CN117462467A - 一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物及其制备方法和应用。本发明的马齿苋提取物的制备方法，包括如下步骤：S1：对马齿苋全草进行清洗、干燥、粉碎、过筛，得到马齿苋粉末；S2：采用由石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂对马齿苋粉末进行浸泡，得到马齿苋浸泡物；S3：将马齿苋浸泡物装入玻璃层析柱中，依次采用由石油醚和乙醇组成的第一洗脱溶剂、由乙醇和水组成的第二洗脱溶剂和纯水进行洗脱，得到马齿苋提取物。本发明的制备方法能够在提取过程中高效富集马齿苋中的有效成分，提高原料利用度，降低生产成本。通过本发明的制备方法，制备得到的马齿苋提取物护肤功效强，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及药食同源植物提取技术领域，尤其是涉及一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物及其制备方法和应用。
背景技术
马齿苋(Portulaca oleracea L.)为马齿苋科一年生肉质草本植物，别名马齿菜、五行草、长寿菜、地马菜等。马齿苋含有多种营养成分和药用成分，可以增强机体免疫，其食用价值和药用价值相当高，被列入“药食两用”名录。《草本纲目》记载其具有“散血消肿，解毒通散血消肿，解毒通”的功效。已有研究报道其提取物主要有神经保护、抗糖尿病、抗氧化、抗癌、抗菌等生物活性，然而其在护肤领域的功效尚不清楚。
目前，马齿苋提取方法包括水提法、超声辅助醇提法、石油醚回流提取法等，然而现有的提取方法无法在提取过程中高效富集马齿苋中的有效成分，因此存在原料利用率低等问题，无法保证马齿苋提取物的功效。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物及其制备方法和应用，该制备方法的原料利用度高，制得的马齿苋提取物的护肤功效强。
本发明提供一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1：对马齿苋全草进行清洗、干燥、粉碎、过筛，得到马齿苋粉末；
S2：采用由石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂对马齿苋粉末进行浸泡，得到马齿苋浸泡物；
S3：将马齿苋浸泡物以填料的形式装入层析柱中，依次采用由石油醚和乙醇组成的第一洗脱溶剂、由乙醇和水组成的第二洗脱溶剂和纯水进行洗脱，得到马齿苋提取物。
步骤S1中，干燥温度为40-60℃，优选为60℃；过筛为过40-100目药典筛，优选为40目。
步骤S2中，浸泡溶剂中石油醚与乙醇的体积比为2：8至8：2，优选为8：2；马齿苋粉末与浸泡溶剂的质量体积比(即料液比)为1g：(3-4)mL，优选为1g：3.5mL；浸泡时间为2-4h，优选为2h。
在本发明中，若无特殊说明，乙醇均指的是无水乙醇。
步骤S3中，第一洗脱溶剂中石油醚与乙醇的体积比为2：8至8：2，优选为8：2；第一洗脱溶剂与浸泡溶剂的体积比为(0.8-1.2)：1，优选为1：1；第二洗脱溶剂中乙醇与水的体积比为5：5至7：3，优选为6：4；第二洗脱溶剂与浸泡溶剂的体积比为(1.8-2.2)：1，优选为2：1；纯水与浸泡溶剂的体积比为(1.8-2.2)：1，优选为2：1。
采用以上洗脱步骤旨在充分提取马齿苋中的有效成分，并且能够同时提取得到脂溶性成分如脂肪酸和水溶性成分如蛋白，多糖等，从而建立高效的提取分离方法。
特别是，洗脱后还包括：收集洗脱液并静置分层，收集上层得到石油醚相提取物；向下层加入乙醇至终浓度为75-85％，静置、离心，收集上清得到乙醇相提取物，收集沉淀得到水相提取物，具体流程如图1所示。
此外，可以采用旋转蒸发去除各提取物中的有机溶剂，以达到回收的目的；旋转蒸发时的温度可以为40-60℃，速度为30-40r/min。旋转蒸发后，使用真空干燥箱进行干燥。
本发明还提供一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物，按照上述制备方法制得。
在本发明中，马齿苋提取物包括石油醚相提取物、乙醇相提取物和水相提取物中的至少一种；对石油醚相提取物、乙醇相提取物、水相提取物进行抗过敏测试研究，对乙醇相提取物和水相提取物进行保湿性能研究，对水相提取物进行舒缓测试研究。具体地，通过测定马齿苋提取物对透明质酸酶的抑制作用评估其抗过敏活性；保湿性能研究方法是将马齿苋水相、乙醇相提取物置于相对湿度(RH)为81％、32％以及0％(以干燥硅胶维持)的干燥器中进行；通过斑马鱼试验测定马齿苋水相提取物的舒缓功效。
本发明还提供上述马齿苋提取物在制备具备保湿和舒缓功效的护肤品中的应用。
本发明的制备方法工艺简单、操作合理，提取过程中的提取试剂、提取材料可回收循环利用，特别是通过采用特定的方式对马齿苋进行提取，能够在提取过程中高效富集马齿苋中的有效成分，原料利用度高，降低了生产成本；本发明制备得到的马齿苋提取物护肤功效强，经保湿和抗过敏试验测试证明该马齿苋提取物具有保湿、舒缓等功效，不仅为马齿苋在抗过敏、抑菌等方面提供了一定的实验依据，同时也为其功能特性成分的开发利用以及在护肤品等相关产业中的发展提供了理论参考，具有广阔的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为柱层析法制备马齿苋提取物的工艺流程图；
图2为马齿苋提取物的制备工艺及护肤功效测试流程图；
图3为实例1-4马齿苋粉末在不同溶解时间内的饱和吸液量；
图4为实例5-7制得的马齿苋提取物对透明质酸酶抑制结果图；
图5为实施例6和对比例1-11制得的马齿苋提取物对透明质酸酶抑制结果图；
图6为实施例6制得的水相提取物、乙醇相提取物及对比例1制得的马齿苋提取物在不同湿度下的保湿结果图；其中(A)湿度为0％，(B)湿度为32％，(C)湿度为81％；
图7为实施例6制得的水相提取物进行的斑马鱼中性粒细胞聚集抑制结果图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
结合图1和图2所示，本实施例的马齿苋提取物的制备方法，步骤如下：
将马齿苋全草清洗后在60℃下烘干，粉碎过40目药典筛，得到马齿苋粉末。
称取50g干燥的马齿苋粉末，用材料干重3.5倍体积(175mL)的由石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂(石油醚与乙醇的体积比为8：2)室温浸泡1h，得到马齿苋浸泡物。
将马齿苋浸泡物装入玻璃层析柱中，依次用175mL由石油醚和乙醇组成的第一洗脱溶剂(石油醚与乙醇的体积比为8：2)、350mL由乙醇和水组成的第二洗脱溶剂(乙醇与水的体积比为6：4)和350mL纯水进行洗脱，收集洗脱液后静置分层，收集上层为石油醚相提取物；向下层加入乙醇至终浓度为80％，低温静置后在5000rpm离心15min，收集上清为乙醇相提取物，沉淀为水相提取物；将各提取物于45℃、35r/min条件下进行真空旋转浓缩，随后使用真空干燥箱进行干燥。
实施例2
除使用石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂(石油醚与乙醇的体积比为8：2)室温浸泡2h之外，其余与实施例1相同。
实施例3
除使用石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂(石油醚与乙醇的体积比为8：2)室温浸泡3h之外，其余与实施例1相同。
实施例4
除使用石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂(石油醚与乙醇的体积比为8：2)室温4h之外，其余与实施例1相同。
实施例1-4的溶解平衡时间结果如图3所示。由图3中的曲线可知，在不同的时间段，马齿苋粉末的饱和吸液量不同，且曲线在2h后趋于平缓，溶液吸收量不再大幅增长；因此，结合实际操作考虑，马齿苋在溶剂中的溶解平衡时间优选为2h。
实施例5
本实施例的马齿苋提取物的制备方法，步骤如下：
将马齿苋全草清洗后在50℃下烘干，粉碎过60目药典筛，得到马齿苋粉末。
称取50g干燥的马齿苋粉末，用材料干重3倍体积(150mL)的由石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂(石油醚与乙醇的体积比为2：8)室温浸泡2h，得到马齿苋浸泡物。
将马齿苋浸泡物装入玻璃层析柱中，依次用120mL由石油醚和乙醇组成的第一洗脱溶剂(石油醚与乙醇的体积比为2：8)、270mL由乙醇和水组成的第二洗脱溶剂(乙醇与水的体积比为5：5)和270mL纯水进行洗脱，收集洗脱液后静置分层，收集上层为石油醚相提取物；向下层加入乙醇至终浓度为75％，低温静置后在5000rpm离心15min，收集上清为乙醇相提取物，沉淀为水相提取物；将各提取物于60℃、30r/min条件下进行真空旋转浓缩，随后使用真空干燥箱进行干燥。
实施例6
将马齿苋全草清洗后在60℃下烘干，粉碎过40目药典筛，得到马齿苋粉末。
称取50g干燥的马齿苋粉末，用材料干重3.5倍体积(175mL)的由石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂(石油醚与乙醇的体积比为8：2)室温浸泡2h，得到马齿苋浸泡物。
将马齿苋浸泡物装入玻璃层析柱中，依次用175mL由石油醚和乙醇组成的第一洗脱溶剂(石油醚与乙醇的体积比为8：2)、350mL由乙醇和水组成的第二洗脱溶剂(乙醇与水的体积比为6：4)和350mL纯水进行洗脱，收集洗脱液后静置分层，收集上层为石油醚相提取物；向下层加入乙醇至终浓度为80％，低温静置后在5000rpm离心15min，收集上清为乙醇相提取物，沉淀为水相提取物；将各提取物于45℃、35r/min条件下进行真空旋转浓缩，随后使用真空干燥箱进行干燥。
实施例7
本实施例的马齿苋提取物的制备方法，步骤如下：
将马齿苋全草清洗后在40℃下烘干，粉碎过100目药典筛，得到马齿苋粉末。
称取50g干燥的马齿苋粉末，用材料干重4倍体积(200mL)的由石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂(石油醚与乙醇的体积比为6：4)室温浸泡2h，得到马齿苋浸泡物。
将马齿苋浸泡物装入玻璃层析柱中，依次用240mL由石油醚和乙醇组成的第一洗脱溶剂(石油醚与乙醇的体积比为6：4)、440mL由乙醇和水组成的第二洗脱溶剂(乙醇与水的体积比为7：3)和440mL纯水进行洗脱，收集洗脱液后静置分层，收集上层为石油醚相提取物；向下层加入乙醇至终浓度为85％，低温静置后在5000rpm离心15min，收集上清为乙醇相提取物，沉淀为水相提取物；将各提取物于40℃、40r/min条件下进行真空旋转浓缩，随后使用真空干燥箱进行干燥。
对比例1
本对比例采用普通柱层析水提法制备马齿苋提取物，制备方法如下：
按照实施例1方法制备马齿苋粉末，称取50g干燥的马齿苋粉末，按1：3.5的料液比加入175mL纯水，在室温下浸泡2h，得到马齿苋浸泡物。
将马齿苋浸泡物装入玻璃层析柱中，用350mL纯水进行洗脱，收集洗脱液，使用纱布滤去残渣，得到马齿苋提取液，于45℃、35r/min条件下进行真空旋转浓缩，随后使用真空干燥箱进行干燥，得到马齿苋提取物。
对比例2
本对比例采用超声辅助醇提法制备马齿苋提取物，制备方法如下：
按照实施例1方法制备马齿苋粉末，称取50g干燥的马齿苋粉末，采用5倍体积的石油醚回流脱脂2h后，按1：10的料液比加入95％的乙醇溶液，在40kHZ下进行超声提取60min，对提取液进行固液分离，将液相浓缩回收乙醇，得到马齿苋提取物。
对比例3
本对比例采用超声辅助醇提法制备马齿苋提取物，与对比例2的区别仅在于未用石油醚回流，制备方法如下：
按照实施例1方法制备马齿苋粉末，称取50g干燥的马齿苋粉末，按1：10的料液比加入95％乙醇溶液，在40kHZ下进行超声提取60min，对提取液进行固液分离，将液相浓缩回收乙醇，得到马齿苋提取物。
对比例4
本对比例采用石油醚-乙醇浸提法制备马齿苋提取物，制备方法如下：
按照实施例1方法制备马齿苋粉末，称取50g干燥的马齿苋粉末，按1：3.5的料液比加入175mL由石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂(石油醚与乙醇的体积比为8：2)室温浸泡2h，得到马齿苋浸泡物。
使用纱布对马齿苋浸泡物进行过滤，滤去残渣，得到马齿苋提取液，于45℃、35r/min条件下进行真空旋转浓缩，随后使用真空干燥箱进行干燥，得到马齿苋提取物。
对比例5
本对比例采用石油醚回流提取法制备马齿苋提取物，制备方法如下：
按照实施例1方法制备马齿苋粉末，称取50g干燥的马齿苋粉末，按照料液比1：10加入500mL石油醚，在60℃的温度下进行回流提取2次，每次2h，回流提取后进行抽滤，经干燥后得到马齿苋提取物。
对比例6
本对比例采用乙醇回流提取法制备马齿苋提取物，制备方法如下：
按照实施例1方法制备马齿苋粉末，称取50g干燥的马齿苋粉末，按照料液比1：10加入500mL无水乙醇，在60℃的温度下进行回流提取2次，每次2h，回流提取后进行抽滤，经干燥后得到马齿苋提取物。
对比例7
除采用175mL的石油醚(即石油醚与乙醇的体积比为10：0)对马齿苋粉末进行浸泡之外，其余与实施例6相同。
对比例8
除采用175mL的乙醇(即石油醚与乙醇的体积比为0：10)对马齿苋粉末进行浸泡之外，其余与实施例6相同。
对比例9
除第一洗脱溶剂仅采用石油醚(即石油醚与乙醇的体积比为10：0)之外，其余与实施例6相同。
对比例10
除第一洗脱溶剂仅采用乙醇(即石油醚与乙醇的体积比为0：10)之外，其余与实施例6相同。
对比例11
除第二洗脱溶剂仅采用乙醇(即乙醇与水的体积比为10：0)之外，其余与实施例6相同。
测试例1抗过敏功效评价试验
测试样品：实施例5-7及对比例1-11制备的马齿苋提取物；
测试方法如下：取0.1mL CaCl2溶液(2.5mmol/L)和0.5mL透明质酸酶液于37℃下水浴恒温培养20min；加入一定浓度的马齿苋提取液0.5mL，继续保温20min；再加入0.5mL透明质酸钠液(0.5mg/mL)，37℃水浴恒温培养30min后取出，在常温下放置5min；加入0.1mLNaOH溶液(5mol/L)和0.5mL乙酰丙酮溶液，于沸水浴中加热15min后立即转移至冰水水浴冷却5min；滴加1.0mL埃尔利希试剂，并用3.0mL无水乙醇稀释，室温放置30min显色，用分光光度计测定波长为528nm处吸光度值。马齿苋提取物对透明质酸酶抑制率的测定计算公式如下：
式中：
A：对照溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)；
B：对照空白溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)；
C：试样溶液吸光度值；
D：试样空白溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替酶液)。
测试结果如图4、图5所示。
结果表明：在相同浓度下，不同提取方法制得的马齿苋提取物对透明质酸酶的抑制率有所不同。一般而言，透明质酸酶活性抑制率越高则反映该物质抗敏效果越强。实施例5、6、7所得马齿苋提取物对透明质酸抑制的结果如图4所示，使用不同体积的溶剂浸泡后所得马齿苋提取物对透明质酸酶的抑制率有所不同，且体积倍数越高反而效果不明显，因此，结合实际操作及经济效益考虑，优选干重的3.5倍体积溶剂浸泡进行后续试验。此外，结合对比例试验，如图5所示，与透明质酸酶抑制率在7-35％内的对比例1-11相比，实施例6制备的水相提取物对透明质酸酶的抑制率达到47％，抑制效果最好，即本发明制备的马齿苋提取物具有较好的抗过敏效果。
测试例2保湿功效评价试验
测试样品：实施例6制备的马齿苋水相、乙醇相提取物及对比例1提供的马齿苋提取物；
测试方法如下：准确称取干燥的马齿苋提取物0.1g于称量瓶中，加入纯水配制成质量分数为10％的水溶液，每组三个平行样，分别置于相对湿度(RH)为81％、32％以及0％(以干燥硅胶维持)的干燥器中，每隔一段时间精确称量各样品重量，直至72h后取出。
式中：
Hn：样品放置后的含水量；
Ho：样品放置前的含水量。
测试结果如图6所示。
测试例3舒缓功效评价试验
测试样品：实施例6提供的马齿苋水相提取物。
测试方法如下：随机选取挑选健康、无畸形的斑马鱼胚胎于6孔细胞培养板中，每孔20尾，每孔容量为5mL。设置为空白对照组，模型组，阳性对照组和受试样品组，于28℃恒温培养箱中孵育40-45min，将鱼胚胎进行固定并使用苏丹黑染液进行染色，将斑马鱼置于显微镜下拍照后计数尾部侧线区域的中性粒细胞数目，并进行计算和统计分析。
斑马鱼中性粒细胞聚集抑制率计算公式如下：
式中：
T：受试物处理组鱼胚胎中性粒细胞数目的平均值；
C：模型对照组鱼胚胎中性粒细胞数目的平均值。
测试结果如图7所示。
通过上述测试例1-3的测试结果可以证明利用本发明制备方法制备得到的马齿苋提取物、特别是马齿苋水相提取物具有良好的抗过敏、保湿及舒缓功效。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：对马齿苋全草进行清洗、干燥、粉碎、过筛，得到马齿苋粉末；
S2：采用由石油醚和乙醇组成的浸泡溶剂对马齿苋粉末进行浸泡，得到马齿苋浸泡物；
S3：将马齿苋浸泡物以填料的形式装入层析柱中，依次采用由石油醚和乙醇组成的第一洗脱溶剂、由乙醇和水组成的第二洗脱溶剂和纯水进行洗脱，得到马齿苋提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，干燥温度为40-60℃；过筛为过40-100目药典筛。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，浸泡溶剂中石油醚与乙醇的体积比为2：8至8：2。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，马齿苋粉末与浸泡溶剂的质量体积比为1g：(3-4)mL；浸泡时间为2-4h。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中，第一洗脱溶剂中石油醚与乙醇的体积比为2：8至8：2；第一洗脱溶剂与浸泡溶剂的体积比为(0.8-1.2)：1。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中，第二洗脱溶剂中乙醇与水的体积比为5：5至7：3；第二洗脱溶剂与浸泡溶剂的体积比为(1.8-2.2)：1。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中，纯水与浸泡溶剂的体积比为(1.8-2.2)：1。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中，洗脱后还包括：收集洗脱液并静置分层，收集上层得到石油醚相提取物；向下层加入乙醇至终浓度为75-85％，静置、离心，收集上清得到乙醇相提取物，收集沉淀得到水相提取物。
9.一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物，其特征在于，按照权利要求1-8任一所述的制备方法制得。
10.权利要求9所述的马齿苋提取物在制备具备保湿和舒缓功效的护肤品中的应用。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| CN202311550052.1A CN117462467A (zh) | 2023-11-20 | 2023-11-20 | 一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
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| CN202311550052.1A CN117462467A (zh) | 2023-11-20 | 2023-11-20 | 一种具备保湿和舒缓功效的马齿苋提取物及其制备方法和应用 |
Publications (1)
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| CN117462467A true CN117462467A (zh) | 2024-01-30 |
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Country Status (1)
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|---|---|
| CN (1) | CN117462467A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118121639A (zh) * | 2024-05-06 | 2024-06-04 | 吉林大学 | 一种马齿苋有效成分的提取方法及其在降尿酸中的应用 |
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2023
- 2023-11-20 CN CN202311550052.1A patent/CN117462467A/zh active Pending
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| CN118121639A (zh) * | 2024-05-06 | 2024-06-04 | 吉林大学 | 一种马齿苋有效成分的提取方法及其在降尿酸中的应用 |
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