CN107929731A - 利用补体途径抑制剂治疗眼部疾病 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及通过施用补体途径抑制剂特别是旁路途径抑制剂对眼部疾病及病症的治疗。眼部疾病包括老年性黄斑变性、糖尿病视网膜病变及眼部血管新生。一个实施方案包括以全抗体、Fab片段或单域抗体的形式施用抗D因子。可用于本方法的其它补体组分抑制剂包括H因子或阻断备解素、因子B、因子Ba、因子Bb、C2、C2a、C3a、C5、C5a、C5b、C6、C7、C8、C9或C5b‑9的作用的抑制剂。

Description

利用补体途径抑制剂治疗眼部疾病
本申请是申请日为2006年11月04日、申请号为200680050481.0、名称为“利用补体途径抑制剂治疗眼部疾病”的发明申请的分案。
发明领域
本发明涉及对患有补体活化相关眼部病症和疾病如老年性黄斑变性、糖尿病视网膜病变的患者进行补体途径抑制特别是D因子的抑制。
发明背景
黄斑退变是用来描述一类眼病的临床术语，其特征是进行性中心视力损失，这种损失与布鲁赫膜(Bruch’s membrane)、脉络膜、神经视网膜和/或视网膜色素上皮异常有关。黄斑位于视网膜中央，直径约为1/3-1/2厘米。由于具有更高的视锥细胞密度，黄斑可产生精细视觉，尤其是黄斑中心(中心凹)。血管、神经节细胞、内核层及细胞和网织层都分布于视锥细胞的侧部(而不与其重叠)，因此光线可更直接地到达视锥细胞。视网膜下面是脉络膜和视网膜色素上皮(PE)，脉络膜是嵌于纤维组织中的大量血管的集合，视网膜色素上皮覆盖于脉络膜之上。脉络膜血管为视网膜(特别是其视觉细胞)提供营养。脉络膜和PE位于眼后部。
构成视网膜色素上皮的视网膜色素上皮(RPE)细胞产生、储存并运输很多与光感受器的正常功能和存活有关的因子。这些多功能细胞将代谢物从它们的血液供应处——眼的脉络膜毛细血管运送给光感受器。RPE也具有巨噬细胞的功能，可吞噬在正常细胞生理过程中所产生的视杆细胞和视锥细胞外段的尖部。各种离子、蛋白和水穿梭于RPE细胞和光感受器间隙区域，这些分子最终将影响光感受器的代谢和活性。
老年性黄斑变性(AMD)是最常见的黄斑病变，这种疾病通常与中心视野视敏度的进行性损失、色彩视觉的变化及异常的暗适应性和敏感性相关联。AMD的临床表现主要有干性或萎缩性和湿性或渗出性两种。干性与中心视网膜或黄斑的萎缩性细胞死亡有关，中心视网膜或黄斑是诸如阅读、驾车或脸部识别等活动中使用的精细视觉所需要的。约有10-20％的干性AMD患者将发展为第二型的AMD，即湿性AMD。
湿性(新生血管性/渗出性)AMD由视网膜后黄斑下血管异常增生及血管渗漏引起，导致视网膜异位、出血和疤痕形成。这种病变在数月至数年内将导致病人视力退化。不过病人也可能迅速失明。所有的湿性病变均源自晚期干性病变。AMD致盲病例的85％都是湿性病变引起。在湿性AMD中，由于血管出现液体及血液外渗，形成了破坏中心视网膜的疤痕组织。
形成两种形式AMD的最重要的风险因素是老龄化和视网膜色素上皮后的脉络膜小疣沉积及异常胞外沉积。脉络膜小疣引起RPE单层的侧向拉伸和RPE与其直接血管供应处脉络膜毛细血管的物理错位。这种错位产生物理屏障，其可阻碍代谢物和废物在脉络膜毛细血管与视网膜之间的正常扩散。脉络膜小疣是与AMD相关的标志性沉积。脉络膜小疣的生成涉及RPE功能障碍、光感受器外段消化不良及随后的碎片积聚。脉络膜小疣含有补体激活剂、抑制剂、活化特异性补体片段及包括膜攻击复合物(MAC或C5b-9)的末端通路组分，其提示这些物质的聚集可能通过补体级联反应产生强大的白细胞趋化刺激(Killingsworth等,(2001)Exp Eye Res 73,887-96)。最近的研究已暗示在脉络膜小疣的形成中的局部炎症和补体级联反应的活化(Bok D.Proc.Natl.Acad.Sci.(USA).2005；102:7053-4；Hageman GS等，Prog.Retin Eye Res.2001；20:705-32；Anderson DH等，Am J Ophthalmol.2002；134:411-431。Johnson LV等，Exp Eye Res.2001；73:887-96)。
湿性AMD与脉络膜血管新生(CNV)相关，是一个复杂的生物学过程。虽然对脉络膜新生血管形成的病理学并不清楚，但认为诸如炎症、缺血及血管生成因子的局部生成这样的因素是重要的。虽然已经提示炎症发挥作用，但对补体的作用还没有进行探索。在小鼠模型中的初步研究表明CNV由补体活化引起(Bora PS,J Immunol.2005；174:491-497)。
补体系统是天然免疫抵抗微生物感染的重要组分，且包含一组正常情况下以非活性形式存在于血清中的蛋白质。这些蛋白存在于三个活化途径中：经典途径、凝集素途径和旁路途径(V.M.Holers,在Clinical Immunology:Principles and Practice中,R.R.Rich编,Mosby Press；1996,363-391)。微生物表面分子可激活这些途径，形成名为C3转化酶的蛋白酶复合物。经典途径是钙/镁依赖级联反应，该反应通常通过抗原抗体复合物的形成而活化。经典途径也可通过结合C反应蛋白－配体复合物或通过包括革兰氏阴性菌的很多病原菌等以非抗体依赖途径而活化。旁路途径是镁离子依赖级联反应，该反应主要通过某些易感表面(如酵母和细菌的细胞壁多糖以及某些生物多聚物)上C3的沉积和活化来激活。
旁路途径参与经典途径和凝集素途径活性的放大(Suankratay,C.,同上；Farries,T.C.等,Mol.Immunol,27:1155-1161(1990))。补体途径活化后可产生补体蛋白的生物活性片段，如C3a、C4a、C5a过敏毒素及C5b-9膜攻击复合物(MAC)，这些活性片段进而通过白细胞趋化、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、血小板、肥大细胞、内皮细胞活化及增加血管通透性、细胞裂解和组织损伤等介导炎症反应。
D因子在人体血浆中的浓度非常低(1.8μg/ml)，并且已有报道表明D因子是补体旁路途径活化的限速酶(P.H.Lesavre和H.J.Muller-Eberhard.J.Exp.Med.,1978:148:1498-1510:J.E.Volanakis等,New Eng.J.Med.,1985；3121:395-401)，因此D因子可能是抑制补体途径的这种放大效应的合适靶点。使用动物模型和在离体实验研究中已经表明抑制补体活化可以有效治疗一些疾病适应症，如系统性红斑狼疮和肾小球肾炎(Y.Wang等,Proc.Natl.Acad.Sci.；1996,93:8563-8568)。
对AMD病人进行单核苷酸多态性(SNP)分析，发现H因子遗传变体(Y402H)与AMD发病率的增加高度相关(Zareparsi S,Branham KEH,Li M等,Am J Hum Genet.2005；77:149-53；Haines JL等，Sci 2005；208:419-421)。50％的AMD患者在H因子的这一突变位点为纯合型或杂合型。H因子是补体旁路途径的关键可溶性抑制物(Rodriguez de Cordoba S等,MolImmunol.2004；41:355-67)。H因子与C3b结合并因而加速补体旁路途径C3转化酶(C3bBb)的衰变，同时，H因子也可作为I因子介导的C3b酶解灭活的辅助因子而发挥抑制作用。组织化学染色显示H因子和MAC在RPE-脉络膜交界处有相似的分布。AMD患者中MAC在这一交界处的大量沉积表明H因子单倍体型(Y402H)可能具有降低的补体抑制活性。据推测，H因子(Y402H)具有较低的C3b结合亲和性。因此，其抑制补体旁路途径活化的有效性低于野生型H因子。这使得RPE和脉络膜细胞持续受到补体旁路途径活化的攻击威胁。
已经显示，血浆H因子缺乏导致旁路途径失控性活化，伴随C3及其它末端补体成分如C5的大量消耗。与这一发现相一致的是，已知H因子的血浆水平因吸烟而下降，而后者是AMD的已知的风险因素(Esparza-Gordillo J等,Immunogenetics.2004；56:77-82)。
目前，对于干性AMD尚缺乏有确切疗效的治疗方法，对于晚期干性AMD没有任何可用的治疗措施。在湿性AMD的部分病例中，称为激光光凝固法的技术可有效封闭渗漏或出血血管。但是，激光光凝固法通常不能恢复已丧失的视觉功能，但仅能减缓且在某些病例中阻止视觉功能的进一步丧失。最近，已经显示，在早期治疗的情况下，光动力学疗法在大约1/3的湿性AMD病人中可以有效阻止异常血管增生。在Visdyne光动力学疗法(PDT)中，染料被注入病人眼中，染料在视网膜血管渗漏部位积累，且当用低功率激光照射时，染料发生反应而使血管渗漏得以封闭。除上述两种激光治疗技术外，针对湿性AMD的治疗的几种靶向血管内皮细胞生长因子(VEGF)的抗血管新生的治疗方法正处于开发之中。然而，只有10％的被治疗患者视力得到改善。
鉴于对湿性AMD的不充分治疗和对晚期干性AMD的治疗方法的完全空白，明确需要开发对该严重疾病的新疗法。本发明为治疗该严重疾病提供了新的方法。
发明概述
本发明涉及用于治疗眼部相关病症或疾病例如老年性黄斑变性(AMD)、糖尿病性视网膜病变、眼部血管新生(如影响脉络膜、角膜或视网膜组织的眼部血管新生)以及其它涉及补体活化的眼部病症的补体抑制剂。AMD的治疗包括干性和湿性AMD。
本发明的补体抑制剂包括但不限于抑制补体旁路途径如D因子、备解素、B因子、Ba因子、Bb因子的抑制剂和抑制补体经典途径如C3a、C5、C5a、C6、C7、C8、C9和C5b-9的抑制剂。本发明也包括联合使用补体抑制剂和其它试剂如抗血管新生剂及抗炎剂如类固醇。
本发明的另一实施方案涉及C5aR和C3aR抑制剂的使用，比如抗体和衍生片段以及单域构建体，和小分子化合物。
本发明的另一实施方案涉及重组可溶性CR1(TP10)及其衍生蛋白的应用；C3抑制分子(如Compstatin，结合并抑制C3活化的模拟肽)的应用；阻断C3、C5、FD、P因子和B因子的合成的siRNA。
这些抑制物可以是但不限于小分子化合物、核苷酸、肽、蛋白、模拟肽和抗体。
本发明的另一实施方案包括通过眼内给药或其它有效的临床给药途径施用于患者的从人血液中纯化的人H因子或重组人H因子的应用。
本发明的抗体包括完整免疫球蛋白、scFv、Fab、Fab’、Fv、F(ab’)2或dAb。域抗体包含VH结构域或VL结构域。
本发明的一实施方案是结合D因子并阻断其激活补体旁路途径的能力的单克隆抗体的应用。这些抗体(例如从保藏在ATCC且命名为HB12476的杂交瘤制备的单克隆抗体166-32)在WO 01/70818和US 20020081293中有描述，这些文献被引入本文作为参考。本发明也包括与单克隆抗体166-32一样特异性结合相同表位的抗体。本发明也包括共同未决申请____中的人源化抗体，该申请被引入本文作为参考。
本发明的一实施方案是与补体组分C5a结合的单克隆抗体的应用。此类抗体包括从保藏在ATCC且命名为PTA-3650的杂交瘤制备的抗体137-26及与137-26一样特异性结合相同表位的任何抗体。
根据本发明，补体途径抑制剂可通过以下途径给药：(a)胃肠外给药；(b)生物相容或生物可降解缓释植入物；(c)输液泵植入；或(d)局部给药，如角膜下或玻璃体内给药。补体抑制剂也可通过选自口腔给药、肠道给药和局部给药的胃肠外给药方式给药。局部给药可包括洗眼液、眼软膏、护眼罩或眼滴液。
此外，本发明中的补体抑制剂也可与其它免疫调节或免疫抑制化合物联合给药。
本发明的另一实施方案涉及用于基因疗法的可表达补体途径抑制剂的核酸构建体的给药。
本发明的另一实施方案包括筛选可用于治疗AMD的补体抑制剂的方法，该方法包含使用Ccl-2或Ccr-2缺陷老年小鼠AMD模型。这种小鼠表现出与人干性和湿性AMD相似的组织病理学变化。可通过玻璃体内给药的方式使用补体抑制剂或H因子对这种小鼠进行治疗。可用组织学检验来确定所检测的试剂在小鼠中是否对AMD的发展有保护作用。
本发明的详细说明
鉴于可以变化，本发明并不局限于本文中所描述的各具体的方法、规程、细胞系、载体或试剂。此外，本文中的各术语也仅为便于描述各具体实施方案而采用，其并不意图限制本发明的范围。除非上下文中明确地另外指明，本文及所附权利要求中所用各单数形式“一个”、”一种”以及“这种”均包括复数含义，如“一种宿主细胞”包括大量这样的宿主细胞。
除非另外定义，本文中所有科学、技术术语和任何缩略语均具有本发明所属领域普通技术人员所公认的含义。虽然任何其它与本文所述类似的方法和材料也可用于本发明的操作中，本文描述了本发明的示例性方法、装置和材料。
本文中所述及的所有专利及出版物均以法律允许的程度引入本文作为参考，以便对其中所报道且可能在本发明中使用的蛋白质、酶、载体、宿主细胞和方法进行描述和披露。但是，本文中任何引用都不应被理解为承认本发明由于之前的发明而无权主张在此批露的内容。
定义
术语“氨基酸序列变体”指与天然多肽序列有一定程度氨基酸序列差异的多肽。一般而言，氨基酸序列变体将与天然多肽有至少约70％、或至少约80％或至少约90％的同源性。这些氨基酸序列变体在天然氨基酸序列的氨基酸序列中的特定位点具有替代、缺失或插入。
术语“同一性”或“同源性”指在将序列比对且如果为获得整个序列的最大同一性而必须引入空位后，并且在任何保守性残基替换都不被看作序列统一性的一部分后，候选序列中与所比对的相应序列的残基相同的氨基酸残基的百分比。序列N端或C端的延伸及任何插入都不应被理解为降低同一性或同源性。序列比对方法及计算机程序是本领域充分已知的。利用已知方法可以很容易地计算序列同一性，这些方法包括但不限于下述文献中所述方法：Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.编,Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing:Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.编,Academic Press,New York,1993；Computer Analysis of Sequence Data,第I部分,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编,Humana Press,New Jersey,1994；Sequence Analysisin Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；和Sequence AnalysisPrimer,Gribskov,M.和Devereux,J.编,M Stockton Press,New York,1991；和Carillo,30H.,和Lipman,D.,SIAM J.Applied Math.,48:1073(1988)。确定同一性的方法经设计以在被测序列之间产生最大匹配。确定两序列之间的同一性的计算机程序方法包括但不限于：GCG软件包(Devereux,J.等,Nucleic Acids Research 12(1):387(1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA(Atschul,S.F.等,J Molec.Biol.215:403-410(1990))。BLAST X程序可以从NCBI及其它途径公开获得(BLAST手册,Altschul,S.等,NCBI NLM NIH Bethesda,Md.20894,Altschul,S.等,J.Mol.Biol.215:403-410(1990)。熟知的Smith Waterman算法也可用来确定同一性。
本文中使用的术语“抗体”具有其最广泛的意义，且特别涵盖完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(比如双特异性抗体)以及抗体片段，只要它们呈现所需的生物学活性。
本文中使用的术语“单克隆抗体”是指来自基本同源的抗体群体的抗体，即除了可能存在的少量天然突变，组成此抗体群体的各单个抗体成员相同。与包含针对不同抗原决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每个单克隆抗体只针对抗原上的单个抗原决定簇。修饰语“单克隆”反映了抗体来自于基本同源的抗体群体的特性，这一修饰不应视为抗体须由某特定方法产生。比如，本发明所使用的单克隆抗体可以通过由Kohler等,Nature,256:495(1975)首次描述的杂交瘤的方法制备，也可以通过重组DNA的方法制备(见美国专利号4,816,567)。“单克隆抗体”也可以使用如Clackson等,Nature,352:624-628(1991)和Marks等,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)中所述技术从噬菌体抗体文库中分离得到。
本文中的单克隆抗体特别包括“嵌合抗体”，这种抗体的重链和/或轻链的一部分与获自特定物种或属于特定抗体类型或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的其它部分则与获自另一物种、或属于另一抗体类型或亚类的抗体的相应序列相同或同源，以及这些抗体的片段，只要它们呈现出需要的生物学活性(美国专利号4,816,567；Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。
“抗体片段”包含抗体的抗原体结合区或可变区的完整抗体的一部分。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段，双链抗体，线性抗体，单链抗体分子以及由多个抗体片段形成的多特异性抗体。
“完整”抗体指包含抗原结合可变区及轻链恒定域(CL)和重链恒定域CH1、CH2、CH3的抗体。恒定域可以是天然序列恒定域(如人天然序列恒定域)或为其氨基酸序列变体。完整抗体可具有一或多种效应物功能。
抗体“效应物功能”指归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸变体Fc区)的生物学活性。抗体效应物功能的例子包括C1q结合；补体依赖细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬；细胞表面受体(B细胞受体BCR)的下调等。
根据其重链恒定域的氨基酸序列，完整抗体可被分为不同的“类型”。完整抗体主要有五类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，且某些类型可进一步分为不同“亚类”(同型)，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA及IgA2。对应于不同类型抗体的重链恒定域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类型免疫球蛋白的亚基结构及三维构象是熟知的。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”(ADCC)指细胞介导的反应，该反应中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(如自然杀伤细胞(NK)、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上的结合抗体且随后使靶细胞裂解。NK细胞是介导ADCC的主要细胞，其只表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。FcR在造血细胞上的表达。可利用如美国专利号5,500,362或5,821,337中所述的体外ACDD测试方法检测目标分子的ADCC活性。可用于这些测试方法的效应物细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤细胞(NK)。可选地或额外地，可在例如动物模型中体内评价目标分子的ADCC活性。有几种这样的模型可供使用。
术语“可变的”是指在抗体中可变区的某些部分在序列上存在广泛差异且这些部分被用在各特定抗体与其特定抗原的结合和专一性中的事实。然而，可变性在抗体的可变区呈不均匀分布。其主要集中于轻链和重链可变区的三个被称为高变区的片段中。这些高变区也称为互补决定区或CDR。可变区的更高度保守的部分称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变区各包含四个FR，FR主要呈β片层构象，β片层间由三个高变区连接，这些高变区形成环状连接，且在某些情况下形成β片层结构的一部分。每条链的高变区通过FR保持在邻近范围内，且与其它链的高变区共同形成抗体的抗原结合位点(Kabat等,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。
本文中使用的术语“高变区”是指抗体中负责抗原结合的氨基酸序列。高变区通常包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(如轻链可变区中的残基24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)以及重链可变区残基31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)；Katbat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))和/或来自“高变环”的残基(如轻链可变区残基2632(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)及重链可变区残基26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。“框架区”或“FR”残基是除了在此定义的高变区残基之外的可变区残基。
抗体经木瓜蛋白酶消化后产生两个相同的被称为“Fab”片段的抗原结合片段(各“Fab”片段具有单个抗原结合位点)和残留“Fc”片段，其名反映出其易结晶的特性。胃蛋白酶处理则可产生具有两个抗原结合位点且仍具有交联抗原能力的F(ab’)2片段。
Fab片段还包含了轻链的恒定区和重链的第一个恒定区(CH1)。Fab’片段与Fab片段的不同之处在于其在重链C1区的羧基端增加了几个残基，包括来自抗体铰链区的一或多个半胱氨酸残基。本文中的Fab’-SH表示恒定区的半胱氨酸具有至少一个游离巯基的Fab’片段。F(ab’)2抗体片段初始作为一对Fab’片段生成，它们之间具有铰链区半胱氨酸。抗体片段的其它化学交联形式也是已知的。
所有脊椎动物的抗体“轻链”可根据其恒定区氨基酸序列分入两种明显不同的类型(称为κ和λ)中的一种。
“Fv”是包含完整的抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。它由一个重链和一个轻链可变区通过紧密的非共价连接形成的二聚体组成。在该构象中，每个可变区的三个高变区相互作用限定VH-VL二聚体表面上的抗原结合位点。共同地，6个高变区赋予抗体抗原结合的特异性。当然，即使单个可变区(或仅包含三个抗原特异性的高变区的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，只不过其亲和力低于完整结合位点。
“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。优选地，Fv多肽在VH和VL结构域之间进一步包含肽接头，该接头使scFv形成抗原结合所需的构象。关于scFv的综述，参见Plückthun在The Pharmacology of MonoclonalAntibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编,Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994)。在WO93/16185、美国专利号5,571,894及美国专利号5,587,458中有关于抗ErbB2抗体scFv片段的描述。
术语“双链抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，该片段包含与同一多肽链(VH-VL)中轻链可变区(VL)相连的重链可变区(VH)。通过使用过短的以至在同一条多肽链上的两个结构域之间不能形成配对的接头，这些结构域被迫与另一条链上的互补区配对并形成两个抗原结合位点。关于双链抗体的更详细描述见如EP 404,097；WO 93/11161及Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)。
“单域抗体”与“dAb”同义，是指其中抗原结合由单个可变区结构域决定的免疫球蛋白可变区多肽。本文中使用的“单域抗体”包括：i)包含独立于其它任何可变区形成抗原结合位点的重链可变区(VH)或其抗原结合片段的抗体；ii)包含独立于其它任何可变区形成抗原结合位点的轻链可变区(VL)或其抗原结合片段的抗体；iii)包含与另一VH或VL结构域多肽连接的VH结构域多肽的抗体(例如，VH-VH或VHx-VL)，其中各V结构域独立于其它任何可变区形成抗原结合位点；以及iv)包含与另一VL结构域多肽连接的VL结构域多肽的抗体(VL-VL)，其中各V结构域独立于其它任何可变区形成抗原结合位点。这里使用的VL结构域指κ和λ类型的轻链。
“人源化”形式的非人抗体(如啮齿类)指含有最少的来自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。人源化抗体是人免疫球蛋白，其中高变区用来自其它具有所需的特异性、亲和性或结合量的非人类(如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物)的高变区的残基替换。某些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基由对应的非人类的残基替换。此外，人源化抗体可包含在人抗体或非人抗体中没有的残基。进行这些修饰以进一步优化抗体的性能。一般来说，人源化抗体将基本上包含至少一个且通常两个可变区的全部，其中其高变环的全部或基本全部对应于非人源免疫球蛋白部分且其FR的全部或基本全部是人源免疫球蛋白序列部分。人源化抗体也任选地包含至少一部分的免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常为人免疫球蛋白的恒定区。人源化技术的例子参见Queen等，美国专利号5,585,089、5,693,761、5,693,762和6,180,370，这些专利被引入本文作为参考。
抗体生成
本发明的抗体可通过本领域已知的任何适当方法生成。本发明的抗体可包含多克隆抗体。制备多克隆抗体的方法是本领域技术人员已知的(Harlow等,Antibodies:aLaboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第二版(1988)，该内容完整引入本文作为参考)。
例如，可通过将包含目标抗原的免疫原施用于各种宿主动物以诱导产生含有对该抗原具有特异性的多克隆抗体的血清来产生抗体，宿主动物包括但不限于兔、小鼠、大鼠等。免疫原的施用可需要一次或多次免疫制剂的注射，以及如有需要，使用佐剂。根据宿主物种，不同的免疫佐剂可用于提高免疫应答，这些佐剂包括但不限于：弗氏(完全或不完全)佐剂、矿物凝胶如氢氧化铝、表面活性物质如溶血卵磷脂、聚醚多元醇、聚阴离子、肽、乳化油、钥孔戚血蓝蛋白、二硝基苯酚以及潜在有用的人佐剂例如BCG(卡介苗)和短小棒状杆菌。其它可用的佐剂的例子包括MPL-TDM佐剂(单磷酰脂A，合成海藻糖二霉酸(dicorynomycolate))。免疫方案已为本领域技术人员所熟知，且可用任何可诱发免疫应答的方法在选择的动物宿主中进行。佐剂也是本领域熟知的。
一般来说，免疫原(伴有或不伴有佐剂)是通过多次皮下或腹腔内注射、或肌内或静脉内注射来注射进哺乳动物的。免疫原可包含抗原性多肽、其融合蛋白或变体。根据多肽的性质(即疏水性百分比、亲水性百分比、稳定性、净电荷、等电点等)，将免疫原与已知在被免疫哺乳动物中具有免疫原性的蛋白偶联可能是有用的。这些偶联包括化学偶联，其通过在免疫原和待偶联的免疫原性蛋白上衍生出活性化学功能基团从而在其间形成共价键，也包括基于融合蛋白的方法或其它技术人员已知的方法。这些免疫原性蛋白的例子包括但不限于钥孔戚血蓝蛋白、卵清蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白、大豆胰蛋白酶抑制剂及混合型T辅助肽。也可如前所述利用各种佐剂来增强免疫应答。
可用于本发明的抗体包括单克隆抗体。单克隆抗体可用杂交瘤技术来制备，例如下述文献所述技术：Kohler和Milstein,Nautre,256:495(1975)和Harlow等的美国专利号4,376,110；Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor LaboratoryPress,2.sup.nd ed.(1988),Hammerling等，Monoclonal Antibodies and T-CellHybridomas(Elsevier,N.Y.,(1981))，或本领域技术人员已知的其它方法。可用于制备单克隆抗体的方法的其它例子包括但不限于人B细胞杂交瘤技术(Kosbor等,1983,Immunology Today 4:72；Cole等,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80:2026-2030)和EBV杂交瘤技术(Cole等,1985,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.,第77-96页)。这些抗体可以属于免疫球蛋白的任何类型，包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD及其任何亚类。制备本发明的单克隆抗体的杂交瘤可在体外或体内进行培养。
使用常见的杂交瘤技术，通常用免疫原免疫宿主动物来激发产生或能够产生特异性结合目标抗原的抗体的淋巴细胞，宿主动物例如小鼠、人源化小鼠、具有人免疫系统的小鼠、仓鼠、兔、骆驼或其它任何合适的宿主动物。或者，也可在体外用抗原对淋巴细胞进行免疫。
通常，在制备生成抗体的杂交瘤时，如需人源细胞时，使用外周血淋巴细胞(“PBL”)；如需非人类哺乳动物细胞时，使用脾细胞或淋巴结细胞。随后使用合适的融合试剂如聚乙二醇将淋巴细胞与永生化细胞系融合以形成杂交瘤细胞(Goding MonoclonalAntibodies:Principles and Practice,Academic Press,(1986),第59-103页)。永生化细胞系通常是经转化的哺乳动物细胞，特别是啮齿类、牛或人源的骨髓瘤细胞。一般采用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可培养在合适的培养基中，其中优选含有一种或多种可抑制未融合的永生细胞生长或存活的物质。例如，如果亲代细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，杂交瘤培养基则通常含有次黄嘌呤、氨甲喋呤和胸腺嘧啶(“HAT培养基”)，可抑制HGPRT缺陷细胞的生长的物质。
优选的永生化细胞系是能高效融合、可支持选定的抗体生成细胞对抗体的稳定高水平表达、并对培养基例如HAT培养基敏感的细胞系。更优选的永生化细胞系是小鼠骨髓瘤细胞系，其可从诸如Salk Institute Cell Distribution Center,San Diego,Calif.和American Type Culture Collection,Manassas,Va获取。人骨髓瘤和小鼠-人种间骨髓瘤细胞系也可以用于制备人单克隆抗体(Kozbor,J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,Marcel Dekker公司,New York,(1987)第51-63页)。
随后可在其中进行杂交瘤细胞培养的培养基中检测免疫原的单克隆抗体的存在。由杂交瘤细胞生成的单克隆抗体的结合特异性可以采用例如免疫沉淀或体外结合试验如放射免疫分析(RIA)或酶联免疫吸收分析(ELISA)等进行测定。这些技术是本领域及技术人员已知的。单克隆抗体的结合亲和性可通过例如Scatchard分析进行测定(Munson等,Anal.Biochem.,107:220(1980))。
所需的杂交瘤克隆经确定后，可采用有限稀释法进行亚克隆，并采用标准方法进行培养(Goding,同上)。用于该目的的合适的培养基包括例如Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基和RPMI-1640。由亚克隆分泌的单克隆抗体可用常规的免疫球蛋白纯化方法从培养基中分离或纯化，这些方法例如蛋白A-琼脂糖凝胶、羟基磷灰石色谱、凝胶排阻层析、凝胶电泳、透析或亲和层析等。
本领域存在各种制备单克隆抗体的方法，因此本发明并不限于仅从杂交瘤进行制备。例如，单克隆抗体可通过如美国专利号4,816,567中所述的重组DNA的方法制备。在此情况下，术语“单克隆抗体”是指其来自单个真核、噬菌体或原核克隆的抗体。编码本发明的单克隆抗体的DNA可以利用常规技术很方便地进行分离并测序(例如通过使用能够与鼠抗体的重链和轻链、或来自人、人源化的或其它来源的这样的链的编码基因特异性结合的寡核苷酸探针)。本发明的杂交瘤细胞可作为此种DNA的优选来源。一旦经过分离，DNA被置入表达载体中，然后该载体被转化到诸如NS0细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的宿主细胞或其它情况下不产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞中以在重组宿主细胞中实现单克隆抗体的合成。抗体编码DNA也可进行修饰，如利用人抗体的重链和轻链恒定区的编码序列替换对应的小鼠同源序列(美国专利号4,816,567；Morrison等，同上)或将其非免疫球蛋白肽的编码序列的全部或一部分与免疫球蛋白编码序列共价连接。可用此非免疫球蛋白多肽替换本发明抗体的恒定区；或可用其替换本发明的抗体的一抗原结合位点的可变区来产生嵌合二价抗体。
抗体可以是单价抗体。制备单价抗体的方法是本领域已知的。例如，一方法涉及免疫球蛋白轻链和经修饰的重链的重组表达。通常在Fc区内的任何位点将重链截断由此防止重链交联。或者，将相关的半胱氨酸残基用其它残基替换或将其删除以防止交联。
可以使用已知方法产生可识别特定表位的抗体片段。比如，可以用诸如木瓜蛋白酶(以制备Fab片段)或胃蛋白酶(以制备F(ab’)2片段)的酶对免疫球蛋白分子进行蛋白酶切来制备本发明的Fab和F(ab’)2片段。F(ab’)2片段含有可变区、轻链恒定区及重链CH1区。
对于一些应用，包括抗体在人体内的体内应用或体外检测分析，优选使用嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。嵌合抗体是其中抗体的不同部分源于不同物种的分子，例如，具有源于小鼠单克隆抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区的抗体。制备嵌合抗体的方法是本领域已知的。见如Morrison,Science 229:1202(1985)；Oi等,BioTechniques 4:214(1986)；Gillies等,(1989)J.Immunol.Methods 125:191-202；美国专利号5,807,715、4,816,567、4,816,397，以上所列文献均引入本文作为参考。
人源化抗体是与所需抗原结合的在非人物种中产生的抗体分子，其具有非人物种的一或多个互补决定区(CDR)和人类免疫球蛋白分子的框架(FR)区。经常地，人框架区中的框架残基会被来自CDR供体抗体的相应残基所替换以改变(优选地改善)抗原结合。这些框架取代可通过本领域熟知的方法来确定，如通过对CDR和框架残基的相互作用建模来确定对抗原结合有重要作用的框架残基以及通过序列比对来发现特定位置上的特殊框架残基(Queen等,美国专利号5,585,089；Riechmann等,Nature 332:323(1988)，两者均完整引入本文作为参考)。可用本领域多种已知技术将抗体人源化，如CDR移植(EP 239,400；PCT公布号WO 91/09967；美国专利号5,225,539；5,530,101和5,585,089)、贴面(veneering)或表面置换(resurfacing)(EP 592,106；EP 519,596；Padlan,Molecular Immunology 28(4/5):489-498(1991)；Studnicka等,Protein Engeering 7(6):805-814(1994)；Roguska等,PNAS91:969-973(1994))和链重排(美国专利号5,565,332)。
人源化抗体通常会具有引入其中的一个或多个非人源的氨基酸残基，这些非人的氨基酸残基通常被称为“输入”残基，其通常来自“输入”可变区。人源化可基本上按Winter及其同事的方法通过用啮齿类动物的CDR或CDR序列替换人抗体的相应序列来进行(Jones等,Nature,321:522-525(1986)；Reichmann等,Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyen等,Science,239:1534-1536(1988))。因此，这样的“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中基本上小于完整人可变区的部分已为来自非人物种的相应序列所替换。实践中，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能的一些FR残基被相应的啮齿类抗体位点所替换。
完全的人抗体对治疗人类患者是最理想的。人类抗体可通过多种本领域已知方法制备，包括前面提到的利用人免疫球蛋白序列抗体文库的噬菌体展示方法。也见美国专利号4,444,887和4,716,111；和PCT公布号WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741，所列文献内容均完整引入本文作为参考。Cole等和Boerder等的技术也可用于制备人单克隆抗体(Cole等,MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy,Alan R.Riss,(1985)；和Boerner等,J.Immunol.,147(1):86-95,(1991))。
人抗体也可以是具有VH或VL区的单域抗体，其VH或VL独立于其它任何可变区发挥功能。这些抗体通常从噬菌体表达的抗体文库中选择。这些抗体及分离这些抗体的方法在美国专利号6,595,142、6,248,516和申请US20040110941及US20030130496中均有描述，所有内容均被引入本文作为参考。
人抗体也可通过转基因小鼠制备，该小鼠不能表达功能性的内源免疫球蛋白，但可表达人免疫球蛋白基因。例如，可通过随机引入或同源重组将人免疫球蛋白重链和轻链基因复合物引入小鼠胚胎干细胞。或者，除人轻链和重链基因之外，还将人的可变区、恒定区和多样化区引入小鼠胚胎干细胞中。通过同源重组引入人类免疫球蛋白基因座(loci)可分别地或同时地使小鼠免疫球蛋白轻链和重链基因无功能化。具体来说，JH区纯合缺失可阻止内源抗体的生成。修饰过的胚胎干细胞经扩增并显微注射入囊胚可产生嵌合小鼠。嵌合小鼠交配后产生表达人抗体的纯合后代。转基因小鼠可采用常规方法用选择的抗原如本发明的肽的全部或部分进行免疫。采用常规杂交瘤技术可从经免疫的转基因小鼠获得针对抗原的单克隆抗体。在B细胞分化过程中，转基因小鼠中的人免疫球蛋白转基因可重排并发生类型转换和体细胞突变。因此，利用这种技术可以制备有治疗价值的IgG、IgA、IgM、IgE抗体。关于这种制备人抗体的技术的具体讨论可参见Lonberg和Huszar,Int.Rev.Immunol.13:65-93(1995)。关于这种制备人抗体和人单克隆抗体的技术以及制备此类抗体的规程的详细讨论，参见PCT公布号WO 98/24893、WO 92/01047、WO 96/34096、WO96/33735；欧洲专利号0 598 877；美国专利号5,413,923；5,625,126、5,633,425、5,569,825、5,661,016、5,545,806、5,814,318、5,885,793、5,916,771和5,939,598，上述文献均被完整引入本文作为参考。此外，诸如Abgenix公司(Freemont,Calif.)、Genpharm(San Jose,Calif.)、Medarex公司(Princeton,N.J.)的公司也致力于使用与前面所述技术类似的技术提供针对选定抗原的人抗体。
也可通过对移植了人外周血白细胞、脾细胞或骨髓的小鼠进行免疫来制备人MAb(例如XTL的Trioma技术)。也可利用被称为“定向选择”的技术来产生识别特定表位的完全人抗体。在这种方法中，使用选定的非人类单克隆(例如小鼠抗体)抗体对识别同一表位的完全人抗体进行定向选择(Jespers等,Bio/technology 12:899-903(1988))。
此外，利用本领域技术人员熟知的技术，本发明的多肽的抗体可用来产生“模拟”本发明多肽的抗独特型抗体(见如Greenspan和Bona,FASEB J.7(5):437-444；(1989)和Nissinoff,J.Immunol.147(8):2429-2438(1991))。例如，可与本发明的多肽结合并竞争性抑制多肽多聚化和/或本发明的多肽与配体的结合的抗体可被用来生成“模拟”多肽多聚化和/或结合结构域且因此结合并中和多肽和/或其配体的抗独特型抗体。这些中和的抗独特型抗体或这些抗独特型抗体的Fab片段可以用于治疗方案以中和多肽配体。例如，这些抗独特型抗体可被用于与本发明的多肽结合和/或结合其配体/受体并由此阻断其生物学活性。
本发明的抗体可以是双特异性抗体。双特异性抗体是可与至少两个不同抗原特异性结合的单克隆抗体，优选人或人源化抗体。在本发明中，一种结合特异性可以针对D因子，而另外一种则可以针对任何其它抗原，且优选针对细胞表面蛋白、受体、受体亚基、组织特异性抗原、病毒蛋白、病毒编码的包膜蛋白、细菌蛋白或细菌表面蛋白等。双特异性抗体也可包含两个或多个单域抗体。
制备双特异性抗体的方法是熟知的。传统地，双特异抗体的重组制备是基于两对免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中两个重链具有不同的特异性(Milstein和Cuello,Nature,305:537-539(1983)。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分类，这些杂交瘤(四源交瘤)可产生十种不同的抗体分子的可能的混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常采用亲和层析的方法来纯化正确的抗体分子。WO 93/09929(1993年5月13日公布)和Traunecker等,EMBO J.,10:3655-3659(1991)中披露了类似方法。
可将具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变区与免疫球蛋白恒定区序列融合。优选地与至少包含部分铰链区、CH2和CH3区的免疫球蛋白重链恒定区融合。在至少一个融合重组体中可具有包含了结合轻链所需位点的第一重链恒定区(CH1)。将编码免疫球蛋白重链融合体以及免疫球蛋白轻链(如有必要的话)的DNA分别插入不同的表达载体中，共转染到合适的宿主生物体中。关于产生双特异性抗体的进一步的详细描述可参见如Suresh等,Meth In Bnzym.,121:210(1986)。
本发明也包括异源偶联抗体。异源偶联抗体由两个共价连接的抗体组成。有人提出利用这种抗体将免疫系统细胞靶向欲清除的细胞(美国专利号4,676,980)。利用已知的蛋白合成化学方法包括使用交联剂的方法体外制备抗体也被本发明涵盖。例如，通过二硫键交换反应或形成硫酯键来构建免疫毒素。用于此目的的合适的试剂的例子包括亚氨基硫酯、4-甲基巯基亚氨丁酯及在美国专利号4,676,980中所披露的试剂。此外，也可以产生IL-13的单域抗体。WO9425591中关于骆驼重链Ig衍生抗体的描述及US20030130496中关于从噬菌体库中分离单域完全人抗体的描述提供了这种技术的例子。
制备单克隆抗体(MAB)
在本发明的一个实施方案中，通过使用纯化自人血清或尿液的天然D因子、或由原核或真核系统表达的重组D因子或其片段免疫啮齿类动物(如小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠)来产生单克隆抗体，例如抗D因子。也可以使用其它动物进行免疫，如非人灵长类、表达人免疫球蛋白的转基因小鼠或移植人B淋巴细胞的严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠。可利用G.Kohler和C.Milstein(Nature,1975,256:495-497)所描述的常规方法将来自免疫动物的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞(如Sp2/0和NS0)融合来产生杂交瘤。
此外，可通过在噬菌体展示系统中筛选来自人B淋巴细胞的重组单链Fv或Fab文库来产生单克隆抗体。MAb对给定抗原的特异性可通过酶联免疫吸收分析(ELISA)、Western免疫印迹或其它免疫化学技术来检测。抗体对补体活化的抑制活性可通过溶血分析来评估，对于旁路途径使用未敏化的兔或豚鼠红血球(RBC)，对于经典途径使用敏化的鸡或绵羊RBC。阳性孔中的杂交瘤可通过有限稀释法进行克隆。将抗体纯化以使用本领域已知的试验对其抗原(如D因子)特异性进行表征。
也可以产生重链和轻链Fv区相连的单肽链抗原结合分子。美国专利号4,946,778描述了单链抗体(ScFv)及其构建方法。或者，可使用类似的方法构建和表达Fab(M.J.Evans等,J.Immunol.Meth.,1995,184:123-138)。所有的完全人抗体或部分人抗体都比完全小鼠MAb的免疫原性弱，抗体片段和单链抗体的免疫原性也更弱。因此，所有这些类型的抗体引发免疫反应或过敏反应的可能性更小。因此，这类抗体比完全动物抗体更适合人的体内施用，特别是需要重复使用或长期使用时。另外，抗体片段的更小的尺寸有助于提高生物利用率，这对于治疗急性疾病适应症时更好的剂量累积可能非常关键。
在本发明的优选实施方案中，治疗性使用嵌合Fab，该Fab具有动物(小鼠)可变区和人恒定区。优选Fab因为它比完整免疫球蛋白更小，有更好的组织通透性；而且，作为单价分子，Fab更不易产生免疫复合物和聚集物；另外，Fab可以用微生物系统制备，比哺乳动物系统更容易扩大规模。
补体途径抑制剂的应用
诸如抗体和其结合片段的补体抑制剂可以通过多种途径以适当的药物制剂形式对个体进行给药，给药途径包括但不限于静脉输液、静脉弹丸注射(bolus injection)、腹膜内、皮内、肌肉内、皮下、鼻内、气管内、椎管内、颅内和口腔途径。这些给药均使得抑制剂能够与内源抗原如D因子结合及抑制C3b、C3a、C5a过敏毒素以及c5b-9的生成。
这些抗体和分子估计的优先剂量估计为10-500μg/ml血清。实际剂量可在临床试验中按照确定最优剂量的常规方法加以确定，即多种剂量给药并测定何种剂量最有效。
补体途径抑制剂可抑制体内补体活化和/或补体旁路途径及伴随的炎症症状，比如巨噬细胞、嗜中性粒细胞、血小板和肥大细胞的募集和活化、水肿及组织损伤。这类抑制剂可以用来治疗由补体系统过度活化或失控活化介导的疾病或病症。
本发明的抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性或更多特异性抗体。多特异性抗体可以对选定抗原的不同表位具有特异性或同时对抗原和异源表位如异源多肽或固相支持材料具有特异性。见例如PCT公布WO 93/17715、WO/9208802、WO 91/00360、WO 92/05793；Tutt等,J.Immunol.147:60-69(1991)；美国专利号4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920、5,601,819；Kostelny等,J.Immunol.148:1547-1553(1992)。
适用于本发明的抗体可就其识别或特异结合的补体途径成员如D因子的表位或片段而言来进行描述或定义。如本文所述，表位或多肽部分可用诸如N-末端位置、C末端位置或相邻氨基酸残基数目等方法加以指明。
适用于本发明的抗体也可就其交叉反应性而言来进行描述或指明。本发明也包括与和IL-13有至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少65％、至少60％、至少55％或至少50％同一性(通过本领域的已知方法或本文中描述的方法计算)的补体途径成员多肽结合的抗体。抗D因子抗体也可以小于约10-7M、小于约10-6M或小于约10- 5M的KD与其它蛋白结合，比如，来自与其靶向的物种不同物种的D因子抗体。
载体和宿主细胞
另一方面，本发明提供了含有本发明的抗体的编码核苷酸序列的载体构建物和包含此载体的宿主细胞。可以使用标准克隆和转化技术来制备可表达本发明抗体的细胞系。
可通过已知技术来制备包含本发明抗体的编码核苷酸序列的重组表达载体。表达载体包括与合适的转录或翻译调控核苷酸序列可操作连接的核苷酸序列，转录或翻译调控核苷酸序列可来自哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因。调控序列的例子包括转录启动子、操作子、增强子、mRNA核糖体结合位点和/或其它可控制转录和翻译起始及终止的合适序列。当调控序列与合适多肽的核苷酸序列发生功能性连接时，核苷酸序列为“可操作连接”。因此，如果启动子核苷酸序列可控制合适核苷酸序列的转录，启动子核苷酸序列与例如抗体重链序列可操作连接。
此外，与抗体重链和/或轻链序列天然不相关的合适信号肽的编码序列也可结合入表达载体。例如，信号肽(分泌前导肽)的核苷酸序列可与多肽序列以阅读框相容方式(in-frame)融合以使抗体可分泌到周质空间或培养基中。在目标宿主细胞中有功能的信号肽可有利于合适抗体的胞外分泌。信号肽可在抗体分泌后从多肽上切除。这些分泌信号的例子是已知的且包括例如US5698435、US5698417和US6204023中所描述的。
可用于本发明的宿主细胞包括但不限于微生物如由包含抗体编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌(如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌)；由包含抗体编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如酵母、毕赤酵母)；由包含抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如杆状病毒)转染的昆虫细胞；由包含抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如花椰菜花叶病毒CaMV；烟草花叶病毒TMV)转染或重组质粒表达载体(如Ti质粒)转化的植物细胞系统；或具有包含来自哺乳动物基因组(例如金属硫蛋白启动子)或哺乳动物病毒(例如腺病毒晚期启动子；痘病毒7.5K启动子)的启动子的重组表达构建体的哺乳动物细胞系统(例如COS、CHO、BHK、293、3T3细胞)。
载体可以是质粒载体、单链或双链噬菌体载体或单链或双链RNA或DNA病毒载体。这些载体可通过向细胞内导入DNA或RNA的已知技术作为多核苷酸引入细胞内。对于噬菌体和病毒载体，也可通过熟知的转染和转导技术作为包装病毒被引入细胞。病毒载体可以是可复制型或复制缺陷型。对于后者来说，病毒扩增通常只能在辅助宿主细胞中进行。也可利用获自本发明的DNA构建体的RNA通过无细胞翻译系统来制备蛋白质。这些载体可包含抗体分子的恒定区的编码核苷酸序列(参见例如PCT公布WO 86/05807；PCT公布WO 89/01036；和美国专利号5,122,464)，并且可将抗体可变区克隆到这种载体中以表达完整的重链或轻链。
可用作本发明的宿主细胞的原核细胞包括革兰氏阴性或阳性菌，如大肠杆菌和枯草柑橘。用于原核宿主细胞的表达载体通常包含一个或多个表型选择标记基因。表型选择标记基因是例如编码蛋白质的基因，该蛋白质可赋予抗生素抗性或满足营养缺陷型的需求。可用于原核宿主细胞的表达载体的例子包括衍生自商业可购得质粒如pKK223-3(Pharmacia Fine Chemicals,Uppsala,瑞典)、pGEM1(Promega Biotec,Madison,Wisconsin.,美国)、pET(Novagen,Madison,Wisconsin,美国)和pRSET(Invitrogen公司,Carlsbad,California,美国)系列载体的表达载体。通常用于重组原核宿主细胞表达载体的启动子序列包括T7(Rosenberg等,Gene 56,125-135(1987))、β-内酰胺酶(青霉素酶)、乳糖启动子系统(Chang等,Nature 275:615,(1978)；和Goeddel等,Nature 281:544,(1979))、色氨酸(trp)启动子系统(Goeddel等,Nucl.Acids Res.8:4057,(1980))、和tac启动子(Sambrook等,1990,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,第2版,Cold SpringHarbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.)。
可用于本发明的酵母包括来自酵母属、毕赤酵母属、放线菌属和克鲁维酵母属的酵母。酵母载体通常包含来自2μ酵母质粒的复制起始序列、自主复制序列(ARS)、启动子区、多聚腺苷化序列、转录终止序列和选择标记基因。适用于酵母载体的启动子序列包括金属硫蛋白启动子、3-磷酸甘油酸激酶(Hitzeman等,J.Biol.Chem.255:2073,(1980))或其它糖酵解酶(Holland等,Biochem.17:4900,(1978))如烯醇化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸葡萄糖异构酶和葡萄糖激酶等的启动子。其它适用于酵母表达系统的载体和启动子在Fleer等,Gene,107:285-195(1991)中有进一步的描述。其它适用于酵母的启动子和载体及酵母转化方案是本领域已知的。酵母转化方案是已知的。一个这样的方案由例如，Hinnen等,Proc.Natl.Acad.Sci.,75:1929(1978)描述。Hinnen方案在选择性培养基中选出Trp+转化物。
也可利用哺乳动物或昆虫宿主细胞培养系统来表达重组抗体，如利用杆状病毒系统制备异源蛋白。在昆虫系统中，苜蓿尺蠖核多角体病毒(AcNPV)被作为载体来表达外源基因。这种病毒在草地贪夜蛾细胞中生长。抗体编码序列可被单独克隆到病毒的非必需区(如多角体基因)并置于AcNPV启动子(如多角体基因启动子)控制之下。
可以将NS0或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞用于在哺乳动物系统中表达本发明的抗体。哺乳动物宿主细胞表达载体的转录和翻译控制序列可从病毒基因组切取。常用的启动子序列和增强子序列常衍生自多瘤病毒、腺病毒2、猿病毒40(SV20)和人巨细胞病毒(CMV)。来自SV40病毒基因组的DNA序列可被用于提供在哺乳动物宿主细胞中表达结构基因序列所需的其它遗传元件，如SV40复制原点、早期和晚期启动子、增强子、剪切位点和多聚腺苷化位点。由于可以很容易从病毒基因组中以包括病毒复制原点的序列片段的形式获得，病毒早期和晚期启动子非常有用。哺乳动物宿主细胞中使用的代表性表达载体都可通过商业渠道获得。
编码抗体的多核苷酸
本发明进一步提供了包含编码本发明的抗体或其片段的核苷酸序列的多核苷酸或核酸，如DNA。典型的多核苷酸包括编码包含了一个或多个本文所述的氨基酸序列的抗体链的多核苷酸。本发明也包括可在严格或严格性略低的杂交条件下与编码本发明抗体的多核苷酸杂交的多核苷酸。
可通过本领域已知的任何方法来获得多核苷酸并确定该多核苷酸的核苷酸序列。例如，如果抗体的核苷酸序列已知，就可通过化学合成的寡核苷酸来拼接编码抗体的多核苷酸(如Kutmeier等,BioTechniques 17:242(1994)中所述)，简单来说，这个过程包括合成交迭的寡核苷酸，其包含抗体的部分编码序列；退火和连接这些寡核苷酸；以及随后通过PCR将连接的寡核苷酸扩增。
或者，编码抗体的多核苷酸也可以从合适来源的核酸产生。如果无法获得含编码特定抗体的核酸序列的克隆，而此抗体分子的序列已知，则编码此免疫球蛋白的核酸可通过化学合成方法获得，或者从合适的核酸源(如抗体cDNA文库、或从表达该抗体的任何组织或细胞(如选出的表达本发明抗体的杂交瘤细胞)产生的cDNA文库、或分离出的核酸、优选poly A+RNA)通过使用可与此序列3’和5’端杂交的合成引物通过PCR扩增获得，或通过利用对特定基因序列具有特异性的寡核苷酸探针从例如cDNA文库中识别编码此抗体的cDNA克隆通过克隆获得。随后可使用本领域已知的任何方法将由PCR产生的扩增的核酸克隆到可复制克隆载体中。
一旦确定了抗体的核苷酸序列和相应的氨基酸序列，就可以利用本领域已知的处理核苷酸序列的方法处理抗体的核苷酸序列，例如重组DNA技术、定点突变技术、PCR等(参见例如Sambrook等,1990,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,第2版,Cold SpringHarbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.和Ausubel等编,1998,Current Protocolsin Molecular Biology,John Wiley&Sons,NY中所述技术，这些文献被完整引入本文作为参考)以生成具有不同氨基酸序列的抗体，例如产生氨基酸替代、缺失和/或插入。
在具体的实施方案中，可研究重链和/或轻链可变区的氨基酸序列以通过熟知方法识别CDR的序列，例如通过与其它重链和轻链可变区的已知氨基酸序列进行比较来确定具有序列高度可变性的区域。如上所述，通过常规DNA重组技术，将一个或多个CDR插入到框架区内，例如插入人的框架区内以将非人抗体人源化。框架区可以是天然存在的或一致的框架区，优选人的框架区(关于人框架区的列表参见Chothia等,J.Mol.Bio.278:457-479(1998))。优选地，通过组合框架区和CDR区产生的多核苷酸编码与本发明的多肽特异性结合的抗体。优选地，如以上所讨论的，可在框架区内引入一个或多个氨基酸替代，且优选地，此氨基酸替代改善抗体与其抗原的结合。此外，这样的方法也可以用于对参与链内二硫键形成的一个或多个可变区半胱氨酸残基的进行氨基酸替换或删除，以生成缺少一个或多个链内二硫键的抗体分子。对多核苷酸的其它改变也包含在本发明中且是本领域技术人员已知的。
另外，也可以使用通过拼接具有适当抗原特异性的小鼠抗体分子的基因和具有适当生物学活性的人抗体分子的基因制备“嵌合抗体”(Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.81:851-855(1984)；Neuberger等,Nature 312:604-608(1984)；Takeda等,Nature 314:452-454(1985))的技术。如前所述，嵌合抗体是其不同组成部分来自不同动物物种的分子，例如，具有来自小鼠MAb的可变区和人免疫球蛋白恒定区的抗体，例如人源化抗体。
或者，可调整单链抗体制备技术(美国专利号4,946,778；Bird,Science 242:423-42(1988)；Huston等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988)；Ward等,Nature334:544-54(1989))来制备单链抗体。通过氨基酸桥连接Fv区的轻链和重链片段生成单个多肽形成单链抗体。也可使用在大肠杆菌中组装功能性Fv片段的技术(Skerra等,Science242:1038-1041(1988))。
制备抗体的方法
本发明的抗体可通过本领域已知的任何合成抗体的方法来制备，特别是通过化学合成，或优选地通过重组表达技术制备。
本发明的抗体、或其片段、衍生物或类似物(如本发明抗体的重链或轻链，或本发明的单链抗体)的重组表达需要构建包含编码抗体或抗体片段的多核苷酸的表达载体。一旦获得了编码抗体分子的多核苷酸，可通过重组DNA技术制备生成抗体的载体。构建包含抗体编码序列和适当的转录和翻译控制信号的表达载体。这些方法包括例如体外重组DNA技术、合成技术及体内遗传重组等。
通过常规技术将表达载体转入宿主细胞，转染细胞通过常规培养来制备本发明的抗体。在本发明的一个方面，编码重链和轻链的载体可在宿主细胞中共表达来表达完整的免疫球蛋白分子，详细描述见下文。
各种宿主-表达载体系统都可以用于表达如上所述的本发明的抗体分子。这些宿主细胞-表达载体系统代表了运载体(vehicle)，通过该运载体可制备并随后纯化目标编码序列，该系统也代表了当用适当核苷酸编码序列转化或转染时原位表达本发明抗体分子的细胞。通常将细菌细胞如大肠杆菌和真核细胞用于表达重组抗体分子，特别是表达完整重组抗体分子。例如，哺乳动物细胞如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)和载体例如来自人巨细胞病毒的主要中早期基因启动子元件的组合是有效的抗体表达系统(Foecking等,Gene 45:101(1986)；Cockett等,Bio/Technology 8:2(1990))。
此外，可以选择调节插入序列的表达或以某种所需的特定方式修饰和加工基因产物的宿主细胞株。对蛋白产物的这些修饰(如糖基化)和加工(如裂解)可能对蛋白功能来说是重要的。不同的宿主细胞具有特征性的和特异的对蛋白和基因产物的翻译后加工和修饰的机制。可选择合适的细胞系或宿主系统以保证可获得对表达的外源蛋白正确的修饰和加工。为此目的，可以使用具有能对初始转录产物进行适当加工以及对基因产物进行糖基化和磷酸化的细胞器的真核宿主细胞。这样的哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO、COS、293、3T3或骨髓瘤细胞。
为了重组蛋白的长期和高水平的表达，稳定表达是优选的。例如，可工程化稳定表达抗体分子的细胞系。不使用包含病毒复制原点的表达载体，而是可用由适当表达控制元件(如启动子、增强子、序列、转录终止位点、多聚腺苷化位点等)控制的DNA和选择标记转化宿主细胞。在引入外源DNA后，工程细胞在富集培养基中培养1-2天后转入选择性培养基。重组质粒中的选择标记使细胞对选择具有抗性，并使细胞将质粒稳定地整合到其染色体中且生长形成灶(foci)，该灶经克隆扩增后产生细胞系。这个方法可有利地用于工程化表达抗体分子的细胞系。这种工程细胞系在筛选和评价与抗体分子直接或间接相互作用的复合物时特别有用。
可使用多种选择系统，包括但不限于单疱病毒胸腺嘧啶激酶(Wigler等,Cell 11:223(1977))、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Szybalska和Szybalski,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48:202(1992))和腺嘌呤磷酸核糖转移酶(Lowy等,Cell 22:817(1980))，这些基因可分别用于tk、hgprt和aprt细胞。此外，抗代谢物抗性可被用作选择以下基因的基础：产生氨甲喋呤抗性的dhfr(Wigler等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:357(1980)；O’Hare等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:1527(1981))、产生霉酚酸抗性的gpt(Mulligan和Berg,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:2027(1981))、产生氨基糖苷G-418抗性的neo(Wu和Wu,Biotherapy 3:87-95(1991))、产生潮霉素抗性的hgro(Santerre等,Gene 30:147(1984))。重组DNA技术领域的常见方法都可常规应用于目标重组克隆的筛选，这些方法在例如下列文献中都有描述：Ausubel等(编),Current Protocols in MolecularBiology,John Wiley&Sons,NY(1993)；Kriegler,Gene Transfer and Expression,ALaboratory Manual,Stockton Press,NY(1990)；以及Chapters 12 and 13,Dracopoli等(编),Current Protocols in Human Genetics,John Wiley&Sons,NY(1994),第12和13章；Colberre-Garapin等,J.Mol.Biol.150:1(1981)，这些文献被完整引入本文作为参考。
通过载体扩增可提高抗体分子的表达水平(综述见Bebbington和Hentschel,“Theuse of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genesin mammalian cells”(DNA Cloning,第3卷,Academic Press,New York,1987))。如果标记在表达抗体的载体系统中是可扩增的，提高宿主细胞培养物中存在的抑制剂的水平就可增加标记基因的拷贝数。由于被扩增的区域与抗体基因相关联，抗体的生成也会提高(Crouse等,Mol.Cell.Biol.3:257(1983))。
可以用本发明的两个表达载体共转染宿主细胞，其中第一载体编码重链衍生多肽，第二载体编码轻链衍生多肽。这两个载体可包含相同的选择标记，其使得重链和轻链多肽能够平等地表达。或者，可以使用编码且能够表达重链和轻链多肽的单个载体。在此种情况下，应该将轻链置于重链之前以避免产生过量的毒性游离重链(Proudfoot,Nature 322:52(1986)；Kohler,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:2197(1980))。重链和轻链的编码序列可包含cDNA或基因组DNA。
一旦通过动物、化学合成或重组表达制备本发明的抗体分子后,可以通过本领域已知的任何用于免疫球蛋白分子纯化的方法纯化该抗体分子，比如通过色谱法(如离子交换、亲和层析，特别是对蛋白A后的特异抗原的亲和层析、以及排阻层析)、离心、差异溶解度或其它蛋白纯化的标准技术。另外，本发明的抗体或其片段也可与本文中所述的或本领域已知的异源多肽序列融合以方便纯化。
本发明包括与多肽重组融合或化学偶联(包括共价或非共价偶联)的抗体。本发明的融合或偶联的抗体抗体可用于方便纯化。见例如Harbor等,同上和PCT公布WO 93/21232；EP 439,095；Naramura等,Immunol.Lett.39:91-99(1994)；美国专利号5,474,981；Gillies等,Proc.Natl.Acad.Sci.89:1428-1432(1992)；Fell等,J.Immunol.146:2446-2452(1991)，这些文献完整引入本文作为参考。
此外，本发明的抗体或其片段可与标记序列(如多肽)融合，以利于纯化。在优选实施方案中，标记氨基酸序列是六组氨酸肽，例如pQE载体(QIAGEN公司,9259 Eton Avenue,Chatsworth,Calif.,91311)所提供的标签等，许多此类标记均可从商业上获得。例如，如Gentz等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:821-824(1989)中所述，六组氨酸提供了融合蛋白的方便纯化。其它可用于纯化的肽标签包括但不限于“HA”标签和“flag”标签，“HA”标签对应于来自流感病毒血凝素蛋白的表位(Wilson等,Cell 37:767(1984))。
抗体在诊断中的应用
本发明的抗体包括经修饰的衍生物，即通过将任何类型的分子与抗体以不干扰抗原结合的方式共价连接进行的修饰。例如(但并不限于)，抗体衍生物包括用生物素、HRP或其它任何可检测部分修饰的抗体。
本发明的抗体可被用于例如(但不限于)D因子的检测，包括体外及体内诊断方法。例如，抗体可用于对从患有眼部病症或疾病的患者的眼部获得的生物学样品中的D因子水平进行定量和定性的免疫分析。如Harlow等,Antibodies:A Laboratory Manual,(ColdSpring Harbor Laboratory Press,第2版1900)(该文献完整引入本文作为参考)中对免疫分析进行了典型描述。
本发明的抗体可单独使用或与其它组分联合使用，下文对此有更详细的讨论。抗体还可以在其C-或N-末端与其它异源多肽重组融合或通过化学偶联(包括共价和非共价偶联)与多肽或其它组分偶联。例如，本发明的抗体可以与在检测分析中作为标记的分子重组融合或偶联。
本发明还包括与诊断试剂偶联的抗体或其片段在检测受感染个体的眼内补体途径组分的水平中的应用。抗体也可诊断性地用于(例如)作为临床试验的一部分监测眼部病症或疾病的发展或进展以(例如)确定给定治疗方案的功效。通过将抗体与可检测物偶联可有利于检测。可检测物的例子包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料、放射性材料、使用各种正电子发射断层的正电子发射金属、以及非放射性顺磁金属离子等。可检测物可与抗体(或其片段)直接偶联或结合，或可通过本领域已知技术通过中间物(如本领域已知的接头)与抗体(或其片段)间接相连。根据本发明可与抗体结合用于诊断的金属离子可参阅美国专利号4,741,900。合适的酶的例子包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合物的例子包括链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素；合适的荧光材料的例子包括伞形花内酯、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红素；发光材料的例子包括鲁米诺；生物发光材料的例子包括荧光素酶、虫荧光素和水母发光蛋白；合适的放射性材料包括125I、131I、111In或99Tc。
也可以将抗体与固相支持物连接，这对免疫分析或目标抗原的纯化非常有用。这样的固相支持物包括但不限于：玻璃、纤维素、聚丙酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙稀。
与D因子特异性结合的标记抗体、及其衍生物或类似物可以用于诊断目的来检测、诊断或监测与D因子的异常表达或活性相关的疾病、障碍和/或病症。本发明提供了对D因子异常表达的检测，包括：(a)利用一种或多种本发明的D因子特异性抗体分析个体细胞或体液中的D因子的表达和(b)将基因表达水平与标准基因表达水平进行比较，由此，与标准表达水平相比，所分析的D因子表达水平的升高或下降意味着异常表达。
抗体可用于检测样品如眼液中D因子的存在和/或水平。检测方法可能包括将样品与抗D因子抗体接触并确定与样品相结合的抗体的量。
本发明提供了一种诊断障碍的诊断分析方法，包括(a)利用一种或多种本发明的抗体分析个体体液或细胞中的D因子的表达和(b)将基因表达水平与标准基因表达水平进行比较，由此，与标准表达水平相比，所分析的基因表达水平的升高或下降指示特定的障碍。
利用本领域技术人员已知的经典免疫组化方法(参见如Jalkanen等,J.Cell.Biol.101:976-985(1985)；Jalkanen等,J.Cell.Biol.105:3087-3096(1987))，本发明的抗体可用于对生物样品中的蛋白水平进行分析。其它基于抗体的可用于检测蛋白基因表达的方法包括免疫分析，例如酶联免疫吸收分析(ELISA)和放射免疫分析(RIA)。合适的抗体分析标记物是本领域已知的且包括：酶标记物(如葡萄糖氧化酶)、放射性同位素(如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(112In)和锝(99Tc))、发光标记物(如鲁米诺)、荧光标记物(如荧光素、罗丹明)和生物素。
本发明的一个方面是检测并诊断与补体活化相关的个体眼部疾病或障碍，优选哺乳动物，最优选人。在一种实施方案中，诊断包括：a)从病人眼部采集样品；b)测量样品中补体组分如C3a或C3b或C5a水平。背景水平可通过多种方法加以确定，包括将检测到的标记分子的量与之前已经确定的具体系统的标准值进行比较。
在实施方案中，通过在例如首次诊断一个月后、首次诊断六个月后、首次诊断一年后等重复诊断疾病的方法来对疾病或障碍进行监测。
补体途径抑制剂的治疗应用
可对眼病患者如老年性黄斑变性患者进行补体途径抑制剂给药。偶联有治疗性部分或未偶联治疗性部分的抗体都可用作治疗剂。本发明涉及补体途径抑制剂特别是抗体的应用，包括对动物、哺乳动物或人进行所述抑制剂给药以治疗涉及补体途径活化的眼部疾病、障碍或病症。该动物或个体可以是需要特定治疗的动物，比如被诊断为某种特定障碍(如与补体相关的障碍)的动物。抗D因子抗体可用于抑制补体旁路途径，因而可抑制与补体途径相关的疾病或病症。具体地，本发明涉及AMD、糖尿病性视网膜病变及脉络膜血管新生的治疗。例如，通过施用治疗可接受剂量的本发明的抗体或多种抗体、或本发明抗体的混合物或与其它不同来源的分子组合的本发明抗体或多种抗体，在被治疗哺乳动物体内的补体途径组分活化的效应会得到减弱或清除。
本发明的治疗性化合物包括(但不限于)本发明的抗体(包括本文所述的抗体的片段、类似物或衍生物)和如下所述的编码本发明抗体的核酸(包括本文所述的其片段、类似物和衍生物以及抗独特型抗体)。本发明的抗体可用于治疗、抑制或预防与补体途径(特别是旁路途径，且特别是D因子)的异常表达和/或活性相关的疾病、障碍或病症。与D因子的异常表达和/或活性相关的疾病、障碍或病症的治疗和/或预防包括但不限于缓解与此种疾病、障碍或病症相关的至少一种症状。本发明的抗体可以本领域已知的或本文所述的药学可接受组合物的形式提供。
有效治疗、抑制和预防与补体途径的异常表达和/或活化相关的疾病或障碍的抗体的量可通过标准的临床技术来确定。抗体可以与所治疗疾病相适应的治疗方案进行给药，例如在一至数日内单剂量或多剂量给药以改善疾病状况或者在延长的时间内周期性给药以预防眼部疾病或病症。
此外，任选地，可使用体外分析来帮助确定最佳剂量范围。制剂中所用的准确剂量也依赖于给药途径及疾病或病症的严重程度，应当根据医师的判断及每个病人的状况来加以决定。可以根据体外或动物模型测试系统测得的剂量-应答曲线外推得到有效剂量。
对抗体来说，病人的给药剂量一般介于0.1-100mg/kg病人体重。优选地，病人给药剂量为0.1-20mg/kg病人体重，更优选为1-10mg/kg病人体重。一般来说，由于对外源多肽的免疫应答，人抗体比其它物种的抗体在人体内有更长的半衰期。因此，人抗体的给药剂量和给药频率通常可能更低。此外，本发明抗体的给药剂量和给药频率可进一步通过对抗体进行修饰(如脂化)以增强其吸收和组织透过性(如进入脑)而降低。在优选的方面，抗体是基本纯的(如基本上没有限制其效应或产生不良副作用的其它物质)。
各种给药系统是已知的且也可用于本发明抗体的给药，包括注射，例如包裹在脂质体、微粒、微囊中，能够表达该化合物的重组细胞，受体介导的内吞(参见例如Wu等,J.Biol.Chem.262:4429-4432(1987))，将核酸构建为逆转录病毒或其它载体的一部分等。
抗体可以以任何可接受的方式对哺乳动物给药。引入的方式包括(但不限于)：皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻腔内、硬膜外腔、吸入及口服途径。但对于本发明的目的来说，眼内是优选给药途径。
给药可以是全身给药或局部给药。另外，希望通过任何适当的途径(包括脑室内或鞘内注射)将本发明的治疗性抗体或组合物引入到中枢神经系统。脑室内导管可帮助进行脑室内注射，比如，将导管与储器(如Ommaya储器)相连。
在另一实施方案中，可使用囊泡，特别是脂质体递送抗体(参见Langer,Science249:1527-1533(1990)；Treat等,Liposomes in the Therapy of Infectious Diseaseand Cancer,Loperz-Berestein和Fidler(编),Liss,New York,第353-365页(1989)；Lopez-Berestein,同上,第317-327页；参见前文)。
在另一实施方案中，可使用控释系统递送抗体。在一实施方案中，可使用泵(参见Langer,见上；Sefton,CRC Crit,Ref.Biomed.Eng.14:201(1987)；Buchwald等,Surgery88:507(1980)；Saudek等,N.Engl.J.Med.321:574(1989))。在另一实施方案中，可使用聚合材料(参见Medical Applications of Controlled Release,Langer和Wise(编),CRCPress.,Boca Raton,Fla.(1974)；Controlled Drug Bioavailability,Drug ProductDesign and Performance,Smolen和Ball(编),Wiley,New York(1984)；Ranger和Peppas,J.,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61(1983)；也参见Levy等,Science 228:190(1985)；During等,Ann.Neurol.25:351(1989)；Howard等,J.Neurosurg.71:105(1989))。在另一实施方案中，可将控释系统置于治疗靶标的附近。
本发明也提供了适用于本发明所述方法的药用组合物，这些组合物包含治疗有效量的抗体和生理可接受载体。在特定的实施方案中，“生理可接受”指为联邦政府或州政府监管机构批准或在美国药典或其它公认的药典中列为可在动物体内应用，尤其是可在人体内应用；术语“载体”指与治疗剂一同施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或运载体。这些生理载体可以是无菌液体，如水和油，包括来自石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。通过药物组合物静脉内给药时，水是优选载体。盐水溶液、右旋糖水溶液及甘油水溶液也可以作为液态载体使用，特别是用于注射溶液。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油硬脂酸单酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，组合物也可包含少量的湿润剂、乳化剂或pH缓冲试剂。这些组合物可以采用溶液、悬浮液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉剂或缓释制剂等形式。组合物也可用传统粘合剂和载体如甘油三酯配制成栓剂。口服制剂可包括标准载体，例如药学级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。合适载体的例子在E.W.Martin的“Remington’s Pharmaceutical Sciences”中描述。这些组合物包含有效量的抗体(优选纯化形式)和适量载体，从而形成适于对病人给药的形式。剂型须与给药方式相适应。
在一实施方案中，根据常规方法将本发明所述的组合物配制为适于对人进行静脉内给药的药物组合物。通常，静脉给药的组合物为无菌等渗水缓冲溶液。必要时，组合物还可包含增溶剂和局部麻醉剂(如利多卡因)以减轻注射位点的疼痛。通常，配方成分单独或混合在单位剂量中提供，例如，以置于标明活性试剂的量的密封容器(如安瓿、密封袋)内的冻干粉或无水浓缩物的形式提供。当组合物将通过输液给药时，可将其与含有药物级无菌水或无菌盐水的输液瓶一同分发。当组合物通过注射给药时，可提供安瓿瓶的注射用无菌水或盐水，以便于在给药前将各成分进行混合。
本发明也提供包含一个或多个容器的药物包或药物试剂盒，容器中装有本发明所述药物组合物的一种或多种成分。任选地，可在这种容器上附加管理药物或生物制品的生产、使用或销售的政府机构所规定的声明，该声明表明其已获人体用药生产、使用或销售监管机构的批准。
此外，本发明的抗体可与各种效应物分子偶联，比如异源多肽、药物、放射性核苷酸或毒素。参见例如PCT公布WO 92/08495、WO/91/14438、WO 89/12624；美国专利号5,314,995和EP 396,387。抗体或其片段可与治疗性部分(比如细胞毒素，如细胞生长抑制剂或杀细胞剂)、治疗性试剂或放射性金属离子(比如α射线源，如213Bi)偶联。细胞毒素或细胞毒试剂包括任何对细胞有害的试剂。例子包括紫杉醇、松胞菌素B、克杀汀D、溴化乙啶、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、阿霉素、正定霉素、二羟基蒽醌、米托唑胺、普卡霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、和嘌呤霉素及其类似物或同源物。治疗性试剂包括但不限于抗代谢物(如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟脲嘧啶、达卡巴嗪)、烷基化剂(如氮芥、thioepa chlorambucil、美法仑、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、cyclothosphamide、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C和顺二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环类抗生素(如正定霉素和阿霉素)、抗生素(如放线菌素、博莱霉素、光神霉素、氨茴霉素(AMC))和抗有丝分裂试剂(如长春新碱和长春花碱)。
将抗体与这些治疗性部分偶联的技术是熟知的，可参见如：Arnon等,“MonoclonalAntibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”,MonoclonalAntibodies And Cancer Therapy中,Reisfeld等(编),第243-56页(Alan R.Liss,Inc.1985)；Hellstrom等,“Antibodies For Drug Delivery”，Controlled Drug Delivery(第二版)中,Robinson等(编),第623-53页(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe,“AntibodyCarriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review”，MonoclonalAntibodies’84:Biological And Clinical Applications中,Pinchera等(编),第475-506页(1985)；“Analysis,Results,And Future Prospective Of The Therapeutic Use OfRadiolabeled Antibody In Cancer Therapy”，Monoclonal Antibodies For CancerDetection And Therapy中,Baldwin等(编),第303-16页(Academic Press 1985),和Thorpe等,“The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-ToxinConjugates”,Immunol.Rev.62:119-58(1982)。或者，抗体可与第二抗体偶联以形成异源抗体偶联物(参见例如Segal的美国专利号4,676,980)。
本发明的偶联物可用于改变给定的生物应答，治疗性试剂或药物部分不应理解为限于经典的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有所需生物学活性的蛋白质或多肽。这些蛋白质可包括例如毒素(如相思子豆毒蛋白、蓖麻毒素A、假单胞菌外毒素或白喉毒素)、蛋白(如肿瘤坏死因子、α干扰素、β干扰素、神经生长因子、血小板源生长因子、组织纤溶酶原激活剂)、凋亡试剂(如TNF-α、TNF-β、AIM I(见国际公布号WO 97/33899)、AIM II(见国际公布号WO 97/34911)、Fas配体(Takahashi等,Int.Immunol.,6:1567-1574(1994))、VEGI(见国际公布号WO 99/23105)、血栓试剂或抗血管新生试剂(如血管抑制素或内皮抑素)、生物应答修饰物(如淋巴因子、白细胞介素-1(“IL-1”)、白细胞介素-2(“IL-2”)、白细胞介素-6(“IL-6”)、粒细胞巨噬集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”)或其它生长因子)。
基于抗体的基因治疗
在本发明的另一方面，施用包含编码抗体或其结合片段的序列的核酸以通过基因治疗对与补体途径的异常表达和/或活化相关的疾病或病症进行治疗、抑制或预防。基因治疗指通过对个体施用表达的或可表达的核酸进行的治疗。在本发明的该实施方案中，核酸生成其编码蛋白，该蛋白介导治疗效果。根据本发明可使用任何可用的基因治疗的方法。以下对典型方法进行描述。
对于基因治疗方法的一般综述，参见Goldspiei等,Clinical Pharmacy 12:488-505(1993)；Wu和Wu,Biotherapy 3:87-95(1991)；Toistoshev,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596(1993)；Mulligan,Science 260:926-932(1993)；以及Morgan和Anderson,Ann.Rev.Biochem.62:191-217(1993)；May,TIBTECH 11(5):155-215(1993)。
在一方面中，化合物包含编码抗体的核酸序列，所述核酸序列为可在适当宿主中表达抗体或其片段、嵌合蛋白、重链或轻链的表达载体的一部分。特别地，这样的核酸序列含有与抗体编码区可操作连接的启动子，所述启动子是可诱导型或组成型，且任选地，可以是组织特异型。
在另一具体实施方案中，使用核酸分子，在该分子中，抗体编码序列及其它所需序列两侧与可促进基因组中特定位点同源重组的序列相连，由此使得编码抗体的核酸可以在染色体内表达(Koller和Smithies,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:8932-8935(1989)；Zijistra等,Nature 342:435-438(1989))。在特定实施方案中，表达的抗体分子为单链抗体；或者，核酸序列包含抗体的重链和轻链或其片段的编码序列。
核酸在病人体内的递送可以是直接的或间接的，在直接递送中，将病人直接暴露于核酸或携带核酸的载体；在间接递送中，先在体外用核酸转化细胞，再将转化细胞移植入病人体内。这两种方法分别被称为体内和离体基因治疗。
在具体的实施方案中，直接在体内施用核酸序列，其中核酸序列在体内表达生成编码产物。该实施方案可通过任何本领域已知的许多方法实现，比如将核酸序列构建作合适的核酸表达载体的一部分并施用使其进入细胞，例如通过缺陷或减毒逆转录病毒或其它病毒载体感染(美国专利号4,980,286)、或通过直接注射裸露DNA、或利用微粒子轰击(如基因枪,Biolistic,Dupont)、或用脂质或细胞表面受体或转染试剂包衣、或包裹在脂质体、微粒、微囊中、或与已知可进入细胞核内的多肽连接进行给药、或与可实现受体介导内吞作用的配体相连进行给药(参见如Wu和Wu,J.Biol.Chem.262:4429-4432(1987))(此方法可用于靶向特异性表达受体的细胞类型)等。在另一实施方案中，形成核酸-配体复合物，其中，配体包含病毒膜融合肽以破坏内吞体，使得核酸免于被溶酶体降解。在另一实施方案中，通过靶向特定受体，核酸可以在体内靶向至特定细胞进行摄取和表达(参见如PCT公布WO 92/08180、WO 92/22635、WO 92/20316、WO 93/14188、WO 93/20221)。或者，通过同源重组，核酸可被引入胞内并整合到宿主细胞DNA中表达(Koller和Smithies,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:8932-8935(1989)；Zijistra等,Nature 342:435-438(1989))。
在具体实施方案中，采用含有本发明抗体编码核酸序列的病毒载体。例如，使用逆转录病毒载体(参见Miller等,Math.Enzymol.217:581-599(1993))。这些逆转录病毒载体含有正确包装病毒基因组并整合入宿主细胞DNA所需的组分。将用于基因治疗的抗体编码核酸序列克隆到一种或多种载体中，该载体有助于在病人体内的递送。更多关于逆转录病毒载体的详细信息参见Boesen等,Biotherapy 6:291-302(1994)，其描述了用逆转录病毒载体将mdrl基因导入造血干细胞以增强干细胞对化疗药物的抗性。其它关于使用逆转录病毒载体进行基因治疗的文献包括：Clowes等,J.Clin.Invest.93:644-651(1994)；Klem等,Blood 83:1467-1473(1994)；Salmons和Gunzberg,Human Gene Therapy 4:129-141(1993)；和Grossman和Wilson,Curr.Opin.Gen.and Dev.3:110-114(1993)。
本发明也可以使用腺病毒。在将本发明抗体递送至呼吸上皮时，腺病毒是特别有吸引力的运载体。腺病毒天然感染呼吸上皮。基于腺病毒的递送系统的其它靶组织是肝脏、中枢神经系统、内皮细胞和肌肉。腺病毒载体具有可感染非分裂细胞的优势。Kozarsky和Wilson,Curr.Opin.Gen.and Dev.3:499-503(1993)对基于腺病毒的基因治疗进行了综述。Bout等,Human Gene Therapy 5:3-10(1994)证实了腺病毒载体在将基因转入恒河猴呼吸上皮中的应用。其它关于利用腺病毒进行基因治疗的例子描述参见Rosenfeld等,Science252:431-434(1991)；Rosenfeld等,Cell 68:143-155(1992)；Mastrangeli等,J.Clin.Invest.91:225-234(1993)；PCT公布WO 94/12649和Wang等,Gene Therapy 2:775-783(1995)。腺病毒相关病毒(AAV)也已被提议用于基因治疗(Walsh等,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204:289-300(1993)；美国专利号5,436,146、6,632,670、6,642,051)。
其它基因治疗方法包括通过诸如电穿孔、脂质体转染、磷酸钙介导的转染或病毒感染等方法将基因转入组织培养细胞中。一般来说，转移方法包括向细胞内转移入选择标记。随后将细胞置于选择条件下以分离那些已摄取并表达转染基因的细胞。然后将这些细胞递送给病人。
在该实施方案中，核酸首先被导入细胞，然后再将生成的重组细胞体内施用。可利用任何本领域已知的方法将核酸导入细胞内，包括(但不限于)：转染、电穿孔、显微注射、包含核酸序列的病毒或噬菌体载体感染、细胞融合、染色体介导的基因转移、微细胞介导的基因转移、原生质球融合等。本领域已知很多将外源基因导入细胞的技术(参见例如Loeffler和Behr,Meth.Enzymol.217:599-618(1993)；Cohen等,Meth.Enzymol.217:618-644(1993)；Cline,Pharmac.Ther.29:69-92m(1985))，且只要不干扰受体细胞的必需的发育和生理功能，这些技术均可依据本发明得到使用。这些技术应能使核酸稳定转入细胞中，以使核酸在细胞中能进行表达，并且优选能遗传到其子代细胞并能进行表达。
可通过本领域已知的各种方法将生成的重组细胞递送到病人体内。重组血液细胞(如造血干细胞或祖细胞)优选通过静脉内给药。所需的细胞数量取决于所需达到的效应、病人状况等，且可由本领域技术人员进行确定。
为进行基因治疗，将核酸导入其中的细胞包括任何所需的且可获得的细胞类型，包括但不限于：上皮细胞、内皮细胞、角质细胞、成纤维细胞、肌肉细胞、肝细胞、血液细胞(如T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨核细胞、粒细胞)、各种干细胞或祖细胞(特别是造血干细胞或祖细胞，如取自骨髓、脐带血、外周血或胎肝等的干细胞)。
在一实施方案中，基因治疗所用的细胞采用病人自体细胞。将本发明的抗体编码核酸序列导入细胞中，使其在细胞或其子细胞中可进行表达，然后将重组细胞体内施用以实现治疗效果。在特定实施方案中，使用干细胞或祖细胞。任何可被分离并可在体外维持的干细胞和/或祖细胞都可能依据本发明的本实施方案加以使用(参见如：PCT公布WO 94/08598；Stemple和Anderson,Cell 71:973-985(1992)；Rheinwald,Cell Bio.21A:229(1980)及Pittelkow和Scott,Meyo Clinic Proc.61:771(1986))。
利用siRNA调节补体途径组分表达
在传统拮抗剂如小分子或抗体效果不佳的情况下，siRNA已被证明是研究基因表达调控的有用工具(Shi Y.,Trends in Genetics 19(1):9-12(2003))。体外合成的21-23个核苷酸长度的双链RNA可作为干扰RNA(iRNA)且能特异性抑制基因表达(Fire A.,Trendsin Genetics 391:806-810(1999))。这类iRNA通过介导其靶标RNA的降解发挥作用。由于低于30个核苷酸长度，这类RNA不引发宿主的抗病毒保护机制。这种机制包括：产生干扰素和总体关闭宿主细胞蛋白合成。实践中，可合成siRNA并将其克隆到DNA载体中。这些载体可被转染并以高水平表达siRNA。高水平表达的siRNA可用于抑制或显著降低细胞内生成的蛋白量，因此，在相信蛋白的过量表达与疾病如癌症关联时所进行的试验中，siRNA非常有用。通过抑制抗原在细胞内的生成并抑制补体级联反应的活化，siRNA成为补体途径蛋白的有用拮抗剂。
模拟肽和小分子
本领域普通技术人员熟知模拟肽可以替代肽。由于具有更高的生物利用率和更不易被蛋白酶降解，一般来说，模拟肽作为治疗剂会优于肽。可以利用分子建模技术来设计可模拟本文所述补体相关多肽结构的模拟肽，因此，本发明也提供模拟肽及其它先导化合物，它们可根据补体途径蛋白结构分析数据加以识别。可利用诸如GRAM、DOCK或AUTODOCK等对接(docking)程序通过计算机模拟对潜在的D因子类似物进行检测。此过程也可包括对D因子潜在类似物的计算机拟合。也可利用计算机程序对类似物与潜在结合位点间的吸引、排斥和空间位阻等进行估计。一般来说，拟合越好(比如空间位阻更小和/或吸引力更大)，潜在药物越有效，因为这些性质与更强的结合常数是一致的。此外，潜在药物设计的特异性越高，药物就越不易对表达系统的其它性质发生干扰。这将使因与其它蛋白的有害相互作用而引起的潜在副作用最小化。
可首先通过筛选例如由重组噬菌体产生的随机肽文库或化合物文库来得到可能的D因子类似物。然后通过计算机模拟软件对以该方式得到的类似物配体进行系统修饰，直到发现一个或多个有前景地潜在配体。
这种计算机模拟使得可以从无数的可以进行的主要随机化学修饰中选择出有限数目的合理化学修饰，其中每一个都可能产生有用的药物。因此，通过使用本发明所披露的三维结构及计算机模拟，可对大量化合物进行快速筛选，并且可在无需费力合成无数化合物的情况下鉴别出少数可能的候选化合物。
一旦确定了可能的D因子类似物，可从很多大化学试剂公司(包括Merck、GlaxoWelcome、Bristol Meyers Squib、Monsanto/Searle、Eli Lilly、Novartis和PharmaciaUpJohn)购买到的化合物文库中将其选出，或从头合成潜在配体。如上所述，从头合成一种或甚至相对少量数目的一组特定化合物在药物设计领域是合理可行的。
或者，根据抗D因子抗体可变区的分子结构，可以使用分子建模和合理分子设计方法产生并筛选模拟抗体结合区分子结构并可抑制D因子活性的小分子。这些小分子可以是多肽、模拟肽、寡核苷酸或有机化合物。
实施例
抗体对作为湿性AMD模型的激光诱导脉络膜血管新生(CNV)的疗效
眼内注射抗体的疗效可以用Krzystolik MG等(Arch Ophthalm.2002；120:338-346)已描述过的激光损伤CNV模型进行检验。这种模型可用于检测任何预防和/或改善AMD的候选药物的疗效。这激光诱导CNV模型用氩绿激光在猴黄斑内诱导CNV。在CNV损伤数目与显著血管渗漏之间存在很好的相关性。
本实验研究包括两期：第一期是预防期，此期包括在激光诱导CNV前和激光暴露1周后进行抗体治疗以抑制CNV形成，CNV一般出现在激光损伤2-3周后；第二期为治疗期，此期于第42天(激光损伤3周后)开始，预期1期中的对照眼此时会出现CNV损伤。第二期对减轻已存在的CNV损伤的程度和渗漏的治疗效果进行评估。
这种研究一般使用10只猕猴(食蟹猴)。整个过程中，通过肌肉注射如盐酸氯胺酮(20mg/kg)、马来酸乙烯丙嗪(0.125mg/kg)和硫酸阿托品(0.125mg/kg)等对猴进行麻醉。需要时可给予5-6mg/kg体重盐酸氯胺酮进行补充麻醉。此外，一般用0.5％的盐酸丙对卡因进行局部麻醉。摘除术前可通过静脉给予戊巴比妥钠溶液(5mg/kg)进行补充麻醉。实验后对动物均行安乐死。
抗体治疗
待测抗体以例如大约10μg/μL的浓度溶于生理缓冲液中进行给药。对照眼注射由除待测抗体之外的所有其它组分组成的运载体。在经过灌注局部麻醉和5％碘伏溶液后，用30号针和结核菌素注射器经睫状体平坦部向每只眼分别眼内注射大约例如50μL/眼的抗体或运载体。抗体经5μm滤器从储瓶中取出，用新的(锐利的)30号针进行眼内注射。注射后，向穹隆部灌注杀菌眼膏(如杆菌肽)。变换注射部位以避免巩膜损伤。
在第一期，对每个动物随机选取其左眼或右眼进行眼内抗体注射，注射剂量约为如500μg(每只眼50μl)，且这只眼命名为预防眼。所用剂量可根据在进行此疗效研究前进行的安全和毒理学研究或其它临床上适当的方法加以确定。另一只眼进行眼内运载体注射，且被命名为对照眼。每只动物的两只眼通常在激光处理前0天和14天接受两次仅有待测抗体或仅有运载体的眼内注射。第21天，对所有眼进行氩绿激光光凝固处理以诱发CNV损伤。第28天，也就是激光诱发1周后，对预防眼再次进行抗体注射，对照眼进行运载体注射。第二期于激光诱发后42天或3周后开始，预计此时CNV已经形成。在第42天实施荧光血管造影后，每只动物的两只眼均接受眼内抗体注射，剂量大约为例如500μg(每只眼50μL)，第56天重复此过程。
诱发实验性CNV
通过裂隙灯和隐形眼底平光镜用氩绿激光灼烧(Coherent Argon Dye Laser920；CoherentMedical Laser,Palo Alto,Calif)在猕猴黄斑诱发CNV膜。由受掩蔽防护的外科医生在每只眼的黄斑中对称分布9个损伤。激光变量包括光斑尺寸50-100μm，时间0.1秒，功率为350-700mW。所用功率由激光在所选功率下产生水疱和小出血斑的能力确定。如未出现出血，可按照相同的激光步骤在第一斑点的邻近处再添置激光斑点。一般采用彩色照片和荧光血管造影来检测和测量CNV的范围和渗漏情况。然而，可以使用任何能测量激光诱发CNV及其相关效应的方法。
眼部检查
检查实验动物的眼睛的相对瞳孔传入缺陷，并随后用2.5％的盐酸去氧肾上腺素和0.8％的托吡卡胺散瞳。第0、14、28、42和56天(抗体注射前)，第1、15、29、43和57天(注射后)，第21天(激光处理前)，第35和第49天(中间)及第63天(摘除术及死亡)使用裂隙灯生物显微镜和间接检眼镜对两只眼进行检查。
彩色照片和荧光血管造影
在进行眼部检查的同一天，对所有动物进行眼底照相。可以使用眼底照相机(Canon Fundus CF-60Z；Canon USA公司,Lake Success,NY)和35-mm胶卷进行照相，也可以使用其它任何照相器材。
可使用Imagenet数字血管造影系统(Topcon 501Aand Imagenet system；TopconAmerica公司,Paramus,NJ)进行荧光血管造影。一般先对双眼进行无赤光照相，之后以0.1mL/s流速灌注0.1mL/kg体重的10％荧光素钠(Akorn公司,Abita Springs,La)进行荧光血管造影。注射荧光素后，在第一分钟之内以先右眼后左眼的顺序对眼球后极进行快速连续拍摄。一般在大约1-2分钟和5分钟时再次对两眼进行拍摄；在2-5分钟之间，对每只眼侧中部(颞侧和鼻侧)拍摄两张照片。分别在基线(第0天)和第7、14、29、42、49、57及63天进行荧光血管造影。
眼科数据分析
评估所拍照片和血管造影作为血管渗漏、出血或任何其它异常的证据。眼底出血按以下分级系统进行分级：视网膜出血少于3个视盘区为1级，3-6个视盘区出血为2级，多于6个视盘区出血为3级。同时对出血与CNV膜或激光诱发为点之间的相关性也进行评估。临床显著出血被定义为大于等于6个视盘区的任何眼底出血。
利用裂隙灯生物显微镜对眼部炎症进行评估。利用高倍2-mm裂隙灯对前房和玻璃体内细胞进行计数，按美国眼科学会标准进行分级。CNV损伤由(一般是两位)熟练检查人员综合分析第35、42、49、56天所拍荧光造影后根据共同意见进行分级。对照标准造影按以下方案进行分级。无强荧光为1级损伤。具有强荧光而无渗漏为2级损伤。早期和中期有强荧光且晚期有渗漏为3级。处理区域外在中期和晚期渗漏中出现高亮强荧光为4级。4级损伤为临床显著损伤。
可利用群体累计组数据(Population-Aggregated Panel Data)通过广义估计方程(Generalized Estimating Equations)和发病率比例(IRR)进行统计学分析。发病率通常定义为给定时间内4级损伤发生数除以诱发的损伤总数。在第一期中，IRR指预防眼中4级损伤发病率与对照眼中发病率的比值。IRR为1表明发病率无差异，IRR远小于1表明预防组4级损伤发病率低于对照组。在第二期中，将治疗眼4级损伤发生率与对照眼4级损伤发生率进行比较。这意味着对那些首先作为对照组而在第42天和56天接受抗体治疗成为治疗组的眼随时间的4级损伤发生率进行比较。
筛选用于治疗AMD的试剂
可使用新的动物模型进行AMD的治疗和研究，该动物模型包含单核细胞趋化蛋白1(Cc1-2,又名MCP-1)或其同类C-C趋化因子受体-2(Ccr-2)(Ambati,J.等Nat.Med.2003Nov；9(11):1390-7.2003年10月19日网络公开)缺陷型小鼠模型。这些小鼠发展出AMD的主要特征，包括视网膜色素上皮(RPE)中的脂褐素及其下的脉络膜小疣、光受体萎缩和脉络膜血管新生(CNV)等。
用所需药物对这些小鼠的治疗有助于评估这些试剂在治疗AMD中的疗效。

Claims (10)

1.补体抑制剂在制备用于预防或改善补体活化相关眼部疾病的药物中的用途，其中该补体抑制剂抑制补体旁路途径，且其中该补体抑制剂是特异性结合因子D的抗体或其抗原结合片段。
2.根据权利要求1所述的用途，其中该抗体是单域抗体。
3.根据权利要求1所述的用途，其中该抗原结合片段是Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或单链Fv。
4.根据权利要求1所述的用途，其中该抗体是单克隆抗体。
5.根据权利要求1所述的用途，其中该抗体是嵌合抗体、去免疫型抗体、人源化抗体、灵长类化抗体或人抗体。
6.根据权利要求1所述的用途，其中该抗体或其抗原结合片段与治疗性部分偶联。
7.根据权利要求1所述的用途，其中该抗体是由保藏在ATCC且命名为HB12476的杂交瘤产生的单克隆抗体166-32。
8.根据权利要求1所述的用途，其中该抗体与由保藏在ATCC且命名为HB12476的杂交瘤产生的单克隆抗体166-32特异性结合相同的表位。
9.根据权利要求1所述的用途，其中该抗体是由保藏在ATCC且命名为HB12476的杂交瘤产生的单克隆抗体166-32衍生的人源化抗体。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的用途，其中所述药物进一步包含药学可接受稀释剂或载体。
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Families Citing this family (106)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7999082B2 (en) 2004-02-10 2011-08-16 National Jewish Medical And Research Center Anti-factor B antibodies
WO2006096561A2 (en) 2005-03-04 2006-09-14 Duke University Genetic variants increase the risk of age-related macular degeneration
CN101227924A (zh) 2005-05-26 2008-07-23 科罗拉多大学评议会 用于治疗外伤性脑损伤、脊髓损伤及相关病症的补体旁路抑制
US8168584B2 (en) 2005-10-08 2012-05-01 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating age-related macular degeneration by compstatin and analogs thereof
KR20180002911A (ko) 2005-11-04 2018-01-08 제넨테크, 인크. 안질환 치료를 위한 보체 경로 억제제의 용도
SI2044111T1 (sl) 2006-06-21 2015-02-27 Musc Foundation For Research Development Ciljanje komplementa faktorja H za zdravljenje bolezni
PL2698166T3 (pl) 2006-10-10 2016-03-31 Regenesance B V Hamowanie układu dopełniacza służące do lepszej regeneracji nerwów
KR20160092061A (ko) 2006-11-02 2016-08-03 제넨테크, 인크. 인간화 항-ｄ 인자 항체
CN101668773B (zh) 2007-03-14 2016-08-31 亚力史制药公司 人工程化抗b因子抗体
EP2129681A2 (en) * 2007-03-22 2009-12-09 Novartis Ag C5 antigens and uses thereof
WO2009029669A1 (en) 2007-08-27 2009-03-05 Novelmed Therapeutics, Inc. Method of inhibiting complement activation with factor bb specific antibodies
AR066660A1 (es) * 2007-05-23 2009-09-02 Genentech Inc Prevencion y tratamiento de condiciones del ojo asociadas con su complemento
US10131706B2 (en) 2007-08-27 2018-11-20 Novelmed Therapeutics, Inc. Anti-factor Bb antibodies
GB0718737D0 (en) * 2007-09-25 2007-11-07 Glaxo Group Ltd Antibodies
CN101918444A (zh) * 2007-11-08 2010-12-15 健泰科生物技术公司 抗因子b抗体及其用途
WO2009111701A2 (en) * 2008-03-06 2009-09-11 Case Western Reserve University Method of treating t cell mediated disorders
CR20170001A (es) * 2008-04-28 2017-08-10 Genentech Inc Anticuerpos anti factor d humanizados
AU2013200637B2 (en) * 2008-04-28 2015-07-16 Genentech, Inc. Humanized anti-Factor D antibodies and uses thereof
AU2009270020B2 (en) * 2008-07-10 2014-09-25 Regenesance B.V. Complement antagonists and uses thereof
PL2328616T3 (pl) 2008-08-05 2015-10-30 Novartis Ag Kompozycje i sposoby dla przeciwciał celujących białko dopełniacza C5
US8092013B2 (en) * 2008-10-28 2012-01-10 Johnson & Johnson Vision Care, Inc. Apparatus and method for activation of components of an energized ophthalmic lens
CA3045436A1 (en) 2009-01-29 2010-08-05 Forsight Vision4, Inc. Posterior segment drug delivery
US8623395B2 (en) 2010-01-29 2014-01-07 Forsight Vision4, Inc. Implantable therapeutic device
RS20120461A1 (en) 2009-07-02 2013-06-28 Musc Foundation For Research Development METHODS FOR STIMULATION OF LIVER REGENERATION
KR20120130748A (ko) 2009-11-05 2012-12-03 알렉시온 캠브리지 코포레이션 발작성 야간 혈색소뇨증, 용혈성 빈혈, 및 혈관내 및 혈관외 용혈을 수반한 질환 상태의 치료
WO2013022801A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Forsight Vision4, Inc. Small molecule delivery with implantable therapeutic device
US20130011857A1 (en) 2010-02-12 2013-01-10 Cemm Forschungszentrum Fur Molekulare Medizin Gmbh Complement factor h for oxidative stress disease conditions
US20130058931A1 (en) 2010-03-11 2013-03-07 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Methods of predicting and decreasing the risk of pregnancy loss
SG185383A1 (en) 2010-04-30 2012-12-28 Alexion Pharma Inc Anti-c5a antibodies and methods for using the antibodies
ES2717912T3 (es) 2010-05-14 2019-06-26 Univ Colorado Regents Grupos dirigidos al receptor del complemento 2 (cr2) mejorados
WO2011163394A2 (en) 2010-06-22 2011-12-29 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Compstatin analogs for treatment of neuropathic pain
KR20130036276A (ko) 2010-06-22 2013-04-11 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 콜로라도, 어 바디 코포레이트 보체 결합 3의 C3d 조각에 대한 항체들
JP5907966B2 (ja) * 2010-08-05 2016-04-26 フォーサイト・ビジョン フォー・インコーポレーテッド 埋め込み型治療デバイス
US8915877B2 (en) 2010-10-12 2014-12-23 Emmett T. Cunningham, JR. Glaucoma drainage device and uses thereof
US9370444B2 (en) 2010-10-12 2016-06-21 Emmett T. Cunningham, JR. Subconjunctival conformer device and uses thereof
AR083677A1 (es) 2010-11-01 2013-03-13 Genentech Inc Prediccion del paso a degeneracion macular avanzada relacionada con la edad utilizando una puntuacion poligenica
EP2640360A2 (en) 2010-11-19 2013-09-25 Forsight Vision4, Inc. Therapeutic agent formulations for implanted devices
EP2646821A4 (en) * 2010-11-29 2015-09-23 Novelmed Therapeutics Inc NEOANTIC BODY FOR THE DIAGNOSIS OF TISSUE INJURY
SG194780A1 (en) * 2011-05-05 2013-12-30 Wellstat Immunotherapeutics Llc Complement factor b analogs and their uses
JP6522337B2 (ja) * 2011-05-11 2019-05-29 アペリス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＡｐｅｌｌｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 細胞反応性、長時間作用型または標的化コンプスタチン類似体およびその使用
US10588879B2 (en) * 2011-08-01 2020-03-17 Aurin Biotech Inc. Treatment of age-related macular degeneration
CA2859493A1 (en) 2011-12-21 2013-06-27 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting factor p
WO2013126006A1 (en) * 2012-02-20 2013-08-29 Swedish Orphan Biovitrum Ab (Publ) Polypeptides binding to human complement c5
US9540626B2 (en) 2012-03-19 2017-01-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regulator of complement activation and uses thereof
FR2988298A1 (fr) * 2012-03-23 2013-09-27 Lfb Biotechnologies Facteur h pour son utilisation comme molecule antioxydante
CA2869473C (en) 2012-04-03 2020-06-09 Novelmed Therapeutics, Inc. Humanized and chimeric anti-factor bb antibodies and uses thereof
US9056874B2 (en) 2012-05-04 2015-06-16 Novartis Ag Complement pathway modulators and uses thereof
EP2855529A4 (en) 2012-05-24 2015-12-09 Alexion Pharma Inc HUMANIZED ANTI-FACTOR B ANTIBODIES
AU2013277154A1 (en) * 2012-06-20 2014-12-18 Jonathan E. Grob Complement pathway modulators and uses thereof
KR102073312B1 (ko) * 2012-06-27 2020-02-05 엘지전자 주식회사 당뇨망막병증 진단용 마커 및 이의 용도
CN102743371A (zh) * 2012-07-26 2012-10-24 山东省眼科研究所 一种治疗视网膜新生血管性疾病的药物
US10413620B2 (en) 2012-08-17 2019-09-17 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Light-emitting versions of the monoclonal antibody to C3D (MAB 3D29) for imaging
WO2014028865A1 (en) 2012-08-17 2014-02-20 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Compositions and methods for detecting complement activation
US9926366B2 (en) 2012-10-04 2018-03-27 Novelmed Therapeutics, Inc. Methods of treating a hemolytic disorder comprising administering anti-properdin antibodies
CA2891673A1 (en) 2012-11-15 2014-05-22 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Cell-reactive, long-acting, or targeted compstatin analogs and related compositions and methods
KR101638931B1 (ko) * 2013-01-31 2016-07-12 서울대학교산학협력단 보체 관련 질환의 예방 및 치료를 위한 ｃ5 항체 및 방법
EP2968113B8 (en) 2013-03-14 2020-10-28 Forsight Vision4, Inc. Systems for sustained intraocular delivery of low solubility compounds from a port delivery system implant
EP2970269B1 (en) 2013-03-14 2017-04-19 Novartis AG 2-(1h-indol-4-ylmethyl)-3h-imidazo[4,5-b]pyridine-6-carbonitrile derivatives as complement factor b inhibitors useful for the treatment of ophthalmic diseases
WO2014152391A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Cell-penetrating compstatin analogs and uses thereof
CA2907681C (en) 2013-03-28 2022-11-22 Forsight Vision4, Inc. Ophthalmic implant for delivering therapeutic substances
BR112015026513A2 (pt) 2013-04-17 2017-07-25 Pfizer derivados de n-piperidin-3-ilbenzamida para tratar as doenças cardiovasculares
US20150017163A1 (en) 2013-07-12 2015-01-15 Ophthotech Corporation Methods for Treating or Preventing Ophthalmological Conditions
CN107318267B (zh) 2013-08-12 2021-08-17 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗补体相关的病症的组合物和方法
US20160237146A1 (en) * 2013-10-07 2016-08-18 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Methods of Preventing or Reducing Photoreceptor Cell Death
EP3089963A1 (en) 2013-10-30 2016-11-09 Novartis AG 2-benzyl-benzimidazole complement factor b inhibitors and uses thereof
JP2017502023A (ja) * 2013-12-24 2017-01-19 ノーベルメッド セラピューティクス インコーポレイテッド． 眼疾患を治療する組成物および方法
KR20160126054A (ko) * 2014-02-27 2016-11-01 알러간, 인코포레이티드 보체 인자 Bb 항체
BR112016025312A2 (pt) 2014-05-01 2017-10-17 Genentech Inc variantes de anticorpo, anticorpo anti-fator d, formulação farmacêutica, dispositivo de distribuição, utilização da formulação e de uma composição, composição e método de tratamento de uma desordem
EP4223317A3 (en) 2014-06-12 2023-09-27 RA Pharmaceuticals, Inc. Modulation of complement activity
US9474756B2 (en) 2014-08-08 2016-10-25 Forsight Vision4, Inc. Stable and soluble formulations of receptor tyrosine kinase inhibitors, and methods of preparation thereof
US10112993B2 (en) * 2014-08-20 2018-10-30 Stichting Sanquin Bloedvoorziening Factor H potentiating antibodies and uses thereof
EP3218403B1 (en) 2014-11-10 2020-05-13 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
SI3250230T1 (sl) 2015-01-28 2022-01-31 Ra Pharmaceuticals, Inc. Modulatorji aktivnosti komplementa
RU2727411C2 (ru) * 2015-09-24 2020-07-21 Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания Композиция и способ для лечения заболевания, опосредованного комплементом
CN117503905A (zh) 2015-10-07 2024-02-06 阿佩利斯制药有限公司 给药方案
CN108472382A (zh) 2015-10-30 2018-08-31 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-因子d抗体变体缀合物及其用途
ES2772696T3 (es) 2015-10-30 2020-07-08 Hoffmann La Roche Procedimientos de medición de la actividad del factor D y la potencia de los inhibidores del factor D
JP2018534930A (ja) 2015-10-30 2018-11-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｄ因子抗体及びコンジュゲート
FI3685847T3 (fi) 2015-12-16 2023-04-03 Ra Pharmaceuticals Inc Komplementtiaktiivisuuden modulaattoreita
US11072661B2 (en) 2015-12-23 2021-07-27 Sorbonne Universite Agents that inhibit the binding of CFH to CD11 b/CD18 and uses thereof
AU2017210042B2 (en) 2016-01-20 2021-01-21 396419 B.C. Ltd. Compositions and methods for inhibiting Factor D
KR20190003951A (ko) 2016-04-04 2019-01-10 바이오버라티브 유에스에이 인코포레이티드 항-보체 인자 bb 항체 및 이의 용도
UA124734C2 (uk) 2016-06-14 2021-11-10 Рідженерон Фармасьютікалз, Інк. Антитіло проти с5 і його застосування
BR112019011053A2 (pt) 2016-12-07 2019-10-15 Ra Pharmaceuticals Inc moduladores da atividade do complemento
WO2018136827A1 (en) 2017-01-20 2018-07-26 Vitrisa Therapeutics, Inc. Stem-loop compositions and methods for inhibiting factor d
JP7101684B2 (ja) * 2017-01-30 2022-07-15 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 一価の抗プロペルジン抗体および抗体断片
IL268601B1 (en) 2017-02-10 2024-03-01 Univ Pennsylvania Antibodies against factor D and their uses
CA3059304A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Dosing regimens and related compositions and methods
AU2018250695A1 (en) 2017-04-14 2019-11-07 Kodiak Sciences Inc. Complement factor D antagonist antibodies and conjugates thereof
CN117327187A (zh) 2017-07-11 2024-01-02 亚力兄制药公司 结合补体成分c5或血清白蛋白的多肽及其融合蛋白
CN111527105A (zh) * 2017-10-11 2020-08-11 美国比奥维拉迪维股份有限公司 诱导补体活性的方法
US20210000927A1 (en) 2017-12-04 2021-01-07 Ra Pharmaceuticals, Inc. Modulators of complement activity
JP2021506241A (ja) 2017-12-13 2021-02-22 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 抗ｃ５抗体組み合わせ物およびその使用
GB201800620D0 (en) 2018-01-15 2018-02-28 Univ Manchester C3b Binding Polypeptide
CA3093356A1 (en) 2018-04-03 2019-10-10 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. C3-binding agents and methods of use thereof
US20210246507A1 (en) * 2018-05-10 2021-08-12 The University Of Manchester Methods for assessing macular degeneration
EP3586865A1 (en) * 2018-06-21 2020-01-01 Charité - Universitätsmedizin Berlin Complement anaphylatoxin binders and their use in treatment of a subject having an ocular wound and/or fibrosis
EP3934675A2 (en) 2019-03-08 2022-01-12 RA Pharmaceuticals, Inc. Zilucoplan as deep tissue penetrating c5 inhibitor
CA3134614A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 Ra Pharmaceuticals, Inc. Complement modulators and related methods
TW202106290A (zh) 2019-04-24 2021-02-16 美商Ｒａ製藥公司 用於調節補體活性之組成物及方法
JP2022541275A (ja) 2019-07-17 2022-09-22 ジェミニ・セラピューティクス・サブ・インコーポレイテッド Ｈ因子増強性抗体及びその使用
KR102428619B1 (ko) 2019-09-25 2022-08-04 대구가톨릭대학교산학협력단 망막병증 치료용 약물 방출 콘택트렌즈 및 이의 제조방법
AU2021236306A1 (en) 2020-03-13 2022-09-15 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
AU2021261257A1 (en) 2020-04-20 2022-12-22 Genzyme Corporation Humanized anti-complement factor Bb antibodies and uses thereof
CN114686481B (zh) * 2020-12-31 2023-08-15 北京键凯科技股份有限公司 一种抑制cfd表达的干扰rna及其制备方法和应用
WO2024006902A2 (en) * 2022-06-30 2024-01-04 Iveric Bio, Inc. Sustained release silica hydrogel composites for treating ophthalmological conditions and methods of using same

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1298308A (zh) * 1998-02-20 2001-06-06 泰诺士公司 补体活化的抑制剂
WO2004075837A3 (en) * 2003-02-21 2005-06-02 Tanox Inc Methods for preventing and treating tissue damage associated with ischemia-reperfusion injury

Family Cites Families (142)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5022A (en) * 1847-03-20 Alfred stillman
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4474893A (en) 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
US4714681A (en) 1981-07-01 1987-12-22 The Board Of Reagents, The University Of Texas System Cancer Center Quadroma cells and trioma cells and methods for the production of same
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
CA1319120C (en) 1985-04-01 1993-06-15 John Henry Kenten Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5256642A (en) * 1988-04-01 1993-10-26 The Johns Hopkins University Compositions of soluble complement receptor 1 (CR1) and a thrombolytic agent, and the methods of use thereof
AU631802B2 (en) 1988-06-14 1992-12-10 Cetus Oncology Corporation Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US4925648A (en) 1988-07-29 1990-05-15 Immunomedics, Inc. Detection and treatment of infectious and inflammatory lesions
US5601819A (en) 1988-08-11 1997-02-11 The General Hospital Corporation Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding
AU634186B2 (en) 1988-11-11 1993-02-18 Medical Research Council Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IE63847B1 (en) 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
WO1991000360A1 (en) 1989-06-29 1991-01-10 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
US5436146A (en) 1989-09-07 1995-07-25 The Trustees Of Princeton University Helper-free stocks of recombinant adeno-associated virus vectors
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
WO1991010741A1 (en) 1990-01-12 1991-07-25 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5314995A (en) 1990-01-22 1994-05-24 Oncogen Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins
AU654811B2 (en) 1990-03-20 1994-11-24 Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The Chimeric antibodies with receptor binding ligands in place of their constant region
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
AU660629B2 (en) 1990-10-01 1995-07-06 University Of Connecticut, The Targeting viruses and cells for selective internalization by cells
WO1992005793A1 (en) 1990-10-05 1992-04-16 Medarex, Inc. Targeted immunostimulation with bispecific reagents
ATE160379T1 (de) 1990-10-29 1997-12-15 Chiron Corp Bispezifische antikörper, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendungen
AU660297B2 (en) 1990-11-09 1995-06-22 Stephen D. Gillies Cytokine immunoconjugates
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
AP257A (en) 1991-04-26 1993-06-03 Surface Active Ltd A method of releasing an antigen from an antibody and methods for their use in diagnosis and therapy.
ATE199647T1 (de) 1991-05-14 2001-03-15 Univ Connecticut Gerichtete abgabe von genen, die immunogene proteine kodieren
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
WO1992022635A1 (en) 1991-06-05 1992-12-23 University Of Connecticut Targeted delivery of genes encoding secretory proteins
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
ATE297465T1 (de) 1991-11-25 2005-06-15 Enzon Inc Verfahren zur herstellung von multivalenten antigenbindenden proteinen
ES2227512T3 (es) 1991-12-02 2005-04-01 Medical Research Council Produccion de anticuerpos contra auto-antigenos a partir de repertorios de segmentos de anticuerpos fijados en un fago.
AU3434393A (en) 1992-01-17 1993-08-03 Regents Of The University Of Michigan, The Targeted virus
DE69334255D1 (de) 1992-02-06 2009-02-12 Novartis Vaccines & Diagnostic Marker für Krebs und biosynthetisches Bindeprotein dafür
ATE239506T1 (de) 1992-03-05 2003-05-15 Univ Texas Verwendung von immunokonjugate zur diagnose und/oder therapie der vaskularisierten tumoren
EP0633943A4 (en) 1992-04-03 1997-05-02 Alexander T Young GENTHERAPY USING TARGETED VIRAL VECTORS.
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
ATE182651T1 (de) 1992-06-09 1999-08-15 Hoppe Ag Riegel und türschloss
US5456909A (en) * 1992-08-07 1995-10-10 T Cell Sciences, Inc. Glycoform fractions of recombinant soluble complement receptor 1 (sCR1) having extended half-lives in vivo
JPH08501085A (ja) 1992-08-26 1996-02-06 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 抗腫瘍剤としてのサイトカインｉｐ−１０の利用
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
WO1994008598A1 (en) 1992-10-09 1994-04-28 Advanced Tissue Sciences, Inc. Liver reserve cells
EP0673431A1 (en) 1992-12-03 1995-09-27 Genzyme Corporation Gene therapy for cystic fibrosis
US5861156A (en) * 1993-01-08 1999-01-19 Creative Biomolecules Methods of delivering agents to target cells
DK0698097T3 (da) 1993-04-29 2001-10-08 Unilever Nv Produktion af antistoffer eller (funktionaliserede) fragmenter deraf afledt af Camelidae-immunoglobuliner med tung kæde
US5856300A (en) * 1994-05-12 1999-01-05 T Cell Sciences, Inc. Compositions comprising complement related proteins and carbohydrates, and methods for producing and using said compositions
US5679546A (en) * 1993-09-24 1997-10-21 Cytomed, Inc. Chimeric proteins which block complement activation
US5627264A (en) * 1994-03-03 1997-05-06 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Chimeric complement inhibitor proteins
CA2186108A1 (en) * 1994-03-23 1995-09-28 Scott A. Rollins Method for reducing immune and hemostatic dysfunctions during extracorporeal circulation
US5534615A (en) * 1994-04-25 1996-07-09 Genentech, Inc. Cardiac hypertrophy factor and uses therefor
US6074642A (en) 1994-05-02 2000-06-13 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of antibodies specific to human complement component C5 for the treatment of glomerulonephritis
WO2000037638A2 (en) 1998-12-22 2000-06-29 Genentech, Inc. Methods and compositions for inhibiting neoplastic cell growth
WO2001004311A1 (en) 1999-07-07 2001-01-18 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US5681736A (en) * 1994-10-05 1997-10-28 Antex Biologics, Inc. Methods for producing enhanced antigenic shigella bacteria and vaccines comprising same
CA2219361C (en) 1995-04-27 2012-02-28 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
JPH11514853A (ja) 1995-09-08 1999-12-21 ジエンザイム コーポレイション 遺伝子治療のための改良されたａａｖベクター
AU5711196A (en) 1996-03-14 1997-10-01 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule i
CA2248868A1 (en) 1996-03-22 1997-09-25 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule ii
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
WO2002008284A2 (en) 2000-07-20 2002-01-31 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis
EP1500329B1 (en) 1996-12-03 2012-03-21 Amgen Fremont Inc. Human antibodies that specifically bind human TNF alpha
US20050197285A1 (en) * 1997-03-07 2005-09-08 Rosen Craig A. Human secreted proteins
US6472520B2 (en) * 1997-03-21 2002-10-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Rat PEG-3 promoter
CN100387621C (zh) 1997-04-14 2008-05-14 麦可麦脱股份公司 抗人抗原受体的新的生产方法及其用途
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
DE69835524T2 (de) * 1997-08-26 2007-04-05 Amgen Fremont Inc. Ein verfahren zur inhibierung der komplementaktivierung über einen alternativen weg
US6410708B1 (en) * 1997-11-21 2002-06-25 Genentech, Inc. Nucleic acids encoding A-33 related antigen polypeptides
US6642051B1 (en) 1997-10-21 2003-11-04 Targeted Genetics Corporation Amplifiable adeno-associated virus(AAV) packaging cassettes for the production of recombinant AAV vectors
EP1992633A1 (en) 1997-11-03 2008-11-19 Human Genome Sciences, Inc. VEGI, an inhibitor of angiogenesis and tumor growth
US6595142B2 (en) 1997-11-13 2003-07-22 M.C.M. Holding A/S Floor for a transport means and profiles for the construction thereof as well as a vehicle provided with such a floor
US8007798B2 (en) * 1997-11-21 2011-08-30 Genentech, Inc. Treatment of complement-associated disorders
US7282565B2 (en) * 1998-03-20 2007-10-16 Genentech, Inc. PRO362 polypeptides
US7419663B2 (en) * 1998-03-20 2008-09-02 Genentech, Inc. Treatment of complement-associated disorders
US7192589B2 (en) * 1998-09-16 2007-03-20 Genentech, Inc. Treatment of inflammatory disorders with STIgMA immunoadhesins
US8088386B2 (en) * 1998-03-20 2012-01-03 Genentech, Inc. Treatment of complement-associated disorders
ES2305608T3 (es) 1997-11-21 2008-11-01 Genentech, Inc. Antigenos tipo a-33 y sus utilizaciones farmacologicas.
CA2320625A1 (en) * 1998-02-09 1999-08-12 Human Genome Sciences, Inc. 45 human secreted proteins
US6956107B2 (en) 1998-02-20 2005-10-18 Tanox, Inc. Inhibitors of complement activation
US7112327B2 (en) * 1998-02-20 2006-09-26 Tanox, Inc. Inhibition of complement activation
ES2312205T3 (es) 1998-03-10 2009-02-16 Genentech, Inc. Nuevo polipeptido y acidos nucleicos que lo codifican.
EP1108019A2 (en) 1998-08-27 2001-06-20 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Protein transport-associated molecules
CA2348757A1 (en) 1998-12-16 2000-06-22 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
KR20010103046A (ko) 1999-03-08 2001-11-17 제넨테크, 인크. 면역 관련 질환 치료용 조성물 및 치료 방법
EP2292761A1 (en) 1999-03-11 2011-03-09 Merck Serono S.A. Vascular adhesion molecules and modulation of their function
US6642353B1 (en) * 1999-03-17 2003-11-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Peptide ligands for the erythropoietin receptor
EP1234030A4 (en) 1999-11-19 2003-05-07 Human Genome Sciences Inc 18 HUMAN SECRETED PROTEINS
CA2391455A1 (en) 1999-12-01 2001-06-07 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6821775B1 (en) * 2000-02-11 2004-11-23 Genvec, Inc. Viral vector encoding pigment epithelium-derived factor
ES2329010T3 (es) 2000-03-23 2009-11-20 Genentech, Inc. Inhibidores anti-c2/c2a de la activacion del complemento.
ES2316446T3 (es) * 2000-04-29 2009-04-16 University Of Iowa Research Foundation Diagnostico y terapeutica para trastornos relacionados con la degeneracion macular.
EP1309620A2 (en) 2000-06-23 2003-05-14 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis
PT1325033E (pt) * 2000-10-10 2010-04-15 Genentech Inc Inibição da activação do complemento c5 para o tratamento e a prevenção da rejeição diferida de um xenoenxertos ou de uma rejeição vascular aguda
GEP20063752B (en) 2000-10-13 2006-02-27 Biogen Inc Humanized Anti-LT-Beta-R Antibodies
US20040077575A1 (en) * 2002-01-11 2004-04-22 Giordano Giovan Giacomo Inhibition of pathological angiogenesis in vivo
US6867189B2 (en) 2001-07-26 2005-03-15 Genset S.A. Use of adipsin/complement factor D in the treatment of metabolic related disorders
JP4958387B2 (ja) * 2001-08-17 2012-06-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃ５ｂの形成を妨害することなくｃ５及びｃ５ａに結合する補体経路阻害剤
AR040778A1 (es) 2002-08-06 2005-04-20 Glaxo Group Ltd Anticuerpos alterados o fragmentos funcionales que se unen a mag (glicoproteina asociada a mielina).
AU2003258714A1 (en) 2002-09-06 2004-03-29 Cytos Biotechnology Ag Immune modulatory compounds and methods
US7816497B2 (en) * 2002-10-30 2010-10-19 University Of Kentucky Compositions and methods for inhibiting drusen complement components C3a and C5a for the treatment of age-related macular degeneration
RU2232991C1 (ru) 2003-04-09 2004-07-20 Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Способ определения функциональной активности фактора d комплемента человека
US7709610B2 (en) 2003-05-08 2010-05-04 Facet Biotech Corporation Therapeutic use of anti-CS1 antibodies
WO2005014849A2 (en) * 2003-07-03 2005-02-17 Euro-Celtique, S.A. Genes associated with responses to neuropathic pain
WO2005025509A2 (en) 2003-09-11 2005-03-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and materials for treating autoimmune diseases and conditions
JP2007527865A (ja) * 2003-09-12 2007-10-04 ザ・レジェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・カリフォルニア 種々の配列を有するタンパク質から形成されたアミロイドに共通の高分子量凝集中間体に特異的なモノクローナル抗体
US20050169921A1 (en) * 2004-02-03 2005-08-04 Leonard Bell Method of treating hemolytic disease
US7794713B2 (en) 2004-04-07 2010-09-14 Lpath, Inc. Compositions and methods for the treatment and prevention of hyperproliferative diseases
JP2008520242A (ja) * 2004-11-18 2008-06-19 イェール ユニバーシティ 視覚障害を処置するための方法および組成物
WO2006071856A2 (en) 2004-12-23 2006-07-06 Glycofi, Inc. Immunoglobulins comprising predominantly a man5glcnac2 glycoform
US8088579B2 (en) * 2005-02-14 2012-01-03 University Of Iowa Research Foundation Complement factor H for diagnosis of age-related macular degeneration
BRPI0617186A2 (pt) * 2005-10-08 2011-07-19 Potentia Pharmaceuticals Inc uso de análogo de compstatina, implante ocular, micropartìcula ou nanopartìcula, composição, composto multivalente, ácido nucléico, vetor de expressão, célula hospedeira recombinante, proteìna de fusão e método de produção e teste
KR20180002911A (ko) 2005-11-04 2018-01-08 제넨테크, 인크. 안질환 치료를 위한 보체 경로 억제제의 용도
US20070190057A1 (en) 2006-01-23 2007-08-16 Jian Wu Methods for modulating mannose content of recombinant proteins
KR20160092061A (ko) * 2006-11-02 2016-08-03 제넨테크, 인크. 인간화 항-ｄ 인자 항체
AR066660A1 (es) * 2007-05-23 2009-09-02 Genentech Inc Prevencion y tratamiento de condiciones del ojo asociadas con su complemento
CR20170001A (es) 2008-04-28 2017-08-10 Genentech Inc Anticuerpos anti factor d humanizados

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1298308A (zh) * 1998-02-20 2001-06-06 泰诺士公司 补体活化的抑制剂
WO2004075837A3 (en) * 2003-02-21 2005-06-02 Tanox Inc Methods for preventing and treating tissue damage associated with ischemia-reperfusion injury

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