CN110742908A - 一种美洲大蠊提取物的制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种美洲大蠊提取物的制备工艺，所述制备工艺包括以下步骤：(1)冷冻灭活；(2)虫体干燥；(3)将完成步骤(2)的虫体进行粉碎处理并且过筛，制得虫体粉末；(4)虫体粉末进行脱脂处理，制得脱脂虫体粉末；(5)对脱脂虫体粉末进行冷水浴超声处理，(6)对美洲大蠊提取液进行离心处理，得到美洲大蠊上清液；(7)滤膜抽滤处理，得到美洲大蠊提取物提纯液；(8)对美洲大蠊提取物提纯液进行冷冻干燥处理，最终得到美洲大蠊提取物。本发明采用冷水浴超声提取法替代现有工艺中的高温蒸煮、热回流抽提及醇提法，所述冷水浴超声提取法能有效保护美洲大蠊提取物的有效活性；能更加充分的提出有效成分。
Description
技术领域
本发明属于药用原料提取技术领域，特别涉及一种美洲大蠊提取物的制备工艺。
背景技术
美洲大蠊俗称“蟑螂”，世界上生命力最强，至今繁衍最成功的昆虫类群之一，药用始载于《神农本草经》，常以干燥或鲜成虫入药，其性寒味咸，有毒，有散瘀、消积、利水、消肿等功效。现代药理学及临床研究显示其具有抑制癌细胞增殖、抗肿瘤、治疗溃疡性肠胃炎、促进受损组织修复、增强免疫力等作用。美洲大蠊含有的药用价值成分主要包括多肽、多糖、抗菌肽、粘多糖、凝集素等，美洲大蠊中的多肽和多糖因为具有能抑制肿瘤细胞，同时对人体的正常细胞无毒或毒性小的特点，成为国内外学者寻找潜在的抗肿瘤药物的源头。
从美洲大蠊体内分离出单一活性组分，成本较高，需要的仪器设备也相应较复杂，且整个工艺流程耗时长，活性组分含量损失较大，取得的效益回报难以衡量。现有研究表明美洲大蠊提取物在抗肿瘤、促进组织修复、镇痛、消炎及提高免疫力方面具有良好的效果。相对于美洲大蠊中多糖、多肽等有效成分的分离工艺来说，美洲大蠊提取物的制备工艺相对简单，获得的经济价值更大。
目前，美洲大蠊的制备工艺有方法有：1)采用一定浓度的乙醇浸泡美洲大蠊的处死活体，再用水煎煮虫体数次，合并煎煮液，真空浓缩制成浸膏；2)对美洲大蠊采用热水灭活，并用一定浓度的乙醇长时间浸泡虫体，然后再用乙醇和水加热回流提取，抽提温度超过65℃，然后将提取液浓缩制得浸膏。
从上可知，目前对于美洲大蠊提取物的制备均采用乙醇或较高温度的方法进行处理的，但是这样的处理方法会使蛋白质、小分子肽类及多糖等有效成分失去活性，从而大大降低美洲大蠊提取物的药用价值；通过上述制备工艺制得的提取液未进行一定的纯化处理，浓缩制得的浸膏中杂质较多，干燥的浸膏也较容易受潮溶解，存储和使用都极为不便；并且上述步骤中没有对美洲大蠊虫体进行脱脂处理，而美洲大蠊虫体油脂会干扰有效成分的浸出，还会部分溶于乙醇，并随提取成分一并制成浸膏，进而影响浸膏质量和利用价值。
发明内容
本发明提供一种美洲大蠊提取物的制备工艺，其能够有效保护提取物的有效活性，能够减少杂质的干扰。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案。
一种美洲大蠊提取物的制备工艺，包括以下步骤：
(1)冷冻灭活：将活体美洲大蠊放入-50～-20℃冷冻处死，用去离子水反复清洗三次，沥干水分后，转入温度为-80℃及以下的环境中冷冻灭活24～48小时；
(2)虫体干燥：将完成步骤(1)冷冻灭活的虫体在恒温干燥箱中进行干燥处理，直至虫体呈现干燥状为止；
(3)将完成步骤(2)的虫体进行粉碎处理并且过筛，制得虫体粉末；
(4)将步骤(3)制得的虫体粉末进行脱脂处理，制得脱脂虫体粉末；
(5)然后将步骤(4)制得的脱脂虫体粉末进行冷水浴超声处理，其具体过程为：第一次提取处理，向脱脂虫体粉末中加入蒸馏水，其加入的蒸馏水的质量为脱脂虫体粉末质量的6～12倍，然后在冷水浴的条件下进行超声处理15～75min，其超声处理的处理功率为400～600w，冷水浴的温度条件为5～25℃，处理完成后，将脱脂虫体粉末过滤，得到第一次提取液；然后向过滤出的脱脂虫体粉末中加入蒸馏水，其加入的蒸馏水的质量为脱脂虫体粉末质量的2～5倍，然后在冷水浴的条件下进行超声处理，其超声处理的处理功率为400～600w，冷水浴的温度条件为5～25℃，处理完成后，将脱脂虫体粉末过滤，得到第二次提取液；最后将第一提取液与第二次提取液合并，得到美洲大蠊提取液；
(6)然后将步骤(5)得到的美洲大蠊提取液进行离心处理，得到美洲大蠊上清液；
(7)将步骤(6)得到的美洲大蠊上清液进行滤膜抽滤处理，得到美洲大蠊提取物提纯液；
(8)将步骤(7)中获得的美洲大蠊提取物提纯液进行冷冻干燥处理，最终得到美洲大蠊提取物。
进一步地，步骤(2)中所使用的恒温干燥箱的干燥温度为40～50℃。
进一步地，步骤(3)中，虫体进行粉碎过筛处理时候，其过筛的目数为30～50目。
进一步地，步骤(4)中的脱脂处理的具体过程为：第一脱脂处理，向虫体粉末中加入石油醚，其加入石油醚的质量为虫体粉末质量的3～5倍，然后在室温下浸泡5～10h后，将虫体粉末过滤，得到第一次石油醚混合液及第一次脱脂虫体粉末；然后对第一次脱脂虫体粉末进行第二次脱脂处理，其过程同第一脱脂处理过程相同，得到第二次石油醚混合液与第二次脱脂虫体粉末；再次对第二次脱脂虫体粉末进行第三次脱脂处理，其过程同第一脱脂处理过程相同，最终得到脱脂虫体粉末。
进一步地，步骤(6)中离心处理的条件为，离心转速为5000～7000r/min，温度为3～4℃，离心时间为5～15min。
进一步地，步骤(7)中滤膜抽滤处理的具体过程为：用孔径为0.45μm的微孔滤膜对美洲大蠊上清液进行抽滤，得到第一次美洲大蠊提取物提纯液，再用孔径为0.22μm的微孔滤膜对第一次美洲大蠊提取物提纯液进行抽滤，得到美洲大蠊提取物提纯液。
进一步地，步骤(8)中冷冻干燥处理过程为：先将美洲大蠊提取物提纯液置于温度为-80℃及以下的环境下冷冻10～15h，然后将其取出放入冷冻干燥机中处理，最终得到美洲大蠊提取物，所述美洲大蠊提取物为粉末状。
本发明的有益效果为：本发明采用冷水浴超声提取法替代现有工艺中的高温蒸煮、热回流抽提及醇提法，所述冷水浴超声提取法能有效保护美洲大蠊提取物的有效活性；能更加充分的提出有效成分；能缩短了现有工艺的提取时间，减少了工艺步骤和降低了溶剂的成本；本发明还对虫体粉末进行了脱脂处理，这能有效地减少虫体油脂对提取物质量的影响和降低油脂对超声提取效率的影响；本发明还采用微孔滤膜抽滤的工艺，这能有效地除去提取物中的悬浮物和细菌，能进一步纯化提取物，较少杂质的干扰；本发明还采用低温冷冻干燥技术，其能够制得美洲大蠊提取物粉末，提高了美洲大蠊提取物的使用价值和存储的简便性，拓宽了美洲大蠊提取物的应用范围。
具体实施方式
实施例1
一种美洲大蠊提取物的制备工艺，所述制备工艺包括以下步骤：
(1)冷冻灭活：将活体美洲大蠊放入-20℃冷冻处死，用去离子水反复清洗三次，沥干水分后，转入-80℃冷冻灭活48小时；
(2)虫体干燥：将完成步骤(1)冷冻灭活的虫体在恒温干燥箱中进行恒温干燥处理，直至虫体呈现干燥状为止，所使用的恒温干燥箱的干燥温度为40℃；
(3)将完成步骤(2)的虫体进行粉碎处理并且过40目筛，制得虫体粉末；
(4)将步骤(3)制得的虫体粉末进行脱脂处理，其具体过程为：第一脱脂处理，向虫体粉末中加入石油醚，其加入石油醚的质量为虫体粉末质量的3倍，然后在室温下浸泡8h后，将虫体粉末过滤，得到第一次石油醚混合液及第一次脱脂虫体粉末；然后对第一次脱脂虫体粉末进行第二次脱脂处理，其过程同第一脱脂处理过程相同，得到第二次石油醚混合液与第二次脱脂虫体粉末；再次对第二次脱脂虫体粉末进行第三次脱脂处理，其过程同第一脱脂处理过程相同，最终得到脱脂虫体粉末；
(5)然后将步骤(4)制得的脱脂虫体粉末进行冷水浴超声处理，其具体过程为：第一次提取处理，向脱脂虫体粉末中加入蒸馏水，其加入的蒸馏水的质量为脱脂虫体粉末质量的10倍，然后在冷水浴的条件下进行超声处理30min，其超声处理的处理功率为500w，并在超声处理过程中控制冷水浴温度为25℃以下，处理完成后，将脱脂虫体粉末过滤，得到第一次提取液；然后向过滤出的脱脂虫体粉末中加入蒸馏水，其加入的蒸馏水的质量为脱脂虫体粉末质量的5倍，然后在冷水浴的条件下进行超声处理，其超声处理的处理功率为500w，并在超声处理过程中控制冷水浴温度为25℃以下，处理完成后，将脱脂虫体粉末过滤，得到第二次提取液；最后将第一提取液与第二次提取液合并，得到美洲大蠊提取液；
(6)然后将步骤(5)得到的美洲大蠊提取液进行离心处理，得到美洲大蠊上清液，离心处理的条件为，离心转速为6000r/min，温度为4℃，离心时间为10min；
(7)将步骤(6)得到的美洲大蠊上清液进行滤膜抽滤处理，其具体过程为：用孔径为0.45μm的微孔滤膜对美洲大蠊上清液进行抽滤，得到第一次美洲大蠊提取物提纯液，再用孔径为0.22μm的微孔滤膜对第一次美洲大蠊提取物提纯液进行抽滤，得到美洲大蠊提取物提纯液；
(8)将步骤(7)中获得的美洲大蠊提取物提纯液进行冷冻干燥处理，其具体过程为：先将美洲大蠊提取物提纯液置于-80℃的环境下冷冻12h，然后将其取出放入冷冻干燥机中处理，最终得到美洲大蠊提取物，所述美洲大蠊提取物为粉末状。
并对最终得到的美洲大蠊提取物的有效成分进行测定，测得其可溶性还原糖含量为3.647％，其粗多肽含量为68.41％，这说明采用本发明所述的制备方法能够将美洲大蠊中大多数有效物质提取出来。
对比例1
取与实施例1品种、生活环境及质量相同的美洲大蠊，采用传统的醇提取方法进行美洲大蠊提取物提取，并对最终得到的美洲大蠊提取物的有效成分进行测定，测得其氨基酸总含量为29.8％，这说明美洲大蠊中大部分水溶性氨基酸未被提出。
对比例2
取与实施例1品种、生活环境及质量相同的美洲大蠊，采用传统的醇提取和水提取结合的方法进行美洲大蠊提取物提取，并对最终得到的美洲大蠊提取物的有效成分进行测定，测得其氨基酸总含量为50.4％，将其与实施例1进行对比，可以明显看出实施例1中美洲大蠊提取物的有效成分高于对比例2的。
Claims (8)
1.一种美洲大蠊提取物的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
(1)冷冻灭活：将活体美洲大蠊放入-50～-20℃冷冻处死，用去离子水反复清洗三次，沥干水分后，转入温度为-80℃及以下的环境中冷冻灭活24～48小时；
(2)虫体干燥：将完成步骤(1)冷冻灭活的虫体进行干燥处理，直至虫体呈现干燥状为止；
(3)将完成步骤(2)的虫体进行粉碎处理并且过筛，制得虫体粉末；
(4)将步骤(3)制得的虫体粉末进行脱脂处理，制得脱脂虫体粉末；
(5)然后将步骤(4)制得的脱脂虫体粉末进行冷水浴超声处理，其具体过程为：第一次提取处理，向脱脂虫体粉末中加入蒸馏水，其加入的蒸馏水的质量为脱脂虫体粉末质量的6～12倍，然后在冷水浴的条件下进行超声处理15～75min，其超声处理的处理功率为400～600w，冷水浴的温度条件为5～25℃，处理完成后，将脱脂虫体粉末过滤，得到第一次提取液；然后向过滤出的脱脂虫体粉末中加入蒸馏水，其加入的蒸馏水的质量为脱脂虫体粉末质量的2～5倍，然后在冷水浴的条件下进行超声处理，其超声处理的处理功率为400～600w，冷水浴的温度条件为5～25℃，处理完成后，将脱脂虫体粉末过滤，得到第二次提取液；最后将第一提取液与第二次提取液合并，得到美洲大蠊提取液；
(6)然后将步骤(5)得到的美洲大蠊提取液进行离心处理，得到美洲大蠊上清液；
(7)将步骤(6)得到的美洲大蠊上清液进行滤膜抽滤处理，得到美洲大蠊提取物提纯液；
(8)将步骤(7)中获得的美洲大蠊提取物提纯液进行冷冻干燥处理，最终得到美洲大蠊提取物。
2.根据权利要求1所述的美洲大蠊提取物的制备工艺，其特征在于，步骤(2)中所使用的恒温干燥箱的干燥温度为40～50℃。
3.根据权利要求1所述的美洲大蠊提取物的制备工艺，其特征在于，步骤(3)中，虫体进行粉碎过筛处理时候，其过筛的目数为30～50目。
4.根据权利要求1所述的美洲大蠊提取物的制备工艺，其特征在于，步骤(4)中的脱脂处理的具体过程为：第一脱脂处理，向虫体粉末中加入石油醚，其加入石油醚的质量为虫体粉末质量的3～5倍，然后在室温下浸泡5～10h后，将虫体粉末过滤，得到第一次石油醚混合液及第一次脱脂虫体粉末；然后对第一次脱脂虫体粉末进行第二次脱脂处理，其过程同第一脱脂处理过程相同，得到第二次石油醚混合液与第二次脱脂虫体粉末；再次对第二次脱脂虫体粉末进行第三次脱脂处理，其过程同第一脱脂处理过程相同，最终得到脱脂虫体粉末。
5.根据权利要求1所述的美洲大蠊提取物的制备工艺，其特征在于，步骤(6)中离心处理的条件为，离心转速为5000～7000r/min，温度为3～4℃，离心时间为5～15min。
6.根据权利要求1所述的美洲大蠊提取物的制备工艺，其特征在于，步骤(7)中滤膜抽滤处理的具体过程为：用孔径为0.45μm的微孔滤膜对美洲大蠊上清液进行抽滤，得到第一次美洲大蠊提取物提纯液，再用孔径为0.22μm的微孔滤膜对第一次美洲大蠊提取物提纯液进行抽滤，得到美洲大蠊提取物提纯液。
7.根据权利要求1所述的美洲大蠊提取物的制备工艺，其特征在于，步骤(8)中冷冻干燥处理过程为：先将美洲大蠊提取物提纯液置于温度为-80℃及以下的环境下冷冻10～15h，然后将其取出放入冷冻干燥机中处理，最终得到美洲大蠊提取物，所述美洲大蠊提取物为粉末状。
8.权利要求1～7任一项所述制备工艺得到的美洲大蠊提取物。
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