CN111630065A - 抗c5抗体组合及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抗C5抗体和抗原结合片段的组合，所述组合已确定相对于单一抗C5抗体或片段具有更高的活性。所述组合包含彼此不会竞争与C5结合的抗C5抗体和抗原结合片段。还提供了包含不竞争和/或结合C5上的相同表位的抗原结合结构域的双特异性抗体。本文提供了与这样的抗C5组合和双特异性抗体有关的组合物和治疗方法。

Description

抗C5抗体组合及其用途

本申请要求2017年12月13日提交的美国临时专利申请号62/598,023的权益，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及包含特异性结合补体因子C5的抗体与抗体的抗原结合片段的组合，及其使用方法。

背景技术

补体系统是一组血浆蛋白，当激活时，其导致靶细胞裂解并通过调理作用促进吞噬作用。补体通过三个主要途径经一系列蛋白水解步骤被激活：通常由免疫复合物激活的经典途径，可以被不受保护的细胞表面诱导的替代途径，以及甘露糖结合凝集素途径。补体级联的所有三个途径都集中于补体组分5(C5)蛋白的蛋白水解切割。补体组分5(C5)的切割导致产生片段C5a和C5b，该过程在补体级联的激活过程中是至关重要的。C5a可通过与其受体结合而产生多效生理反应(Monk et al.2007，Br.J.Pharmacol.152：429-448)。C5a是有效的促炎介质，其诱导趋化性迁移，增强细胞粘附，刺激氧化爆发并诱导多种炎症介质(例如组胺或细胞因子)的释放。C5b介导膜攻击复合物(MAC，或C5b-9)的形成，在补体依赖性细胞毒性(CDC)的晚期阶段的导致细胞裂解。此外，在对C5b-9的细胞溶解具有抗性的有核细胞中，亚溶解量的C5b-9可引起细胞活化，导致细胞增殖、促炎介质的产生和细胞外基质的产生。

针对C5的单克隆抗体是本领域已知的，并且已经描述在例如以下中：美国专利/公开号9206251、9107861、9079949、9051365、8999340、8883158、8241628、7999081、7432356、7361339、7279158、6534058、6355245、6074642、20150299305、20160051673、20160031975、20150158936、20140056888、20130022615、20120308559，以及WO2017218515、WO2015198243、WO2015134894、WO2015120130、EP2563813B1、EP2328616B1和EP2061810B1。

具有高亲和力和生物活性的抗C5抗体是已知的；然而，生物活性的改善可得到对患有C5相关疾病和障碍的对象的更有效的疗法。

发明内容

已经鉴定了显示出令人惊讶和出乎意料的生物活性水平(例如，减少红细胞(RBC)裂解)的抗C5抗体和抗原结合片段的特定组合。彼此不竞争C5结合的抗C5抗体和片段的组合导致RBC裂解的减少，超过与单一抗C5抗体或片段相关的减少。本文提供了与这样的抗C5组合有关的组合物和治疗方法。

本发明提供了一种组合(例如试剂盒)，其包含：与C5特异性结合的第一抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)；以及一种或更多种另外的抗原结合蛋白(例如多肽(例如，coversin)或抗体(例如，依库珠单抗)或其抗原结合片段)，其(i)在与所述抗原结合蛋白的表位不同的表位处与C5特异性结合；和/或(ii)不与第一抗原结合蛋白竞争结合C5。可以将第一抗原结合蛋白和另外的抗原结合蛋白共配制为单一药物制剂(例如，具有可药用载体)或配制为分开的制剂(例如，各自具有可药用载体)。在本发明的一个实施方案中，第一抗原结合蛋白和/或其一种或更多种另外的抗原结合蛋白在预填充的注射装置(例如，预填充的注射器或预填充的自动注射器)或容器中。例如，在本发明的一个实施方案中，第一抗原结合蛋白(例如抗体)包含含有SEQ ID NO：19中所示的氨基酸序列的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，以及含有SEQ ID NO：27中所示的氨基酸序列的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在本发明的一个实施方案中，另外的抗原结合蛋白(例如抗体或抗原结合片段)包含：(i)含有SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，以及含有SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；(ii)含有SEQ ID NO：35中所示的氨基酸序列的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，以及含有SEQ ID NO：43中所示的氨基酸序列的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；(iii)含有SEQ ID NO：51中所示的氨基酸序列的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，以及含有SEQ ID NO：59中所示的氨基酸序列的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；(iv)含有SEQ ID NO：67中所示的氨基酸序列的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，以及含有SEQ ID NO：75中所示的氨基酸序列的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；(v)含有SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，以及含有SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；和/或(vi)含有SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，以及含有SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在本发明的一个实施方案中，第一抗原结合蛋白(例如抗体或片段)包含重链可变区，所述重链可变区包含：含有SEQ ID NO：21中所示的氨基酸序列的CDR-H1，含有SEQ ID NO：23中所示的氨基酸序列的CDR-H2，和含有SEQ ID NO：25中所示的氨基酸序列的CDR-H3，以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：含有SEQ ID NO：29中所示的氨基酸序列的CDR-L1，含有SEQ ID NO：31中所示的氨基酸序列的CDR-L2，和含有SEQ ID NO：33中所示的氨基酸序列的CDR-L3。在本发明的一个实施方案中，所述另外的抗原结合蛋白膜蛋白(例如抗体或片段)包含重链可变区，所述重链可变区包含：(i)含有SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列的CDR-H1，含有SEQ ID NO：7中所示的氨基酸序列的CDR-H2，和含有SEQ ID NO：9中所示的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：含有SEQ ID NO：13中所示的氨基酸序列的CDR-L1，含有SEQ ID NO：15中所示的氨基酸序列的CDR-L2，和含有SEQID NO：17中所示的氨基酸序列的CDR-L3；(ii)重链可变区，所述重链可变区包含：含有SEQID NO：37中所示的氨基酸序列的CDR-H1，含有SEQ ID NO：39中所示的氨基酸序列的CDR-H2，和含有SEQ ID NO：41中所示的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：含有SEQ ID NO：45中所示的氨基酸序列的CDR-L1，含有SEQ ID NO：47中所示的氨基酸序列的CDR-L2，和含有SEQ ID NO：49中所示的氨基酸序列的CDR-L3；(iii)重链可变区，所述重链可变区包含：含有SEQ ID NO：53中所示的氨基酸序列的CDR-H1，含有SEQ ID NO：55中所示的氨基酸序列的CDR-H2，和含有SEQ ID NO：57中所示的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：含有SEQ ID NO：61中所示的氨基酸序列的CDR-L1，含有SEQ ID NO：63中所示的氨基酸序列的CDR-L2，和含有SEQ ID NO：65中所示的氨基酸序列的CDR-L3；(iv)重链可变区，所述重链可变区包含：含有SEQ ID NO：69中所示的氨基酸序列的CDR-H1，含有SEQ ID NO：71中所示的氨基酸序列的CDR-H2，和含有SEQ ID NO：73中所示的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含：含有SEQ ID NO：77中所示的氨基酸序列的CDR-L1，含有SEQ ID NO：79中所示的氨基酸序列的CDR-L2，和含有SEQ IDNO：81中所示的氨基酸序列的CDR-L3；(v)含有SEQ ID NO：89中所示的氨基酸序列的CDR-H1，含有SEQ ID NO：91中所示的氨基酸序列的CDR-H2，含有SEQ ID NO：93中所示的氨基酸序列的CDR-H3；含有SEQ ID NO：97中所示的氨基酸序列的CDR-L1，含有SEQ ID NO：99中所示的氨基酸序列的CDR-L2，和含有SEQ ID NO：101中所示的氨基酸序列的CDR-L3；或(vi)含有SEQ ID NO：105中所示的氨基酸序列的CDR-H1，含有SEQ ID NO：107中所示的氨基酸序列的CDR-H2，含有SEQ ID NO：109中所示的氨基酸序列的CDR-H3；含有SEQ ID NO：97中所示的氨基酸序列的CDR-L1，含有SEQ ID NO：99中所示的氨基酸序列的CDR-L2，和含有SEQ IDNO：101中所示的氨基酸序列的CDR-L3。在本发明的一个实施方案中，所述组合包含任选的另外的治疗剂。例如，在本发明的一个实施方案中，另外的治疗剂是一种或更多种抗C5抗体，例如H2M11683N；H2M11686N；H4H12159P；H4H12163P；H4H12164P；H4H12166P2；H4H12166P3；H4H12166P4；H4H12166P5；H4H12166P6；H4H12166P7；H4H12166P8；H4H12166P9；H4H12166P10；H4H12167P；H4H12168P；H4H12169P；H4H12176P2；H4H12177P2；H4H12183P2；H2M11682N；H2M11684N；H2M11694N；或H2M11695N，或者包含V_H和/或V_L的抗体或抗原结合片段；或和/或其CDR-H和/或CDR-L(参见2017年6月13日提交的国际专利申请号PCT/US2017/037226)；或前述任一种的抗原结合片段(不是组合中的第一或第二/另外的抗体或抗原结合片段)。在本发明的一个实施方案中，另外的治疗剂是依库珠单抗(eculizumab)或coversin(如果还不是组合的组分的话)、铁、抗胸腺细胞球蛋白、生长因子、抗凝剂、凝血酶抑制剂、抗炎药、抗高血压药、免疫抑制剂、纤维蛋白溶解剂、降脂剂、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、抗CD20剂、抗TNFα剂、抗癫痫剂(anti-seizure agent)、C3抑制剂、抗血栓剂、华法林、阿司匹林、肝素、苯茚二酮、磺达肝癸钠、艾卓肝素、阿加曲班、来匹卢定、比伐卢定或达比加群、皮质类固醇和非甾体抗炎药、长春新碱、环孢菌素A、氨甲喋呤、安克洛酶、ε-氨基己酸、纤溶酶抑制剂a1、前列环素、去纤苷、利妥昔单抗和硫酸镁。

本发明提供了双特异性或双互补位(biparatopic)抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段(例如IgG))，其包含在第一表位处与C5(例如人C5)结合的第一抗原结合结构域(例如，来自H4H12166P抗体的一个抗原结合结构域)，以及第二抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域(i)在与第一抗原结合结构域的表位不同的第二表位处与C5特异性结合，和/或(ii)不与第一抗原结合结构域竞争结合C5(例如，来自依库珠单抗、H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2或H4H12177P2抗体，例如H4H12176P2xH4H12177P2)，或者包含可药用载体的其药物组合物。本发明还提供了用于在需要这样的治疗或预防的对象(例如哺乳动物，例如人)对象中治疗或预防C5相关疾病或病症或者在对象中抑制经典补体途径和替代补体途径(分别为CP和AP)二者的方法，其包括向所述对象施用(例如皮下、静脉内、皮内、腹膜内、经口、肌内或颅内)有效量的本发明的组合(和任选地一种或更多种另外的治疗剂，例如本文所讨论的)。这样的疾病或病症可以是例如急性呼吸窘迫综合征；成人呼吸窘迫综合征；年龄相关性黄斑变性；变态反应；奥尔波特综合征；阿尔茨海默病；哮喘；哮喘；动脉粥样硬化；非典型溶血性尿毒症综合征；自身免疫性疾病；由球囊血管成形术引起的补体激活；支气管收缩；大疱性类天疱疮；烧伤；C3肾小球病；毛细血管渗漏综合征；化学性损伤；慢性阻塞性肺病；克罗恩病；糖尿病；糖尿病性黄斑水肿；糖尿病肾病；糖尿病视网膜病变；呼吸困难；肺气肿；癫痫；纤维化粉尘疾病；冻疮；地理性萎缩；肾小球病；肺出血肾炎综合征；吉兰-巴雷综合征；血液透析引起的补体激活；血液透析并发症；溶血性贫血；咯血；遗传性血管性水肿；超急性同种异体移植排斥；超敏性肺炎；免疫复合物疾病；免疫复合物相关炎症；自身免疫性疾病的炎症；炎性疾病；遗传性CD59缺陷；惰性粉尘和/或矿物质引起的损伤；IL-2治疗期间白介素2诱导的毒性；狼疮性肾炎；膜增生性肾小球肾炎；膜增生性肾炎；主动脉重建后肠系膜动脉再灌注；感染性疾病后肠系膜动脉再灌注；脓毒症后肠系膜动脉再灌注；多发性硬化症；重症肌无力；心肌梗死；视神经脊髓炎；视神经脊髓炎；肥胖；眼血管生成；有机粉尘病；寄生虫病；帕金森病；阵发性夜间血红蛋白尿；肺炎；缺血后再灌注病症；心肺搭桥或肾脏搭桥的泵后综合征；进行性肾衰竭；蛋白尿性肾病；银屑病；肺栓塞和梗死；肺纤维化；肺血管炎；肾缺血；肾缺血再灌注损伤；肾移植；类风湿关节炎；精神分裂症；烟雾损伤；中风；中风；系统性红斑狼疮；系统性红斑狼疮肾炎；热损伤；热损伤；创伤性脑损伤；葡萄膜炎；血管炎；和异种移植排斥。例如，在本发明的一个实施方案中，方法包括向对象施用特异性结合C5的第一抗原结合蛋白和特异性结合C5的第二抗原结合蛋白；其中例如在本文讨论的条件下，第一和第二抗原结合蛋白：(a)与C5上不同的、不重叠的表位结合；和/或(b)在例如本文讨论的条件下彼此不竞争结合C5。

本发明的试剂盒也可以通过包括以下步骤的方法制备：共包装第一抗C5抗原结合蛋白(例如抗体或片段)和一种或更多种所述另外的抗C5抗原结合蛋白(例如多肽、抗体或片段)以及任选地一种或更多种另外的治疗剂。作为这种方法的产物的试剂盒也是本发明的一部分。

本发明的共制剂可以通过包括以下步骤的方法制备：将所述第一抗原结合蛋白(例如抗体或片段)和一种或更多种所述另外的抗原结合蛋白(例如多肽、抗体或片段)和任选地一种或更多种另外的治疗剂以及可药用载体共配制(例如混合)成单一药物制剂。作为这种方法的产物的共制剂也是本发明的一部分。

附图说明

图1A是显示在血清和抗C5抗体H4H12166P、H4H12170P、H4H12161P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2或H4H12177P2的存在下红细胞溶血的图。图1B是显示在血清和组合H4H12166P+H4H12170P、H4H12166P+H4H12161P、H4H12166P+H4H12171P、H4H12166P+H4H12175P、H4H12166P+H4H12176P2或H4H12166P+H4H12177P2的存在下红细胞溶血的图。

图2A是显示在25％血清和H4H12166P、H4H12161P或H4H12166P+H4H12161P的存在下孵育30或120分钟的红细胞溶血的图。图2B是显示在25％或48％血清存在下与H4H12166P、H4H12161P或H4H12166P+H4H12161P孵育120分钟的红细胞溶血的图。

图3.在血清和H4H12166P、H4H12170P Fab或H4H12166P+H4H12170P Fab的存在下孵育30或120分钟的红细胞溶血。

图4.在血清和H4H12176P2、H4H12177P2或H4H12176P2+H4H12177P2的存在下孵育30分钟的红细胞溶血。

图5A是显示在血清和H4H12170P、H4H12159P或H4H12170P+H4H12159P的存在下孵育30分钟的红细胞溶血的图；图5B是显示在血清和H4H12175P、H4H12177P2或H4H12175P+H4H12177P2的存在下孵育30分钟的红细胞溶血的图；图5C是显示在血清和H4H12176P2、H4H12164P2或H4H12176P2+H4H12164P2的存在下孵育30分钟的红细胞溶血的图；图5D是显示在血清和H4H12167P、H4H12163P或H4H12167P+H4H12163P的存在下孵育30分钟的红细胞溶血的图。

图6.在单独或与C3蛋白组合的H4H12166P、H4H12161P的存在下红细胞的溶血。

图7.在H4H12166P、H4H12161P或H4H12166P+H4H12161P的存在下C5a的产生。

图8.溶血测定；用25％正常人血清孵育30分钟的替代补体途径。

图9.溶血测定；25％C5缺乏的正常人血清的替代补体途径；145nM C5加回和抗体与C5的多种比例。

图10A和图10B是显示溶血测定的图；25％C5缺乏的正常人血清的替代补体途径；125nM C5加回和双特异性抗C5抗体与C5的多种比例。

图11.在没有第二抗体的情况下H4H12166P∶C5复合物(mAb∶C5：：1m∶1μm)的A4F-MALLS分析。

图12.具有第二抗体(mAb2)H4H12175P或H4H12177P2的H4H12166P∶C5复合物(mAb1∶mAb2∶C5：：0.5.μm∶0.5μm∶1μm比例)的A4F-MALLS分析。

图13.H4H12166P∶H4H12161P∶hC5、H4H12166P∶H4H12176P2∶hC5、和H4H12176P2∶H4H12177P2∶hC5复合物(mAb1∶mAb2∶C5：：0.5.μm∶0.5μm∶1μm比例)的A4F-MALLS分析。

图14.具有第二抗体H4H12170P的H4H12166P∶C5复合物(mAb1∶mAb2∶C5：：0.5.μm∶0.5μm∶1μm比例)的A4F-MALLS分析。

图15.具有第二抗体H4H12171P的H4H12166P∶C5复合物(mAb1∶mAb2∶C5：：0.5.μm∶0.5μm∶1μm比例)的A4F-MALLS分析。

图16.多种比例的H4H12176P2xH4H12177P2∶C5复合物(mAb∶C5：：3∶1、1∶1或1∶3)的A4F-MALLS分析。

具体实施方式

在描述本发明的方法之前，应当理解，本发明不限于所描述的特定方法和实验条件，因为这些方法和条件可以变化。还应理解，本文中使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，而并非旨在进行限制，因为本发明的范围将仅由所附权利要求限制。

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管类似于或等同于本文描述的那些方法和材料的任何方法和材料都可以用于本发明的实践或测试中，但是现在描述优选的方法和材料。本文提及的所有专利、申请和出版物均通过引用整体并入本文。

定义

如本文所用，术语“表面等离子体共振”是指一种光学现象，其允许例如使用BIACORE^TM系统(Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden and Piscataway，N.J.)通过检测生物传感器基质内蛋白质浓度的变化来分析实时生物分子相互作用。

如本文所用，术语“KD”意指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。

序列同一性是指当两个序列最佳比对时，两个多肽的氨基酸在等效位置相同的程度。序列相似性包括相同的残基和不同的生化相关的氨基酸。具有类似化学性质的侧链的氨基酸组的实例包括：1)脂族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；2)脂族羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；3)含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；4)芳香族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，以及7)含硫侧链：半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸替换组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸，苯丙氨酸-酪氨酸，赖氨酸-精氨酸，丙氨酸-缬氨酸，谷氨酸-天冬氨酸，和天冬酰胺-谷氨酰胺。或者，保守替换是在Gonnet et al.(1992)Science 256：144345(通过引用并入本文)中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何改变。“中等保守”替换是在PAM250对数似然矩阵中具有非负值的任何改变。

多肽(例如免疫球蛋白链或CDR)的“变体”是指当通过BLAST算法进行比较时，包含与本文中所示的参考氨基酸序列至少约70-99.9％(例如，70％、72％、74％、75％、76％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％)相同或相似的氨基酸序列的多肽，其中选择算法的参数以在相应参考序列的整个长度上给出相应序列之间的最大匹配(例如，预期阈值：10；字长：3；查询范围内的最大匹配：0；BLOSUM62矩阵；缺口罚分：存在11，延伸1；条件组成评分矩阵调整)。

多核苷酸的“变体”是指当通过BLAST算法进行比较时，包含与本文中所示的参考核苷酸序列至少约70-99.9％(例如，70％、72％、74％、75％、76％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％)相同的核苷酸序列的多核苷酸，其中选择算法的参数以在相应参考序列的整个长度上给出相应序列之间的最大匹配(例如，预期阈值：10；字长：28；查询范围内的最大匹配：0；匹配/不匹配评分：1、-2；缺口罚分：线性)。

以下参考文献涉及经常用于序列分析的BLAST算法：BLAST ALGORITHMS：Altschulet al.(2005)FEBS J.272(20)：5101-5109；Altschul，S.F.，et al.，(1990)J.Mol.Biol.215：403-410；Gish，W.，et al.，(1993)Nature Genet.3：266-272；Madden，T.L.，et al.，(1996)Meth.Enzymol.266：131-141；Altschul，S.F.，et al.，(1997)NucleicAcids Res.25：3389-3402；Zhang，J.，et al.，(1997)Genome Res.7：649-656；Wootton，J.C.，et al.，(1993)Comput.Chem.17：149-163；Hancock，J.M.et al.，(1994)Comput.Appl.Biosci.10：67-70；ALIGNMENT SCORING SYSTEMS：Dayhoff，M.O.，et al.，″Amodel of evolutionary change in proteins.″in Atlas of Protein Sequence andStructure，(1978)vol.5，suppl.3.M.O.Dayhoff(ed.)，pp.345-352，Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，D.C.；Schwartz，R.M.，et al.，″Matrices fordetecting distant relationships.″in Atlas of Protein Sequence and Structure，(1978)vol.5，suppl.3.″M.O.Dayhoff(ed.)，pp.353-358，Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，D.C.；Altschul，S.F.，(1991)J.Mol.Biol.219：555-565；States，D.J.，etal.，(1991)Methods 3：66-70；Henikoff，S.，et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915-10919；Altschul，S.F.，et al.，(1993)J.Mol.Evol.36：290-300；ALIGNMENTSTATISTICS：Karlin，S.，et al.，(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：2264-2268；Karlin，S.，et al.，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5873-5877；Dembo，A.，et al.，(1994)Ann.Prob.22：2022-2039；以及Altschul，S.F.″Evaluating the statisticalsignificance of multiple distinct local alignments.″in Theoretical andComputational Methods in Genome Research(S.Suhai，ed.)，(1997)pp.1-14，Plenum，NY。

如本文所用，术语“对象”是指例如需要改善、预防和/或治疗C5相关疾病或病症(例如非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)或阵发性夜间血红蛋白尿(PNH))的动物，优选哺乳动物，更优选人。该术语包括患有或有患这种疾病或病症的风险的人对象。

如本文所用，“组合”是指作为抗C5抗原结合蛋白的第一组分(例如抗体或抗原结合片段)与作为抗C5抗原结合蛋白的一种或更多种另外的组分(例如抗体、抗原结合片段或多肽)的搭配(例如H4H12166P与以下中的一种：H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2或H4H12177P2)。这样的搭配可以在包含两种组分的单一液体(例如，水性)或干燥(例如，冻干)组合物(例如药物组合物)中。搭配可以是在两个或更多个独立的容器或装置中包含每种组分的试剂盒。关于结合本文讨论的治疗或预防方法使用的组合，组合中的每种组分可以在与施用另一组分的时间不同的时间施用于对象；例如，可以以给定时间内的间隔不同时(例如，分别地或顺序地)给予每次施用。此外，分开的组分可以通过相同或不同的途径施用于对象，例如其中抗C5抗体经皮下施用，而另一种抗C5抗体经静脉内施用。在本发明的一个实施方案中，组合的组分位于共同的分子(例如在多个表位处结合C5的多特异性分子(例如双特异性))中。例如，两种抗C5抗体或抗原结合片段的组合包括双特异性或双互补位抗体或片段，其具有与C5上的第一表位结合的第一抗原结合结构域，以及与C5上的第二、不同的表位结合并且不与第一抗原结合结构域竞争结合C5的第二抗原结合结构域(例如，如本文进一步讨论的)。

C5

本发明涉及包含与C5(“补体组分5”或“补体因子5”)，例如人C5结合的抗原结合蛋白(例如抗体和抗原结合片段)的组合(例如H4H12166P与以下中的一种：H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2或H4H12177P2)。

C5基因编码补体系统的组分，补体系统是先天免疫系统的一部分，其在炎症、宿主体内稳态和宿主对病原体的防御中起重要作用。C5基因产物经过蛋白水解处理产生多种蛋白质产物，包括C5α链、C5β链、C5a过敏毒素和C5b。C5蛋白包含通过二硫键连接的C5α和β链。

全长C5蛋白的氨基酸序列由GenBank中作为登录号NP_001726.2(SEQ ID NO：1)提供的氨基酸序列示例。术语“C5”包括重组C5蛋白或其片段(例如，缺少N端信号肽的成熟片段)。该术语还涵盖与例如组氨酸标签、小鼠或人Fc或信号序列(例如ROR1)偶联的C5蛋白或其片段。该术语还包括包含与具有R885H变化或R885C变化的全长C5蛋白的第19-19676位氨基酸残基偶联的C末端组氨酸标签的蛋白质变体。在本发明的一个实施方案中，人C5包含SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列。

抗C5抗体、片段和多肽

本发明提供了组合，其包含与C5特异性结合的第一抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)，以及一种或更多种另外的抗原结合蛋白(例如，多肽或抗体或其抗原结合片段)，所述另外的抗原结合蛋白(i)在与第一抗原结合蛋白的表位不同的表位处与C5特异性结合；和/或(ii)不与第一抗原结合蛋白竞争结合C5(例如H4H12166P与以下中的一种：H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2或H4H12177P2)。

抗C5“抗原结合蛋白”是与C5多肽特异性结合的多肽或者多于一种多肽的复合物(例如四聚体IgG抗体)，例如抗C5抗体或抗原结合片段。

例如，本发明包括组合，其包含抗体H4H12166P(或其抗原结合片段)，以及选自以下的任一种或更多种抗体(或其抗原结合片段)：H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2和H4H12177P2；或依库珠单抗(作为“Soliris”出售)；或者多肽非洲钝缘蜱(Ornithodoros moubata)OmCI(或其变体)或EV576(coversin)。参见国际专利申请公开号WO2004106369或美国专利申请公开号US20170065677或WO2007028968。

如本文所用，术语“抗体”是指作为以下的抗原结合蛋白：免疫球蛋白分子，其包含通过二硫键相互连接的四条多肽链，两条重(H)链和两条轻(L)链(即，“完整抗体分子”)，及其多聚体(例如IgM)或其抗原结合片段。每条重链包含重链可变区(“HCVR”或“V_H”)和重链恒定区(包含结构域C_H1、C_H2和C_H3)。每条轻链包含轻链可变区(“LCVR”或“V_L”)和轻链恒定区(C_L)。V_H和V_L区可以进一步细分为高变区，称为“互补决定区”(CDR)，其间间插着更为保守的区，称为框架区(FR)。每个V_H和V_L由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。在本发明的某些实施方案中，抗体(或其抗原结合片段)的FR可以与人种系序列相同，或者可以是天然或人工修饰的。

本发明包括作为多特异性(例如双特异性)抗原结合蛋白(例如抗体及其抗原结合片段)的组合，其包含在第一表位处与C5结合的第一抗原结合结构域，以及第二抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域(i)在与第一抗原结合结构域的表位不同的第二表位处与C5特异性结合，和/或(ii)不与第一抗原结合结构域竞争结合C5(或者，如果第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域在测试竞争的不同单特异性(例如二价IgG)蛋白(例如抗体)中，则不竞争)。只要分子与相同抗原(C5)内的两个表位结合，双特异性抗原结合蛋白(例如抗体)也可以称为双互补位。例如，在本发明的一个实施方案中，第一抗原结合结构域包含H4H12166P的重链和轻链CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)或V_H和V_L或重链和轻链；并且第二抗原结合结构域包含H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2或H4H12177P2的重链和轻链CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)或V_H和V_L或重链和轻链。例如，在本发明的一个实施方案中，双互补位抗原结合蛋白(例如抗体或抗原结合片段)是双特异性IgG形式(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(例如，具有Ser228Pro突变))，其为包含两个重链/轻链对的四聚体。在本发明的一个实施方案中，另外将双互补位抗原结合蛋白(例如抗体或片段)与一个或更多个另外的抗原结合免疫球蛋白(例如，另外的C5结合免疫球蛋白)或另外的多肽(例如，coversin)连接。本发明还提供了与多肽(例如coversin)连接的抗C5抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)，所述多肽在与抗原结合蛋白(例如抗体或片段)的表位不同的表位处与C5结合，和/或不与抗原结合蛋白(例如抗体或片段)竞争结合C5。在本发明的一个实施方案中，双特异性抗原结合蛋白是完整双特异性抗体(例如IgG抗体)的F(ab’)₂，例如双特异性IgG抗体的胃蛋白酶切割产物。在本发明的一个实施方案中，双特异性抗原结合蛋白是二价/双特异性scFv，其包含与第一C5表位结合的V_L和V_H，它们连接(例如，通过接头(例如肽接头))至与第二C5表位结合的第二V_L和V_H。

本文讨论的抗体和抗原结合片段可以根据其重链恒定结构域的氨基酸序列分为不同的类别。免疫球蛋白有至少五个主要类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4；IgA1和IgA2。人重链恒定区可以是具有Ser228Pro突变的γ-4(IgG4)(Schuurman，J et al.，Mol.Immunol.38：1-8，2001)。抗体或抗原结合片段可包含轻链恒定区，例如人轻链恒定区(例如λ或κ人轻链区)。本文讨论的抗C5抗体和抗原结合片段V_H链可以与本文讨论的任何重恒定链连接。本文讨论的抗C5抗体和抗原结合片段V_L链可以与本文讨论的任何轻恒定链连接。

本文讨论的抗体和抗原结合片段可包含本文示出的V_H和/或V_L和经修饰的Fc。这样的Fc修饰的非限制性实例包括例如在位置250处的修饰(例如，E或Q)；250和428(例如，L或F)；252(例如，L/Y/F/W或T)、254(例如，S或T)和256(例如，S/R/Q/E/D或T)；或位置428和/或433(例如，H/L/R/S/P/Q或K)和/或434(例如，A、W、H、F或Y[N434A、N434W、N434H、N434F或N434Y])处的修饰；或在位置250和/或428处的修饰；或在位置307或308(例如308F，V308F)和434处的修饰。在一个实施方案中，修饰包括428L(例如，M428L)和434S(例如，N434S)修饰；428L、259I(例如，V259I)和308F(例如，V308F)修饰；433K(例如，H433K)和434(例如，434Y)修饰；252、254和256(例如，252Y、254T和256E)修饰；250Q和428L修饰(例如T250Q和M428L)；以及307和/或308修饰(例如308F或308P)。在又一个实施例中，修饰包括265A(例如，D265A)和/或297A(例如，N297A)修饰。在本发明的一个实施方案中，组合包含一种或更多种抗C5抗体或抗原结合片段，其包含Fc结构域，所述Fc结构域包含选自以下的一对或更多对或者一组或更多组突变：250Q和248L(例如，T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如，M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如，M428L和N434S)；257I和311I(例如，P257I和Q311I)；257I和434H(例如，P257I和N434H)；376V和434H(例如，D376V和N434H)；307A、380A和434A(例如，T307A、E380A和N434A)；以及433K和434F(例如，H433K和N434F)。在本发明的范围内考虑了本文公开的抗体可变结构域内的前述Fc结构域突变和其他突变的所有可能的组合。

免疫球蛋白链内CDR的鉴定是本领域众所周知的。在本发明的一个实施方案中，每个结构域的氨基酸分配是根据以下中的定义：Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，Kabat，et al.；National Institutes of Health，Bethesda，Md.；5^th ed.；NIHPubl.No.91-3242(1991)；Kabat(1978)Adv.Prot.Chem.32：1-75；Kabat，et al.，(1977)J.Biol.Chem.252：6609-6616；Chothia，et al.，(1987)J Mol.Biol.196：901-917 orChothia，et al.，(1989)Nature 342：878-883。因此，在本发明的一个实施方案中，当提及给定免疫球蛋白链中的CDR时，可以使用以上引用的任何惯例和方法来鉴定所述CDR。

本发明涉及包含本文具体示出的序列的抗C5抗体和抗原结合片段和多肽，及其变体。与本文示出的相应特定序列相比，本文公开的抗C5抗体或片段的变体可以在重链和/或轻链可变结构域的框架区和/或CDR区(例如在CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3中的任一个或更多个)中包含一个或更多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸替换、插入和/或缺失。在本发明的一个实施方案中，抗C5抗体或片段的变体具有一个或更多个保守替换；例如相对于本文具体公开的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一个，具有具例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等保守氨基酸替换的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列。在本发明的一个实施方案中，抗C5抗体、片段或多肽是变体，当通过BLAST算法进行比较时，其包含与本文中所示的参考氨基酸序列至少约70-99.9％(例如，70％、72％、74％、75％、76％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％)相同或相似的多肽(例如，免疫球蛋白重链和/或轻链可变区)氨基酸序列，其中选择算法的参数以在相应参考序列的整个长度上给出相应序列之间的最大匹配(例如，预期阈值：10；字长：3；查询范围内的最大匹配：0；BLOSUM 62矩阵；缺口罚分：存在11，延伸1；条件组成评分矩阵调整)。在本发明的一个实施方案中，这样的变体保留了结合C5的能力。

在本发明的一个实施方案中，抗C5抗体或抗原结合片段包含重链，所述重链包含与SEQ ID NO：3、19、35、51、67、82、84、87或103中所示的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸，和/或轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO：11、27、43、59、75、83、85或95中所示的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸。例如，在本发明的一个实施方案中，尽管免疫球蛋白链相对于参考免疫球蛋白链氨基酸序列的整体序列同一性小于100％，但是免疫球蛋白链包含与参考免疫球蛋白链中的CDR 100％相同的CDR1、CDR2和CDR3。

本发明还涉及包含人抗C5抗原结合蛋白(例如抗体及其抗原结合片段)的组合。如本文所用，术语“人抗体”包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人mAb可以例如在CDR中，特别是在CDR3中包含不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外的随机或位点特异性诱变或通过体内的体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”未旨在包括其中已经将来源于另一哺乳动物物种(例如，小鼠)种系的CDR序列接枝到人FR序列上的mAb。该术语包括在非人哺乳动物或非人哺乳动物的细胞中重组产生的抗体。该术语未旨在包括从人对象中分离或产生的抗体。在转基因小鼠中产生人抗体的方法是本领域已知的。任何这样的已知方法均可用于本发明的上下文中以制备与C5蛋白特异性结合的人抗体。使用

技术(例如，参见US 6,596,541，Regeneron Pharmaceuticals，

)或任何其他已知的产生单克隆抗体的方法，可以首先分离具有人可变区和小鼠恒定区的C5高亲和力嵌合抗体。

技术涉及产生转基因小鼠，其基因组包含可操作地连接至内源小鼠恒定区基因座的人重链和轻链可变区，从而使小鼠响应于抗原刺激产生包含人可变区和小鼠恒定区的抗体。可以分离编码抗体的重链和轻链可变区的DNA，并与编码人重链和轻链恒定区的DNA有效连接。然后可以在能够表达完全人抗体的细胞中表达DNA。通常，用目标抗原攻击

小鼠，并且从表达抗体的小鼠中回收淋巴细胞(例如B细胞)。可将淋巴细胞与骨髓瘤细胞系融合以制备永生化杂交瘤细胞系，并且筛选和选择这样的杂交瘤细胞系以鉴定产生对目标抗原具有特异性的抗体的杂交瘤细胞系。可以分离编码重链和轻链可变区的DNA，并连接至重链和轻链的期望同型恒定区。可以在诸如CHO细胞的细胞中产生这样的抗体蛋白。或者，可直接从抗原特异性淋巴细胞分离编码抗原特异性嵌合抗体或轻链和重链可变结构域的DNA。

本发明还涉及包含重组抗C5抗原结合蛋白(例如抗体及其抗原结合片段)的组合。如本文所用，术语“重组”是指通过本领域已知为重组DNA技术(其包括例如DNA剪接和转基因表达)的技术或方法产生、表达、分离或获得的本发明的抗体或其抗原结合片段。该术语是指在非人哺乳动物(包括转基因非人哺乳动物，例如转基因小鼠)或细胞(例如CHO细胞)表达系统中表达或分离自重组人抗体文库的抗原结合蛋白，例如抗体。参见，例如，美国专利号4816567、6331415和7923221。

本发明还涉及包含阻断或中和抗C5抗原结合蛋白(例如抗体及其抗原结合片段和多肽)的组合。如本所用，“阻断”或“中和”抗原结合蛋白，例如抗体、片段或多肽(或者“中和C5活性”的抗体、片段或多肽，或“拮抗剂”抗体、片段或多肽)意指其与C5的结合导致C5的至少一种生物学活性被抑制的蛋白质。例如，本发明的抗体可以例如通过经典途径或替代途径预防或阻断补体介导的溶血(例如红细胞的)。

本发明还涉及包含作为抗体的抗原结合片段的抗C5抗原结合蛋白的组合。如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括与抗原特异性结合以形成复合物的除完全抗体以外的天然存在的、可酶促获得的、合成的或基因工程的多肽或糖蛋白。如本文所用，术语抗体的“抗原结合片段”或“抗体片段”是指保留与C5蛋白结合的能力的抗体的一个或更多个片段，抗原结合片段包括(i)Fab片段；(ii)F(ab′)₂片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；以及(vii)包含模拟抗体的高变区(例如，分离的互补决定区(CDR)，例如CDR3肽)的氨基酸残基的最小识别单元，或受约束的FR3-CDR3-FR4肽。本文使用的表达“抗原结合片段”还涵盖其他工程改造的分子，例如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失的抗体、嵌合抗体、CDR接枝抗体、双抗体、三抗体、四抗体、迷你抗体(minibody)、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小模块化免疫药物(small modular immunopharmaceutical，SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域。在某些实施方案中，术语“抗原结合片段”是指多特异性抗原结合分子的多肽片段。可以使用任何合适的标准技术，例如蛋白水解消化或涉及编码抗体可变区和(任选地)恒定区的DNA的操作和表达的重组基因工程技术，例如从完全抗体分子得到抗体的抗原结合片段。这样的DNA是已知的和/或可容易地从例如商业来源、DNA文库(包括例如噬菌体-抗体文库)获得，或者可以合成。可以对DNA进行测序并且通过化学方法或使用分子生物学技术进行操作，例如将一个或更多个可变和/或恒定结构域排列成合适的构型，或引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或缺失氨基酸等。

在本发明的一个实施方案中，抗体的抗原结合片段包含至少一个可变结构域。可变结构域可以具有任何大小或氨基酸组成，并且通常将包含至少一个CDR，其与一个或更多个框架序列相邻或符合读框。在具有与V_L结构域缔合的V_H结构域的抗原结合片段中，V_H和V_L结构域可以以任何合适的排列相对于彼此定位。例如，可变区可以是二聚体并且包含V_H-V_H、V_H-V_L或V_L-V_L二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可以包含单体V_H或V_L结构域。

在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段包含与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可存在于本发明抗体的抗原结合片段内的可变和恒定结构域的非限制性示例性配置包括：

(i)V_H-C_H1；

(ii)V_H-C_H2；

(iii)V_H-C_H3；

(iv)V_H-C_H1-C_H2；

(v)V_H-C_H1-C_H2-C_H3；

(vi)V_H-C_H2-C_H3；

(vii)V_H-C_L；

(viii)V_L-C_H1；

(ix)V_L-C_H2；

(x)V_L-C_H3；

(xi)V_L-C_H1-C_H2；

(xii)V_L-C_H1-C_H2-C_H3；

(xiii)V_L-C_H2-C_H3；和

(xiV)V_L-C_L

在可变结和恒定结构域的任何配置中，包括上文列出的任何示例性配置中，可变和恒定结构域可以彼此直接连接，或者可以通过全部或部分铰链或接头区连接。铰链区可以由至少2个(例如5、10、15、20、40、60或更多个)氨基酸组成，其导致单个多肽分子中相邻的可变和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本发明抗体的抗原结合片段可以包含彼此和/或与一个或更多个单体V_H或V_L结构域(例如，通过二硫键)非共价缔合的上述任何可变和恒定结构域配置的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)。

本发明还涉及包含多特异性(例如双特异性)抗原结合蛋白(例如抗体、抗原结合片段或多肽)的组合。术语多特异性包括术语多互补位(和双互补位)。多互补位分子与同一抗原内的多个表位结合。抗体的多特异性抗原结合片段通常包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性与不同的抗原或相同抗原上的不同表位(例如，双互补位)结合。双互补位IgG抗体包含与C5内的两个不同表位结合的两个不同的重链/轻链对。

“分离的”抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸和载体至少部分地不含来自产生它们的细胞或细胞培养物的其他生物分子。这样的生物分子包括核酸、蛋白质、其他抗体或抗原结合片段、脂质、碳水化合物，或其他材料，例如细胞碎片和生长培养基。分离的抗体或其抗原结合片段、多肽、多核苷酸和载体可以进一步至少部分不含表达系统组分，例如来自宿主细胞或其生长培养基的生物分子。通常，术语“分离的”未旨在指示完全不存在这样的生物分子或不存在水、缓冲剂或盐，或包含抗体或其抗原结合片段、多肽、多核苷酸和/或载体的药物制剂的组分。

术语“特异性结合”或“与...特异性结合”等是指抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)与抗原形成在生理条件下相对稳定的复合物。特异性结合可以通过至少约1x10^-8M或更小的平衡解离常数(例如，K_D越小表示结合约紧密)来表征，例如对于在25℃下与C5结合通过SPR测量为至少10^-9M或10^-10M，或至少1.29 X 10^-10M，或者对于在37℃下与C5结合通过SPR测量为至少2.62 X 10^-10M。

术语“抗C5”是指与C5多肽或其免疫原性片段特异性结合的抗原结合蛋白，例如抗体、抗原结合片段、多肽或其他分子。

用于确定两个分子是否特异性结合的方法是本领域众所周知的，并且包括例如平衡透析、表面等离子体共振等。如本文所述，已经通过表面等离子体共振(例如BIACORE^TM)鉴定了与C5特异性结合的抗体。

在本发明的一个实施方案中，可以将本发明的抗原结合蛋白(例如抗体或抗体片段)缀合至可用于治疗C5相关疾病或病症的部分，例如配体或治疗性部分(“免疫缀合物”)、第二抗C5抗体或任何其他治疗性部分。在本发明的一个实施方案中，将本文所述的抗C5抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)缀合至coversin多肽。

其中每个都不与H4H12166P竞争C5结合的抗C5抗体和抗原结合片段的选择包括H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2和H4H12177P2。本发明包括包含这些抗体或其抗原结合片段中的任意两种或更多种的组合。如上所述，组合可以是包含一种这样的抗体的重链和轻链以及另一种这样的抗体的重链和轻链的多特异性(例如，双特异性)抗体。例如，本发明的范围包括双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含取自H4H12161P、H4H12166P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2和H4H12177P2中的任一个的免疫球蛋白重链(heavy chain immunoglobulin)和免疫球蛋白轻链(lightchain immunoglobulin)的组合以形成抗原结合结构域，以及取自H4H12161P、H4H12166P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2和H4H12177P2中的任一个的不同的免疫球蛋白重链和不同的免疫球蛋白轻链的组合以形成不同的抗原结合结构域。下表A中列出了构成本发明的一些双特异性抗体和抗原结合片段的轻链和重链组合的概述。“X”表示包含来自水平轴上抗体的抗原结合结构域和垂直轴上抗体的抗原结合结构域的双特异性抗体(例如H4H12176P2xH4H12177P2双特异性抗体)。如本文所用，双特异性抗体可以称为“AxB”，其中A是第一抗体的抗原结合结构域，并且B是来自第二不同的抗体的抗原结合结构域。

表A.示例性双特异性抗体链组合*

*表A中用x指示的包含两个单独的抗原结合蛋白的组合也是本发明的一部分。

“H4H12161P”、“H4H12166P”、“H4H12170P”、“H4H12171P”、“H4H12175P”、“H4H12176P2”和“H4H12177P2”例如是指抗体及其抗原结合片段(或在双特异性抗体或其抗原结合片段的情况下，是指其抗原结合结构域)，它们包含：如下所述的重链或V_H(或其变体)和轻链或V_L(或其变体)；或包含含有其CDR(CDR-H1(或其变体)、CDR-H2(或其变体)和CDR-H3(或其变体))的V_H和含有其CDR(CDR-L1(或其变体)、CDR-L2(或其变体)和CDR-L3(或其变体))的V_L，例如，其中免疫球蛋白链、可变区和/或CDR包含下文所述的特定氨基酸序列。这样的命名法可以在本文中用于指WO2017/218515中公开的其他抗体及其抗原结合片段和其抗原结合结构域。

因此，本发明包括但不限于多特异性(例如，双特异性或双互补位)抗体及其抗原结合片段，包括“H4H12161PxH4H12177P2”；“H4H12166PxH4H12177P2”；“H4H12170PxH4H12177P2”；“H4H12171PxH4H12177P2”；“H4H12176P2xH4H12177P2”；“H4H12176P2xH4H12161P”；“H4H12176P2xH4H12166P”；“H4H12176P2xH4H12170P”；“H4H12176P2xH4H12171P”；“H4H12176P2xH4H12175P”；“H4H12175PxH4H12161P”；“H4H12175PxH4H12166P”；“H4H12175PxH4H12170P”；“H4H12175PxH4H12171P”；“H4H12171PxH4H12161P”；“H4H12171PxH4H12166P”；“H4H12171PxH4H12170P”；“H4H12170PxH4H12161P”；“H4H12170PxH4H12166P”；和“H4H12166PxH4H12161P”。

例如，多特异性(例如，双特异性或双互补位)抗体或抗原结合片段H4H12176P2xH4H12177P2包含：

第一抗原结合结构域，其包含：

(1)

免疫球蛋白重链或其可变区，其包含含有SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列的免疫球蛋白重链或其可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；或其变体；和

免疫球蛋白轻链或其可变区，其包含含有SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链或其可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或其变体；以及

第二抗原结合结构域，其包含

免疫球蛋白重链或其可变区，其包含含有SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列的免疫球蛋白重链或其可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；或其变体；和

免疫球蛋白轻链或其可变区，其包含含有SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链或其可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或其变体；

或者

(2)

第一抗原结合结构域，其包含：

重链可变区，其包含

包含SEQ ID NO：89中所示的氨基酸序列的CDR-H1；

包含SEQ ID NO：91中所示的氨基酸序列的CDR-H2；和

包含SEQ ID NO：93中所示的氨基酸序列的CDR-H3；

和轻链可变区，其包含

包含SEQ ID NO：97中所示的氨基酸序列的CDR-L1；

包含SEQ ID NO：99中所示的氨基酸序列的CDR-L2；和

包含SEQ ID NO：101中所示的氨基酸序列的CDR-L3；

以及第二抗原结合结构域，其包含：

重链可变区，其包含

包含SEQ ID NO：105中所示的氨基酸序列的CDR-H1；

包含SEQ ID NO：107中所示的氨基酸序列的CDR-H2；和

包含SEQ ID NO：109中所示的氨基酸序列的CDR-H3；

和轻链可变区，其包含

包含SEQ ID NO：97中所示的氨基酸序列的CDR-L1；

包含SEQ ID NO：99中所示的氨基酸序列的CDR-L2；和

包含SEQ ID NO：101中所示的氨基酸序列的CDR-L3；

或者

(3)

第一抗原结合结构域，其包含：

(a)免疫球蛋白重链或其可变区，其包含含有SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列和与SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的免疫球蛋白重链或其可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；和/或

(b)免疫球蛋白轻链或其可变区，其包含含有SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列和与SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的免疫球蛋白轻链或其可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。

第二抗原结合结构域，其包含

(a)免疫球蛋白重链或其可变区，其包含含有SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列和与SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的免疫球蛋白重链或其可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；和/或

(b)免疫球蛋白轻链或其可变区，其包含含有SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的免疫球蛋白轻链或其可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；

或者

(4)

第一抗原结合结构域，其包含：

免疫球蛋白重链或其可变区，其包含与SEQ ID NO：87中所示的氨基酸序列具有至少90％(例如100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列；和/或

免疫球蛋白轻链或其可变区，其包含与SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列具有至少90％(例如100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列；以及

第二抗原结合结构域，其包含：

免疫球蛋白重链或其可变区，其包含与SEQ ID NO：103中所示的氨基酸序列具有至少90％(例如100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列；和/或

免疫球蛋白轻链或其可变区，其包含与SEQ ID NO：95中所示的氨基酸序列具有至少90％(例如100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

*包含本文所述的免疫球蛋白链的其他组合的类似多特异性抗原结合蛋白的实施方案也是本发明的一部分。

本发明的多特异性(例如，双特异性)抗原结合蛋白包含两个或更多个不同的抗原结合结构域，其选自WO2017/218515中列出的任何抗C5抗体，例如H2M11683N；H2M11686N；H4H12159P；H4H12161P；H4H12163P；H4H12164P；H4H12166P；H4H12166P2；H4H12166P3；H4H12166P4；H4H12166P5；H4H12166P6；H4H12166P7；H4H12166P8；H4H12166P9；H4H12166P10；H4H12167P；H4H12168P；H4H12169P；H4H12170P；H4H12171P；H4H12175P；H4H12176P2；H4H12177P2；H4H12183P2；H2M11682N；H2M11684N；H2M11694N或H2M11695N，在本发明的一个实施方案中，抗原结合结构域取自该列表中的非竞争性抗体；在本发明的一个实施方案中，抗原结合结构域取自该列表中的竞争性抗体。参见本文表1。WO2017/218515通过引用整体并入本文。在本发明的一个实施方案中，抗原结合结构域取自依库珠单抗或ALXN1210(Ravulizumab)。

H4H12161P

V_H结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：2)

V_H结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：3)

CDR-H1(DNA)：

(SEQ ID NO：4)

CDR-H1(多肽)：

(SEQ ID NO：5(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-H2(DNA)：

(SEQ ID NO：6)

CDR-H2(多肽)：

(SEQ ID NO：7(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-H3(DNA)：

(SEQ ID NO：8)

CDR-H3(多肽)：

(SEQ ID NO：9(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

V_L结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：10)

V_L结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：11)

CDR-L1(DNA)：

(SEQ ID NO：12)

CDR-L1(多肽)：

(SEQ ID NO：13(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-L2(DNA)：

(SEQ ID NO：14)

CDR-L2(多肽)：

(SEQ ID NO：15(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-L3(DNA)：

(SEQ ID NO：16)

CDR-L3(多肽)：

(SEQ ID NO：17(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

H4H12166P

V_H结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：18)

V_H结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：19)

免疫球蛋白重链hIgG4(M428L N434S)

(SEQ ID NO：82)

CDR-H1(DNA)：

(SEQ ID NO：20)

CDR-H1(多肽)：

(SEQ ID NO：21(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-H2(DNA)：

(SEQ ID NO：22)

CDR-H2(多肽)：

(SEQ ID NO：23(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-H3(DNA)：

(SEQ ID NO：24)

CDR-H3(多肽)：

(SEQ ID NO：25(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

V_L结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：26)

V_L结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：27)

免疫球蛋白轻链(κ)

(SEQ ID NO：83)

CDR-L1(DNA)：

(SEQ ID NO：28)

CDR-L1(多肽)：

(SEQ ID NO：29(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-L2(DNA)：

(SEQ ID NO：30)

CDR-L2(多肽)：

(SEQ ID NO：31(或具有点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-L3(DNA)：

(SEQ ID NO：32)

CDR-L3(多肽)：

(SEQ ID NO：33(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

H4H12170P

V_H结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：34)

V_H结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：35)

免疫球蛋白重链(IgG4)：

(SEQ ID NO：84)

CDR-H1(DNA)：

(SEQ ID NO：36)

CDR-H1(多肽)：

(SEQ ID NO：37(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-H2(DNA)：

(SEQ ID NO：38)

CDR-H2(多肽)：

(SEQ ID NO：39(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-H3(DNA)：

(SEQ ID NO：40)

CDR-H3(多肽)：

(SEQ ID NO：41(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

V_L结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：42)

V_L结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：43)

免疫球蛋白轻链(κ)

(SEQ ID NO：85)

CDR-L1(DNA)：

(SEQ ID NO：44)

CDR-L1(多肽)：

(SEQ ID NO：45(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-L2(DNA)：

(SEQ ID NO：46)

CDR-L2(多肽)：

(SEQ ID NO：47(或具有点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-L3(DNA)：

(SEQ ID NO：48)

CDR-L3(多肽)：

(SEQ ID NO：49(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

H4H12171P

V_H结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：50)

V_H结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：51)

CDR-H1(DNA)：

(SEQ ID NO：52)

CDR-H1(多肽)：

(SEQ ID NO：53(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-H2(DNA)：

(SEQ ID NO：54)

CDR-H2(多肽)：

(SEQ ID NO：55(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-H3(DNA)：

(SEQ ID NO：56)

CDR-H3(多肽)：

(SEQ ID NO：57(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

V_L结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：58)

V_L结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：59)

CDR-L1(DNA)：

(SEQ ID NO：60)

CDR-L1(多肽)：

(SEQ ID NO：61(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-L2(DNA)：

(SEQ ID NO：62)

CDR-L2(多肽)：

(SEQ ID NO：63(或具有点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-L3(DNA)：

(SEQ ID NO：64)

CDR-L3(多肽)：

(SEQ ID NO：65(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

H4H12175P

V_H结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：66)

V_H结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：67)

CDR-H1(DNA)：

(SEQ ID NO：68)

CDR-H1(多肽)：

(SEQ ID NO：69(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-H2(DNA)：

(SEQ ID NO：70)

CDR-H2(多肽)：

(SEQ ID NO：71(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-H3(DNA)

(SEQ ID NO：72)

CDR-H3(多肽)：

(SEQ ID NO：73(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

V_L结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：74)

V_L结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：75)

CDR-L1(DNA)：

(SEQ ID NO：76)

CDR-L1(多肽)：

(SEQ ID NO：77(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-L2(DNA)：

(SEQ ID NO：78)

CDR-L2(多肽)：

(SEQ ID NO：79(或具有点突变和/或点缺失的其变体))

CDR-L3(DNA)：

(SEQ ID NO：80)

CDR-L3(多肽)：

(SEQ ID NO：81(或具有1、2、3或4个点突变和/或点缺失的其变体))

H4H12176P2

V_H结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：86)

V_H结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：87)

CDR-H1(DNA)：

(SEQ ID NO：88)

CDR-H1(多肽)：

(SEQ ID NO：89)

CDR-H2(DNA)：

(SEQ ID NO：90)

CDR-H2(多肽)：

(SEQ ID NO：91)

CDR-H3(DNA)：

(SEQ ID NO：92)

CDR-H3(多肽)：

(SEQ ID NO：93)

V_L结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：94)

V_L结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：95)

CDR-L1(DNA)：

(SEQ ID NO：96)

CDR-L1(多肽)：

(SEQ ID NO：97)

CDR-L2(DNA)：

(SEQ ID NO：98)

CDR-L2(多肽)：

(SEQ ID NO：99)

CDR-L3(DNA)：

(SEQ ID NO：100)

CDR-L3(多肽)：

(SEQ ID NO：101)

H4H12177P2

V_H结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：102)

V_H结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：103)

CDR-H1(DNA)：

(SEQ ID NO：104)

CDR-H1(多肽)：

(SEQ ID NO：105)

CDR-H2(DNA)：

(SEQ ID NO：106)

CDR-H2(多肽)：

(SEQ ID NO：107)

CDR-H3(DNA)：

(SEQ ID NO：108)

CDR-H3(多肽)：

(SEQ ID NO：109)

V_L结构域(DNA)：

(SEQ ID NO：94)

V_L结构域(多肽)：

(SEQ ID NO：95)

CDR-L1(DNA)：

(SEQ ID NO：96)

CDR-L1(多肽)：

(SEQ ID NO：97)

CDR-L2(DNA)：

(SEQ ID NO：98)

CDR-L2(多肽)：

(SEQ ID NO：99)

CDR-L3(DNA)：

(SEQ ID NO：100)

CDR-L3(多肽)：

(SEQ ID NO：101)

参见WO2017/218515。

本发明还包括复合物，其包含与一个或更多个抗C5抗原结合蛋白结合的C5多肽或其抗原片段。例如，在本发明的一个实施方案中，复合物包含与一个或更多个第一抗C5抗原结合蛋白和不竞争结合C5的一个或更多个另外的抗C5抗原结合蛋白结合的一个或更多个C5多肽或其抗原片段。复合物可以以第一抗原结合蛋白与第二抗原结合蛋白与C5的多种比例形成。例如，本发明的范围包括包含以下的复合物：

(i)1∶1∶2、2∶2∶4或3∶3∶6比例的第一单特异性抗C5抗原结合蛋白(例如H4H12166P)和第二单特异性抗C5抗原结合蛋白和C5多肽或片段；

(ii)1∶1、1∶2、2∶1或2∶2比例的双特异性抗C5抗原结合蛋白和C5多肽或片段；

(iii)1∶1∶1、1∶1∶2或1∶2∶2比例的单特异性抗C5抗原结合蛋白和双特异性抗C5抗原结合蛋白和C5多肽或段；或者

(iv)1∶2比例的单特异性抗C5抗原结合蛋白和C5多肽或片段。

在本发明的一个实施方案中，单特异性抗C5抗原结合蛋白是依库珠单抗、H4H12166P、H4H12177P2或H4H12176P2。在本发明的一个实施方案中，双特异性抗C5抗原结合蛋白是H4H12176P2xH4H12177P2。

基于非对称流场流分离(A4F-MALLS)后洗脱的材料的计算的摩尔质量和分析的混合物中各抗体和C5多肽的平均计算质量，推测了一些复合物。这些数据在本文的图11-16中列出。

表位作图和竞争

如本文中所讨论的，本发明提供了组合，其包含与C5特异性结合的第一抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)，以及一种或更多种另外的抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合蛋白或多肽)(例如coversin)，所述另外的抗原结合蛋白(i)在与第一抗原结合蛋白的表位不同的表位处与C5特异性结合，和/或不(ii)与第一抗原结合蛋白竞争结合C5。

双特异性抗原结合蛋白(例如，抗体及其抗原结合片段)具有两个抗原结合结构域(第一个和第二个)，其中第一个与C5的表位特异性结合，并且第二个(i)在与第一抗原结合结构域的表位不同的表位处与C5特异性结合，和/或不(ii)与第一抗原结合结构域竞争结合C5。在本发明的一个实施方案中，这样的抗原结合结构域取自WO2017/218515中列出的抗体或抗原结合片段。

对于两种抗原结合蛋白，例如抗体，如果在C5抗原中存在抗原结合蛋白与之显著结合的共同氨基酸，则它们具有共同的表位。

用于确定抗原结合蛋白(例如抗体或片段或多肽)的表位的方法包括丙氨酸扫描突变分析、肽印迹分析(Reineke(2004)Methods Mol.Biol.248：443-63)、肽切割分析、晶体学研究和NMR分析。另外，可以采用诸如抗原的表位切除、表位提取和化学修饰的方法(Tomer(2000)Prot.Sci.9：487-496)。可用于鉴定多肽内与抗原结合蛋白(例如抗体或片段或多肽)(例如coversin)相互作用的氨基酸的另一种方法是通过质谱法检测的氢/氘交换。一般而言，氢/氘交换方法涉及目的蛋白质的氘标记，然后使抗原结合蛋白(例如抗体或片段或多肽)与氘标记的蛋白质结合。接下来，将C5蛋白/抗原结合蛋白复合物转移到水中。并且与不是界面的一部分的氨基酸内的可交换质子相比，受抗体复合物保护的氨基酸中的可交换质子以更慢的速率经历氘-氢反向交换。结果，与不包含在界面中的氨基酸相比，形成蛋白质/抗原结合蛋白界面的一部分的氨基酸可以保留氘，因此表现出相对较高的质量。在抗原结合蛋白(例如抗体或片段或多肽)解离之后，对靶蛋白进行蛋白酶切割和质谱分析，从而揭示出氘标记的残基，其对应于与抗原结合蛋白相互作用的特定氨基酸。参见，例如Ehring(1999)Analytical Biochemistry 267：252-259；Engen and Smith(2001)Anal.Chem.73：256A-265A。

术语“表位”是指与抗原结合蛋白中的特定抗原结合位点(例如抗体分子的可变区，称为互补位)相互作用的抗原决定簇(例如，在C5上)。单个抗原可以具有多于一个表位。因此，不同的抗原结合蛋白(例如抗体)可以结合至抗原上的不同区域，并且可以具有不同的生物学作用。由不连续的氨基酸构成的表位可以被称为“构象的”。线性表位仅包含连续氨基酸。在某些实施方案中，表位可以包含是分子的化学活性表面基团的决定簇，例如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，并且在某些实施方案中，可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。

例如，抗体H4H12166P结合的表位定义为：(i)氨基酸序列NMATGMDSW，其对应于SEQID NO：1中包含的β链中的第591至599位氨基酸；(ii)氨基酸序列WEVHLVPRRKQLQFALPDSL，其对应于SEQ ID NO：1中包含的α链中包含第775至794位氨基酸。参见例如，PCT国际申请PCT/US2017/037226。依库珠单抗的C5表位公开于Brachet et al.，Eculizumab epitopeon complement C5：Progress towards a better understanding of the mechanism ofaction.Mol Immunol.2016 Sep；77：126-131中。

如本文所用，术语“竞争”是指抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)与抗原结合并抑制或阻断另一抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)与该抗原结合。该术语还包括两种抗原结合蛋白(例如抗体)之间两个方向上的竞争，即第一抗体结合并且阻断第二抗体的结合，反之亦然。在某些实施方案中，第一抗原结合蛋白(例如抗体)和第二抗原结合蛋白(例如抗体)可以结合于相同的表位。或者，第一和第二抗原结合蛋白(例如抗体)可以结合于不同但例如重叠的表位，其中一种抗体的结合抑制或阻断第二抗体的结合，例如通过空间位阻。抗原结合蛋白(例如抗体)之间的交叉竞争可以通过本领域已知的方法来测量，例如，通过实时、无标记的生物层干涉测定法。在本发明的一个实施方案中，通过测量固定的第一抗C5抗原结合蛋白(例如抗体)(最初未与C5蛋白复合)与和第二抗C5抗原结合蛋白(例如抗体)复合的可溶性C5蛋白结合的能力来确定第一和第二抗C5抗原结合蛋白(例如抗体)之间的竞争。相对于未复合的C5蛋白，第一抗C5抗原结合蛋白(例如抗体)与复合的C5蛋白结合的能力降低表明第一和第二抗C5抗原结合蛋白(例如，抗体)竞争。竞争程度可以表示为结合降低的百分比。可以使用实时、无标记的生物层干涉测定法，例如在Octet RED384生物传感器(Pall ForteBio Corp)、ELISA(酶联免疫吸附测定)或SPR(表面等离体共振)上测量这样的竞争。

可以使用实时、无标记的生物层干涉测定法在Octet RED384生物传感器(PallForteBio Corp.)上确定抗C5抗原结合蛋白(例如，单克隆抗体(mAb))之间的结合竞争。例如，为了确定两种抗人C5单克隆抗体之间的竞争，可以首先将抗C5 mAb捕获到抗hFc抗体涂覆的Octet生物传感器尖端(Pall ForteBio Corp.，#18-5060)，其通过将尖端浸入抗人C5mAb(以下称为“mAb1”)的溶液来实现。作为阻断阳性对照，可以通过浸入已知的阻断同种型对照mAb(以下称为“阻断mAb”)的溶液来用阻断mAb使抗体捕获的生物传感器尖端饱和。为了确定mAb2是否与mAb1竞争，随后可以将生物传感器尖端浸入已预先孵育一段时间的人C5多肽和第二抗人C5 mAb(随后称为“mAb2”)的共复合溶液中，并且可以确定mAb1与C5多肽的结合。在实验的每个步骤之间，可以在缓冲液中洗涤生物传感器尖端。可以在实验过程中监测实时结合反应，并可以记录每个步骤结束时的结合反应。对mAb1/C5结合的mAb2依赖性抑制表明mAb1和mAb2之间竞争C5结合。参见例如2017年6月13日提交的国际专利申请号PCT/US2017/037226，例如其中的实施例5。

在本发明的一个实施方案中，在实施例5中示出的条件下测定抗原结合蛋白(例如抗体)之间的竞争。例如，在本发明的一个实施方案中，所述测定在25℃和约7.4的pH下，例如在缓冲液(例如HEPES)、盐(例如NaCl)、表面活性剂(例如Tween-20)和蛋白质(例如牛血清白蛋白)的存在下，例如0.01M HEPES pH7.4、0.15M NaCl、0.05％v/v表面活性剂Tween-20、0.1mg/mL BSA(Octet HBS-P缓冲液)的存在下以1000rpm的速度摇动板来进行。

下表1总结了2017年6月13日提交的国际专利申请号PCT/US2017/037226(WO2017/218515)中示出的抗C5抗体之间的竞争。因此，本发明包括包含选自表1的两种抗C5抗体或其抗原结合片段的组合，其中抗体或片段不竞争C5结合(例如，H4H12166P和H4H12168P；或H4H12166P和H4H12161P；或H4H12166P和H4H11686N)。

表1.所选抗C5抗体对之间的竞争

参见WO2017/218515，表15.

药物组合物和施用

本发明的组合(例如H4H12166P与以下中的一种：H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2或H4H12177P2)包含组分，所述组分可以配制成单一共同的组合物或配制成多种/分开的组合物。此外，分开的组合物用不同种类的载体配制。例如，可以将作为本发明组合的一部分的与C5特异性结合的第一抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)与一种或更多种另外的抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段或多肽)(例如Coversin)共配制成单一组合物(例如具有可药用载体)，所述另外的抗原结合蛋白(i)在与第一抗原结合蛋白(例如抗体或片段)的表位不同的表位处与C5特异性结合，和/或(ii)不与第一抗原结合蛋白(例如抗体或片段)竞争结合C5。在本发明的实施方案中，将第一抗原结合蛋白(例如抗体或片段)和第二抗原结合蛋白(例如抗体或片段或多肽)配制成分开的组合物(例如具有可药用载体)。在本发明的组合中的另外的治疗剂可以配制成另外的组合物。另外的治疗剂可以与第一抗体或片段以及第二抗体或片段或多肽分开地包含在本发明的组合中。在本发明的另一个实施方案中，将另外的治疗剂配制到第一抗体或片段或者第二抗体或片段或多肽(或两者)中。

为了制备包含本发明组合的组分的药物或无菌组合物，可以将组分与可药用载体或赋形剂混合。参见，例如Remington′s Pharmaceutical Sciences和U.S.Pharmacopeia：National Formulary，Mack Publishing Company，Easton，Pa.(1984)。包含这样的组合物的组合是本发明的一部分。

本发明的范围包括包含一种或更多种干燥形式(例如冻干，基本上不含水)的组分的组合。

可以通过与例如冻干粉末、浆料、水溶液或悬浮液形式的可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合来制备制剂(参见，例如，Hardman，et al.(2001)Goodman and Gilman′s ThePharmacological Basis of Therapeutics，McGraw-Hill，New York，NY；Gennaro(2000)Remington：The Science and Practice of Pharmacy，Lippincott，Williams，andWilkins，New York，NY；Avis，et al.(eds.)(1993)Pharmaceutical Dosage Forms：Parenteral Medications，Marcel Dekker，NY；Lieberman，et al.(eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets，Marcel Dekker，NY；Lieberman，et al.(eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms：Disperse Systems，Marcel Dekker，NY；Weinerand Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity and Safety，Marcel Dekker，Inc.，New York，NY)。

如果本发明的组合包含施用于对象的另外的治疗剂，则另外的治疗剂可以根据Physicians′Desk Reference(PDR)，例如Physicians′Desk Reference 2003(ThomsonHealthcare；57th edition(Nov.1，2002))施用于对象，和/或可以根据PDR中的描述配制。

组合或组合的任何组分的施用方式可以变化。施用途径包括经口、直肠、透粘膜、肠、肠胃外；肌内、皮下、真皮内、髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、眼内、吸入、吹入、外用、皮肤、透皮或动脉内。

本发明提供了施用组合或其组分的方法，包括将物质引入对象体内。例如，方法包括用注射器的针刺穿对象的身体，并将组合或其组分注射到对象的体内，例如注射到对象的静脉、动脉、肿瘤、肌肉组织或皮下组织。

发明提供了包含本发明的组合或其一种或更多种组分的容器(例如，塑料或玻璃小瓶(例如具有盖)，或色谱柱、空心针或注射器筒)。

本发明还提供了包含来自本发明的组合的一种或更多种抗原结合蛋白(例如抗体、抗原结合片段或多肽)或其药物组合物的注射装置。例如，一种抗原结合蛋白(来自组合)可以在第一注射装置中，并且另一种抗原结合蛋白(来自组合)可以在第二注射装置中；或两种抗原结合蛋白(来自组合)可以在共同的注射装置中。注射装置可以(共)包装到试剂盒中。注射装置是通过肠胃外途径(例如肌内、皮下或静脉内)将物质引入对象体内的装置。例如，注射装置可以是注射器(例如，预填充有药物组合物，例如自动注射器)，其例如包括用于容纳待注射流体(例如，包含抗体或片段或其药物组合物)的缸或筒，用于刺穿皮肤和/或血管以注射流体的针；以及用于将流体推出缸并通过针孔的柱塞。在本发明的一个实施方案中，包含来自本发明组合的抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)或其药物组合物的注射装置是静脉内(IV)注射装置。这样的装置可以在插管或套管针/针中包含抗原结合蛋白或其药物组合物，所述插管或套管针/针可以附接至管，所述管可以附接至用于容纳待通过插管或套管针/针引入对象体内的流体(例如，盐水)的袋或储器。在本发明的一个实施方案中，一旦将套管针和套管插入对象的静脉中并且从所插入的套管中取出套管针，就可以将抗体或片段或其药物组合物引入装置中。IV装置可以例如插入到外周静脉中(例如，在手或臂中)；上腔静脉或下腔静脉，或心脏右心房内(例如中心IV)；或锁骨下、颈内静脉或股静脉，例如，向心脏前进直至到达上腔静脉或右心房(例如，中心静脉线)。在本发明的一个实施例中，注射装置是自动注射器、喷射注射器或外部输液泵。喷射注射器使用高压窄液体喷射，其穿透表皮以将抗体或片段或其药物组合物引入对象的身体。外部输液泵是将抗体或片段或其药物组合物以受控量递送到对象体内的医疗设备。外部输液泵可以电动或机械动力的。不同的泵以不同的方式运行，例如，注射泵将流体保持在注射器的储器中并且可移动的活塞控制流体递送，弹性泵将流体保持在可伸缩的球囊储器中并且来自球囊弹性壁的压力驱动流体递送。在蠕动泵中，一组滚子在挠性管的长度上向下挤压，将流体向前推动。在多通道泵中，流体可以以多种速率从多个储器递送流体。

本发明包括在有此需要的对象(例如人)中通过向对象施用(例如肠胃外)治疗有效量的组合来治疗C5相关疾病或病症(例如，PNH或aHUS)的方法，所述组合包含：

(1)与C5特异性结合的第一抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)和一种或更多种另外的抗原结合蛋白(例如，多肽(例如，coversin)或抗体或抗原结合片段)，所述另外的抗原结合蛋白(i)在与第一抗原结合蛋白(例如抗体或片段)的表位不同的表位处与C5特异性结合，和/或(ii)不与第一抗原结合蛋白(例如抗体或片段)竞争结合C5；或

(2)多特异性抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)(例如，双互补位抗C5IgG抗体)，其包含与C5上的不同表位结合的两个或更多个结合结构域(例如，第一和第二结合结构域)，其中第一结合结构域(i)在与第二结合结构域的表位不同的表位处与C5特异性结合，和/或(ii)不与第二结合结构域竞争结合C5；

任选地与另外的治疗剂(例如皮质类固醇)和/或程序(例如输血，例如在患有PNH的人对象中)相结合。

“治疗”是指将本发明的组合施用于具有所述组合有效的C5相关疾病或病症的一种或更多种症状的对象，例如在治疗患有阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)或非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)或被怀疑患有PNH或aHUS的对象。通常，以有效或治疗量或剂量(如本文所述)施用所述组合。

选择本发明组合或其组分的适当剂量的指南是可获得的(参见例如Wawrzynczak(1996)Antibody Therapy，Bios Scientific Pub.Ltd，Oxfordshire，UK；Kresina(ed.)(1991)Monoclonal Antibodies，Cytokines and Arthritis，Marcel Dekker，New York，N.Y.；Bach(ed.)(1993)Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in AutoimmuneDiseases，Marcel Dekker，New York，N.Y.；Baert et al.(2003)New Engl.J.Med.348：601-608；Milgrom et al.(1999)New Engl.J.Med.341：1966-1973；Slamon et al.(2001)New Engl.J.Med.344：783-792；Beniaminovitz et al.(2000)New Engl.J.Med.342：613-619；Ghosh et al.(2003)New Engl.J.Med.348：24-32；Lipsky et al.(2000)NewEngl.J.Med.343：1594-1602)。

用于治疗C5相关疾病或病症的本发明组合中抗C5抗原结合蛋白(例如抗体或抗原结合片段或多肽)的有效剂量或治疗有效剂量是指在治疗的对象或人群中足以减轻疾病或病症的一种或更多种体征和/或症状(例如潜在原因，例如补体激活)的组合的量，无论是通过诱导这样的体征和/或症状的消退或消除，还是通过抑制这样的体征和/或症状的进展。剂量可以根据待施用的对象的年龄和大小、目标疾病、病情、施用途径等而变化。在本发明的一个实施方案中，用于在例如成人对象中治疗或预防C5相关疾病或病症的本发明组合的抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)的有效或治疗有效剂量是约0.1至约100mg/kg体重，例如约5至约80，例如约10至约70，或约20至约50mg/kg体重的单剂量。根据病情的严重程度，可以调整治疗的频率和持续时间。在某些实施方案中，本发明组合中的抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)可以以至少约0.1mg至约800mg，约1至约600m，约5至约500mg，或约10至约400mg的初始剂量施用。在某些实施方案中，可以在初始剂量之后施用抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)的第二或多个后续剂量，其量可以大致等于或小于初始剂量的量，其中后续剂量分开至少1至3天；至少1周；至少2周；至少3周；至少4周；至少5周；至少6周；至少7周；至少8周；至少9周；至少10周；至少12周；或至少14周。

在本发明的一个实施方案中，以0.57mg/kg的第一剂量施用本发明的组合中的coversin，然后每日重复维持剂量，其中初始重复剂量为消去剂量的25％。

“C5相关”疾病或病症是指(直接或间接)由C5a和/或C5b介导的炎症、细胞损伤和/或细胞杀伤引起的疾病或病症。

C5相关疾病或病症包括非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)。本发明提供了用于在有此需要的对象(例如，患有aHUS以及患有其一种或更多种体征和/或症状的对象)中通过向对象施用治疗有效量的组合来治疗或预防aHUS或者诱导aHUS的至少一种体征或症状的消退或消除或抑制其进展的方法，所述体征或症状为例如：

·血小板活化；

·溶血；

·系统性血栓性微血管病(在全身小血管中形成血块)，例如导致中风；

·心脏病发作；

·肾衰竭(例如导致死亡)；

·晚期肾病；

·永久性肾损害；

·腹痛；

·混乱；

·水肿；

·疲劳；

·恶心/呕吐；

·腹泻；和/或

·微血管性贫血。

C5相关疾病或病症包括阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)。本发明提供了用于在有此需要的对象(例如，患有aHUS以及患有其一种或更多种体征和/或症状的对象)中通过向对象施用治疗有效量的组合来治疗或预防PNH或者诱导PNH的至少一种体征或症状的消退或消除或抑制其进展的方法，所述体征或症状为例如：

·红细胞破坏；

·血栓形成(例如深静脉血栓形成和/或肺栓塞)；

·血管内溶血性贫血；

·尿液变红；

·贫血；

·疲劳；

·气促；

·心悸；

·腹痛；和/或

·吞咽困难。

C5相关疾病或病症包括神经系统疾病、肾病、多发性硬化症、中风、吉兰-巴雷综合征(Guillain Barre Syndrome)、创伤性脑损伤、帕金森病、不适当或不期望的补体激活疾病、血液透析并发症、超急性同种异体移排斥、异种移植排斥、IL-2治疗期间白介素2诱导的毒性、炎性疾病、自身免疫性疾病的炎症、克罗恩病、成人呼吸窘迫综合征、热损伤(包括烧伤或冻伤)、缺血再灌注后病症、心肌梗死、毛细血管渗漏综合征、肥胖、糖尿病、阿尔茨海默病、精神分裂症、中风、癫痫、动脉粥样硬化、血管炎、大疱性类天疱疮、C3肾小球病、膜增生性肾小球肾炎、由球囊血管成形术引起的补体激活、心肺搭桥或肾脏搭桥的泵后综合征、由血液透析引起的补体激活、肾缺血、主动脉重建后肠系膜动脉再灌注、感染性疾病或脓毒症、免疫复合物疾病和自身免疫性疾病、糖尿病肾病、奥尔波特综合征(Alport’ssyndrome)、进行性肾衰竭、蛋白尿性肾病、肾缺血再灌注损伤、狼疮性肾炎、肾小球病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、SLE肾炎、膜增生性肾炎、溶血性贫血、视神经脊髓炎、肾移植、遗传性CD59缺陷、银屑病和重症肌无力。本发明包括通过向有此需要的对象施用治疗有效量的本发明的组合来在对象中治疗或预防任何前述C5相关疾病或病症的方法。

在某些另一些实施方案中，本发明的组合可用于治疗或预防C5相关疾病或病症的至少一种症状或适应症，其选自肺病和障碍，例如呼吸困难、咯血、ARDS、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺气肿、肺栓塞和梗死、肺炎、纤维化粉尘病、惰性粉尘和矿物质(例如硅、煤粉、铍和石棉)造成的损伤、肺纤维化、有机粉尘病、化学损伤(由于刺激性气体和化学物质，例如氯、光气、二氧化硫、硫化氢、二氧化氮、氨和盐酸)、烟雾损伤、热损伤(例如烧伤、冰冻)、哮喘、变态反应、支气管收缩、超敏性肺炎、寄生虫病、肺出血肾炎综合征、肺血管炎、遗传性血管性水肿和免疫复合物相关炎症。本发明包括通过向有此需要的对象施用治疗有效量的本发明的组合来在对象中治疗或预防任何前述C5相关疾病或病症的方法。

作为C5相关疾病或病症的眼疾病包括，例如年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、糖尿病视网膜病变、眼血管生成(影响脉络膜、角膜或视网膜组织的眼新血管形成)、地理萎缩(GA)、葡萄膜炎和视神经脊髓炎。本发明提供了用于在有此需要的对象(例如，患有眼疾病以及患有其一种或更多种体征和/或症状的对象)中通过向对象施用治疗有效量的组合来治疗或预防眼疾病或者诱导眼疾病的至少一种体征或症状的消退或消除或抑制其进展的方法，所述体征或症状为例如：

·视觉损失率增加；

·眼玻璃疣(例如患有干性AMD的对象)；

·视觉损失；

·逐渐失去中央视觉(例如，患有非渗出性黄斑变性的对象)；

·视觉失真；

·难以适应低照度；

·中央视觉弯曲；

·中央和/或整体视觉模糊；

·眼睛色素沉着改变；

·视觉扭曲(例如，视物变形症，其中直线网格看起来为波浪形，而网格的一部分可能看起来为空白)；

·渗出变化(例如，眼出血、硬渗出物、视网膜下/RPE膜下/视网膜内液)；

·暴露于强光下后视觉功能恢复缓慢(例如，在光应力测试中确定)；

·初期和/或地理性萎缩；

·视觉敏锐度急剧降低(例如，两个或更高级别，例如20/20至20/80)；

·优先性高敏锐度视野变化(例如，患有湿性AMD的对象)；

·视瞻昏渺；

·迅速发作的视觉损失(例如，由患有渗出性黄斑变性患者的异常血管渗漏和出血引起)；

·中央盲点(视觉的阴影或损失区域)；

·辨别颜色困难(例如，尤其是深色与其他深色和浅色与其他浅色)；

·对比敏感度下降；和/或

·Amsler网格中直线看起来弯曲。

在本文中还预期考虑了将治疗有效量的本发明的组合预防性地施用于具有出现C5相关疾病或病症(例如aHUS、PNH或黄斑变性)的风险的对象，例如年龄超过50岁的对象，有黄斑变性家族史的对象，吸烟者以及具有肥胖、高胆固醇、心血管疾病和/或不健康饮食的对象。

组合治疗

本发明提供了组合，其包含与C5特异性结合的第一抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)，以及一种或更多种另外的抗原结合蛋白(例如，多肽或抗体或其抗原结合片段)，所述另外的抗原结合蛋白(i)在与第一抗原结合蛋白(例如抗体或片段)的表位不同的表位处与C5特异性结合，和/或(ii)不与第一抗原结合蛋白(例如抗体或片段)竞争结合C5(例如H4H12166P与以下中的一种：H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2或H4H12177P2)。这样的组合可以进一步包含一种或更多种另外的治疗剂和/或一种或更多种治疗方法。例如，另外的治疗剂可以与本发明组合的一种或更多种组分一起配制为单一组合物，或者与一种或两种组分分开配制。本发明提供了在有此需要的对象中通过向对象施用治疗有效量的组合，任选地与一种或更多种另外的治疗剂联合，来治疗或预防C5相关疾病或病症，或者治疗或改善这样的疾病或病症的至少一种症状或适应症的方法。

在本发明的一个实施方案中，所述另外的治疗剂是另一种抗C5抗体或其抗原结合片段，其本身不是组合中的第一或第二/另外的抗体或片段，例如选自以下的一种或更多种抗体或其抗原结合片段：H2M11683N；H2M11686N；H4H12159P；H4H12163P；H4H12164P；H4H12166P2；H4H12166P3；H4H12166P4；H4H12166P5；H4H12166P6；H4H12166P7；H4H12166P8；H4H12166P9；H4H12166P10；H4H12167P；H4H12168P；H4H12169P；H4H12176P2；H4H12177P2；H4H12183P2；H2M11682N；H2M11684N；H2M11694N；和H2M11695N；如国际PCT专利申请号PCT/US2017/037226中所示(或其变体；或包含任意前述抗体的免疫球蛋白重链(包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)和免疫球蛋白轻链(包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)的抗原结合蛋白，例如抗体或抗原结合片段)(其不是组合中的第一或第二/另外的抗体或抗原结合片段)。

这样的另外的治疗剂包括，例如铁、抗胸腺细胞球蛋白、生长因子、抗凝剂(例如，华法林、阿司匹林、肝素、苯茚二酮、磺达肝癸钠、艾卓肝素，以及凝血酶抑制剂，例如阿加曲班、来匹卢定(lepirudin)、比伐卢定(bivalirudin)或达比加群)、抗炎药(例如，皮质类固醇和非甾体抗炎药)、抗高血压药(例如血管紧张素转换酶抑制剂)、免疫抑制剂(例如长春新碱、环孢霉素A或氨甲喋呤)、纤维蛋白溶解剂(例如安克洛酶、ε-氨基己酸、纤溶酶抑制剂a1、前列环素和去纤苷)、降脂剂例如羟甲基戊二酰CoA还原酶抑制剂(例如阿托伐他汀)、抗CD20剂例如利妥昔单抗、抗TNFα剂例如英利昔单抗(infliximab)、抗癫痫剂(例如硫酸镁)、C3抑制剂、抗血栓形成药、avacopan(CCX168；CAS#：1346623-17-3)、ravulizumab或zimura(avacincaptad pegol；CAS#1491144-00-3)。

在本发明的一个实施方案中，另外的治疗剂是抑制C5的活性、或C5切割成C5a和C5b、或C5的表达的药剂。在本发明的一个实施方案中，另外的治疗剂是C5RNAi分子或与C5结合的多肽，例如单克隆抗体或肽(例如环肽)。

在本发明的一个实施方案中，对于联合抗C5抗体或抗原结合片段或多肽施用于对象的另外的治疗剂，根据医师参考文献，例如Physicians′Desk Reference 2003(ThomsonHealthcare；57^th edition(Nov.1，2002))来将其施用于对象。

另外的治疗剂可以与本发明组合的组分顺序或同时施用至对象。“同时”施用是指以单一的共同制剂或以在相同治疗情景期间施用的分开的制剂施用(例如注射)两种或更多种物质。“顺序”施用是指在分开的治疗情景(基本上按时间分开)期间施用两种或更多种物质。例如，在顺序施用方案中，可以认为第一组分在第二组分之前“施用”，例如其中在第二组分施用之前1周、之前72小时、之前60小时、之前48小时、之前36小时、之前24小时、之前12小时、之前6小时、之前5小时、之前4小时、之前3小时、之前2小时、之前1小时或之前30分钟施用第一组分。在另一些实施方案中，可以在施用本发明的抗C5抗体之后施用另外的治疗活性组分。

在本发明的一个实施方案中，还向对象施用例如旨在治疗C5相关疾病或病症(例如PNS或aHUS)的治疗程序，例如透析、血液或血浆输注或交换和/或骨髓/干细胞移植(BMT/SCT)。

本发明包括联合如本文所述的另外的治疗剂的本文所述的多特异性或多互补位抗原结合蛋白(例如，药物组合物或其试剂盒)，以及使用这样的蛋白质来治疗或预防如本文所述的C5相关疾病或病症的方法。

试剂盒

本发明提供了试剂盒，其包含本发明组合的一种或更多种组分，任选地与如本文所述的一种或更多种另外的治疗剂联合(例如H4H12166P与以下中的一种：H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2或H4H12177P2)。在本发明的一个实施方案中，试剂盒包含在一个装置(例如预填充注射器)或容器(例如无菌玻璃瓶或塑料瓶)中的本发明的抗C5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)或其药物组合物，以及在另一装置(例如预填充注射器)或容器(例如无菌玻璃瓶或塑料瓶)中的本发明的另一种C5抗原结合蛋白(例如抗体或抗原结合片段)或其药物组合物。

在另一个实施方案中，试剂盒包含在单个共同的容器或装置中的本发明的组合，所述组合包含两种或更多种抗C5抗原结合蛋白(例如抗体或抗原结合片段)或其药物组合物。

如果试剂盒包含用于向对象肠胃外施用的药物组合物，则试剂盒可包含用于进行这种施用的装置。例如，试剂盒可包含一个或更多个皮下注射针或如上所述的其他注射装置。因此，本发明包括试剂盒，所述试剂盒包含注射装置和本发明的一种或更多种抗C5抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)，例如其中注射装置包含抗体或片段，或其中抗体或片段在单独的容器中。

试剂盒可以包含包装插页，该包装插页包含与试剂盒中的药物组合物和剂型有关的信息。通常，这样的信息帮助患者/对象和医师有效且安全地使用所包含的药物组合物和剂型。例如，可以在插页中提供以下有关本发明组合的信息：药代动力学、药效学、临床研究、功效参数、适应症和用法、禁忌症、警告、注意事项、不良反应、过量、适当剂量和施用、如何提供、适当的储存条件、参考文献、制造商/分销商信息和专利信息。

本发明包括用于制备包含本发明的组合的试剂盒的方法。这样的方法包括将第一抗C5抗原结合蛋白(例如抗体或抗原结合片段)和一种或更多种所述另外的抗原结合蛋白(例如多肽、抗体或抗原结合片段)共包装到试剂盒中的步骤。该方法任选地包括在试剂盒中包含一种或更多种另外的治疗剂和/或其他材料(例如，如本文所讨论的)的步骤。

实施例

提出以下实施例以向本领域普通技术人员提供关于如何制备和使用本发明的方法和组合物的完整公开和描述，并且未旨在限制本发明认为的其发明的范围。已经尽力确保所用数字(例如，量、温度等)的准确性，但是应考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则份是重量份，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，室温是约25℃，并且压力是大气压或接近大气压。本文阐述的任何抗体组合或多特异性抗体构成了本发明的一部分。

实施例1：双重而不是单一抗C5 mAb治疗实现了对替代补体途径激活的完全抑制。

研究了多种抗C5抗体单独地或与其他药剂组合并且在多种条件下抑制溶血的能力。

材料和方法

替代途径溶血测定。使用替代途径溶血测定作为对补体激活的量度，以评估抗C5mAb阻断兔红细胞(RbRBC)裂解的能力。通过膜攻击复合物裂解兔红细胞是该测定的基础，通过其实验地测量补体激活。

将期望数量的RbRBC在GVB-Mg²⁺/EGTA缓冲液中洗涤并且以2x10⁸个细胞/ml的浓度重悬。为了测试单一抗C5 mAb或抗C5 mAb的组合的功效，将正常人血清在GVB-Mg²⁺/EGTA缓冲液中稀释至50-96％，使得在添加至RBC时达到25-48％的总浓度。使用圆底96孔板测量溶血活性。将总共100ul RbRBC(2x10⁸个细胞/ml)于37℃铺到96孔板中，然后添加100ul稀释的血清。将细胞轻轻混合并在37℃下孵育30-120分钟。在孵育时间之后，通过在4℃下以1250x g离心使细胞沉淀。将总共100uL的上清液转移到新鲜的96平底板上，并在Spectramax酶标仪上于412nm读数。如下所述进行溶血百分比的计算。

通过使用以下等式，利用吸光度值计算溶血百分比：

％溶血＝100×(实验细胞裂解-背景细胞裂解)/(最大细胞裂解-背景细胞裂解)

在该等式中，“背景细胞裂解”是在不含血清的仅GVB-Mg²⁺/EGTA缓冲液中孵育的细胞在A412nm处的OD。“最大细胞裂解”是用水处理的细胞在A412nm处的OD。裂解的最大抑制计算为曲线中最低值和最高值之间的差异，以最高值的百分比表示。数据表示为平均值±平均值的标准误。

测试的抗C5单克隆抗体。测试了一组12种抗C5单抗，包括H4H12166P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12177P2、H4H12176P2、H4H12161P、H4H12183P2、H4H12159P、H4H12164P、H4H12167P和H4H12163P。在测定中还评估了H4H12170P的Fab版本。

结果

H4H12166P与其他抗C5 mAb的组合完全阻断了通过替代途径激活的RbRBC溶血。如图1A和表2A所示，在25％NHS(正常人血清)和30分钟孵育时间的标准测定条件下，所有单一mAb处理在使AP溶血抑制约80％(或更低)时达到平台期。但是，当与H4H12166P以1∶1的摩尔比使用时，所有组合都将AP溶血阻断至基本上为零(图2B和表2B)。

表2A.在单一抗体存在下的红细胞裂解。

表2B.在抗体组合存在下的红细胞裂解。

抗C5 mAb组合的抑制作用在高血清浓度或更长的孵育时间下持续存在。将孵育时间从30分钟增加到120分钟(图2A和表3A)或将血清浓度从25％增加到48％(孵育120分钟)(图2B和表3B)两种情况都显著降低了单一mAb的抑制作用。然而，尽管更高的血清浓度或更长的孵育时间，H4H12166P和H4H12161P的组合仍然能够完全阻断AP溶血，表明该阻断作用是强力且完全的。

表3A.在抗体存在下孵育30或120分钟的红细胞裂解。

表3B.在抗体和25％或48％血清存在下的红细胞裂解。

不仅是mAb，利用Fab也观察到了组合作用，其还不依赖于H4H12166P，但是需要来自不同表位箱的组合mAb。当H4H12170P的Fab版本与H4H12166P以2∶1的摩尔比使用时，在30分钟和120分钟的孵育时间也都实现了完全阻断(图3和表4)。接下来，测试了观察到的组合作用是否需要H4H12166P。如图4和表5所示，抗体H4H12176P2和H4H12177P2的不同组合也完全阻断了通过替代途径的RbRBC溶血，表明组合作用不依赖于H4H12166P。但是，如图5所示，当测试来自相同表位箱的组合mAb(H4H12170P+H4H12159P、H4H12175P+H4H12177P2、H4H12176P2+H4H12164P、H4H12167P+H4H12163P)时，未观察到最大的溶血抑制，这表明不同的结合位点对于这种观察到的作用是必需的。

表4.在与H4H12166P以2∶1的摩尔比使用的H4H12170P的Fab版本的存在下的红细胞裂解。

表5.H4H12176P2和/或H4H12177P2存在下的红细胞裂解

添加C3导致单一抗C5而不是组合mAb的阻断作用降低。在1μM浓度的H4H12166P或H4H12161P mAb下，添加多余的人C3蛋白导致单一mAb中AP活性的部分恢复，但是在组合mAb中没有，表明C3的添加克服了单一抗C5 mAb而不是组合抗C5 mAb的作用(图6)。

与单一抗C5 mAb相比，组合抗C5 mAb的抑制作用不会引起对C5a产生的更强抑制。如图7所示，在单一(H4H12166P或H4H12161P)和组合抗C5 mAb(H4H12166P+H4H12161P)之间，对C5a产生的阻断作用没有表现出不同。

实施例2：类似于抗C5 mAb的组合，C5双特异性抗体实现了对替代补体途径激活的完全抑制

使用替代途径溶血测定作为对补体激活的量度，以评估抗C5 mAb阻断兔红细胞(RbRBC)裂解的能力。通过膜攻击复合物裂解兔红细胞是该测定的基础，通过其实验地测量补体激活。

将期望数量的RbRBC在GVB-Mg²⁺/EGTA缓冲液中洗涤并且以2x10⁸个细胞/ml的浓度重悬。为了测试单一抗C5 mAb或抗C5 mAb的组合的功效，将正常人血清在GVB-Mg²⁺/EGTA缓冲液中稀释至50-96％，使得在添加至RBC时达到25-48％的总浓度。使用圆底96孔板测量溶血活性。将总共100ul RbRBC(2x10⁸个细胞/ml)于37℃铺到96孔板中，然后添加100ul稀释的血清。将细胞轻轻混合并在37℃下孵育30-120分钟。在孵育时间之后，通过在4℃下以1250x g离心使细胞沉淀。将总共100uL的上清液转移到新鲜的96平底板上，并在Spectramax酶标仪上于412nm读数。如下所述进行溶血百分比的计算。

通过使用以下等式，利用吸光度值计算溶血百分比：

％溶血＝100×(实验细胞裂解-背景细胞裂解)/(最大细胞裂解-背景细胞裂解)

在该等式中，“背景细胞裂解”是在不含血清的仅GVB-Mg²⁺/EGTA缓冲液中孵育的细胞在A_412nm处的OD。“最大细胞裂解”是用水处理的细胞在A_412nm处的OD。裂解的最大抑制计算为曲线中最低值和最高值之间的差异，以最高值的百分比表示。数据表示为平均值±平均值的标准误。

对于检查mAb/C5的摩尔比的实验，将固定浓度的125或145nM的C5(购自CompTechInc.)添加到缺乏C5的正常人血清(购自CompTech Inc.)中，并在于替代途径溶血测定中进行测试之前，针对多种浓度的抗体进行滴定。

测试的抗C5单克隆抗体：

·H412176P2

·H412177P2

·由H412176P2和H412177P2制成的双特异性抗体(“H412176P2xH412177P2”)

C5双特异性抗体H412176P2xH412177P2完全阻断了通过替代途径激活的RbRBC溶血。如图8和表6所示，在25％NHS和30分钟孵育时间的标准测定条件下，H412176P2或H412177P2的单一mAb处理导致AP溶血的部分抑制。然而，当以1∶1的摩尔比使用时，H412176P2+H412177P2的组合将AP溶血阻断至基本上为零。由H412176P2和H412177P2的重链和轻链Ig链制成的双特异性抗体H412176P2xH412177P2也显示出与mAb的组合类似的对AP溶血的完全抑制

表6.裂解抑制百分比

几乎相等当量的抗体组合或C5-双特异性足以完全阻断通过替代途径激活的RbRBC溶血。如图9所示，在mAb/C5比例为约1.29时，组合mAb(H412176P2+H412177P2)或C5双特异性(H412176P2xH412177P2)将溶血阻断至接近零。该比例甚至更高比例的单个mAb仅提供部分抑制。使用H412176P2xH412177P2的进一步实验显示在1.0-1.5的mAb/C5比例下完全阻断了替代途径溶血测定(图10A和10B)。

实施例3：通过与多角度激光散射偶联的非对称流场流分离(asymmetrical flowfield-flow fractionation coupled to multi-angle laser light scattering，A4F-MALLS)对hC5和抗hC5单克隆抗体(mAb)之间形成的复合物的体外大小分析

A4F-MALLS系统由与配备有紫外(UV)二极管阵列检测器、Wyatt Technology Dawn

II激光散射仪(LS)和

T-rEX示差折光仪(RI)检测器的Agilent1200系列HPLC系统偶联的Eclipse^TM 3+A4F分离系统构成。检测器按以下顺序串联：UV-LS-RI。LS和RI检测器根据Wyatt Technology提供的说明进行校准。

将限定量的抗hC5 mAb各自与人补体C5(hC5；EMD Millipore)组合，并在1X DPBS，pH 7.4中稀释以产生表7中列出的最终摩尔比。将所有样品在环境温度下孵育2小时，并在4℃下保持未过滤，然后进样到装有W350间隔器箔(350μm间隔器厚度，2.2cm间隔器宽度)并使用10kDa MWCO Nadir再生纤维素膜的Eclipse^TM短通道中。在进样每个样品之前，用流动相缓冲液(10mM磷酸钠，500mM氯化钠，pH 7.0±0.1)对通道进行预平衡。单独注射牛血清白蛋白(BSA；2mg/mL；10μg样品上样量)，并且被包括作为系统适用性对照。

分离方法包括四个步骤：进样、聚焦、洗脱和通道“冲洗”步骤。在整个分离方法中，使用A4F-MALLS流动相缓冲液(10mM磷酸钠，500mM氯化钠，pH 7.0±0.1)。每个样品(7μg总蛋白上样量)以0.2mL/min的流速上样1分钟，然后以1.5mL/min的聚焦流速聚焦2分钟。用1.0mL/min的通道流速和45分钟内从3.0mL/min到0mL/min的线性梯度横流洗脱样品。最后，将横流在0mL/min的流速下保持另外5min，以冲洗通道。使用相同的参数设置对BSA进行分离。

表7.用于样品制备的每种组分的浓度

A4F-MALLS数据分析。使用ASTRA V软件(版本5.3.4.14，Wyatt Technology)分析数据。将数据拟合至将过量散射光与溶质浓度和重均摩尔质量Mw相关联的等式(KendrickBS，Kerwin BA，Chang BS，Philo JS.(2001).Anal Biochem.299(2)，136-46，“OnlineSize-Exclusion High-Performance Liquid Chromatography Light Scattering andDifferential Refractometry Methods to Determine Degree of Polymer Conjugationto Proteins and Protein-Protein or Protein-Ligand Association States”；Wyatt，PJ.(1993)Anal.Chim.Acta 272(1)，1-40，“Light Scattering and the AbsoluteCharacterization of Macromolecules”)：

等式1：

其中c是溶质浓度，R(θ，c)是作为散射角和浓度的函数的溶质的过量Raleigh比，Mw是摩尔质量，P(θ)描述了散射光的角度依赖性(对于回转半径＜50nm的颗粒为～1)，A₂是渗透压膨胀的第二维里系数(由于测量时在稀溶液上进行，所以其可以忽略不计)，并且K*由等式2定义：

等式2：

其中n_o代表溶剂折射率，N_A是阿伏伽德罗常数，λ₀是真空中入射光的波长，dn/dc代表溶质的比折射率增量。

从为使用的A4F-MALLS条件收集的BSA色谱图计算光散射检测器的归一化系数、检测器间延迟体积和谱带展宽项。将这些值应用于为所有其他样品收集的数据文件，以校正这些项。

使用Astra软件中提供的蛋白质缀合物分析通过实验确定dn/dc值和215nm处的消光系数(针对糖基化进行了校正)。将校正后的消光系数和dn/dc值用于分析所有蛋白质-蛋白质复合物样品。BSA单体的摩尔质量用于评估数据收集过程中光散射和示差折光检测器的校准常数(系统适用性检查)。由UV和RI检测器确定的BSA平均摩尔质量的相对标准偏差为≤5.0％。

A4F-MALLS用于评估抗hC5抗体和hC5之间形成的复合物的相对大小分布。表8提供了潜在mAb∶hC5复合物的理论摩尔质量及其预测的化学计量。

抗hC5 mAb组合的初步筛选突出了与hC5形成的复合物的大小分布差异。在没有第二mAb的情况下，当以等摩尔量混合时，H4H12166P与hC5形成典型的1∶1和1∶2复合物(图11，表9)。总体而言，所有检测的mAb组合均具有与hC5形成异聚复合物的能力，大多数组合在测试条件下在测试条件下倾向于符合2∶2 mAb∶hC5异聚复合物的较小离散物质(峰1，图12和13；表10)。尽管在这些样品中也可以检测到少量的较大的离散复合物(峰2)，但是非常大的、异质、扩展的抗体-抗原晶格(≥～1500kDa；峰3-4)(称为““paper-dolling”的过程)的形成非常有限。相反，H4H12166P与H4H12170P的组合倾向于与hC5形成更大的异质复合物，这表明与其他测试组合相比更高的“paper-dolling”程度(图14；表10)。最后，H4H12166P和H4H12171P的组合显示出与hC5形成异聚复合物的趋势降低，如通过该样品中检测到的游离mAb和1∶1 mAb∶hC5同聚复合物(*)的存在证明的(图15；表10)。这可能表明一个mAb的结合会影响组合中的另一个对hC5的亲和力(和/或解离速率)。或者，这表明与其他测试的组合相比，分离过程中该样品中异聚复合物的稳定性降低。

对H412176P2xH412177P2(双特异性抗hC5 mAb)和hC5之间形成的复合物的分析显示，在所有条件下稳定的1∶1 H412176P2xH412177P2∶hC5复合物是有利的。当以多种摩尔比混合时，H412176P2xH412177P2双特异性抗体主要与hC5形成稳定的1∶1复合物，表明H412176P2xH412177P2的两个臂优先与单个hC5分子结合-称为单配二价二价相互作用(monogamous，bivalent interaction)(图16；表11)。尽管可以在多种条件下检测到少量符合1∶2、2∶1和2∶2的mAb∶hC5的另外的离散复合物，但未观察到其他更高阶的复合物，表明H412176P2xH412177P2不促进与hC5的“paper-dolling”。

表8.mAb∶hC5配合物的理论摩尔质量

mAb∶hC5复合物	理论摩尔质量(kDa)
		1∶0	150
0∶1	195
		1∶1	345
2∶1	495
		1∶2	540
2∶2	690
		3∶2	840
2∶3	885
		3∶4	1230
4∶4	1380
		5∶5	1725
6∶5	1875
		5∶6	1920
6∶6	2070

表9.与单独H4H12166P的hC5复合物的近似摩尔质量和保留时间的总结表

R_t：保留时间；M_w：重均摩尔质量；min：分钟；kDa：千道尔顿；ND：未检出

表10.与抗hC5 mAb组合的hC5复合物的近似摩尔质量和保留时间的总结表

R_t：保留时间；M_w：重均摩尔质量；min：分钟；kDa：千道尔顿；ND：未检出

表11.与H412176P2xH412177P2(抗hC5双特异性mAb)的hC5复合物的近似摩尔质量和保留时间的总结表

R_t：保留时间；M_w：重均摩尔质量；min：分钟；kDa：千道尔顿；ND：未检出。

Claims (29)

1.组合，其包含：与C5特异性结合的第一抗原结合蛋白；以及一种或更多种另外的抗原结合蛋白，其

(i)在与所述第一抗原结合蛋白的表位不同的表位处与C5特异性结合；和/或

(ii)不与所述第一抗原结合蛋白竞争结合C5。

2.权利要求1所述的组合，其中所述第一抗原结合蛋白是与C5特异性结合的抗体或抗原结合片段；并且所述另外的抗原结合蛋白是与C5特异性结合的抗体或抗原结合片段或多肽。

3.权利要求1至2中任一项所述的组合，其包含为H4H12166P的第一抗体或其抗原结合片段；

以及

另外的抗体或其抗原结合片段，所述另外的抗体或其抗原结合片段选自：

H2M11683N；H2M11686N；H4H12159P；H4H12161P；H4H12164P；H4H12166P2；H4H12166P3；H4H12166P4；H4H12166P5；H4H12166P6；H4H12166P7；H4H12166P8；H4H12166P9；H4H12166P10；H4H12168P；H4H12169P；H4H12170P；H4H12171P；H4H12175P；H4H12176P2；H4H12177P2；H2M11682N；H2M11684N；H2M11694N和H2M11695N。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合，其中所述第一抗原结合蛋白包含：

抗体H4H12166P的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及

抗体H4H12166P的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；并且

所述另外的抗原结合蛋白包含：

(i)

抗体H4H12161P的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及

抗体H4H12161P的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；

(ii)

抗体H4H12170P的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及

抗体H4H12170P的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；

(iii)

抗体H4H12171P的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及

抗体H4H12171P的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；

(iv)

抗体H4H12175P的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及

抗体H4H12175P的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；

(v)

抗体H4H12176P2的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及

抗体H4H12176P2的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；

或者

(vi)

抗体H4H12177P2的重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及

抗体H4H12177P2的轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。

5.权利要求1至4中任一项所述的组合，其中所述第一抗原结合蛋白是抗体H4H12166P，或者包含其V_H和V_L的抗体或其抗原结合片段；并且所述另外的抗原结合蛋白是抗体H4H12161P、H4H12170P、H4H12171P、H4H12175P、H4H12176P2或H4H12177P2；或者包含其V_H和V_L的抗体或其抗原结合片段。

6.权利要求1至5中任一项所述的组合，其中所述第一抗原结合蛋白和所述另外的抗原结合蛋白被配制成单一组合物。

7.权利要求1所述的组合，其中所述另外的抗原结合蛋白是为coversin的多肽。

8.权利要求1所述的组合，其中所述另外的抗原结合蛋白是为依库珠单抗的抗体。

9.权利要求1至8中任一项所述的组合，其包含另外的治疗剂。

10.权利要求1至9中任一项所述的组合，其包含另外的治疗剂，所述另外的治疗剂是与C5特异性结合的抗体或抗原结合片段。

11.权利要求1至10中任一项所述的组合，其包含另外的治疗剂，所述治疗剂是与C5特异性结合的抗体，其选自：

H2M11683N；H2M11686N；H4H12159P；H4H12163P；H4H12164P；H4H12166P2；H4H12166P3；H4H12166P4；H4H12166P5；H4H12166P6；H4H12166P7；H4H12166P8；H4H12166P9；H4H12166P10；H4H12167P；H4H12168P；H4H12169P；H4H12176P2；H4H12177P2；H4H12183P2；H2M11682N；H2M11684N；H2M11694N；和H2M11695N；或其抗原结合片段；

或者其为

与C5结合的抗体、抗凝剂、凝血酶抑制剂、抗炎药、抗高血压药、免疫抑制剂、纤维蛋白溶解剂、降脂剂、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、抗CD20剂、抗TNFα剂、抗癫痫剂、C3抑制剂或抗血栓剂。

12.权利要求1至10中任一项所述的组合，其包含选自以下的另外的治疗剂：华法林、阿司匹林、肝素、苯茚二酮、磺达肝癸钠、艾卓肝素、阿加曲班、来匹卢定、比伐卢定或达比加群、皮质类固醇和非甾体抗炎药、长春新碱、环孢菌素A、氨甲喋呤、安克洛酶、ε-氨基己酸、纤溶酶抑制剂a1、前列环素、去纤苷、利妥昔单抗和硫酸镁。

13.双特异性或双互补位抗体或其抗原结合片段，其包含在第一表位处与C5特异性结合的第一抗原结合结构域，以及第二抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域

(i)在与所述第一抗原结合结构域的表位不同的第二表位处与C5特异性结合，和/或

(ii)不与所述第一抗原结合结构域竞争结合C5。

14.权利要求13所述的双特异性或双互补位抗体或片段，其是IgG。

15.双特异性或双互补位抗原结合蛋白，其选自：

H4H12161PxH4H12177P2；

H4H12166PxH4H12177P2；

H4H12170PxH4H12177P2；

H4H12171PxH4H12177P2；

H4H12175PxH4H12177P2；

H4H12176P2xH4H12177P2；

H4H12176P2xH4H12161P；

H4H12176P2xH4H12166P；

H4H12176P2xH4H12170P；

H4H12176P2xH4H12171P；

H4H12176P2xH4H12175P；

H4H12175PxH4H12161P；

H4H12175PxH4H12166P；

H4H12175PxH4H12170P；

H4H12175PxH4H12171P；

H4H12171PxH4H12161P；

H4H12171PxH4H12166P；

H4H12171PxH4H12170P；

H4H12170PxH4H12161P；

H4H12170PxH4H12166P；和

H4H12166PxH4H12161P。

16.复合物，其包含：

一种或更多种C5多肽或其抗原片段，其与不竞争结合C5的一种或更多种第一抗C5抗原结合蛋白和一种或更多种另外的抗C5抗原结合蛋白结合。

17.复合物，其包含：

(i)1∶1∶2、2∶2∶4或3∶3∶6比例的第一单特异性抗C5抗原结合蛋白与第二单特异性抗C5抗原结合蛋白与C5多肽或其抗原片段；

(ii)1∶1、1∶2、2∶1或2∶2比例的双特异性抗C5抗原结合蛋白与C5多肽或其抗原片段；或者

(iii)1∶1∶1、1∶1∶2或1∶2∶2比例的单特异性抗C5抗原结合蛋白与双特异性抗C5抗原结合蛋白与C5多肽或其抗原片段。

18.用于在对象中治疗或预防C5相关疾病或病症和/或用于在需要这样的治疗、预防和/或抑制的对象中抑制经典补体途径和替代补体途径二者的方法，所述方法包括向所述对象施用特异性结合C5的第一抗原结合蛋白和特异性结合C5的第二抗原结合蛋白；其中所述第一和第二抗原结合蛋白：(a)与C5上不同的、不重叠的表位结合；和/或(b)彼此不竞争结合C5

和/或

特异性结合C5的多特异性抗原结合蛋白；其中所述多特异性抗原结合蛋白包含第一和第二抗原结合结构域，其中所述结构域(a)与C5上不同的、不重叠的表位结合；和/或(b)彼此不竞争结合C5。

19.用于在需要这样的治疗或预防的对象中治疗或预防C5相关疾病或病症的方法，其包括向所述对象施用有效量的权利要求1至12中任一项所述的组合或者权利要求13至15中任一项所述的双特异性或双互补位抗体或片段。

20.权利要求18至19中任一项所述的方法，其中所述C5相关疾病或病症选自：急性呼吸窘迫综合征；成人呼吸窘迫综合征；年龄相关性黄斑变性；变态反应；奥尔波特综合征；阿尔茨海默病；哮喘；哮喘；动脉粥样硬化；非典型溶血性尿毒症综合征；自身免疫性疾病；由球囊血管成形术引起的补体激活；支气管收缩；大疱性类天疱疮；烧伤；C3肾小球病；毛细血管渗漏综合征；化学性损伤；慢性阻塞性肺病；克罗恩病；糖尿病；糖尿病性黄斑水肿；糖尿病肾病；糖尿病视网膜病变；呼吸困难；肺气肿；癫痫；纤维化粉尘疾病；冻疮；地理性萎缩；肾小球病；肺出血肾炎综合征；吉兰-巴雷综合征；血液透析引起的补体激活；血液透析并发症；溶血性贫血；咯血；遗传性血管性水肿；超急性同种异体移植排斥；超敏性肺炎；免疫复合物疾病；免疫复合物相关炎症；自身免疫性疾病的炎症；炎性疾病；遗传性CD59缺陷；惰性粉尘和/或矿物质引起的损伤；IL-2治疗期间白介素2诱导的毒性；狼疮性肾炎；膜增生性肾小球肾炎；膜增生性肾炎；主动脉重建后肠系膜动脉再灌注；感染性疾病后肠系膜动脉再灌注；脓毒症后肠系膜动脉再灌注；多发性硬化症；重症肌无力；心肌梗死；视神经脊髓炎；视神经脊髓炎；肥胖；眼血管生成；有机粉尘病；寄生虫病；帕金森病；阵发性夜间血红蛋白尿；肺炎；缺血后再灌注病症；心肺搭桥或肾脏搭桥的泵后综合征；进行性肾衰竭；蛋白尿性肾病；银屑病；肺栓塞和梗死；肺纤维化；肺血管炎；肾缺血；肾缺血再灌注损伤；肾移植；类风湿关节炎；精神分裂症；烟雾损伤；中风；中风；系统性红斑狼疮；系统性红斑狼疮肾炎；热损伤；热损伤；创伤性脑损伤；葡萄膜炎；血管炎；和异种移植排斥。

21.权利要求18至20中任一项所述的方法，其中向所述对象施用一种或更多种另外的治疗剂和/或一种或更多种治疗程序。

22.权利要求21所述的方法，其中向所述对象施用另外的治疗剂，所述另外的治疗剂是与C5特异性结合的抗体或抗原结合片段。

23.权利要求21所述的方法，其中向所述对象施用一种或更多种另外的治疗剂，所述另外的治疗剂是与C5结合的抗体，其选自：

H2M11683N；H2M11686N；H4H12159P；H4H12163P；H4H12164P；H4H12166P2；H4H12166P3；H4H12166P4；H4H12166P5；H4H12166P6；H4H12166P7；H4H12166P8；H4H12166P9；H4H12166P10；H4H12167P；H4H12168P；H4H12169P；H4H12176P2；H4H12177P2；H4H12183P2；H2M11682N；H2M11684N；H2M11694N；和H2M11695N；

或其抗原结合片段；

或者

其选自：与C5结合的抗体、抗凝剂、凝血酶抑制剂、抗炎药、抗高血压药、免疫抑制剂、纤维蛋白溶解剂、降脂剂、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、抗CD20剂、抗TNFα剂、抗癫痫剂、C3抑制剂和抗血栓剂；

和/或

其中向所述对象施用治疗程序，所述治疗程序是透析、血液或血浆输注或交换和/或骨髓/干细胞移植(BMT/SCT)。

24.权利要求21所述的方法，其中向所述对象施用一种或更多种另外的治疗剂，其选自：依库珠单抗、coversin、铁、抗胸腺细胞球蛋白、生长因子、华法林、阿司匹林、肝素、苯茚二酮、磺达肝癸钠、艾卓肝素、阿加曲班、来匹卢定、比伐卢定或达比加群、皮质类固醇和非甾体抗炎药、长春新碱、环孢菌素A、氨甲喋呤、安克洛酶、ε-氨基己酸、纤溶酶抑制剂a1、前列环素、去纤苷、利妥昔单抗、硫酸镁、avacopan、ravulizumab和avacincaptad pegol。

25.权利要求18至24中任一项所述的方法，其中将所述组合的一种或更多种组分皮下、静脉内、皮内、腹膜内、经口、肌内或颅内施用至所述对象。

26.权利要求18至25中任一项所述的方法，其中所述对象是人。

27.用于制备权利要求1至12中任一项所述的组合的方法，其包括将以下共包装到试剂盒中：

所述第一抗原结合蛋白；

所述一种或更多种另外的抗原结合蛋白；和

任选地，一种或更多种另外的治疗剂。

28.用于制备权利要求1至12中任一项所述的组合的方法，其包括将以下共配制成单一药物制剂

所述第一抗原结合蛋白，

所述一种或更多种另外的抗原结合蛋白；和

任选地，一种或更多种另外的治疗剂；和

可药用载体，

以及任选地将所述制剂并入装置或容器中。

29.组合，其为权利要求27至28中任一项所述的方法的产物。

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