BR122020019190B1 - Métodos para monitorar a responsividade de um indivíduo ao tratamento com um inibidor do complemento, métodos para diagnosticar um indivíduo tendo ou com risco de desenvolver síndrome urêmica hemolítica atípica (ahus) e uso de um kit de diagnóstico para diagnosticar ahus - Google Patents

Métodos para monitorar a responsividade de um indivíduo ao tratamento com um inibidor do complemento, métodos para diagnosticar um indivíduo tendo ou com risco de desenvolver síndrome urêmica hemolítica atípica (ahus) e uso de um kit de diagnóstico para diagnosticar ahus Download PDF

Info

Publication number
BR122020019190B1
BR122020019190B1 BR122020019190-2A BR122020019190A BR122020019190B1 BR 122020019190 B1 BR122020019190 B1 BR 122020019190B1 BR 122020019190 A BR122020019190 A BR 122020019190A BR 122020019190 B1 BR122020019190 B1 BR 122020019190B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
ahus
concentration
complement
antibody
treatment
Prior art date
Application number
BR122020019190-2A
Other languages
English (en)
Inventor
Susan Faas McKnight
Roxanne Cofiell
Anjli Kukreja
Yan Yan
Krystin A. Bedard (Falecida)
Original Assignee
Alexion Pharmaceuticals, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Alexion Pharmaceuticals, Inc. filed Critical Alexion Pharmaceuticals, Inc.
Publication of BR122020019190B1 publication Critical patent/BR122020019190B1/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/626—Diabody or triabody
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4716—Complement proteins, e.g. anaphylatoxin, C3a, C5a
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/475—Assays involving growth factors
    • G01N2333/485—Epidermal growth factor [EGF] (urogastrone)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/521—Chemokines
    • G01N2333/522—Alpha-chemokines, e.g. NAP-2, ENA-78, GRO-alpha/MGSA/NAP-3, GRO-beta/MIP-2alpha, GRO-gamma/MIP-2beta, IP-10, GCP-2, MIG, PBSF, PF-4 or KC
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5412—IL-6
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5421—IL-8
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5434—IL-12
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/545—IL-1
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/555—Interferons [IFN]
    • G01N2333/57—IFN-gamma
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70525—ICAM molecules, e.g. CD50, CD54, CD102
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/715—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • G01N2333/7151—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for tumor necrosis factor [TNF]; for lymphotoxin [LT]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
    • G01N2333/7452—Thrombomodulin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
    • G01N2333/75—Fibrin; Fibrinogen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/775—Apolipopeptides
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/81—Protease inhibitors
    • G01N2333/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • G01N2333/8139—Cysteine protease (E.C. 3.4.22) inhibitors, e.g. cystatin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/81—Protease inhibitors
    • G01N2333/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • G01N2333/8146—Metalloprotease (E.C. 3.4.24) inhibitors, e.g. tissue inhibitor of metallo proteinase, TIMP
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/974—Thrombin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/22—Haematology
    • G01N2800/226—Thrombotic disorders, i.e. thrombo-embolism irrespective of location/organ involved, e.g. renal vein thrombosis, venous thrombosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/34—Genitourinary disorders
    • G01N2800/347—Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

A divulgação fornece proteínas biomarcadoras, uma mudança na concentração ou nível de atividade das quais está associada com a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) ou tratamento clinicamente significativo de aHUS com um inibidor do complemento. Também são fornecidos composições e métodos para apurar a concentração e/ou atividade de uma ou mais das proteínas biomarcadoras em um fluído biológico. As composições e métodos são úteis, entre outras coisas, para avaliar o risco de desenvolver aHUS, diagnosticar aHUS, determinar se um indivíduo está experienciando a primeira apresentação aguda de aHUS, monitorar a progressão ou diminuição de aHUS, e/ou monitorar a resposta ao tratamento com um inibidor do complemento ou otimizar tal tratamento.

Description

[001] Dividido do BR 11 2016 002435 4, depositado em 06/08/2014.
REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS RELACIONADOS
[002] Este pedido reivindica prioridade para os Pedidos Provisórios U.S. Nos. 61/913.180 e 61/863.299, depositado em 6 de dezembro de 2013 e 7 de agosto de 2013, respectivamente. Os conteúdos inteiros dos pedidos anteriormente mencionados e de quaisquer patentes, pedidos de patente, e referências citadas por todo este relatório descritivo são aqui incorporados por referência em suas totalidades.
CAMPO TÉCNICO
[003] Os campos da invenção são a medicina, imunologia, biologia molecular, e química de proteína.
FUNDAMENTOS
[004] A síndrome urêmica hemolítica (HUS) é caracterizada pela trombocitopenia, anemia hemolítica microangiopática, e insuficiência renal aguda. A HUS é classificada como um de dois tipos: associada com diarréia (D+ HUS; também aludida como E. coli que produz a toxina shiga (STEC)-HUS ou HUS típica) e HUS não diarréica ou atípica (aHUS). D+ HUS é a forma mais comum, sendo responsável por mais do que 90 % dos casos e é causada por uma enfermidade precedente com uma bactéria que produz a toxina shiga, por exemplo, E. coli O157:H7. A aHUS é rara e tem uma taxa de mortalidade de até 25 %. Muitos pacientes com esta doença carregará a deterioração neurológica ou renal permanente, por exemplo, pelo menos 50 % dos paciente com a aHUSs progredirá para a insuficiência renal de estado terminal (ESRF). Ver, por exemplo, Kavanagh et al. (2006) British Medical Bulletin 77 e 78: 5-22.
[005] A aHUS pode ser genética, adquirida, ou idiopática. As formas hereditárias de aHUS podem ser associadas com mutações em vários componentes do complemento humano incluindo, por exemplo, fator H do complemento (CFH), proteína do cofator de membrana (MCP), fator I do complemento (CFI), proteína de ligação C4b (C4BP), fator B do complemento (CFB), e componente do complemento 3 (C3). Ver, por exemplo, Caprioli et al. (2006) Blood108: 1267-1279. Certas mutações no gene que codifica CD55, embora não ainda implicadas na aHUS, estão associadas com a severidade da aHUS. Ver, por exemplo, Esparza-Gordillo et al. (2005) Hum Mol Genet 14: 703-712.
[006] Até recentemente, as opções de tratamento para pacientes com a aHUS foram limitadas e frequentemente envolveram a infusão de plasma ou troca de plasma. em alguns casos, o paciente com a aHUSs passa pela nefrectomia uni- ou bilateral ou transplante renal (ver Artz et al. (2003) Transplantation 76:821-826). Entretanto, o retorno da doença nos pacientes tratados é comum. Recentemente, o tratamento de pacientes com a aHUS com o medicamento Soliris® foi aprovado nos Estados Unidos da América e na Europa. A despeito finalmente de se ter um medicamento útil para o tratamento de pacientes com a aHUS, existe ainda uma necessidade para diagnosticar pacientes com a aHUS, assim como monitorar a progressão e diminuição de aHUS.
SUMÁRIO
[007] A presente divulgação fornece, entre outras coisas, uma variedade de proteínas cuja atividade e/ou concentração em um fluído biológico é anormal em pacientes afligidos com a aHUS e/ou aqueles pacientes com a aHUS que recebem a terapia com inibidor do complemento. Daqui em diante estas proteínas são aludidas como “proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS” ou “proteínas biomarcadoras de aHUS”. Por exemplo, os inventores observaram que as concentrações e/ou atividades de várias proteínas no sangue (por exemplo, soro e/ou plasma) e urina são anormais em pacientes com a aHUS. Os inventores também observaram que, a seguir da administração de um anticorpo antagonista anti-C5 (eculizumab) a um ser humano, as concentrações de um subconjunto destas proteínas mudam. Em alguns casos, a concentração de uma ou mais das proteínas é normalizada. Embora a divulgação não esteja ligada a nenhuma teoria ou mecanismo de ação em particular, os inventores acreditam que monitorar um paciente tratado com um inibidor do complemento (tal como um anticorpo anti-C5) para uma mudança na concentração de uma ou mais destas proteínas - proteínas biomarcadoras de aHUS - é útil, por exemplo, para diagnosticar um paciente como tendo ou em risco de desenvolver aHUS. Monitorar a situação de uma ou mais destas proteínas biomarcadoras também pode ser útil para determinar se um paciente com a aHUS está respondendo à terapia com um inibidor do complemento. Além disso, avaliar a situação de um ou mais dos biomarcadores também é útil para identificar uma dose - uma dose mínima - de um inibidor do complemento, tal como um anticorpo anti-C5, que em virtude do seu efeito sobre a concentração de uma ou mais das proteínas biomarcadoras de aHUS no ser humano é suficiente para alcançar um efeito clinicamente significativo sobre a doença (isto é, suficiente para tratar uma doença associada com complemento tal como aHUS).
[008] Consequentemente, em um aspecto, a divulgação retrata um método para monitorar ou avaliar a situação das proteínas biomarcadoras associadas com a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) em um sujeito (por exemplo, um mamífero tal como um ser humano) ou um método para avaliar um ou ambos da concentração e nível de atividade de pelo menos uma proteína biomarcadora associada com a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) em um sujeito. O método compreende medir em um fluído biológico obtido do sujeito um ou ambos de (i) a concentração de pelo menos uma (por exemplo, pelo menos duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20) proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS no fluído biológico, em que as proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são qualquer um dos biomarcadores apresentados na Tabela 1, por exemplo, um selecionado do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, ICAM-1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8, e CCL5. O sujeito, por exemplo, pode ser um ser humano tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS. O sujeito pode ser um que foi (ou está sendo) tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um inibidor de componente do complemento C5 tal como um anticorpo anti-C5). O tratamento pode ter ocorrido a menos do que um mês (por exemplo, menos do que 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, ou 1 dia) antes da obtenção da amostra do sujeito. O método pode incluir ainda a etapa de determinar se o sujeito tem ou está em risco de desenvolver aHUS. Quando o sujeito foi tratado ou está sendo tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um anticorpo anti-C5) sob um programa de dosagem predeterminado, o método pode incluir ainda determinar se o paciente é responsivo (terapeuticamente) à terapia de inibidor do complemento.
[009] Em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para monitorar ou avaliar a situação de proteínas biomarcadoras associadas com a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) em um sujeito (por exemplo, um mamífero tal como um ser humano) ou um método para avaliar um ou ambos da concentração e nível de atividade de pelo menos uma proteína biomarcadora associada com a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) em um sujeito. O método compreende: (A) medir em um fluído biológico obtido do sujeito a concentração de pelo menos uma (por exemplo, pelo menos duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20) proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS no fluído biológico, em que as proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são qualquer um dos biomarcadores apresentados na Tabela 1, por exemplo, um selecionado do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, ICAM-1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8, e CCL5; e (B) registrar (por exemplo, em um registro eletrônico do paciente) os resultados da medição(ões) ou comunicar os resultados da(s) medição(ões) ao sujeito, ao tutor do sujeito, ou um profissional médico em cujo cuidado o sujeito foi colocado. O sujeito, por exemplo, pode ser um ser humano tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS. O sujeito pode ser um que foi (ou está sendo) tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um inibidor de componente do complemento C5 tal como um anticorpo anti-C5). O tratamento pode ter ocorrido a menos do que um mês (por exemplo, menos do que 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, ou 1 dia) antes da obtenção da amostra do sujeito. O método pode incluir ainda a etapa de determinar se o sujeito tem ou está em risco de desenvolver aHUS. Quando o sujeito foi tratado ou está sendo tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um anticorpo anti-C5) sob um programa de dosagem predeterminado, o método pode incluir ainda determinar se o paciente é responsivo (terapeuticamente) à terapia de inibidor do complemento.
[0010] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para monitorar ou determinar se um paciente está em risco de desenvolver microangiopatia trombótica. O método inclui (A) medir em um fluído biológico obtido do sujeito a concentração de pelo menos uma (por exemplo, pelo menos duas, três, quatro) proteína biomarcadora associada com trombose ou coagulação no fluído biológico, em que as proteínas biomarcadoras são qualquer um de tais biomarcadores apresentados na Tabela 1 ou Tabela 11, por exemplo, F1+2 ou dímero D; e (B) registrar (por exemplo, em um registro eletrônico do paciente) os resultados da(s) medição(ões) ou comunicar os resultados da(s) medição(ões) ao sujeito, ao tutor do sujeito, ou um profissional médico em cujo cuidado o sujeito foi colocado. O sujeito, por exemplo, pode ser um ser humano tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS. O sujeito pode ser um que foi (ou está sendo) tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um inibidor de componente do complemento C5 tal como um anticorpo anti-C5). O tratamento pode ter ocorrido a menos do que um mês (por exemplo, menor do que 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, ou 1 dia) antes da obtenção da amostra do sujeito. O método pode incluir ainda a etapa de determinar se o sujeito tem ou está em risco de desenvolver aHUS (ou confirmar um diagnóstico de aHUS) usando qualquer um dos métodos aqui descritos. Quando o sujeito foi tratado ou está sendo tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um anticorpo anti-C5) sob um programa de dosagem predeterminado, o método pode incluir ainda determinar se o paciente é responsivo (terapeuticamente) à terapia de inibidor do complemento, isto é, uma redução na concentração de um ou mais dos biomarcadores de trombose ou associados com a coagulação ocorre seguindo o tratamento com o inibidor do complemento.
[0011] Em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para monitorar ou avaliar a situação de proteínas biomarcadoras associadas com a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) em um sujeito (por exemplo, um mamífero tal como um ser humano) ou um método para avaliar um ou ambos da concentração e nível de atividade de pelo menos uma proteína biomarcadora associada com a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) em um sujeito. O método compreende: (A) medir em um fluído biológico obtido do sujeito a concentração de pelo menos uma (por exemplo, pelo menos duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, ou 13) proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS no fluído biológico, em que as proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são qualquer um dos biomarcadores apresentados na Tabela 1, por exemplo, um selecionado do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, TIMP-1, e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1); e (B) registrar (por exemplo, em um registro eletrônico do paciente) os resultados da(s) medição(ões) ou comunicar os resultados da(s) medição(ões) ao sujeito, ao tutor do sujeito, ou um profissional médico em cujo cuidado o sujeito foi colocado. O sujeito, por exemplo, pode ser um ser humano tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS. O sujeito pode ser um que foi (ou está sendo) tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um inibidor de componente do complemento C5 tal como um anticorpo anti-C5). O tratamento pode ter ocorrido a menos do que um mês (por exemplo, menos do que 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, ou 1 dia) antes da obtenção da amostra do sujeito. O método pode incluir ainda a etapa de determinar se o sujeito tem ou está em risco de desenvolver aHUS. Quando o sujeito foi tratado ou está sendo tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um anticorpo anti-C5) sob um programa de dosagem predeterminado, o método pode incluir ainda determinar se o paciente é responsivo (terapeuticamente) à terapia de inibidor do complemento.
[0012] Em algumas formas de realização, qualquer um dos métodos aqui descritos pode compreender ainda determinar se o sujeito tem ou está em risco de desenvolver aHUS. Em algumas formas de realização, uma concentração elevada, quando comparada com a concentração em um fluído biológico de controle normal do mesmo tipo, de pelo menos um de Ba, sC5b-9, C5a, sCD40L, fragmento de protombina F1+2, dímero D, trombomodulina, VCAM-1, vWF, FABP-1, ß2M, clusterina, cistatina C, TIMP-1, albumina, NGAL, CXCL10, CXCL9, IL-18, TNFR1, VCAM-1, MCP-1, VEGF, CCL5, IL-6, IFN-Y,indica que o sujeito tem, ou está em risco de desenvolver, aHUS.
[0013] Em algumas formas de realização, qualquer um dos métodos aqui descritos inclui determinar se o sujeito respondeu ao tratamento com o inibidor do complemento. Em algumas formas de realização, (a) uma concentração reduzida, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de pelo menos um de CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-y, um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero d, trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), componente do complemento C5a, sC5b9, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), albumina, CXCL10, CXCL9, e KIM-1; ou (b) uma concentração aumentada, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de CCL5, indica que o sujeito é responsivo ao tratamento com o inibidor.
[0014] Em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para monitorar a responsividade de um sujeito (por exemplo, um mamífero tal como um ser humano) ao tratamento com um inibidor de componente do complemento C5. O método inclui: medir a concentração de pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS em um fluído biológico, em que as proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são qualquer uma daquelas apresentadas na Tabela 1, por exemplo, uma selecionada do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN- Y, ICAM-1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8, e CCL5. O fluído biológico é obtido de um sujeito: (i) tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS e (ii) que está sendo (ou que foi, por exemplo, recentemente) tratado com um inibidor de componente do complemento C5 sob um programa de dosagem predeterminado. De acordo com tais métodos, (a) uma concentração reduzida, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de pelo menos um de CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero d, trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), albumina, CXCL10, CXCL9, e KIM-1; ou (b) uma concentração aumentada, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de CCL5, indica que o sujeito é responsivo ao tratamento com o inibidor.
[0015] Em algumas formas de realização, qualquer um dos métodos aqui descritos inclui determinar se o sujeito respondeu ao tratamento com o inibidor do complemento. Em algumas formas de realização, uma concentração reduzida, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de pelo menos um de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, TIMP-1, e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1).
[0016] Em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para monitorar a responsividade de um sujeito ao tratamento com um inibidor do complemento, em que o método compreende: determinar a concentração de pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS em um fluído biológico obtido do sujeito, em que as proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são selecionadas do grupo consistindo de: CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, IL-6, um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero d, trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), albumina, CXCL9, KIM-1, e CCL5. O sujeito tem, é suspeito de ter, ou está em risco de desenvolver aHUS e o sujeito foi ou está sendo tratado com um inibidor do complemento. (A) uma concentração reduzida, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de pelo menos um de CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, IL-6, um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero d, trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), albumina, CXCL9, e KIM-1; ou (B) uma concentração aumentada, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de CCL5, indica que o sujeito é responsivo ao tratamento com o inibidor.
[0017] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para reduzir o número, frequência, ou ocorrência, probabilidade de ocorrência, ou risco de desenvolver, TMA, usando um inibidor do complemento em uma maneira suficiente para induzir uma mudança fisiológica em pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas com a trombose ou coagulação. O método inclui: (a) determinar a concentração de pelo menos duas proteínas biomarcadoras em um fluído biológico obtido do sujeito, em que as proteínas biomarcadoras são selecionadas das Tabelas 1 ou 11 e dizem respeito à trombose e/ou coagulação (por exemplo, dímero D ou F1+2); e (b) administrar a um sujeito tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, TMA um inibidor do complemento em uma quantidade e com uma frequência suficiente para causar uma mudança fisiológica em pelo menos cada uma de duas (2) das proteínas biomarcadoras, em que a mudança fisiológica é uma redução na concentração das pelo menos duas proteínas biomarcadoras em relação à concentração dos marcadores em uma amostra biológica equivalente obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor do complemento. O método pode incluir medir a concentração dos biomarcadores tanto antes quanto depois do tratamento.
[0018] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para determinar se um paciente com a aHUS tratado com um inibidor do complemento sob um programa de dosagem predeterminado está em necessidade de: (i) tratamento com um inibidor do complemento diferente ou (ii) tratamento com o mesmo inibidor do complemento sob um programa de dosagem diferente. O método compreende: (A) determinar se o paciente com a aHUS é responsivo ao tratamento com o inibidor do complemento sob o programa de dosagem predeterminado, em que a determinação compreende: medir em um fluído biológico obtido do sujeito uma ou ambas da concentração e atividade de pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS no fluído biológico, em que as proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são selecionadas do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN- Y, ICAM-1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8, e CCL5, e em que: (a) uma concentração reduzida, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de pelo menos um de CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero d, trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), componente do complemento C5a, sC5b9, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), albumina, CXCL10, CXCL9, e KIM-1; ou (b) uma concentração aumentada, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de CCL5, indica que o sujeito é responsivo ao tratamento com o inibidor; e (B) se o paciente não é responsivo ao tratamento com o inibidor do complemento, administrar ao paciente um inibidor do complemento diferente ou o mesmo inibidor do complemento em uma dose mais alta ou programa de dosagem mais frequente quando comparado ao programa de dosagem predeterminado.
[0019] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para determinar se um paciente com a aHUS tratado com um inibidor do complemento sob um programa de dosagem predeterminado está em necessidade de: (i) tratamento com um inibidor do complemento diferente ou (ii) tratamento com o mesmo inibidor do complemento sob um programa de dosagem diferente. O método compreende: (A) determinar se o paciente com a aHUS é responsivo ao tratamento com o inibidor do complemento sob o programa de dosagem predeterminado, em que a determinação compreende: medir em um fluído biológico obtido do sujeito uma ou ambas da concentração e atividade de pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS no fluído biológico, em que as proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são selecionadas do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C,TIMP-1,e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), e em que: (a) uma concentração reduzida, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de pelo menos um de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, TIMP-1, e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1) indica que o sujeito é responsivo ao tratamento com o inibidor; e (B) se o paciente não é responsivo ao tratamento com o inibidor do complemento, administrar ao paciente um inibidor do complemento diferente ou o mesmo inibidor do complemento em uma dose mais alta ou programa de dosagem mais frequente quando comparado ao programa de dosagem predeterminado.
[0020] A concentração de uma ou mais das proteínas pode ser medida usando, por exemplo, um imunoensaio (por exemplo, ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA), um radioimunoensaio (RIA), Western blotting, ou dot blotting) ou arranjo de grânulo citométrico (CBA; ver os exemplos de trabalho). Tais métodos assim como kits úteis para a realização dos métodos são aqui descritos. Os métodos adequados para medir a atividade de vWF são conhecidos na técnica e aqui descritos.
[0021] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos cinco proteínas biomarcadoras individuais associadas com a aHUS são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos dez proteínas biomarcadoras individuais associadas com a aHUS são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos 15 proteínas biomarcadoras individuais associadas com a aHUS são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos 20 proteínas biomarcadoras individuais associadas com a aHUS são medidas.
[0022] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o fluído biológico é sangue. Em algumas formas de realização, o fluído biológico é uma fração do sangue, por exemplo, soro ou plasma. Em algumas formas de realização, o fluído biológico é urina. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, todas das medições são realizadas em um fluído biológico. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as medições são realizadas em pelo menos dois fluídos biológicos diferentes obtidos do sujeito. Em algumas formas de realização, as concentrações de pelo menos duas proteínas biomarcadoras individuais associadas com a aHUS são medidas e a concentração do primeiro biomarcador associado com a proteína aHUS é medida em um tipo de fluído biológico e o segundo biomarcador associado com a proteína aHUS é medida em um segundo tipo de fluído biológico.
[0023] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos dois (por exemplo, pelo menos três, quatro, ou todos) de IFN-Y, ICAM-1, IL-1 beta, e IL-12 p70 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações tanto de Ba quanto de sC5b9 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de um ou ambos de C5a e C5b9 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos dois (por exemplo, pelo menos três, quatro, cinco, seis, ou todos) de ß2M, clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, e FABP-1 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de CXCL10, CXCL9, e/ou KIM-1 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de um ou ambos de dímero D e F1+2 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos dois (por exemplo, pelo menos três, quatro, ou todos) de sCD40L, fragmento de protombina F1+2, e dímero D, são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de trombomodulina, VCAM-1, e/ou vWF são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de CXCL10, MCP-1, e/ou TNFR1 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos dois (por exemplo, pelo menos três, quatro, ou todos) de IFN-Y, ICAM-1, IL-1 beta, e IL-12 p70 são medidas.
[0024] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de um ou mais de CXCL9, CXCL10, IL-1 beta, IL-12 p70, IFN-y, MCP-1, CCL5, sCD40L, e/ou sTNFR1 são medidas no soro do sujeito. Em algumas formas de realização, as concentrações de um ou mais de componente do complemento C5a, sC5b9, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL10, CXCL9, e/ou KIM-1 são medidas na urina do sujeito. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de um ou mais de NGAL, um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero D, trombomodulina, e/ou Fator de von Willebrand (vWF) são medidas no plasma do sujeito.
[0025] Em algumas formas de realização, as concentrações de duas ou mais (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, ou 13) de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, TIMP-1, e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1) são medidas.
[0026] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de pelo menos duas do grupo consistindo em Ba, sC5b-9, e C5a é medida. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de um ou ambos de Ba e sC5b9 é medida. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de um ou ambos de C5a e C5b9 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos dois membros individuais do grupo consistindo em ß2M, clusterina, cistatina C, albumina, TIMP-1, NGAL, e FABP-1 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos dois membros individuais do grupo consistindo em CXCL10, CXCL9, IL-18, MCP-1, TNFR1, VEGF, IL-6, e IFN-Ysão medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de um ou ambos de dímero d e F1+2 é medida. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos dois membros individuais do grupo consistindo em sCD40L, fragmento de protombina F1+2, e dímero d são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de trombomodulina, VCAM-1, ou vWF é medida. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de TNFR1 é medida. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de pelo menos dois membros individuais do grupo consistindo em IFN-Y,CXCL10, CXCL9, IL-18, TNFR1, VCAM-1, MCP-1, VEGF, CCL5, e IL-6 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de pelo menos um biomarcador associado com a proteína aHUS selecionado do grupo consistindo em IFN-y, CXCL10, CXCL9, IL-18, TNFR1, VCAM-1, MCP-1, VEGF, e IL-6 é medida. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de pelo menos um biomarcador associado com a aHUS selecionado do grupo consistindo de microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL10, CXCL9, albumina, e KIM-1 é medida. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de pelo menos um biomarcador associado com a proteína aHUS selecionado do grupo consistindo de: CXCL10, CXCL9, IL-18, MCP-1, TNFR1, VEGF, IL-6, CCL5, IFN-y, IL-8, ICAM-1, IL-1 beta, e IL-12 p70 é medida. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de CXCL9, CXCL10, IL-1 beta, IL-12 p70, IFN-y, MCP-1, CCL5, sCD40L, ou sTNFR1 é medida no soro do sujeito. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de pelo menos um biomarcador associado com a aHUS selecionado do grupo consistindo de microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL10, CXCL9, albumina, e KIM-1 é medida na urina do sujeito. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de NGAL, um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero D, trombomodulina, ou Fator de von Willebrand (vWF) é medida no plasma do sujeito. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de Ba é medida (por exemplo, na amostra de plasma obtida do sujeito).
[0027] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o método requer registrar o(s) valor(es) medido(s) da concentração da pelo menos uma proteína biomarcadora de aHUS. O registro pode ser escrito ou em um meio legível por computador. O método também pode incluir comunicar o(s) valor(es) medido(s) da concentração da pelo menos uma proteína biomarcadora de aHUS ao sujeito e/ou a um médico em cujo cuidado o sujeito é colocado.
[0028] Em algumas formas de realização, qualquer um dos métodos aqui descritos pode incluir a etapa de administrar ao sujeito o inibidor do complemento em uma dose mais alta ou com uma frequência aumentada de dosagem, em relação ao programa de dosagem predeterminado, se o sujeito não é responsivo ao tratamento com o inibidor sob o programa de dosagem predeterminado.
[0029] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o inibidor do complemento é administrado ao sujeito sob um programa de dosagem predeterminado com base, em parte, no peso corporal do sujeito. Por exemplo, no caso de um anticorpo antagonista anti-C5 (por exemplo, eculizumab), para sujeitos tendo um peso corporal maior do que ou igual a 40 kg, o anticorpo pode ser administrado ao sujeito durante pelo menos 7 semanas sob o seguinte programa: pelo menos 800 mg do anticorpo, uma vez por semana durante quatro semanas consecutivas; pelo menos 800 mg do anticorpo uma vez durante a quinta semana; e pelo menos 800 mg do anticorpo bissemanalmente daí em diante. Em algumas formas de realização, o anticorpo é administrado ao sujeito durante pelo menos 7 semanas sob o seguinte programa: pelo menos 900 mg do anticorpo, uma vez por semana durante quatro semanas consecutivas; pelo menos 1200 mg do anticorpo uma vez durante a quinta semana; e pelo menos 1200 mg do anticorpo bissemanalmente daí em diante.
[0030] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, para os sujeitos tendo um peso corporal menor do que 40 kg porém maior do que ou igual a 30 kg, o anticorpo pode ser administrado ao sujeito durante pelo menos 7 semanas sob o seguinte programa: pelo menos 500 mg do anticorpo, uma vez por semana durante duas semanas consecutivas; pelo menos 700 mg do anticorpo uma vez durante a terceira semana; e pelo menos 700 mg do anticorpo bissemanalmente daí em diante. Em algumas formas de realização, o anticorpo é administrado ao sujeito durante pelo menos 5 semanas sob o seguinte programa: pelo menos 600 mg do anticorpo, uma vez por semana durante duas semanas consecutivas; pelo menos 900 mg do anticorpo uma vez durante a terceira semana; e pelo menos 900 mg do anticorpo bissemanalmente daí em diante.
[0031] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o peso corporal do sujeito é menor do que 30 kg, porém é maior do que ou igual a 20 kg e o anticorpo é administrado ao sujeito durante pelo menos 5 semanas sob o seguinte programa: pelo menos 500 mg do anticorpo, uma vez por semana durante duas semanas consecutivas; pelo menos 500 mg do anticorpo uma vez durante a terceira semana; e pelo menos 500 mg do anticorpo bissemanalmente daí em diante. Em algumas formas de realização, o anticorpo é administrado ao sujeito durante pelo menos 5 semanas sob o seguinte programa: pelo menos 600 mg do anticorpo, uma vez por semana durante duas semanas consecutivas; pelo menos 600 mg do anticorpo uma vez durante a terceira semana; e pelo menos 600 mg do anticorpo bissemanalmente daí em diante.
[0032] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o peso corporal do sujeito é menor do que 20 kg, porém é maior do que ou igual a 10 kg e o anticorpo é administrado ao sujeito durante pelo menos 4 semanas sob o seguinte programa: pelo menos 500 mg do anticorpo uma vez por semana durante uma semana; pelo menos 200 mg do anticorpo uma vez durante a segunda semana; e pelo menos 200 mg do anticorpo bissemanalmente daí em diante. Em algumas formas de realização, o anticorpo é administrado ao sujeito durante pelo menos 4 semanas sob o seguinte programa: pelo menos 600 mg do anticorpo uma vez por semana durante uma semana; pelo menos 300 mg do anticorpo uma vez durante a segunda semana; e pelo menos 300 mg do anticorpo bissemanalmente daí em diante.
[0033] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o peso corporal do sujeito é menor do que 10 kg, porém é maior do que ou igual a 5 kg e o anticorpo é administrado ao sujeito durante pelo menos 5 semanas sob o seguinte programa: pelo menos 200 mg do anticorpo, uma vez por semana durante uma semana; pelo menos 200 mg do anticorpo uma vez durante a segunda semana; e pelo menos 200 mg do anticorpo uma vez a cada três semanas daí em diante. Em algumas formas de realização, o anticorpo é administrado ao sujeito durante pelo menos 5 semanas sob o seguinte programa: pelo menos 300 mg do anticorpo, uma vez por semana durante uma semana; pelo menos 300 mg do anticorpo uma vez durante a segunda semana; e pelo menos 300 mg do anticorpo a cada três semanas daí em diante. Os programas de dosagem de anticorpo anti-C5 exemplares adicionais (por exemplo, programas de dosagem crônica) para aHUS são descritos na publicação do pedido de patente Internacional no. WO 2010/054403 (por exemplo, Tabelas 1 e 2 da WO 2010/054403), a divulgação da qual é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0034] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o inibidor é anticorpo ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo, uma molécula pequena, um polipeptídeo, um análogo de polipeptídeo, um peptidomimético, ou um aptâmero. Em algumas formas de realização, o inibidor pode ser um que iniba um ou mais dos componentes do complemento C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, Fator D, Fator B, properdina, MBL, MASP-1, MASP-2, ou fragmentos biologicamente ativo de qualquer um do precedente. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o inibidor do complemento inibe um ou ambos da geração da atividade de anaflatóxico associada com C5a e/ou a montagem do complexo de ataque de membrana associada com C5b.
[0035] As composições também podem conter formas que ocorrem naturalmente ou solúveis de compostos inibidores do complemento tais como CR1, LEX-CR1, MCP, DAF, CD59, Fator H, fator de veneno de cobra, FUT-175, complestatina, e K76 COOH.
[0036] Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento pode ser uma molécula do Fator H (FH) de receptor do complemento 2 (CR2) compreendendo: a) uma porção CR2 compreendendo CR2 (por exemplo, CR2 humano) ou um fragmento do mesmo, e b) uma porção FH compreendendo um FH ou um fragmento do mesmo, em que a molécula de CR2-FH ou fragmento do mesmo é capaz de se ligar a um ligante de CR2, e em que a molécula de CR2-FH é capaz de inibir a ativação do complemento do caminho alternativo. As proteínas de fusão CR2-FH exemplares são descritos e exemplificados, por exemplo, nas Publicações dos pedidos de patente internacionais nos. WO 2007/149567 e WO 2011/143637, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência na sua totalidade. Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento compreende um domínio de alvejamento tal como CR2 ou um anticorpo anti-C3d como descrito, por exemplo, na Publicação do pedido de patente internacional no. WO 2011/163412, a divulgação da qual é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Fusões de domínios de alvejamento com outros inibidores do complemento tais como CD59, CD55, e as moléculas como fator H podem ser usadas nos métodos aqui descritos como um inibidor do complemento. Ver a WO 2011/163412, acima.
[0037] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o inibidor do complemento é um anticorpo antagonista ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo. O anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo pode ser selecionado do grupo consistindo de um anticorpo humanizado, um anticorpo recombinante, um diacorpo, um anticorpo quimerizado ou quimérico, um anticorpo monoclonal, um anticorpo desimunizado, um anticorpo totalmente humano, um anticorpo de cadeia leve, um fragmento Fv, um fragmento Fd, um fragmento Fab, um fragmento Fab’, e um fragmento F(ab’)2.
[0038] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o anticorpo antagonista é um anticorpo anti-C5 tal como eculizumab. Em algumas formas de realização, o anticorpo antagonista é pexelizumab, um fragmento de ligação de C5 de anticorpo anti-C5.
[0039] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o inibidor do complemento é selecionado do grupo consistindo em MB12/22, MB12/22-RGD, ARC187, ARC1905, SSL7, e OmCI.
[0040] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o subconjunto de proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS a partir do qual um médico pode determinar a concentração de um ou mais (por exemplo, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, ou mais) de pode ser: Ba, trombomodulina, VCAM-1, TNFR1, F1+2, dímero D, CXCL10, IL-6, clusterina, TIMP- 1, FABP-1, ß2M, e cistatina C.
[0041] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um arranjo compreendendo uma pluralidade de agentes de ligação, em que cada agente de ligação da pluralidade tem um endereço único no arranjo, em que o arranjo compreende não mais do que 500 endereços únicos, em que cada agente de ligação da pluralidade se liga a uma proteína de análito biológico diferente, e em que o arranjo compreende agentes de ligação que se ligam a quatro ou mais proteínas de análito apresentadas na Tabela 1, por exemplo, selecionadas do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, ICAM-1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8, e CCL5. O arranjo é útil em qualquer um dos métodos aqui descritos. Em algumas formas de realização, o arranjo é um chip de proteína. Em algumas formas de realização, cada endereço do arranjo é um reservatório de uma placa de ensaio. Em algumas formas de realização, cada endereço do arranjo é uma partícula (por exemplo, um grânulo) tendo imobilizado em seguida um agente de ligação.
[0042] Como aqui usado, o termo “agente de ligação” inclui qualquer agente que ocorre naturalmente, sintético ou geneticamente engendrado, tal como proteína, que se liga a um antígeno (por exemplo, uma proteína biomarcadora de aHUS). Os agentes de ligação podem ser ou ser derivados de anticorpos que ocorrem naturalmente. Uma proteína ou agente de ligação podem funcionar similarmente a um anticorpo pela ligação a um antígeno específico para formar um complexo. Os agentes de ligação ou proteínas podem incluir fragmentos de ligação de antígeno isolados de anticorpos.
[0043] Em algumas formas de realização, o arranjo compreende anticorpos que se ligam a pelo menos duas (por exemplo, pelo menos três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ou 25) das proteínas de análito. Por exemplo, o arranjo pode compreender agentes de ligação/anticorpos que se ligam a pelo menos dois (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, ou 13) de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, TIMP-1, e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1).
[0044] Em algumas formas de realização, o arranjo compreende não mais do que 200 (por exemplo, não mais do que 175, 150, 125, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 45, 40, 35, 30, 25, ou 20) endereços únicos.
[0045] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata kit de diagnóstico compreendendo um ou mais de qualquer um dos arranjos aqui descritos e, opcionalmente, instruções para (a) obter e/ou processar uma amostra biológica (por exemplo, um fluído biológico) de um sujeito e/ou (b) medir um ou mais análitos em uma amostra biológica (por exemplo, um fluído biológico) de um sujeito.
[0046] Em um outro aspecto, a divulgação retrata kit de diagnóstico compreendendo: (a) uma placa de ensaio e (b) pelo menos três agentes de ligação, cada agente de ligação capaz de se ligar a um análito biológico diferente, em que os análitos são aqueles representados na Tabela 1, por exemplo, selecionados do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y,ICAM-1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8, e CCL5. Em algumas formas de realização, o kit de diagnóstico compreende um ou mais meios para medir a atividade de vWF no plasma humano.
[0047] Em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para diagnosticar um sujeito como tendo, ou estando em risco de desenvolver, síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS). O método inclui: medir em um fluído biológico a concentração de pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS selecionadas do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN- Y, ICAM-1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8, e CCL5. O fluído biológico é um obtido de um sujeito suspeito de ter ou em risco de desenvolver aHUS. De acordo com os métodos, uma concentração elevada, quando comparada com a concentração em um fluído biológico de controle normal do mesmo tipo, de pelo menos um de Ba, sC5b-9, C5a, sCD40L, fragmento de protombina F1+2, dímero d, trombomodulina, VCAM-1, vWF, FABP-1, ß2M, clusterina, cistatina C, TIMP-1, albumina, NGAL, CXCL10, CXCL9, IL- 18, TNFR1, VCAM-1, MCP-1, VEGF, CCL5, IL-6, ou IFN-Y, indica que o sujeito tem, ou está em risco de desenvolver, aHUS. Em algumas formas de realização, os pelo menos dois biomarcadores associados com a aHUS podem ser selecionados da Tabela 11, isto é, pelo menos dois (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, ou 13) de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, TIMP-1, e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP- 1).
[0048] Como aqui usado, o termo “normal,” quando usado para modificar os termos “indivíduo” ou “sujeito” refere-se a um indivíduo ou grupo de indivíduos que não têm uma doença ou condição particulares (por exemplo, aHUS) e também não é suspeito de ter ou estar em risco de desenvolver a doença ou condição. O termo “normal” também é aqui usado para qualificar um espécime ou amostra biológicos (por exemplo, um fluído biológico) isolados de um indivíduo ou sujeito (ou grupo de tais sujeitos) normais ou saudáveis, por exemplo, uma “amostra de controle normal” ou “fluído biológico de controle normal”.
[0049] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para determinar se um paciente está experienciando uma primeira manifestação da síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) aguda. O método compreende: medir um ou ambos da concentração de dímero D (por exemplo, a concentração plasmática de dímero d) e a concentração de proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1) (por exemplo, a concentração na urina de FABP-1), em que uma elevação na concentração de dímero D, em relação à concentração de dímero d em uma amostra de controle normal, e uma elevação na concentração de FABP-1, em relação à concentração de FABP-1 em uma amostra de controle normal, indica que o paciente com a aHUS está experienciando uma primeira manifestação de aHUS aguda. Em algumas formas de realização, a elevação de um ou ambos de dímero d e FABP-1 pode ser elevação significante.
[0050] Em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para tratar a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), o método compreendendo administrar a um sujeito tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS um inibidor do complemento (por exemplo, um inibidor de componente do complemento C5) em uma quantidade e com uma frequência suficiente para efetuar uma mudança fisiológica em pelo menos uma (por exemplo, pelo menos duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ou 25) proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS, em que a mudança fisiológica é selecionada do grupo consistindo de: (a) uma concentração reduzida, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de pelo menos um de CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero d, trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), componente do complemento C5a, sC5b9, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), albumina, CXCL10, CXCL9, e KIM-1; ou (b) uma concentração aumentada, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de CCL5. Em algumas formas de realização, o pelo menos um biomarcador associado com a aHUS pode ser selecionado da Tabela 11, isto é, pelo menos um (por exemplo, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, ou 13) de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, TIMP-1, e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP- 1).
[0051] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para tratar a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) usando um inibidor do complemento em uma maneira suficiente para induzir uma mudança fisiológica em pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS. O método inclui: (a) determinar a concentração de pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS em um fluído biológico obtido do sujeito, em que as proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são selecionadas do grupo consistindo de: CXCL10, MCP- 1, TNFR1, IFN-Y, IL-6, um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero d, trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), albumina, CXCL9, KIM-1, e CCL5; e (b) administrar a um sujeito tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS um inibidor do complemento em uma quantidade e com uma frequência suficiente para causar uma mudança fisiológica em pelo menos cada uma de duas (2) proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS, em que a mudança fisiológica é selecionada do grupo consistindo de: (a) uma concentração reduzida, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de pelo menos um de CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-y, IL-6, um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero d, trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), albumina, CXCL9, ou KIM-1; e (b) uma concentração aumentada em um fluído biológico obtido do sujeito, quando comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do sujeito antes do tratamento com o inibidor, de CCL5. O método também pode incluir determinar se as mudanças fisiológicas ocorreram. Em algumas formas de realização, os pelo menos dois biomarcadores associados com a aHUS podem ser selecionados da Tabela 11, isto é, pelo menos dois (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, ou 13) de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C,TIMP-1,e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1).
[0052] Em algumas formas de realização, os métodos podem incluir ainda a etapa de medir as concentrações de pelo menos duas proteínas biomarcadoras individuais associadas com a aHUS em um fluído biológico, em que as proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são selecionadas do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, ICAM-1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8, e CCL5. O fluído biológico é obtido do sujeito. Em algumas formas de realização, os pelo menos dois biomarcadores associados com a aHUS podem ser selecionados da Tabela 11, isto é, pelo menos dois (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, ou 13) de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, TIMP-1, e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1).
[0053] Em algumas formas de realização, qualquer um dos métodos aqui descritos pode incluir determinar se as pelo menos duas (por exemplo, pelo menos três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ou 25) mudanças fisiológicas ocorreram. Em algumas formas de realização, as concentrações de pelo menos dois de IFN-y, ICAM-1, IL-1 beta, e IL-12 p70 são reduzidas. Em algumas formas de realização, as concentrações tanto de Ba quanto de sC5b9 são reduzidas. Em algumas formas de realização, a concentração (por exemplo, a concentração na urina) de cada um de C5a e sC5b9 é reduzida. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações (por exemplo, a concentração na urina) de pelo menos duas (por exemplo, pelo menos três, quatro, cinco, seis, ou todos) de ß2M, clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, e FABP-1 são reduzidas. Em algumas formas de realização, as concentrações (por exemplo, a concentração na urina) de CXCL10, CXCL9, e/ou KIM-1 são reduzidas. Em algumas formas de realização, as concentrações (por exemplo, concentração plasmática) de um ou ambos de dímero D e F1+2 são reduzidas. Em algumas formas de realização, as concentrações (por exemplo, as concentrações de soro e/ou plasma) de pelo menos dois (por exemplo, pelo menos três, ou todos) de sCD40L, fragmento de protombina F1+2, e dímero D são reduzidas. Em algumas formas de realização, as concentrações de trombomodulina, VCAM-1, e/ou vWF são reduzidas. Em algumas formas de realização, as concentrações (por exemplo, as concentrações séricas) de CXCL10, MCP-1, e TNFR1 são reduzidas. Em algumas formas de realização, as concentrações (por exemplo, as concentrações séricas) de pelo menos dois (por exemplo, pelo menos três, quatro, ou todos) de IFN- Y, ICAM-1, IL-1 beta, e IL-12 p70 são reduzidas. Em algumas formas de realização, as pelo menos duas mudanças fisiológicas podem ser uma redução na concentração de pelo menos dois biomarcadores associados com a aHUS selecionados da Tabela 11, isto é, pelo menos dois (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, ou 13) de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), C5a, trombomodulina, VCAM-1, fragmento de protombina F1+2, dímero D, sTNFR1, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, TIMP-1, e proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1).
[0054] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de Ba (por exemplo, concentração plasmática de plasma Ba) é reduzida em pelo menos 10 % em 6 semanas após o início do tratamento. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de Ba (por exemplo, concentração plasmática de Ba) é reduzida em pelo menos 30 % em 12 semanas após o início do tratamento. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de C5a (por exemplo, concentração urinária de C5a) é reduzida em pelo menos 40 % em 3 semanas após o início do tratamento. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de C5a (por exemplo, concentração urinária de C5a) é reduzida em pelo menos 70 % em 6 semanas após o início do tratamento. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de C5b-9 (por exemplo, concentração urinária ou plasmática de C5b-9) é reduzida em pelo menos 50 % em 3 semanas após o início do tratamento. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de F1+2 (por exemplo, a concentração plasmática de F1+2) é reduzida em pelo menos 20 % em 6 semanas após o início do tratamento. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de dímero d (por exemplo, a concentração plasmática de dímero d) é reduzida em pelo menos 40 % em 6 semanas após o início do tratamento. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de trombomodulina (por exemplo, a concentração sérica de trombomodulina) é reduzida em pelo menos 20 % em 12 semanas após o início do tratamento. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de VCAM- 1 (por exemplo, a concentração sérica de VCAM-1) é reduzida em pelo menos 20 % em 12 semanas após o início do tratamento.
[0055] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o inibidor do complemento é administrado ao sujeito em uma quantidade e com uma frequência suficiente para efetuar uma mudança fisiológica em três ou mais biomarcadores associados com a aHUS. Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento é administrado ao sujeito em uma quantidade e com uma frequência suficiente para efetuar uma mudança fisiológica em pelo menos quatro biomarcadores associados com a aHUS. Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento é administrado ao sujeito em uma quantidade e com uma frequência suficiente para efetuar uma mudança fisiológica em pelo menos cinco biomarcadores associados com a aHUS. Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento é administrado ao sujeito em uma quantidade e com uma frequência suficiente para efetuar uma mudança fisiológica em pelo menos 10 biomarcadores associados com a aHUS. Em algumas formas de realização, o inibidor de componente do complemento C5 é administrado ao sujeito em uma quantidade e com uma frequência suficiente para efetuar uma mudança fisiológica em 15 ou mais biomarcadores associados com a aHUS.
[0056] Em algumas formas de realização, uma mudança fisiológica em pelo menos duas (por exemplo, pelo menos três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ou 25 ou mais) proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS ocorre dentro de dois dias, três dias, quatro dias, cinco dias, seis dias, uma semana, duas semanas, três semanas, quatro semanas, seis semanas, dois meses, nove semanas, ou três meses ou mais depois da administração (por exemplo, administração crônica) do inibidor.
[0057] Em algumas formas de realização, a concentração de pelo menos um (por exemplo, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ou 25) biomarcador associado com a proteína de aHUS é reduzida em pelo menos 5 (por exemplo, pelo menos 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, ou 70) % a seguir da administração do inibidor.
[0058] Em algumas formas de realização, a concentração de pelo menos um (por exemplo, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ou 25) biomarcador associado com a proteína de aHUS é reduzida até dentro de 50 (por exemplo, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, ou 1) % da concentração normal da proteína biomarcadora a seguir da administração de uma ou mais doses do inibidor.
[0059] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de FABP-1 (por exemplo, FABP-1 urinário) é reduzida em pelo menos 80 % (por exemplo, 85, 90, 95, ou até 100 %) a seguir da administração de um inibidor do complemento humano (por exemplo, um anticorpo anti-C5). Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de cistatina C (por exemplo, cistatina C urinária) é reduzida em pelo menos 80 % (por exemplo, 85, 90, 95, 99, ou até 100 %) a seguir da administração de um inibidor do complemento humano (por exemplo, um anticorpo anti-C5). Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de clusterina (por exemplo, clusterina urinária) é reduzida em pelo menos 80 % (por exemplo, 85, 90, 95, 98, ou até 100 %) a seguir da administração de um inibidor do complemento humano (por exemplo, um anticorpo anti-C5). Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de um fragmento proteolítico do fator B (por exemplo, Ba) é reduzida em pelo menos 10 % (por exemplo, 15, 20, 25, 30, ou 40 %) a seguir da administração de um inibidor do complemento humano (por exemplo, um anticorpo anti-C5). Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de sTNFR1 é reduzida em pelo menos 80 % (por exemplo, 85, 90, ou mais %) a seguir da administração de um inibidor do complemento humano (por exemplo, um anticorpo anti-C5). Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de trombomodulina ou sVCAM-1 é reduzida em pelo menos 80 % (por exemplo, 85, 90, 95, ou até 100 %) a seguir da administração de um inibidor do complemento humano (por exemplo, um anticorpo anti-C5). Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de um ou ambos de F1+2 ou dímero D é reduzida em pelo menos 80 % (por exemplo, 85, 90, 95, ou mais %) a seguir da administração de um inibidor do complemento humano (por exemplo, um anticorpo anti-C5).
[0060] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de pelo menos uma (por exemplo, pelo menos duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ou 25) das proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS é normalizada a seguir da administração do inibidor. Em algumas formas de realização, as concentrações (por exemplo, as concentrações urinária) de pelo menos três da microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL10, CXCL9, e KIM-1 são normalizada.
[0061] Como aqui usado, o termo “normalizada” ou termos gramaticais semelhantes, quando usados no contexto do efeito de um terapia de inibidor do complemento sobre a concentração ou atividade de uma proteína de aHUS biomarcadora, se refere a uma concentração ou atividade medidas em um fluído biológico de uma proteína biomarcadora que foi levada dentro de 50 (por exemplo, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, ou 1) % da faixa de concentração ou atividade médias da proteína de aHUS biomarcadora como medida em uma amostra do mesmo tipo de fluído biológico obtido de um grupo de indivíduos saudáveis (indivíduos normais). Por exemplo, o tratamento de um paciente com a aHUS com um inibidor do complemento pode normalizar uma concentração de clusterina urinária elevada para dentro, por exemplo, de 20 % da faixa de concentração urinária média normal de clusterina. Em algumas formas de realização, o tratamento com o inibidor do complemento restauraria a concentração na urina de clusterina para dentro da faixa de concentração urinária média normal de clusterina.
[0062] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o sujeito recebeu diálise pelo menos uma vez (por exemplo, pelo menos duas vezes, três vezes, quatro vezes, ou cinco vezes ou mais) dentro dos três meses (por exemplo, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, ou 1 semana(s)) antes do tratamento com o inibidor. Por exemplo, em algumas formas de realização o sujeito recebeu diálise uma vez dois meses antes de receber a terapia de inibidor do complemento. Em um outro exemplo, o sujeito pode ser um que recebeu diálise três vezes dentro do período de três mês exatamente antes de receber a terapia de inibidor do complemento. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, em relação à concentração em um sujeito saudável, as concentrações de um ou mais de TNFR1, Ba, fragmento F1+2 de trombomodulina, e sC5b9 são elevadas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, em relação às concentrações (por exemplo, as concentrações na urina) em um ser humano saudável, as concentrações de um ou mais de ß2M, sC5b9, C5a, cistatina C, clusterina, TIMP-1, e NGAL são elevadas.
[0063] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o sujeito (por exemplo, um sujeito humano) está experienciando uma primeira manifestação de aHUS aguda. Por exemplo, antes do tratamento com o inibidor do complemento, o sujeito pode ter concentrações elevadas, em relação ás concentrações normais, de um ou ambos de dímero D e FABP-1.
[0064] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o sujeito (por exemplo, um sujeito humano) é um tendo aHUS, mas julgado estar em remissão clínica (por exemplo, o sujeito é um tendo níveis normais de plaquetas ou outros marcadores hematológicos tais como LDH ou haptoglobina). Em algumas formas de realização, um tal sujeito é um tendo níveis elevados de um ou mais dos biomarcadores aHUS aqui descritos incluindo, mas não limitado, um ou mais de Ba, dímero D, VCAM-1, e fragmentos de protombina 1+2.
[0065] É entendido que para qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração e/ou atividade de uma ou mais proteínas biomarcadoras de aHUS podem ser determinadas. Por exemplo, em algumas formas de realização, um médico pode medir a atividade de vWF em uma amostra biológica obtida do sujeito como um substituto para a concentração de vWF (ou outras proteínas biomarcadoras) na amostra. Os métodos para avaliar a atividade relativa das proteínas biomarcadoras de aHUS apresentadas na Tabela 1 são conhecidos na técnica.
[0066] Como debatido aqui em detalhes (por exemplo, nos exemplos de trabalho), a aHUS é uma doença genética, potencialmente letal envolvendo a desregulagem do complemento crônica. Os pacientes afligidos com a doença sofrem, entre outras coisas, de microangiopatia trombótica (TMA), que pode resultar em acidente vascular cerebral e insuficiência renal. Eculizumab, um anticorpo antagonista anti-C5, foi mostrado reduzir dramaticamente a TMA, normalizar os níveis de plaqueta, e melhorar a função renal de pacientes com a aHUS. Mesmo assim, mesmo com o benefício clínico evidente e robusto da terapia de inibidor do complemento para os pacientes com a aHUS, alguns pacientes experienciam ainda níveis elevados de várias proteínas biomarcadoras de aHUS a despeito do tratamento. Por exemplo, os inventores descobriram que, em alguns pacientes, os níveis (por exemplo, no plasma) de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb) não normalizam a seguir do tratamento com um anticorpo antagonista anti- C5. Além disso, para alguns pacientes, os níveis de fragmento de protombina 1+2, dímero D, trombomodulina, VCAM-1, TNFR1, e níveis de CXCL10 são reduzidos mas não normalizam com o tempo. Embora a divulgação não esteja ligada a qualquer teoria ou mecanismo de ação particulares, estas observações sugerem que, para alguns pacientes, níveis baixos de inflamação e coagulopatia podem persistir mesmo com a terapia de inibidor do complemento. Assim, a divulgação considera métodos em que um inibidor do complemento é administrado em combinação com uma segunda terapia para tratar o nível baixo de inflamação persistente em alguns pacientes com a aHUS.
[0067] Assim, ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para tratar a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS). O método compreende administrar (por exemplo, administrar cronicamente) a um sujeito (por exemplo, um sujeito humano) tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor do complemento (por exemplo, um inibidor de componente do complemento C5) e uma quantidade terapeuticamente eficaz de: (i) um anticoagulante, (ii) um agente fibrinolítico; (iii) um agente anti- inflamatório; ou (iv) um inibidor de IL-6, IL-8, CXCL-9, IL-18, ou VEGF. Em algumas formas de realização, dois inibidores do complemento podem ser usados (por exemplo, um inibidor de C5 e um inibidor de C3, tal como, um anticorpo anti-Fator B, um anticorpo anti-C3, ou um anticorpo anti-C3b). Em algumas formas de realização, no momento de descontinuar a terapia com um inibidor de C5, um inibidor de componente do complemento C3 pode ser administrado ao paciente durante um tempo suficiente para reduzir a ativação do caminho alternativo a montante.
[0068] Em algumas formas de realização, os métodos podem incluir monitorar a situação de um ou mais biomarcadores de aHUS e determinar se iniciar uma segunda terapia (além da terapia de inibidor do complemento) ou modificar o regime de dosagem de uma ou mais terapias secundárias sendo administradas a um paciente com a aHUS. Por exemplo, durante o tratamento (por exemplo, tratamento crônico) com um inibidor do complemento, a concentração de uma ou mais proteínas biomarcadoras associadas com aHUS pode ser medida em um ou mais fluídos biológicos obtidos do sujeito. Se a concentração de uma ou mais das proteínas biomarcadoras não normalizou e/ou permanece elevada, um médico pode decidir administrar ao sujeito um ou mais agentes secundários adicionais (por exemplo, anti- inflamatórios) para tratar qualquer um dos efeitos fisiopatológicos resultantes dos biomarcadores elevados.
[0069] O inibidor do complemento pode ser qualquer um daqueles aqui descritos. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o inibidor é anticorpo ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo, uma molécula pequena, um polipeptídeo, um análogo de polipeptídeo, um peptidomimético, ou um aptâmero. Em algumas formas de realização, o inibidor pode ser um que inibe um ou mais de componentes do complemento C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, Fator D, Fator B, properdina, MBL, MASP-1, MASP-2, ou fragmentos biologicamente ativos de qualquer um dos precedentes. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o inibidor do complemento inibe um ou ambos da geração da atividade anafilatóxica associada com C5a e/ou a montagem do complexo de ataque à membrana associado com C5b.
[0070] As composições também podem conter formas que ocorrem naturalmente ou solúveis de inibidor de compostos complementares tais como CR1, LEX-CR1, MCP, DAF, CD59, Fator H, fator de veneno de cobra, FUT-175, complestatina, e K76 COOH.
[0071] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o inibidor do complemento é um anticorpo antagonista ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo. O anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo pode ser selecionado do grupo consistindo de um anticorpo humanizado, um anticorpo recombinante, um diacorpo, um anticorpo quimerizado ou quimérico, um anticorpo monoclonal, um anticorpo desimunizado, um anticorpo totalmente humano, um anticorpo de cadeia leve, um fragmento Fv, um fragmento Fd, um fragmento Fab, um fragmento Fab’, e um fragmento F(ab’)2.
[0072] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o anticorpo antagonista é um anticorpo anti-C5 tal como eculizumab. Em algumas formas de realização, o anticorpo antagonista é pexelizumab, um fragmento de ligação de C5 de anticorpo anti-C5.
[0073] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o inibidor do complemento é selecionado do grupo consistindo em MB12/22, MB12/22-RGD, ARC187, ARC1905, SSL7, e OmCI.
[0074] Em algumas formas de realização, o anticoagulante é selecionado do grupo consistindo em: uma coumarina, heparina, um inibidor do fator Xa, e um inibidor de trombina. Os exemplos de anticoagulantes incluem, por exemplo, varfarina (Coumadin), aspirina, heparina, fenindiona, fondaparinux, idraparinux, e inibidores de trombina (por exemplo, argatroban, lepirudin, bivalirudin, ou dabigatran).
[0075] Em algumas formas de realização, o agente fibrinolítico é selecionado do grupo consistindo em ancrod, ácido e-aminocapr0ico, antiplasm ina-ai, prostaciclina, e defibrotida.
[0076] Em algumas formas de realização, o agente anti-inflamatório é um agente anti-citocina tal como um anticorpo antagonista (ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo) ou um receptor de citocina solúvel, que se liga a uma citocina inflamatória e inibe a atividade da citocina. O agente anti-citocina, por exemplo, pode ser um inibidor de TNF (por exemplo, um anticorpo anti-TNF ou proteína receptora de TNF solúvel) ou um agente anti-CD20.
[0077] Agentes anti-inflamatórios também incluem, por exemplo, esteróides (por exemplo, dexametazona), medicamentos anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs) (por exemplo, indometacina, naproxen, sulindac, diclofenaco, aspirina, flurbiprofeno, oxaprozin, salsalato, difunisal, piroxicam, etodolac, meclofenamato, ibuprofeno, fenoprofeno, cetoprofeno, nabumetona, tolmetina, magnésio salicilato de colina, inibidores de COX-2, antagonistas de TNF alfa (etanercept, adalimumab, infliximab, golimumab), medicamentos anti-reumáticos modificador de doença (DMARDS) (por exemplo, sulfasalazina, metotrexato), ciclosporina, retinóides e corticoesteróides.
[0078] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para determinar se a concentração de uma ou mais proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são elevadas em um paciente tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), em que o método compreende: (i) medir em uma amostra biológica obtida do paciente a concentração de cada um de pelo menos dois biomarcadores associados com a aHUS da Tabela 11 (infra), isto é, selecionados do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B, C5a, C5b-9 solúvel (sC5b-9), TNFR1 solúvel (sTNFR1), VCAM-1 solúvel (sVCAM-1), trombomodulina, fragmentos de protombina 1 e 2 (F1+2), dímero D, clusterina, TIMP-1, FABP-1, microglobulina beta-2 (ß2m), e cistatina C, e (ii) determinar se o paciente tem uma concentração elevada de cada um de pelo menos dois dos biomarcadores associados com a aHUS quando comparada a uma concentração de controle normal dos mesmos pelo menos dois biomarcadores. Em algumas formas de realização, as pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são medidas usando um imunoensaio, tal como, um ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA) ou um radioimunoensaio (RIA). O fluído biológico, por exemplo, pode ser sangue, uma fração do sangue (por exemplo, plasma ou soro), ou urina. É entendido que qualquer combinação de qualquer duas ou mais (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11 ou 12) dos biomarcadores de aHUS anteriormente mencionados pode ser medida e analisada de acordo com os métodos aqui descritos.
[0079] Em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para diagnosticar um paciente como tendo síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) (ou confirmar um diagnóstico de aHUS, por exemplo, onde o paciente atingiu dois ou mais dos critérios de inclusão debatido sob o Exemplo 1), em que o método compreende: (i) medir em uma amostra biológica obtida de um paciente suspeito de ter aHUS ou em risco de desenvolver aHUS a concentração de cada um de pelo menos dois biomarcadores associados com a aHUS selecionados do grupo consistindo de: um fragmento proteolítico do fator B, C5a, C5b-9 solúvel (sC5b-9), TNFR1 solúvel (sTNFR1), VCAM-1 solúvel (sVCAM-1), trombomodulina, fragmentos de protombina 1 e 2 (F1+2), dímero D, clusterina, TIMP-1, FABP-1, microglobulina beta-2 (ß2m), e cistatina C, e (ii) diagnosticar um paciente como tendo aHUS (ou confirmar um diagnóstico de aHUS) se a concentração de cada um de pelo menos dois dos biomarcadores associados com a aHUS são elevados quando comparados a uma concentração de controle normal dos mesmos pelo menos dois biomarcadores. Em algumas formas de realização, as pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas com a aHUS são medidas usando um imunoensaio, tal como, um ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA) ou um radioimunoensaio (RIA). O fluído biológico, por exemplo, pode ser sangue, uma fração do sangue (por exemplo, plasma ou soro), ou urina. É entendido que qualquer combinação de qualquer dois ou mais (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11 ou 12) dos biomarcadores de aHUS anteriormente mencionados pode ser medida e analisada de acordo com os métodos aqui descritos.
[0080] Uma concentração de controle normal, como usada em qualquer um dos métodos aqui descritos, pode ser (ou pode estar fundamentada na), por exemplo, a concentração de um dado biomarcador associado com a proteína de aHUS em uma amostra biológica ou amostra biológicas obtida de um ou mais (por exemplo, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 15, 20, 25, 30, 35, ou 40 ou mais) indivíduos saudáveis. Em algumas formas de realização, uma concentração de controle normal de um biomarcador pode ser (ou pode estar fundamentada na), por exemplo, a concentração do biomarcador em uma amostra reunida obtida de dois ou mais (por exemplo, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 15, 20, 25, 30, 35, ou 40 ou mais) indivíduos saudáveis. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as amostras reunidas pode ser de indivíduos saudáveis ou, pelo menos, indivíduos que não têm ou não são suspeitos de ter (nem em risco de desenvolver) aHUS. Por exemplo, determinar se um sujeito é um tendo aHUS pode envolver comparar a concentração medida de uma ou mais proteínas de componente do complemento (por exemplo, Tabela 1 ou Tabela 11) em uma amostra biológica (ou vários tipos diferentes de amostra biológica) obtida do paciente e comparando a concentração medida com a concentração média das mesmas proteínas nas amostras saudáveis reunidas. Tais concentrações de controle de ser humano saudável pode ser, em algumas formas de realização, uma faixa de valores, ou uma média ou valor médio obtido da faixa.
[0081] Em algumas formas de realização, a concentração de pelo menos um biomarcador associado com a aHUS é medida em dois ou mais tipos de fluído biológico. Em algumas formas de realização, a concentração da primeira das pelo menos duas proteínas biomarcadoras de aHUS é medida em um tipo de fluído biológico e a concentração da segunda das pelo menos duas proteínas biomarcadoras de aHUS é medida em um segundo tipo de fluido.
[0082] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração do fragmento proteolítico do fator B é medida. O fragmento, por exemplo, pode ser Ba. A amostra biológica pode ser uma amostra de plasma. Como descrito na Tabela 11, a concentração de controle normal de Ba pode ser menor do que 1000 ng/ml. A concentração de controle normal de Ba pode ser menor do que 600 ng/ml. A concentração de controle normal de Ba pode estar entre 300 e 600 ng/ml.
[0083] Em algumas formas de realização, a concentração de Ba na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos duas vezes maior do que a concentração de controle normal de Ba. Em algumas formas de realização, a concentração de Ba na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos cinco vezes maior do que a concentração de controle normal de Ba. Em algumas formas de realização, a concentração de Ba na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 1500 ng/ml. Em algumas formas de realização, a concentração de Ba na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 2500 ng/ml.
[0084] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de C5a é medida. A amostra biológica na qual C5a é medido pode ser uma amostra de urina. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de C5a é menor do que 2 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de C5a é menor do que 1 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de C5a está entre 0 e 0,7 ng por mg de creatinina urinária.
[0085] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de C5a na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos duas vezes maior do que a concentração de controle normal de C5a. Em algumas formas de realização, a concentração de C5a na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos dez vezes maior do que a concentração de controle normal de C5a. Em algumas formas de realização, a concentração de C5a na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos quarenta vezes maior do que a concentração de controle normal de C5a. Em algumas formas de realização, a concentração de C5a na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 5 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de C5a na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 9 ng por mg de creatinina urinária.
[0086] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de sC5b-9 é medida. A amostra biológica na qual sC5b-9 é medido pode ser uma amostra de urina. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de sC5b-9 é menor do que 2 ng por mg de creatinina urinária. A concentração de controle normal de sC5b-9 pode ser menor do que 1 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de sC5b-9 está entre 0 e 0,6 ng por mg de creatinina urinária.
[0087] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de sC5b-9 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos dez vezes maior do que a concentração de controle normal de sC5b-9. Em algumas formas de realização, a concentração de sC5b-9 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos cinquenta vezes maior do que a concentração de controle normal de sC5b-9. Em algumas formas de realização, a concentração de sC5b-9 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos cem vezes maior do que a concentração de controle normal de sC5b-9. Em algumas formas de realização, a concentração de sC5b-9 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 20 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de sC5b-9 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 30 ng por mg de creatinina urinária.
[0088] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de sTNFR1 é medida. A amostra biológica na qual sTNFR1 é medido pode ser uma amostra de soro. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de sTNFR1 é menor do que 2000 pg/ml. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de sTNFR1 é menor do que 1500 pg/ml. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de sTNFR1 está entre 400 e 1500 pg/ml.
[0089] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de sTNFR1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos duas vezes maior do que a concentração de controle normal de sTNFR1. Em algumas formas de realização, a concentração de sTNFR1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos cinco vezes maior do que a concentração de controle normal de sTNFR1. Em algumas formas de realização, a concentração de sTNFR1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos quinze vezes maior do que a concentração de controle normal de sTNFR1. Em algumas formas de realização, a concentração de sTNFR1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 10.000 pg/ml. Em algumas formas de realização, a concentração de sTNFR1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 15.000 pg/ml.
[0090] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de sVCAM-1 é medida. A amostra biológica na qual sVCAM-1 é medido pode ser uma amostra de soro. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de sVCAM-1 é menor do que 500 ng/ml. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de sVCAM-1 é menor do que 300 ng/ml. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de sVCAM-1 está entre 100 e 500 ng/ml.
[0091] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de sVCAM-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 10 % maior do que a concentração de controle normal de sVCAM-1. Em algumas formas de realização, a concentração de sVCAM- 1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 30 % maior do que a concentração de controle normal de sVCAM-1. Em algumas formas de realização, a concentração de sVCAM-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 50 % maior do que a concentração de controle normal de sVCAM-1. Em algumas formas de realização, a concentração de sVCAM- 1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 550 ng/ml. Em algumas formas de realização, a concentração de sVCAM-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 650 ng/ml.
[0092] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de trombomodulina é medida. A amostra biológica na qual a trombomodulina é medida pode ser uma amostra de plasma. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de trombomodulina é menor do que 5 ng/ml. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de trombomodulina é menor do que 3 ng/ml. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de trombomodulina está entre 2 e 6 ng/ml.
[0093] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de trombomodulina na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 10 % maior do que a concentração de controle normal de trombomodulina. Em algumas formas de realização, a concentração de trombomodulina na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 30 % maior do que a concentração de controle normal de trombomodulina. Em algumas formas de realização, a concentração de trombomodulina na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 50 % maior do que a concentração de controle normal de trombomodulina. Em algumas formas de realização, a concentração de trombomodulina na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 8 ng/ml. Em algumas formas de realização, a concentração de trombomodulina na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 10 ng/ml.
[0094] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de F1+2 é medida. A amostra biológica na qual F1+2 é medido pode ser uma amostra de plasma. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de F1+2 é menor do que 400 pmol/L. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de F1+2 é menor do que 300 pmol/L. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de F1+2 está entre 50 e 400 pmol/L.
[0095] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de F1+2 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 30 % maior do que a concentração de controle normal de F1+2. Em algumas formas de realização, a concentração de F1+2 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 50 % maior do que a concentração de controle normal de F1+2. Em algumas formas de realização, a concentração de F1+2 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 100 % maior do que a concentração de controle normal de F1+2. Em algumas formas de realização, a concentração de F1+2 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 900 pmol/L. Em algumas formas de realização, a concentração de F1+2 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 1000 pmol/L.
[0096] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de dímero D é medida. A amostra biológica na qual o dímero D é medido pode ser uma amostra de plasma. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de dímero D é menor do que 500 µg/L. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de dímero D é menor do que 400 µg/L. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de dímero D está entre 100 e 500 µg/L.
[0097] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de dímero D na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos duas vezes maior do que a concentração de controle normal de dímero D. Em algumas formas de realização, a concentração de dímero D na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos cinco vezes maior do que a concentração de controle normal de dímero D. Em algumas formas de realização, a concentração de dímero D na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos dez vezes maior do que a concentração de controle normal de dímero D. Em algumas formas de realização, a concentração de dímero D na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 1500 µg/L. Em algumas formas de realização, a concentração de dímero D na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 2500 µg/L.
[0098] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de clusterina é medida. A amostra biológica na qual clusterina é medida pode ser uma amostra de urina. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de clusterina é menor do que 500 ng por mg de creatinina urinária. A concentração de controle normal de clusterina, por exemplo, pode ser menor do que 400 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de clusterina está entre 0 e 500 ng por mg de creatinina urinária.
[0099] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de clusterina na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos duas vezes maior do que a concentração de controle normal de clusterina. Em algumas formas de realização, a concentração de clusterina na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos cinco vezes maior do que a concentração de controle normal de clusterina. Em algumas formas de realização, a concentração de clusterina na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos dez vezes maior do que a concentração de controle normal de clusterina. Em algumas formas de realização, a concentração de clusterina na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 900 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de clusterina na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 1200 ng por mg de creatinina urinária.
[00100] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de TIMP-1 é medida. A amostra biológica na qual TIMP-1 é medida pode ser uma amostra de urina. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de TIMP-1 é menor do que 10 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de TIMP-1 é menor do que 5 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de TIMP-1 está entre 0 e 10 ng por mg de creatinina urinária.
[00101] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de TIMP-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos duas vezes maior do que a concentração de controle normal de TIMP-1. Em algumas formas de realização, a concentração de TIMP-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos dez vezes maior do que a concentração de controle normal de TIMP-1. Em algumas formas de realização, a concentração de TIMP-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos vinte vezes maior do que a concentração de controle normal de TIMP-1. Em algumas formas de realização, a concentração de TIMP-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 15 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de TIMP-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 20 ng por mg de creatinina urinária.
[00102] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de FABP-1 (também aqui aludido como L-FABP-1) é medida. A amostra biológica na qual C5a é medida pode ser uma amostra de urina. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de FABP-1 é menor do que 20 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de FABP-1 é menor do que 15 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de FABP-1 está entre 0 e 20 ng por mg de creatinina urinária.
[00103] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de FABP-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos duas vezes maior do que a concentração de controle normal de FABP-1. Em algumas formas de realização, a concentração de FABP-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos dez vezes maior do que a concentração de controle normal de FABP-1. Em algumas formas de realização, a concentração de FABP-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos vinte vezes maior do que a concentração de controle normal de FABP-1. Em algumas formas de realização, a concentração de FABP-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 40 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de FABP-1 na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 50 ng por mg de creatinina urinária.
[00104] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de ß2m é medida. A amostra biológica na qual ß2m é medida pode ser uma amostra de urina. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de ß2m é menor do que 5 µg por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de ß2m é menor do que 3 µg por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de ß2m está entre 0 e 5 µg por mg de creatinina urinária.
[00105] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de ß2m na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos duas vezes maior do que a concentração de controle normal de ß2m. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de ß2m na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos dez vezes maior do que a concentração de controle normal de ß2m. Em algumas formas de realização, a concentração de ß2m na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos vinte vezes maior do que a concentração de controle normal de ß2m. Em algumas formas de realização, a concentração de ß2m na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 15 µg por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de ß2m na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 20 µg por mg de creatinina urinária.
[00106] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de cistatina C é medida. A amostra biológica na qual cistatina C é medida pode ser uma amostra de urina. E em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de cistatina C é menor do que 400 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de cistatina C é menor do que 300 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de controle normal de cistatina C está entre 0 e 400 ng por mg de creatinina urinária.
[00107] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, a concentração de cistatina C na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos duas vezes maior do que a concentração de controle normal de cistatina C. Em algumas formas de realização, a concentração de cistatina C na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos dez vezes maior do que a concentração de controle normal de cistatina C. Em algumas formas de realização, a concentração de cistatina C na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos vinte vezes maior do que a concentração de controle normal de cistatina C. Em algumas formas de realização, a concentração de cistatina C na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 900 ng por mg de creatinina urinária. Em algumas formas de realização, a concentração de cistatina C na amostra biológica é julgada elevada quando a mesma é de pelo menos 1200 ng por mg de creatinina urinária.
[00108] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de dois ou mais de fragmentos proteolíticos do fator B, C5a, e sC5b-9 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de C5a e sC5b-9 são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de sVCAM-1 e trombomodulina são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de F1+2 e dímero D são medidas. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as concentrações de dois ou mais de clusterina, TIMP-1, ß2m, FABP-1, e cistatina C são medidas.
[00109] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para avaliar o nível de ativação de caminho alternativo em um paciente tendo aHUS, suspeito de ter aHUS, ou em risco de desenvolver aHUS, antes, durante, ou depois do tratamento com um inibidor do complemento, tal como, um anticorpo anti-C5. O método compreende: medir a concentração de um fragmento proteolítico do fator B (por exemplo, Ba ou Bb) em uma amostra biológica obtida de um paciente tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um inibidor de componente do complemento C5 humano, tal como, um anticorpo anti-C5).
[00110] Ainda em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para determinar se um paciente respondeu à terapia com um inibidor do complemento (por exemplo, teve uma redução no risco de desenvolver trombose ou teve uma redução no número, frequência, ou ocorrência de microangiopatia trombótica), o método compreendendo medir a concentração de um ou mais biomarcadores de trombose ou coagulação apresentadas na Tabela 1 ou 11, por exemplo, F1+2, dímero D, vWF, ou trombomodulina, em uma amostra biológica obtida de um paciente em risco elevado de, sofrendo de, ou suspeito de ter, microangiopatia trombótica (TMA) e tratado com um inibidor do complemento; e determinar que o paciente respondeu à terapia se a concentração do um ou mais biomarcadores na amostra biológica é reduzida, quando comparada com a concentração do um ou mais biomarcadores em uma amostra biológica do mesmo tipo obtido do paciente antes do tratamento com o inibidor do complemento ou determinar que o paciente não respondeu à terapia se a concentração do um ou mais biomarcadores na amostra biológica não é reduzida, quando comparada com a concentração do um ou mais biomarcadores em uma amostra biológica do mesmo tipo obtido do paciente antes do tratamento com o inibidor do complemento. Em algumas formas de realização, o paciente tem, é suspeito de ter, ou está em risco de desenvolver, aHUS.
[00111] Em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para determinar se um paciente com a aHUS respondeu à terapia com um inibidor do complemento, o método compreendendo medir a concentração de um ou mais biomarcadores de ativação do complemento terminal apresentados na Tabela 1 ou 11, por exemplo, C5a e/ou sC5b-9, em uma amostra biológica obtida de um paciente tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS e tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um anticorpo anti-C5); e determinar que o paciente respondeu à terapia se a concentração do um ou mais biomarcadores na amostra biológica é reduzida, quando comparada com a concentração do um ou mais biomarcadores em uma amostra biológica do mesmo tipo obtido do paciente antes do tratamento com o inibidor do complemento ou determinar que o paciente não respondeu à terapia se a concentração do um ou mais biomarcadores na amostra biológica não é reduzida, quando comparada com a concentração do um ou mais biomarcadores em uma amostra biológica do mesmo tipo obtida do paciente antes do tratamento com o inibidor do complemento. Assim, o método pode ser usado para tratar ou monitorar o bloqueio do complemento terminal em um paciente com a aHUS tratado com um inibidor do complemento. Nas formas de realização em que o paciente é não responsivo, ou menos responsivo à terapia, o método também pode incluir mudar a quantidade de dose ou frequência de dose do inibidor do complemento ou eleger um inibidor do complemento diferente (por exemplo, um inibidor da ativação de C3) para o uso no tratamento do paciente.
[00112] Em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para determinar se um paciente com a aHUS respondeu à terapia com um inibidor do complemento, o método compreendendo medir a concentração de um ou mais biomarcadores de inflamação vascular ou ativação endotelial apresentados na Tabela 1 ou 11, por exemplo, sTNFR1, sVCAM-1, ou trombomodulina, em uma amostra biológica obtida de um paciente tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS; e determinar que o paciente respondeu à terapia se a concentração do um ou mais biomarcadores na amostra biológica é reduzida, quando comparada com a concentração do um ou mais biomarcadores em uma amostra biológica do mesmo tipo obtida do paciente antes do tratamento com o inibidor do complemento ou determinar que o paciente não respondeu à terapia se a concentração do um ou mais biomarcadores na amostra biológica não é reduzida, quando comparada com a concentração do um ou mais biomarcadores em uma amostra biológica do mesmo tipo obtida do paciente antes do tratamento com o inibidor do complemento. Assim, o método pode ser usado para avaliar ou monitorar a inflamação vascular em um paciente com a aHUS tratado com um inibidor do complemento. Nas formas de realização em que o paciente é não responsivo, ou menos responsivo à terapia, o método também pode incluir mudar a quantidade de dose ou frequência de dose do inibidor do complemento ou eleger um inibidor do complemento diferente (por exemplo, um inibidor da ativação de C3) para o uso no tratamento do paciente.
[00113] Em um outro aspecto, a divulgação retrata um método para determinar se um paciente com a aHUS respondeu à terapia com um inibidor do complemento, o método compreendendo medir a concentração de um ou mais biomarcadores de lesão renal apresentados na Tabela 1 ou 11, por exemplo, clusterina, TIMP-1, FABP-1, ß2m, e/ou cistatina C, em uma amostra biológica obtida de um paciente tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS; e determinar que o paciente respondeu à terapia se a concentração do um ou mais biomarcadores na amostra biológica é reduzida, quando comparada com a concentração do um ou mais biomarcadores em uma amostra biológica do mesmo tipo obtida do paciente antes do tratamento com o inibidor do complemento ou determinar que o paciente não respondeu à terapia se a concentração do um ou mais biomarcadores na amostra biológica não é reduzida, quando comparada com a concentração do um ou mais biomarcadores em uma amostra biológica do mesmo tipo obtida do paciente antes do tratamento com o inibidor do complemento. Assim, o método pode ser usado para avaliar ou monitorar a lesão renal em um paciente com a aHUS tratado com um inibidor do complemento. Nas formas de realização em que o paciente é não responsivo, ou menos responsivo à terapia, o método também pode incluir mudar a quantidade de dose ou frequência de dose do inibidor do complemento ou eleger um inibidor do complemento diferente (por exemplo, um inibidor da ativação de C3) para o uso no tratamento do paciente.
[00114] Os inventores também descobriram que, nos pacientes com a aHUS, a elevação relativa das concentrações dos marcadores da ativação do complemento terminal C5a e sC5b-9 (por exemplo, concentrações urinárias) é muito mais alta do que a elevação relativa dos níveis de marcadores da ativação do caminho alternativo do complemento (por exemplo, Ba) nestes pacientes. Isto é, a concentração média de C5a e sC5b-9 em pacientes com a aHUS foi 45 e 305 vezes mais alta, respectivamente, do que a concentração média destes marcadores nos ser humano saudáveis normais, ao passo que a concentração média de Ba foi apenas de aproximadamente 5 vezes mais alta do que a concentração média de Ba nos seres humanos saudáveis normais. Embora não estando ligados por qualquer teoria ou mecanismo particulares de ação, os inventores acreditam que a razão da ativação do complemento terminal em relação à ativação do caminho alternativo é uma ferramenta de diagnóstico útil para aHUS. Assim, em um outro aspecto, a divulgação retrata um método de diagnosticar aHUS ou confirmar um diagnóstico de aHUS, método este que inclui comparar o nível de ativação do complemento terminal (por exemplo, sC5b- 9 ou C5a) com o nível de ativação da ativação de caminho alternativo a montante (por exemplo, Ba ou Bb) (em relação aos seres humanos saudáveis normais), em que um grau mais alto de ativação terminal em relação á ativação de caminho alternativo é uma indicação de que o paciente tem aHUS. Por exemplo, uma razão indicativa de aHUS seria, por exemplo, aproximadamente 45:5 ou 305:5, vezes de indução da ativação do complemento terminal para vezes de indução da ativação de caminho alternativo. Além disso, os inventores acreditam que esta razão possa ser útil para distinguir aHUS de outras doenças associadas com complemento, tais como, púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), que pode não exibir uma tal diferença nos níveis do complemento terminal e ativação de caminho alternativo a montante.
[00115] “Polipeptídeo,” “peptídeo,” e “proteína” são usados intercambiavelmente e significam qualquer cadeia ligada a peptídeo de aminoácidos, independente do comprimento ou modificação pós-traducional. As proteínas aqui descritas podem conter ou ser proteínas do tipo selvagem ou pode ser variantes que não têm mais do que 50 (por exemplo, não mais do que uma, duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, ou 50) substituições de aminoácido conservativas. As substituições conservativas tipicamente incluem substituições dentro dos seguintes grupos: glicina e alanina; valina, isoleucina, e leucina; ácido aspártico e ácido glutâmico; asparagina, glutamina, serina e treonina; lisina, histidina e arginina; e fenilalanina e tirosina.
[00116] Como aqui usado, a identidade de sequência de aminoácido percentual (%) é definida como a porcentagem de aminoácidos em uma sequência candidata que são idênticos aos aminoácidos em uma sequência de referência, depois de alinhar as sequências e introduzir intervalos, se necessário, para se alcançar a identidade de sequência percentual máxima. O alinhamento para os propósitos de determinar a identidade de sequência percentual pode ser obtido de vários modos que estão dentro da habilidade na técnica, por exemplo, usando software de computador publicamente disponíveis tais como o software BLAST. Os parâmetros apropriados para medir o alinhamento, incluindo qualquer um dos algoritmos necessários para se obter alinhamento máximo em relação ao tamanho natural das sequências que são comparadas podem ser determinados pelos métodos conhecidos.
[00117] Como aqui usado, o termo “anticorpo” inclui tanto anticorpos inteiros quanto fragmentos de ligação de antígeno dos anticorpos inteiros. Os anticorpos inteiros incluem isótipos de anticorpo diferentes incluindo os anticorpos IgM, IgG, IgA, IgD, e IgE. O termo “anticorpo” inclui um anticorpo policlonal, um anticorpo monoclonal, um anticorpo quimerizado ou quimérico, um anticorpo humanizado, um anticorpo primatizado, um anticorpo desimunizado, e um anticorpo totalmente humano. O anticorpo pode ser fabricado em ou derivado de qualquer uma de uma variedade de espécies, por exemplo, mamíferos tais como seres humanos, primatas não humanos (por exemplo, orangotango, babuínos, ou chimpanzés), cavalos, gado bovino, porcos, ovelhas, cabras, cães, gatos, coelhos, porquinhos da Índia, gerbos, hamsters, ratos, e camundongos. O anticorpo pode ser um anticorpo purificado ou um recombinante.
[00118] Como aqui usado, os termos “fragmento de anticorpo,” “fragmento de ligação de antígeno,” ou termos similares se referem a um fragmento de um anticorpo que retém a capacidade para se ligar a um antígeno alvo (por exemplo, C5 humano) e inibir a atividade do antígeno alvo. Tais fragmentos incluem, por exemplo, um anticorpo de cadeia leve, um fragmento Fv de cadeia única (scFv), um fragmento Fd, um fragmento Fab, um fragmento Fab’, ou um fragmento F(ab’)2. Um fragmento scFv é uma cadeia de polipeptídeo única que inclui as regiões variáveis tanto da cadeia pesada quanto da leve do anticorpo a partir do qual o scFv é derivado. Além disso, intracorpos, minicorpos, triacorpos, e diacorpos também são incluídos na definição de anticorpo e são compatíveis para o uso nos métodos aqui descritos. Ver, por exemplo, Todorovska et al. (2001) J Immunol Methods248(1): 47-66; Hudson e Kortt (1999) J Immunol Methods231(1): 177-189; Poljak (1994) Structure2(12): 1121-1123; e Rondon e Marasco (1997) Annual Review of Microbiology 51: 257-283, as divulgações de cada um dos quais são aqui incorporadas por referência em sua totalidade. Os anticorpos biespecíficos (incluindo anticorpos DVD-Ig; ver abaixo) também são abrangidos pelo termo “anticorpo.” Os anticorpos específicos são monoclonais, preferivelmente anticorpos humanos ou humanizados que tenham especificidades de ligação para pelo menos dois antígenos diferentes.
[00119] Como aqui usado, o termo “anticorpo” também inclui, por exemplo, anticorpos de domínio único tais como anticorpos de domínio único camelizados. ver, por exemplo, Muildermans et al. (2001) Trends Biochem Sci26: 230-235; Nuttall et al. (2000) Curr Pharm Biotech 1: 253-263; Riechmann et al. (1999) J Immunol Meth231: 25-38; Publicações dos pedidos PCT nos. WO 94/04678 e WO 94/25591; e Patente U.S. no. 6.005.079, todos os quais são aqui incorporados por referência em suas totalidades. Em algumas formas de realização, a divulgação fornece anticorpos de domínio único compreendendo dois domínios VH com modificações tal que os anticorpos de domínio único sejam formados.
[00120] A menos que de outro modo definidos, todos os termos técnicos e científicos aqui usados têm os mesmos significados como habitualmente entendido por uma pessoa de habilidade comum na técnica à qual esta divulgação pertence. Os métodos e materiais preferidos são descritos abaixo, embora métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles aqui descritos também possam ser usados na prática ou teste dos métodos e composições presentemente divulgados. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes, e outras referências aqui mencionadas são incorporadas por referência em sua totalidade.
[00121] Outros traços e vantagens da presente divulgação, por exemplo, métodos para tratar distúrbios associados a complemento em um sujeito, estarão evidentes a partir da seguinte descrição, dos exemplos, e das reivindicações.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DOS DESENHOS
[00122] A Fig. 1A é um gráfico de pontos representando a concentração de C5a (em ng/mg de creatina urinária) na urina de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pre-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração de C5a urinário também foi medida na urina de indivíduos normais, saudáveis (NORM).
[00123] A Fig. 1B é um gráfico de pontos representando a concentração de sC5b-9 (em ng/mg de creatina urinária) na urina de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pre-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração de C5b9 urinário também foi medida na urina de indivíduos normais, saudáveis (NORM).
[00124] A Fig. 1C é um gráfico de pontos representando a concentração de componente do complemento Ba (em ng/ml) no plasma de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pre-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração de Ba também foi medida no plasma de indivíduos normais, saudáveis (normais).
[00125] A Fig. 1D é um gráfico de barras representando a redução percentual (%) média nos níveis de C5a urinários (eixo Y) com o tempo em pacientes com a aHUS (N = 26) após o início de tratamento com eculizumab. O eixo x indica a semana de visita do paciente com a aHUS para a avaliação após o início do tratamento, por exemplo, V3 é a visita do paciente para avaliação na semana 3 após o início do tratamento.
[00126] A Fig. 1E é um gráfico de barras representando a redução percentual (%) média nos níveis de sC5b-9 urinários (eixo Y) com o tempo em pacientes com a aHUS (N = 23) após o início de tratamento com eculizumab. O eixo x indica a semana de visita do paciente com a aHUS para avaliação após o início do tratamento, por exemplo, V3 é a visita do paciente para avaliação na semana 3 após o início do tratamento.
[00127] A Fig. 1F é um gráfico de barras representando a redução percentual (%) média nos níveis de Ba plasmático (eixo Y) com o tempo em pacientes com a aHUS (N = 35) após o início de tratamento com eculizumab. O eixo x indica a semana de visita do paciente com a aHUS para avaliação após o início do tratamento, por exemplo, V3 é a visita do paciente para avaliação na semana 3 após o início do tratamento.
[00128] As Figs. 2A-2C são gráficos de barras representando a porcentagem de pacientes com a aHUS que alcançam as concentrações normalizadas de C5a urinário (Fig. 2A), sC5b9 urinário (Fig. 2B), e Ba plasmático (Fig. 2C) na linha de base (pré-tratamento com eculizumab) e várias semanas a seguir do início do tratamento com eculizumab.
[00129] A Fig. 3A é um gráfico de pontos representando a concentração de fragmento de protombina 1+2 (em pmol/L) no plasma de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pré-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração plasmática de F1+2 também foi medida no plasma de indivíduos normais, saudáveis (normais).
[00130] A Fig. 3B é um gráfico de pontos representando a concentração de dímero D (em µg/L) no plasma de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pré-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração plasmática de dímero D também foi medida no plasma de indivíduos normais, saudáveis (normais).
[00131] A Fig. 3C é um gráfico de barras representando a redução percentual (%) média nos níveis plasmáticos do fragmento de protombina F1+2 (eixo Y) com o tempo em pacientes com a aHUS após o início de tratamento com eculizumab. O eixo x indica a semana de visita do paciente com a aHUS para avaliação após o início do tratamento, por exemplo, V3 é a visita do paciente para avaliação na semana 3 após o início do tratamento.
[00132] A Fig. 3D é um gráfico de barras representando a redução percentual (%) média nós níveis plasmáticos de dímero d (eixo Y) com o tempo em pacientes com a aHUS após o início de tratamento com eculizumab. O eixo x indica a semana de visita do paciente com a aHUS para avaliação após o início do tratamento, por exemplo, V3 é a visita do paciente para avaliação na semana 3 após o início do tratamento.
[00133] As Figs. 4A e 4B são gráficos de barras representando a porcentagem de pacientes com a aHUS que alcançam concentrações normalizadas de fragmento de protombina 1+2 plasmático (Fig. 4A) e dímero D plasmático (Fig. 4B) na linha de base (pré-tratamento com eculizumab) e várias semanas a seguir do início do tratamento com eculizumab.
[00134] A Fig. 5A é um gráfico de pontos representando a concentração de trombomodulina (em ng/ml) no plasma (plasma tratado com EDTA) de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pré-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração plasmática de trombomodulina também foi medida no plasma de indivíduos normais, saudáveis (normais). EOS designa os resultados da análise de amostras obtidas no “final do estudo”.
[00135] A Fig. 5B é um gráfico de pontos representando a concentração de VCAM-1 (em ng/ml) no soro de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pré-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração de soro VCAM-1 também foi medida no soro de indivíduos normais, saudáveis (reunião normal). EOS designa os resultados da análise de amostras obtidas no “final do estudo”.
[00136] A Fig. 5C é um gráfico de pontos representando a atividade de vWF (em mU/ml) no plasma (plasma tratado com EDTA) de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pré-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A atividade de vWF também foi medida no plasma de indivíduos normais, saudáveis (normais). EOS designa os resultados da análise de amostras obtida no “final do estudo”.
[00137] As Figs. 6A e 6B são gráficos de barras representando a porcentagem de pacientes com a aHUS que alcançam concentrações de trombomodulina plasmáticas normalizadas (Fig. 6A) e nível plasmático de atividades vWF (Fig. 4B) na linha de base (pré-tratamento com eculizumab) e várias semanas a seguir do início do tratamento com eculizumab.
[00138] A Fig. 6C é um gráfico de barras representando a redução percentual (%) média nos níveis plasmáticos de trombomodulina (eixo Y) com o tempo em pacientes com a aHUS (N = 33) após o início de tratamento com eculizumab. O eixo x indica a semana de visita do paciente com a aHUS para avaliação após o início do tratamento, por exemplo, V3 é a visita do paciente para avaliação na semana 3 após o início do tratamento.
[00139] A Fig. 6D é um gráfico de barras representando a redução percentual (%) média nos níveis séricos de VCAM-1 (eixo Y) com o tempo em pacientes com a aHUS (N = 36) após o início de tratamento com eculizumab. O eixo x indica a semana de visita do paciente com a aHUS para avaliação após o início do tratamento, por exemplo, V3 é a visita do paciente para avaliação na semana 3 após o início do tratamento.
[00140] A Fig. 7A é um gráfico de pontos representando a concentração de TNFR1 (em pg/ml) no soro de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pré-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração sérica de TNFR1 também foi medida no soro de indivíduos normais, saudáveis (reunião normal). EOS designa os resultados da análise de amostras obtidas no “final do estudo”.
[00141] A Fig. 7B é um gráfico de barras representando a porcentagem de pacientes com a aHUS que alcança as concentrações séricas de TNFR1 normalizadas na linha de base (pré-tratamento com eculizumab) e várias semanas a seguir do início do tratamento com eculizumab.
[00142] A Fig. 8A é um gráfico de pontos representando a concentração de cistatina C (CysC) (em ng/mg de creatina urinária) na urina de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pré-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração urinária de CysC também foi medida na urina de indivíduos normais, saudáveis (NORM).
[00143] A Fig. 8B é um gráfico de pontos representando a concentração de ß2M (em µg/mg de creatina urinária) na urina de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pré-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração urinária de ß2M também foi medida na urina de indivíduos normais, saudáveis (NORM).
[00144] A Fig. 8C é um gráfico de pontos representando a concentração de NGAL (em ng/mg de creatina urinária) na urina de pacientes com a aHUS tanto antes do tratamento com eculizumab (Pré-Tx) quanto várias semanas depois do início do tratamento com eculizumab. A concentração urinária de NGAL também foi medida na urina de indivíduos normais, saudáveis (NORM).
[00145] As Figs. 9A-9E são uma série de gráficos de barras representando os níveis médios de várias proteínas biomarcadoras de aHUS em pacientes com a aHUS que foram submetidas à diálise (Diálise), quando comparados com aqueles de pacientes com a aHUS que não foram submetidos à diálise (nenhuma Diálise) antes do alistamento no estudo aqui descrito. A Fig. 9A representa a concentração sérica média de TNFR1 (em pg/ml); a Fig. 9B representa a concentração urinária média de ß2M (em µg/mg de creatina urinária); a Fig. 9C representa a concentração plasmática de Ba (em ng/ml); a Fig. 9D representa a concentração urinária de sC5b9 (em ng/mg de creatina urinária); e a Fig. 9E representa a concentração urinária de C5a (em ng/ml).
[00146] A Fig. 10A é um gráfico de pontos representando a concentração sérica de TNFR1 (em pg/ml) em pacientes com a aHUS exibindo parâmetros clínicos estáveis (remissão clínica) (Sem TMA) e aqueles pacientes com a aHUS que continuam a experienciar níveis elevados de haptoglobina e LDH (e contagens de plaqueta reduzidas) (Outros), tanto na linha de base quanto em 1 a 2,5 semanas após o início de tratamento com eculizumab. Também são mostradas as concentrações de soro TNFR1 de indivíduos normais, saudáveis (Normais).
[00147] As Figs. 10B-10E são uma série de gráficos de barras, cada um representando a concentração de um dado biomarcador em pacientes com marcadores hematológicos LDH e haptoglobina normais (“pacientes normais” ou pacientes julgados estar em remissão clínica), pacientes com marcadores hematológicos anormais (elevados) (“pacientes anormais” ou pacientes com apresentação de aHUS ativa), e sujeitos saudáveis (“normais”). A Fig. 10B representa os níveis de Ba plasmático (ng/ml) nestas populações objetos. A Fig. 10C representa o nível de VCAM-1 sérico (ng/ml) nas populações objeto. A Fig. 10E representa o nível de fragmentos de protombina 1+2 plasmáticos (pmol/L) nas populações, e a Fig. 10D representa o nível de dímero D plasmático (em µg/L). Os valores P para as respectivas comparações de grupo são mostradas nas figuras.
[00148] As Figs. 10F-10I são uma série de gráficos de barras, cada um representando a concentração de um dado biomarcador em pacientes com níveis de plaqueta normais (“pacientes normais”), pacientes com níveis de plaqueta anormais (reduzidos) (“pacientes anormais”), e sujeitos saudáveis (“normais”). A Fig. 10F representa os níveis de Ba plasmático (ng/ml) nestas populações objetos. A Fig. 10G representa o nível de VCAM-1 sérico (ng/ml) nas populações objetos. A Fig. 10I representa o nível de fragmentos de protombina 1+2 plasmáticos (pmol/L) nas populações, e a Fig. 10H representa o nível de dímero D plasmático (em µg/L). Os valores P para as respectivas comparações de grupo são mostrados nas figuras.
[00149] A Fig. 11 é um gráfico de barras representando a mudança percentual média nos níveis de TNFR1 séricos e clusterina, C5a, e C5b9 urinários nestes pacientes com a aHUS que alcançam uma resposta de TMA completa e aqueles pacientes que ainda experienciam eventos de TMA (resposta incompleta). (Como mencionado e elaborado nos exemplos de trabalho, uma resposta de TMA completa se refere a uma normalização de parâmetros hematológicos e preservação da função renal).
[00150] A Fig. 12 é um gráfico de barras representando a mudança percentual média nos níveis plasmáticos de Ba em pacientes tratados com eculizumab com a aHUS experienciando uma resposta de TMA completa e aqueles pacientes tratados com eculizumab com a aHUS que não (outros).
[00151] A Fig. 13 é gráfico de barras representando a mudança média da linha de base (visita inicial, antes do tratamento com eculizumab) na contagem de plaqueta (109/L) nas semanas 12 a 17 e semana 26 após o início de tratamento com eculizumab em pacientes com a aHUS com níveis de Ba plasmático normalizados versus níveis de Ba plasmático persistentemente elevados. Os valores p para cada observação também são fornecidos na figura.
[00152] As Figs. 14A-14D são uma série de gráficos de barras representando a observação de que certos biomarcadores associados com a aHUS são elevados em pacientes com a aHUS com marcadores de TMA anormais na linha de base. A Fig. 14A representa a concentração de cistatina C (CysC) (em ng/mg de creatina urinária) na urina de pacientes com a aHUS com contagens de plaqueta normais (>150.000 por µL de sangue) quando comparada com a dos pacientes com contagens de plaqueta reduzidas (<150.000 per µL de sangue). A Fig. 14B representa a concentração de clusterina (em ng/mg de creatina urinária) na urina de pacientes com a aHUS com contagens de plaqueta normais (>150.000 per µL de sangue) quando comparada com a dos pacientes com contagens de plaqueta reduzidas (<150.000 per µL de sangue). A Fig. 14C representa a concentração de VCAM-1 no soro de pacientes com a aHUS com níveis de LDH normais quando comparada aos pacientes com níveis de LDH elevados. A Fig. 14D representa a concentração de dímero d (in µg/L) no plasma de pacientes com a aHUS com níveis de LDH normais quando comparada aos pacientes com níveis de LDH elevados. Os valores p para cada observação são indicados nas figuras.
[00153] A Fig. 15 é um gráfico de barras representando o nível de cistatina C (ng/mg de creatina urinária) na urina de pacientes com a aHUS na linha de base tendo terapia plasmática repetida (PT repetida; N = 23), nenhuma terapia plasmática (Nenhuma PT; N = 3), ou em pacientes normais (N = 9).
[00154] A Fig. 16 é uma série de gráficos de barras representando a mudança média na linha de base de eGFR (ml/min/1,73 m2) em pacientes com a aHUS que alcançam níveis normalizados de vários biomarcadores (Ba plasmático, VCAM-1 sérico, F1+2 plasmático, dímero D plasmático, e cistatina C urinária) seguindo o tratamento com eculizumab quando comparado aos pacientes com a aHUS em quem a concentração destes biomarcadores permanece elevada.
[00155] As Figs. 17A-E são uma série de gráficos de barras representando a observação de que certos biomarcadores associados com a aHUS são elevados em pacientes com a aHUS antes do tratamento com um inibidor do complemento, independente de se os pacientes receberam terapia de troca de plasma (PE) ou de infusão de plasma (PI). A Fig. 17A representa a concentração de fragmento proteolítico Ba do Fator B (em ng/ml) no plasma de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS que recebem terapia de PE ou PI (PE/PI), ou pacientes com a aHUS que não recebem terapia de PE/PI (nenhuma PE/PI). A Fig. 17B representa a concentração de sTNFR1 (em pg/ml) no soro de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS que recebem terapia de PE ou PI (PE/PI), ou pacientes com a aHUS que não recebem a terapia de PE/PI (nenhuma PE/PI). A Fig. 17C representa a concentração de sVCAM-1 (em ng/ml) no soro de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS que recebem terapia de PE ou PI (PE/PI), ou pacientes com a aHUS que não recebem terapia de PE/PI (nenhuma PE/PI). A Fig. 17D representa a concentração de dímero D (in µg/L) no plasma de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS que recebem terapia de PE ou PI (PE/PI), ou pacientes com a aHUS que não recebem terapia de PE/PI (nenhuma PE/PI). A Fig. 17E representa a concentração de cistatina C (em ng/mg de creatinina urinária) na urina de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS que recebem terapia de PE ou PI (PE/PI), ou pacientes com a aHUS que não recebem terapia de PE/PI (nenhuma PE/PI). Os valores p para cada observação são indicados nas figuras.
[00156] As Figs. 18A-E são uma série de gráficos de barras representando a observação de que certos biomarcadores associados com a aHUS são elevados em pacientes com a aHUS antes do tratamento com um inibidor do complemento, independente dos níveis de plaqueta nos pacientes. A Fig. 18A representa a concentração de fragmento proteolítico Ba do Fator B (em ng/ml) no plasma de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS tendo níveis de plaqueta normais (> 150 x 109), ou pacientes com a aHUS tendo contagens de plaqueta reduzidas (<150 x 109). A Fig. 18B representa a concentração de sTNFR1 (em pg/ml) no soro de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS tendo níveis de plaqueta normais (> 150 x 109), ou pacientes com a aHUS tendo contagens de plaqueta reduzidas (<150 x 109). A Fig. 18C representa a concentração de sVCAM-1 (em ng/ml) no soro de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS tendo níveis de plaqueta normais (> 150 x 109), ou pacientes com a aHUS tendo contagens de plaqueta reduzidas (<150 x 109). A Fig. 18D representa a concentração de dímero D (em µg/L) no plasma de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS tendo níveis de plaqueta normais (> 150 x 109), ou pacientes com a aHUS tendo contagens de plaqueta reduzidas (<150 x 109). A Fig. 18E representa a concentração de cistatina C (em ng/mg de creatinina urinária) na urina de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS tendo níveis de plaqueta normais (> 150 x 109), ou pacientes com a aHUS tendo contagens de plaqueta reduzidas (<150 x 109). Os valores p para cada observação são indicados nas figuras.
[00157] As Figs. 19A-E são uma série de gráficos de barras representando a observação de que certos biomarcadores associados com a aHUS são elevados em pacientes com a aHUS antes do tratamento com um inibidor do complemento, independente dos níveis de haptoglobina (Hp) ou lactato desidrogenase (LDH). A Fig. 19A representa a concentração de fragmento proteolítico Ba do Fator B (em ng/ml) no plasma de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS tendo níveis de Hp e LDH normais, ou pacientes com a aHUS tendo Hp/LDH elevadas (anormais). A Fig. 19B representa a concentração de sTNFR1 (em pg/ml) no soro de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS tendo níveis de Hp e LDH normais, ou pacientes com a aHUS tendo Hp/LDH elevadas (anormais). A Fig. 19C representa a concentração de sVCAM-1 (em ng/ml) no soro de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS tendo níveis de Hp e LDH normais, ou pacientes com a aHUS tendo Hp/LDH elevadas (anormais). A Fig. 19D representa a concentração de dímero D (em µg/L) no plasma de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS tendo níveis de Hp e LDH normais, ou pacientes com a aHUS tendo Hp/LDH elevadas (anormais). A Fig. 19E representa a concentração de cistatina C (em ng/mg de creatinina urinária) na urina de voluntários saudáveis normais (NHV), pacientes com a aHUS tendo níveis de Hp e LDH normais, ou pacientes com a aHUS tendo Hp/LDH elevadas (anormais). Os valores p para cada observação são indicados nas figuras.
[00158] As Figs. 20A-B são plotagens de Box-Whisker representando os efeitos longitudinais de tratamento prolongado com eculizumab na ativação do complemento terminal em pacientes com a aHUS. A Fig. 20A representa a mudança com o tempo na concentração de C5a urinário (ng/mg de creatinina urinária) de pacientes com a aHUS seguindo o tratamento com eculizumab, quando comparada com a concentração de C5a urinário na urina de voluntários saudáveis normais (NHV). A Fig. 20B representa a mudança com o tempo na concentração da sC5b-9 urinário (ng/mg de creatinina urinária) de pacientes com a aHUS a seguir do tratamento com eculizumab, quando comparada com a concentração de sC5b-9 urinário na urina de voluntários saudáveis normais (NHV). As plotagens Box-Whisker mostram a média, 25o, e 75o percentis e faixa. *Primeiro ponto de tempo no qual os níveis foram significantemente reduzidos vs. Linha de base (BL); os valores P versus linha de base em cada ponto de tempo foram calculados usando um método das medidas repetidas com base na probabilidade máxima restrita (Modelo Misto). Os valores P comparados com NHV foram calculados usando o teste da Soma de Postos de Wilcoxon.
[00159] As Figs. 21A-C são diagramas de caixa representando os efeitos longitudinais de tratamento com eculizumab prolongado na concentração de proteínas biomarcadoras associadas com a lesão renal em pacientes com a aHUS. A Fig. 20A representa a mudança com o tempo na concentração do FABP-1 urinário (ng/mg de creatinina urinária) de pacientes com a aHUS a seguir do tratamento com eculizumab, quando comparada com a concentração do FABP-1 urinário na urina de voluntários saudáveis normais (NHV). A Fig. 21B representa a mudança com o tempo na concentração da cistatina C urinária (ng/mg de creatinina urinária) de pacientes com a aHUS a seguir do tratamento com eculizumab, quando comparada com a concentração da cistatina C urinária na urina de voluntários saudáveis normais (NHV). A Fig. 21C representa a mudança com o tempo na concentração da clusterina urinária (ng/mg de creatinina urinária) de pacientes com a aHUS a seguir do tratamento com eculizumab, quando comparada com a concentração da clusterina urinária na urina de voluntários saudáveis normais (NHV). Os diagramas de caixa mostram a média, 25o, e 75o percentis e faixa. *Primeiro ponto de tempo no qual os níveis foram significantemente reduzidos vs. linha de base (BL); os valores P versus linha de base em cada ponto de tempo foram calculados usando um método de medidas repetidas com base na probabilidade máxima restrita (Modelo Misto). Os valores P comparados com NHV foram calculados usando o teste da Soma de Postos de Wilcoxon.
[00160] A Fig. 22 é um diagrama de caixa representando os efeitos longitudinais de tratamento com eculizumab prolongado na ativação do caminho alternativo do complemento em pacientes com a aHUS. A mudança com o tempo na concentração de Ba (ng/ml) no plasma de pacientes com a aHUS a seguir do tratamento com eculizumab é mostrada junto com a concentração plasmática de Ba em voluntários saudáveis normais (NHV). O diagrama de caixa mostra a média, 25o, e 75o percentis e faixa. *Primeiro ponto de tempo no qual os níveis foram significantemente reduzidos vs. linha de base (BL); os valores P versus a linha de base em cada ponto de tempo foram calculados usando um método das medidas repetidas com base na probabilidade máxima restrita (Modelo Misto). Os valores P comparados com NHV foram calculados usando o teste da Soma de Postos de Wilcoxon.
[00161] As Figs. 23A-C são diagramas de caixa representando os efeitos longitudinais de tratamento com eculizumab prolongado na concentração de proteínas biomarcadoras associadas com a inflamação, ativação de células endoteliais, e dano de tecido em pacientes com a aHUS. A Fig. 23A representa a mudança com o tempo na concentração de sTNFR1 (pg/ml) no soro de pacientes com a aHUS a seguir do tratamento com eculizumab, quando comparada com a concentração de sTNFR1 no soro de voluntários saudáveis normais (NHV). A Fig. 23B representa a mudança com o tempo na concentração de sVCAM-1 (ng/ml) no soro de pacientes com a aHUS a seguir do tratamento com eculizumab, quando comparada com a concentração do análito no soro de voluntários saudáveis normais (NHV). A Fig. 23C representa a mudança com o tempo na concentração de trombomodulina (ng/ml) no plasma de pacientes com a aHUS a seguir do tratamento com eculizumab, quando comparada com a concentração do análito no plasma de voluntários saudáveis normais (NHV). Os diagramas de caixa mostram a média, 25o, e 75o percentis e faixa. *Primeiro ponto de tempo no qual os níveis foram significantemente reduzidos vs. linha de base (BL); Os valores P versus a linha de base em cada ponto de tempo foram calculados usando um método das medidas repetidas com base na probabilidade máxima restrita (Modelo Misto). Os valores P comparados com NHV foram calculados usando o teste da Soma de Postos de Wilcoxon.
[00162] As Figs. 24A-B são diagramas de caixa representando os efeitos longitudinais de tratamento com eculizumab prolongado sobre a concentração de proteínas biomarcadoras associadas com a trombose e coagulação em pacientes com a aHUS. A Fig. 24A representa a mudança com o tempo na concentração de F1+2 (pmol/L) no plasma de pacientes com a aHUS a seguir do tratamento com eculizumab, quando comparada com a concentração do análito no plasma de voluntários saudáveis normais (NHV). A Fig. 24B representa a mudança com o tempo na concentração de dímero D (µg/L) no plasma de pacientes com a aHUS a seguir do tratamento com eculizumab, quando comparada com a concentração do análito no plasma de voluntários saudáveis normais (NHV). Os diagramas de caixa mostram a média, 25o, e 75o percentis e faixa. *Primeiro ponto de tempo no qual os níveis foram significantemente reduzidos vs. linha de base (BL); os valores P versus a linha de base em cada ponto de tempo foram calculados usando um método das medidas repetidas com base na probabilidade máxima restrita (Modelo Misto). Os valores P comparados com NHV foram calculados usando o teste da Soma de Postos de Wilcoxon.
VISTA GERAL DO SISTEMA DO COMPLEMENTO
[00163] O sistema do complemento atua em conjunção com outros sistemas imunológicos do corpo para defender contra a intrusão de patógenos celulares e virais. Existem pelo menos 25 proteínas do complemento, que são encontradas como uma coleção complexa de proteínas plasmáticas e cofatores de membrana. As proteínas plasmáticas compõem cerca de 10 % das globulinas no soro de vertebrado. Os componentes do complemento executam as suas funções imuno defensivas pela interação em uma série de eventos intricados porém precisos de clivagem enzimática e ligação de membrana. A cascata do complemento resultante leva à produção de produtos com funções opsônicas, imunorreguladoras, e líticas. Um resumo conciso das atividades biológicas associadas com a ativação do complemento é fornecida, por exemplo, no Merck Manual, 16aEdição.
[00164] A cascata do complemento progride por intermédio do caminho clássico, do caminho alternativo, ou do caminho da lectina. Estes caminhos compartilham muitos componentes, e embora eles difiram nas suas etapas iniciais, eles convergem e compartilham os mesmos componentes de “complemento terminal” (C5 até C9) responsáveis pela ativação e destruição das células alvo.
[00165] O caminho clássico (CP) é tipicamente iniciado pelo reconhecimento de anticorpo de, e ligação a, um sítio antigênico em uma célula alvo. O caminho alternativo (AP) pode ser independente de anticorpo, e pode ser iniciado por certas moléculas nas superfícies patogênicas. Adicionalmente, o caminho da lectina é tipicamente iniciado com a ligação de lectina de ligação de manose (MBL) aos substratos com alto teor de manose. Estes caminhos convergem no ponto onde o componente do complemento C3 é clivado por uma protease ativa para produzir C3a e C3b. Outros caminhos que ativam o ataque do complemento podem atuar mais tarde na sequência de eventos que levam a vários aspectos da função do complemento. C3a é uma anafilatoxina. C3b se liga à célula bacteriana e outras, assim como a certos vírus e complexos imunes, e os rotulam para a remoção da circulação. Esta função opsônica de C3b é no geral considerada ser a ação anti-infecciosa mais importante do sistema do complemento. C3b também forma um complexo com outros componentes únicos para cada caminho para formar C5 convertase clássica ou alternativa, que cliva o componente do complemento C5 (daqui em diante aludido como "C5") em C5a e C5b.
[00166] A clivagem de C5 libera espécies biologicamente ativas tais como por exemplo C5a, uma anafilatoxina potente e fator quimiotático, e C5b que através de uma série de interações de proteína leva à formação do complexo do complemento de terminal lítico, C5b-9. C5a e C5b-9 também têm propriedades ativadoras de célula pleiotrópica, pela amplificação da liberação de fatores inflamatórios a jusante, tais como enzimas hidrolíticas, espécies de oxigênio reativo, metabólitos do ácido araquidônico e várias citocinas.
[00167] C5b combina com C6, C7, e C8 para formar o complexo C5b-8 na superfície da célula alvo. Na ligação de várias moléculas C9, o complexo de ataque à membrana (MAC, C5b-9, complexo do complemento terminal--TCC) é formado. Quando números suficientes de MACs se infiltram dentro das membranas da célula alvo as aberturas que eles criam (poros de MAC) medeiam a lise osmótica rápida das células alvos. As concentrações mais baixas, não líticas de MACs podem produzir outros efeitos. Em particular, a inserção de membrana de números pequenos dos complexos C5b-9 dentro das células endoteliais e plaquetas pode causar a ativação de célula deletéria. Em alguns casos, a ativação pode preceder a lise celular.
[00168] Como mencionado acima, C3a e C5a são componentes do complemento ativados. Estes podem deflagrar a desgranulação de mastóide, que libera histamina a partir dos basófilos e mastóides, e outros mediadores de inflamação, resultando na contração de músculo liso, permeabilidade vascular aumentada, ativação de leucócito, e outros fenômenos inflamatórios incluindo a proliferação celular que resulta na hipercelularidade. C5a também funciona como um peptídeo quimiostático que serve para atrair granulócitos pró-inflamatórios para o sítio de ativação do complemento. Os receptores C5a são encontrados nas superfícies de células epiteliais brônquicas e alveolares e células do músculo liso brônquico. Os receptores de C5a também foram encontrados em eosinófilos, mastóides, monócitos, neutrófilos, e linfócitos ativados.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[00169] Como aqui descrito e exemplificado nos exemplos de trabalho, os inventores identificaram biomarcadores para aHUS. Por exemplo, foi descoberto que uma concentração elevada ou, em alguns casos, reduzida de certas proteínas está associada com a presença de aHUS. Similarmente, uma concentração (ou atividade) reduzida ou elevada de certas proteínas em um fluído biológico obtido de um paciente com a aHUS tratado com um inibidor do complemento indica que o paciente respondeu à terapia com o inibidor. Consequentemente, a análise da concentração e/ou nível de atividade de tais proteínas pode ser utilizada para avaliar, entre outras coisas, o risco para aHUS, diagnosticar aHUS, monitorar a progressão ou diminuição de aHUS, e/ou monitorar a resposta ao tratamento para um inibidor do complemento.
[00170] Proteínas Biomarcadoras de aHUS e Aplicações
[00171] As proteínas biomarcadoras de aHUS (assim como fluídos biológicos exemplares nos quais elas são encontradas) são apresentadas na Tabela 1. A sequência de proteína associada com o nome de cada um dos biomarcadores listados na Tabela 1 no GenBank (National Center for Biotechnology Information (NCBI)) tão disponíveis quanto da data de depósito do presente pedido é aqui incorporada por referência. Tabela 1. * O número de acesso NCBI para uma sequência humana exemplar é fornecido para cada proteína biomarcadora citada na Tabela. ** A forma solúvel do receptor é gerada pelo processamento proteolítico da forma ligada à membrana do receptor. *** UniProtKB (consórcio: European Bioinformatics Institute, Cambridge, UK; Swiss Institute of Bioinformatics; Geneva, Suíça; e Protein Information Resource, Washington, D.C). designação para fibrinogênio humano alfa, que é clivado pela trombina para formar fibrina. O dímero D é um produto da degradação da fibrina. Uma descrição da transição com base na clivagem de fibrinogênio para fibrina para dímero D é apresentada em Soheir et al. (2009) Blood 113(13): 2878-2887, a divulgação da qual pelo menos conforme a mesma diz respeito à formação de dímero D é aqui incorporada na sua totalidade.
[00172] Os biomarcadores aqui fornecidos podem ser usados sozinhos ou em combinação como um indicador, por exemplo, para avaliar o risco para desenvolver aHUS, diagnosticar aHUS, determinar se um sujeito está experienciando a primeira apresentação aguda de aHUS, monitorar a progressão ou diminuição de aHUS, e/ou monitorar a resposta ao tratamento com um inibidor do complemento ou otimizar tal tratamento. Em algumas formas de realização, uma proteína biomarcadora de aHUS individual aqui descrita pode ser usada. Em algumas formas de realização, pelo menos duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ou 25 ou mais) proteínas biomarcadoras de aHUS selecionadas da Tabela 1 podem ser usadas em combinação como um painel.
[00173] Em algumas formas de realização, as proteínas biomarcadoras de aHUS são selecionadas de um fragmento proteolítico do fator B de componente do complemento (por exemplo, Ba ou Bb), C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, ICAM-1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8, e CCL5. A concentração e/ou atividade de um ou mais dos biomarcadores na Tabela 1 (ou qualquer um dos subconjuntos de biomarcadores aqui mencionados) podem ser medidas.
[00174] Em algumas formas de realização, uma elevação na concentração de dímero D, em relação à concentração de dímero d em uma amostra de controle normal, e uma elevação na concentração de FABP-1, em relação à concentração de FABP-1 em uma amostra de controle normal, indica que o paciente com a aHUS está experienciando uma primeira manifestação de aHUS aguda. Em alguns casos, esta elevação de uma ou ambas destas proteínas biomarcadoras de aHUS é uma elevação significante quando comparada ao controle normal.
[00175] Em algumas formas de realização, uma elevação na concentração de um ou mais de TNFR1, Ba, C5b-9, F1+2, ß2M, clusterina, TIMP-1, NGAL, CysC, e C5a (ver Tabela 7) em uma amostra biológica obtida de um paciente com a aHUS, em relação á concentração de controle dos análitos obtidos, por exemplo, de uma reunião de amostras de pacientes com a aHUS que não receberam a diálise repetida, indica que o paciente é um que recebeu diálise repetida.
[00176] Em algumas formas de realização, uma elevação na concentração de um ou ambos de C5a e FABP-1 (por exemplo, C5a e FABP-1 urinários) em uma amostra biológica obtida de um paciente com a aHUS, em relação á concentração de controle dos análitos obtidos, por exemplo, de uma reunião de amostras de pacientes com a aHUS que não receberam um transplante renal, indica que o paciente é um que recebeu um transplante renal.
[00177] Em algumas formas de realização, uma elevação na concentração de cistatina C (por exemplo, cistatina urinária C) em uma amostra biológica obtida de um paciente com a aHUS, em relação à concentração de controle dos análitos obtidos, por exemplo, de uma reunião de amostras de pacientes com a aHUS que não receberam terapia plasmática repetida, indica que o paciente é um que recebeu terapia plasmática repetida.
[00178] Em algumas formas de realização, uma redução após o tratamento na concentração de Ba (por exemplo, concentração de Ba plasmática) de pelo menos 10 (por exemplo, pelo menos 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, ou 50) %, em relação à concentração de Ba em uma amostra do mesmo tipo de fluído biológico obtido do sujeito antes do tratamento, indica que o sujeito tem ou é provável de alcançar uma resposta de trombomicroangiopatia completa (TMA) (isto é, cessação de eventos de TMA). Em algumas formas de realização, a redução ocorre em 12 semanas a seguir do primeiro tratamento com o inibidor do complemento. Em algumas formas de realização, a redução ocorre dentro de 12 a 17 semanas seguindo o primeiro tratamento com o inibidor do complemento. Em algumas formas de realização, a redução ocorre na semana 26 seguindo o primeiro tratamento com o inibidor do complemento.
[00179] Em algumas formas de realização, uma redução após o tratamento em um ou ambos de CCL5 e sCD40L de pelo menos 10 (por exemplo, pelo menos 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, ou 50) %, em relação à respectiva concentração na(s) amostra(s) do mesmo tipo de fluído biológico obtida(s) do sujeito antes do tratamento, indica que o sujeito tem ou é provável de alcançar contagens de plaqueta aumentadas (por exemplo, recuperação de plaqueta). Em algumas formas de realização, uma redução após o tratamento na concentração de Ba (por exemplo, concentração de Ba plasmática) de pelo menos 10 (por exemplo, pelo menos 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, ou 50) % (ou normalização das concentrações de Ba), em relação à concentração de Ba em uma amostra do mesmo tipo de fluído biológico obtido do sujeito antes do tratamento, indica que o sujeito tem ou é provável de ter alcançado uma resposta de trombomicroangiopatia completa (TMA) (isto é, cessação de eventos de TMA).
[00180] Em algumas formas de realização, a situação de um ou mais dos biomarcadores de aHUS aqui descritos pode ser preditiva de melhora na taxa de filtração glomerular estimada (eGFR) para um paciente com a aHUS tratado com um inibidor do complemento. Por exemplo, uma redução na concentração de protrombina F1+2 (por exemplo, dentro de 4, 5, ou 6 semanas após o tratamento inicial em um regime de tratamento crônico) e/ou dímero d (por exemplo, dentro de 12, 13, 14, 15, 16, ou 17 semanas após o tratamento inicial em um regime de tratamento crônico) indica que um paciente com a aHUS tratado com um inibidor do complemento alcançou ou é provável de alcançar uma melhora clinicamente significativa em eGFR. A realização ou provável realização de uma melhora clinicamente significativa em eGFR também são indicadas por uma normalização da concentração de IL-6 e IFN-Y (por exemplo, dentro de 4, 5, ou 6 semanas após o tratamento inicial com um inibidor do complemento em um regime de tratamento crônico). A realização ou provável realização de uma melhora clinicamente significante em eGFR também são indicadas por uma normalização da concentração de Ba, CXCL9, CXCL10, e vWF (por exemplo, dentro de 12, 13, 14, 15, 16, ou 17 semanas após o tratamento inicial com um inibidor do complemento em um regime de tratamento crônico). Em algumas formas de realização, a realização ou provável realização de um melhora clinicamente significante em eGFR também são indicadas por uma normalização da concentração de Ba, CXCL9, CXCL10, ß2M (por exemplo, na urina), CysC (por exemplo, na urina), vWF, dímero d, clusterina (por exemplo, na urina), e/ou FABP-1 (por exemplo, na urina) (por exemplo, dentro de 26 semanas após o tratamento inicial com um inibidor do complemento em um regime de tratamento crônico).
[00181] Métodos para monitorar ou avaliar a situação de uma ou mais proteínas biomarcadoras associadas com a síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS) em um sujeito (por exemplo, um mamífero, por exemplo, um ser humano) incluem: medir em um fluído biológico obtido do sujeito um ou ambos da (i) concentração de pelo menos um (por exemplo, pelo menos duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20) biomarcador associado com a proteína de aHUS no fluído biológico.
[00182] A medição ou determinação dos níveis de expressão de proteína em uma amostra biológica podem ser realizadas por qualquer método adequado (ver, por exemplo, Harlow e Lane (1988) “Antibodies: A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Laboratory: Cold Spring Harbor, NY). No geral, os níveis de proteína são determinados contatando-se uma amostra biológica obtida de um sujeito com agentes de ligação para uma ou mais das proteínas biomarcadoras de aHUS; detectando, na amostra (por exemplo, no fluído biológico), os níveis de uma ou mais das proteínas biomarcadoras de aHUS que se ligam aos agentes de ligação; e comparando os níveis de uma ou mais das proteínas biomarcadoras de aHUS na amostra com os níveis das proteínas biomarcadoras correspondentes em uma amostra de controle (por exemplo, uma amostra normal). Em certas formas de realização, um agente de ligação adequado é um ribossoma, com ou sem um componente de peptídeo, uma molécula de RNA, ou um polipeptídeo (por exemplo, um polipeptídeo que compreenda uma sequência de polipeptídeo de um marcador de proteína, uma variante de peptídeo do mesmo, ou um mimético não peptídico de uma tal sequência).
[00183] Os agentes de ligação adequados também incluem um anticorpo específico para uma proteína de aHUS biomarcadora aqui descrita (por exemplo, um anticorpo específico para qualquer biomarcador listado na Tabela 1). Os anticorpos adequados para o uso nos métodos da presente invenção incluem anticorpos monoclonais e policlonais e fragmentos de ligação de antígeno (por exemplo, fragmentos Fab ou scFvs) de anticorpos. Os anticorpos, incluindo anticorpos monoclonais e policlonais, fragmentos e quimeras, podem ser preparados usando métodos conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Kohler e Milstein (1975) Nature 256: 495-497; Kozbor et al. (1985) J Immunol Methods 81: 31-42; Cote et al. (1983) Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-203; e Zhang et al. (2002) J Biol Chem 277: 3937939387). Os anticorpos a serem usados nos métodos da invenção podem ser purificados pelos métodos bem conhecidos na técnica. Os anticorpos também podem ser obtidos a partir de fontes comerciais.
[00184] Em certas formas de realização, o agente de ligação é direta ou indiretamente rotulado com uma porção detectável. O papel de um agente detectável é facilitar a etapa de detecção do método de diagnóstico permitindo-se a visualização do complexo formado pela ligação do agente de ligação ao marcador de proteína (ou fragmento do mesmo). O agente detectável pode ser selecionado tal que o mesmo gere um sinal que possa ser medido e cuja intensidade está relacionada (preferivelmente proporcional) com a quantidade de marcador de proteína presente na amostra que é analisada. Os métodos para rotular moléculas biológicas tais como polipeptídeos e anticorpos são bem conhecidos na técnica. Qualquer um de uma ampla variedade de agentes detectáveis pode ser usado na prática da presente invenção. Os agentes detectáveis adequados incluem, mas não são limitados a: vários ligantes, radionuclídeos, corantes fluorescentes, agentes quimioluminescentes, micropartículas (tais como, por exemplo, pontos de quantum, nanocristais, fósforos e os semelhantes), enzimas (tais como, por exemplo, aquelas usadas em um ELISA, isto é, peroxidase de rábano, beta-galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina), rótulos colorimétricos, rótulos magnéticos, e biotina, digoxigenina ou outros haptenos e proteínas para as quais os anti-soros ou anticorpos monoclonais são disponíveis.
[00185] Em certas formas de realização, os agentes de ligação (por exemplo, anticorpos) podem ser imobilizados em um carregador ou suporte (por exemplo, um grânulo, uma partícula magnética, uma partícula de látex, um poço de placas de microtitulação, uma cubeta, ou outro vaso de reação). Os exemplos de materiais carregadores ou de suporte incluem agarose, celulose, nitrocelulose, dextrano, Sephadex®, Sepharose®, lipossomas, carboximetil celulose, poliacrilamidas, poliestireno, gabros, papel de filtro, magnetita, resina de troca iônica, película plástica, tubo plástico, vidro, copolímero de poliamina-éter metil vinílico-ácido maléico, copolímero de aminoácido, copolímero de etileno-ácido maléico, náilon, seda, e os semelhantes. Os agentes de ligação podem ser indiretamente imobilizados usando agentes de ligação secundários específicos para os agentes de ligação primários (por exemplo, anticorpos de camundongo específicos para os marcadores de proteína podem ser imobilizados usando anticorpo específico de fragmento Fc de IgG anti- camundongo de ovelha revestido sobre o carregador ou suporte).
[00186] Os níveis de expressão de proteína em uma amostra biológica podem ser determinados usando imunoensaios. Os exemplos de tais ensaios são imunoensaios de fluorescência resolvidos no tempo (TR-FIA), radioimunoensaios, imunoensaios enzimáticos (por exemplo, ELISA), imunoprecipitação de imunofluorescência, aglutinação de látex, hemaglutinação, Western blot, e testes histoquímicos, que são métodos convencionais bem conhecidos na técnica. Os métodos de detecção e quantificação do sinal gerado pelo complexo formado pela ligação do agente de ligação com o marcador de proteína dependerá da natureza do ensaio e da porção detectável (por exemplo, porção fluorescente).
[00187] Em um exemplo, a presença ou quantidade de expressão de proteína de um gene (por exemplo, uma proteína de aHUS biomarcadora descrita na Tabela 1) podem ser determinadas usando uma técnica de Western blotting. Por exemplo, um lisado pode ser preparado a partir de uma amostra biológica, ou a própria amostra biológica (por exemplo, fluído biológico), podem ser contatados com tampão de Laemmli e submetidas à eletroforese em gel de dodecil sulfato de sódio poliacrilamida (SDS-PAGE). As proteínas resolvidas em SDS-PAGE, separadas por tamanho, podem ser depois transferidas para uma membrana filtrante (por exemplo, nitrocelulose) e submetidas às técnicas de imunomanchamento usando um anticorpo específico detectavelmente rotulado para a proteína de interesse. A presença ou quantidade de anticorpo detectavelmente rotulado ligado indica a presença ou quantidade de proteína na amostra biológica.
[00188] Em um outro exemplo, um imunoensaio pode ser usado para detectar e/ou medir a expressão de proteína de uma proteína de aHUS biomarcadora (por exemplo, uma descrita na Tabela 1). Como acima, para os propósitos de detecção, um imunoensaio pode ser realizado com um anticorpo que carrega uma porção de detecção (por exemplo, um agente fluorescente ou enzima). As proteínas de uma amostra biológica podem ser conjugadas diretamente a uma matriz de fase sólida (por exemplo, uma placa de ensaio de multi-reservatório, nitrocelulose, agarose, Sepharose®, partículas codificadas, ou grânulos magnéticos) ou as mesmas podem ser conjugadas a um primeiro membro de um par de ligação específica (por exemplo, biotina ou estreptavidina) que se liguem a uma matriz de fase sólida na ligação a um segundo membro do par de ligação específica (por exemplo, estreptavidina ou biotina). Tal ligação a uma matriz de fase sólida permite que as proteínas sejam purificadas de outros componentes interferentes ou irrelevantes da amostra biológica antes do contato com o anticorpo de detecção e também permite a lavagem subsequente de anticorpo não ligado. Aqui, como acima, a presença ou quantidade de anticorpo ligado detectavelmente rotulado indica a presença ou quantidade de proteína na amostra biológica.
[00189] Alternativamente, os níveis de expressão de proteína podem ser determinados usando métodos com base na espectrometria de massa ou métodos com base em imagem conhecidos na técnica para a detecção de proteínas. Outros métodos adequados incluem eletroforese em gel 2D, métodos com base em proteômicos tais como a identificação de proteínas individuais recuperadas do gel (por exemplo, pela espectrometria de massa ou sequenciamento de terminal N) e/ou bioinformática.
[00190] Métodos para detectar ou medir a expressão de proteína, opcionalmente, podem ser realizados em formatos que permitam a preparação, processamento, e análise rápidos de amostras múltiplas. isto, por exemplo, pode ser em placas de ensaio de reservatórios múltiplos (por exemplo, 96 reservatórios ou 386 reservatórios) ou arranjos (por exemplo, chips de proteína). Soluções de estoque para vários reagentes podem ser fornecidas manual ou roboticamente, e preparação da amostra subsequente, pipetagem, diluição, mistura, distribuição, lavagem, incubação (por exemplo, hibridização), leitura de amostra, coleta de dados (dados ópticos) e/ou análise (análise de imagem auxiliada por computador) pode ser feita roboticamente usando software de análise comercialmente disponível, robótica, e instrumentação de detecção capaz de detectar o sinal gerado do ensaio. Os exemplos de tais detectores incluem, mas não são limitados a, espectrofotômetros, luminômetros, fluorímetros, e dispositivos que meçam o decaimento de radioisótopo. Os ensaios com base em célula de alto rendimento exemplares (por exemplo, detectando a presença ou nível de uma proteína alvo em uma célula) pode utilizar as tecnologias ArrayScan® VTI HCS Reader ou KineticScan® HCS Reader (Cellomics Inc., Pittsburg, PA).
[00191] Os métodos para determinar a atividade de vWF também são conhecidos na técnica e aqui descritos (por exemplo, os exemplos de trabalho). Ver também, por exemplo, Horvath et al. (2004) Exp Clin Cardiol9(10): 31-34. Kits comerciais também são disponíveis - Instrumentation Laboratory (Bedford, MA; catálogo número: 0020004700) e Quest Diagnostics (Madison, NJ).
[00192] Em algumas formas de realização, o nível de expressão (ou atividade) de proteína de pelo menos duas proteínas biomarcadoras de aHUS (por exemplo, pelo menos três proteínas, pelo menos quatro proteínas, pelo menos cinco proteínas, pelo menos seis proteínas, pelo menos sete proteínas, pelo menos oito proteínas, pelo menos nove proteínas, pelo menos 10 proteínas, pelo menos 11 proteínas, pelo menos 12 proteínas, pelo menos 13 proteínas, pelo menos 14 proteínas, pelo menos 15 proteínas, pelo menos 16 proteínas, pelo menos 17 proteínas, pelo menos 18 proteínas, pelo menos 19 proteínas, pelo menos 20 proteínas, pelo menos 21 proteínas, pelo menos 22 proteínas, pelo menos 23 proteínas, ou pelo menos 24 proteínas ou mais) podem ser avaliadas e/ou medidas.
[00193] Em algumas formas de realização, o fluído biológico no qual as proteínas biomarcadoras de aHUS são medidas é o sangue. Em algumas formas de realização, o fluído biológico é uma fração do sangue, por exemplo, soro ou plasma. Em algumas formas de realização, o fluído biológico é urina. Em algumas formas de realização, todas das medições são realizadas em uma amostra de fluído biológico (por exemplo, uma amostra de soro). Em algumas formas de realização, as medições são realizadas em pelo menos dois fluídos biológicos diferentes obtidos do sujeito. Por exemplo, em algumas formas de realização, a concentração ou atividade de uma ou mais proteínas biomarcadoras de aHUS é medida em uma amostra de soro obtida do paciente. Em algumas formas de realização, uma amostra de sangue e uma amostra de urina estão disponíveis de modo a permitir o teste de análitos diferentes em duas matrizes de amostra diferentes.
[00194] O sujeito, por exemplo, pode ser um ser humano tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, aHUS. O sujeito pode ser um que foi (ou está sendo) tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um inibidor de componente do complemento C5 tal como um anticorpo anti-C5). O tratamento pode ter ocorrido a menos do que um mês (por exemplo, menos do que 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, ou 1 dia) antes da obtenção da amostra do sujeito.
[00195] O método pode incluir ainda a etapa de determinar se o sujeito tem ou está em risco de desenvolver aHUS. Quando o sujeito foi tratado ou está sendo tratado com um inibidor do complemento (por exemplo, um anticorpo anti-C5) sob um programa de dosagem predeterminado, o método pode incluir ainda determinar se o paciente é responsivo (terapeuticamente) à terapia de inibidor do complemento.
[00196] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o método requer registrar o(s) valor(es) medido(s) da concentração da pelo menos uma proteína de aHUS biomarcadora. O registro pode ser escrito ou em um meio legível por computador. O método também pode incluir comunicar o(s) valor(es) medido(s) da concentração da pelo menos uma proteína de aHUS biomarcadora ao sujeito e/ou a um médico em cujo cuidado o sujeito é colocado.
[00197] Em algumas formas de realização, qualquer um dos métodos aqui descritos pode incluir a etapa de administrar ao sujeito o inibidor do complemento em uma dose mais alta ou com uma frequência aumentada de dosagem, em relação ao programa de dosagem predeterminado, se o sujeito não é responsivo ao tratamento com o inibidor sob o programa de dosagem predeterminado.
[00198] Alguns dos métodos aqui descritos envolve comparar a concentração ou atividade medidas de uma proteína de aHUS biomarcadora (como medidas em uma amostra biológica obtida de um sujeito) com uma amostra de controle. Em algumas formas de realização, a amostra de controle é obtida do sujeito antes da administração ao sujeito de um inibidor do complemento (por exemplo, um inibidor de C5 tal como eculizumab). Em algumas formas de realização, a amostra de controle pode ser (ou pode estar fundamentada em), por exemplo, uma coleção de amostras obtidas de um ou mais (por exemplo, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 15, 20, 25, 30, 35, ou 40 ou mais) indivíduos saudáveis que não foram administrados com um inibidor do complemento. Em algumas formas de realização, a amostra de controle pode ser (ou pode estar fundamentada em), por exemplo, uma amostra reunida obtida de dois ou mais (por exemplo, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 15, 20, 25, 30, 35, ou 40 ou mais) indivíduos. Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, as amostras reunidas podem ser de indivíduos saudáveis, ou pelo menos, indivíduos que não têm ou não são suspeitos de ter (nem em risco de desenvolver) aHUS. Por exemplo, determinar se um sujeito é um tendo aHUS pode envolver comparar a concentração medida de um ou mais biomarcadores séricos no sujeito e comparar a concentração medida com a concentração média dos mesmos biomarcadores nas amostras saudáveis reunidas. Similarmente, determinar se a concentração ou atividade de um biomarcador associado com aHUS foi reduzido a seguir de tratamento com um inibidor do complemento pode envolver comparar a concentração ou atividade da proteína em um fluído biológico obtido de um sujeito antes do tratamento com um inibidor do complemento com a concentração de proteína em uma amostra do mesmo fluído biológico obtido do paciente depois do tratamento com o inibidor (por exemplo, um dia, dois dias, três dias, quatro dias, cinco dias, seis dias, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, um mês, 6 semanas, dois meses, ou três meses depois do tratamento (por exemplo, o primeiro de uma série de tratamento na terapia crônica) com o inibidor).
[00199] Em algumas formas de realização, determinar se um inibidor do complemento produziu um efeito desejado (por exemplo, uma redução na concentração ou atividade de uma proteína de aHUS biomarcadora) em um ser humano pode ser realizada pesquisando-se se a concentração após o tratamento da proteína cai dentro de uma faixa predeterminada indicativa de responsividade a um inibidor do complemento por um ser humano. Em algumas formas de realização, determinar se um inibidor do complemento produziu um efeito desejado em um ser humano pode incluir pesquisar se a concentração ou atividade após o tratamento de uma ou mais proteínas biomarcadoras de aHUS caem acima ou abaixo de um valor de corte predeterminado. Um valor de corte é tipicamente a concentração ou atividade de uma dada proteína em um dado fluído biológico acima ou abaixo que é considerado indicativo de um certo fenótipo - por exemplo, responsividade à terapia com um inibidor do complemento.
[00200] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos aqui descritos, o mesmo médico pode administrar o inibidor do complemento ao sujeito antes de determinar se uma mudança na concentração ou atividade de uma ou mais proteínas biomarcadoras de aHUS tenha ocorrido, ao passo que em algumas formas de realização, o médico que administra o inibidor ao sujeito é diferente do médico que determina se uma resposta ocorreu no sujeito. Em algumas formas de realização, o médico pode obter uma amostra biológica (por exemplo, a amostra de sangue) do sujeito antes da administração do inibidor. Em algumas formas de realização, o médico pode obter uma amostra biológica (por exemplo, uma amostra de sangue) do sujeito seguindo a administração do inibidor ao sujeito. Em algumas formas de realização, a amostra após o tratamento pode ser obtida do sujeito em menos do que 48 (por exemplo, menos do que 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, nove, oito, sete, seis, cinco, quatro, três, duas, ou ainda menos do que uma) horas a seguir da administração do inibidor ao sujeito. Em algumas formas de realização, a amostra após o tratamento pode ser obtida do sujeito em menos do que 20 (por exemplo, menos do que 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, nove, oito, sete, seis, cinco, quatro, três, dois, ou um) dia(s) depois de administrar ao sujeito o inibidor. Em algumas formas de realização, a amostra biológica é obtida do sujeito em não mais do que 20 (por exemplo, não mais do que 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, nove, oito, sete, seis, cinco, quatro, três, dois, ou um) dia(s) depois que o inibidor é administrado ao sujeito.
[00201] Em algumas formas de realização, várias etapas dos métodos aqui descritos podem ser realizadas por mais do que um médico. Por exemplo, um médico pode analisar (por exemplo, medir a concentração ou atividade de uma ou mais proteínas biomarcadoras de aHUS) nas amostras pré- e pós-tratamento obtidas do sujeito. Um outro médico pode receber informação com referência à análise das amostras pelo primeiro médico para determinar deste modo se, por exemplo, o sujeito respondeu ao tratamento com um inibidor do complemento. Em algumas formas de realização, já um outro médico pode obter uma amostra biológica de pré-tratamento de um paciente e um quarto médico pode obter uma amostra biológica do sujeito após o tratamento. Em algumas formas de realização, todas as etapas são realizadas pelo mesmo médico.
[00202] Amostras Biológicas e Coleta de Amostra
[00203] As amostras biológicas adequadas para o uso nos métodos aqui descritos incluem, por exemplo, qualquer fluído biológico. Uma amostra biológica, por exemplo, pode ser um espécime obtido de um sujeito (por exemplo, um mamífero tal como um ser humano) ou pode ser derivada de um tal sujeito. Uma amostra biológica também pode ser um fluído biológico tal como urina, sangue integral ou uma fração do mesmo (por exemplo, plasma ou soro), saliva, sêmen, catarro, fluido cerebroespinhal, lágrimas, ou muco. Uma amostra biológica pode ser ainda fracionada, se desejado, a uma fração contendo análitos particulares (por exemplo, proteínas) de interesse. Por exemplo, uma amostra de sangue integral pode ser fracionada no soro ou em frações contendo tipos particulares de proteínas. Se desejado, uma amostra biológica pode ser uma combinação de amostras biológicas diferentes de um sujeito tal como uma combinação de dois fluidos diferentes.
[00204] As amostras biológicas adequadas para a invenção podem ser amostras frescas ou congeladas coletadas de um sujeito, ou amostras de arquivo com diagnóstico, tratamento e/ou história de resultado conhecidos. As amostras biológicas podem ser obtidas de um sujeito, por exemplo, um sujeito tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver, um distúrbio associado com complemento tal como aHUS. Qualquer método adequado para a obtenção das amostras biológicas pode ser utilizado, embora os métodos exemplares incluam, por exemplo, procedimento de flebotomia, esfregaço (por exemplo, esfregaço bucal), lavagem, ou biópsia de aspirado com agulha fina. As amostras biológicas também podem ser obtidas a partir da medula óssea.
[00205] Em algumas formas de realização, um extrato de proteína pode ser preparado a partir de uma amostra biológica. Em algumas formas de realização, um extrato de proteína contém o teor de proteína total. Os métodos de extração de proteína são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Roe (2001) “Protein Purification Techniques: A Practical Approach”, 2a Edição, Oxford University Press. Numerosos kits diferentes e versáteis podem ser usados para extrair proteínas de fluidos corporais e tecidos, e são comercialmente disponíveis, por exemplo, da BioRad Laboratories (Hercules, CA), BD Biosciences Clontech (Mountain View, CA), Chemicon International, Inc. (Temecula, CA), Calbiochem (San Diego, CA), Pierce Biotechnology (Rockford, IL), e Invitrogen Corp. (Carlsbad, CA).
[00206] Os métodos para a obtenção e/ou armazenagem de amostras que preservem a atividade ou integridade de células na amostra biológica são bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica. Por exemplo, uma amostra biológica pode ser contatada ainda com um ou mais agentes adicionais tais como tampões e/ou inibidores apropriados, incluindo inibidores de protease, os agentes pretendem preservar ou minimizar mudanças (por exemplo, mudanças na osmolaridade ou pH) na estrutura da proteína. Tais inibidores incluem, por exemplo, queladores tais como ácido etilenodiamino tetraacético (EDTA), ácido tetraacético de etileno glicol (EGTA), inibidores de protease tais como fluoreto de fenilmetilsulfonila (PMSF), aprotinina, e leupeptina. Tampões e condições apropriados para armazenar ou de outro modo manipular células integrais são descritos, por exemplo, em Pollard e Walker (1997), “Basic Cell Culture Protocols,” volume 75 de Methods in molecular biology, Humana Press; Masters (2000) “Animal cell culture: a practical approach,” volume 232 de Practical approach series, Oxford University Press; e Jones (1996) “Human cell culture protocols,” volume 2 de Methods in molecular medicine, Humana Press.
[00207] Uma amostra também pode ser processada para eliminar ou minimizar a presença de substâncias interferentes. Por exemplo, uma amostra biológica pode ser fracionada ou purificada para remover um ou mais materiais (por exemplo, células) que não são de interesse. Métodos de fracionar ou purificar uma amostra biológica incluem, mas não são limitados à citometria de fluxo, classificação de célula ativada por fluorescência, e sedimentação.
[00208] Inibidores do complemento
[00209] Qualquer composto que se ligue e iniba, ou de outro modo iniba, a geração e/ou atividade de qualquer um dos componentes do complemento humano pode ser utilizado de acordo com a presente divulgação. Por exemplo, um inibidor do complemento, por exemplo, pode ser uma molécula pequena, um ácido nucléico ou análogo de ácido nucléico, um peptidomimético, ou uma macromolécula que não seja um ácido nucléico ou uma proteína. Estes agentes incluem, mas não são limitados a, moléculas orgânicas pequenas, aptâmeros de RNA, aptâmeros de L-RNA, Spiegelmers, compostos de anti-sentido, RNA de filamento duplo, RNA interferente pequeno, inibidores de ácido nucléico bloqueado, e inibidores de ácido nucléico peptídico. Em algumas formas de realização, um inibidor do complemento pode ser uma proteína ou fragmento de proteína.
[00210] Em algumas formas de realização, as composições contêm anticorpos específicos para um componente do complemento humano. Alguns compostos incluem anticorpos direcionados contra os componentes do complemento C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, Fator D, Fator B, Fator P, MBL, MASP-1, MASP- 2, properdina, ou um fragmento biologicamente ativo de qualquer um do precedente, prevenindo assim a geração da atividade anafilatóxica associada com C5a e/ou prevenindo a montagem do complexo de ataque à membrana C5b-9.
[00211] As composições também podem conter formas que ocorrem naturalmente ou solúveis de inibidor de compostos complementares tais como CR1, LEX-CR1, MCP, DAF, CD59, Fator H, fator de veneno de cobra, FUT-175, complestatina, e K76 COOH. Outros compostos que podem ser utilizados para ligar ou de outro modo bloquear a geração e/ou atividade de qualquer um dos componentes do complemento humano incluem, mas não são limitados a, proteínas, fragmentos de proteína, peptídeos, moléculas pequenas, aptâmeros de RNA incluindo ARC187 (que é comercialmente disponível da Archemix Corporation, Cambridge, MA), aptâmeros de L-RNA, spiegelmers, compostos de anti-sentido, inibidores da serina protease, moléculas que podem ser utilizadas na interferência de RNA (RNAi) tal como RNA de filamento duplo incluindo RNA interferente pequeno (siRNA), inibidores de ácido nucléico bloqueado (LNA), inibidores de ácido nucléico peptídico (PNA), etc.
[00212] Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento inibe a ativação do complemento. Por exemplo, o inibidor do complemento pode ligar e inibir a atividade de ativação do complemento de C1 (por exemplo, C1q, C1r, ou C1s) ou o inibidor do complemento pode ligar e inibir (por exemplo, inibir a clivagem de) C2, C3, ou C4. Em algumas formas de realização, o inibidor inibe a formação ou montagem da C3 convertase e/ou C5 convertase dos caminhos alternativos e/ou clássicos do complemento. Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento inibe a formação do complemento de terminal, por exemplo, formação do complexo de ataque à membrana C5b-9. Por exemplo, um anticorpo inibidor do complemento pode incluir um anticorpo anti-C5. Tais anticorpos anti-C5 podem diretamente interagir com C5 e/ou C5b, de modo a inibir a formação e/ou função fisiológica de C5b.
[00213] Em algumas formas de realização, as composições aqui descritas podem conter um inibidor de componente do complemento C5 humano (por exemplo, um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, que se liga a uma proteína de componente do complemento C5 humano ou um fragmento biologicamente ativo do mesmo tal como C5a ou C5b). Como aqui usado, um “inibidor de componente do complemento C5” é qualquer agente que iniba: (i) a expressão, ou o tráfego ou secreção intracelular apropriados para uma célula, de uma proteína de componente do complemento C5; (ii) a atividade de fragmentos de clivagem de C5, C5a ou C5b (por exemplo, a ligação de C5a aos seus receptores celulares cognatos ou a ligação de C5b a C6 e/ou outros componentes do complexo do complemento terminal; ver acima); (iii) a clivagem de um proteína C5 humana para formar C5a e C5b; (iv) o tráfego intracelular apropriado, ou secreção por uma célula, de uma proteína de componente do complemento C5; ou (v) a estabilidade da proteína C5 ou da proteína C5 que codifica mRNA. A inibição da expressão da proteína de componente do complemento C5 inclui: a inibição da transcrição de um gene que codifica uma proteína C5 humana; degradação aumentada de um mRNA que codifica uma proteína C5 humana; inibição da tradução de um mRNA que codifica um proteína C5 humana; degradação aumentada de uma proteína C5 humana; inibição do processamento apropriado de uma proteína C5 pré-pro humana; ou inibição do tráfego ou secreção apropriados por uma célula de uma proteína C5 humana. Métodos para determinar se um agente candidato é um inibidor de componente do complemento C5 humano são conhecidos na técnica e aqui descritos.
[00214] Um inibidor de componente do complemento C5 humano, por exemplo, pode ser uma molécula pequena, um polipeptídeo, um análogo de polipeptídeo, um ácido nucléico, ou um análogo de ácido nucléico.
[00215] “Molécula pequena” como aqui usado, é intencionado a se referir a um agente, que tem um peso molecular preferivelmente de menos do que cerca de 6 kDa e o mais preferivelmente menor do que cerca de 2,5 kDa. Muitas companhias farmacêuticas têm bibliotecas extensivas de misturas químicas e/ou biológicas compreendendo arranjos de moléculas pequenas, frequentemente extratos fúngicos, bacterianos, ou algais, que podem ser triados com qualquer um dos ensaios do pedido. Este pedido considera usar, entre outras coisas, bibliotecas químicas pequenas, bibliotecas de peptídeo, ou coleções de produtos naturais. Tan et al. descreveram uma biblioteca com mais de dois milhões de compostos sintéticos que é compatível com ensaios com base em célula miniaturizados (J Am Chem Soc (1998) 120: 8565-8566). Está dentro do escopo deste pedido que uma tal biblioteca possa ser usada para triar quanto a agentes que se ligam a um antígeno alvo de interesse (por exemplo, componente do complemento C5). Existem numerosas bibliotecas de composto comercialmente disponíveis, tais como a Chembridge DIVERSet. Bibliotecas também estão disponíveis de investigadores acadêmicos, tais como o conjunto Diversity do NCI developmental therapeutics program. O planejamento de medicamento racional também pode ser utilizado. Por exemplo, o planejamento de medicamento racional pode utilizar o uso da informação estrutural de cristal ou solução na proteína de componente do complemento C5 humana. Ver, por exemplo, as estruturas descritas em Hagemann et al. (2008) J Biol Chem283(12): 7763-75 e Zuiderweg et al. (1989) Biochemistry28(1): 172-85. O planejamento de medicamento racional também pode ser obtido com base nos compostos conhecidos, por exemplo, um inibidor de C5 conhecido (por exemplo, um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, que se liga a um proteína de componente do complemento C5 humana).
[00216] Peptidomiméticos podem ser compostos em que pelo menos uma porção de um polipeptídeo objeto é modificada, e as três estruturas dimensionais do peptidomimético permanece substancialmente a mesma como aquela do polipeptídeo objeto. Os peptidomiméticos podem ser análogos de um polipeptídeo objeto da divulgação que são, eles próprios, polipeptídeos contendo uma ou mais substituições ou outras modificações dentro da sequência de polipeptídeo objeto. Alternativamente, pelo menos uma porção da sequência de polipeptídeo objeto pode ser substituída com uma estrutura não peptídica, tal que a estrutura tridimensional do polipeptídeo objeto é substancialmente retida. Em outras palavras, um, dois ou três resíduos de aminoácido dentro da sequência de polipeptídeo objeto podem ser substituídos por uma estrutura não peptídica. Além disso, outras porções peptídicas do polipeptídeo objeto podem, mas não precisam, ser substituídas com uma estrutura não peptídica. Peptidomiméticos (tanto peptídicos quanto análogos não peptidílicos) podem ter propriedades melhoradas (por exemplo, proteólise diminuída, retenção aumentada ou biodisponibilidade aumentada). Os peptidomiméticos geralmente têm biodisponibilidade oral aumentada, que os tornam especialmente adequados para o tratamento de distúrbios em um ser humano ou animal. Deve ser mencionado que os peptidomiméticos podem ter estruturas químicas bidimensionais similares ou não, mas compartilham traços e geometria estruturais tridimensionais comuns. Cada peptidomimético pode ter ainda um ou mais elementos de ligação adicional únicos.
[00217] Os inibidores de ácido nucléico podem ser usados para ligar e inibir um antígeno alvo de interesse. O antagonista de ácido nucléico, por exemplo, pode ser um aptâmero. Os aptâmeros são sequências de oligonucleotídeo curtas que podem ser usadas para reconhecer e especificamente ligar quase qualquer molécula, incluindo proteínas de superfície celular. A evolução sistemática de ligantes pelo processo de enriquecimento exponencial (SELEX) é poderosa e pode ser usada para identificar prontamente tais aptâmeros. Os aptâmeros podem ser fabricados para uma ampla faixa de proteínas de importância para terapia e diagnósticos, tais como fatores de crescimento e antígenos de superfície celular. Estes oligonucleotídeos ligam seus alvos com afinidades e especificidades similares aos anticorpos (ver, por exemplo, Ulrich (2006) Handb Exp Pharmacol. 173: 305-326).
[00218] Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento é uma proteína de esqueleto que não de anticorpo. Estas proteínas são, no geral, obtidas através da adaptação com base na química combinatória de proteínas de ligação de antígeno pré-existe. Por exemplo, o sítio de ligação de transferrina humana ao receptor de transferrina humana pode ser modificado usando a química combinatória para criar uma biblioteca diversa de variantes de transferrina, algumas das quais têm afinidade adquirida para antígenos diferentes. Ali et al. (1999) J Biol Chem274: 2406624073. A porção de transferrina humana não envolvida com a ligação do receptor permanece inalterada e serve como um esqueleto, como regiões de armação de anticorpos, para apresentar os sítios de ligação variantes. As bibliotecas são depois triadas, como uma biblioteca de anticorpo é, contra um antígeno alvo de interesse para identificar aquelas variantes tendo seletividade e afinidade ideais para o antígeno alvo. As proteínas de esqueleto que não anticorpo, embora similares na função aos anticorpos, são apontadas como tendo várias vantagens quando comparadas aos anticorpos, vantagens estas que incluem, entre outras coisas, solubilidade e penetração tecidual realçadas, fabricação menos cara, e facilidade de conjugação a outras moléculas de interesse. Hey et al. (2005) TRENDS Biotechnol23(10): 514-522.
[00219] Uma pessoa de habilidade na técnica avaliaria que a porção de esqueleto da proteína de esqueleto que não anticorpo pode incluir, por exemplo, todo ou parte: do domínio Z da proteína A de S. aureus, transferrina humana, domínio da décima fibronectina tipo III humana, domínio kunitz de um inibidor de tripsina humano, CTLA-4 humano, uma proteína de repetição de anquirina, uma lipocalina humana, cristalina humana, ubiquitina humana, ou um inibidor de tripsina de E. elaterium. Id.
[00220] Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento é um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, que se liga a uma proteína de componente do complemento C5 humana. (Daqui em diante, o anticorpo pode algumas vezes ser aludido como um “anticorpo anti-C5”).
[00221] Em algumas formas de realização, o anticorpo anti-C5 pode se ligar a um epítopo na cadeia alfa da proteína de componente do complemento C5 humana. Os anticorpos que se ligam à cadeia alfa de C5 são descritas, por exemplo, na Publicação do pedido PCT no. WO 2010/015608 e Patente U.S. no. 6.355.245. Em algumas formas de realização, o anticorpo anti-C5 pode se ligar a um epítopo na cadeia beta da proteína de componente do complemento C5 humana. Os anticorpos que se ligam à cadeia beta de C5 são descritos, por exemplo, em Moongkarndi et al. (1982) Immunobiol162: 397; Moongkarndi et al. (1983) Immunobiol165: 323; e Mollnes et al. (1988) Scand J Immunol28: 307-312.
[00222] Os fragmentos antigênicos exemplares adicionais de componente do complemento C5 humano são divulgados, por exemplo, na Patente U.S. No. 6.355.245, a divulgação da qual é aqui incorporada por referência.
[00223] Os anticorpos anti-C5 adicionais, e fragmentos de ligação de antígeno dos mesmos, adequados para o uso nas proteínas de fusão aqui descritas são descritos, por exemplo, na Publicação do pedido PCT no. WO 2010/015608, a divulgação da qual é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[00224] Em algumas formas de realização, o anticorpo anti-C5 especificamente se liga a um C5 proteína humana de componente do complemento (por exemplo, a proteína C5 humana tendo a sequência de aminoácido representada na SEQ ID NO: 1). Os termos “ligação específica” ou “se liga especificamente” se referem a duas moléculas formando um complexo (por exemplo, um complexo entre um anticorpo e uma proteína de componente do complemento C5) que é relativamente estável sob condições fisiológicas. Tipicamente, a ligação é considerada específica quando a constante de associação (Ka) é mais alta do que 106 M-1. Assim, um anticorpo pode especificamente se ligar a uma proteína C5 com um Ka de pelo menos (ou maior do que) 106 (por exemplo, pelo menos ou maior do que 107, 108, 109, 1010, 1011 1012, 1013, 1014, ou 1015 ou mais alto) M-1. Os exemplos de anticorpos que especificamente se ligam a uma proteína de componente do complemento C5 humana são descritos, por exemplo, na Patente U.S. No. 6.355.245, a divulgação da qual é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[00225] Os anticorpos anti-C5 aqui descritos podem ter atividade no bloqueio da geração ou atividade dos fragmentos ativos C5a e/ou C5b de uma proteína de componente do complemento C5 (por exemplo, uma proteína C5 humana). Através deste efeito de bloqueio, os anticorpos anti-C5 inibem, por exemplo, os efeitos pró- inflamatórios de C5a e a geração do complexo de ataque à membrana (MAC) C5b-9 na superfície de uma célula. Os anticorpos anti-C5 que têm a capacidade para bloquear a geração de C5a são descritos, por exemplo, em Moongkarndi et al. (1982) Immunobiol162: 397 e Moongkarndi et al. (1983) Immunobiol165: 323.
[00226] Em algumas formas de realização, um anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, pode reduzir a capacidade de uma proteína C5 para ligar componente do complemento C3b humano (por exemplo, C3b presente em um complexo de AP ou CP C5 convertase) em mais do que 50 (por exemplo, mais do que 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, ou 95 ou mais) %. Em algumas formas de realização, na ligação a uma proteína C5, o anticorpo anti-C5 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo pode reduzir a capacidade da proteína C5 para ligar componente do complemento C4b (por exemplo, C4b presente em uma CP C5 convertase) em mais do que 50 (por exemplo, mais do que 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, ou 95 ou mais) %. Métodos para determinar se um anticorpo pode bloquear a geração ou atividade dos fragmentos ativos de C5a e/ou C5b de uma proteína de componente do complemento C5, ou ligação ao componente do complemento C4b ou C3b, são conhecidos na técnica e descritos, por exemplo, na Patente U.S. No. 6.355.245 e Wurzner et al. (1991) Complement Inflamm 8: 328-340.
[00227] Em algumas formas de realização, a composição compreende, e/ou o anticorpo é, eculizumab (Soliris®; Alexion Pharmaceuticals, Inc., Cheshire, CT). (Ver, por exemplo, Kaplan (2002) Curr Opin Investig Drugs3(7): 1017-23; Hill (2005) Clin Adv Hematol Oncol3(11): 849-50; e Routro et al. (2007) Nature Biotechnology 25(11): 1256-1488). Em algumas formas de realização, a composição compreende, e/ou o anticorpo é, pexelizumab (Alexion Pharmaceuticals, Inc., Cheshire, CT). (Ver, por exemplo, Whiss (2002) Curr Opin Investig Drugs3(6): 870-7; Patel et al. (2005) Drugs Today (Barc)41(3): 165-70; e Thomas et al. (1996) Mol Immunol33(17-18): 1389-401).
[00228] Em algumas formas de realização, o inibidor de C5 é um anticorpo que se liga ao C5a (algumas vezes aqui aludido como “um anticorpo anti-C5a”). Em algumas formas de realização, o anticorpo se liga a C5a, mas não a C5 de tamanho natural. Em algumas formas de realização, a ligação de um anticorpo a C5a pode inibir a atividade biológica de C5a. Os métodos para medir a atividade de C5a incluem, por exemplo, ensaios de quimiotaxia, RIAs, ou ELISAs (ver, por exemplo, Ward e Zvaifler (1971) J Clin Invest50(3): 606-16 e Wurzner et al. (1991) Complemento Inflamm 8: 328-340). Em algumas formas de realização, a ligação de um anticorpo a C5a pode inibir a interação entre C5a e C5aR1. Os métodos adequados para detectar e/ou medir a interação entre C5a e C5aR1 (na presença e ausência de um anticorpo) são conhecidos na técnica e descritos, por exemplo, em Mary e Boulay (1993) Eur J Haematol51(5): 282-287; Kaneko et al. (1995) Immunology86(1): 149-154; Giannini et al. (1995) J Biol Chem270(32): 19166-19172; e Publicação do Pedido de Patente U.S. No. 20060160726. Por exemplo, a ligação de células mononucleares de sangue periférico que expressam C5a a C5aR1 detectavelmente rotuladas (por exemplo, radioativamente rotuladas) pode ser avaliada na presença e ausência de um anticorpo. Uma diminuição na quantidade de C5a detectavelmente rotulado que se liga ao C5aR1 na presença do anticorpo, quando comparada com a quantidade de ligação na ausência do anticorpo, é uma indicação de que o anticorpo inibe a interação entre C5a e C5aR1. Em algumas formas de realização, a ligação de um anticorpo a C5a pode inibir a interação entre C5a e C5L2 (ver abaixo). Os métodos para detectar e/ou medir a interação entre C5a e C5L2 são conhecidos na técnica e descritos, por exemplo, em Ward (2009) J Mol Med87(4): 375-378 e Chen et al. (2007) Nature 446(7132): 203-207 (ver abaixo).
[00229] Em algumas formas de realização, o inibidor de C5 é um anticorpo que se liga ao C5b (algumas vezes aqui aludido como “um anticorpo anti-C5b”). Em algumas formas de realização, o anticorpo se liga ao C5b, mas não se liga a C5 de tamanho natural. A estrutura de C5b é descrita, por exemplo, em Müller-Eberhard (1985) Biochem Soc Symp 50: 235-246; e Yamamoto e Gewurz (1978) J Immunol 120(6): 2008-2015. Como descrito acima, C5b combina com C6, C7, e C8 para formar o complexo C5b-8 na superfície da célula alvo. Os intermediários de complexo de proteína formados durante a série de combinações incluem C5b-6 (incluindo C5b e C6), C5b-7 (incluindo C5b, C6, e C7), e C5b-8 (incluindo C5b, C6, C7, e C8). Na ligação de várias moléculas C9, o complexo de ataque à membrana (MAC, complexo do complemento terminal (TCC) C5b-9) é formado. Quando números suficientes de MACs inseridos dentro das membranas da célula alvo, as aberturas que eles criam (poros MAC) medeiam a lise osmótica rápida das células alvos.
[00230] Em algumas formas de realização, a ligação de um anticorpo a C5b pode inibir a interação entre C5b e C6. Em algumas formas de realização, a ligação do anticorpo a C5b pode inibir a montagem ou atividade do MAC-TCC de C5b-9. Em algumas formas de realização, a ligação de um anticorpo a C5b pode inibir a lise celular dependente do complemento (por exemplo, in vitro e/ou in vivo). Os métodos adequados para avaliar se um anticorpo inibe lise dependente do complemento incluem, por exemplo, ensaios hemolíticos ou outros ensaios funcionais para detectar a atividade de C5b-9 solúvel. Por exemplo, uma redução na capacidade de lisar célula do complemento na presença de um anticorpo pode ser medida por um ensaio de hemólise descrito por Kabat e Mayer (eds.), “Experimental Immunochemistry, 2a Edição,” 135-240, Springfield, IL, CC Thomas (1961), páginas 135-139, ou uma variação convencional deste ensaio tal como o método de hemólise de eritrócito de galinha como descrito, por exemplo, em Hillmen et al. (2004) N Engl J Med350(6): 552.
[00231] Os anticorpos que se ligam a C5b assim como os métodos para fabricar tais anticorpos são conhecidos na técnica. anticorpos anti-C5b comercialmente disponíveis são disponíveis de vários fornecedores incluindo, por exemplo, Hycult Biotechnology (número de catálogo: HM2080; clone 568) e Abcam® (ab46151 ou ab46168).
[00232] Os métodos para determinar se um agente particular é um inibidor de componente do complemento C5 humano são aqui descritos e são conhecidos na técnica. Por exemplo, a concentração e/ou atividade fisiológica de C5a e C5b em um fluido corporal podem ser medidas pelos métodos bem conhecidos na técnica. Os métodos para medir a concentração ou atividade de C5a incluem, por exemplo, ensaios de quimiotaxia, RIAs, ou ELISAs (ver, por exemplo, Ward e Zvaifler (1971) J Clin Invest.50(3): 606-16 e Wurzner et al. (1991) Complement Inflamm. 8: 328-340). Para C5b, ensaios hemolíticos ou ensaios para C5b-9 solúvel como aqui debatido podem ser usados. Outros ensaios conhecidos na técnica também podem ser usados. Usando ensaios destes ou outros tipos adequados, os agentes candidatos capazes de inibir componente do complemento C5 humano tal como um anticorpo anti-C5, podem ser triados de modo a, por exemplo, identificar compostos que são úteis nos métodos aqui descritos e determinar os níveis de dosagem apropriados de tais compostos.
[00233] Os métodos para determinar se um composto candidato inibe a clivagem de C5 humano nas formas C5a e C5b são conhecidos na técnica e descritos, por exemplo, em Moongkarndi et al. (1982) Immunobiol162: 397; Moongkarndi et al. (1983) Immunobiol165: 323; Isenman et al. (1980) J Immunol124(1): 326-31; Thomas et al. (1996) Mol. Immunol33(17-18): 1389-401; e Evans et al. (1995) Mol. Immunol 32(16): 1183-95.
[00234] A inibição de componente do complemento C5 humano também pode reduzir a capacidade de lisar célula do complemento em um dos fluidos corporais do sujeito. Tais reduções da capacidade de lisar células do complemento presentes podem ser medidas pelos métodos bem conhecidos na técnica tais como, por exemplo, por um ensaio hemolítico convencional tal como o ensaio de hemólise descrito por Kabat e Mayer (eds), “Experimental Immunochemistry, 2aEdição,” 135240, Springfield, IL, CC Thomas (1961), páginas 135-139, ou uma variação convencional deste ensaio tal como o método da hemólise de eritrócito de galinha como descrito, por exemplo, em Hillmen et al. (2004) N Engl J Med350(6): 552.
[00235] Os anticorpos que se ligam a C3b e, por exemplo, inibem a C3b convertase também são bem conhecidos na técnica. Ver por exemplo, as Publicações dos pedidos PCT nos. WO 2010/136311, WO 2009/056631, e WO 2008/154251, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência em sua totalidade. Anticorpos anti-C6 e anti-C7 antagonísticos foram descritos, por exemplo, em Brauer et al. (1996) Transplantation61(4): 588-594 e Patente U.S. no. 5.679.345.
[00236] Em algumas formas de realização, o anticorpo é um anticorpo anti- fator B (tal como o anticorpo monoclonal 1379 produzido pela ATCC Depósito No. PTA-6230). Os anticorpos Anti-fator B também são descritos, por exemplo, em Ueda et al. (1987) J Immunol138(4): 1143-9; Tanhehco et al. (1999) Transplant Proc31(5): 2168-71; Patentes U.S. nos. 7.999.082 e 7.964.705; e publicação PCT no. WO 09/029669.
[00237] Em algumas formas de realização, o anticorpo é um anticorpo anti- fator D, por exemplo, um anticorpo descrito em Pascual et al. (1990) J Immunol Methods127: 263-269; Sahu et al. (1993) Mol Immunol30(7): 679-684; Pascual et al. (1993) Eur J Immunol 23: 1389-1392; Niemann et al. (1984) J Immunol132(2): 809815; Patente U.S. no. 7.439.331; ou Publicação do Pedido de Patente U.S. no. 20080118506.
[00238] Em algumas formas de realização, o anticorpo é um anticorpo anti- properdina. Os anticorpos anti-properdina adequados também são bem conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, Publicação do Pedido de Patente U.S. no. 20110014614 e Publicação do pedido PCT no. WO2009110918.
[00239] Métodos para o Tratamento
[00240] Também são aqui fornecidos composições e métodos para tratar ou prevenir aHUS em um sujeito (por exemplo, um ser humano). As composições (por exemplo, inibidores do complemento e/ou agentes secundários) podem ser administradas a um sujeito, por exemplo, um sujeito humano, usando uma variedade de métodos que dependem, em parte, da via de administração. A via, por exemplo, pode ser injeção ou infusão intravenosa (IV), injeção subcutânea (SC), injeção intraperitoneal (IP), ou injeção intramuscular.
[00241] A administração pode ser obtida, por exemplo, pela infusão local, injeção, ou por meio de um implante. O implante pode ser de um material poroso, não poroso, ou gelatinoso, incluindo membranas, tais como membranas sialásticas, ou fibras. O implante pode ser configurado para a liberação prolongada ou periódica da composição ao sujeito. Ver, por exemplo, a publicação de Patente U.S. no. 20080241223; Patentes U.S. nos. 5.501.856; 4.863.457; e 3.710.795; e Patente Européia nos. EP488401 e EP430539, as divulgações de cada um das quais são aqui incorporadas por referência em sua totalidade. A composição pode ser liberada ao sujeito por via de um dispositivo implantável com base, por exemplo, nos sistemas difusivo, erodível ou convectivo, por exemplo, bombas osmóticas, implantes biodegradáveis, sistemas de eletrodifusão, sistemas de eletro-osmose, bombas de pressão de vapor, bombas eletrolíticas, bombas efervescentes, bombas piezoelétricas, sistemas com base na erosão, ou sistemas eletromecânicos.
[00242] Uma dose adequada de um inibidor do complemento (por exemplo, um anticorpo anti-C5 ou fragmento do mesmo), dose esta que é capaz de tratar ou prevenir aHUS em um sujeito, pode depender de uma variedade de fatores incluindo, por exemplo, a idade, sexo, e peso de um sujeito a ser tratado e do composto inibidor particular usado. Por exemplo, uma dose diferente de um siRNA específico para C5 humano pode ser requerida para tratar um sujeito com a aHUS quando comparada com a dose de um anticorpo anti-C5 requerida para tratar o mesmo paciente. Outros fatores que afetam a dose administrada ao sujeito incluem, por exemplo, o tipo ou severidade da aHUS. Por exemplo, um sujeito tendo aHUS associada com CFH pode requerer a administração de uma dosagem diferente do inibidor do que um sujeito com aHUS associada a MCP. Outros fatores podem incluir, por exemplo, outros distúrbios médicos concorrentemente ou afetando previamente o sujeito, a saúde geral do sujeito, a disposição genética do sujeito, dieta, tempo de administração, taxa de excreção, combinação medicamentosa, e qualquer outra terapêutica adicional que seja administrada ao sujeito. Também deve ser entendido que um regime de dosagem e tratamento específico para qualquer sujeito particular dependerá do julgamento do profissional médico do tratamento (por exemplo, doutor ou enfermeira).
[00243] O inibidor pode ser administrado como uma dose fixa, ou em uma dose de miligrama por quilograma “mg/kg”. Em algumas formas de realização, a dose também pode ser escolhida para reduzir ou evitar a produção de anticorpos ou outras respostas imunes do hospedeiro contra um ou mais agentes ativos na composição. Embora de nenhum modo intencionado ser limitante, as dosagens exemplares de um inibidor, tal como um anticorpo anti-C5, incluem, por exemplo, 1 a 100 mg/kg, 0,5 a 50 mg/kg, 0,1 a 100 mg/kg, 0,5 a 25 mg/kg, 1 a 20 mg/kg, e 1 a 10 mg/kg de peso corporal.
[00244] Em algumas formas de realização, um ser humano pode ser intravenosamente administrado com um anticorpo anti-C5 (por exemplo, eculizumab) em uma dose de cerca de 900 mg a cerca de cada 12 (por exemplo, cerca de cada 10, 11, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 28, 30, 42, ou 49 ou mais) dias. Ver, por exemplo, Hill et al. (2005) Blood106(7): 2559.
[00245] Em algumas formas de realização, um ser humano pode ser intravenosamente administrado com um anticorpo anti-C5 (por exemplo, eculizumab) em uma dose de cerca de 600 (por exemplo, cerca de 625, 650, 700, 725, 750, 800, 825, 850, 875, 900, 925, 950, ou 1.000 ou mais) mg a cada semana, opcionalmente, por duas ou mais (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, ou oito ou mais) semanas. Seguindo o tratamento inicial, o ser humano pode ser administrado com o anticorpo em uma dose de cerca de 900 mg a cerca de cada 14 (por exemplo, cerca de cada 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 28, 30, 42, ou 49 ou mais) dias, por exemplo, como uma dose de manutenção. Ver, por exemplo, Hillmen et al. (2004) N Engl J Med.350(6): 552-9 e Dmytrijuk et al. (2008) The Oncologist13(9): 993.
[00246] Em algumas formas de realização, um ser humano pode ser intravenosamente administrado com um anticorpo anti-C5 (por exemplo, eculizumab) em uma dose de cerca de 900 (por exemplo, 925, 950, 975, 1000, 1100, ou 1200 ou mais) mg a cada semana, opcionalmente, por duas ou mais (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, ou oito ou mais) semanas. Seguindo o tratamento inicial, o ser humano pode ser administrado com o anticorpo em uma dose de cerca de 1200 mg a cerca de cada 14 (por exemplo, cerca de cada 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 28, 30, 42, ou 49 ou mais) dias, por exemplo, como uma dose de manutenção. Ver, por exemplo, a Publicação do pedido de patente internacional no. WO 2010/054403.
[00247] Como aqui usado, “cronicamente administrado,” “tratamento crônico,” “cronicamente tratando,” ou variações gramaticais similares dos mesmos se referem a um regime de tratamento que é utilizado para manter uma certa concentração limítrofe de um agente terapêutico no sangue de um paciente de modo a completa ou substancialmente suprimir a atividade do complemento sistêmico no paciente em um período prolongado de tempo. Consequentemente, um paciente cronicamente tratado com um inibidor do complemento pode ser tratado por um período de tempo que seja maior do que ou igual a 2 semanas (por exemplo, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, ou 52 semanas; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, ou 12 meses; ou 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 10,5, ou 12 anos ou para o resto da vida do paciente) com o inibidor em uma quantidade e com uma frequência de dosagem que sejam suficientes para manter uma concentração do inibidor no sangue do paciente que iniba ou substancialmente iniba a atividade do complemento sistêmica no paciente. Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento pode ser cronicamente administrado a um paciente em necessidade do mesmo em uma quantidade e com uma frequência que sejam eficazes para manter a atividade hemolítica sérica em menos do que ou igual a 20 (por exemplo, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5) %. Ver, por exemplo, Hill et al. (2005) Blood106(7): 2559. Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento pode ser administrado a um paciente em uma quantidade e com uma frequência que sejam eficazes para manter os níveis séricos da lactato desidrogenase (LDH) dentro de pelo menos 20 (por exemplo, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, ou 5) % da faixa normal para LDH. Ver Hill et al. (2005) supra. Em algumas formas de realização, o inibidor do complemento é administrado ao paciente em uma quantidade e com uma frequência que sejam eficazes para manter um nível sérico de LDH menor do que 550 (por exemplo, menor do que 540, 530, 520, 510, 500, 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 400, 390, 380, 370, 360, 350, 340, 330, 320, 310, 300, 290, 280, ou menor do que 270) IU/L. Para manter a inibição do complemento sistêmica em um paciente, o inibidor do complemento pode ser cronicamente administrado ao paciente, por exemplo, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, duas vezes por semana, uma vez ao dia, uma vez ao mês, ou uma vez a cada três semanas.
[00248] Uma composição farmacêutica pode incluir uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de componente do complemento C5 humano (por exemplo, um anticorpo anti-C5 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo). Tais quantidades eficazes podem ser facilmente determinadas por uma pessoa de habilidade comum na técnica com base, em parte, no efeito do inibidor administrado, ou do efeito combinatório do anticorpo e um ou mais agentes ativos adicionais, se mais do que um agente é usado. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de componente do complemento C5 humano (por exemplo, um anticorpo anti- C5) também pode variar de acordo com fatores tais como o estado de doença, idade, sexo, e peso do indivíduo, e da capacidade do anticorpo (e um ou mais agentes ativos adicionais) para evocar uma resposta desejada no indivíduo, por exemplo, melhora de pelo menos um parâmetro de condição, por exemplo, melhora de pelo menos um sintoma de aHUS. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de componente do complemento C5 humano (por exemplo, um anticorpo anti- C5) pode inibir (diminuir a severidade de ou eliminar a ocorrência de) e/ou prevenir a trombocitopenia, anemia hemolítica microangiopática, insuficiência renal, e/ou qualquer um dos sintomas de aHUS conhecidos na técnica ou aqui descritos. Uma quantidade terapeuticamente eficaz também é uma em que qualquer um dos efeitos tóxicos ou prejudiciais da composição são superados pelos efeitos terapeuticamente benéficos.
[00249] Os termos “quantidade terapeuticamente eficaz” ou “dose terapeuticamente eficaz,” ou termos similares aqui usados são intencionados a significar uma quantidade de um agente (por exemplo, um inibidor de componente do complemento 5 humano) que evocará a resposta biológica ou médica desejada (por exemplo, uma melhora em um ou mais sintomas de aHUS). Em algumas formas de realização, uma composição aqui descrita contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de componente do complemento C5 humano. Em algumas formas de realização, uma composição aqui descrita contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, que se liga a uma proteína de componente do complemento C5. Em algumas formas de realização, a composição contém dois ou mais (por exemplo, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, ou 11 ou mais) inibidores diferentes de componente do complemento C5 humano tal que a composição como um todo é terapeuticamente eficaz. Por exemplo, uma composição pode conter um anticorpo que se liga a uma proteína C5 humana e um siRNA que se liga a, e promove a degradação de, um mRNA que codifica uma proteína C5 humana, em que o anticorpo e siRNA estão cada um em uma concentração que quando combinada são terapeuticamente eficazes. Em algumas formas de realização, a composição contém o inibidor e um ou mais agentes ativos secundários tal que a composição como um todo é terapeuticamente eficaz. Por exemplo, a composição pode conter um anticorpo que se liga a uma proteína C5 humana e um outro agente útil para tratar ou prevenir aHUS.
[00250] A toxicidade e eficácia terapêutica de tais composições podem ser determinadas pelos procedimentos farmacêuticos conhecidos em culturas de célula ou animais experimentais (modelos de animal de aHUS). Estes procedimentos podem ser usados, por exemplo, para determinar a LD50 (a dose letal para 50 % da população) e a ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50 % da população). A razão de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico e o mesmo pode ser expresso como a razão LD50/ED50. As composições, ou inibidores (por exemplo, anticorpos anti-C5) das composições, que exibem altos índices terapêuticos são preferidos. Embora as composições que exibem efeitos colaterais tóxicos possam ser usadas, cuidado deve ser tomado para planejar um sistema de liberação que alveje tais compostos ao sítio de tecido afetado e minimizar dano potencial para as células normais e, deste modo, reduzir os efeitos colaterais.
[00251] Os dados obtidos a partir dos ensaios de cultura de célula e estudos de animal podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem para o uso em seres humanos. Os modelos de animal adequados de aHUS são conhecidos na técnica e são descritos, por exemplo, em Atkinson et al. (2007) Journal of Experimental Medicine204(6): 1245-1248. A dosagem de tais inibidores reside geralmente dentro de uma faixa de concentrações circulantes dos inibidores (por exemplo, um anticorpo anti-C5 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo) que incluem a ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem utilizada e da via de administração utilizada. Para um inibidor de componente do complemento C5 humano (por exemplo, um anticorpo anti-C5) usado como aqui descrito (por exemplo, para tratar ou prevenir aHUS), a dose terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente a partir de ensaios de cultura de célula. Uma dose pode ser formulada em modelos de animal para alcançar uma faixa de concentração plasmática circulante que inclui a IC50 (isto é, a concentração do composto de teste que alcance uma inibição meia-máxima de sintomas) como determinada em cultura de célula. Tal informação pode ser usado para determinar mais acuradamente doses úteis em seres humanos. Os níveis no plasma podem ser medidos, por exemplo, pela cromatografia líquida de anto desempenho.
[00252] Em algumas formas de realização, a dose requerida de um inibidor de componente do complemento C5 humano pode ser determinada com base na concentração de proteína C5 humana no sangue do sujeito. Por exemplo, um sujeito tendo uma concentração mais alta de níveis de proteína C5 humana circulante pode requerer uma dose mais alta de um inibidor C5 humano do que um sujeito tendo níveis mais baixo de C5 humano circulante. Os métodos para determinar a concentração de componente do complemento C5 humano em uma amostra fluida derivada do sangue de um sujeito são conhecidos na técnica e descritos, por exemplo, em Rawal et al. (1998) J Biol Chem 273(27): 16828-16835.
[00253] Em algumas formas de realização, os métodos podem ser realizados em conjunção com outras terapias para aHUS. Por exemplo, a composição pode ser administrada a um sujeito ao mesmo tempo, antes, ou depois, da nefrectomia (por exemplo, nefrectomia bilateral), diálise, uma troca de plasma, ou uma infusão de plasma (ver, por exemplo, “Noris et al. (2005) “Non-shiga toxin-associated hemolytic uremic syndrome.” In: Zipfel P (ed). Complement and Kidney Disease. Basel: Birkhauser-Verlag, 65-83).
[00254] Um “sujeito,” como aqui usado, pode ser qualquer mamífero. Por exemplo, um sujeito pode ser um ser humano, um primata não humano (por exemplo, macaco, babuíno, ou chimpanzé), um cavalo, uma vaca, um porco, uma ovelha, uma cabra, um cão, um gato, um coelho, um porquinho da Índia, um gerbo, um hamster, um rato, ou um camundongo. Em algumas formas de realização, o sujeito é um bebê (por exemplo, um bebê humano).
[00255] Como aqui usado, um sujeito “em necessidade de prevenção,” “em necessidade de tratamento,” ou “em necessidade do mesmo,” se refere a um, que pelo julgamento de um médico apropriado (por exemplo, um doutor, uma enfermeira, ou uma enfermeira de hospital no caso de seres humanos; um veterinário no caso de mamíferos não humanos), seria razoavelmente beneficiado de um dado tratamento (tal como tratamento com uma composição compreendendo um inibidor de componente do complemento C5 humano).
[00256] Como aqui usado, um sujeito “em risco de desenvolver aHUS” é um sujeito tendo um ou mais (por exemplo, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, ou oito ou mais) fatores de risco para desenvolver o distúrbio. Os fatores de risco para aHUS são bem conhecidos na técnica da medicina e incluem, por exemplo, uma predisposição para desenvolver a condição, isto é, uma história familiar da condição ou uma predisposição genética para desenvolver a condição tal como, por exemplo, uma ou mais mutações no fator H do complemento (CFH), proteína do cofator de membrana (MCP; CD46), proteína de ligação C4b, fator B do complemento (CFB), ou fator I do complemento (CFI). Ver, por exemplo, Warwicker et al. (1998) Kidney Int 53: 836-844; Richards et al. (2001) Am J Hum Genet 68: 485-490; Caprioli et al. (2001) Am Soc Nephrol 12: 297-307; Neuman et al. (2003) J Med Genet 40: 676-681; Richards et al. (2006) Proc Natl Acad Sci USA100: 12966-12971; Fremeaux-Bacchi et al. (2005) J Am Soc Nephrol 17: 2017-2025; Esparza-Gordillo et al. (2005) Hum Mol Genet 14: 703-712; Goicoechea de Jorge et al. (2007) Proc Natl Acad Sci USA104(1): 240-245; Blom et al. (2008) J Immunol180(9): 6385-91; e Fremeaux-Bacchi et al. (2004) J Medical Genet41: e84). Ver também Kavanagh et al. (2006), supra. Os fatores de risco também incluem, por exemplo, infecção com Streptococcus pneumoniae, gravidez, câncer, exposição aos agentes anti-câncer (por exemplo, quinina, mitomicina C, cisplatina, ou bleomicina), exposição aos agentes imunoterapêuticos (por exemplo, ciclosporina, OKT3, ou interferon), exposição aos agentes anti-plaquetários (por exemplo, ticlopidina ou clopidogrel), infecção pelo HIV, transplante, doença autoimune, e aciduria metilmalônica e homocistinuria combinadas (cblC). Ver, por exemplo, Constantinescu et al. (2004) Am J Kidney Dis 43: 976-982; George (2003) Curr Opin Hematol 10: 339-344; Gottschall et al. (1994) Am J Hematol 47: 283-289; Valavaara et al. (1985) Cancer 55: 47-50; Miralbell et al. (1996) J Clin Oncol 14: 579-585; Dragon-Durey et al. (2005) J Am Soc Nephrol16: 555-63; e Becker et al. (2004) Clin Infect Dis39: S267-S275. Assim, um ser humano em risco de desenvolver aHUS, por exemplo, pode ser um que tenha uma história familiar de aHUS e/ou um que tem uma infecção pelo HIV. A partir do acima estará claro que sujeitos “em risco de desenvolver aHUS” não são todos os sujeitos dentro de uma espécie de interesse.
[00257] Um sujeito “suspeito de ter aHUS” é um tendo um ou mais sintomas da condição. Os sintomas desta condição são bem conhecidos por aqueles de habilidade na técnica da medicina e incluem, por exemplo, hipertensão severa, proteinuria, uremia, letargia/fadiga, irritabilidade, trombocitopenia, anemia hemolítica microangiopática, e deterioração da função renal (por exemplo, insuficiência renal aguda). Estará claro a partir da passagem precedente que sujeitos “suspeitos de ter aHUS” não são todos os sujeitos dentro de uma espécie de interesse.
[00258] A aHUS pode ser genética, adquirida, ou idiopática. A aHUS pode ser considerada genética quando dois ou mais (por exemplo, três, quatro, cinco, ou seis ou mais) membros da mesma família são afetados pela doença pelo menos seis meses separadamente e a exposição a um agente deflagrador comum tenha sido excluída, ou quando uma ou mais mutações de gene associadas com a aHUS (por exemplo, uma ou mais mutações em CFH, MCP/CD46, CFB, ou CFI) são identificadas em um sujeito. Por exemplo, um sujeito pode ter aHUS associada com CFH, aHUS associada com CFB, aHUS associada com CFI, ou aHUS associada com MCP. Até 30 % da aHUS genética está associada com mutações em CFH, 12 % com mutações em MCP, 5 a 10 % com mutações em CFI, e menos do que 2 % com mutações em CFB. A aHUS genética pode ser multiplex (isto é, familiar; dois ou mais membros da família afetados) ou simples (isto é, uma única ocorrência em uma família). A aHUS pode ser considerada adquirida quando um fator ambiental subjacente (por exemplo, um medicamento, doença sistêmica, ou agentes virais ou bacterianas que não resultam em exotoxinas iguais a Shiga) pode ser identificado. A aHUS pode ser considerada idiopática quando nenhum deflagrador (genético ou ambiental) está evidente.
[00259] Em algumas formas de realização, os métodos podem incluir identificar o sujeito como um tendo, suspeito de ter, ou em risco de desenvolver aHUS. Além do uso da definição de perfil do biomarcador de aHUS aqui descrito, testes de laboratório podem ser realizados para determinar se um sujeito humano tem trombocitopenia, anemia hemolítica microangiopática, ou insuficiência renal aguda. A trombocitopenia pode ser diagnosticada por um profissional médico como um ou mais de: (i) uma contagem de plaqueta que seja menor do que 150.000/mm3 (por exemplo, menor do que 60.000/mm3); (ii) uma redução no tempo de sobrevivência de plaqueta que seja reduzida, refletindo no rompimento de plaqueta realçada na circulação; e (iii) plaquetas gigantes observadas em um esfregaço periférico, que é compatível com a ativação secundária de trombocitopoiese. A anemia hemolítica microangiopática pode ser diagnosticada por um profissional médico como um ou mais de: (i) concentrações de hemoglobina que são menores do que 10 mg/dL (por exemplo, menores do que 6,5 mg/dL); (ii) concentrações da lactato desidrogenase (LDH) sérica aumentadas (>460 U/L); (iii) hiperbilirrubinemia, reticulocitose, hemoglobina livre circulante, e concentrações de haptoglobina baixa ou indetectável; e (iv) a detecção de células sanguíneas vermelhas fragmentadas (esquistócitos) com o aspecto típico de equinócitos ou esquizócitos no esfregaço periférico junto com um teste de Coombs negativo. Ver, por exemplo, Kaplan et al. (1992) “Hemolytic Uremic Syndrome and Thrombotic Thrombocytopenic Purpura,” Informa Health Care (ISBN 0824786637) e Zipfel (2005) “Complement and Kidney Disease,” Springer (ISBN 3764371668).
[00260] As concentrações sanguíneas de C3 e C4 também podem ser usadas como uma medida da ativação ou desregulagem do complemento. Além disso, uma condição do sujeito pode ser caracterizada ainda pela identificação do sujeito como abrigando uma ou mais mutações em um gene associado com a aHUS tal como CFI, CFB, CFH, ou MCP (supra). Os métodos adequados para detectar uma mutação em um gene incluem, por exemplo, sequenciamento de DNA e técnicas de arranjo de ácido nucléico. Ver, por exemplo, Breslin et al. (2006) Clin Am Soc Nephrol 1. 88-99 e Goicoechea de Jorge et al. (2007) Proc Natl Acad Sci USA 104: 240-245.
[00261] Em algumas formas de realização, o inibidor de componente do complemento C5 humano (por exemplo, um anticorpo anti-C5 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo) pode ser administrado a um sujeito como uma monoterapia. Alternativamente, como descrito acima, o inibidor pode ser administrado a um sujeito como uma terapia de combinação com um outro tratamento, por exemplo, um outro tratamento para aHUS. Por exemplo, a terapia de combinação pode incluir administrar ao sujeito (por exemplo, um paciente humano) um ou mais agentes adicionais (por exemplo, anti-hipertensivos) que forneçam um benefício terapêutico ao sujeito que tem, ou está em risco de desenvolver, aHUS. Em algumas formas de realização, o inibidor de componente do complemento C5 humano e o um ou mais agentes ativos adicionais são administrados ao mesmo tempo. Em outras formas de realização, o inibidor é administrado primeiro e o um ou mais agentes ativos adicionais são administrados em segundo lugar. Em algumas formas de realização, o um ou mais agentes ativos adicionais são administrados primeiro e o inibidor é administrado em segundo lugar.
[00262] O inibidor de componente do complemento C5 humano pode substituir ou aumentar uma terapia prévia ou correntemente administrada. Por exemplo, no tratamento com um anticorpo anti-C5 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, a administração do um ou mais agentes ativos adicionais pode cessar ou diminuir, por exemplo, ser administrado em níveis mais baixos. Em algumas formas de realização, a administração da terapia anterior pode ser mantida. Em algumas formas de realização, uma terapia anterior será mantida até que o nível de inibidor de C5 humano atinja um nível suficiente para fornecer um efeito terapêutico. As duas terapias podem ser administradas em combinação.
[00263] Monitorar um sujeito (por exemplo, um paciente humano) quanto a uma melhora na aHUS, como aqui definido, significa avaliar o sujeito quanto a uma mudança em um parâmetro de doença, por exemplo, uma melhora em um ou mais sintomas da doença. Tais sintomas incluem qualquer um dos sintomas de aHUS aqui descritos. Em algumas formas de realização, a avaliação é realizada pelo menos 1 hora, por exemplo, pelo menos 2, 4, 6, 8, 12, 24, ou 48 horas, ou pelo menos 1 dia, 2 dias, 4 dias, 10 dias, 13 dias, 20 dias ou mais, ou pelo menos 1 semana, 2 semanas, 4 semanas, 10 semanas, 13 semanas, 20 semanas ou mais, depois que o tratamento começa. O sujeito pode ser avaliado em um ou mais dos seguintes períodos: antes do começo do tratamento; durante o tratamento; ou depois que um ou mais elementos do tratamento tenham sido administrados. A avaliação pode incluir avaliar a necessidade quanto a tratamento adicional, por exemplo, avaliar se uma dosagem, frequência de administração, ou duração de tratamento devam ser alterados. A mesma também pode incluir avaliar a necessidade para adicionar ou abandonar uma modalidade terapêutica selecionada, por exemplo, adicionar ou abandonar qualquer um dos tratamentos para aHUS aqui descritos.
[00264] Kits
[00265] Também são fornecidos kits compreendendo vários reagentes e materiais úteis para realizar os métodos aqui descritos. Os procedimentos para medir, diagnosticar, avaliar, e/ou estimar aqui descritos podem ser realizados pelos laboratórios de diagnóstico, laboratórios experimentais, ou médicos individuais. A invenção fornece kits que podem ser usados em qualquer um ou todos destes cenários.
[00266] Em algumas formas de realização, os kits aqui descritos compreendem materiais e reagentes, entre outras coisas, para caracterizar ou processar amostras biológicas (por exemplo, fluídos biológicos), medir níveis de biomarcador (por exemplo, os níveis de proteína ou ácido nucléico), diagnosticar aHUS em um sujeito, ou monitorar resposta de tratamento em um sujeito de acordo com os métodos aqui fornecidos. Em certas formas de realização, um kit inventivo compreende pelo menos um ou mais reagentes que especificamente detectam os níveis de proteína de uma ou mais proteínas biomarcadoras de aHUS (por exemplo, aquelas selecionadas da Tabela 1) e, opcionalmente, instruções para o uso do kit. O kit pode incluir, por exemplo, qualquer um dos arranjos aqui descritos.
[00267] Em algumas formas de realização, os kits podem incluir amostras de controle adequadas (por exemplo, fluídos biológicos de indivíduos saudáveis normais ou uma solução compreendendo uma quantidade conhecida, de controle de um análito particular de interesse). Em algumas formas de realização, kits da invenção podem incluir instruções quanto ao uso do kit de acordo com um ou mais métodos aqui descritos e pode compreender instruções para processar a amostra biológica (por exemplo, um fluído biológico) obtido do sujeito e/ou para a realização do teste ou instruções para interpretar os resultados.
[00268] Os seguintes exemplos são intencionados a ilustrar, não limitar, a invenção.
EXEMPLOS
[00269] Para melhor entender a patologia da aHUS, os inventores coletaram amostras de fluídos biológicos (sangue integral, soro, plasma, e urina) de pacientes tendo aHUS ou suspeito de ter aHUS tanto antes, em vários pontos, quanto depois do início do tratamento com um inibidor do complemento (o anticorpo anti-C5 eculizumab). Um objetivo deste estudo foi definir uma série de parâmetros clinicamente definíveis que seriam usados para monitorar a responsividade de pacientes ao tratamento com o inibidor do complemento assim como marcadores da doença e progressão ou diminuição da mesma. Os inventores identificaram várias proteínas cuja expressão e/ou atividade foi correlacionada com o estado de doença da aHUS e/ou responsividade de um paciente com a aHUS ao tratamento com um inibidor do complemento. As proteínas foram aquelas envolvidas ou associadas com complemento e/ou ativação de células endoteliais, inflamação, lesão renal, e coagulação (ver a Tabela 1).
[00270] Para o estudo, um total de 41 sujeitos adultos (27 mulheres e 12 homens) com um diagnóstico confirmado de aHUS foram recrutados como o foram voluntários adultos saudáveis normais. Todos os pacientes confirmaram aHUS na triagem com base em uma ou mais das seguintes características: contagem de plaqueta menor do que 150 x 109/L; níveis de hemoglobina em menos do que o limite inferior de normal; níveis de LDH que foram maiores do que ou igual a 1,5 vez o limite superior de normal; níveis de creatinina sérica que foram maiores do que ou iguais ao limite superior de normal; e um nível de atividade de ADAMTS13 que foi maior do que 5 %. Todos os pacientes testaram negativo para a toxina Shiga.
[00271] A idade de paciente média na inclusão foi de 40,3 anos de idade. 68 % dos pacientes foram do sexo feminino; 2 (4,8 %) foram negros ou Afro-Americanos; e 1 paciente (2,4 %) foi de descendência asiática. Seis pacientes (14,6 %) relataram uma história familiar de aHUS. Vinte (48,7 %) tiveram pelo menos uma mutação de proteína reguladora do complemento identificada ou testaram positivo para um autoanticorpo que se liga a uma proteína reguladora do complemento. Trinta pacientes (73,2 %) se apresentaram com uma primeira manifestação clínica de aHUS. Seis pacientes (14 %) imediatamente iniciaram eculizumab sem o uso de troca/infusão de plasma (PE/PI). Vinte e quatro pacientes (58,5 %) foram na diálise na linha de base (antes do tratamento com eculizumab). Nove pacientes (22 %) passaram previamente por um transplante renal. Vinte e sete (66 %) tiveram uma contagem de plaqueta que foi menor do que 150x109/L. Trinta e dois (78 %) pacientes tiveram um nível de LDH sérico que foi maior do que o limite superior de normal. Os níveis de haptoglobina (Hp) médios para os pacientes neste grupo foi de 0,6 ± 0,4 g/L; ao passo que os níveis médios de creatinina sérica neste grupo de pacientes foi de 411 ± 264,6 µmol/L (N = 40).
[00272] Os fluídos biológicos foram coletados no alistamento no estudo (antes do tratamento) e depois seguindo o tratamento em cada administração do medicamento. Eculizumab foi administrado aos sujeitos sob o seguinte programa: 900 mg uma vez por semana durante quatro semanas; 1200 mg como a quinta dose; e 1200 mg uma vez a cada duas semanas daí em diante por até 55 semanas como parte de um teste clínico de Fase 2.
[00273] Exemplo 1. Materiais e Métodos
[00274] Amostras de Urina
[00275] A urina recém coletada foi imediatamente misturada com inibidores de protease. As concentrações de vários análitos incluindo NGAL, cistatina C, clusterina, TIMP-1, ß2-microglobulina, C5b9, C5a, e creatinina na urina coletada dos sujeitos foram medidas usando kits comercialmente disponíveis como descrito resumidamente abaixo.
[00276] Os níveis de NGAL foram medidos na urina usando um kit comercialmente disponível (R&D Systems, Minneapolis, MN; número de catálogo: DLCN20). Em resumo, as amostras de urina foram diluídas 1:3 usando diluente calibrador fornecido no kit RD5-24. 50 µL de cada amostra ou controle padrão do kit (Lipocalina-2 humana recombinante expressada em NS0) foram adicionados aos reservatórios de uma placa de ensaio em duplicata, cada reservatório contendo 100 µL de Diluente de Ensaio fornecido com o kit RD1-52. Depois de umas duas horas de incubação a 4 °C no refrigerador, os reservatórios foram lavados quatro vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem. Um conjugado anti-NGAL enzimaticamente rotulado (peroxidase de rábano) foi adicionado a 200 µL por reservatório e incubados por duas horas a 4 °C no refrigerador. Os reservatórios foram lavados quatro vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem e desenvolvidos pela adição de 200 µL por reservatório de Solução de Substrato TMB fornecida com o kit (substrato para a enzima do conjugado anti-NGAL) e incubados na temperatura ambiente no escuro por 30 minutos. TMB é um substrato para a peroxidase de rábano frequentemente usado no ELISA. A reação entre o substrato e peroxidase de rábano (HRP) imobilizado conjugado aos anticorpos nos reservatórios de ELISA produz uma solução de cor azul. Depois de atingir a intensidade de cor desejada, a reação é terminada pela adição da solução de parada (ácida), que muda a cor da solução de azul para amarelo. Assim, as reações foram interrompidas depois da incubação pela adição de 50 µL por reservatório de Solução de Parada fornecida com o kit a cada reservatório e a absorbância lida a 450 nm.
[00277] Os níveis de cistatina C foram medidos com um kit comercialmente disponível (R&D Systems, Minneapolis, MN; número de catálogo: DSCTC0). Em resumo, as amostras de urina foram diluídas 1:3 usando diluente calibrador fornecido no kit RD5-24. 50 µL de cada amostra ou controle padrão do kit (CysC recombinante humano) foram adicionados aos reservatórios de uma placa de ensaio em duplicata, cada reservatório contendo 100 µL de Diluente de Ensaio fornecido com o kit RD1-52. Depois de umas duas horas de incubação a 4 °C no refrigerador, os reservatórios foram lavados quatro vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem. Um conjugado anti-CysC enzimaticamente rotulado foi adicionado a 200 µL por reservatório e incubados por duas horas a 4 °C no refrigerador. Os reservatórios foram lavados quatro vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem e desenvolvidos pela adição de 200 µL por reservatório de Solução de Substrato TMB fornecida com o kit (substrato para a enzima do conjugado anti-CysC) e incubados na temperatura ambiente no escuro por 30 minutos. As reações foram interrompidas depois da incubação pela adição de 50 µL por reservatório de Solução de Parada fornecida com o kit a cada reservatório e a absorbância lida a 450 nm.
[00278] Os níveis de clusterina foram medidos com um kit comercialmente disponível (R&D Systems, Minneapolis, MN; número de catálogo: DCLU00). Em resumo, as amostras de urina foram diluídas 1:3 usando diluente calibrador fornecido no kit RD5T. 50 µL de cada amostra ou controle padrão do kit (clusterina humana recombinante) foram adicionados aos reservatórios de uma placa de ensaio em duplicata, cada reservatório contendo 100 µL de Diluente de Ensaio fornecido com o kit RD1-19. Depois de umas duas horas de incubação na temperatura ambiente no agitador orbital ajustado a 500 rpm, os reservatórios foram lavados quatro vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem. Um conjugado anti-clusterina enzimaticamente rotulado foi adicionado a 200 µL por reservatório e incubados por duas horas na temperatura ambiente no agitador orbital ajustado a 500 rpm. Os reservatórios foram lavados quatro vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem e desenvolvidos pela adição de 200 µL por reservatório de Solução de Substrato TMB e incubados na temperatura ambiente no escuro por 30 minutos. As reações foram interrompidas depois da incubação pela adição de 50 µL por reservatório de Solução de Parada a cada reservatório e a absorbância lida a 450 nm.
[00279] Os níveis de TIMP-1 foram medidos com um kit comercialmente disponível (R&D Systems, Minneapolis, MN; número de catálogo: DTM100). Em resumo, as amostras de urina foram diluídas 1:2 usando o diluente calibrador fornecido com o kit RD5P. 50 µL de cada amostra ou controle padrão do kit (TIMP-1 recombinante humano) foram adicionados aos reservatórios de uma placa de ensaio em duplicata, cada reservatório contendo 100 µL de Diluente de Ensaio RD1X fornecido com o kit. Depois de umas duas horas de incubação na temperatura ambiente no agitador orbital ajustado a 500 rpm, os reservatórios foram lavados três vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem. Um conjugado anti-TIMP- 1 enzimaticamente rotulado foi adicionado a 200 µL por reservatório e incubados por duas horas na temperatura ambiente no agitador orbital ajustado a 500 rpm. Os reservatórios foram lavados quatro vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem e desenvolvidos pela adição de 200 µL por reservatório de Solução de Substrato TMB e incubados na temperatura ambiente no escuro por 30 minutos. As reações foram interrompidas depois da incubação pela adição de 50 µL por reservatório de Solução de Parada a cada reservatório e a absorbância lida a 450 nm.
[00280] Os níveis de ß2M foram medidos com um kit comercialmente disponível (R&D Systems, Minneapolis, MN; número de catálogo: DBM200). Em resumo, as amostras de urina foram diluídas 1:10 usando o Diluente de Amostra fornecido com o kit. 20 µL de cada amostra, os controles do kit ou padrões do kit foram adicionados aos reservatórios em duplicata, contendo 100 µL de uma solução contendo conjugado anti-ß2M enzimaticamente rotulado. Depois de uma incubação de uma hora na temperatura ambiente, os reservatórios foram lavados seis vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem. Os reservatórios foram desenvolvidos pela adição de 100 µL por reservatório de Solução de Substrato TMB e incubados na temperatura ambiente no escuro por 15 minutos. As reações foram interrompidas depois da incubação pela adição de 100 µL por reservatório de Solução de Parada a cada reservatório e a absorbância lida a 450 nm.
[00281] Os níveis de creatinina foram medidos com um kit comercialmente disponível (R&D Systems, Minneapolis, MN; número de catálogo: KGE005). Em resumo, as amostras de urina foram diluídas 1:20 usando água e 50 µL de amostras, controles do kit ou padrões do kit foram adicionados aos reservatórios em duplicata, contendo 100 µL da Solução de Picrato Alcalina fornecida com o kit. Depois de uma incubação de 30 minutos na temperatura ambiente, a absorbância a 490 nm foi medida.
[00282] Os níveis de C5b-9 foram medidos com um kit comercialmente disponível (BD Biosciences, San Jose, CA; número de catálogo: 558315) e um reagente optEIA conjunto B (BD Biosciences, San Jose, CA; número de catálogo: 550534). Em resumo, um anticorpo de captura anti-C5b-9 foi diluída 1:250 no tampão de revestimento, 100 µL do qual foram adicionados a cada reservatório de uma placa maxisorp de 96 reservatórios (Nunc; número de catálogo: 439454) e incubados durante a noite a 4 °C no refrigerador. Os reservatórios foram lavados três vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem e bloqueados pela adição de 200 µL por reservatório de Diluente de Ensaio fornecido com o kit por uma hora na temperatura ambiente. Os reservatórios foram lavados três vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem e 100 µL de amostras de urina ou padrões do kit foram adicionados aos reservatórios em duplicata. Depois de umas duas horas de incubação na temperatura ambiente, os reservatórios foram lavados três vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem. 100 µL da Solução de Anticorpo C5b- 9 de Detector de Trabalho fornecida com o kit foram adicionados a cada reservatório e incubados por uma hora na temperatura ambiente. Os reservatórios foram lavados sete vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem e desenvolvidos pela adição de 100 µL por reservatório de Solução de Substrato TMB e incubados na temperatura ambiente no escuro por 30 minutos. As reações foram interrompidas depois da incubação pela adição de 50 µL por reservatório de Solução de Parada a cada reservatório e a absorbância lida a 450 nm.
[00283] Os níveis de C5a foram medidos com um kit comercialmente disponível (BD Biosciences, San Jose, CA; número de catálogo: 557965). Em resumo, 100 µL de amostras de urina ou padrões do kit foram adicionados aos reservatórios em duplicata contendo 50 µL de Diluente ELISA fornecido com o kit. Depois de umas duas hora de incubação na temperatura ambiente, os reservatórios foram lavados cinco vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem. 100 µL da Solução de Anticorpo C5a de Detector de Trabalho fornecida com o kit foram adicionados a cada reservatório e incubados por uma hora na temperatura ambiente. Os reservatórios foram lavados sete vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem e desenvolvidos pela adição de 100 µL por reservatório de Solução de Substrato TMB e incubados na temperatura ambiente no escuro por 30 minutos. As reações foram interrompidas depois da incubação pela adição de 50 µL por reservatório de Solução de Parada a cada reservatório e a absorbância lida a 450 nm.
[00284] Plasma
[00285] As amostras de plasma foram preparadas como segue. Sangue foi coletado em um tubo BD® P100 de 10 ml (Becton Dickinson) contendo EDTA. O sangue integral foi centrifugado não mais tarde do que 60 minutos depois da coleta em uma centrífuga refrigerada (ajustada para manter de 4 a 8 °C) por 10 minutos a 3000 rpm. O plasma foi depois obtido da amostra seguindo a centrifugação. As amostras hemolisadas foram descartadas.
[00286] A concentração de vários análitos incluindo Ba, fragmento de protombina 1+2, trombomodulina, vWF, sC5b-9, e C5a nas frações plasmáticas de sangue coletado dos sujeitos foi medida usando kits comercialmente disponíveis como descrito em resumo abaixo.
[00287] Os níveis de Ba foram medidos com um kit comercialmente disponível (Quidel, San Diego, CA; número de catálogo: A033). Em resumo, os reservatórios de uma placa de ensaio foram lavados três vezes com solução de lavagem. As amostras de plasma foram diluídas 1:1000 com diluente de espécime fornecido com o kit e 100 µL das amostras de plasma diluídas, controles e padrões do kit foram adicionados aos reservatórios em duplicata. Depois de uma incubação de 60 minutos na temperatura ambiente, os reservatórios foram lavados cinco vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem. 100 µL de um conjugado de anticorpo anti-Ba enzimaticamente rotulado foram adicionados a cada reservatório e incubados por sessenta minutos na temperatura ambiente. Depois de cinco lavagens com solução de lavagem, 100 µL de substrato de TMB foram adicionados a cada reservatório e incubados por quinze minutos na temperatura ambiente protegidos da luz. A reação foi interrompida com a adição de 100 µL por reservatório de Solução de Parada e a absorbância foi lida a 450 nm.
[00288] Os níveis de fragmento de protombina 1+2 em EDTA plasma foram medidos com o kit Enzygnost F1+2 (Siemens Healthcare; número de catálogo: OPBD03). Em resumo, as amostras de plasma foram diluídas 1:2 com tampão de amostra e 50 µL das amostras diluídas, ou padrão (contendo uma concentração conhecida de fragmento de protombina 1+2 humana recombinante) foram adicionados aos reservatórios. Depois de uma incubação de 30 minutos a 37 °C, os reservatórios foram lavados três vezes com 200 µL por reservatório de solução de lavagem. 100 µL de um conjugado de anticorpo anti-fragmento de protombina 1+2 enzimaticamente rotulado foram adicionados a cada reservatório e incubados por 15 minutos a 37 °C. Depois de três lavagens adicionais, 100 µL de substrato chromagen foram adicionados a cada reservatório e incubados 15 minutos na temperatura ambiente protegidos da luz. A reação foi interrompida pela adição de 100 µL de Solução de Parada a cada reservatório e a absorbância lida a 450 nm.
[00289] Os níveis de trombomodulina (TM) em EDTA plasma foram avaliados com o kit TM ELISA (American Diagnostica, Stamford, CT; número de catálogo: 837). Em resumo, as amostras de plasma foram diluídas 1:4 com tampão de amostra e 200 µL de amostras ou padrão diluídos (contendo uma concentração conhecida de TM recombinante) foram adicionados aos reservatórios. Depois de uma incubação de 60 minutos na temperatura ambiente, os reservatórios da placa de ensaio foram lavados quatro vezes com 200 µL/reservat0rio de solução de lavagem. Uma solução de um anticorpo anti-TM enzimaticamente rotulado foi adicionada (200 µL por reservatório) e incubados por 30 minutos na temperatura ambiente. Depois de 4 lavagens, 200 µL de substrato foram adicionados a cada reservatório e os reservatórios foram incubados por 20 minutos na temperatura ambiente protegidos da luz. A reação foi interrompida com 100 µL de H2SO4 0,5 M e a absorbância a 450 nm foi medida.
[00290] Os níveis da atividade do Fator de von Willebrand (vWF) foram determinados em EDTA plasma por um kit de ELISA utilizando anticorpo de captura específico para os sítios de ligação de vWF colágeno (American Diagnostica; número de catálogo: 885). As amostras de plasma e controles do kit foram diluídos 1:20 com diluente de ensaio e 100 µL das amostras e controles diluídos adicionados aos reservatórios em duplicata. Depois de uma incubação de 60 minutos na temperatura ambiente, os reservatórios foram lavados 5 vezes com solução de lavagem e 100 µL de um conjugado anti-vWF enzimaticamente rotulado foram adicionados a cada reservatório. Os reservatórios foram incubados por 15 minutos na temperatura ambiente e lavados 5 vezes com solução de lavagem. 100 µL de substrato de TMB (que, na clivagem pela enzima, gera um sinal detectável) foram adicionados a cada reservatório. Os reservatórios foram incubados por 15 minutos na temperatura ambiente protegidos da luz seguidos pela adição de 100 µL de Solução de Parada fornecida com o kit a cada reservatório. A absorbância foi medida a 450 nm dentro de 30 minutos da adição de Solução de Parada.
[00291] Os níveis circulantes de sC5b-9 foram determinados com um conjunto de C5b-9 ELISA humano (BD Biosciences, San Diego, CA; número de catálogo: 558315) e um reagente BD optEIA conjunto B (BD Biosciences; número de catálogo: 550534). Em resumo, um anticorpo de captura anti-C5b-9 foi diluído 1:250 no tampão de revestimento fornecido com o kit, 100 µL do qual foram adicionados aos reservatórios de uma placa maxisorp de 96 reservatórios (Nunc) e incubados durante a noite a 4 °C. Seguindo três lavagens em solução de lavagem, os reservatórios foram bloqueados com 200 µL de Diluente de Ensaio fornecido com o kit por uma hora na temperatura ambiente. Seguindo 3 lavagens mais com solução de lavagem, 100 µL das amostras de plasma (diluídas 1:100 em diluente de ensaio) ou padrões (contendo uma concentração conhecida de sC5b-9 purificado) foram adicionados e incubados por duas horas na temperatura ambiente. Os reservatórios foram lavados três vezes com solução de lavagem e 100 µL de detector de trabalho (que contém um anticorpo de detecção anti-C5b-9 rotulado com biotina e peroxidase de rábano rotulado com estreptavidina diluídos 1:250 em diluente de ensaio) adicionados a cada reservatório. Seguindo uma incubação de uma hora na temperatura ambiente, os reservatórios foram lavados sete vezes com solução de lavagem e 100 µL de soluções TMB de substrato adicionados a cada reservatório. A reação foi deixada desenvolver por 30 minutos na temperatura ambiente protegidos da luz. Seguindo a adição de 50 µL de Solução de Parada a cada reservatório, a absorbância foi determinada a 450 nm.
[00292] Os níveis circulantes de C5a foram determinados com um ELISA intercalado utilizando o reagente BD optEIA conjunto B (BD Biosciences; número de catálogo: 550534). Todas as incubações foram realizadas na presença de futhan (BD Biosciences; número de catálogo: 550236). Em resumo, um anticorpo de captura anti- C5a foi diluído a 2 µg/ml em tampão de revestimento fornecido com o kit, 100 µL dos quais foram adicionados aos reservatórios de uma placa maxisorp de 96 reservatórios (Nunc) seguido por uma incubação durante a noite a 4 °C. Seguindo três lavagens em solução de lavagem, os reservatórios foram bloqueados com 200 µL de diluente de ensaio por uma hora na temperatura ambiente. Seguindo 3 lavagens mais com solução de lavagem, 50 µL das amostras de plasma (diluídas 1:5 em diluente de ensaio) ou padrões (contendo uma concentração conhecida de C5a) foram adicionados e incubados por uma hora na temperatura ambiente. Os reservatórios foram lavados 4 vezes com solução de lavagem e 100 µL de detector de trabalho adicionados a cada reservatório (que contém um anticorpo de detecção anti-C5a rotulado com biotina e peroxidase de rábano rotulada com estreptavidina diluídos 1:250 em diluente de ensaio). Seguindo uma incubação por uma hora na temperatura ambiente, os reservatórios foram lavados sete vezes com solução de lavagem e 100 µL de soluções de TMB de substrato adicionados a cada reservatório. A reação foi deixada desenvolver por 30 minutos na temperatura ambiente protegida da luz. Seguindo a adição de 50 µL de Solução de Parada a cada reservatório, a absorbância foi medida a 450 nm.
[00293] Soro
[00294] As amostras de soro foram processadas como segue. O sangue foi coletado em um tubo de separação de soro vacutainer (SST) de 10 ml. O tube foi invertido cinco vezes e o sangue deixado coagular na temperatura ambiente durante pelo menos 30 minutos, mas não mais do que duas horas. O tubo foi submetido à centrifugação a 1800 rcf com o freio ligado. As amostras hemolisadas foram descartadas.
[00295] A determinação quantitativa de vários análitos no soro foi realizada usando Kits Flex Set de arranjo de grânulo citométrico humano (CBA) (CBA Flex Set; Becton Dickinson Biosciences, San Diego, CA), e adquiridas pelo citômetro de fluxo (FACS LSR II, Becton Dickinson) de acordo com as instruções do fabricante. Um grânulo de captura Flex set é uma população de grânulo único com intensidade fluorescente distinta e é revestido com um anticorpo de captura específico para uma proteína solúvel. A cada população de grânulo é dada uma designação da posição alfanumérica, indicando a sua posição em relação a outros grânulos no sistema BD CBA Flex Set. Os grânulos com posições diferentes podem ser combinados nos ensaios para criar um ensaio multiplex. em um ensaio Flex Set o grânulo de captura, reagente de detecção conjugado a PE, e as amostras padrão ou de teste são incubados juntos para formar complexos intercalados.
[00296] Em resumo, os padrões para cada análito foram misturados e uma diluição em série foi realizada usando o diluente de ensaio. Os grânulos de captura para cada análito foram preparados e reunidos usando diluente de grânulo de Captura para soro/plasma. As amostras de soro foram diluídas apropriadamente e juntas com os padrões foram incubadas com os grânulos de captura misturados em um volume total de 100 µL durante uma hora na temperatura ambiente. Os reagentes de detecção de ficoeritrina (PE) foram misturados para todos os análitos e foram adicionados aos tubos (50 µL). As amostras foram lavadas com tampão de lavagem depois de uma incubação de duas horas na temperatura ambiente no escuro e foram adquiridas pelo citômetro de fluxo depois da reconstituição do grânulo no tampão de lavagem.
[00297] A seguir os conjuntos de grânulo foram incubados com as amostras de soro diluídas 1:4 em Diluente de Ensaio fornecido com o kit (em que a proteína biomarcadora especificada indica o anticorpo de captura conjugado ao grânulo): IFN- Y (Grânulo E7; número de catálogo: 558283); IL-12 p70 (Grânulo E5; número de catálogo: 558283); IL-1ß (Grânulo B4; número de catálogo: 558279); IL-6 (Grânulo A7; número de catálogo: 558276); IL-8 (Grânulo A9; número de catálogo: 558277); CXCL- 9 (Grânulo E8; número de catálogo: 558286); CXCL-10 (Grânulo B5; número de catálogo: 558280); MCP-1 (Grânulo D8; número de catálogo: 558287); VEGF (Grânulo B8; número de catálogo: 558336); e sCD40L (Grânulo C7; número de catálogo 560305). Os seguintes conjuntos de grânulo foram incubados com amostras de soro diluídas 1:50 em diluente fornecido com o kit: ICAM-1 (Grânulo A4; número de catálogo: 560269); VCAM-1 (Grânulo D6; número de catálogo: 560427); TNFR1 (Grânulo C4; número de catálogo: 560156); E-selectina (Grânulo D9; número de catálogo: 560419); P-selectina (Grânulo D7; número de catálogo: 560426); e CCL5 (Grânulo D4; número de catálogo: 558324).
[00298] Exemplo 2: Resultados
[00299] Marcadores de Ativação do complemento avançada
[00300] Como resumido na Tabela 2 abaixo, em relação à concentração em uma amostra de fluído biológico de voluntários saudáveis, a concentração plasmática de componente do complemento Ba e sC5b9 e a concentração na urina de C5a e sC5b-9 foram elevadas na maioria dos pacientes com a aHUS. Ver também a Fig. 1. Tabela 2. * “N” indica o número total de pacientes avaliados quanto a um dado biomarcador, e “n” indica o número destes “N” pacientes com níveis elevados da proteína biomarcadora.
[00301] Estes resultados indicam que a ativação do complemento do caminho alternativo sistêmico significante está avançada nos pacientes com a aHUS.
[00302] A seguir do tratamento com eculizumab, os níveis médios (concentrações) destes biomarcadores de aHUS foram reduzidos (Figs. 1A-C). Os níveis médios de C5a e sC5b-9 urinárias são reduzidos significantemente entre 1 e 2,5 semanas a seguir do início do tratamento e assim permaneceram. A redução percentual média nos níveis urinários de C5a foi maior do que 40 % na semana 3 após o tratamento e acima de 70 % em 6 semanas (Fig. 1D). Os níveis urinários de sC5b- 9 foram reduzidos em mais de 60 % em 3 semanas (Fig. 1E). Estes marcadores eventualmente normalizaram. Os níveis plasmáticos de Ba também foram significantemente reduzidos (p = 0,0053) em torno de quatro a seis semanas seguindo o tratamento com eculizumab, sugerindo que com o tempo eculizumab reduz o início ou amplificação do caminho do complemento clássico (Fig. 1C). Entretanto, a redução percentual média nos níveis de Ba plasmáticos foi em torno de 10 % na semana 6 e acima de 30 % em 12 semanas (Fig. 1F).
[00303] A porcentagem de pacientes com a aHUS tratados que experienciam níveis de proteína biomarcadora do complemento normalizada com o tempo é mostrada nas Figs. 2A-C. Por exemplo, como mostrado na Fig. 2B, 50 % dos pacientes tratados com a aHUS exibem níveis normalizados de sC5b-9 urinária em 2,5 semanas após o início de tratamento com eculizumab. Em 17 semanas após o início do tratamento, 79 % dos pacientes tratados com a aHUS exibiram níveis de sC5b-9 normalizados. Entretanto, os níveis de Ba não normalizam na maioria dos pacientes (Figs. 1C e 2C). Estes dados indicam que mesmo com a terapia com eculizumab pode haver, em alguns pacientes, ativação do complemento de baixo nível avançada.
[00304] Marcadores de Plaqueta e Ativação Hemostática
[00305] Como resumido na Tabela 3 abaixo, em relação à concentração em uma amostra de fluído biológico de voluntários saudáveis, a concentração sérica de sCD40L e os níveis plasmáticos de fragmento de protombina 1+2 e dímero D foram significantemente elevados na maioria dos pacientes com a aHUS. Ver também as Figs. 3A-B. Tabela 3. * “N” indica o número total de pacientes avaliados quanto a um dado biomarcador, e “n” indica o número destes “N” pacientes com níveis elevados da proteína biomarcadora.
[00306] A liberação de sCD40L está geralmente associada com o metabolismo e atividade de plaqueta. Fragmentos de protombina F1+2 são gerados durante a conversão de protrombina para trombina, ao passo que o dímero D é um produto da degradação de fibrina que indica fibrinólise.
[00307] A seguir do tratamento com eculizumab, os níveis médios (concentrações) destes biomarcadores de aHUS foram reduzidos. Os níveis médios dos níveis plasmáticos de F1+2 e dímero D são reduzidos significantemente entre 1 e 2,5 semanas (p = 0,0078 e 0,0083, respectivamente) a seguir do início do tratamento e assim permaneceram. Como mostrado na Fig. 3C, a redução percentual média em F1+2 foi em torno de 15 % em 3 semanas e acima de 50 % em 12 semanas. A redução percentual média nos níveis de dímero d foi em torno de 40 % na semana 6, porém maior do que 60 % em 12 semanas. Estes dados indicam que a terapia com eculizumab tem um efeito imediato sobre os caminhos da coagulação e fibrinólise. Como mostrado nas Figs. 4A-B, 32 % dos pacientes tratados com a aHUS exibem a normalização de níveis F1+2 na semana 26 após o início do tratamento e 46 % dos pacientes têm níveis normalizados de dímero D. Ao contrário, os níveis de sCD40L permaneceram elevados por todo o estudo.
[00308] Marcadores de Dano e/ou Ativação de Célula Endotelial
[00309] Como resumido na Tabela 4 abaixo, em relação à concentração na amostra de fluído biológico de voluntários saudáveis, a concentração plasmática de trombomodulina e vWF e a concentração sérica de VCAM-1 foram significantemente elevadas nos pacientes com a aHUS. Ver também as Figs. 5A-C. Tabela 4. “N” indica o número total de pacientes avaliados quanto a um dado biomarcador, e “n” indica o número destes “N” pacientes com níveis elevados da proteína biomarcadora. n.s. indica não significante.
[00310] A alta concentração de trombomodulina e VCAM-1 nos fluídos biológicos de pacientes com a aHUS indica ativação significante de células endoteliais. A trombomodulina é liberada em resposta ao C3a, que enfatiza ainda mais a ativação do complemento avançada em pacientes com a aHUS. A concentração de vWF também é significantemente elevada. O vWF tem vários papéis fisiológicos incluindo a adesão e coagulação de plaqueta e também é um marcador do dano e ativação endoteliais.
[00311] A seguir do tratamento com eculizumab, os níveis médios (concentrações) destes biomarcadores de aHUS foram reduzidos (Figs. 5A-C). Os níveis médios de trombomodulina e VCAM-1 foram reduzidos significantemente a partir da linha de base na semana 17 (p = 0,0007 e <0,0001, respectivamente) a seguir do início do tratamento (ver as Figs. 6C e 6D). Na semana 26, os níveis de VCAM-1 e vWF também foram reduzidos. Entretanto, embora o vWF normalizasse em ~70 % dos pacientes com a aHUS tratados na semana 17 após o início do tratamento (Fig. 6B), os níveis de trombomodulina e VCAM-1 permaneceram elevados. Interessantemente, dos 10 % de pacientes que normalizaram os níveis de trombomodulina (Fig. 6A), apenas um paciente teve os níveis tanto de trombomodulina quanto de vWF normalizados. Estes dados indicam que a terapia com eculizumab tem um efeito positivo rápido e robusto para corrigir o dano e a ativação de célula endotelial.
[00312] Marcadores de Inflamação
[00313] A Tabela 5 (abaixo) apresenta uma série de análitos detectados no plasma e/ou soro e indica a porcentagem de pacientes com a aHUS em que os respectivos análitos foram elevados antes do tratamento com a terapia de inibidor do complemento. Tabela 5. “N” indica o número total de pacientes avaliados quanto a um dado biomarcador, e “n” indica o número destes “N” pacientes com níveis elevados da proteína biomarcadora. 1 * As concentrações dos dois análitos marcados como “Séricos” foram medidos no soro. As concentrações de todos os outros análitos na Tabela foram medidas no plasma. n.s. indica não significante.
[00314] Antes da terapia com eculizumab, pacientes com a aHUS tiveram níveis elevados de citocinas e quimiocinas inflamatórias circulantes incluindo, por exemplo, CXCL-10, CXCL-9, IL-18, TNFR1, MCP-1, VEGF, IL-6, e IL-8. A seguir do início do tratamento, entretanto, TNFR1 foi o primeiro marcador inflamatório a ser significantemente reduzido (em 6 semanas, p = 0,0012) (Fig. 7A). A concentração média de TNFR1 permaneceu significantemente mais baixo do que a linha de base em todas as visitas subsequentes (P<0,0001), mas apenas normalizou em 6 % de pacientes com a aHUS (Fig. 7B). Similarmente, os níveis médios de CXCL10 foram significantemente reduzidos na semana 26 (p = 0,0055), mas não normalizou em todos os pacientes com a aHUS (31 % dos pacientes não normalizaram). Na semana 26, os níveis médios de IFN-Y normalizaram em aproximadamente 50 % dos pacientes; entretanto, os níveis médios de IL-8 sérico (p = 0,01), CXCL-9 (p = 0,01), IL-18 (p<0,0001) e VEGF (p<0,0001) permaneceram elevados na maioria dos pacientes com a aHUS, quando comparada com os controles normais, e não significantemente diferentes da linha de base. A IL-6 sérica foi significantemente reduzida (p = 0,04) da linha de base na semana 26 e permaneceu elevada na semana 26 quando comparada ao controle normal.
[00315] Ao contrário, os níveis médios de CCL-5 foram significantemente elevados na semana 17 após o início do tratamento e daí em diante (p = 0,0072 e 0,0021 nas semanas 12 a 17 e semana 26, respectivamente). Na resposta à lesão vascular em camundongos, CCL5 é supra-regulada, que promove a infiltração de célula T seletiva como parte de uma resposta à cicatrização de ferimento vascular. Ver, por exemplo, Rookmaaker et al. (2007) Am J Physiol Renal Physiol293(2): F624- 630. Estes dados indicam que a terapia com eculizumab tem um efeito positivo rápido e robusto sobre a inflamação em muitos pacientes com a aHUS, mas que a inflamação em baixo nível pode existir nestes pacientes mesmo durante o tratamento.
[00316] Marcadores de Lesão Renal Tubular e Glomerular
[00317] A Tabela 6A (abaixo) apresenta uma série de análitos detectados na urina coletada de pacientes e indica a porcentagem de pacientes com a aHUS em que os respectivos análitos foram elevados antes do tratamento com a terapia de inibidor do complemento. Tabela 6A. “N” indica o número total de pacientes avaliados quanto a um dado biomarcador, e “n” indica o número destes “N” pacientes com níveis elevados da proteína biomarcadora. n.s. indica não significante.
[00318] Antes do tratamento com eculizumab, as moléculas de baixo peso molecular que são normalmente filtradas pelos rins foram elevadas na urina de pacientes com a aHUS incluindo ß2M, clusterina, cistatina C, e NAG. As moléculas produzidas pelas células epiteliais tubulares renais em resposta à lesão também foram elevadas, tais como TIMP-1, NGAL e L-FABP. Entretanto, seguindo o tratamento com eculizumab, CysC (p = 0,0012) (Fig. 8A), clusterina (p = 0,0446), e TIMP-1 (p = 0,0353) são significantemente reduzidos em 1 a 2,5 semanas após o início do tratamento e elas permaneceram significantemente reduzidas por todo o curso do estudo. NGAL (p = 0,0003) (Fig. 8C), L-FABP (p = 0,0366), e NAG (p = 0,0369) foram significantemente reduzidos a partir da linha de base em 4 a 6 semanas após o início do tratamento e assim permaneceu assim daí em diante. ß2M foi significantemente reduzida em 12 a 17 semanas (p = 0,0008) e daí em diante (Fig. 8B). Na semana 26, os níveis urinários médios de todos os análitos normalizaram nos pacientes tratados com a aHUS.
[00319] Estes dados indicam que a terapia com eculizumab tem um efeito positivo rápido, robusto, e durável reparando a lesão tubular e glomerular renal experienciada por muitos pacientes com a aHUS.
[00320] Sumário
[00321] A seguinte Tabela fornece um sumário de biomarcadores de aHUS exemplares (embora não uma lista exaustiva), que são elevados em pacientes com a aHUS antes do tratamento com eculizumab, mas são significantemente reduzidos a seguir do tratamento com eculizumab. Também é fornecido na Tabela (Tabela 6B) o tempo médio após o início do tratamento com eculizumab no qual redução significante do biomarcador de aHUS ocorreu. Tabela 6B.
[00322] Níveis de Marcador de aHUS na Linha de Base em Pacientes com aHUS Que Recebem Diálise e/ou Que Recebem Transplante Renal
[00323] Também foram avaliados a concentração de marcadores do complemento, inflamação, e lesão renal no plasma e urina em pacientes com a aHUS que receberam diálise antes da terapia com eculizumab. Como mostrado na Tabela 7 (abaixo), a concentração média de TNFR1 sérico, Ba plasmático, C5b9, fragmentos de protombina 1+2, ß2M, clusterina, sC5b9, TIMP-1, NGAL, CysC, e C5a foi significantemente elevada em pacientes com a aHUS que passaram pela diálise repetida (por exemplo, duas ou mais vezes dentro de 6 meses antes do tratamento) quando comparada aos pacientes com a aHUS que não passaram pela diálise repetida antes do alistamento no estudo (antes do tratamento). Ver também as Figs. 9A-E. Tabela 7. ** A concentração do análito marcado “sérico” foi medida no soro. A concentração de análitos designados com “urinário” foi medida na urina, ao passo que a concentração de análitos rotulados com “plasmático” foi medida no plasma obtido dos pacientes.
[00324] Além disso, pacientes com a aHUS que receberam um transplante renal antes do tratamento com eculizumab tiveram C5b-9 urinário e FABP-1 urinário mais baixo na linha de base quando comparados aos pacientes que não receberam um transplante renal.
[00325] Níveis de Marcador de aHUS na Linha de Base em comparação com Marcadores de TMA
[00326] Os níveis de alguns biomarcadores associados com a aHUS em alguns pacientes com a aHUS correlacionaram-se com marcadores da microangiopatia trombótica (TMA) anormais tais como contagens de plaqueta reduzidas, LDH elevado, e níveis aumentados de haptoglobina. Por exemplo, pacientes com a aHUS com contagens de plaqueta reduzidas na linha de base (<150.000 por µL de sangue), exibiram níveis elevados de cistatina C urinária (P = 0,0276) e clusterina urinária (P = 0,0401). Ver as Figs. 14A-B. pacientes com a aHUS tendo níveis de LDH elevados exibiram níveis aumentados de VCAM-1 (P = 0,0226) (Fig. 14C), dímero d (P = 0,0369) (Fig. 14D), IL-18, trombomodulina, e TNFR1 (ver abaixo). Os níveis de haptoglobina elevados foram frequentemente presentes em pacientes com a aHUS tendo níveis de IL-18 elevados.
[00327] Níveis de Marcador de aHUS de Linha de Base em Pacientes aHUS Que Recebem Terapia Plasmática
[00328] Os pacientes com a aHUS com terapia plasmática repetida antes do tratamento com eculizumab exibiram níveis médios mais altos de cistatina C urinária na linha de base (ver a Fig. 15).
[00329] Correlações entre Níveis de Biomarcador e Parâmetros Clínicos
[00330] Plaquetas
[00331] Um nível elevado de CCL5 foi positivamente correlacionado com contagens de plaqueta mais altas na linha de base (p = <0,0001; cc (coeficiente de correlação) = 0,8106). Um nível elevado de sCD40L também foi correlacionado com as contagens de plaqueta mais altas na linha de base (p = <0,001; cc = 0,6313).
[00332] Além disso, pacientes com níveis de Ba normalizados a seguir do tratamento com eculizumab mostram aumentos de plaqueta significantemente mais altos do que os pacientes cujos níveis de Ba permanecem elevados a seguir do tratamento. Ver a Fig. 13.
[00333] Taxa de Filtração Glomerular Estimada (eGFR), LDH, e Complemento Urinário
[00334] Uma correlação também foi observada entre os níveis elevados de Ba plasmáticos e eGFR reduzida (p<0,0001; cc = -0,7219). Uma concentração elevada de TNFR1 no soro de pacientes com a aHUS antes do tratamento foi correlacionada com os níveis de lactato desidrogenase (LDH) (p = 0,027; cc = 0,3586), mas mais significantemente correlacionada com eGFR mais baixa (p<0,0001; cc = - 0,6134). Além disso, níveis mais altos de componentes do complemento urinários C5a e sC5b-9 e marcadores de lesão renal (ß2M, clusterina, cistatina C, NGAL, e TIMP-1) foram moderadamente correlacionados com eGFR mais baixo (p = 0,0002 a 0,0242; cc = -0,4286 a -0,6714).
[00335] Os níveis elevados de sC5b-9, clusterina, e TIMP-1 urinários foram modestamente correlacionados com a proteinuria (p = 0,0086 a 0,0284; cc = 0,40 a 0,4788), ao passo que os níveis elevados de Ba (p = 0,0017; cc = 0,517), ß2M, clusterina plasmáticos, sC5b-9, e cistatina C urinários foram correlacionados com a creatinina aumentada na urina de pacientes antes do tratamento com eculizumab (p = 0,0440-0,0018; cc = 0,3982-0,6457).
[00336] Primeira Apresentação Clínica de aHUS
[00337] Também foi observada uma correlação entre pacientes que experienciam a sua primeira manifestação de aHUS e níveis plasmáticos de dímero D significantemente elevados ou FABP-1 urinário na linha de base (antes do tratamento com eculizumab) (ver a Tabela 8). Tabela 8.
[00338] Doença Latente
[00339] Seis dos pacientes com a aHUS envolvidos no estudo se apresentaram no alistamento com parâmetros hematológicos normalizados (incluindo níveis de haptoglobina, LDH, e plaqueta). Entretanto, estes pacientes mostraram ainda evidência de inflamação crônica e ativação do complemento a despeito de um quadro clínico estável. Os pacientes tiveram níveis significantemente elevados de TNFR1 sérico (como mostrado na Fig. 10A) assim como níveis significantemente elevados de trombomodulina, Ba (Fig. 10B), fragmentos de protombina 1+2 (Fig. 10E), VCAM-1 (Fig. 10C), e dímero d (Fig. 10D). Similarmente, pacientes com níveis plaquetários normais (>150 x 109plaquetas/µL) na linha de base mostram ainda níveis elevados da maioria dos biomarcadores (por exemplo, Ba (Fig. 10F), VCAM-1 (Fig. 10G), dímero D (Fig. 10H), e F1+2 (Fig. 10I). Quando juntas, estas descobertas indicam que, mesmo para o subconjunto de pacientes com a aHUS julgados estar em remissão clínica a seguir do tratamento, existem provavelmente níveis baixos avançados de atividade do complemento, coagulopatia, e inflamação.
[00340] Correlações entre Níveis de Biomarcador e Resultados Clínicos
[00341] Respostas Hematológicas
[00342] Pacientes com respostas hematológicas completas mostram reduções mais dramáticas nos níveis de TNFR1, clusterina urinária, e complemento urinário (C5a e C5b-9) (Fig. 11). Por exemplo, 86 % dos pacientes exibindo uma concentração reduzida destas proteínas biomarcadoras de aHUS atingiram uma resposta hematológica completa (normalização de plaquetas e LDH) nas semanas 1217 após o início do tratamento com eculizumab. Além disso, estes pacientes mostraram uma redução percentual média maior no TNFR1 sérico, clusterina urinária, C5a urinário, e C5b-9 urinário do que os pacientes que não atingiram uma resposta hematológica completa.
[00343] Também foi observado que a rapidez de redução no TNFR1 (por exemplo, em 12 semanas quando comparado com 17 semanas ou além) foi correlacionada com resposta hematológica completa (p = 0,0008). A taxa de normalização de dímero D foi significantemente associada com uma resposta hematológica completa (p = 0,0109; cc = 6,26).
[00344] Além disso, os dados mostram que um aumento significantemente maior nas contagens de plaqueta nas semanas 12-17 (p = 0,0022) e semana 26 (p = 0,0110) foi obtido nos pacientes com a aHUS tratados com eculizumab tendo (nas semanas 12 a 17 e semana 26, respectivamente) concentrações de Ba plasmáticas normalizadas. A melhora nas plaquetas também foi correlacionada com uma redução significante nos níveis médios de F1+2 nas semanas 4-6 (P = 0,0148; cc = -0,4087) e semanas 12-17 (P = 0,0073; cc = -0,4396) e mais modestamente com uma redução nos níveis de dímero d na semana 12-17 (P = 0,0470; cc = -0,3381). Não obstante, um subconjunto de pacientes, a despeito de demonstrar um aumento maior na contagem de plaquetas nas semanas quatro até 26, continuaram a exibir níveis significantemente elevados de fragmentos de protombina 1+2, trombomodulina, ß2M urinária, clusterina, TIMP-1, e cistatina C, sugerindo atividade de doença subjacente avançada.
[00345] A análise dos dados coletados do estudo também revelou uma correlação entre a mudança em outra concentração de proteína biomarcadora e recuperação de plaqueta. Por exemplo, a concentração de CCL5, MCP-1, e sCD40L foram positivamente correlacionadas com as contagens de plaqueta aumentadas em pacientes tratados com eculizumab como mostrado na Tabela 9 abaixo. Tabela 9.
[00346] Trombomicroangiopatia (TMA)
[00347] Pacientes com a aHUS tratados com eculizumab tendo uma redução maior nos níveis de Ba plasmáticos mais frequentemente alcançam uma resposta TMA completa (por exemplo, a normalização de parâmetros hematológicos (por exemplo, contagem de plaqueta e níveis de LDH) e preservação da função renal). Por exemplo, 72,7 % dos pacientes atingiram uma resposta de TMA completa em 12-17 semanas, e 85,29 % dos pacientes alcançaram uma resposta TMA completa em 26 semanas. Como mostrado na Fig. 12, estes pacientes mostraram uma redução percentual média maior na concentração plasmática de Ba do que os pacientes que não atingiram uma resposta de TMA completa (p = 0,0018 e p = 0,006, respectivamente).
[00348] eGFR após o tratamento
[00349] Também foi observada uma relação entre a redução e/ou normalização de certos biomarcadores e uma melhora no eGFR. Por exemplo, uma melhora significantemente maior (Tabela 10) no eGFR (por exemplo, eGFR > 15 ml/min/1,73 m2 prolongado durante pelo menos duas medições consecutivas obtidas pelo menos quatro semanas separadamente) foi observada entre os pacientes com MCP-1, IL-6, e IFN-Y normalizados (em 4-6 semanas); VCAM-1, CXCL10, CXCL9, e Ba normalizados (em 12-17 semanas), e Ba, ß2M urinário, CysC urinário, vWF, dímero D, clusterina, CXCL10, CXCL9, FABP-1 urinário, e outros normalizados (em 26 semanas) (Tabela 10). Ver também a Fig. 16. Tabela 10
[00350] Exemplo 3. Níveis de Linha de Base de Proteínas Biomarcadoras de aHUS Selecionadas em Pacientes com a aHUS
[00351] Na linha de base, antes do tratamento com eculizumab, evidência substancial de ativação do complemento, inflamação/dano vascular, e lesão de órgão significantes foi observada nos pacientes com a aHUS independente do uso de troca de plasma/infusão de plasma ou valores de laboratório normais para a contagem de plaqueta, Hp ou LDH. Como evidenciado pelos dados apresentados na Tabela 11, as concentrações de biomarcadores aHUS de atividade do complemento, inflamação vascular, ativação e dano endoteliais, coagulação, e lesão renal foram significantemente elevados nos pacientes com a aHUS comparadas aos sujeitos saudáveis. Tabela 11. NHV significa valor ou concentração humanos normais para uma dada proteína biomarcadora de aHUS citada na Tabela. “creat” significa creatinina, a concentração da qual é usada para normalizar certas concentrações de biomarcador citado na tabela. CAP se refere ao caminho alternativo do complemento (ver acima). “BL” se refere à “linha de base”, isto é, antes do tratamento com eculizumab. “N” é o número total de pacientes analisados para um dado processo e biomarcador de doença. “n” é o número de “N” pacientes em que um dado biomarcador foi elevado. “U” indica que o análito foi medido na urina. * Os Valores P foram calculados usando um teste da Soma de Postos de Wilcoxon, testando quanto a uma diferença entre os grupos.
[00352] Além disso, os inventores observaram que não houve nenhuma significância estatística entre os níveis elevados da linha de base de certos biomarcadores de aHUS observados em pacientes que receberam ou estavam recebendo terapia de troca de plasma (PE) ou infusão de plasma (PI) quando comparados ao nível de elevação dos biomarcadores de aHUS em pacientes que não receberam a terapia de PE ou PI. Por exemplo, a concentração de Ba, sTNFR1, sVCAM-1, e dímero D não foi reduzida ou normalizada em pacientes que receberam terapia de PE/PI (Figs. 17A-D). Observe que apenas 3 de 26 pacientes analisados nos dados apresentados nas Figs. 17A-D não receberam PE/PI. A maioria dos pacientes (n = 23) tiveram níveis elevados de Cistatina C, quando comparados aos voluntários saudáveis normais. A cistatina C sendo um marcador da lesão renal (lesão glomerular), é possível que os pacientes que não receberam PE/PI tivessem menos dano nos seus rins e assim tiveram níveis reduzidos de proteínas biomarcadoras relacionadas com a lesão renal na sua urina.
[00353] Similarmente, na linha de base, antes da terapia com eculizumab, a concentração dos marcadores de proteína da ativação do complemento (por exemplo, Ba), inflamação (por exemplo, sTNFR1), ativação de células endoteliais (sVCAM-1), coagulação (dímero D), e lesão renal (cistatina C) foi elevada nos pacientes com a aHUS tendo contagens de plaqueta normais. Ver as Figs. 18A-E. E os pacientes com níveis de Hp e LDH normais mostraram evidência de ativação do complemento, inflamação, ativação de células endoteliais, coagulação e lesão renal avançadas (ver Figs. 19A-E).
[00354] Em vista do precedente, a concentração de biomarcadores que reflete a atividade do complemento, inflamação vascular, ativação e dano endoteliais, coagulação e lesão renal foi cronicamente elevada nos pacientes com a aHUS comparados aos sujeitos saudáveis normais. Pacientes com a aHUS que recebem PE/PI mostraram forte evidência de ativação do complemento, inflamação vascular, ativação endotelial, coagulação e lesão renal avançadas significantes. Embora PE/PI possam transitoriamente manter a contagem de plaqueta e LDH normais em alguns pacientes, os resultados acima demonstram que a desregulagem do complemento e os processos de TMA subjacentes persistem. A despeito dos valores de laboratório normais para a contagem de plaqueta, LDH, e Hp, estes estudos indicam que ativação do complemento, inflamação vascular, ativação endotelial, coagulação e lesão renal avançadas significantes existem nos pacientes com a aHUS.
[00355] Exemplo 4. Efeitos de Tratamento Prolongado com Eculizumab sobre as Concentrações de Biomarcador de aHUS
[00356] Os inventores observaram que o tratamento com eculizumab prolongado inibe a ativação do complemento e lesão renal mediada por complemento de terminal crônicas elevadas, e reduz a inflamação, dano endotelial e risco trombótico em pacientes com a aHUS. Por exemplo, o tratamento com eculizumab prolongado rápida e completamente inibiu a ativação do complemento terminal como indicado pela redução na concentração tanto de C5a quanto de sC5b-9 (por exemplo, C5a e sC5b-9 urinários). Ver as Figs. 20A-B. Na linha de base, pacientes com a aHUS mostraram ativação do complemento terminal significante comparados com NHV, a despeito do uso de PE/PI ou contagens de plaqueta normais em alguns pacientes. De fato, pacientes com a aHUS demonstraram níveis de C5a urinário 45 vezes mais alto e sC5b-9 urinário 305 vezes mais alto do que em NHV. Entretanto, durante o tratamento com eculizumab prolongado, todos os pacientes com a aHUS demonstraram bloqueio do complemento de terminal rápido e potente, com normalização completa dos produtos patogênicos da ativação do complemento terminal e nenhuma diferença nos níveis em relação a NHV.
[00357] Além disso, o tratamento com eculizumab prolongado normalizou a concentração de proteínas biomarcadoras da lesão renal (Figs. 21A-C). Antes de iniciar a terapia com eculizumab, a maioria dos pacientes tiveram níveis elevados de biomarcadores de: lesão intersticial tubular e deterioração da função renal (por exemplo, L-FABP-1, ~48 vezes mais alta do que em NHV), filtração glomerular (por exemplo, cistatina C, ~24 vezes mais alta do que em NHV), lesão tubular proximal (por exemplo, clusterina, 8,6 vezes mais alta do que em NHV). Entretanto, o tratamento prolongado com eculizumab dramaticamente reduziu as concentrações urinárias de FABP-1 (em até 100 %), cistatina C (em até 99 %), e clusterina (em até 98 %). Esta redução foi significante através de todos os pontos de tempo (P<0,0001 para todos) e a concentração reduzida de todos os marcadores de lesão renal não foi diferente do que os níveis em NHV. Os marcadores da lesão renal adicionais (por exemplo, TIMP-1 e ß2-microglobulina) também normalizaram (ver acima no Exemplo 2). Estes resultados sugerem que a isquemia e o dano de órgão podem ser totalmente dependentes do complemento de terminal e confirma os dados clínicos que demonstram que a inibição prolongada de TMA mediada por complemento levou à melhora de eGFR clinicamente significativa e à descontinuação da diálise.
[00358] O tratamento prolongado com eculizumab também reduz significantemente a ativação do caminho alternativo do complemento (ver a Fig. 22). Todos os pacientes com a aHUS mostraram ativação de CAP sistêmico significante a montante de C5, com níveis 5,5 vezes mais altos de Ba comparados com NHV, antes do tratamento com eculizumab. Entretanto, a seguir do início da terapia com eculizumab, a concentração de biomarcadores a montante da ativação de CAP (por exemplo, níveis de Ba) foi reduzida em 30 % e a redução depois de 4-6 semanas foi significante através de todos os pontos de tempo (p<0,005) quando comparada com a concentração dos marcadores em NHV. Embora os níveis de Ba não normalizassem nos pacientes com a aHUS tratados com eculizumab, sugerindo que a ativação de CAP persiste, refletindo a desregulagem do complemento subjacente nos pacientes com a aHUS. Para ser claro, de qualquer forma, o bloqueio do complemento terminal com eculizumab protegeu os pacientes das consequências clínicas da ativação de CAP avançada.
[00359] Além disso, o tratamento crônico de pacientes com a aHUS com eculizumab resultou em concentrações significantemente reduzidas de biomarcadores associados com a inflamação, ativação endotelial, e dano de tecido (Figs. 23A-C). Os níveis de sTNFR1 sérico foram elevados (18,7 vezes mais alto do que os níveis de NHV) em 100 % dos pacientes com a aHUS na linha de base. O tratamento prolongado com eculizumab significantemente reduziu sTNFR1 até 94 %. A redução na concentração destes biomarcadores em 4-6 semanas foi significante através de todos os pontos de tempo (P<0,0001). Os níveis de VCAM-1 solúvel e TM foram elevados em >95 % dos pacientes com a aHUS na linha de base em 2 vezes e 3,6 vezes, respectivamente, quando comparados aos NHV, demonstrando ativação e dano de células endoteliais significantes antes da terapia com eculizumab. As concentrações de TM e sVCAM-1 também foram significantemente reduzidas durante o tratamento com eculizumab. Depois de 12-17 semanas, a redução na concentração de biomarcadores de dano endotelial foi significante através de todos os pontos de tempo posteriores (TM; P<0,0001), mas ainda modestamente elevada comparada aos NHV. Os níveis de TM solúvel dramaticamente reduzidos pode refletir na restauração da TM ligada à membrana, que é protetiva contra o risco trombótico.
[00360] Finalmente, o tratamento crônico com eculizumab rápida e significantemente reduziu a concentração de biomarcadores associados com o risco trombótico e a coagulação (Figs. 24A-B). A concentração de biomarcadores de coagulação F1+2 e dímero D foi significantemente elevada (5,5 vezes e 9,8 vezes mais alta do que os NHV) na linha de base em mais do que 94 % dos pacientes com a aHUS (P<0,0001 e P = 0,0002, respectivamente). Embora F1+2 e dímero D fossem significantemente reduzidos em 2,5 semanas após o início de tratamento com eculizumab. A concentração de F1+2 diminuiu em até 88 % (P<0,05 para todos os pontos de tempo) e a concentração de dímero d foi reduzida em até 99 % (P<0,0001 para todos os pontos de tempo) com tratamento com prolongado. Entretanto, estes dois marcadores permaneceram modestamente elevados nas respectivas concentrações em sujeitos saudáveis normais.
[00361] Conclusões
[00362] Em vista dos dados precedentes, os inventores foram capazes de tirar várias conclusões. Primeira, na linha de base, níveis elevados de todos os biomarcadores da microangiopatia trombótica (TMA) foram evidentes nos pacientes com a aHUS quando comparados aos níveis nas amostras de voluntários saudáveis normais (NHV). Em todos os grupos de paciente - incluindo aqueles que recebem PE/PI ou aqueles com plaquetas, Hp ou LDH normais - pacientes com a aHUS demonstraram elevação significante, em relação aos NHVs, nas medições de: ativação do complemento terminal (45 a 305 vezes mais alta do que os níveis de NHV); dano a órgão vital; caminho alternativo da ativação do complemento (por exemplo, como representado pelos níveis de Ba; 5,5 vezes mais alta do que os níveis dos NHVs); inflamação vascular; ativação e dano endoteliais; e coagulação.
[00363] O tratamento com eculizumab prolongado de pacientes com a aHUS significantemente reduziu e normalizou marcadores altamente elevados de ativação do complemento terminal. A inibição da ativação do complemento terminal com eculizumab também dramaticamente reduziu e normalizou os marcadores de dano de órgão. Os biomarcadores a montante da ativação de caminho alternativo também foram significantemente reduzidos, mas não normalizaram. E os níveis baixos de ativação de caminho alternativo persistiram nos pacientes tratados, refletindo a desregulagem do complemento subjacente nos pacientes com a aHUS. Dito isto, os dados claramente indicam que o bloqueio do complemento terminal com eculizumab protege os pacientes com a aHUS das consequências clínicas da ativação avançada do caminho alternativo.
[00364] Além disso, o tratamento com eculizumab prolongado também resultou em: (i) redução significante e prolongada de marcadores de inflamação vascular (em até 94 %); (ii) inibição significante de marcadores de ativação endotelial (em até 60 %); (iii) redução significante e prolongada nos marcadores de dano endotelial (em até 77 %) até próximo aos níveis normais, demonstrando uma clara relação entre a ativação do complemento terminal e o dano endotelial; e (iv) redução acentuada (em até 99 %) da concentração de biomarcadores de risco trombótico, provavelmente diminuindo o potencial para a formação de coágulo e reduzindo assim a incidência de TMA nestes pacientes. Os inventores concluem, embora não estando ligados por qualquer teoria ou mecanismo de ação, que a inibição da ativação do complemento terminal com eculizumab deve ser prolongada, visto que a perda da inibição do complemento de terminal na aHUS levaria a um aumento rápido na ativação do complemento terminal severamente amplificada, subsequentemente levando a: aumento na ativação endotelial subclínica subjacente, aceleração significante de dano endotelial, aumento acentuado no risco trombótico, e um risco inicial e avançado de isquemia vascular e dano a órgão vital catastróficos. Além disso, estes dados indicam que a lesão renal, inflamação vascular, e dano e ativação endoteliais são no todo ou em parte dependentes da atividade do complemento de terminal, atividade esta que é eficaz e seguramente inibida usando eculizumab.
[00365] Embora a presente divulgação tenha sido descrita com referência às suas formas de realização específicas, deve ser entendido por aqueles habilitados na técnica que várias mudanças podem ser feitas e equivalentes podem ser substituídos sem divergir do verdadeiro espírito e escopo da divulgação. Além disso, muitas modificações podem ser feitas para adaptar uma situação, material, composição de matéria, processo, ou etapa ou etapas de processo particulares, ao objetivo, espírito e escopo da presente divulgação. Todas de tais modificações são intencionadas a estar dentro do escopo da divulgação.

Claims (16)

1. Método para monitorar a responsividade de um indivíduo ao tratamento com um inibidor do complemento, o qual é um anticorpo anti-C5 ou um fragmento de ligação ao C5 do mesmo, o método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: determinar a concentração de pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas à aHUS em um fluído biológico obtido do indivíduo, em que: (a) as proteínas biomarcadoras associadas à aHUS são TNFR1 e pelo menos uma outra proteína biomarcadora associada à aHUS selecionada dentre: CXCL10, MCP-1, IFN-Y, IL-6, um fragmento proteolítico do fator B do componente do complemento, C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero D, trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), albumina, CXCL9 e KIM-1; (b) o indivíduo tem, é suspeito de ter, ou está em risco de desenvolver aHUS; (c) o indivíduo foi ou está sendo tratado com um inibidor do complemento; e (d) uma concentração reduzida das pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas à aHUS comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do indivíduo antes do tratamento com o inibidor do complemento indica que o indivíduo é sensível ao tratamento com o inibidor.
2. Método para monitorar a responsividade de um indivíduo ao tratamento com um inibidor do complemento, o qual é um anticorpo anti-C5 ou um fragmento de ligação ao C5 do mesmo, o método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: determinar a concentração de pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas à aHUS em um fluído biológico obtido do indivíduo, em que: (a) as proteínas biomarcadoras associadas à aHUS são TNFR1 e pelo menos uma outra proteína biomarcadora associada à aHUS, em que a pelo menos uma outra proteína biomarcadora associada à aHUS é tanto um fragmento proteolítico do fator B do componente do complemento quanto C5b9 solúvel (sC5b9), em que o dito fragmento proteolítico do fator B do componente do complemento é Ba; (b) o indivíduo tem, é suspeito de ter, ou está em risco de desenvolver aHUS; (c) o indivíduo foi ou está sendo tratado com um inibidor do complemento; e (d) uma concentração reduzida das pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas à aHUS comparada com a concentração em uma amostra de fluído biológico do mesmo tipo obtida do indivíduo antes do tratamento com o inibidor do complemento indica que o indivíduo é sensível ao tratamento com o inibidor.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo está sendo cronicamente tratado com um inibidor do complemento.
4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo: (i) é selecionado dentre um anticorpo humanizado, um anticorpo recombinante, um diacorpo, um anticorpo quimerizado ou quimérico, um anticorpo monoclonal, um anticorpo desimunizado, um anticorpo totalmente humano, um anticorpo de cadeia única, um fragmento Fv, um fragmento Fd, um fragmento Fab, um fragmento Fab’, e um fragmento F(ab’)2; (ii) inibe a clivagem de C5 em fragmentos C5a e C5b; ou (iii) é o anticorpo eculizumab ou o fragmento de ligação de antígeno de pexelizumab.
5. Método para diagnosticar um indivíduo tendo, ou estando em risco de desenvolver, síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), o método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: determinar a concentração de pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas à aHUS em um fluído biológico obtido de um indivíduo, em que as proteínas biomarcadoras associadas à aHUS são TNFR1 e pelo menos uma outra proteína biomarcadora associada à aHUS selecionada dentre: um fragmento proteolítico do fator B do componente do complemento, C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, IFN-Y, ICAM- 1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8, e CCL5; em que uma concentração elevada das pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas à aHUS comparadas com a concentração das proteínas biomarcadoras associadas à aHUS em uma amostra controle de fluído biológico do mesmo tipo indica que o indivíduo tem, ou está em risco de desenvolver, aHUS.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que pelo menos uma outra proteína biomarcadora associada à aHUS é selecionada dentre: um fragmento proteolítico do fator B, C5a, C5b-9 solúvel (sC5b-9), VCAM-1, trombomodulina, fragmentos de protrombina 1 e 2 (F1+2), dímero D, clusterina, TIMP-1, FABP-1, microglobulina ß2 (ß2m) e cistatina-C, em que o VCAM-1 é VCAM-1 solúvel (sVCAM-1).
7. Método para diagnosticar um indivíduo tendo, ou estando em risco de desenvolver, síndrome urêmica hemolítica atípica (aHUS), o método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: determinar a concentração de pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas à aHUS em um fluído biológico obtido de um indivíduo, em que as proteínas biomarcadoras associadas à aHUS são TNFR1 e pelo menos uma outra proteína biomarcadora associada à aHUS, em que a pelo menos uma outra proteína biomarcadora associada à aHUS é tanto um fragmento proteolítico do fator B do componente do complemento quanto C5b9 solúvel (sC5b9), em que o dito fragmento proteolítico do fator B do componente do complemento é Ba; em que uma concentração elevada das pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas à aHUS comparadas com a concentração das proteínas biomarcadoras associadas à aHUS em uma amostra controle de fluído biológico do mesmo tipo indica que o indivíduo tem, ou está em risco de desenvolver, aHUS.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, CARACTERIZADO pelo fato de que pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas à aHUS são medidas usando um imunoensaio, tal como um ensaio de imunoadsorção ligado à enzima (ELISA) ou um radioimunoensaio (RIA).
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o fluído biológico é sangue, uma fração do sangue, tal como soro ou plasma, ou urina.
10. Método, de acordo com a reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de que a fração do sangue é soro.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, CARACTERIZADO pelo fato de que: (i) a concentração de pelo menos um biomarcador associado à aHUS é medida em dois ou mais tipos de fluído biológico; ou (ii) a concentração de uma primeira das pelo menos duas proteínas biomarcadoras associadas à aHUS é medida em um tipo de fluído biológico e a concentração de uma segunda das pelo menos duas proteínas biomarcadoras de aHUS é medida em um segundo tipo de fluido.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que: (i) a concentração de CXCL9, CXCL10, IFN-y, MCP-1, CCL5, sCD40L ou TNFR1 no soro do indivíduo é determinada, em que o TNFR1 é TNFR1 solúvel (sTNFR1); (ii) a concentração de pelo menos uma microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL10, CXCL9, albumina, e KIM-1 na urina do indivíduo é determinada; (iii) a concentração de NGAL, um fragmento proteolítico do fator B do componente do complemento, C5b9 solúvel (sC5b9), fragmento de protombina F1+2, dímero D, trombomodulina, ou Fator de von Willebrand (vWF) no plasma do indivíduo é determinada; e/ou (iv) a concentração de Ba no plasma obtido do indivíduo é determinada.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, CARACTERIZADO pelo fato de que o TNFR1 é sTNFR1, e a concentração de controle normal de sTNFR1 é menor do que 2000 pg/mL.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, CARACTERIZADO pelo fato de que o TNFR1 é sTNFR1, e a concentração de sTNFR1 na amostra biológica é considerada elevada quando ela é: (i) pelo menos duas vezes maior do que a concentração de controle de sTNFR1; ou (ii) pelo menos 10.000 pg/mL.
15. Uso de um kit de diagnóstico CARACTERIZADO pelo fato de que é para diagnosticar aHUS, em que o kit de diagnóstico compreende: (a) um placa de ensaio e (b) pelo menos três agentes de ligação, em que cada agente de ligação se liga a uma proteína de analito biológico diferente, em que as proteínas de analito são selecionadas dentre: um fragmento proteolítico do fator B do componente do complemento, C5b9 solúvel (sC5b9), trombomodulina, VCAM-1, Fator de von Willebrand (vWF), ligante CD40 solúvel (sCD40L), fragmento de protombina F1+2, dímero D, CXCL10, MCP-1, TNFR1, IFN-Y, ICAM-1, IL-1 beta, IL-12 p70, componente do complemento C5a, microglobulina ß2 (ß2M), clusterina, cistatina C, NAG, TIMP-1, NGAL, proteína 1 de ligação de ácido graxo (FABP-1), CXCL9, KIM-1, IL-18, fator de crescimento de célula endotelial vascular (VEGF), IL-6, albumina, IL-8 e CCL5, e uma das proteínas é TNFR-1.
16. Uso de um kit de diagnóstico, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de ligação é um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
BR122020019190-2A 2013-08-07 2014-08-06 Métodos para monitorar a responsividade de um indivíduo ao tratamento com um inibidor do complemento, métodos para diagnosticar um indivíduo tendo ou com risco de desenvolver síndrome urêmica hemolítica atípica (ahus) e uso de um kit de diagnóstico para diagnosticar ahus BR122020019190B1 (pt)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361863299P 2013-08-07 2013-08-07
US61/863,299 2013-08-07
US201361913180P 2013-12-06 2013-12-06
US61/913,180 2013-12-06
PCT/US2014/049957 WO2015021166A2 (en) 2013-08-07 2014-08-06 Atypical hemolytic uremic syndrome biomarker proteins
BR112016002435A BR112016002435A8 (pt) 2013-08-07 2014-08-06 proteínas biomarcadoras da síndrome urêmica hemolítica atípica

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BR122020019190B1 true BR122020019190B1 (pt) 2023-11-21

Family

ID=51358124

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112016002435A BR112016002435A8 (pt) 2013-08-07 2014-08-06 proteínas biomarcadoras da síndrome urêmica hemolítica atípica
BR122020019190-2A BR122020019190B1 (pt) 2013-08-07 2014-08-06 Métodos para monitorar a responsividade de um indivíduo ao tratamento com um inibidor do complemento, métodos para diagnosticar um indivíduo tendo ou com risco de desenvolver síndrome urêmica hemolítica atípica (ahus) e uso de um kit de diagnóstico para diagnosticar ahus

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112016002435A BR112016002435A8 (pt) 2013-08-07 2014-08-06 proteínas biomarcadoras da síndrome urêmica hemolítica atípica

Country Status (14)

Country Link
US (5) US20150079613A1 (pt)
EP (3) EP4300103A3 (pt)
JP (3) JP6211701B2 (pt)
KR (3) KR102192596B1 (pt)
CN (1) CN105683759B (pt)
AU (1) AU2014306002B2 (pt)
BR (2) BR112016002435A8 (pt)
CA (1) CA2918959C (pt)
EA (1) EA034870B1 (pt)
ES (1) ES2650917T3 (pt)
HK (1) HK1218443A1 (pt)
IL (1) IL243653B (pt)
SI (1) SI3011345T1 (pt)
WO (1) WO2015021166A2 (pt)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9029093B2 (en) * 2010-02-26 2015-05-12 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
CN105683759B (zh) * 2013-08-07 2019-03-29 瑞颂医药公司 非典型溶血性尿毒综合征(aHUS)生物标志物蛋白
EP3046581B1 (en) 2013-09-16 2020-04-01 Children's Hospital Medical Center Compositions and methods for treatment of hsct-associated thrombotic microangiopathy
IL229134A0 (en) * 2013-10-29 2014-03-31 Omrix Biopharmaceuticals Ltd Compounds and methods for stabilizing thrombin activity
US10527633B2 (en) * 2015-03-29 2020-01-07 Endothel Pharma Aps Composition comprising prostacyclin andor analogues thereof for treatment of acute critically ill patients
WO2016200627A1 (en) 2015-06-09 2016-12-15 Children's Hospital Medical Center Dosing algorithm for complement inhibitor
WO2017035401A1 (en) 2015-08-26 2017-03-02 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Amide compounds for treatment of immune and inflammatory disorders
WO2017035405A1 (en) 2015-08-26 2017-03-02 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Amino compounds for treatment of immune and inflammatory disorders
AU2017283470B2 (en) 2016-06-14 2024-03-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-C5 antibodies and uses thereof
WO2018075758A1 (en) * 2016-10-19 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. A method of quantitating unbound c5 in a sample
WO2018081400A1 (en) 2016-10-27 2018-05-03 Alexion Pharmaceuticals Inc. Assay for c5b-9 deposition in complement-associated disorders
JP7169979B2 (ja) * 2017-02-27 2022-11-11 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 補体関連腎症および肝線維症の候補治療剤の治療有効性を評価する方法
CA3053818A1 (en) 2017-03-01 2018-09-07 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Aryl, heteroaryl, and heterocyclic pharmaceutical compounds for treatment of medical disorders
WO2018160891A1 (en) 2017-03-01 2018-09-07 Achillion Pharmaceutical, Inc. Pharmaceutical compounds for treatment of medical disorders
FR3069156B1 (fr) * 2017-07-21 2019-08-09 Universite de Bordeaux Clusterine pour son utilisation dans le traitement des micro-angiopathies thrombotiques
WO2019108456A1 (en) * 2017-12-01 2019-06-06 Children's Hospital Medical Center Compositions for interferon blockade and methods of using same
JP2021506241A (ja) 2017-12-13 2021-02-22 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 抗ｃ５抗体組み合わせ物およびその使用
US20190247560A1 (en) * 2018-02-13 2019-08-15 Gambro Lundia Ab Extracorporeal devices and methods of treating complement factor related diseases
EP3814374A4 (en) * 2018-05-25 2022-03-09 Achillion Pharmaceuticals, Inc. BIOMARKERS OF NEPHROPATHY ASSOCIATED WITH THE ALTERNATIVE COMPLEMENT PATHWAY
EP3802603A1 (en) * 2018-06-04 2021-04-14 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Dosage and administration of anti-c5 antibodies for treatment of atypical hemolytic uremic syndrome (ahus) in pediatric patients
EP3847174A4 (en) 2018-09-06 2022-06-15 Achillion Pharmaceuticals, Inc. MORPHIC FORMS OF COMPLEMENT D FACTOR INHIBITORS
JP7443375B2 (ja) 2018-09-06 2024-03-05 アキリオン ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド 医学的障害の治療のための大環状化合物
CA3114039A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Morphic forms of complement factor d inhibitors
CN110244053B (zh) * 2019-05-09 2022-03-11 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 用于诊断狼疮肾炎并肺动脉高压疾病的分子标志物及其用途
TW202140553A (zh) 2020-01-13 2021-11-01 美商威特拉公司 C5ar1抗體分子及其用途
JP7347767B2 (ja) * 2020-01-31 2023-09-20 公立大学法人大阪 造血幹細胞移植後の合併症リスクの検出方法、予測診断薬及びキット
KR102314642B1 (ko) * 2020-04-17 2021-10-20 재단법인 아산사회복지재단 파브리 병 진단용 바이오 마커 및 이의 용도
TW202246331A (zh) 2021-01-13 2022-12-01 美商威特拉公司 人源化補體５ａ受體１抗體及其使用方法
US11940450B2 (en) * 2021-03-16 2024-03-26 University Of Connecticut Biomarker panel for non-invasive diagnosis of congenital renal dysfunction
EP4348263A1 (en) * 2021-05-28 2024-04-10 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods for detecting cm-tma biomarkers

Family Cites Families (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3710795A (en) 1970-09-29 1973-01-16 Alza Corp Drug-delivery device with stretched, rate-controlling membrane
US4686100A (en) 1985-04-02 1987-08-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method for the treatment of adult respiratory distress syndrome
US4863457A (en) 1986-11-24 1989-09-05 Lee David A Drug delivery device
US5135916A (en) 1989-06-12 1992-08-04 Oklahoma Medical Research Foundation Inhibition of complement mediated inflammatory response
DE3924924A1 (de) 1989-07-27 1991-02-07 Goetze Otto Verfahren zum nachweis und/oder der quantitativen bestimmung von komplementpeptid c5a und/oder c5adesarg
US5164188A (en) 1989-11-22 1992-11-17 Visionex, Inc. Biodegradable ocular implants
GB9007971D0 (en) 1990-04-09 1990-06-06 Imutran Ltd Pharmaceutical formulations
KR0185215B1 (ko) 1990-11-30 1999-05-01 요시다 쇼오지 서방성 안구삽입용 약제
AU9149791A (en) 1990-12-06 1992-07-08 T Cell Sciences, Inc. Synergistic compositions of soluble complement receptors and compounds that inhibit complement and/or suppress immune activity
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
DK1589107T3 (da) 1992-08-21 2010-04-26 Univ Bruxelles Immonuglobuliner uden lette kæder
US5807884A (en) * 1992-10-30 1998-09-15 Emory University Treatment for atherosclerosis and other cardiovascular and inflammatory diseases
DE69431290D1 (de) 1993-02-12 2002-10-10 Avant Immunotherapeutics Inc PULMONÄRE VERABREICHUNG DES LÖSLICHEN KOMPLEMENT-RECEPTORS TYP 1 sCR1
DK0698097T3 (da) 1993-04-29 2001-10-08 Unilever Nv Produktion af antistoffer eller (funktionaliserede) fragmenter deraf afledt af Camelidae-immunoglobuliner med tung kæde
US6074642A (en) 1994-05-02 2000-06-13 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of antibodies specific to human complement component C5 for the treatment of glomerulonephritis
US5679345A (en) 1994-06-02 1997-10-21 The Johns Hopkins University Method for preventing complement-dependent rejection of organ or tissue transplants
AUPO755097A0 (en) 1997-06-25 1997-07-17 University Of Queensland, The Receptor agonist and antagonist
KR100425965B1 (ko) 1998-02-20 2004-04-06 타녹스 인코퍼레이티드 보체 활성화의 억제물질
CA2702148C (en) 1999-01-06 2014-03-04 Genenews Inc. Method of profiling gene expression in a human subject having an infectious disease
US20050036991A1 (en) 2000-02-10 2005-02-17 Fodor William L Mixtures of caspase inhibitors and complement inhibitors and methods of use thereof
DK1642910T3 (da) 2000-12-05 2012-05-07 Alexion Pharma Inc Rationelt designede atistoffer
WO2002072636A2 (en) 2000-12-28 2002-09-19 Altus Biologics Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
WO2003081206A2 (en) 2002-03-18 2003-10-02 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Stratification of patient populations having or suspected of having rheumatoid arthritis
US20050271660A1 (en) 2002-09-06 2005-12-08 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Nebulization of monoclonal antibodies for treating pulmonary diseases
JP4601426B2 (ja) 2002-09-06 2010-12-22 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 補体成分ｃ５に対する抗体を使用する喘息の処置の方法
KR100960560B1 (ko) 2002-09-27 2010-06-03 젠코어 인코포레이티드 최적화된 Ｆｃ 변이체 및 그의 제조 방법
US7361339B2 (en) 2003-01-09 2008-04-22 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing morality associated with acute myocardial infarction
ES2387275T3 (es) * 2003-05-15 2012-09-19 Genentech, Inc. Métodos y composiciones para la prevención y el tratamiento de la sepsis
US20050036691A1 (en) 2003-08-13 2005-02-17 Pascal Cathier Method and system for using structure tensors to detect lung nodules and colon polyps
US20050169921A1 (en) 2004-02-03 2005-08-04 Leonard Bell Method of treating hemolytic disease
ES2432112T3 (es) 2004-02-10 2013-11-29 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Inhibición del factor B, de la vía alternativa del complemento y métodos relacionados
US8685435B2 (en) 2004-04-30 2014-04-01 Allergan, Inc. Extended release biodegradable ocular implants
US20090028850A1 (en) 2004-05-14 2009-01-29 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Prolongation of survival of an allograft by inhibiting complement activity
KR20080025174A (ko) 2005-06-23 2008-03-19 메디뮨 인코포레이티드 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제
KR20080048034A (ko) 2005-09-19 2008-05-30 체에스엘 베링 게엠베하 만성 신장병증 치료용 인자 ｈ 및 이의 제조
JP2009510478A (ja) * 2005-10-03 2009-03-12 バイオサイト インコーポレイテッド 全身性炎症反応症候群の診断および／または予後診断のための方法および組成物
FR2894145B1 (fr) 2005-12-07 2008-10-17 Lab Francais Du Fractionnement Utilisation de facteur h du complement a titre de medicament
CN101437501B (zh) 2006-03-02 2012-09-05 阿莱克申药物公司 通过抑制补体活性延长同种异体移植物的存活
PT2044111E (pt) 2006-06-21 2014-11-12 Univ Colorado Regents Abordagem seletiva do fator h do complemento para o tratamento de doenças
US20090041764A1 (en) 2006-10-20 2009-02-12 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of muscular dystrophy associated with dysferlin-deficiency
EP2907827B1 (en) 2006-11-02 2018-09-19 Genentech, Inc. Humanized anti-factor D antibodies and uses thereof
KR20090122465A (ko) 2007-03-01 2009-11-30 어드벤스드 비젼 테라피스, 인코포레이티드 염증성 질환의 치료
EP2236518B1 (en) 2007-03-14 2014-08-06 Alexion Cambridge Corporation Humaneered anti-factor B antibody
KR20150029002A (ko) 2007-06-07 2015-03-17 제넨테크, 인크. 보체-관련 장애의 예방 및 치료를 위한 Ｃ３ｂ 항체 및 방법
US20110008343A1 (en) 2007-06-08 2011-01-13 Lambris John D Method Of Reducing Tissue Loss In Pancreatic Islet Cell Transplantation
US8981060B2 (en) 2007-08-27 2015-03-17 Novelmed Therapuetics, Inc. Method of inhibiting complement activation with factor Bb specific antibodies
AR069130A1 (es) 2007-11-02 2009-12-30 Novartis Ag Moleculas de enlace de la opsonina principal del complemento (c3b) y metodos para modular el componente de complemento
SI2262831T1 (sl) 2008-03-03 2015-10-30 Novelmed Therapeutics, Inc. Protitelesa anti-properdina
JP5815403B2 (ja) 2008-08-05 2015-11-17 ノバルティス アーゲー 補体タンパク質ｃ５を標的とする抗体に関する組成物および方法
BRPI0921237A2 (pt) 2008-11-10 2015-09-22 Alexion Pharma Inc métodos e composições para o tratamento de distúrbios associados ao complemento
US20110262456A1 (en) * 2008-11-14 2011-10-27 Rekha Bansal Method of treating ischemia reperfusion injury
KR101238061B1 (ko) * 2009-03-31 2013-02-27 한화케미칼 주식회사 Ｖｃａｍ－１에 특이적으로 결합하는 인간 단일클론항체 및 그를 포함하는 염증성 질환 또는 암의 치료용 조성물
US20100291106A1 (en) 2009-05-06 2010-11-18 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting complement protein c3b
CN102597005A (zh) * 2009-06-23 2012-07-18 阿雷克森制药公司 与补体蛋白质结合的双特异性抗体
WO2011012901A1 (en) * 2009-07-29 2011-02-03 Randox Laboratories Ltd Method for detection of, or the risk of, bladder cancer
US9011852B2 (en) * 2010-04-30 2015-04-21 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-C5a antibodies
EP2569332B1 (en) 2010-05-14 2019-01-09 The Regents of the University of Colorado, A Body Corporate Improved complement receptor 2 (cr2) targeting groups
CA2803588A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Antibodies to the c3d fragment of complement component 3
CN102539745B (zh) * 2010-12-31 2013-03-06 中国人民解放军第三〇九医院 移植肾排斥反应早期诊断及预警试剂盒
AU2013201606B2 (en) * 2011-04-08 2016-02-25 Omeros Corporation Methods for treating conditions associated with MASP-2 dependent complement activation
CN105683759B (zh) 2013-08-07 2019-03-29 瑞颂医药公司 非典型溶血性尿毒综合征(aHUS)生物标志物蛋白

Also Published As

Publication number Publication date
BR112016002435A2 (pt) 2017-09-12
JP2021009162A (ja) 2021-01-28
CN105683759B (zh) 2019-03-29
JP7235709B2 (ja) 2023-03-08
EA201690346A1 (ru) 2016-08-31
EA034870B1 (ru) 2020-03-31
WO2015021166A3 (en) 2015-05-07
US20170269102A1 (en) 2017-09-21
AU2014306002B2 (en) 2017-05-25
EP4300103A3 (en) 2024-02-28
JP2016528235A (ja) 2016-09-15
JP6211701B2 (ja) 2017-10-11
US9494601B2 (en) 2016-11-15
BR112016002435A8 (pt) 2020-09-29
IL243653B (en) 2019-01-31
IL243653A0 (en) 2016-03-31
JP2017142266A (ja) 2017-08-17
US20150079613A1 (en) 2015-03-19
KR101834469B1 (ko) 2018-03-06
KR102448976B1 (ko) 2022-09-29
US9658236B2 (en) 2017-05-23
KR102192596B1 (ko) 2020-12-18
JP6798934B2 (ja) 2020-12-09
CA2918959A1 (en) 2015-02-12
AU2014306002A1 (en) 2016-02-18
US20170023590A1 (en) 2017-01-26
KR20160033230A (ko) 2016-03-25
US20160154009A1 (en) 2016-06-02
HK1218443A1 (zh) 2017-02-17
US20210285964A1 (en) 2021-09-16
CN105683759A (zh) 2016-06-15
SI3011345T1 (sl) 2017-12-29
EP4300103A2 (en) 2024-01-03
CA2918959C (en) 2024-05-07
KR20180026555A (ko) 2018-03-12
EP3290922A1 (en) 2018-03-07
EP3011345B1 (en) 2017-10-04
WO2015021166A2 (en) 2015-02-12
ES2650917T3 (es) 2018-01-23
KR20200066743A (ko) 2020-06-10
EP3011345A2 (en) 2016-04-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7235709B2 (ja) 非典型溶血性尿毒症症候群のバイオマーカータンパク質
JP2023095851A (ja) 抗生物質治療をモニタリングするためのマーカーとしてのｐｃｔおよびｐｒｏ－ａｄｍ
EP3971573A1 (en) Proadrenomedullin as a marker for abnormal platelet levels
EA044587B1 (ru) Белковые биомаркеры атипичного гемолитического уремического синдрома
JP7366007B2 (ja) プロアドレノメジュリンに基づく輸液療法のガイダンスのための方法
RU2788885C2 (ru) Прокальцитонин и про-адм в качестве маркеров для мониторинга лечения антибиотиками
RU2782305C2 (ru) Про-адм в качестве маркера мониторинга терапии для критически больных пациентов
WO2022251446A1 (en) Methods for detecting cm-tma biomarkers
CN117480393A (zh) 检测cm-tma生物标志物的方法

Legal Events

Date Code Title Description
B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 06/08/2014, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS