CN111704662A - 一种大分子量蛋白聚糖的制备方法 - Google Patents
一种大分子量蛋白聚糖的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111704662A CN111704662A CN202010787918.0A CN202010787918A CN111704662A CN 111704662 A CN111704662 A CN 111704662A CN 202010787918 A CN202010787918 A CN 202010787918A CN 111704662 A CN111704662 A CN 111704662A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- molecular weight
- high molecular
- producing high
- proteoglycan
- drying
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/461—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from fish
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种大分子量蛋白聚糖的制备方法，包括如下步骤：1)原料处理：以鲑鱼鼻软骨作为原料，清洗；2)向提取罐中加水，加热后缓慢搅拌升温，保温；3)粗过滤：利用震荡过滤机进行过滤，得到粗过滤液；4)离心过滤：将粗过滤液进行离心过滤，得到均一半透明的离心滤液；5)膜分离：将上述离心滤液进行超滤膜分离操作；6)灭菌：将膜分离的料液升温，保温灭菌结束后趁热灌装；7)冷冻干燥：将灭菌浓缩液放入冷库中进行速冻降温，冷却完成后放入冷冻干燥机干燥；8)粉碎：冷冻干燥结束后，依次进行粉碎、称重、取样和分子量检测。本发明可以获得较高的收率与较高的分子量，获得性能优异的蛋白聚糖产品。
Description
技术领域
本发明涉及生物化工技术领域，尤其涉及一种大分子量蛋白聚糖的制备方法。
背景技术
蛋白聚糖(proteoglycan，PG)是一类特殊的糖蛋白，是蛋白聚糖的糖链与Ⅱ型胶原蛋白相结合的高分子复合体结构，是一种细胞外基质的基本成分。
鲑鱼又称三文鱼，是深海鱼类的一种，也是一种非常有名的溯河洄游鱼类，被国际美食界誉为“冰海之皇”。北海道渔场，位于千岛寒流与日本暖流的北海道附近海域，自然环境优良，鱼群密集，是世界第一大渔场，出产大量鲑鱼。在日本，鲑鱼肉不但是世界著名美食，而且鲑鱼的鼻软骨在东北地方会以“醋拌冰头”的方式进行食用，有丰富的食用经验。
现有技术中缺少关于大分子量蛋白聚糖的制备方法，制约了蛋白聚糖的发展及其在各领域的应用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述问题，提供一种大分子量蛋白聚糖的制备方法。
为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现：
一种大分子量蛋白聚糖的制备方法，包括如下步骤：
1)原料处理：以鲑鱼鼻软骨作为原料，将原料投入罐内，加3-15倍量的纯水，检查最后清洗排水样，送检透光率达到90％以上为原料处理合格；该步骤的主要目的为去除多余的脂类化合物，使产品纯度更高；
2)煮提：使用处理完的原料，向提取罐中加入1-10倍的水，加热至40-80℃后缓慢搅拌升温至80-100℃，保温0.5-5小时；
3)粗过滤：将上述煮提得到的料液趁热利用震荡过滤机进行过滤，得到粗过滤液；
4)离心过滤：将上述粗过滤液进行离心过滤，得到均一半透明的离心滤液；
5)膜分离：将上述离心滤液进行超滤膜分离操作，膜分离终点为料液糖度达到10-12，超滤膜分离操作停止；
6)灭菌：将膜分离的料液升温至83-85℃，保温灭菌45分钟，灭菌结束后趁热灌装在洁净中转桶中；
7)冷冻干燥：将上述灭菌浓缩液放入冷库中进行速冻降温，-18℃冷冻保存，冷却完成后放入冷冻干燥机干燥；
8)粉碎：冷冻干燥结束后，取出干燥固体，依次进行粉碎、称重、取样和分子量检测。
本发明的一个优选方案为，步骤1)中，加10倍量的纯水。
本发明的一个优选方案为，步骤2)中，保温至料液中无明显可见鲑鱼软骨。
本发明的一个优选方案为，步骤2)中，震荡过滤机使用的滤网目数为100目。
本发明的一个优选方案为，步骤2)中，加热至50-55℃后缓慢搅拌升温至95℃。
本发明的一个优选方案为，步骤3)中，震荡过滤机使用的滤网目数为100目。
本发明的一个优选方案为，步骤5)中，超滤膜的分子截留量为10000道尔顿。
本发明的一个优选方案为，所述分子量检测基于凝胶渗透色谱，即用溶剂作流动相，流经多孔填料作为分离介质的液相色谱法。
本发明的一个优选方案为，所述分子量检测的标准溶液为右旋糖苷，用0.1mol/L硝酸钠溶液溶解，配制成0.1W/V％溶液。
本发明的一个优选方案为，所述分子量检测的样品溶液配制：取样品20mg，用5mL的0.1mol/L硝酸钠溶液溶解，溶胀24h，过微孔滤膜后，即为样品溶液。
本发明的有益效果是：
本发明通过对海洋鱼类软骨预漂洗、提取、精制、膜分离和干燥，得到该蛋白聚糖物质，其制备方法可以最大程度的得到大分子量的蛋白聚糖。作为食品原料，较其他同类产品，具有更明显的改善骨关节健康的作用，降低膝盖疼痛的程度。作为化妆品原料，具有很好的保湿作用和增加皮肤弹性和紧致度的作用。该产品可应用于各种化妆品、食品甚至是药品中。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上的所有优点。
具体实施方式
基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
分子量的检测方法：
该产品的一个重要指标就是产品的分子量。现使用凝胶渗透色谱，也称作体积排阻色谱，是用溶剂作流动相，流经多孔填料作为分离介质的液相色谱法。按照分子量大小不同进行分离。对不同大小的组分分子，可分别渗入到凝胶孔内的不同深度，大个的组分分子可以渗入到凝胶的大孔内，但进不了小孔甚至于完全被排斥。小个的组分分子，大孔小孔都可以渗入，甚至进入很深，一时不易洗脱出来。因此，大的组分分子在色谱柱中停留时间较短，很快被洗脱出来，它的洗脱体积很小，小的组分分子在色谱柱中停留时间较长，洗脱体积较大，直到所有孔内的最小分子到达柱出口，完成按分子大小而分离的洗脱过程。
仪器及耗材：
岛津高效液相色谱仪；GPC数据处理程序
溶液配制：
(1)标准品溶液配制：右旋糖苷(Dextran Standard)用0.1mol/L硝酸钠溶液溶解，配制成0.1W/V％溶液。右旋糖苷标准品信息如下：
(2)样品溶液配制：取样品20mg，用5ml的0.1mol/L硝酸钠溶液溶解，溶胀24h，过微孔滤膜后，即为样品溶液。
色谱条件：
检测器：示差检测器；色谱柱：日本昭和电工Shodex色谱柱(SB-806M HQ)；流动相：0.1mol/L硝酸钠溶液；柱温：50℃；流速：0.5ml/min；进样量：50μl。
分子量测定
(1)将标准品溶液注入HPLC，用GPC程序绘制时间-分子量标准曲线。
(2)将样品溶液注入HPLC，用GPC程序进行分子量大小计算。
(3)用单分散标样法进行分子量大小计算。
实施例1：
取鲑鱼鼻软骨1000g，加入10000mL纯水，搅拌清洗5分钟，过80目筛网，反复清洗三次。使用处理完的原料，加入8000mL水，加热到50℃开始缓慢搅拌，升温至95℃开始计时，保持温度在95℃，提取2小时。离心机过滤，可以获得蛋白聚糖提取液。将蛋白聚糖提取液用膜分离至糖度为11时停止，83℃～85℃保温灭菌45分钟，然后放入零下18℃下保温16小时。冷却完成后冷冻干燥获得蛋白聚糖干粉。
实施例2：
取鲑鱼鼻软骨1000g，加入3000mL纯水，搅拌清洗3分钟，过80目筛网，反复清洗二次。使用处理完的原料，加入3000mL水，加热到40℃开始缓慢搅拌，升温至80℃开始计时，保持温度在80℃，提取0.5小时。离心机过滤，可以获得蛋白聚糖提取液。将蛋白聚糖提取液用膜分离至糖度为10时停止，83℃～85℃保温灭菌45分钟，然后放入零下18℃下保温16小时。冷却完成后冷冻干燥获得蛋白聚糖干粉。
实施例3：
取鲑鱼鼻软骨1000g，加入5000mL纯水，搅拌清洗5分钟，过80目筛网，反复清洗三次。使用处理完的原料，加入5000mL水，加热到70℃开始缓慢搅拌，升温至90℃开始计时，保持温度在90℃，提取3小时。离心机过滤，可以获得蛋白聚糖提取液。将蛋白聚糖提取液用膜分离至糖度为11时停止，83℃～85℃保温灭菌45分钟，然后放入零下18℃下保温16小时。冷却完成后冷冻干燥获得蛋白聚糖干粉。
实施例4：
取鲑鱼鼻软骨1000g，加入15000mL纯水，搅拌清洗5分钟，过80目筛网，反复清洗四次。使用处理完的原料，加入10000mL水，加热到80℃开始缓慢搅拌，升温至100℃开始计时，保持温度在100℃，提取5小时。离心机过滤，可以获得蛋白聚糖提取液。将蛋白聚糖提取液用膜分离至糖度为12时停止，83℃～85℃保温灭菌45分钟，然后放入零下18℃下保温16小时。冷却完成后冷冻干燥获得蛋白聚糖干粉。
对比实施例1：
取鲑鱼鼻软骨1000g，加入10000mL纯水，搅拌清洗5分钟，过80目筛网，反复清洗三次。使用处理完的原料，加入8000mL水，加热到50℃开始缓慢搅拌，升温至95℃开始计时，保持温度在95℃，提取1小时。离心机过滤。用膜分离至糖度为11时停止，83℃～85℃保温灭菌45分钟，然后放入零下18℃下保温16小时。冷却完成后冷冻干燥获得蛋白聚糖干粉。
对比实施例2：
取鲑鱼鼻软骨1000g，加入10000mL纯水，搅拌清洗5分钟，过80目筛网，反复清洗三次。使用处理完的原料，加入8000mL水，加热到50℃开始缓慢搅拌，升温至95℃开始计时，保持温度在95℃，提取5小时。离心机过滤。用膜分离至糖度为11时停止，83℃～85℃保温灭菌45分钟，然后放入零下18℃下保温16小时。冷却完成后冷冻干燥获得蛋白聚糖干粉。
对比实施例3：
取鲑鱼鼻软骨1000g，加入10000mL纯水，搅拌清洗5分钟，过80目筛网，反复清洗三次。使用处理完的原料，加入8000mL水，加热到50℃开始缓慢搅拌，升温至80℃开始计时，保持温度在80℃，提取2小时。离心机过滤。用膜分离至糖度为11时停止，83℃～85℃保温灭菌45分钟，然后放入零下18℃下保温16小时。冷却完成后冷冻干燥获得蛋白聚糖干粉。
对比实施例4：
取鲑鱼鼻软骨1000g，加入10000mL纯水，搅拌清洗5分钟，过80目筛网，反复清洗三次。使用处理完的原料，加入8000mL水，加热到50℃开始缓慢搅拌，升温至95℃开始计时，保持温度在95℃，提取2小时。离心机过滤。用膜分离为糖度11时停止，83℃～85℃保温灭菌45分钟，然后放入零下18℃下保温16小时。冷却完成后冷冻干燥获得蛋白聚糖干粉。
对比实施例5：
取鲑鱼鼻软骨1000g，加入10000mL纯水，搅拌清洗5分钟，过80目筛网，反复清洗三次。使用处理完的原料，加入8000mL水，加热到50℃开始缓慢搅拌，升温至95℃开始计时，保持温度在95℃，提取2小时。离心机过滤。用膜分离为糖度11时停止，83℃～85℃保温灭菌45分钟，后80℃真空干燥获得蛋白聚糖粉。
不同实施例和对比例方案下得到的结果比较
| 干品质量/g | 蛋白聚糖含量/％ | 收率/％ | 分子量/万 | |
| 实施例1 | 35.6 | 48.91 | 3.56 | 2.78 |
| 实施例2 | 10.1 | 33.31 | 1.01 | 2.03 |
| 实施例3 | 22.1 | 40.15 | 2.21 | 2.32 |
| 实施例4 | 40.1 | 39.21 | 4.01 | 0.52 |
| 对比实施例1 | 18.3 | 45.41 | 1.83 | 2.41 |
| 对比实施例2 | 37.8 | 33.7 | 3.78 | 0.68 |
| 对比实施例3 | 15.7 | 40.77 | 15.7 | 2.37 |
| 对比实施例4 | 30.5 | 33.8 | 3.05 | 0.91 |
| 对比实施例5 | 24.9 | 44.8 | 2.49 | 1.77 |
本发明制备方法通过对原料预处理、提取条件与干燥条件的控制，可以获得较高的收率与较高的分子量，获得性能优异的蛋白聚糖产品。分子量越高，蛋白聚糖产品无论用于化妆品还是食品中，都能表现出更好的功效。提取所得的蛋白聚糖由核心蛋白和硫酸软骨素构成，而硫酸软骨素可以结合大量的水分，通过与水分的结合，可以起到维持肌肤的保湿性、强化关节的缓冲等作用。
本发明制备方法的核心在于蛋白聚糖提取液的步骤与时间，包括但不限于处理方式、提取温度、提取时间等，蛋白聚糖提取液提升分子量的超滤膜膜分离技术、冷冻干燥等。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (10)
1.一种大分子量蛋白聚糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)原料处理：以鲑鱼鼻软骨作为原料，将原料投入罐内，加3-15倍量的纯水，检查最后清洗排水样，送检透光率达到90％以上为原料处理合格；
2)煮提：使用处理完的原料，向提取罐中加入1-10倍的水，加热至40-80℃后缓慢搅拌升温至80-100℃，保温0.5-5小时；
3)粗过滤：将上述煮提得到的料液趁热利用震荡过滤机进行过滤，得到粗过滤液；
4)离心过滤：将上述粗过滤液进行离心过滤，得到均一半透明的离心滤液；
5)膜分离：将上述离心滤液进行超滤膜分离操作，膜分离终点为料液糖度达到10-12，超滤膜分离操作停止；
6)灭菌：将膜分离的料液升温至83-85℃，保温灭菌45分钟，灭菌结束后趁热灌装在洁净中转桶中；
7)冷冻干燥：将上述灭菌浓缩液放入冷库中进行速冻降温，-18℃冷冻保存，冷却完成后放入冷冻干燥机干燥；
8)粉碎：冷冻干燥结束后，取出干燥固体，依次进行粉碎、称重、取样和分子量检测。
2.根据权利要求1所述大分子量蛋白聚糖的制备方法，其特征在于：步骤1)中，加10倍量的纯水。
3.根据权利要求1所述大分子量蛋白聚糖的制备方法，其特征在于：步骤2)中，保温至料液中无明显可见鲑鱼软骨。
4.根据权利要求1所述大分子量蛋白聚糖的制备方法，其特征在于：步骤2)中，震荡过滤机使用的滤网目数为100目。
5.根据权利要求1所述大分子量蛋白聚糖的制备方法，其特征在于：步骤2)中，加热至50-55℃后缓慢搅拌升温至95℃。
6.根据权利要求1所述大分子量蛋白聚糖的制备方法，其特征在于：步骤3)中，震荡过滤机使用的滤网目数为100目。
7.根据权利要求1所述大分子量蛋白聚糖的制备方法，其特征在于：步骤5)中，超滤膜的分子截留量为10000道尔顿。
8.根据权利要求1所述大分子量蛋白聚糖的制备方法，其特征在于：所述分子量检测基于凝胶渗透色谱，即用溶剂作流动相，流经多孔填料作为分离介质的液相色谱法。
9.根据权利要求8所述大分子量蛋白聚糖的制备方法，其特征在于：所述分子量检测的标准溶液为右旋糖苷，用0.1mol/L硝酸钠溶液溶解，配制成0.1W/V％溶液。
10.根据权利要求9所述大分子量蛋白聚糖的制备方法，其特征在于：所述分子量检测的样品溶液配制：取样品20mg，用5mL的0.1mol/L硝酸钠溶液溶解，溶胀24h，过微孔滤膜后，即为样品溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010787918.0A CN111704662A (zh) | 2020-08-07 | 2020-08-07 | 一种大分子量蛋白聚糖的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010787918.0A CN111704662A (zh) | 2020-08-07 | 2020-08-07 | 一种大分子量蛋白聚糖的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111704662A true CN111704662A (zh) | 2020-09-25 |
Family
ID=72547124
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010787918.0A Pending CN111704662A (zh) | 2020-08-07 | 2020-08-07 | 一种大分子量蛋白聚糖的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111704662A (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020045735A1 (en) * | 2000-08-22 | 2002-04-18 | Kakuhiro Co., Ltd. | Method for extraction and purification of cartilage type proteoglycan |
| US20070010430A1 (en) * | 2003-03-20 | 2007-01-11 | Hosokawa Micron Corparation | Proteoglycan isolated from cartilaginous fish and process for producing the same |
| US20130303736A1 (en) * | 2011-01-19 | 2013-11-14 | Hirosaki University | Method for mass preparation of proteoglycan |
| US20140080761A1 (en) * | 2009-07-16 | 2014-03-20 | Hirosaki University | Proteoglycan-containing material |
| CN104292363A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-21 | 江苏奇力康皮肤药业有限公司 | 一种用于眼药水的鲨鱼软骨素的提取方法 |
| US20150147407A1 (en) * | 2012-07-25 | 2015-05-28 | Hirosaki University | Composition for preventing or treating osteoarthritis |
-
2020
- 2020-08-07 CN CN202010787918.0A patent/CN111704662A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020045735A1 (en) * | 2000-08-22 | 2002-04-18 | Kakuhiro Co., Ltd. | Method for extraction and purification of cartilage type proteoglycan |
| US20070010430A1 (en) * | 2003-03-20 | 2007-01-11 | Hosokawa Micron Corparation | Proteoglycan isolated from cartilaginous fish and process for producing the same |
| US20140080761A1 (en) * | 2009-07-16 | 2014-03-20 | Hirosaki University | Proteoglycan-containing material |
| US20130303736A1 (en) * | 2011-01-19 | 2013-11-14 | Hirosaki University | Method for mass preparation of proteoglycan |
| US20150147407A1 (en) * | 2012-07-25 | 2015-05-28 | Hirosaki University | Composition for preventing or treating osteoarthritis |
| CN104292363A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-21 | 江苏奇力康皮肤药业有限公司 | 一种用于眼药水的鲨鱼软骨素的提取方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103992384B (zh) | 一种大黄鱼鱼骨胶原肽及其制备方法和用途 | |
| CN104250285A (zh) | 一种大黄鱼鱼肉抗氧化肽及其制备方法和用途 | |
| CN107095123B (zh) | 一种提高蓝莓花色苷稳定性的方法 | |
| CN103882083B (zh) | 一种抗氧化胶原肽的制备方法 | |
| WO2013073404A1 (ja) | 米タンパク質組成物とその製造方法 | |
| JP2002069097A (ja) | 軟骨型プロテオグリカンの精製方法 | |
| CN104558115A (zh) | 一种孔鳐鱼肉蛋白抗氧化多肽及其制备方法和用途 | |
| KR101883979B1 (ko) | 마린 콜라겐을 함유한 석류음료 및 이의 제조방법 | |
| CN113647599A (zh) | 一种通过酶降解牲畜骨生产调味剂中骨素的制备方法 | |
| CN111704662A (zh) | 一种大分子量蛋白聚糖的制备方法 | |
| CN117462467A (zh) | 一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物及其制备方法和应用 | |
| CN111004335A (zh) | 一种从白芨根茎中提取得到的白芨低聚糖及其制备方法 | |
| JP2023003418A (ja) | プロテオグリカン分析方法 | |
| CN105648010A (zh) | 一种激活Nrf2-ARE通路的双髻鲨鱼肉抗氧化肽的制备方法 | |
| CN113214412B (zh) | 一种刺五加果多糖、多糖的提取方法及其应用 | |
| CN106720801B (zh) | 富含菊糖的牛蒡茶 | |
| CN110551789A (zh) | 一种具有成骨活性的贻贝肽冻干粉的制备方法 | |
| CN105646729A (zh) | 一种安全高效制备松茸多糖的方法 | |
| CN114045324B (zh) | 一种从竹荪中提取分离蛋白质的方法 | |
| CN111671783A (zh) | 药用沙棘果汁生产方法 | |
| CN111870998A (zh) | 一种串联凝集素亲和柱纯化海参多糖装置及其使用方法 | |
| CN105648007B (zh) | 灰星鲨软骨蛋白抗氧化肽的制备方法 | |
| CN111534390B (zh) | 大鲵活性肽葡萄酒 | |
| CN106699918A (zh) | 野阳合多糖及其制备方法和应用 | |
| CN107279917A (zh) | 一种黄精多糖入味巴旦木及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |