CN104274338B - 蛋白多糖含有物的用途 - Google Patents
蛋白多糖含有物的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104274338B CN104274338B CN201410469513.7A CN201410469513A CN104274338B CN 104274338 B CN104274338 B CN 104274338B CN 201410469513 A CN201410469513 A CN 201410469513A CN 104274338 B CN104274338 B CN 104274338B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- proteoglycan
- thing
- composition
- acid sugar
- molecular weight
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 133
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 132
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 131
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims abstract description 27
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 claims abstract 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims abstract 5
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 claims description 107
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 claims description 107
- 210000002184 nasal cartilage Anatomy 0.000 claims description 101
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 claims description 27
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 22
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 22
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 20
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 20
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 claims description 18
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 13
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 13
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims description 12
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 11
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims 2
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims 2
- 101000905241 Mus musculus Heart- and neural crest derivatives-expressed protein 1 Proteins 0.000 claims 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 205
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 205
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 76
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 74
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 description 69
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 48
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 41
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 37
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 36
- 230000008569 process Effects 0.000 description 36
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 30
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 30
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 30
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 26
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 26
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 26
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 24
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 22
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 17
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 16
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 16
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 15
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 description 15
- FNEHAOQZWPHONV-UHFFFAOYSA-N 9h-carbazole;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 FNEHAOQZWPHONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 14
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 14
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 14
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 11
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 11
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 11
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 7
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 7
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 7
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 7
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 7
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 7
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 241000192130 Leuconostoc mesenteroides Species 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 6
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 6
- -1 egg White polysaccharide Chemical class 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 6
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 4
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 4
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 4
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 3
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical class [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000007561 laser diffraction method Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000000790 scattering method Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 9H-carbazole Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 2
- 229920002567 Chondroitin Polymers 0.000 description 2
- 206010013786 Dry skin Diseases 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000243251 Hydra Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000013098 chemical test method Methods 0.000 description 2
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 2
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 2
- DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N chondroitin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@H](O)C=C(C(O)=O)O1 DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000551 dentifrice Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000037336 dry skin Effects 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 2
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethanethiol Chemical compound CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N h2o hydrate Chemical compound O.O JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N isoniazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=NC=C1 QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010894 Artemisia argyi Nutrition 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 241000442132 Lactarius lactarius Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000353345 Odontesthes regia Species 0.000 description 1
- 241000277277 Oncorhynchus nerka Species 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 1
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 1
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N ac1ldcw0 Chemical compound Cl.C1CN(C)CCN1C1=C(F)C=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN3CCSC1=C32 LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000030166 artemisia Species 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 description 1
- 238000000498 ball milling Methods 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 235000021329 brown rice Nutrition 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001716 carbazoles Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 239000007910 chewable tablet Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000013527 degreasing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004332 deodorization Methods 0.000 description 1
- AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L dermatan sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C([O-])=O)O1 AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L 0.000 description 1
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000004088 foaming agent Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical group 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 235000001497 healthy food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000004579 marble Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 235000021067 refined food Nutrition 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 230000004215 skin function Effects 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000007779 soft material Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000516 sunscreening agent Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 230000036572 transepidermal water loss Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
- A23F3/00—Tea; Tea substitutes; Preparations thereof
- A23F3/16—Tea extraction; Tea extracts; Treating tea extract; Making instant tea
- A23F3/30—Further treatment of dried tea extract; Preparations produced thereby, e.g. instant tea
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/20—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents
- A23L29/275—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents of animal origin, e.g. chitin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/60—Fish, e.g. seahorses; Fish eggs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
- A61K8/73—Polysaccharides
- A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0066—Isolation or extraction of proteoglycans from organs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
- A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
- A23G3/36—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G4/00—Chewing gum
- A23G4/06—Chewing gum characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/92—Oral administration
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Birds (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Non-Alcoholic Beverages (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明提供了蛋白多糖含有物在皮肤老化抑制用的经皮组合物的制造中的用途,所述蛋白多糖含有物是从鱼类的软骨中得到的、包含蛋白多糖及酸性糖作为酸性糖成分的蛋白多糖含有物,其中,所述蛋白多糖含有物包含分子量为2000kDa以上的酸性糖成分,包含分子量为5000kDa以上的蛋白多糖。
Description
本申请是于2010年7月16日提交的申请号为201080040456.0(PCT/JP2010/062125)、发明名称为“蛋白多糖含有物”的分案申请
技术领域
本发明涉及一种蛋白多糖含有物。更具体来说,涉及从鱼类的软骨中得到的蛋白多糖含有物。
背景技术
蛋白多糖是与胶原蛋白等一起形成结缔组织的细胞外基质中的基质的主要生物体高分子。蛋白多糖以往是将哺乳动物(特别是牛)软骨中所含的物质提取分离而得的,然而由于报告过牛海绵状脑症(BSE)的发病,因此希望有取而代之的蛋白多糖供给源及制造方法。
水产动物组织是有力的蛋白多糖供给源替代候选。尝试过提取水产动物鲸、鲨鱼的软骨中所含的蛋白多糖。但是,在这些水产动物的捕获量方面存在限制,很难制造大量的蛋白多糖。另外,提取分离操作也很烦杂,在提取中所用的溶剂等中存在有毒性不低的物质,如此等等。由此,形成如下的状况,即,产品的用途受到限制,特别是难以用于食品或化妆品的制造中。
此种状况下,研究了各种各样的蛋白多糖制造方法。例如,专利文献1中,记载有如下的蛋白多糖的提纯方法,其特征在于,用溶剂提取对鲑鱼的鼻软骨进行粉碎及脱脂处理而得的脱脂干燥粉末,进行从所得的提取液中分离提纯粗蛋白多糖的后透析。但是,该方法中将氯仿、甲醇等毒性不低的有机溶剂作为提取溶剂使用,另外,还有在所得的蛋白多糖中残存有腥臭等问题。
另外,专利文献2中记载有使用乙酸作为提取溶剂从鲑鱼鼻软骨中提纯蛋白多糖的方法。专利文献3中显示,在利用专利文献2记载的提纯方法提纯出的蛋白多糖中具有纤维芽细胞繁殖促进作用及玻尿酸合成促进作用。
如此所述,对于蛋白多糖的制造方法、其用途及效果,现在也还在进行着研究。
专利文献
专利文献1日本特开2001-172296号公报
专利文献2日本特开2002-069097号公报
专利文献3日本特开2008-247803号公报
发明内容
本发明的目的在于,使用毒性低的溶剂,从鱼类软骨中制造新型的含有蛋白多糖的组合物(蛋白多糖含有物),以及找出该蛋白多糖含有物的新用途及优异的效果。
本发明人等发现,令人吃惊的是,从鱼类的软骨中利用特定的步骤提取而得的、含有酸性糖成分的提取物包含具有与以往已知的蛋白多糖相比更大的分子量的蛋白多糖。此外还发现,该提取物发挥出各种优异的效果,反复加以改良而完成了本发明。
予以说明,本说明书中,有时将酸性糖、以及具有酸性糖作为构成成分的化合物称作酸性糖成分。蛋白多糖是具有将酸性糖与蛋白质结合而成的结构的物质,因此与该化合物相当。所以,蛋白多糖是酸性糖成分的1种。本发明的蛋白多糖含有物包含蛋白多糖及酸性糖作为酸性糖成分。所以,也可以将本发明的蛋白多糖含有物改称为酸性糖成分含有物。
本发明例如包含以下的项目中记载的蛋白多糖含有物、含有该含有物的组合物等。
项目1.
一种蛋白多糖含有物,其是从鱼类的软骨中得到的、包含蛋白多糖及酸性糖作为酸性糖成分的蛋白多糖含有物,其中
包含分子量为2000kDa以上的酸性糖成分。
项目2.
根据项目1中记载的蛋白多糖含有物,包含分子量为5000kDa以上的蛋白多糖。
项目3.
根据项目1或2中记载的蛋白多糖含有物,酸性糖成分的50质量%以上具有2000kDa以上的分子量。
项目4.
根据项目1~3中任一项记载的蛋白多糖含有物,蛋白多糖的20质量%以上具有10000kDa以上的分子量。
项目5.
根据项目1~4中任一项记载的蛋白多糖含有物,酸性糖成分的20质量%以上为蛋白多糖。
项目6.
一种饮食品组合物,包含项目1~5中任一项记载的蛋白多糖含有物。
项目7.
一种口腔用组合物,包含项目1~5中任一项记载的蛋白多糖含有物。
项目8.
一种化妆品组合物,包含项目1~5中任一项记载的蛋白多糖含有物。
项目9.
一种蛋白多糖,其是从鱼类的软骨中提取出的蛋白多糖,分子量为5000kDa以上。
本发明的蛋白多糖含有物能够起到出色的皮肤纤维芽细胞繁殖效果、皮肤屏蔽功能增强及改善效果、皮肤胶原蛋白产生能力增强及改善效果、真皮肥厚抑制效果等、对于皮肤的保湿及抗老化来说有利的效果。
附图说明
图1是表示在本发明中考虑表示蛋白多糖的峰面积时的步骤的示意图。
图2是表示将来源于鲑鱼鼻软骨的粉末(左图)及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物(右图)作为样品,用凝胶过滤色谱(使用Sepharose CL-2B填充柱)处理,每次1mL地采取洗脱馏分,分别用咔唑硫酸法及UV吸收法对该各馏分中所含的酸性糖量及蛋白质量进行定量而得的结果。
图3是表示对市售的蛋白多糖(PG-K)及市售的粘多糖(PG-M;作为软骨素销售)进行凝胶过滤色谱处理、并将各洗脱馏分中所含的酸性糖量定量而得的结果。将PG-M的结果表示于左图中,将PG-K的结果表示于右图中。
图4表示对葡聚糖分子量标示物进行凝胶过滤色谱、并利用苯酚·硫酸法将各洗脱馏分中所含的糖量(即葡聚糖量)定量而得的结果。
图5表示以由图4得到的、各分子量标示物所洗脱的液体量为基准制成的标准线。
图6表示将图1及图2所示的酸性糖量测定结果汇总而得的曲线图。
图7表示将来源于鲑鱼鼻软骨的粉末作为样品用凝胶过滤色谱(使用SephacrylS-1000 SF填充柱)处理,每次1mL地采集洗脱馏分,用咔唑硫酸法对该各馏分中所含的酸性糖量进行定量而得的结果。
图8表示对来源于鲑鱼鼻软骨的粉末、以及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物的、人皮肤纤维芽细胞繁殖能力研究而得的结果。
图9表示对来源于鲑鱼鼻软骨的粉末、以及来源于鱼鼻软骨的粉末的水提取物因经口摄取而对皮肤屏蔽功能(TEWL值)造成的影响研究而得的结果。
图10表示来源于鲑鱼鼻软骨的粉末、以及来源于鱼鼻软骨的粉末的水提取物因经口摄取而对皮肤弹性造成的影响研究而得的结果。
图11表示来源于鲑鱼鼻软骨的粉末、以及来源于鱼鼻软骨的粉末的水提取物因经口摄取而对皮肤的胶原蛋白产生能力造成的影响研究而得的结果。
图12表示为了研究来源于鲑鱼鼻软骨的粉末、以及来源于鱼鼻软骨的粉末的水提取物对真皮皮厚造成的影响而测定将它们经口投放后的小鼠的背部的真皮皮厚的结果。
图13表示对来源于鲑鱼鼻软骨的粉末、以及来源于鱼鼻软骨粉末的水提取物因经皮投放而对皮肤屏蔽功能(TEWL值)造成的影响研究而得的结果。
图14表示使用了离子交换色谱及凝胶过滤色谱的、来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物的分级的概要。
图15表示对来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物的分级级别研究细胞繁殖效果的结果。具体来说,表示从添加各样品(50μg/ml)起7天后的细胞数。而且,所谓“PGNP水提取物”表示来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物。
图16表示对来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物的分级级别研究细胞繁殖效果的结果。具体来说,表示从添加各样品(10μg/ml)起7天后的细胞数。
具体实施方式
下面,对本发明进行更详细的说明。而且,以下记载的酸性糖及蛋白多糖的分子量值及平均分子量值是在凝胶过滤色谱分析中将葡聚糖作为分子量标示物使用时算出的值。
本发明的蛋白多糖含有物是从鱼类的软骨中制造的。作为鱼类没有特别限制,然而具体来说可以举出鳟鱼(细鳞鳟鱼、樱鳟鱼、五月鳟等)、鲑鱼(白鲑、红鲑、银鲑、大鳞大马哈鱼、钢头鳟等)、鲨鱼、鳕鱼等。优选鲑鱼科鲑鱼属的鱼,特别优选鲑鱼或鳟鱼。另外,作为软骨,没有特别限制,然而优选头部软骨,尤其优选鼻软骨。另外,由于鱼类被加工为食品产品等时头部通常被废弃,因此头部软骨的获得成本很低,从而还具有可以大量地稳定供给的优点。
本发明中,所谓酸性糖成分是指酸性糖及具有酸性糖作为构成成分的化合物。本发明的蛋白多糖含有物含有酸性糖成分(即酸性糖及具有酸性糖作为构成成分的化合物)。
这里所说的酸性糖是含有糖醛酸的多糖类。本发明的蛋白多糖含有物中所含的酸性糖例如可以举出玻尿酸、硫酸软骨素等粘多糖。而且,玻尿酸以外的粘多糖通常以与蛋白质共价结合的形态(即作为蛋白多糖)存在。
对于具有酸性糖作为构成成分的化合物,具体来说可以举出蛋白多糖。蛋白多糖具有将粘多糖及蛋白质共价结合而成的结构。构成蛋白多糖的粘多糖是具有加成了硫酸基的2糖的重复结构的酸性糖,具体来说可以例示出硫酸软骨素、硫酸皮质素、硫酸乙酰肝素等。也就是说,蛋白多糖是具有蛋白质与酸性糖结合而成的结构的化合物。
在这些酸性糖成分所具有的2糖的重复结构中,该2糖当中通常一个是氨基糖,另一个是糖醛酸。所以,在酸性糖成分的检测中,可以使用作为糖醛酸检测法的常法之一的咔唑硫酸法。
所谓咔唑硫酸法是如下的方法,即,将作为糖醛酸的葡萄糖醛酸(Glc A)及作为艾杜糖醛酸的显色色素的咔唑溶液添加到测定检体中,使用分光光度计测定吸光度。使用规定了浓度的葡萄糖醛酸标准溶液制成标准线,求出检体中的葡萄糖醛酸含量。更具体来说,例如可以如下所示地进行。
将在100ml的浓硫酸中溶解了硼酸钠·10水合物0.95g的试剂取入试管中,进行冰浴冷却。再在其中将受检体0.5ml(使之包含4~40μg的糖醛酸)静置而实现多层化。进行水冷并充分搅拌使温度不达到室温以上。用玻璃球盖上盖后,在沸腾热水浴中加热10分钟,水冷到室温。向其中加入0.1ml的在无水甲醇100ml中溶解了125mg咔唑的试剂而混合,再在沸腾热水浴中加热15分钟。其后,水冷到室温,测定530nm的吸光度。空白样使用的是0.5ml蒸馏水。同时,使用匍萄糖醛酸制成标准线。
本发明的蛋白多糖含有物中所含的酸性糖成分的平均分子量通常约为2000kDa~40000kDa,优选为2500kDa~30000kDa,更优选为3000kDa~20000kDa,进一步优选为3000kDa~10000kDa,特别优选为4000kDa~8000kDa。
本发明的蛋白多糖含有物中,含有分子量为2000kDa以上的酸性糖成分。优选含有2500kDa以上、更优选含有3000kDa以上、进一步优选含有4000kDa以上、更进一步优选含有5000kDa以上的酸性糖成分。
另外,本发明的蛋白多糖含有物中所含的酸性糖成分优选其50质量%以上、更优选其55质量%以上、进一步优选其60质量%以上、更进一步优选其65质量%以上具有2000kDa以上的分子量。
本发明的蛋白多糖含有物中所含的蛋白多糖与以往所制造的蛋白多糖相比,分子量(MW)明显更大。具体来说,本发明的蛋白多糖含有物中所含的蛋白多糖的分子量即使是小的也有大约5000kDa~6000kDa以上。即,在本发明的蛋白多糖含有物中,包含具有约5000kDa以上的分子量的蛋白多糖。在本发明的蛋白多糖含有物中,例如可以包含约5000kDa~100000kDa、优选5000kDa~90000kDa、更优选5000kDa~80000kDa、进一步优选5000kDa~70000kDa的蛋白多糖。此外,本发明的蛋白多糖含有物中所含的蛋白多糖的平均分子量没有特别限制,然而通常为约6000kDa~60000kDa,优选为约7000kDa~50000kDa,更优选为约9000kDa~40000kDa。
另外,本发明的蛋白多糖含有物中所含的蛋白多糖优选其20质量%以上、更优选其30质量%以上具有6000kDa以上(更优选为10000kDa以上)的分子量。
而且,本发明的蛋白多糖含有物以干燥质量换算,优选包含15~70质量%、更优选包含30~70质量%的酸性糖成分。另外,本发明的蛋白多糖含有物以干燥质量换算,优选包含4~40质量%、更优选包含10~40质量%、进一步优选包含15~40质量%的蛋白多糖。
本发明的蛋白多糖含有物中所含的酸性糖成分或蛋白多糖的分子量可以使用色谱等来测定。特别适合使用凝胶过滤色谱来测定。具体来说,例如只要作为色谱柱的载体使用琼脂糖系(琼脂糖、交联琼脂糖等)的凝胶,作为缓冲液使用磷酸缓冲液(优选含有氯化钠的缓冲液)即可。可以对蛋白多糖含有物进行凝胶过滤,根据酸性糖成分或蛋白多糖被洗脱前的液量(洗脱液量)来决定该组合物中所含的酸性糖成分或蛋白多糖的分子量。
予以说明,由于蛋白多糖具有将粘多糖(mucopolysuccharide)与蛋白质共价结合而成的结构,因此在进行色谱处理时,可以通过对酸性糖及蛋白质进行监测,来检出蛋白多糖的洗脱。也就是说,将对酸性糖进行监测而得的色谱图、和对蛋白质进行监测而得的色谱图重叠,如果在两个色谱图中在大致相同的洗脱液量范围中有峰,则可知该峰是检出蛋白多糖的峰。例如在酸性糖的监测中可以使用咔唑硫酸法。可以每次分取一定量的色谱的洗脱馏分,利用咔唑硫酸法将各分取馏分中所含的酸性糖量定量而決定。另外,例如,在蛋白质的监测中可以使用UV吸收法(测定在280nm附近具有吸收的色氨酸·酪氨酸·苯基丙氨酸的吸光度而将蛋白质定量的方法)、茚三酮反应、BCA法、Bradford法、Lowry法、双缩脲法等。尤其是,利用UV吸收法来定量十分简便。
而且,在根据洗脱液量决定分子量时,只要对分子量标示物同样的进行凝胶过滤色谱处理,测定该分子量标示物被洗脱的液量而制成标准线(洗脱液量v s分子量)即可。分子量标示物可以考虑上述的蛋白多糖含有物的分子量值、所用的凝胶的种类等,选择、买入适当的材料使用。例如,可以使用由葡聚糖构成的分子量标示物。此种分子量标示物可以从SIGMA等买入。
在本发明的蛋白多糖含有物中,还含有酸性糖成分以外的来源于鱼类软骨的成分。作为此种成分,例如可以举出胶原蛋白等蛋白质、盐类等。
本发明中,所谓物质的平均分子量是指如下求出的分子量,即,在利用凝胶过滤色谱对该物质进行分析而得的色谱图中,引出将该物质的峰的面积2等分的、垂直于横轴(洗脱液量)的线(2等分线),根据相当于该2等分线位置的洗脱液量使用标准线求出。具体来说,是指利用实施例的“蛋白多糖含有物的分子量的研究”中记载的方法求出的分子量。
例如,对于蛋白多糖含有物中所含的酸性糖成分的平均分子量,将蛋白多糖含有物用凝胶过滤色谱分离,在对其中所含的酸性糖成分进行监测而得的色谱图中,引出将该色谱图的面积2等分的线,根据相当于该2等分线位置的洗脱液量使用标准线(即,将该洗脱液量带入标准线的方程式)而求出分子量值,将该值作为平均分子量。对于酸性糖成分的监测,如果更具体地进行说明,则是将蛋白多糖含有物加以凝胶过滤色谱分析,以一定速度进行洗脱,每次一定量地回收洗脱液,对所回收的各洗脱液(馏分)中含有何种程度的酸性糖进行定量,将结果作为色谱图即可。
另外,对于蛋白多糖含有物中所含的蛋白多糖的平均分子量,在利用凝胶过滤色谱分析蛋白多糖含有物而得的色谱图中,引出将表示蛋白多糖的峰的面积2等分的线,根据相当于该2等分线位置的洗脱液量使用标准线求出分子量值,将该值作为平均分子量。
如前所述,将对酸性糖进行监测而得的色谱图、和对蛋白质进行监测而得的色谱图重叠,在两个色谱图中存在于大致一致的位置的峰是表示蛋白多糖的峰。
在表示蛋白多糖的峰的上升沿或下降沿因与其他的酸性糖成分的峰重叠而无法确认的情况下,根据峰的形状来推定上升沿及下降沿。此后,根据所推定的上升沿或下降沿来求出分子量或平均分子量。作为例子,图1中表示出无法确认下降沿时的峰的轮廓的推定方法的概要。图1中,引出峰的下降的延长线而决定峰的轮廓。
在求酸性糖成分及蛋白多糖的任意一个的分子量或平均分子量时,也优选分析对酸性糖进行监测而得的色谱图。
另外,在进行凝胶过滤色谱时,也可以通过仅回收与表示蛋白多糖的峰相当的馏分,来提纯本发明的蛋白多糖含有物中所含的蛋白多糖。另外,也可以通过包含表示蛋白多糖的峰地回收途中以前的馏分,来得到平均分子量更大的蛋白多糖含有物。
本发明的蛋白多糖含有物中所含的酸性糖成分通常其20质量%以上、优选20~60质量%、更优选25~55质量%、进一步优选30~50质量%为蛋白多糖。在该酸性糖成分中所占的蛋白多糖的比例可以根据上述的为求出酸性糖成分或蛋白多糖的分子量而使用的色谱图来求出。即,通过在对蛋白多糖含有物的酸性糖成分进行监测而得的色谱图面积中,求出表示蛋白多糖的峰的面积所占的比例,来求出在酸性糖成分中所占的蛋白多糖的比例。
本发明的蛋白多糖含有物如上所述,由鱼类软骨中制造。具体来说,可以通过利用乙醇处理将鱼类软骨脱脂而制造。另外,可以从脱脂了的鱼类软骨中进行水提取而制造。
例如可以利用以下的工序来制造。
工序(1):水处理工序
将鱼类的含软骨组织(例如鱼类头部)在常温或低温(约0~40℃)的水中浸渍几分钟~几天左右。既可以静置浸渍,也可以一边搅拌一边浸渍,还可以使用管路搅拌器等与水混合搅拌。水的量没有特别限制,然而优选为将该含软骨组织整体浸泡的量。这样,由于将该组织的腥臭去掉,并且向该组织中渗透水而膨胀,因此很容易除去软骨以外的部分。而且也可以在浸渍到水中之前,先将该含软骨组织预先切片或粗粉碎,或者将软骨以外的组织中可以除去的组织预先除去等。
在浸渍到水中而将组织脱臭、适度地膨胀的阶段,从鱼类的含软骨组织中提取脂肪等(即,将含软骨组织脱脂)。该脂肪等溶解或悬浮在水等中,或者成为脂肪层而漂浮在水层上。通过除去该水层及脂肪层,而除去含软骨组织中所含的脂肪。也可以利用离心分离将这些不需要物质分离除去。
工序(2):乙醇处理工序
将除去脂肪层及水层后得到的残渣(软骨组织)回收,向该残渣中加入乙醇,进一步提取脂肪而除去。通过除去脂肪,还会更加高度地加以脱臭。而且,也可以使用含水乙醇。另外,优选在加入有机溶剂前将残渣(软骨组织)粉碎。粉碎方法没有特别限制,然而例如可以使用可以将软质物质微粉碎的球磨机、振动式磨机、低温粉碎机、冷冻粉碎机、滚动球磨机、粉碎混合机、混合磨等来进行。另外,粉碎粒度也没有特别限制,然而优选为10~500μm左右,更优选为50~250μm左右。而且,该粒度可以利用激光衍射散射法来测定。
具体来说,例如,向如上所述地得到的软骨组织(优选为粉碎软骨组织)中,加入将该组织充分浸渍的容量的乙醇而静置或搅拌,其后除去该溶剂即可。另外,优选将该操作反复进行多次(例如2~5次)。或者,也可以使乙醇循环地进行脂肪除去处理。该情况下,例如可以优选使用索氏提取器等。此种处理之后,回收固体成分。也可以将所回收的固体成分风干等,而将有机溶剂完全地除去。
可以将如此得到的固体成分作为蛋白多糖含有物使用。
如果对上述工序(2)举出更具体的一个例子,则例如可以利用包括下面的〔1〕~〔9〕中记载的工序的方法来进行该工序(2)。
〔1〕将除去了皮、硬骨等附着物的鲑鱼鼻软骨用绞肉机粗粉碎。
〔2〕向粉碎了的鲑鱼鼻软骨中,加入鲑鱼鼻软骨的相同量~2倍量(体积)的pH6~7.5的自来水或净化水,在40℃以下的温度下充分地搅拌。
〔3〕搅拌后,进行离心分离机处理,采集固体成分。
〔4〕将〔2〕及〔3〕的处理反复进行1或2次。
〔5〕将所得的固体成分使用公知的湿式粉碎机进一步微粉碎。
〔6〕加入微粉碎鲑鱼微软骨的约10倍量(体积)左右的95°以上的纯度的乙醇,在40℃以下的温度下充分地搅拌。
〔7〕搅拌后,进行离心分离机处理,采集固体成分。
〔8〕将〔6〕及〔7〕的处理反复进行1~3次。
〔9〕根据需要进行干燥。
而且,在上述〔5〕中,也可以将所得的固体物暂时冷冻干燥后进行微粉碎。
工序(3):水提取处理工序
更优选将工序(2)中得到的固体成分再提供给借助水的提取工序,将用水提取出的物质作为蛋白多糖含有物使用。例如,加入能够将工序(2)中得到的固体成分充分地浸渍的量的水,搅拌后,将除去不溶物而得的溶液或其干燥物作为蛋白多糖含有物使用。所用的水通常来说pH为5.5~8.0,优选pH6.0~7.5,更优选pH6.5~7.5。具体来说,例如,在水中浸渍30分钟~6小时左右的同时搅拌,或者在利用管路混合器等与水混合搅拌等后,除去不溶物即可。除去不溶物后,也可以使用公知的方法将其干燥。另外,除去不溶物后,也可以加入以容量计为2~10倍量的乙醇,将所生成的固体成分回收。该情况下,也可以在加入乙醇前添加氯化钠。
如果对上述工序(3)举出更具体的一个例子,则例如可以在进行上述〔1〕~〔9〕后,如下面的〔10〕~〔12〕中记载的那样进行该工序(3)。
〔10〕加入〔9〕中得到的干燥物的相同量~2倍量(体积)左右的pH6~7.5的净化水,在40℃以下的温度充分地搅拌30分钟~48小时左右。
〔11〕进行离心分离处理,除去固体成分。
〔12〕根据需要进行干燥。
而且,也可以在上述〔11〕之后,再添加乙醇而搅拌,将所生成的固体成分回收。
如上所述,也可以说,本申请发明的蛋白多糖含有物是经过
(A)提纯鱼类软骨的工序;
(B)使用有机溶剂从鱼类软骨中除去脂肪的工序;
(C)使用已经除去脂肪的鱼类软骨,再进行水提取,回收提取物的工序的(A)~(B)或(A)~(C)制造的。(A)、(B)、(C)工序分别相当于上述的(1)、(2)、(3)工序。
本发明的蛋白多糖含有物可以理想地用于皮肤的抗老化。皮肤因各种要因而每天受到伤害。例如,在表皮层中,因外在要因(例如紫外线等光照射等)或内在要因(例如老龄化等)而使表皮屏蔽功能降低,经表皮透过散失水分量(transepidermal water loss:TEWL)升高。由此,肌肤变得干燥、或引起肌肤粗糙等。另外,基于相同的理由,在真皮中,也会引起胶原蛋白产生能力的降低、皮肤弹性的降低、真皮层的肥厚等,加剧皮肤的僵固化。由此,会在皮肤中产生褶皱等。
本发明的蛋白多糖含有物具有抑制及改善此种皮肤的症状的多种效果(皮肤纤维芽细胞繁殖效果、皮肤屏蔽功能增强及改善效果、皮肤胶原蛋白产生能力增强及改善效果、真皮肥厚抑制效果等对于皮肤的保湿及抗老化有利的效果),特别是可以理想地用于对由光(尤其是紫外线)照射引起的上述的皮肤症状的预防及改善。
本发明的蛋白多糖含有物的使用方式没有特别限制,然而特别优选用在口腔护理领域、化妆品领域及饮食品领域中。所以,在本发明中,包括含有本发明的蛋白多糖含有物的口腔用组合物、含有本发明的蛋白多糖含有物的化妆品组合物、以及含有本发明的蛋白多糖含有物的饮食品组合物。
口腔护理领域中所用的含有蛋白多糖含有物的口腔用组合物(以下有时记作“本发明的口腔用组合物”)可以通过将本发明的蛋白多糖含有物与口腔用组合物中所用的其他成分(例如研磨剂、发泡剂、清洗剂、表面活性剂、湿润剂、pH调节剂、增稠剂、香味剂等)适当地配合来制造。例如,可以利用常法以糊剂、软膏剂、凝胶剂、涂布剂、喷雾剂、填补剂、液体剂、漱口剂、软膏剂、口香糖、糖锭剂、片剂等形态来制造。
此种本发明的口腔用组合物特别是通过向口腔内涂布、喷雾或者漱口等,会特别地使口腔内的纤维芽细胞繁殖,增强、改善皮肤屏蔽功能,增强、改善皮肤胶原蛋白产生能力,因此适用于口腔组织的再生、防老化。
本发明的口腔用组合物的蛋白多糖含有物中所含的酸性糖成分量并没有特别限制,然而相对于组合物整体来说,通常为0.002~13质量%,优选为0.01~5质量%,更优选为0.02~3质量%。另外,该口腔用组合物的蛋白多糖含有物中所含的蛋白多糖的量没有特别限制,然而相对于组合物整体来说,通常为0.001~5质量%,优选为0.005~2质量%,更优选为0.01~1质量%。
化妆品领域中使用的、含有本发明的蛋白多糖含有物的化妆品组合物(以下有时记作“本发明的化妆品组合物”)可以通过将本发明的蛋白多糖含有物与容许用于化妆品用途的介质、基剂、载体、添加剂、或其他容许用于化妆品用途的成分、材料适当地配合,依照常法来制造。具体来说,可以举出包含本发明的蛋白多糖含有物地制造的乳液、化妆水、霜、美容液、粉底、剥撕式面膜、防晒霜等。此种本发明的化妆品组合物可以作为防晒用、晒后修复用、保湿用及抗皮肤老化用(例如干燥皮肤、皮肤粗糙、皮肤的褶皱、松弛等的预防或改善用)使用。
本发明的化妆品组合物的蛋白多糖含有物中所含的酸性糖成分量,没有特别限制,相对于组合物整体来说,通常为0.002~5质量%,优选为0.02~2质量%,更优选为0.1~2质量%。此外,该化妆品组合物的蛋白多糖含有物中所含的蛋白多糖的量相对于组合物整体来说,通常为0.001~2质量%,优选为0.01~1质量%,更优选为0.05~1质量%。
饮食品(饮料及食品)领域中使用的、含有本发明的蛋白多糖含有物的饮食品组合物(以下有时记作“本发明的饮食品组合物”)是将本发明的蛋白多糖含有物、食品卫生学上容许的基剂、载体、添加剂、或其他可以作为食品利用的成分、材料等适当地配合而得的物质。例如,可以例示出含有本发明的蛋白多糖含有物的、保湿用及抗皮肤老化用(例如干燥皮肤、皮肤粗糙、皮肤的褶皱、松弛等的预防或改善用)的加工食品、饮料、健康食品(营养功能食品、特定保健用食品等)、保健品、美容食品、病人用食品等。此外,此种包含本发明的饮食品组合物的保湿剂、抗皮肤老化剂也包含于本发明中。该保湿剂、抗皮肤老化剂可以以美容用或抗皮肤老化用(例如干燥皮肤、皮肤粗糙、皮肤的褶皱、松弛等的预防或改善用)的饮用剂、锭剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、胶冻剂、糖锭剂等形态提供。
对于本发明的饮食品组合物的蛋白多糖含有物中所含的酸性糖成分量,没有特别限制,在食品组合物或包含食品组合物的剂的情况下,相对于组合物或剂整体来说,通常为0.01~50质量%,优选为0.02~25质量%,更优选为0.1~8质量%。另外,在饮料组合物或包含饮料组合物的制剂的情况下,本发明的饮食品组合物的蛋白多糖含有物中所含的酸性糖成分量,没有特别限制,相对于组合物或剂整体来说,通常为0.002~13质量%,优选为0.01~8质量%,更优选为0.1~2质量%。此外,对于该饮食品组合物的蛋白多糖含有物中所含的蛋白多糖的量,在食品组合物或包含食品组合物的制剂的情况下,相对于组合物或剂整体来说,通常为0.005~20质量%,优选为0.01~10质量%,更优选为0.05~3质量%。在饮料组合物或包含饮料组合物的制剂的情况下,相对于组合物或剂整体来说,通常为0.001~5质量%,优选为0.005~3质量%,更优选为0.01~1质量%。
此外,如果将本发明的蛋白多糖含有物与玻尿酸或胶原蛋白一起使用,则会提高本发明的蛋白多糖含有物的效果,因此优选。所以,在上述的本发明的口腔用组合物、化妆品组合物、饮食品组合物中,也优选还配合玻尿酸和/或胶原蛋白(优选胶原蛋白水解物)。特别是,通过将本发明的蛋白多糖含有物与玻尿酸一起经口摄取,会进一步提高皮肤的保湿效果及抗老化效果,因此优选。虽然没有特别限制,然而在将本发明的蛋白多糖含有物设为1质量份时,可以并用0.01~1质量份、优选0.02~0.5质量份、更优选0.05~0.2质量份的玻尿酸。
而且,该本发明的口腔用组合物、化妆品组合物、及饮食品组合物中所含的酸性糖成分的量例如可以利用咔唑硫酸法求出。另外,可以根据将这些组合物用凝胶过滤色谱分析而得的、酸性糖检测色谱图来求出。另外,对于这些组合物中所含的蛋白多糖的量,例如可以将这些组合物用凝胶过滤色谱分析,将酸性糖检测色谱图及蛋白质检测色谱图重叠,通过将重复的峰作为蛋白多糖的形式检出、定量来决定。
另外,本发明还包括通过将本发明的蛋白多糖含有物向皮肤或口腔内涂布而获得使纤维芽细胞繁殖、或者使皮肤屏蔽功能增强、改善等本说明书中记载的效果的方法。该方法中,也可以原样不变地使用本发明的蛋白多糖含有物。另外,可以优选使用上述的本发明的口腔用组合物、化妆品组合物。适用该方法的对象没有特别限制,然而优选特别是因老化或日晒而使皮肤屏蔽功能降低的人。另外,也可以出于美容目的来使用。使用量也没有特别限制,可以适当地设定必需量。
此外,本发明还包括通过将本发明的蛋白多糖含有物经口摄取而获得使纤维芽细胞繁殖、使皮肤屏蔽功能增强、改善、使皮肤弹性改善、抑制真皮皮厚、或使皮肤胶原蛋白产生能力增强、改善等本说明书中记载的效果的方法。该方法中,也可以原样不变地使用本发明的蛋白多糖含有物。另外,可以优选使用上述的本发明的饮食品组合物。适用该方法的对象没有特别限制,然而优选特别是因老化或日晒而使皮肤屏蔽功能降低的人、皮肤弹性降低的人等。另外,也可以出于美容目的来使用。使用量也没有特别限制,可以适当地设定必需量。
实施例
以下,具体地说明本发明,然而本发明并不限定于下述的例子。
蛋白多糖含有物的制造
将鲑鱼头部浸渍在水中静置1天,使之膨胀。然后,从鲑鱼头部除去鼻软骨以外的组织而得到鲑鱼鼻软骨。将该鲑鱼鼻软骨粗粉碎,制成鲑鱼鼻软骨粉末。向该粉末100g中加入水100mL,温和地搅拌后,在室温下静置10分钟,进行脱脂。其后,进行离心分离(8000rpm,30分钟,室温),回收所得的残渣(鲑鱼鼻软骨脱脂粉末),冷冻干燥。将冷冻干燥了的鲑鱼鼻软骨脱脂粉末9.02g用超离心粉碎机制成粒径约100~200μm(利用激光衍射散射法测定)的细粉末。此后,使用20mL的乙醇将该细粉末清洗3次后风干,得到含有酸性糖成分的细粉末7.69g。以下有时将该细粉末称作“来源于鲑鱼鼻软骨的粉末”。而且,这里所说的使用乙醇的“清洗”是将细粉末分散于乙醇中后离心回收沉淀的操作(乙醇沉淀)。
继而,向来源于鲑鱼鼻软骨的粉末20g中加入1000mL的常温的净化水(pH6.5),搅拌30分钟后,在室温下静置10分钟。其后,进行离心分离(8000rpm,30分,室温),回收上清液而浓缩干固,得到含有酸性糖成分的粉末约7g。以下有时将如此得到的水提取物称作“来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物”。
在该来源于鲑鱼鼻软骨的粉末中,含有约20质量%的酸性糖成分、约9质量%的蛋白多糖(也就是说,含有约11质量%的粘多糖等酸性糖)。另外,在该来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物中,含有约35质量%的酸性糖成分、约15质量%的蛋白多糖(也就是说,含有约20质量%的粘多糖等酸性糖)。而且,该数字是在利用咔唑硫酸法将糖醛酸(葡萄糖醛酸)定量、继而在该定量法中使用广为人知的下式求出硫酸软骨素量(质量)、并将其作为酸性糖成分量时的数字。
[式1]
软骨素硫酸量=葡萄糖醛酸量×2.593
而且,以下只要没有特别指出,利用咔唑硫酸法求出的酸性糖成分量就表示与上述相同地求出的硫酸软骨素量。
另外,蛋白多糖的含有量可以如下算出,即,如下所示地在对酸性糖成分量利用糖醛酸定量进行监测的同时,进行凝胶过滤色谱分析而得到色谱图,根据该色谱图中的表示蛋白多糖的峰在整个色谱图中所占的面积比算出。也就是说,可以通过将该面积比乘以酸性糖成分量而算出。
蛋白多糖含有物的分子量的研究
对所得的蛋白多糖含有物的分子量,利用凝胶过滤色谱进行了研究。具体来说,首先,将来源于鲑鱼鼻软骨的粉末及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物作为样品用下述条件的凝胶过滤色谱进行处理,每次1mL地采集洗脱馏分,将该各馏分中所含的酸性糖量及蛋白质量分别用咔唑硫酸法及UV吸收法定量。
将作为该凝胶过滤色谱分析的结果得到的色谱图表示于图2中。其中,分析酸性糖量的色谱图表示出利用咔唑硫酸法定量的葡萄糖醛酸量(不是将该葡萄糖醛酸量乘以2.593倍而作为硫酸软骨素的量)。而且,对于来源于鲑鱼鼻软骨的粉末,为了提高纯度而用4M盐酸胍(4M GuCl)进行提取处理,将所得的提取物作为样品使用。该提取处理具体来说是如下所示地进行的。向来源于鲑鱼鼻软骨的粉末1g中加入4M GuCl,在4℃搅拌1天后离心分离,向上清液中加入3倍量的食盐饱和乙醇而放置1晚后,离心分离而回收沉淀。将该沉淀作为凝胶过滤色谱用样品。将来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物直接作为样品使用。
〔凝胶过滤色谱条件〕
色谱柱:Sepharose CL-2B填充柱(以Sepharose CL-2B作为载体而填充到的柱子中。Sepharose CL-2B的葡聚糖的分级范围是100~20000kDa,可以从GE Healthcare公司等处买到。Sepharose CL-2B是2%交联琼脂糖,粒子粒径60~200μm(基于激光衍射散射法得到),CAS注册编号65099-79-8。)
缓冲液:0.1M磷酸缓冲液(pH 7.1,含有0.2M NaCl)
应用样品量:4mg(溶解于1ml缓冲液中使用)
流速:0.15mL/min
馏分量:1mL/tube
另外,对于市售的蛋白多糖(以下也称作“PG-K”)及市售的粘多糖(软骨素)(以下也称作“PG-M”),也在相同的条件下进行凝胶过滤色谱处理,将各洗脱馏分中所含的酸性糖量定量。将结果表示于图3中。
如图2所示,在洗脱液量约为15~23mL的范围中,得到糖及蛋白质双方的峰。所以可知,该峰表示蛋白多糖。
然后,对于下述的各种葡聚糖分子量标示物,也分别在与上述相同的条件下(但是样品量为1mg)进行凝胶过滤色谱处理,利用苯酚·硫酸法将各洗脱馏分中所含的糖量(即葡聚糖量)定量。具体来说,依照Hodge,J.E.and Hofreiter,B.T.,Method inCarbohydrate Chemistry,1,338(1962)中记载的方法,如下所示地定量。
〔1〕向105×15mm的试管中加入500μl的试样水溶液或标准单糖(甘露糖)水溶液。
〔2〕加入500μl的苯酚试剂(5v/v%苯酚水溶液),搅拌。
〔3〕加入2.5ml的浓硫酸,立即剧烈搅拌10秒钟。
〔4〕在室温下放置20分钟以上。
〔5〕用分光光度计测定490nm的吸收。
<葡聚糖分子量标示物>
Dextran from Leuconostoc mesenteroides(葡聚糖来自肠膜样明串珠菌)(molwt 5,000,000-40,000,000)(SIGMA)
···空隙体积测定用、10000kDa
Dextran Standard(葡聚糖标准)1,400,000(SIGMA)···1400kDa
Dextran Standard 670,000(SIGMA)···670kDa
Dextran Standard 410,000(SIGMA)···410kDa
Dextran Standard 270,000(SIGMA)···270kDa
而且,对于标示物Dextran from Leuconostoc mesenteroides,是为了测定SepharoseCL-2B填充柱(分级上限20,000kDa)的空隙体积而使用的。为了更为准确地测定空隙体积,进行了将该标示物中所含的低分子的葡聚糖除去的前处理。前处理是通过利用上述的〔凝胶过滤色谱条件〕使Dextran from Leuconostoc mesenteroides洗脱,回收分子量20,000kDa以上的分子并冷冻干燥而进行的。具体来说,将与最先出现的峰相当的洗脱液量15~19mL的分级物回收,将其冷冻干燥(可以认为,由此可以将分子量20,000kDa以上的分子回收、冷冻干燥)。此后,将该冷冻干燥物用于色谱柱中而进行测定。
将结果得到的色谱图表示于图4a~e中。而且,图4a是测定经过上述的前处理的冷冻干燥物的图。对于图4a的来源于Leuconostoc mesenteroides的葡聚糖前处理物,由于分子量超过所用的Sepharose CL-2B填充柱的分级范围(100kDa~20000kDa),因此将与峰顶点位置对应的洗脱液量作为该色谱柱的排斥极限20000kDa的分子被洗脱的洗脱液量。而且,将该洗脱液量解释为表示色谱柱的空隙体积(Void Volume)。对于图4b~e,将与色谱图的峰面积的2等分线的位置相当的洗脱液量作为各自的标示物分子量的分子被洗脱的时间点的洗脱液量。图4b~e分别是测定Dextran Standard 1400000、670000、410000、270000的结果。将这些洗脱液量及分子量的关系加以曲线图化,制成标准线,其结果是形成直线(y=-4.1355Ln(x)+59.47;R2=0.9869)(图5),由此可以确认,利用该葡聚糖分子量标示物得到的分子量与洗脱液量的关系具有高度的相关性。
此外,根据分析结果可知,在到达空隙体积前的洗脱液中含有蛋白多糖(即,存在超过分级极限的20000kDa的蛋白多糖)的可能性很高。该凝胶过滤色谱中所用的色谱柱由于分级范围是100kDa~20000kDa,因此很有可能无法将20000kDa以上的分子准确地分级。所以,与上述相同,将来源于鲑鱼鼻软骨的粉末作为样品进行了借助下述条件的凝胶过滤色谱进行分析及各馏分的酸性糖量的定量。
〔凝胶过滤色谱条件〕
色谱柱:Sephacryl S-1000 SF填充柱(将Sephacryl S-1000 SF作为载体填充到的柱子中的材料。Sephacryl S-1000 SF的葡聚糖的分级范围是5×105~1×108Da,可以从GE Healthcare公司等处买到。)
缓冲液:0.1M磷酸缓冲液(pH7.1,含有0.2M NaCl)
应用样品量:4mg
流速:0.3mL/min
馏分量:1mL/tube
此外,将以下的分子量标示物在相同的条件下进行凝胶过滤色谱处理,利用苯酚·硫酸法将各洗脱馏分中所含的糖量(即葡聚糖量)定量而制成标准线。
<葡聚糖分子量标示物>
Dextran from Leuconostoc mesenteroides(mol wt 5000000-40000000)(SIGMA)···10000kDa
Dextran Standard 1400000(SIGMA)···1400kDa
Dextran Standard 670000(SIGMA)···670kDa
所得的标准线是
y=-3.8743 Ln(x)+59.887(R2=0.9961)
将图2及图3中所示的酸性糖量测定结果曲线图汇总在1个曲线图中,再将记载有如上所述地得到的分子量与洗脱液量的关系的图表示于图6中。如上所述,对于来源于鲑鱼鼻软骨的粉末及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物,在凝胶过滤色谱分析的洗脱量约15~23mL的范围显示出峰,而作为蛋白多糖的市售品的PG-M在约28~49mL的范围内,同样的作为市售品的PG-K在约18~47mL的范围中显示出峰。该结果表明,来源于鲑鱼鼻软骨的粉末及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物(即,本发明的蛋白多糖含有物)含有与以往所知的蛋白多糖不同的非常高分子的蛋白多糖。
另外,根据图5中所示的标准线,可以算出洗脱量23mL相当于分子量约6700kDa。根据该结果可知,来源于鲑鱼鼻软骨的粉末及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物含有分子量约6000kDa以上的蛋白多糖。
此外,将使用Sephacryl S-1000 SF填充柱分析来源于鲑鱼鼻软骨的粉末得到的结果表示于图7中。图7中,色谱图的最先显示的表示蛋白多糖的峰的上升沿从洗脱液量15~16mL的范围开始。如果使用上述的标准线(y=-3.8743 Ln(x)+59.887)算出与该洗脱液量范围相当的分子量,则大约为90000kDa。由此可知,来源于鲑鱼鼻软骨的粉末含有90000kDa左右的蛋白多糖。
根据以上的结果可以确认,来源于鲑鱼鼻软骨的粉末含有6000kDa~90000kDa左右的蛋白多糖。
此外,使用图5中所示的标准线,根据图6的各曲线图的峰位置的洗脱液量算出各试样中的蛋白多糖的平均分子量。通常来说,平均分子量是根据峰面积的2等分线位置的洗脱液量算出,然而图6中所示的各色谱图的蛋白多糖峰基本上是左右对称的,因此将峰位置设为2等分线位置而进行算出。具体来说,将实验误差及批次差也考虑在内,将峰位置的洗脱液量±1mL的范围的洗脱液量值设为标准线的y值,将所得的x值的范围设为各试样中的蛋白多糖的平均分子量。但是,对于利用该分析得到的蛋白多糖的平均分子量的上限值而言,由于所用的色谱柱(Sepharose CL-2B填充柱)的分级量上限是20000kDa,因此有可能无法准确地算出,所以还根据使用Sephacryl S-1000 SF填充柱时的结果,同样地求出蛋白多糖的平均分子量。将结果表示于表1中。
[表1]
根据以上的结果可知,本发明的蛋白多糖含有物中所含的蛋白多糖的平均分子量为9700kDa~38000kDa左右。
另外,对于来源于鲑鱼鼻软骨的粉末、以及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物,求出与将利用Sepharose CL-2B填充柱的分析得到的色谱图面积2等分的位置相当的洗脱液量(图6虚线箭头),根据该液量±1mL的范围的值求出平均分子量。其结果是,来源于鲑鱼鼻软骨的粉末中所含的酸性糖含有成分的混合物的平均分子量约为4800kDa~7700kDa,来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物中所含的酸性糖含有成分的混合物的平均分子量约为1800kDa~4200kDa。
此外,对于来源于鲑鱼鼻软骨的粉末,针对Sephacryl S-1000 SF填充柱的分析也是求出与将色谱图面积2等分的位置相当的洗脱液量(图7虚线箭头),根据该液量±1mL的范围的值求出平均分子量。其结果是,来源于鲑鱼鼻软骨的粉末中所含的酸性糖成分的平均分子量约为3900kDa~6600kDa。
蛋白多糖含有物的皮肤抗老化效果的研究
细胞繁殖促进能力评价
将来源于鲑鱼鼻软骨的粉末、来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物、以及PG-K作为样品使用,研究了它们的细胞繁殖效果。具体来说,如下所示地进行了实验。在培养皿内,在含有10%胎牛血清(FBS)的minimum essential medium(最小必需培养基:MEM培养基)中,播种1.0×104个人皮肤纤维芽细胞(HDF50:CELLAPPLICATIONS,INC),以达到1μg/mL或10μg/mL的浓度的方式将各样品添加到MEM培养基中。添加后,培养5天。培养后,除去MEM培养基,用Trypsin-EDTA(invitrogen)剥除细胞并制成悬浮液后,添加台盼蓝染色液(Sigma),用Burker-Turk计数板计测出细胞数。
将结果表示于图8中。根据该结果可知,来源于鲑鱼鼻软骨的粉末、以及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物显示出明显的人皮肤纤维芽细胞繁殖能力,而作为市售蛋白多糖的PG-K没有显示出该繁殖能力。
另外,如图6中所示,在来源于鲑鱼鼻软骨的粉末及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物、与PG-K中,在所含的成分的分子量方面存在很大差别。特别是在PG-K的色谱图中,没有看到在来源于鲑鱼鼻软骨的粉末及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物的色谱图中存在的分子量大的蛋白多糖的峰,因此可以认为,上述的人皮肤纤维芽细胞繁殖能力是由该蛋白多糖引起的。
经口摄取的保湿及抗皮肤老化能评价
<使用实验动物>
在实验中使用了无毛小鼠()(九动公司)。预饲养由雌激素改变而对皮肤状态不会造成影响的雄鼠(4周龄)后,将其用于实验中。
<试验方法>
将小鼠如表2所示地分配在5个饲养笼中(每组6只)。另外,为了能够对受检体进行个体识别,在尾部施加了标记。继续预饲养至7周龄。
[表2]
<评价材料的经口投药样品制备>
制备来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的2%分散液,进行离心分离,将其上清液作为蛋白多糖含有物的给药样品。该上清液相当于将来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物溶解于水中的物质。在将该上清液干固而得到固体成分后,在该上清液中,含有约0.7质量%的来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物。另外,利用咔唑硫酸法将该上清液中所含的酸性糖成分量定量,其结果是,相对于上清液约为0.17质量%。另外,用凝胶过滤色谱分析该上清液中所含的蛋白多糖量,根据色谱图的面积比求出,其结果是,相对于上清液约为0.07质量%。
制备玻尿酸的0.5质量%水溶液,将其作为玻尿酸的给药样品。另外,将蛋白多糖给药样品与玻尿酸给药样品的1∶1混合液(质量比)作为用于蛋白多糖及玻尿酸同时投与的给药样品。在对照组中,投与蒸留水。而且,玻尿酸使用了从中原株式会社买入的材料。
<经口投药方法>
在无毛小鼠达到7周龄的阶段,每天1次地利用探针的强制经口投药方式来投放给药样品0.5mL。以5次/周(周一~周五)的频率将该投药持续到试验结束。
各给药样品所含有的各评价材料量如下所示。
玻尿酸:2.5mg/day
蛋白多糖含有物:约3.5mg/day(酸性糖成分:约0.83mg/day、蛋白多糖:约0.33mg/day)
蛋白多糖含有物+玻尿酸:蛋白多糖含有物约1.75mg/day(酸性糖成分:约0.42mg/day、蛋白多糖:约0.17mg/day)、玻尿酸1.25mg/day
<UVB照射方法>
UVB照射是从经口投药开始4周后开始的。将小鼠装入UVB照射用笼中,放入UVB照射装置内,以1.0mW/cm2的强度、5次/周(周一~周五)地照射UVB。仅在照射第一周设为60mJ/cm2的照射量,第二周以后设为120mJ/cm2的照射量。10周的UVB照射量的总量为5.7J/cm2。而且,UVB是波长280-315nm的紫外线。
<皮肤屏蔽功能评价>
利用多探针式皮肤计测仪(MPA580:Courage-Khazaka公司)的Tewameter,以每周1次的频率测定经表皮透过散失水分量(TEWL),评价了皮肤屏蔽功能。测定各小鼠背部3处部位,算出平均值。而且,TEWL值越大,说明皮肤屏蔽功能(防止异物从皮肤之外向体内侵入的功能及防止体内的水分向外散失的功能)越低。
将从UVB照射开始8周后的TEWL测定结果表示于图9中。另外,在表3中表示出将未照射对照组(组1:Co-UVB)的TEWL值设为100、将UVB照射对照组(组2:Co+UVB)的TEWL值设为0时的组3~5的小鼠的UVB照射4周、6周、8周后的TEWL值的相对值。可以说该相对值表示了皮肤屏蔽改善率(%)。
[表3]
根据这些结果可知,来源于鲑鱼鼻软骨的蛋白多糖含有物因经口投药而降低了TEWL值,改善了皮肤屏蔽功能(图9、表3)。此外,通过将来源于鲑鱼鼻软骨的蛋白多糖含有物与玻尿酸一起经口摄取,可以快速地获得该皮肤屏蔽功能改善效果(表3)。
<皮肤弹性评价>
利用多探针式皮肤计测仪(MPA580:Courage-Khazaka公司)的Cutometer,进行了皮肤弹性测定。具体来说,测定各小鼠背部4处部位,使用所得的Uf值及Ua值利用下式算出弹性(R2值)。而且,Ua值表示抽吸松开时的皮肤的恢复,Uf值表示抽吸时的皮肤的伸展。
弹性(R2)=Ua/Uf
将从UVB照射开始8周后进行的研究结果表示于图10中(图10中,将UVB记作UV)。由该结果显示出,来源于鲑鱼鼻软骨的蛋白多糖含有物具有利用经口投药改善皮肤弹性的效果。此外,通过将来源于鲑鱼鼻软骨的蛋白多糖含有物与玻尿酸一起经口摄取,会使皮肤弹性明显地恢复。
<胶原蛋白产生能力评价>
在从UVB照射开始10周后,进行各小鼠的背部的皮肤组织采集。采集背部皮肤,将一部分进行福尔马林固定(皮肤组织切片制作用),将剩下的用于胶原蛋白定量。
将如此得到的皮肤组织(胶原蛋白定量用)冷冻,利用细胞破碎装置(AutomillTK-AM5)(Tokken)粉碎,利用真空干燥机将其干燥。向0.5M乙酸中加入蛋白酶抑制剂(P.I.)混合片(complete MINI EASY Pack(Roche公司))并使之溶解,向上述的皮肤组织粉末中加入该乙酸(加有P.I.),在低温下搅拌后进行离心分离,采集上清液部(酸可溶性胶原蛋白提取液)。
此后,使用酸可溶性胶原蛋白定量套组(Sircol Soluble Collagen Assay(biocolor公司)),根据手册,测定出上述酸可溶性胶原蛋白提取液的胶原蛋白量。
将结果表示于图11。根据该结果可知,来源于鲑鱼鼻软骨的蛋白多糖含有物因经口投药而明显地改善了皮肤的胶原蛋白产生能力的降低。
<真皮肥厚抑制效果研究>
将上述的进行了福尔马林固定的组织切片使用自动石蜡固定装置(tissueprocessor(Tissue-Tek公司))制成石蜡包埋块。用切片机制成切片,进行Hematoxylin-Eosin(HE)染色而制成样品。
利用光学显微镜观察样品,用数码相机保存图像。在所得的各个图像中,测定10处真皮层的厚度,将其平均值作为真皮层的厚度算出。将结果表示于图12中(图12中,将UVB记作UV)。根据该结果可知,来源于鲑鱼鼻软骨的蛋白多糖含有物因经口投药而明显地抑制了真皮的肥厚。此外,通过将来源于鲑鱼鼻软骨的蛋白多糖含有物与玻尿酸一起经口摄取,可以明显地抑制真皮的肥厚,其抑制能力比仅摄取来源于鲑鱼鼻软骨的蛋白多糖含有物时更为出色。
向皮肤上涂布的保湿及抗皮肤老化能评价
<使用实验动物>
在实验中使用了无毛小鼠()(九动公司)。在预饲养由雌激素变动对皮肤状态不会造成影响的雄鼠(4周龄)后,将其用于实验中。
<试验方法>
将小鼠如表4所示地分配在4个饲养笼中(每组5只)。另外,为了能够对受检体进行个体识别,在尾部施加了标记。继续预饲养至7周龄。
[表4]
<皮肤屏蔽功能评价>
在无毛小鼠达到7周龄的阶段,将涂布样品0.1mL每天1次地涂布在背部,并且与上述的“经口摄取的保湿及抗皮肤老化能评价”中记载的相同地,对无毛小鼠进行UVB照射。此后,从UVB照射开始5周后,与上述的“经口摄取的保湿及抗皮肤老化能评价”中记载的相同地,测定出经表皮透过散失水分量(TEWL)。将结果表示于图13中(图13中,将UVB记作UV)。根据该结果可知,来源于鲑鱼鼻软骨的蛋白多糖含有物通过向皮肤上涂布的方式明显地降低了TEWL值,改善了皮肤屏蔽功能。
而且,如果也考虑到,如上所述,人皮肤纤维芽细胞繁殖能力据推测是由PG-K中所不含有的分子量大的蛋白多糖引起的,则对于在此以外的各种效果,也可以认为是由该蛋白多糖引起的。
来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物的分级及效果验证
使用离子交换色谱及凝胶过滤色谱将来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物分级,研究哪个级别具有细胞繁殖效果。将该分级的概要表示于图14中。分级条件如下所示。
<离子交换色谱>
色谱柱:向φ5.0cm×20cm的色谱柱中以达到15cm高度的方式填充了载体(DEAESephacel(GE Healthcare公司))。而且,DEAE是二乙基氨基乙基的简称。
溶剂:将7M尿素-50mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)作为溶剂使用。使用向相同的溶剂中加入0~0.75M氯化钠的洗脱液,利用梯度洗脱(直线梯度)进行了洗脱。
将来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物约100mg溶解于上述溶剂约20ml中。其后,依照日本生化学会编基础生化学实验法第5卷(脂肪·糖·复合糖)p189(东京化学同人)进行操作,分级为蛋白质级别、玻尿酸级别、具有硫酸基的酸性糖级别。色谱柱的洗脱以2.0ml/min的流速进行,各馏分量设为16ml。该情况下,蛋白质级别设为将馏分No.16~35的各馏分合并的级别,玻尿酸级别设为将馏分No.37~42的各馏分合并的级别,具有硫酸基的酸性糖级别设为将馏分No.52~67的各馏分合并的级别。
而且,虽然玻尿酸也是酸性糖的一种,然而不具有硫酸基。蛋白多糖中所含的酸性糖(例如硫酸软骨素)具有硫酸基。另外,由于蛋白质(特别是胶原蛋白)、玻尿酸、具有硫酸基的酸性糖的分子极性依次变大,因此可以利用离子交换色谱将这三种分级。
蛋白质的定量是利用280nm吸光度测定进行的。玻尿酸的定量是使用生化学工业(株)的玻尿酸定量组件进行的。具有硫酸基的酸性糖的定量是利用咔唑硫酸法进行的。
相当于将来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物100mg分离的情况的蛋白质量为0.9mg,玻尿酸量为1.2mg,具有硫酸基的酸性糖为43.0mg。
使用如此得到的蛋白质级别、玻尿酸级别、具有硫酸基的酸性糖级别、以及来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物4个样品,与上述“细胞繁殖促进能力评价”相同地,研究了各样品的人皮肤纤维芽细胞繁殖能力。将结果表示于图15中。除来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物以外,相对于对照组明显地提高了人皮肤纤维芽细胞繁殖能力的仅为具有硫酸基的酸性糖级别。另外,具有硫酸基的酸性糖级别与来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物相比,人皮肤纤维芽细胞繁殖能力提高。所以可以认为,来源于鲑鱼鼻软骨的粉末的水提取物所具有的人皮肤纤维芽细胞繁殖效果是由具有硫酸基的酸性糖引起的。另外,由于在具有硫酸基的酸性糖级别中,含有很多蛋白多糖,因此可以推测该效果是由蛋白多糖造成的。
而且,在图14~16中,将具有硫酸基的酸性糖级别简记为“酸性糖级别”。
<凝胶过滤色谱>
将如上所述地得到的、具有硫酸基的酸性糖级别43.0mg进一步利用凝胶过滤色谱分级。具体来说,在使用了上述的“蛋白多糖含有物的分子量的研究”中记载的SepharoseCL-2B填充柱的凝胶过滤色谱条件下,对于在每5mg的具有硫酸基的酸性糖级别中加入1ml的缓冲液而溶解,将具有硫酸基的酸性糖级别分级为分子量5000kDa以上的级别和小于5000kDa的级别。当利用咔唑硫酸法将各个级别中所含的酸性糖量定量时,在分子量5000kDa以上的级别中含有9.7mg的酸性糖,在分子量小于5000kDa的级别中含有16.8mg的酸性糖。
将与上述相同地研究了这些级别的人皮肤纤维芽细胞繁殖效果的结果表示于图16中。发现分子量5000kDa以上的级别与分子量小于5000kDa的级别相比,人皮肤纤维芽细胞繁殖效果更高。由该结果也可以认为,该效果很大程度是是由蛋白多糖引起,特别是分子量大的(分子量5000kDa以上的)蛋白多糖的贡献大。
而且,对于图15及16的“+”、“**”、“***”的意味,与图8相同。
下面,给出本发明的口腔用组合物、化妆品组合物及饮食品组合物的处方例。%表示质量%。处方例1~7是化妆品组合物,处方例8~16是饮食品组合物,处方例17~22是口腔用组合物。
而且,对于以下的各处方例中所用的蛋白多糖含有物的制造方法,也一并记载如下。
<蛋白多糖含有物A>
〔1〕将除去了皮、硬骨等附着物的鲑鱼鼻软骨用绞肉机粗粉碎。
〔2〕向粉碎了的鲑鱼鼻软骨中,加入鲑鱼鼻软骨的2~3倍量左右(体积)的pH6.0~7.5的自来水或净化水,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔3〕搅拌后,分离采集固体成分。
〔4〕将〔2〕及〔3〕的处理反复进行2次。
〔5〕将所得的固体物冷冻干燥。
〔6〕将干燥固体物使用细磨粉碎机进一步微粉碎。
〔7〕加入所述微粉碎鲑鱼微软骨的约10倍量(体积)左右的95度乙醇,在40℃以下的温度下充分地搅拌。
〔8〕搅拌后,分离采集固体成分。
〔9〕将〔7〕及〔8〕的处理反复进行2次。
〔10〕干燥,得到固体物。
<蛋白多糖含有物B>
〔1〕加入蛋白多糖含有物A的10倍量(体积)左右的pH6.0~7.0的净化水,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌30分钟~6小时左右。
〔2〕将固体成分分离除去后,干燥而得到固体成分。
<蛋白多糖含有物C>
〔1〕加入蛋白多糖含有物A的10倍量(体积)左右的pH6.0~7.0的净化水,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌30分钟~6小时左右后,分离除去固体成分。
〔2〕添加所得的水溶液的5倍量左右的乙醇,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔3〕分离采集所生成的固体物,进行干燥。
<蛋白多糖含有物D>
〔1〕将除去了皮、硬骨等附着物的鲑鱼鼻软骨用绞肉机粗粉碎。
〔2〕向粉碎了的鲑鱼鼻软骨中,加入鲑鱼鼻软骨的相同量~2倍量左右(体积)的pH6.5~7.5的净化水,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔3〕搅拌后,分离采集固体物。
〔4〕将〔2〕及〔3〕的处理反复进行3次。
〔5〕将所得的固体物使用湿式粉碎机进行微粉碎。
〔6〕加入所述微粉碎鲑鱼微软骨的10倍量(体积)左右的95度乙醇,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔7〕搅拌后,分离采集固体物。
〔8〕将〔6〕及〔7〕的处理重复进行1次。
〔9〕干燥,得到固体物。
〔10〕加入〔9〕中得到的干燥物的10倍量(体积)左右的pH6.5~7.5的净化水,在低温下搅拌12~48小时左右的同时浸渍。
〔11〕浸渍后,分离除去固体物。
〔12〕添加水溶液的5倍量左右的乙醇,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔13〕分离采集所生成的固体物,进行干燥。
<蛋白多糖含有物E>
〔1〕将除去了皮、硬骨等附着物的鲑鱼鼻软骨用绞肉机粉碎。
〔2〕向粉碎了的鲑鱼鼻软骨中,加入鲑鱼鼻软骨的5倍量左右(体积)的pH6.0~7.5的自来水,在40度以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔3〕搅拌后,分离采集固体成分。
〔4〕将〔2〕及〔3〕的处理反复进行2次。
〔5〕将所得的固体成分使用湿式粉碎机进行微粉碎。
〔6〕加入微粉碎鲑鱼微软骨的5倍量(体积)左右的95度乙醇,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔7〕搅拌后,分离采集固体成分。
〔8〕将〔6〕及〔7〕的处理反复进行2次。
〔9〕加入所得的固体成分的相同量~2倍量(体积)的pH6.0~7.0的净化水,在40℃以下的温度下充分地搅拌30分钟~6小时左右后,分离除去固体成分。
<蛋白多糖含有物F>
〔1〕将除去了皮、硬骨等附着物的鲑鱼鼻软骨用湿式粉碎机粗粉碎。
〔2〕向粉碎了的鲑鱼鼻软骨中,加入鲑鱼鼻软骨的5倍量左右(体积)的pH6.0~7.5的自来水,在40度以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔3〕搅拌后,分离采集固体成分。
〔4〕将〔2〕及〔3〕的处理反复进行2次。
〔5〕将所得的固体成分使用湿式粉碎机进行微粉碎。
〔6〕加入微粉碎鲑鱼微软骨的5倍量(体积)左右的乙醇(食品添加物基准品),在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔7〕搅拌后,分离采集固体成分。
〔8〕将〔6〕及〔7〕的处理反复进行2次。
〔9〕加入所得的固体成分的5倍量(体积)的pH6.0~7.0的净化水,在40℃以下的温度下充分地搅拌30分钟~6小时左右后,分离除去固体成分。
〔10〕添加所得的水溶液的10倍量左右的95度乙醇,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌,分离采集所生成的固体物后,干燥而得到固体物。
<蛋白多糖含有物G>
〔1〕将除去了皮、硬骨等附着物的鲑鱼鼻软骨用湿式粉碎机粗粉碎。
〔2〕向粉碎了的鲑鱼鼻软骨中,加入鲑鱼鼻软骨的10倍量左右(体积)的pH6.0~7.5的自来水,在40度以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔3〕搅拌后,分离采集固体成分。
〔4〕将〔2〕及〔3〕的处理反复进行2次。
〔5〕将所得的固体成分使用湿式粉碎机进行微粉碎。
〔6〕加入微粉碎鲑鱼微软骨的3倍量(体积)左右的95度乙醇,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌。
〔7〕搅拌后,分离采集固体成分。
〔8〕将〔6〕及〔7〕的处理反复进行3次。
〔9〕加入所得的固体成分的2~3倍量(体积)左右的pH6.0~7.0的净化水,在40℃以下的温度下充分地搅拌30分钟~6小时左右后,分离除去固体成分。
〔10〕向分离后的水溶液中添加氯化钠,使氯化钠为饱和状态。
〔11〕添加水溶液的5倍量左右的95度乙醇,在40℃以下的温度(室温)下充分地搅拌,分离采集所生成的固体物后,干燥而得到固体物。
而且,对于蛋白多糖含有物A~D,利用咔唑硫酸法求出酸性糖量,根据色谱图的面积比求出蛋白多糖量,其结果是,以干燥质量换算,相对于蛋白多糖含有物的质量比如下所示。
A:酸性糖约35%,蛋白多糖约15%
B:酸性糖约45%,蛋白多糖约18%
C:酸性糖约55%,蛋白多糖约23%
D:酸性糖约60%,蛋白多糖约24%
[处方例]
处方例1:化妆水
处方例2:美容液
处方例3:乳液
处方例4:霜
处方例5:育毛剂
处方例6:护发素
处方例7:毛孔紧致露
处方例8:粉末糙米饮料
处方例9:片剂
处方例10:粉末食品
处方例11:丸剂
处方例12:糖剂
处方例13:咀嚼片
处方例14:粉末茶
实施例15:胶囊剂
实施例16:口香糖
处方例17:口腔用凝胶剂
处方例18:口腔用涂布剂
处方例19:漱口剂
处方例20:液体洁齿剂
处方例21:洁齿剂
处方例22:小鼠喷雾剂
Claims (14)
1.蛋白多糖含有物在皮肤老化抑制用的经皮组合物的制造中的用途,所述蛋白多糖含有物是从鲑鱼鼻软骨中得到的、包含蛋白多糖及酸性糖作为酸性糖成分的蛋白多糖含有物,其中,
所述蛋白多糖含有物包含分子量为2000kDa以上的酸性糖成分,包含平均分子量为6000kDa~90000kDa的蛋白多糖。
2.根据权利要求1所述的用途,其中,
所述蛋白多糖含有物含有的蛋白多糖的平均分子量在7000kDa~50000kDa的范围。
3.根据权利要求1所述的用途,其中,
所述蛋白多糖含有物含有的蛋白多糖的平均分子量在9000kDa~40000kDa的范围。
4.根据权利要求3所述的用途,其中,
所述蛋白多糖含有物含有的蛋白多糖的20质量%以上具有10000kDa以上的分子量。
5.根据权利要求3所述的用途,其中,
所述蛋白多糖含有物含有的蛋白多糖的30质量%以上具有10000kDa以上的分子量。
6.根据权利要求1所述的用途,其中,
所述蛋白多糖含有物含有的酸性糖成分的50质量%以上具有2000kDa以上的分子量。
7.根据权利要求6所述的用途,其中,
所述蛋白多糖含有物含有的酸性糖成分的65质量%以上具有2000kDa以上的分子量。
8.根据权利要求7所述的用途,其中,
所述蛋白多糖含有物含有的酸性糖成分的平均分子量在4000kDa~8000kDa的范围。
9.根据权利要求1所述的用途,其中,
所述蛋白多糖含有物含有的蛋白多糖的20质量%以上具有10000kDa以上的分子量。
10.根据权利要求1所述的用途,其中,
所述经皮组合物为化妆品组合物。
11.根据权利要求10所述的用途,其中,
所述经皮组合物为在所述蛋白多糖含有物中相对于组合物整体含有0.002~2质量%的蛋白多糖的化妆品组合物。
12.根据权利要求1所述的用途,其中,所述皮肤老化抑制是皮肤屏蔽功能改善、皮肤弹性改善、胶原蛋白产生下降的抑制或真皮肥厚抑制中的任一种。
13.蛋白多糖含有物和透明质酸在皮肤老化抑制用的经皮组合物的制造中的用途,所述蛋白多糖含有物是从鲑鱼鼻软骨中得到的、包含蛋白多糖及酸性糖作为酸性糖成分的蛋白多糖含有物,其中,
所述蛋白多糖含有物包含分子量为2000kDa以上的酸性糖成分,包含平均分子量为6000kDa~90000kDa的蛋白多糖。
14.根据权利要求13所述的用途,其用于在皮肤老化抑制用的经皮组合物的制造,所述蛋白多糖含有物是从鱼类的软骨中得到的、包含蛋白多糖及酸性糖作为酸性糖成分的蛋白多糖含有物,其中,
所述蛋白多糖含有物包含分子量为2000kDa以上的酸性糖成分,包含平均分子量为6000kDa~90000kDa的蛋白多糖,
相对于蛋白多糖含有物1质量份,含有0.01~1质量份的透明质酸。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009168123 | 2009-07-16 | ||
JP2009-168123 | 2009-07-16 | ||
CN201080040456.0A CN102573873B (zh) | 2009-07-16 | 2010-07-16 | 蛋白多糖含有物 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201080040456.0A Division CN102573873B (zh) | 2009-07-16 | 2010-07-16 | 蛋白多糖含有物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104274338A CN104274338A (zh) | 2015-01-14 |
CN104274338B true CN104274338B (zh) | 2018-02-16 |
Family
ID=43449495
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201080040456.0A Active CN102573873B (zh) | 2009-07-16 | 2010-07-16 | 蛋白多糖含有物 |
CN201410469513.7A Active CN104274338B (zh) | 2009-07-16 | 2010-07-16 | 蛋白多糖含有物的用途 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201080040456.0A Active CN102573873B (zh) | 2009-07-16 | 2010-07-16 | 蛋白多糖含有物 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20120157391A1 (zh) |
EP (1) | EP2455097B1 (zh) |
JP (2) | JP5933264B2 (zh) |
CN (2) | CN102573873B (zh) |
ES (1) | ES2566551T3 (zh) |
WO (1) | WO2011007885A1 (zh) |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20120157391A1 (en) | 2009-07-16 | 2012-06-21 | Hirosaki University | Proteoglycan-containing material |
JP6362825B2 (ja) * | 2011-01-19 | 2018-07-25 | 国立大学法人弘前大学 | 水棲動物軟骨抽出物 |
WO2012099216A1 (ja) | 2011-01-19 | 2012-07-26 | 国立大学法人弘前大学 | プロテオグリカンの大量調製法 |
TW201311289A (zh) * | 2011-06-03 | 2013-03-16 | 大正製藥股份有限公司 | 用以維持或改善皮膚屏障功能之組成物 |
JP2013039087A (ja) * | 2011-08-18 | 2013-02-28 | Fuji Agri Arsh:Kk | プロテオグリカンを含有してなる飲料水及びその製造方法 |
JP5921872B2 (ja) * | 2011-12-22 | 2016-05-24 | 一丸ファルコス株式会社 | 口腔用組成物 |
JP6006545B2 (ja) * | 2012-06-27 | 2016-10-12 | 日本薬品株式会社 | プロテオグリカンの製造方法 |
CN104507484B (zh) * | 2012-07-25 | 2019-08-30 | 国立大学法人弘前大学 | 变形性关节病预防或治疗用组合物 |
CN104640462B (zh) * | 2012-09-27 | 2018-05-08 | 三得利控股株式会社 | 含有胶原肽的水性液体组合物 |
JP6253047B2 (ja) * | 2013-01-24 | 2017-12-27 | 地方独立行政法人青森県産業技術センター | プロテオグリカン及び化粧料 |
JP6324733B2 (ja) * | 2014-01-17 | 2018-05-16 | 株式会社ファンケル | コラーゲンの三重螺旋構造安定化剤 |
JP6005780B2 (ja) * | 2015-03-02 | 2016-10-12 | 株式会社Agt&T | ネイルアートの除去方法及び形成方法ならびに指先保護剤 |
JP6501350B2 (ja) * | 2015-03-03 | 2019-04-17 | 国立大学法人弘前大学 | 動物の軟骨からプロテオグリカンを調製する方法 |
KR101913085B1 (ko) * | 2015-07-03 | 2018-10-29 | 닛산 지도우샤 가부시키가이샤 | 연료 전지 |
JP2017014167A (ja) * | 2015-07-03 | 2017-01-19 | 株式会社Agt&T | 化粧用組成物 |
EP3432860B1 (en) | 2016-03-22 | 2022-12-21 | Avicenna Nutraceutical, LLC | Hydrolyzed collagen compositions and methods of making thereof |
JP6782463B2 (ja) * | 2016-03-25 | 2020-11-11 | 日本薬品株式会社 | コンドロイチン硫酸プロテオグリカン及びコンドロイチン硫酸グリコサミノグリカンの分別・定量方法 |
CN106236675B (zh) * | 2016-09-27 | 2020-04-28 | 广东丸美生物技术股份有限公司 | 一种具有保湿和抗衰老功效的护肤基质及其制备与应用 |
JP6883723B2 (ja) * | 2017-01-17 | 2021-06-09 | 株式会社ピカソ美化学研究所 | リポソーム、リポソーム液及び化粧料、並びに上記リポソームを製造する方法 |
JP7156684B2 (ja) * | 2018-09-28 | 2022-10-19 | 株式会社東洋新薬 | 経口組成物 |
JP7197891B2 (ja) * | 2018-10-18 | 2022-12-28 | 国立大学法人 和歌山大学 | プロテオグリカン及び/又はグリコサミノグリカンの製造方法 |
JP7143727B2 (ja) * | 2018-11-06 | 2022-09-29 | 日油株式会社 | 毛髪用化粧料 |
JP7127536B2 (ja) * | 2018-12-27 | 2022-08-30 | 日油株式会社 | 水性皮膚化粧料 |
JP6611968B1 (ja) | 2019-01-17 | 2019-11-27 | 株式会社リナイス | プロテオグリカン含有組成物の製造方法及びプロテオグリカン含有組成物 |
JP7389419B2 (ja) * | 2019-03-14 | 2023-11-30 | 国立大学法人弘前大学 | エストロゲン様作用剤、食品組成物および皮膚外用剤 |
RU2738448C2 (ru) * | 2019-05-13 | 2020-12-14 | Богдан Иванович Асатуров | Способ получения и применения биологически активной добавки на основе протеогликанов и гликозаминогликанов |
KR102337667B1 (ko) * | 2019-10-02 | 2021-12-09 | 휴젤(주) | 피부 보습용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 |
US20230124809A1 (en) * | 2020-03-27 | 2023-04-20 | Nof Corporation | Composition for oral cavity |
CN111704662A (zh) * | 2020-08-07 | 2020-09-25 | 上海辉文生物技术股份有限公司 | 一种大分子量蛋白聚糖的制备方法 |
JP6984832B1 (ja) * | 2020-08-25 | 2021-12-22 | 国立大学法人弘前大学 | 発毛促進剤 |
CN115137076A (zh) * | 2022-07-20 | 2022-10-04 | 广州纽缤乐营养科技股份有限公司 | 一种用于补水保湿的食品组合物及其制备方法 |
WO2024097704A1 (en) * | 2022-11-02 | 2024-05-10 | Zanda, Llc | Herbal formulation for improvement of skin growth |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008247803A (ja) * | 2007-03-30 | 2008-10-16 | Hirosaki Univ | サケ軟骨に含まれるプロテオグリカンの新規な薬理用途 |
Family Cites Families (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5318520B2 (zh) | 1972-07-05 | 1978-06-15 | ||
US4350682A (en) | 1979-05-11 | 1982-09-21 | Lescarden Ltd. | Cartilage extraction processes and products |
US4473551A (en) * | 1982-08-23 | 1984-09-25 | Faxon Pharmaceuticals, Inc. | Anti-inflammatory composition |
EP1012163A4 (en) | 1997-07-11 | 2003-01-29 | Cv Technologies Inc | PREPARATION BASED ON SHARK CARTILAGE FOR THE TREATMENT OF DISEASES LINKED TO EXCESS PHTR OR INTRACELLULAR CALCIUM |
WO2000035959A1 (fr) * | 1998-12-17 | 2000-06-22 | Fujii Suisan Co., Ltd. | Procede pour traiter des tetes de poissons et appareil pour separer les tetes de poissons traitees |
JP2000175617A (ja) * | 1998-12-17 | 2000-06-27 | Fujii Suisan:Kk | 魚類頭部の処理方法 |
JP2001172296A (ja) | 1999-10-07 | 2001-06-26 | Japan Science & Technology Corp | 軟骨型プロテオグリカンの精製方法 |
JP2001247602A (ja) * | 2000-03-02 | 2001-09-11 | Mitsuo Takai | 鮭由来のコンドロイチン硫酸 |
JP3731150B2 (ja) | 2000-08-22 | 2006-01-05 | 株式会社角弘 | 軟骨型プロテオグリカンの精製方法 |
JP4018358B2 (ja) * | 2001-08-10 | 2007-12-05 | アルフレッサファーマ株式会社 | 経口投与用創傷治癒促進剤 |
JP2003171256A (ja) * | 2001-12-03 | 2003-06-17 | Nonogawa Shoji Kk | 皮膚外用剤 |
WO2003054208A2 (en) * | 2001-12-13 | 2003-07-03 | Ism Biopolymer Inc. | Method of modulating release of saccharides and uses thereof |
JP2003299497A (ja) | 2002-02-05 | 2003-10-21 | Masayoshi Kachi | ムコ多糖類及びその製造方法 |
CN1436537A (zh) * | 2002-02-07 | 2003-08-20 | 张晓崧 | 以透明质酸作为功效成份的口服液 |
US7504115B2 (en) | 2002-02-15 | 2009-03-17 | Ocean Nutrition Canada Limited | Shark cartilage extracts and use thereof for immunomodulation |
JP3756838B2 (ja) * | 2002-04-09 | 2006-03-15 | 日本メナード化粧品株式会社 | 皮膚外用剤 |
US20060051316A1 (en) * | 2002-12-05 | 2006-03-09 | Hiromu Ohnogi | Remedy |
CN1720040A (zh) * | 2002-12-05 | 2006-01-11 | 宝生物工程株式会社 | 治疗剂 |
EP1590369B1 (en) | 2003-01-24 | 2016-03-16 | Applied Molecular Evolution, Inc. | Human il-1 beta antagonists |
EP1614697A4 (en) | 2003-03-20 | 2007-10-10 | Hosokawa Micron Kk | FROM CORTAR FISH ISOLATED PROTEOGLYKAN AND METHOD OF MANUFACTURING THEREOF |
US7094880B2 (en) * | 2003-07-25 | 2006-08-22 | The Texas A&M University System | Decorin proteoglycan inhibitor of fibrinogen blood clotting |
JP2005075740A (ja) * | 2003-08-28 | 2005-03-24 | Hajime Otani | 免疫賦活化組成物、並びにそれが含まれた医薬品、動物薬、食品、飼料及び化粧品 |
JP2005113106A (ja) | 2003-10-07 | 2005-04-28 | Ryota Katahira | 粗コンドロイチン硫酸類の製造法 |
CN1654670A (zh) | 2004-02-13 | 2005-08-17 | 四川省天然产物分离工程研究中心 | 一种硫酸软骨素的制备方法 |
JP2006143605A (ja) * | 2004-11-16 | 2006-06-08 | Miyao Shunsuke | 繊維芽細胞の増殖を促進させる経皮投与剤および経口投与剤の製造方法 |
US20090253794A1 (en) * | 2005-07-22 | 2009-10-08 | Jun Tomono | Fibroblast Activator, Collagen Production Promoter, Collagen Contraction Promoter, Hyaluronic Acid Production Promoter, ATP Production Promoter, Melanin Formation Inhibitor, and Agent for External Application to the Skin |
JP4982718B2 (ja) * | 2005-08-31 | 2012-07-25 | 株式会社林原 | 美肌用の経口摂取用組成物 |
CN101384611A (zh) | 2006-02-14 | 2009-03-11 | 财团法人钏路根室圈产业技术振兴中心 | 蛋白多糖的制造方法 |
JP4035553B2 (ja) | 2006-03-20 | 2008-01-23 | 株式会社日本バリアフリー | 有用組成物の製造方法 |
JP2009274955A (ja) | 2006-08-24 | 2009-11-26 | Hokkaido Univ | 変形性関節症治療薬 |
CN101230369B (zh) | 2007-01-25 | 2011-02-09 | 浙江海洋学院 | 软骨素的提取方法 |
JP2007262103A (ja) | 2007-07-24 | 2007-10-11 | Toshitsu Kagaku Kenkyusho:Kk | 変形性関節症の治療剤 |
EP2060562A1 (en) | 2007-11-16 | 2009-05-20 | Laboratoire Medidom S.A. | Dioxoanthracene sulphonate derivatives |
JP5252623B2 (ja) * | 2008-01-22 | 2013-07-31 | 国立大学法人弘前大学 | プロテオグリカンの抽出方法 |
US20100285134A1 (en) | 2008-02-15 | 2010-11-11 | Bone Therepeutics | Pharmaceutical composition for use in the treatment and/or the prevention of osteoarticular diseases |
JP2009263318A (ja) | 2008-04-30 | 2009-11-12 | Hokkaido Univ | モノクローナル抗体、ハイブリドーマ、免疫原の製造方法 |
US8188235B2 (en) | 2008-06-18 | 2012-05-29 | Pfizer Inc. | Antibodies to IL-6 and their uses |
CN101358220A (zh) | 2008-09-25 | 2009-02-04 | 王清荣 | 鲨鱼软骨中提取硫酸软骨素钙的方法 |
US20120157391A1 (en) | 2009-07-16 | 2012-06-21 | Hirosaki University | Proteoglycan-containing material |
JP6362825B2 (ja) | 2011-01-19 | 2018-07-25 | 国立大学法人弘前大学 | 水棲動物軟骨抽出物 |
WO2012099216A1 (ja) | 2011-01-19 | 2012-07-26 | 国立大学法人弘前大学 | プロテオグリカンの大量調製法 |
-
2010
- 2010-07-16 US US13/383,987 patent/US20120157391A1/en not_active Abandoned
- 2010-07-16 JP JP2011522880A patent/JP5933264B2/ja active Active
- 2010-07-16 CN CN201080040456.0A patent/CN102573873B/zh active Active
- 2010-07-16 WO PCT/JP2010/062125 patent/WO2011007885A1/ja active Application Filing
- 2010-07-16 EP EP10799943.5A patent/EP2455097B1/en active Active
- 2010-07-16 CN CN201410469513.7A patent/CN104274338B/zh active Active
- 2010-07-16 ES ES10799943.5T patent/ES2566551T3/es active Active
-
2013
- 2013-10-04 US US14/046,160 patent/US9585828B2/en active Active
-
2016
- 2016-01-20 JP JP2016009223A patent/JP6099777B2/ja active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008247803A (ja) * | 2007-03-30 | 2008-10-16 | Hirosaki Univ | サケ軟骨に含まれるプロテオグリカンの新規な薬理用途 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102573873B (zh) | 2014-10-08 |
US20140080761A1 (en) | 2014-03-20 |
JP5933264B2 (ja) | 2016-06-08 |
EP2455097A4 (en) | 2013-02-27 |
ES2566551T3 (es) | 2016-04-13 |
EP2455097A1 (en) | 2012-05-23 |
JP2016128467A (ja) | 2016-07-14 |
JP6099777B2 (ja) | 2017-03-22 |
US20120157391A1 (en) | 2012-06-21 |
CN104274338A (zh) | 2015-01-14 |
WO2011007885A1 (ja) | 2011-01-20 |
JPWO2011007885A1 (ja) | 2012-12-27 |
EP2455097B1 (en) | 2016-02-17 |
US9585828B2 (en) | 2017-03-07 |
CN102573873A (zh) | 2012-07-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104274338B (zh) | 蛋白多糖含有物的用途 | |
JP7141645B2 (ja) | 水棲動物軟骨抽出物 | |
RU2592850C2 (ru) | Способ крупномасштабного получения протеогликана | |
KR20170130968A (ko) | 저분자 콜라겐 펩티드 및 이를 이용한 식품 조성물의 제조 방법 | |
CN104800124B (zh) | 一种防止皮肤老化的化妆品原料组合物及含有该化妆品原料组合物的化妆品 | |
CN108125244A (zh) | 一种具有抗衰老美白功能的食品组合物及其制备方法 | |
EA004702B1 (ru) | Сульфированные сахариды | |
CN108434064A (zh) | 兼具皮肤抗炎袪痘和修复功能的护肤品 | |
JP7213307B2 (ja) | プロテインl-イソアスパラギン酸メチルトランスフェラーゼ活性化用組成物 | |
Al-Alimi et al. | Tannins acid, ascorbic acid and fluoride from khat chewing plant | |
KR101618726B1 (ko) | 명태껍질로부터 엘라스틴을 포함하는 단백질추출물을 제조하는 방법 | |
CN105168092B (zh) | 具有生物活性和保湿美白功能的洁面组合物及其制备方法 | |
JP2022065760A (ja) | 化粧品組成物 | |
JP2022073223A (ja) | 食品組成物 | |
CN115957157A (zh) | 均匀肤色、修复肌肤的藻类复合提取组合物及其应用 | |
JP2022070061A (ja) | 外用組成物 | |
KR101609217B1 (ko) | 해파리로부터 당단백질을 제조하는 방법 및 그 당단백질을 함유하는 화장료 조성물 | |
CN113648268A (zh) | 一种爽身粉组合物及其制备方法 | |
Pawłowska-Góral et al. | The results of the interference of nitrates and vitamin E in the metabolism in the connective tissue of rat's liver |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |