组合。
15.如权利要求14所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是V64G、V64A、Q79E、S80P、S80A、W94Y、W94S、P100R、P100Q或其组合。
16.如权利要求10所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该轻链可变区包含SEQID NO:60的序列或在一个或多个氨基酸位置60、92和/或93处具有突变的SEQ ID NO:60的序列。
17.如权利要求16所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是L60S、L60P、L60D、L60A、D92E、D92Q、D92T、D92N、S93A、S93N、S93Q、S93V或其组合。
18.如权利要求10所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该轻链可变区包含SEQID NO:61的序列或在一个或多个氨基酸位置56、57、92和/或93处具有突变的SEQ ID NO:61的序列。
19.如权利要求18所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是N56S、N56T、N56Q、N56E、G57A、G57V、D92E、D92Q、D92T、D92N、S93A、S93N、S93Q、S93V或其组合。
20.如权利要求19所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是N56S、N56Q、G57A、D92E、D92Q、S93A或其组合。
21.如权利要求10所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该轻链可变区包含SEQID NO:62的序列或在一个或多个氨基酸位置36、46、61和/或100处具有突变的SEQ ID NO:62的序列。
22.如权利要求21所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是F36Y、S46L、S46R、S46V、S46F、K61R、P100Q、P100G、P100R或其组合。
23.如权利要求22所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是F36Y、K61R、P100Q或其组合。
24.如权利要求10所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该轻链可变区包含SEQID NO:52的序列或在氨基酸位置91处具有突变的SEQ ID NO:52的序列。
25.如权利要求24所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是F91V、F91I、F91T、F91L或F91D。
26.如权利要求25所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是F91V。
27.如权利要求8至26中任一项所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该重链可变区包含(i)与选自SEQ ID NO:110-126的序列至少90％一致的序列；(ii)与选自SEQ ID NO:110-126的序列至少95％一致的序列；或(iii)选自SEQ ID NO:110-126的序列。
28.如权利要求27所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该重链可变区包含SEQID NO:117的序列或在一个或多个氨基酸位置19、55、56、57、58和/或104处具有突变的SEQID NO:117的序列。
29.如权利要求28所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是M19K、M19R、M19T、M19E、M19N、M19Q、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、W104F、W104Y、W104T、W104S、W104A、W104H、W104I、W104Q或其组合。
30.如权利要求27所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该重链可变区包含SEQID NO:118的序列或在一个或多个氨基酸位置19、55、56、57、58和/或104处具有突变的SEQID NO:118的序列。
31.如权利要求30所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是M19K、M19R、M19T、M19E、M19N、M19Q、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、W104F、W104Y、W104T、W104S、W104A、W104H、W104I、W104Q或其组合。
32.如权利要求31所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是M19K、D55E、S56A、D57E、T58A、W104Y、W104T或其组合。
33.如权利要求27所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该重链可变区包含SEQID NO:123的序列或在一个或多个氨基酸位置27、55、56、57、58、105和/或106处具有突变的SEQ ID NO:123的序列。
34.如权利要求33所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是H27Y、H27D、H27F、H27N、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、D105E、D105Q、D105T、D105N、D105G、S106A、S106Q、S106V、S106T或其组合。
35.如权利要求27所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该重链可变区包含SEQID NO:124的序列或在一个或多个氨基酸位置55、56、57、58、105和/或106处具有突变的SEQID NO:124的序列。
36.如权利要求35所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、D105E、D105Q、D105T、D105N、D105G、S106A、S106Q、S106V、S106T或其组合。
37.如权利要求36所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是D55E、D55Q、S56A、D57E、T58A、D105E、D105N、S106A或其组合。
38.如权利要求27所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该重链可变区包含SEQID NO:125的序列或在一个或多个氨基酸位置43、76、85、99、100和/或116处具有突变的SEQID NO:125的序列。
39.如权利要求38所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是L43Q、L43K、L43H、I76T、R85S、R85G、R85N、R85D、D99E、D99Q、D99S、D99T、G100A、G100Y、G100V、T116L、T116M、T116P、T116R或其组合。
40.如权利要求39所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是L43Q、I76T、R85S、D99E、G100A、G100Y、T116L或其组合。
41.如权利要求27所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该重链可变区包含SEQID NO:115的序列或在氨基酸位置62和/或63处具有突变的SEQ ID NO:115的序列。
42.如权利要求41所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是D62E、D62Q、D62T、D62N、S63A、S63Q、S63V或其组合。
43.如权利要求42所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是D62E、D62Q、S63A或其组合。
44.一种经分离的激动剂抗原结合蛋白，该经分离的激动剂抗原结合蛋白特异性结合至人类TREM2，其中该激动剂抗原结合蛋白包括含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，以及含互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1包含SEQ ID NO:16的序列；CDRL2包含SEQ ID NO:139的序列；CDRL3包含SEQ ID NO:140的序列；CDRH1包含SEQ ID NO:85的序列；CDRH2包含SEQ ID NO:141的序列；且CDRH3包含SEQ ID NO:142的序列。
45.如权利要求44所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中CDRL1包含SEQ ID NO:16的序列；CDRL2包含选自SEQ ID NO:26和143-147的序列；CDRL3包含选自SEQ ID NO:43和148-152的序列；CDRH1包含SEQ ID NO:85的序列；CDRH2包含选自SEQ ID NO:91和170-175的序列；且CDRH3包含选自SEQ ID NO:176-179的序列。
46.如权利要求44或45所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该轻链可变区包含(i)与选自SEQ ID NO:153-162的序列至少90％一致的序列；(ii)与选自SEQ ID NO:153-162的序列至少95％一致的序列；或(iii)选自SEQ ID NO:153-162的序列。
47.如权利要求44至46中任一项所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该重链可变区包含(i)与选自SEQ ID NO:180-190的序列至少90％一致的序列；(ii)与选自SEQ IDNO:180-190的序列至少95％一致的序列；或(iii)选自SEQ ID NO:180-190的序列。
48.一种经分离的激动剂抗原结合蛋白，该经分离的激动剂抗原结合蛋白特异性结合至人类TREM2，其中该激动剂抗原结合蛋白包括含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，以及含互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，其中CDRL1包含SEQ ID NO:284的序列；CDRL2包含SEQ ID NO:285的序列；CDRL3包含SEQ ID NO:286的序列；CDRH1包含SEQ ID NO:287的序列；CDRH2包含SEQ ID NO:288的序列；且CDRH3包含SEQ ID NO:289的序列。
49.如权利要求48所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中CDRL1包含选自SEQ IDNO:16、290和291的序列；CDRL2包含选自SEQ ID NO:28、292和293的序列；CDRL3包含选自SEQ ID NO:43、294和271的序列；CDRH1包含SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:302的序列；CDRH2包含SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:303的序列；且CDRH3包含选自SEQ ID NO:107和304-306的序列。
50.如权利要求48或49所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该轻链可变区包含(i)与选自SEQ ID NO:61和295-300的序列至少90％一致的序列；(ii)与选自SEQ ID NO:61和295-300的序列至少95％一致的序列；或(iii)选自SEQ ID NO:61和295-300的序列。
51.如权利要求48至50中任一项所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该重链可变区包含(i)与选自SEQ ID NO:124和307-312的序列至少90％一致的序列；(ii)与选自SEQID NO:124和307-312的序列至少95％一致的序列；或(iii)选自SEQ ID NO:124和307-312的序列。
52.如权利要求1至51中任一项所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该激动剂抗原结合蛋白是单克隆抗体或其结合片段。
53.如权利要求52所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体或其结合片段是嵌合抗体或其结合片段、人源化抗体或其结合片段、或完全人类抗体或其结合片段。
54.如权利要求52或53所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体是人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
55.如权利要求54所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体是人类IgG2抗体。
56.如权利要求55所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体在其重链中包含根据EU编号的C131S突变。
57.如权利要求55所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体在其轻链中包含根据EU编号的C214S突变和在其重链中包含根据EU编号的C220S突变。
58.如权利要求54所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体是人类IgG1抗体。
59.如权利要求58所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体是无糖基化人类IgG1抗体。
60.如权利要求59所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体在其重链中包含根据EU编号的氨基酸位置N297处的突变。
61.如权利要求60所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是N297G。
62.如权利要求60或61所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体在其重链中进一步包含根据EU编号的R292C和V302C突变。
63.如权利要求52所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体包含来自人类IgG1抗体的Fc区以及来自人类IgG2抗体的CH1区和铰链区。
64.如权利要求63所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体在其重链中包含根据EU编号的氨基酸位置N297处的突变。
65.如权利要求64所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该突变是N297G。
66.如权利要求64或65所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体在其重链中进一步包含根据EU编号的R292C和V302C突变。
67.如权利要求63至66中任一项所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体在其重链中包含根据EU编号的C131S突变。
68.如权利要求63至66中任一项所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中该单克隆抗体在其轻链中包含根据EU编号的C214S突变和在其重链中包含根据EU编号的C220S突变。
69.一种经分离的激动剂抗原结合蛋白，该经分离的激动剂抗原结合蛋白特异性结合至人类TREM2，其中该激动剂抗原结合蛋白包括含轻链可变区的轻链和含重链可变区的重链，其中：
(a)该轻链可变区具有SEQ ID NO:326的氨基酸序列且该重链可变区具有SEQ ID NO:327的氨基酸序列；
(b)该轻链可变区具有SEQ ID NO:328的氨基酸序列且该重链可变区具有SEQ ID NO:329的氨基酸序列；
(c)该轻链可变区具有SEQ ID NO:330的氨基酸序列且该重链可变区具有SEQ ID NO:331的氨基酸序列；或
(d)该轻链可变区具有SEQ ID NO:332的氨基酸序列且该重链可变区具有SEQ ID NO:333的氨基酸序列。
70.如权利要求69所述的经分离的激动剂抗原结合蛋白，其中：
(a)该轻链具有SEQ ID NO:334的氨基酸序列且该重链具有SEQ ID NO:335的氨基酸序列；
(b)该轻链具有SEQ ID NO:334的氨基酸序列且该重链具有SEQ ID NO:336的氨基酸序列；
(c)该轻链具有SEQ ID NO:337的氨基酸序列且该重链具有SEQ ID NO:338的氨基酸序列；
(d)该轻链具有SEQ ID NO:339的氨基酸序列且该重链具有SEQ ID NO:340的氨基酸序列；或
(e)该轻链具有SEQ ID NO:341的氨基酸序列且该重链具有SEQ ID NO:342的氨基酸序列。
71.一种药物组合物，该药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和如权利要求1至70中任一项所述的激动剂抗原结合蛋白。
72.一种经分离的多核苷酸，该经分离的多核苷酸编码如权利要求1至70中任一项所述的激动剂抗原结合蛋白。
73.一种表达载体，该表达载体包含如权利要求72所述的多核苷酸。
74.一种宿主细胞，该宿主细胞包含如权利要求73所述的表达载体。
75.一种制备特异性结合至人类TREM2的激动剂抗原结合蛋白的方法，该方法包括在允许表达该抗原结合蛋白的条件下培养如权利要求74所述的宿主细胞；和自培养基或宿主细胞回收该抗原结合蛋白。
76.一种提高有需要的患者中巨噬细胞或小胶质细胞的存活或增殖的方法，该方法包括向该患者施用有效量的如权利要求1至70中任一项所述的激动剂抗原结合蛋白。
77.一种治疗或预防有需要的患者中与人类TREM2功能丧失相关的病症的方法，该方法包括向该患者施用有效量的如权利要求1至70中任一项所述的激动剂抗原结合蛋白。
78.如权利要求77所述的方法，其中该病症是阿尔茨海默病、纳哈氏病、额颞叶痴呆、多发性硬化、朊病毒病或中风。
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TW (1) TWI812619B (zh)
UY (1) UY37698A (zh)
WO (1) WO2018195506A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117964768A (zh) * 2024-04-02 2024-05-03 上海宏成药业有限公司 抗trem2抗体及其用途

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2017001531A (es) 2014-08-08 2017-05-15 Alector Llc Anticuerpos anti-trem2 y metodos de uso de los mismos.
JOP20190248A1 (ar) 2017-04-21 2019-10-20 Amgen Inc بروتينات ربط مولد ضد trem2 واستخداماته
BR112019022752A2 (pt) * 2017-08-03 2020-05-19 Alector Llc anticorpos anti-trem2 e métodos de uso dos mesmos
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
CN113302206A (zh) 2018-11-26 2021-08-24 戴纳立制药公司 治疗脂质代谢失调的方法
WO2020121195A1 (en) * 2018-12-10 2020-06-18 Mor Research Applications Trem2 antibodies and uses thereof
WO2020160468A1 (en) * 2019-02-01 2020-08-06 Avrobio, Inc. Compositions and methods for treating neurocognitive disorders
CN113614110A (zh) 2019-02-20 2021-11-05 戴纳立制药公司 抗trem2抗体及其使用方法
WO2020194317A1 (en) 2019-03-28 2020-10-01 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method of treating lipid-related disorders
CA3146777A1 (en) * 2019-08-02 2021-02-11 CTTQ-Akeso (ShangHai) Biomed. Tech. Co., Ltd. Anti-pd-1 antibody and pharmaceutical use thereof
IL294655A (en) 2020-01-13 2022-09-01 Denali Therapeutics Inc Anti-2trem antibodies and methods of using them
WO2021146256A1 (en) * 2020-01-13 2021-07-22 Denali Therapeutics Inc. Anti-trem2 antibodies and methods of use thereof
US20230159637A1 (en) 2020-02-24 2023-05-25 Alector Llc Methods of use of anti-trem2 antibodies
MX2022012182A (es) 2020-04-03 2022-12-08 Alector Llc Metodos de uso de anticuerpos anti-trem2.
JP2023552553A (ja) * 2020-12-04 2023-12-18 ビジル・ニューロサイエンス・インコーポレイテッド Ｔｒｅｍ２アゴニストを使用した、ａｔｐ結合カセットトランスポーター１機能不全に関連する疾患の治療
WO2023047100A1 (en) * 2021-09-21 2023-03-30 Quell Therapeutics Ltd Anti-trem2 chimeric antigen receptor
CA3239455A1 (en) * 2021-11-22 2023-05-25 Vigil Neuroscience, Inc. Anti-trem2 antibody and uses thereof
WO2023114499A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Denali Therapeutics Inc. Polypeptide engineering, libraries, and engineered cd98 heavy chain and transferrin receptor binding polypeptides
WO2023164516A1 (en) 2022-02-23 2023-08-31 Alector Llc Methods of use of anti-trem2 antibodies
WO2023192288A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 Denali Therapeutics Inc. Monovalent anti-trem2 binding molecules and methods of use thereof
WO2023192282A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 Denali Therapeutics Inc. Methods for treating brain glucose hypometabolism
WO2024040195A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering
WO2024052343A1 (en) 2022-09-06 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Trem-2 agonists for the treatment of marfan syndrome

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101861336A (zh) * 2007-09-18 2010-10-13 安姆根有限公司 人gm-csf抗原结合蛋白质
WO2016023019A2 (en) * 2014-08-08 2016-02-11 Alector Llc Anti-trem2 antibodies and methods of use thereof
WO2017019846A1 (en) * 2015-07-30 2017-02-02 Macrogenics, Inc. Pd-1-binding molecules and methods use thereof
WO2017062672A2 (en) * 2015-10-06 2017-04-13 Alector Llc Anti-trem2 antibodies and methods of use thereof

Family Cites Families (176)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6878687B1 (en) 1997-03-07 2005-04-12 Human Genome Sciences, Inc. Protein HMAAD57
EP0972029A1 (en) 1997-03-07 2000-01-19 Human Genome Sciences, Inc. Human secreted proteins
EP1090118A2 (en) 1998-06-26 2001-04-11 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human signal peptide-containing proteins
AUPQ873300A0 (en) 2000-07-12 2000-08-03 Medvet Science Pty. Ltd. A binding motif of a receptor (2)
NZ521540A (en) 2000-04-11 2004-09-24 Genentech Inc Multivalent antibodies and uses therefor
CA2431177C (en) 2000-12-08 2015-04-14 Baylor College Of Medicine Trem-1 splice variant for use in modifying immune responses
US8231878B2 (en) 2001-03-20 2012-07-31 Cosmo Research & Development S.P.A. Receptor trem (triggering receptor expressed on myeloid cells) and uses thereof
CA2342376C (en) 2001-03-20 2013-11-12 Marco Colonna A receptor trem (triggering receptor expressed on myeloid cells) and uses thereof
US8981061B2 (en) 2001-03-20 2015-03-17 Novo Nordisk A/S Receptor TREM (triggering receptor expressed on myeloid cells) and uses thereof
MXPA04003291A (es) 2001-10-12 2004-07-23 Schering Corp Uso de anticuerpos biespecificos para ragular respuestas inmunes.
AU2003215761A1 (en) 2002-03-22 2003-10-08 Bioxell S.P.A. A novel receptor trem (triggering receptor expressed on myeloid cells) and uses thereof
US7556926B2 (en) 2002-05-24 2009-07-07 Takeda Pharmaceuticals Company Ltd. Methods for screening insulin-sensitizing agents
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
GB0401730D0 (en) 2004-01-27 2004-03-03 Bioxell Spa Diagnosis method
CA2568162C (en) 2004-05-27 2013-04-16 Crucell Holland B.V. Binding molecules capable of neutralizing rabies virus and uses thereof
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
US8101345B1 (en) 2005-03-25 2012-01-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Proinflammatory nucleic acids
KR20060135280A (ko) 2005-06-24 2006-12-29 전남대학교산학협력단 선천성 면역에 관여하는 트렘-2의 클로닝
WO2007005879A2 (en) 2005-07-01 2007-01-11 The Johns Hopkins University Compositions and methods for the treatment or prevention of disorders relating to oxidative stress
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
DE202006007499U1 (de) 2006-05-11 2007-01-11 Osaka University Verwendung einer Zusammensetzung, die Plexin-A1-DAP12-Interaktion inhibiert, zur Behandlung von Entzündungs-, Autoimmun- oder Knochenresorptionserkrankungen
NZ573646A (en) 2006-06-12 2012-04-27 Wyeth Llc Single-chain multivalent binding proteins with effector function
CA2551163A1 (en) 2006-07-17 2008-01-17 Boehringer Ingelheim International Gmbh Methods for treating inflammatory, autoimmune or bone resorption diseases
US7553936B2 (en) 2006-12-04 2009-06-30 The United States of America as represented by Secretary Department of Health and Human Services Anti-TREM-like transcript-1 (TLT-1) antibodies and compositions
CN101687916A (zh) 2007-01-16 2010-03-31 惠氏公司 通过trem-1的炎症治疗、检测和监控
GR1007327B (el) 2007-08-08 2011-06-27 Ευαγγελος Γιαμαρελλος-Μπουρμπουλης Ο διαλυτος υποδοχεας ενεργοποιησης των μυελοκυτταρων (strem-1) ως δεικτης αποτελεσματικοτητας της θεραπειας του πεπτικου ελκους
KR100960684B1 (ko) 2008-02-22 2010-05-31 전남대학교산학협력단 Ｇａ733-2 발현 억제제로서의 ｔｒｅｍ-2 유전자, 및 이를포함하는 형질전환 동물 및 이의 사용방법
US20110256213A1 (en) 2008-10-15 2011-10-20 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Phospholipid micellar and liposomal compositions and uses thereof
WO2010125107A1 (en) 2009-04-28 2010-11-04 Life & Brain Gmbh Microglial precursor cells for the treatment of malignant neoplasms of the central nervous system
WO2010132370A2 (en) 2009-05-11 2010-11-18 Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Soluble tlt-1 for the treatment and diagnosis of sepsis
AU2010270979B2 (en) 2009-06-22 2015-04-23 Medimmune, Llc Engineered Fc regions for site-specific conjugation
WO2011047097A2 (en) 2009-10-13 2011-04-21 Sigalov Alexander B Inhibition of trem receptor signaling with peptide variants
CN102038698A (zh) 2009-10-14 2011-05-04 山东绿叶天然药物研究开发有限公司 莫诺苷的新用途
JO3244B1 (ar) * 2009-10-26 2018-03-08 Amgen Inc بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية
CN102127168A (zh) 2010-01-19 2011-07-20 中国人民解放军第二军医大学 一种髓样细胞表达激发受体-1的重组融合蛋白及其应用
KR20110086460A (ko) 2010-01-22 2011-07-28 한국교원대학교산학협력단 수용성 수용체 라이브러리 및 이를 이용한 사이토카인 발현 조절 유전자의 스크리닝 방법
ES2805301T3 (es) 2010-04-08 2021-02-11 Inst Nat Sante Rech Med Péptidos inhibidores derivados del transcrito de tipo TREM-1 (TLT-1) y sus usos
BR112012027917A2 (pt) 2010-04-30 2017-11-28 Alexion Pharma Inc anticorpos que apresentam reduzida imunogenicidade em um indivíduo humano
WO2012016333A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 University Health Network Biomarkers for malaria
US20130130354A1 (en) 2010-09-28 2013-05-23 CTI Salud S.A. Novel genes and uses thereof, expression profile of colon, gastric and pancreatic cancer
WO2012088290A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Abbott Laboratories Tri-variable domain binding proteins and uses thereof
EP2654792A4 (en) 2010-12-22 2016-05-11 Abbvie Inc HALF IMMUNOGLOBULIN BINDING PROTEINS AND USES THEREOF
US10689447B2 (en) 2011-02-04 2020-06-23 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
AU2012229251A1 (en) 2011-03-11 2013-09-12 Amgen Inc. Method of correlated mutational analysis to improve therapeutic antibodies
KR20120112973A (ko) 2011-04-04 2012-10-12 전남대학교산학협력단 비만 또는 제 2형 당뇨의 예방 또는 치료용 조성물
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
CN104093744A (zh) 2011-10-11 2014-10-08 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 双特异性抗体的改进的组装
RU2018135567A (ru) 2011-10-21 2018-11-15 Стемдженикс, Инк Функционализированные наночастицы для внутриклеточной доставки биологически активных молекул
PT2773671T (pt) 2011-11-04 2021-12-14 Zymeworks Inc Geração de anticorpo heterodimérico estável com mutações no domínio fc
EP2776061B1 (en) 2011-11-07 2019-08-14 MedImmune, LLC Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
EP3539982A3 (en) 2011-12-23 2020-01-15 Pfizer Inc Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
CN102517287B (zh) 2012-01-10 2013-09-11 广西大学 抑制水牛TREM1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用
KR20130114951A (ko) 2012-04-10 2013-10-21 한양대학교 산학협력단 폴리감마글루탐산을 포함하는 Ｔｈ17 매개성 질환 예방 또는 치료용 조성물
DK2892920T3 (da) 2012-09-07 2020-06-08 Inst Nat Sante Rech Med Hæmmende peptider afledt af udløsningsreceptor udtrykt på myeloide celler-1 (trem-1) trem-lignende transskript 1 (tlt-1) og anvendelser deraf
BR112015007672A2 (pt) 2012-10-04 2017-08-08 Dana Farber Cancer Inst Inc anticorpos anti-pd-l1 monoclonais humanos e métodos de uso
EP2912058A1 (en) 2012-10-23 2015-09-02 The Board of Regents of The University of Texas System Antibodies with engineered igg fc domains
WO2014074942A1 (en) 2012-11-08 2014-05-15 Illumina, Inc. Risk variants of alzheimer's disease
US9066928B1 (en) * 2012-12-04 2015-06-30 University Of Kentucky Research Foundation Method, composition, and kit useful for treatment of alzheimer's disease
US9546203B2 (en) 2013-03-14 2017-01-17 Amgen Inc. Aglycosylated Fc-containing polypeptides with cysteine substitutions
KR20150010326A (ko) 2013-07-19 2015-01-28 전남대학교산학협력단 비만 및 제 2형 당뇨 또는 지방간의 예방 또는 치료용 바이아릴아마이드를 포함한 유도체 화합물
CA2825821A1 (en) 2013-08-28 2015-02-28 Chiesi Farmaceutici S.P.A. 1-phenylalkanecarboxylic acid derivatives for the treatment of alzheimer's disease and multiple sclerosis
KR101402921B1 (ko) 2013-08-28 2014-06-02 전남대학교산학협력단 비만 또는 제 2형 당뇨의 치료를 위한 레스베라톨 유도체의 이용
WO2015037000A1 (en) 2013-09-11 2015-03-19 Compugen Ltd Vstm5 polypeptides and uses thereof as a drug for treatment of cancer, infectious diseases and immune related diseases
CN103555829B (zh) 2013-10-12 2015-10-21 厦门人瑞生物医药科技有限公司 一种检测trem2基因r47h突变的探针、试剂盒和方法
WO2015103594A1 (en) 2014-01-06 2015-07-09 Children's Medical Center Corporation Biomarkers for dementia and dementia related neurological disorders
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
CN103866041A (zh) 2014-04-04 2014-06-18 厦门大学 帕金森病和脑白质疏松症的突变检测试剂盒及其检测方法
PT3129406T (pt) 2014-04-11 2019-04-24 Medimmune Llc Compostos conjugados que compreendem anticorpos com manipulação de cisteínas
CN105218669A (zh) 2014-06-10 2016-01-06 河北翰林生物科技有限公司 制备抗人r47h-trem2突变体的人单克隆抗体的方法
US20170218091A1 (en) 2014-07-03 2017-08-03 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
MX2017000484A (es) 2014-07-17 2017-05-01 Novo Nordisk As Mutagenesis dirigida al sitio anticuerpos receptor desencadenante expresado en las celulas mieloides de tipo 1 (trem-1) para reducir la viscosidad.
KR101756417B1 (ko) 2014-08-21 2017-07-10 한국유나이티드제약 주식회사 금제제를 포함하는 간 섬유화 또는 간 경화의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102659538B1 (ko) 2014-09-28 2024-04-22 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 자극성 및 비자극성 골수성 세포의 조절
WO2016064895A1 (en) 2014-10-20 2016-04-28 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting apolipoprotein e (apoe) in neurologic disease
US10081792B2 (en) 2014-12-31 2018-09-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Derivation of human microglia from pluripotent stem cells
DK3283508T3 (en) 2015-04-17 2021-05-31 Alpine Immune Sciences Inc Immunomodulatory Proteins with Tunable Affinities
EP3297632A4 (en) 2015-05-18 2019-01-16 Synaptec Development LLC GALANTAMINE ELIMINATION OF AMYLOIDSS
WO2016201389A2 (en) 2015-06-12 2016-12-15 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
US11136390B2 (en) 2015-06-12 2021-10-05 Alector Llc Anti-CD33 antibodies and methods of use thereof
CA2991209C (en) 2015-07-04 2023-02-07 Emory University Use of trem-1 inhibitors for treatment, elimination and eradication of hiv-1 infection
US20180194861A1 (en) 2015-07-10 2018-07-12 Abbvie Inc. IgM- or IgE-Modified Binding Proteins and Uses Thereof
KR20180054639A (ko) 2015-08-28 2018-05-24 알렉터 엘엘씨 항-siglec-7 항체 및 이의 사용 방법
WO2017058866A1 (en) 2015-09-28 2017-04-06 Precision Immune, Inc. Anti-trem2 antibodies and uses thereof
SG11201803567XA (en) 2015-10-29 2018-05-30 Alector Llc Anti-siglec-9 antibodies and methods of use thereof
US20170218058A1 (en) 2016-01-28 2017-08-03 Alector, LLC Anti-apoe4 antigen-binding proteins and methods of use thereof
US20190046583A1 (en) 2016-02-11 2019-02-14 Johns Hopkins Technology Ventures Compositions and methods for neuralgenesis
WO2017147509A1 (en) 2016-02-25 2017-08-31 Marco Colonna Compositions comprising trem2 and methods of use thereof
JP7023853B2 (ja) 2016-03-04 2022-02-22 アレクトル エルエルシー 抗ｔｒｅｍ１抗体及びその使用方法
US10875919B2 (en) 2016-04-26 2020-12-29 Alector Llc Chimeric receptors and methods of use thereof
EP3452101A2 (en) 2016-05-04 2019-03-13 CureVac AG Rna encoding a therapeutic protein
JP2019522044A (ja) 2016-06-01 2019-08-08 ザ・ユニバーシティ・オブ・ヴァージニア・パテント・ファウンデーション 中枢神経系におけるリンパ管を調節するための方法及び組成物
CN109641961A (zh) 2016-07-22 2019-04-16 德国神经退行性疾病研究中心 Trem2切割调节剂及其用途
CN106244682B (zh) 2016-07-29 2019-11-26 中山大学 Trem-2基因在鉴别猪对蓝耳病毒易感性中的应用
CN106636330B (zh) 2016-09-21 2017-12-15 郁金泰 阿尔茨海默病的诊断和治疗药物
US11957713B2 (en) 2016-10-14 2024-04-16 Children's Medical Center Corporation Compositions and methods for treating diseases and disorders of the central nervous system
WO2018107058A1 (en) 2016-12-09 2018-06-14 Alector Llc Anti-sirp-alpha antibodies and methods of use thereof
WO2018119018A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Genervon Biopharmaceuticals, LLC Methods of using gm6 in diagnosing and treating alzheimer's disease
US20190343882A1 (en) 2017-01-12 2019-11-14 Duke University Compositions and Methods for the Treatment of Demyelinating Conditions
US20190367623A1 (en) 2017-01-17 2019-12-05 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treating neurodegenerative diseases by inducing disease-associated microglia (dam) cells
WO2018136598A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Evelo Biosciences, Inc. Methods of treating cancer
WO2018140831A2 (en) 2017-01-27 2018-08-02 Silverback Therapeutics, Inc. Tumor targeting conjugates and methods of use thereof
US10143187B2 (en) 2017-02-17 2018-12-04 Denali Therapeutics Inc. Transferrin receptor transgenic models
WO2018157014A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Duke University Metabolic biomarkers for the identification and characterization of alzheimer's disease
EP4272551A3 (en) 2017-02-28 2024-03-06 The Regents of the University of California Differentiation and use of human microglia-like cells from pluripotent stem cells and hematopoietic progenitors
CN110891417B (zh) 2017-03-21 2023-05-23 杰克逊实验室 表达人APOE4和小鼠Trem2 p.R47H的遗传修饰小鼠及其使用方法
KR101936249B1 (ko) 2017-04-04 2019-01-08 경희대학교 산학협력단 쿠마타케닌을 포함하는 암의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
JOP20190248A1 (ar) 2017-04-21 2019-10-20 Amgen Inc بروتينات ربط مولد ضد trem2 واستخداماته
US20180318379A1 (en) 2017-05-01 2018-11-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Inhibition of triggering receptor expressed on myeloid cells 1 (trem1) to treat central nervous system disorders
EP3625258A1 (en) 2017-05-16 2020-03-25 Alector LLC Anti-siglec-5 antibodies and methods of use thereof
WO2018218090A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Nanosomix, Inc. Detection of biomarkers on vesicles for the diagnosis and prognosis of diseases and disorders
JP2020522266A (ja) 2017-06-05 2020-07-30 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 非対称なｃｈ２−ｃｈ３領域の変異を有する、操作された多重特異性抗体及び他の多量体タンパク質
JP7356970B2 (ja) 2017-06-25 2023-10-05 システィミューン， インク． 多重特異性抗体とその作製及び使用方法
CN109206503A (zh) 2017-07-07 2019-01-15 厦门大学 一种蛋白用于制备防治阿尔茨海默病药物的用途
US20190008812A1 (en) 2017-07-07 2019-01-10 Washington University Methods for treating microglial dysfunction
WO2019016784A1 (en) 2017-07-21 2019-01-24 Universidade De Coimbra ANTI-NUCLEOLIN ANTIBODIES
CN110945018A (zh) 2017-07-27 2020-03-31 诺华股份有限公司 抗脱落酶的trem2变体
BR112019023789A2 (pt) 2017-08-03 2020-07-28 Alector Llc anticorpos anti-cd33 e métodos de uso dos mesmos
BR112019022752A2 (pt) 2017-08-03 2020-05-19 Alector Llc anticorpos anti-trem2 e métodos de uso dos mesmos
WO2019032624A1 (en) 2017-08-08 2019-02-14 Pionyr Immunotherapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR DEACTIVATING TREM1-EXPRESSING MESHLOID CELLS
WO2019055841A1 (en) 2017-09-14 2019-03-21 Denali Therapeutics Inc. ANTI-TREM2 ANTIBODIES AND METHODS OF USE
US11364303B2 (en) 2017-09-29 2022-06-21 Pfizer Inc. Cysteine engineered antibody drug conjugates
WO2019068072A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 The General Hospital Corporation METHODS OF IDENTIFICATION AND TREATMENT OF ADRENOMYELONEUROPATHY (AMN)
CN112481269A (zh) 2017-10-03 2021-03-12 普利维尔治疗公司 用于溶酶体障碍的基因疗法
WO2019079529A1 (en) 2017-10-17 2019-04-25 The Translational Genomics Research Institute TREM2 AGONISTS FOR STIMULATING MICROGLIA AND IDENTIFICATION METHODS
US10597462B1 (en) 2017-11-08 2020-03-24 University Of Puerto Rico Anti-TLT-1 antibody and uses thereof
WO2019095064A1 (en) 2017-11-15 2019-05-23 UNIVERSITé LAVAL Use of srsf3 agents for the treatment and/or prevention of neurological conditions, cancer, bacterial infections or viral infections
CN109837330A (zh) 2017-11-28 2019-06-04 上海中优精准医疗科技股份有限公司 一种检测trem2基因多态性的探针及方法
US11470827B2 (en) 2017-12-12 2022-10-18 Alector Llc Transgenic mice expressing human TREM proteins and methods of use thereof
BR112020011833A2 (pt) 2017-12-12 2020-11-24 Pionyr Immunotherapeutics, Inc. anticorpos anti-trem2 e métodos relacionados
WO2019152715A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Alector Llc Anti-ms4a4a antibodies and methods of use thereof
CA3091047A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 Yale University Compositions for modulation of a trem or treml protein and methods of use
NL2020520B1 (en) 2018-03-02 2019-09-12 Labo Bio Medical Invest B V Multispecific binding molecules for the prevention, treatment and diagnosis of neurodegenerative disorders
US20210000807A1 (en) 2018-03-22 2021-01-07 Nsc Therapeutics Gmbh Compounds and methods for use in the treatment of microglia-mediated disorders
EA202092302A1 (ru) 2018-04-02 2021-02-02 Бристол-Майерс Сквибб Компани Антитела к trem-1 и их применения
WO2019199776A1 (en) 2018-04-09 2019-10-17 The General Hospital Corporation Combination therapies for the treatment of amyotropic lateral sclerosis and related disorders
AU2019272885A1 (en) 2018-05-25 2020-11-26 Alector Llc Anti-SIRPA antibodies and methods of use thereof
US20210246204A1 (en) 2018-06-08 2021-08-12 Alector Llc Anti-siglec-7 antibodies and methods of use thereof
CN108752482B (zh) 2018-06-12 2019-04-30 南京卡提医学科技有限公司 携带截短或未截短的髓样细胞触发性受体信号结构的嵌合抗原受体及其应用
EP3809838A4 (en) 2018-06-21 2022-03-23 The Jackson Laboratory GENETICALLY MODIFIED MOUSE MODELS OF ALZHEIMER'S DISEASE
SG11202010990TA (en) 2018-06-29 2020-12-30 Alector Llc Anti-sirp-beta1 antibodies and methods of use thereof
US11278575B2 (en) 2018-07-12 2022-03-22 Duke University Compositions and methods for the treatment of demyelinating conditions
EP3820520A4 (en) 2018-07-12 2022-05-11 Corvus Pharmaceuticals, Inc. METHODS FOR DETECTING AND TREATING CANCERS HAVING ACTIVATION OF THE ADENOSINE PATHWAY
WO2020018461A1 (en) 2018-07-16 2020-01-23 The University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods of diagnosis and treatment for neurological diseases
CN112752768A (zh) 2018-07-27 2021-05-04 艾利妥 抗siglec-5抗体及其使用方法
CN109112214A (zh) 2018-07-27 2019-01-01 复旦大学附属中山医院 模式识别受体trem2在肝癌预后和治疗中的应用
AU2019331018A1 (en) 2018-08-31 2021-03-11 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
US20220218652A1 (en) 2018-09-05 2022-07-14 The General Hospital Corporation Methods of treating cytokine release syndrome
SG11202102162RA (en) 2018-09-11 2021-04-29 Univ Washington Anti-trem-2 agonist antibodies
US20210315816A1 (en) 2018-09-12 2021-10-14 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Antimicrobial compositions and methods
JP2022513324A (ja) 2018-09-28 2022-02-07 イノトレム 抗炎症療法に応答しやすい対象を特定するための可溶性ｔｒｅｍ－１レベルの使用
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
KR102096282B1 (ko) 2018-10-15 2020-04-02 재단법인대구경북과학기술원 재조합 베큘로바이러스를 이용한 인간 ｔｒｅｍ２ 세포막 단백질의 효율적인 정제방법
KR102156165B1 (ko) 2018-10-29 2020-09-15 재단법인대구경북과학기술원 인간 ｔｒｅｍ２ 세포막 단백질에 대한 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이의 용도
CN111135185A (zh) 2018-11-02 2020-05-12 杭州星鳌生物科技有限公司 天然免疫激活通过调控髓系细胞触发受体trem2抑制大脑神经慢性炎症
EP3876956A4 (en) 2018-11-08 2022-12-28 The Regents of The University of California SYSTEMS AND METHODS FOR TARGETING CANCER CELLS
CN113302206A (zh) 2018-11-26 2021-08-24 戴纳立制药公司 治疗脂质代谢失调的方法
WO2020121195A1 (en) 2018-12-10 2020-06-18 Mor Research Applications Trem2 antibodies and uses thereof
EP3898667A2 (en) 2018-12-20 2021-10-27 F. Hoffmann-La Roche AG Modified antibody fcs and methods of use
CN109646668B (zh) 2019-01-04 2019-10-18 厦门大学 一种多肽用于制备防治阿尔茨海默病药物的用途
EP3906055A4 (en) 2019-01-04 2023-01-04 Trio Pharmaceuticals, Inc. MULTISPECIFIC PROTEIN MOLECULES AND THEIR USES
US20220119532A1 (en) 2019-01-14 2022-04-21 University Of Virginia Patent Foundation Use of integrin inhibitors for treatment or prevention of a neurological immunity disorder and/or nervous system injury
WO2020152607A1 (en) 2019-01-22 2020-07-30 St. Jude Children's Research Hospital Modulation of lc3-associated endocytosis pathway and genetically modified non-human animals as a model of neuroinflammation and neurodegeneration
EP3914071A4 (en) 2019-01-23 2022-10-19 The Regents of the University of California HUMAN GENOMIC CONSTRUCTION REPORTER CELLS AND MOUSE MODELS FOR SCREENING THERAPEUTIC AGENTS AGAINST GENES ASSOCIATED WITH MICROGLY-EXPRESSED DISEASE
EP3917623A4 (en) 2019-02-01 2022-10-19 Avrobio, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF NEUROCOGNITIVE DISORDERS
CA3128350A1 (en) 2019-02-01 2020-08-06 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Microenvironment sensors to regulate engineered gene expression
WO2020160468A1 (en) 2019-02-01 2020-08-06 Avrobio, Inc. Compositions and methods for treating neurocognitive disorders
CN113614110A (zh) 2019-02-20 2021-11-05 戴纳立制药公司 抗trem2抗体及其使用方法
WO2020194317A1 (en) 2019-03-28 2020-10-01 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method of treating lipid-related disorders
CN110320368A (zh) 2019-05-30 2019-10-11 广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心） 基于trem2的诊断试剂盒及其在帕金森病诊断产品上的应用
CN110241208A (zh) 2019-08-02 2019-09-17 辽宁中医药大学 Trem2作为早期诊断冠心病的分子标志物的应用
CN110511240B (zh) 2019-08-27 2022-03-08 南京医科大学 一种髓细胞触发受体2的内源性配体及其应用
CN110882262A (zh) 2019-11-06 2020-03-17 南京医科大学 一种髓细胞触发受体2的激活用药及其应用
AU2020387380A1 (en) 2019-11-22 2022-05-26 Eli Lilly And Company TREM2 antibodies and uses thereof
EP3986937A1 (en) 2019-12-05 2022-04-27 Alector LLC Methods of use of anti-trem2 antibodies
CN111184742B (zh) 2020-02-13 2022-06-24 中山大学附属第五医院 Trem-2+t细胞在制备用于治疗结核病药物中的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101861336A (zh) * 2007-09-18 2010-10-13 安姆根有限公司 人gm-csf抗原结合蛋白质
WO2016023019A2 (en) * 2014-08-08 2016-02-11 Alector Llc Anti-trem2 antibodies and methods of use thereof
WO2017019846A1 (en) * 2015-07-30 2017-02-02 Macrogenics, Inc. Pd-1-binding molecules and methods use thereof
WO2017062672A2 (en) * 2015-10-06 2017-04-13 Alector Llc Anti-trem2 antibodies and methods of use thereof

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117964768A (zh) * 2024-04-02 2024-05-03 上海宏成药业有限公司 抗trem2抗体及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
UY37698A (es) 2018-10-31
EP3612218A4 (en) 2021-07-28
JP2020517249A (ja) 2020-06-18
CL2019003000A1 (es) 2020-02-14
MA52273A (fr) 2021-04-28
AU2022221560A1 (en) 2022-09-22
AU2018254600B2 (en) 2022-05-26
US20210054069A1 (en) 2021-02-25
KR20200018778A (ko) 2020-02-20
US20220204611A1 (en) 2022-06-30
TW201906628A (zh) 2019-02-16
AU2018254600A1 (en) 2019-10-24
PH12019502356A1 (en) 2020-12-07
CO2019012998A2 (es) 2020-02-18
WO2018195506A1 (en) 2018-10-25
EP3612218A1 (en) 2020-02-26
MX2019012364A (es) 2019-11-28
JP2022188272A (ja) 2022-12-20
JP7252134B2 (ja) 2023-04-04
CR20210171A (es) 2021-05-21
JOP20190248A1 (ar) 2019-10-20
PE20200485A1 (es) 2020-03-03
SG11201909646TA (en) 2019-11-28
CA3060409A1 (en) 2018-10-25
CR20190525A (es) 2020-03-20
US11186636B2 (en) 2021-11-30
TWI812619B (zh) 2023-08-21
BR112019021991A2 (pt) 2020-06-16

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