CN101974095B - 中国水仙多糖的提取分离方法 - Google Patents
中国水仙多糖的提取分离方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101974095B CN101974095B CN 201010507700 CN201010507700A CN101974095B CN 101974095 B CN101974095 B CN 101974095B CN 201010507700 CN201010507700 CN 201010507700 CN 201010507700 A CN201010507700 A CN 201010507700A CN 101974095 B CN101974095 B CN 101974095B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- narcissus
- polysaccharides
- polysaccharide
- deproteinated
- crude polysaccharides
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及的是一种从中国水仙球茎中提取分离水仙多糖的方法，该方法包括如下工艺步骤：水仙球茎预处理；水仙多糖的提取；粗多糖脱蛋白；沉淀法制备水仙粗多糖；水仙粗多糖的纯化。是以新鲜的中国水仙球茎为原料，采用水提醇沉法提取水仙多糖，以三氯乙酸法脱除粗多糖中的蛋白质，最后采用离子交换柱色谱和凝胶排阻色谱法进行纯化得到单一的多糖组分。本发明方法能够充分提取球茎中的多糖组分，所得多糖纯度高，能充分保持原有的生物活性；制备过程中，只以水和乙醇为溶剂，所用的凝胶材料经处理后可多次重复使用，降低了生产成本，适合大规模工业化生产。
Description
技术领域：
本发明涉及的是一种中国水仙多糖的提取分离方法。
背景技术：
中国水仙(Narcissus tazetta L.var.chinensis Roem)别名金盏银台，是石蒜科(Amaryllidaceae)多年生鳞茎植物，是我国传统十大名花之一，同时也是一种药用植物。中医认为，水仙鳞茎性味苦、寒，入脾、肾、肝经.有清热解毒、散结消肿、祛风除热、活血调经之功效，适用于风热病、五心烦热、月经不调、痈肿疮毒、腮腺炎等。《现代实用中药》记述水仙可“治妇人子宫病.月经不调”。《本草再新》记载水仙可“治痈疽疮毒.排脓消肿.解热，祛风，疗百虫咬伤”。《岭南采药录》则称“取水仙头部捣烂.敷治乳痈：又治一切毒痈病，捣烂敷之能驱毒”。近年国际药学界在对水仙花的药用研究中发现，水仙有明显的抗病毒作用.对部分癌肿也有一定的疗效。《本草纲目》写道“水仙花作香泽涂身，理发去风气”。日本《太和本草》称：″水仙花之根去皮晒干研末和以乳汁，对治眼伤有神效″。据日本《农业杂志》记载：“将根去皮捣烂和以米饭调拌均匀，贴于患处，能治肿痈，对妇女乳房肿痛有特殊疗效”。1980年Tomoda等研究了水仙多糖的结构及其生物活性及其对乳腺癌的疗效。Liu等报道了水仙提取物对癌细胞HL-60具有很好的毒效果。Goh等研究了水仙提取物对储粮害虫玉米象和赤拟谷盗等害虫具有一定的拒食效果。刘静等报道了水仙提取物对人类多发性骨髓瘤细胞系ARH-77增殖和凋亡的作用。
国内外关于水仙的化学成分研究报道甚少，对中国水仙的研究目前仍未空白，还未见任何关于中国水仙多糖的提取分离研究报道。
发明内容：
本发明的目的是提供一种关于中国水仙多糖的提取分离方法，其提取分离方法是基于脂溶性物质溶于乙醇、多糖不溶于乙醇而溶于热水的特点，采用乙醇脱脂、热水提取、三氯乙酸脱蛋白、乙醇分级沉淀法得到水仙粗多糖，采用阴离子交换柱和凝胶柱层析纯化得到精制多糖。
本发明的技术解决方案：中国水仙多糖的提取分离方法，其特征是该方法包括以下步骤：
一、水仙球茎预处理：取新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成10mm×10mm的小片，在40～50℃下烘箱干燥1h，去除表面的水分；
二、水仙球茎脱脂：将预处理过的水仙球茎片加入该水仙球茎片3～3.5倍重量的95％乙醇(ml/g)，回流1～1.5h，再经过滤，滤渣经风干、粉碎后用于后续的多糖提取；
三、水仙多糖的提取：脱脂后的球茎粉末用该球茎粉末10～15倍(ml/g)热水在80℃下浸提3～4次，每次浸提时间为6～8h，浸提液经高速离心机离心，得到上清液经旋转浓缩至1/4体积，得到水仙粗多糖水溶液；
四、粗多糖脱蛋白：水仙粗多糖水溶液脱蛋白的方法有Sevage法或三氯乙酸法或等电点法；
五、沉淀法制备水仙粗多糖：经过脱蛋白处理所得到的水仙多糖水溶液，加入3～4倍体积量的95％乙醇进行沉淀，经抽滤所得的滤饼依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，冷冻干燥去除所含的少量溶剂后得到水仙粗多糖；
六、水仙粗多糖的纯化：将醇沉所得的水仙粗多糖溶于蒸馏水，并制成饱和溶液，经离心除去少量不溶物后，1)采用DEAE-Sephadex A50型离子交换柱初步分离，2)采用梯度洗脱方式(分别采用蒸馏水、0.1mol/L NaCl水溶液、0.5mol/L NaCl水溶液、1.0mol/L NaCl水溶液洗涤)，用苯酚-硫酸法跟踪检测，收集单一峰组分，3)采用透析法去除NaCl离子后再浓缩，4)浓缩液用SephadexG-100进一步分离，用去离子水洗脱，收集单一峰，洗脱液经减压浓缩、冷冻干燥，得到单一多糖组分。
三种不同方法脱除蛋白的效果有较大差异，三氯乙酸法不仅脱蛋白效果好，而且多糖的损失率也小，Sevage法次之，等电点法效果最差。
本发明的有点：以水仙多糖为原料，提取、纯化水仙球茎的胞内、胞外多糖；能够充分提取球茎中的多糖组分，所得多糖纯度高，能充分保持原有的生物活性；制备过程中，只以水和乙醇为溶剂，有效降低了污染，所用的凝胶材料经处理后可多次重复使用，降低了生产成本，适合大规模工业化生产。
具体实施方式
实施例1：
将新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成小10mm×10mm左右大小的小片，在50℃下烘箱干燥1h，去除表面的水分。称取250g水仙片，装入2500ml烧瓶中，加750ml 95％乙醇回流1.5h脱脂，过滤，滤渣置通风厨中风干后粉碎；将脱脂处理过的水仙球茎加入5000ml圆底烧瓶中，加入2500ml去离子水在80℃下萃取6h，浸提液用8000r/min的高速离心机离心10min，将上清液取出，留下的渣再按相同的方法浸提2次，将3次所得的上清液合并，经旋转浓缩仪浓缩至600ml左右，得到水仙粗多糖浓缩液。
往水仙粗多糖浓缩液中加入40ml三氯乙酸，充分搅拌后放置过夜，在3000r/min条件下离心10min，弃去沉淀得脱蛋白糖液，采用同样的方法经过2次脱蛋白，得到脱蛋白多糖液。
将脱蛋白多糖液加入95％乙醇1800ml进行沉淀，经抽滤所得滤饼依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，冷冻干燥后得到水仙粗多糖11.43g，得率为4.6％。
将上述水仙多糖溶于40ml的蒸馏水中，并制成饱和溶液，经离心除去少量不溶物后，采用DEAE-Sephadex A50型离子交换柱初步分离，采用梯度洗脱方式(蒸馏水、0.1mol/L NaCl水溶液、0.5mol/L NaCl水溶液、1.0M mol/L NaCl水溶液)进行洗脱，洗脱速度控制在4ml/min，用苯酚-硫酸法跟踪检测，收集的组分在490nm处检测吸光值，得到三个吸收峰，分别收集三个吸收峰(组分A、B、C)，采用透析法去除NaCl离子后再浓缩，得到多糖组分A、B、C的量分别为4.3g、3.7g和2.6g。多糖组分A再经Sephadex G-100进一步纯化，用去离子水洗脱，收集单一峰，洗脱液经减压浓缩、冷冻干燥得到单一多糖组分2.05g。该纯多糖经酸水解后，采用HPLC测定其单糖组成。测试条件为：高效液相色谱仪为Model 500(美国Syltech)，所用液相色谱柱为有机酸柱IC SepICE-Core gel 87H3(300mm×7.8mm)，检测器为示差折光检测器6040XR；柱温为55℃，流动相为5mmol/L的H2SO4水溶液，流动相流速为0.5mL/min，进样量为10μL。该纯多糖是高度乙酰化的多糖，乙酰化程度为65％；该纯多糖由葡萄糖、甘露糖和阿拉伯糖等三种单糖组成，其中葡萄糖占44.96％，甘露糖占54.93％，而阿拉伯糖仅占0.11％。
实施例2：
将新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成小10mm×10mm左右大小的小片，在40℃或50℃下烘箱干燥1h，去除表面的水分。称取300g水仙片，装入2500ml烧瓶中，加900ml 95％乙醇回流1.5h脱脂过滤，滤渣置通风厨中风干后粉碎。将脱脂处理过的水仙球茎加入圆底烧瓶中，加入3000ml去离子水在80℃下萃取6h，浸提液用8000r/min的高速离心机离心10min，将上清液取出，留下的渣再按相同的方法浸提2次，将3次所得的上清液合并，经旋转浓缩仪浓缩至600ml左右，得到水仙粗多糖浓缩液。
往水仙粗多糖浓缩液中加入40ml三氯乙酸，充分搅拌后放置过夜，在3000r/min条件下离心10min，弃去沉淀得脱蛋白糖液，采用同样的方法经过2次脱蛋白，得到脱蛋白多糖液。
将脱蛋白多糖液加入95％乙醇1800ml进行沉淀，经抽滤所得滤饼依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，冷冻干燥后得到水仙粗多糖13.02g，得率为4.3％。
将上述水仙多糖溶于45ml的蒸馏水中，并制成饱和溶液，经离心除去少量不溶物后，采用DEAE-Sephadex A-50型离子交换柱初步分离，采用梯度洗脱方式(蒸馏水、0.1mol/L NaCl水溶液、0.5mol/L NaCl水溶液、1.0mol/L NaCl水溶液)进行洗脱，洗脱速度控制在4ml/min，用苯酚-硫酸法跟踪检测，收集的组分在490nm处检测吸光值，得到三个吸收峰；分别收集三个吸收峰其组分A、B、C，采用透析法去除NaCl离子后再浓缩，所得多糖组分A、B、C的量分别为5.6g、3.9g和2.7g。多糖组分A再经Sephadex G-100进一步纯化，用去离子水洗脱，收集单一峰，洗脱液经减压浓缩、冷冻干燥得到2.46g纯多糖组分。该纯多糖是高度乙酰化的多糖，乙酰化程度为65％；该纯多糖由葡萄糖、甘露糖和阿拉伯糖等三种单糖组成，其中葡萄糖占44.96％，甘露糖占54.93％，而阿拉伯糖仅占0.11％。
Claims (2)
1.中国水仙多糖的提取分离方法，其特征是该方法包括以下步骤：
一、水仙球茎预处理：取新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成10mm×10mm的小片，在40～50℃下烘箱干燥1h，去除表面的水分；
二、水仙球茎脱脂：将预处理过的水仙球茎片加入该水仙球茎片3～3.5倍ml/g的95％乙醇，回流1～1.5h，再经过滤，滤渣经风干、粉碎后用于后续的多糖提取；
三、水仙多糖的提取：脱脂后的球茎粉末用该球茎粉末10～15倍ml/g热水在80℃下浸提3～4次，每次浸提时间为6～8h，浸提液经高速离心机离心，得到上清液经旋转浓缩至1/4体积，得到水仙粗多糖水溶液；
四、粗多糖脱蛋白：水仙粗多糖水溶液脱蛋白的方法有Sevage法或三氯乙酸法或等电点法；
五、沉淀法制备水仙粗多糖：经过脱蛋白处理所得到的水仙多糖水溶液，加入3～4倍体积量的95％乙醇进行沉淀，经抽滤所得的滤饼依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，冷冻干燥去除所含的少量溶剂后得到水仙粗多糖；
六、水仙粗多糖的纯化：将醇沉所得的水仙粗多糖溶于蒸馏水，并制成饱和溶液，经离心除去少量不溶物后，1)采用DEAE-Sephadex A50型离子交换柱初步分离；2)采用梯度洗脱方式，分别采用蒸馏水、0.1mol/LNaCl水溶液、0.5mol/L NaCl水溶液、1.0mol/L NaCl水溶液洗涤，用苯酚-硫酸法跟踪检测，收集单一峰组分；3)采用透析法去除NaCl离子后再浓缩；4)浓缩液用SephadexG-100进一步分离，用去离子水洗脱，收集单一峰，洗脱液经减压浓缩、冷冻干燥，得到单一多糖组分。
2.根据权利要求1所述的中国水仙多糖的提取分离方法，其特征是所述的水仙粗多糖水溶液脱蛋白的方法：
a)Sevage法：水仙粗多糖浓缩液与Sevage试剂等体积混合并充分震摇20min后，去除下层蛋白质，取上层清液并重复萃取5次后，得脱蛋白多糖液；所述的Sevage试剂是氯仿与正丁醇的体积比为氯仿∶正丁醇＝4∶1；
b)三氯乙酸法：往水仙粗多糖浓缩液中加入三氯乙酸，使其浓度达到7％，放置过夜后在3000r/min条件下离心10min，弃去沉淀得脱蛋白糖液，采用同样的方法经过2次脱蛋白，得到脱蛋白多糖液；
c)等电点法：用1mol/L盐酸调节水仙粗多糖浓缩液的pH值至3，放置过夜，在3000r/min条件下离心10min，弃沉淀得脱蛋白液，采用同样的方法经过2次脱蛋白，得到脱蛋白多糖液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010507700 CN101974095B (zh) | 2010-10-14 | 2010-10-14 | 中国水仙多糖的提取分离方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010507700 CN101974095B (zh) | 2010-10-14 | 2010-10-14 | 中国水仙多糖的提取分离方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101974095A CN101974095A (zh) | 2011-02-16 |
| CN101974095B true CN101974095B (zh) | 2012-09-05 |
Family
ID=43574010
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201010507700 Expired - Fee Related CN101974095B (zh) | 2010-10-14 | 2010-10-14 | 中国水仙多糖的提取分离方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101974095B (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102936609B (zh) * | 2012-11-05 | 2014-12-17 | 南京农业大学 | 一种蝙蝠蛾拟青霉胞外酸性糖蛋白的制备方法 |
| CN103275237B (zh) * | 2013-06-04 | 2015-06-10 | 辽宁大学 | 一种茄枝多糖的制备方法及其应用 |
| CN103333265B (zh) * | 2013-06-05 | 2016-03-30 | 南方医科大学 | 一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法 |
| CN104000274B (zh) * | 2014-05-15 | 2015-12-02 | 山东省林业科学研究院 | 蓝莓泡腾片及其制备方法 |
| CN108659998A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-10-16 | 天津农学院 | 一种含有复合型多糖的美肤性手工皂及其制备方法 |
| CN110818811B (zh) * | 2019-10-25 | 2021-08-10 | 嘉文丽（福建）化妆品有限公司 | 一种从水仙鳞茎中提取分离高粘度水仙多糖的方法 |
| CN115252525B (zh) * | 2022-09-14 | 2024-01-16 | 嘉文丽（福建）化妆品有限公司 | 一种水仙多糖发酵液的制备方法及其在化妆品中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1443782A (zh) * | 2002-03-11 | 2003-09-24 | 淄博顺达企业集团总公司 | 水仙子壳聚糖的提取方法 |
| CN1443772A (zh) * | 2002-03-11 | 2003-09-24 | 淄博顺达企业集团总公司 | 水仙子糖肽及其用途 |
-
2010
- 2010-10-14 CN CN 201010507700 patent/CN101974095B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1443782A (zh) * | 2002-03-11 | 2003-09-24 | 淄博顺达企业集团总公司 | 水仙子壳聚糖的提取方法 |
| CN1443772A (zh) * | 2002-03-11 | 2003-09-24 | 淄博顺达企业集团总公司 | 水仙子糖肽及其用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101974095A (zh) | 2011-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101974095B (zh) | 中国水仙多糖的提取分离方法 | |
| CN102417546B (zh) | 一种玫瑰花粗多糖的提取方法 | |
| CN104232718B (zh) | 铁皮石斛抗肿瘤多肽的制备方法及应用 | |
| CN103735633B (zh) | 一种速溶栀子粉的制备方法 | |
| CN112870236B (zh) | 一种黄蜀葵花黄酮类有效部位及其制备方法与应用 | |
| CN103130909A (zh) | 一种富硒羊肚菌多糖的制备方法 | |
| CN110742908A (zh) | 一种美洲大蠊提取物的制备工艺 | |
| CN113855599B (zh) | 一种美白抗炎的牡丹提取物及其制备方法和在化妆品中的应用 | |
| CN105362311A (zh) | 一种提取分离黄蜀葵花挥发油、黄酮及多糖的方法 | |
| CN1733793A (zh) | 利用海参加工废液制备海参皂甙的工艺方法 | |
| CN110283257A (zh) | 一种当归多糖的提取方法 | |
| CN105497109A (zh) | 利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺 | |
| CN108546304A (zh) | 一种利用陈皮制备聚阿拉伯半乳糖醛酸的方法 | |
| CN104262500A (zh) | 一种具有免疫活性的新型红托竹荪多糖及其制备方法和应用 | |
| CN111803531A (zh) | 一种蒲公英叶水溶性粗提物的制备方法及其应用 | |
| CN111840466A (zh) | 增强免疫力、辅助治疗肿瘤的医药保健品及其制备方法 | |
| CN106883306A (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的向日葵茎芯多糖的提取分离方法 | |
| CN103275237A (zh) | 一种茄枝多糖的制备方法及其应用 | |
| CN103588893B (zh) | 一种皖南石耳多糖的制备方法 | |
| CN107903328A (zh) | 一种皱皮木瓜籽多糖及其制备方法 | |
| CN104945533B (zh) | 一种活性玉米须纯多糖的制备方法 | |
| CN101766662B (zh) | 一种高效浓缩虫草菌丝体的工艺 | |
| CN104353057B (zh) | 含有稠李花色苷的降血压保健品 | |
| CN104004108B (zh) | 一种酶解制备锁阳多糖的方法 | |
| CN103054911A (zh) | 一种鳄鱼抗肿瘤制剂及其生产方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120905 Termination date: 20131014 |