CN103333265B - 一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，通过脱脂、提取、脱蛋白、透析、冷冻干燥、纯化、冷冻干燥，得到甘蔗渣多糖纯品粉末。本发明是从甘蔗渣中通过热水提取有生物活性的粗多糖、脱蛋白、除盐、柱层析纯化和冷冻干燥，建立了多糖的分离纯化工艺，获取均一分子量的多糖，具有免疫调节和降血脂活性，对进一步研究其化学结构和阐明其药理活性机制有重要意义，本发明采用的离子交换色谱柱具有开放性的骨架，多糖能自由进入载体中并进行迅速扩散，有较大的表面积，对多糖的吸附量较离子交换树脂大许多，本发明通过离子交换色谱法与凝胶色谱法结合对多糖进行深化分离以得到精多糖。
Description
技术领域
本发明涉及一种应用生物工程技术从甘蔗渣中分离纯化甘蔗渣多糖的方法。
背景技术
甘蔗渣是制糖工业的主要副产品，是甘蔗机械压制后所剩的主要部分，属于农业固体废弃物中的一种，我国有多个省份种植甘蔗，海南、广东、广西、福建、云南都是我国重要的产糖省份，每年均有大量的甘蔗渣产生，多数没有得到有效的高值化利用，有的甚至弃于路边，造成环境污染。寻找高值化的途径综合利用甘蔗渣具有重要意义。多糖是由十几个甚至上千个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子机构复杂且庞大的糖类物质，近年来受到了越来越广泛的关注，研究表明多糖具有极其广泛的生物活性。
多糖的提取多采用水提醇沉法，亦有采用超声提取多糖的方法（专利：一种从甘蔗渣中提取多糖的方法CN101171956）。研究表明甘蔗渣中提取的多糖具有免疫增强、抗肿瘤、抗病毒、降血糖、降血脂的作用。由于多糖成分复杂，所以其组分的分离和纯化对于多糖的利用具有至关重要的作用，对进一步的化学结构研究和药理机制的阐明具有重要意义。
发明内容
为解决上述问题，本发明的目的是提供一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其不影响多糖天然的结构，保留了其生物活性。
本发明的目的是这样实现的：一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）脱脂：取甘蔗渣以乙醇浸泡、回流，滤过后滤渣烘干；
（2）提取：步骤（1）所得滤渣经水提醇沉法得粗多糖；
（3）脱蛋白：步骤（2）所得粗多糖用水溶解，通过sevag法将蛋白分离；
（4）透析：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，将上清液在水中透析，去除小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液；
（5）冷冻干燥：步骤（4）所得甘蔗渣多糖浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品；
（6）纯化：将步骤（5）所得甘蔗渣多糖经离子交换色谱法与凝胶色谱法纯化；
（7）冷冻干燥，得到甘蔗渣多糖纯品粉末。
本发明是从甘蔗渣中通过热水提取有生物活性的粗多糖、脱蛋白、除盐、柱层析纯化和冷冻干燥，建立了多糖的分离纯化工艺，获取均一分子量的多糖，具有免疫调节和降血脂活性，对进一步研究其化学结构和阐明其药理活性机制有重要意义，本发明采用的离子交换色谱柱具有开放性的骨架，多糖能自由进入载体中并进行迅速扩散，有较大的表面积，对多糖的吸附量较离子交换树脂大许多，本发明通过离子交换色谱法与凝胶色谱法结合对多糖进行深化分离以得到精多糖。
附图说明
图1是本发明实施例1中经DEAE-52纤维素柱层析分离出2个组分的图谱；
图2是本发明实施例1中第1组分SephadexG-100凝胶层析图谱；
图3是本发明实施例1中第2组分SephadexG-100凝胶层析图谱；
图4是本发明实施例1中第1组分SephacrylS-300凝胶层析图谱；
图5是本发明实施例1中第2组分SephacrylS-300凝胶层析图谱。
具体实施方式
本发明是一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，包括以下步骤：
（1）脱脂：取甘蔗渣以乙醇浸泡、回流，滤过后滤渣烘干。优选的，取一定量的甘蔗渣，加入6-12倍量95%乙醇浸泡30-60min，回流4-8h，滤过，滤渣烘干。
（2）提取：步骤（1）所得滤渣经水提醇沉法得粗多糖。优选的，水提醇沉法是：将步骤（1）所得滤渣依次加8-12倍量、6-10倍量水回流提取一次以上，每次2-4h，滤过合并滤液，滤液浓缩，加3-5倍量95%乙醇，静置，抽滤，滤渣经干燥得粗多糖。
（3）脱蛋白：步骤（2）所得粗多糖用水溶解，通过sevag法将蛋白分离。优选的，sevag法是：将步骤（2）所得甘蔗渣粗多糖用水溶解，将氯仿按多糖溶液1/5体积加入，随之加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合剧烈振摇搅拌后，以2000-6000rpm，10-30min离心，出去蛋白，如此重复7-10次。
（4）透析：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，将上清液在水中透析，去除小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液。优选的，透析是：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，得上清液，用截留分子量3000的透析袋将上清液在流水中透析40-55h，再在去离子水中透析20-30h，收集甘蔗渣多糖溶液。
（5）冷冻干燥：步骤（4）所得甘蔗渣多糖浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品。
（6）纯化：将步骤（5）所得甘蔗渣多糖经离子交换色谱法与凝胶色谱法纯化。优选的，所述的步骤（6）中，离子交换色谱法采用阴离子交换色谱柱，凝胶色谱法采用葡聚糖凝胶(Sephadex，Sephaeryl)、琼脂糖凝胶(Sepherose)或DEAE-葡聚糖（DEAE-Sephadex）等。色谱柱种类很多，每类还有各种细分型号，种类繁多，大多都适用，只是流速、分离度等有差异，根据实际需要选择并设定相应的参数。例如，阴离子交换色谱柱可采用DEAE-52纤维素、DEAE-32纤维素、DEAE-Sepharosefastflow、DEAE-Cellulose等市售的常规产品；凝胶柱采用SephadexG-50、SephadexG-75、SephadexG-100、SephadexG-150、SephadexG-200、SephacrylS-100、SephacrylS-200、SephacrylS-300、SephacrylS-400、SephacrylS-500、SephadexLH-20、SephadexLH-60、DEAESepharoseCL-6B、DEAESephadexA-50、DEAESephadexA-25等市售的常规产品。
以DEAE-52纤维素阴离子交换色谱柱为例，离子交换色谱参数为：，流速0.2-0.8ml/min，先后以水、0-0.5mol/LNaCl洗脱，分离出两个组分。更优选的，离子交换色谱法为：阴离子交换色谱柱为DEAE-52纤维素，以蒸馏水平衡DEAE-52纤维素（2.6×40cm），上样量100mg，流速0.2-0.8ml/min，收集150管，前50管以水为洗脱液，后100管以0-0.5mol/LNaCl洗脱，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线，分离出两个组分，分别合并多糖峰的收集液，冷冻干燥，得甘蔗渣多糖。
优选的，凝胶色谱法中至少过两次凝胶柱，更好的，在后的凝胶柱的分离精度高于在先的凝胶柱。选用两种不同凝胶柱，是为了能有一个递进的分离过程，第一次过凝胶目的为了快速大量的分离样品，第二次过另一种凝胶是为了更精细的分离，达到更高的分离度。具体以SephadexG-100凝胶柱和SephacrylS-300凝胶柱为例，凝胶色谱法的工艺为：i.将经离子交换色谱法分离出的组分上SephadexG-100凝胶柱（1.6cm×80cm）纯化，以水洗脱，流速0.2-0.8ml/min，浓缩后冷冻干燥；ii.然后上SephacrylS-300凝胶柱（1.6×80cm），以水洗脱，流速0.2-0.8ml/min。
（7）冷冻干燥，得到甘蔗渣多糖纯品粉末。优选的，将步骤（6）纯化后的两个峰的收集液，用截留分子量3000的透析袋在蒸馏水中透析1-4d，浓缩，冷冻干燥，得到两个甘蔗渣多糖纯品粉末。
以下通过具体例子对本发明做进一步的阐述，但本发明并不限于此特定例子。
实施例1
（1）脱脂：取一定量的甘蔗渣，加入10倍量95%乙醇浸泡30min，回流6h，滤过，滤渣烘干。
（2）提取：步骤（1）所得滤渣依次加10倍量、8倍量水回流提取两次，每次2h，滤过合并滤液，滤液浓缩，加4倍量95%乙醇，静置12h，抽滤，滤渣经干燥得粗多糖。
（3）脱蛋白：步骤（2）所得甘蔗渣粗多糖用水溶解，将氯仿按多糖溶液1/5体积加入，随之加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合剧烈振摇搅拌后，以5000rpm，20min离心，出去蛋白。如此重复脱蛋白7次。
（4）透析：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，弃不溶物，得上清液，用截留分子量3000的透析袋将上清液在流水中透析48h，再在去离子水中透析24h，进一步去除寡糖、无机盐、色素等小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液。
（5）冷冻干燥：步骤（4）所得甘蔗渣多糖浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品。
（6）纯化：将步骤（5）所得甘蔗渣多糖经DEAE-52纤维素和葡聚糖凝胶层析。
a)阴离子交换色谱柱（DEAE-52纤维素）：以蒸馏水平衡DEAE-52纤维素（2.6×40cm），上样量100mg，流速0.5ml/min，收集150管，前50管以水为洗脱液，后100管以0-0.5mol/LNaCl洗脱，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线，如图1所示，分离出2个组分，合并多糖峰的收集液，冷冻干燥，得甘蔗渣多糖。
b)凝胶柱纯化（SephadexG-100）：将两个组分分别上凝胶柱（1.6×80cm）纯化，以水洗脱，流速0.3ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。两个组分经凝胶纯化后均得到一个峰，如图2、图3。浓缩后冷冻干燥。
c)凝胶柱纯度验证（SephacrylS-300）：两个组分用SephacrylS-300凝胶柱（1.6×80cm）验证其纯度，均以水洗脱，流速0.3ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线，均得到单一对称峰，如图4、图5，说明是纯的多糖。
（7）冷冻干燥：将纯化后的两个峰收集后，用蒸馏水透析2d，浓缩，冷冻干燥，得到两个甘蔗渣多糖纯品粉末。
实施例2
（1）脱脂：取一定量的甘蔗渣，加入6倍量95%乙醇浸泡60min，回流8h，滤过，滤渣烘干。
（2）提取：步骤（1）所得滤渣依次加8倍量、10倍量水回流提取两次，每次4h，滤过合并滤液，滤液浓缩，加3倍量95%乙醇，静置12h，抽滤，滤渣经干燥得粗多糖。
（3）脱蛋白：步骤（2）所得甘蔗渣粗多糖用水溶解，将氯仿按多糖溶液1/5体积加入，随之加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合剧烈振摇搅拌后，以2000rpm，10min离心，出去蛋白。如此重复脱蛋白7次。
（4）透析：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，弃不溶物，得上清液，用截留分子量3000的透析袋将上清液在流水中透析48h，再在去离子水中透析24h，进一步去除寡糖、无机盐、色素等小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液。
（5）冷冻干燥：步骤（4）所得甘蔗渣多糖浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品。
（6）纯化：将步骤（5）所得甘蔗渣多糖经DEAE-Sepharosefastflow和葡聚糖凝胶层析。
a)阴离子交换色谱柱（DEAE-Sepharosefastflow）：以蒸馏水平衡DEAE-Sepharosefastflow（2.6×40cm），上样量100mg，流速0.6ml/min，收集150管，前50管以水为洗脱液，后100管以0-0.5mol/LNaCl洗脱，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。分离出2个组分，合并多糖峰的收集液，冷冻干燥，得甘蔗渣多糖。
b)凝胶柱纯化（SephadexG-100）：将两个组分分别上凝胶柱（1.6×80cm）纯化，以水洗脱，流速0.2ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。两个组分经凝胶纯化后均得到一个峰。浓缩后冷冻干燥。
c)凝胶柱纯度验证（SephacrylS-300）：两个组分用SephacrylS-300凝胶柱（1.6×80cm）验证其纯度，均以水洗脱，流速0.2ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。均得到单一对称峰，说明是纯的多糖。
（7）冷冻干燥：将纯化后的两个峰收集后，用蒸馏水透析1d，浓缩，冷冻干燥，得到两个甘蔗渣多糖纯品粉末。
实施例3
（1）脱脂：取一定量的甘蔗渣，加入12倍量95%乙醇浸泡50min，回流8h，滤过，滤渣烘干。
（2）提取：步骤（1）所得滤渣依次加7倍量、5倍量水回流提取两次，每次3h，滤过合并滤液，滤液浓缩，加4倍量95%乙醇，静置12h，抽滤，滤渣经干燥得粗多糖。
（3）脱蛋白：步骤（2）所得甘蔗渣粗多糖用水溶解，将氯仿按多糖溶液1/5体积加入，随之加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合剧烈振摇搅拌后，以3000rpm，20min离心，出去蛋白。如此重复脱蛋白7次。
（4）透析：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，弃不溶物，得上清液，用截留分子量3000的透析袋将上清液在流水中透析48h，再在去离子水中透析24h，进一步去除寡糖、无机盐、色素等小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液。
（5）冷冻干燥：步骤（4）所得甘蔗渣多糖浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品。
（6）纯化：将步骤（5）所得甘蔗渣多糖经DEAE-52纤维素和葡聚糖凝胶层析。
a)阴离子交换色谱柱（DEAE-52纤维素）：以蒸馏水平衡DEAE-52纤维素（2.6×40cm），上样量100mg，流速0.3ml/min，收集150管，前50管以水为洗脱液，后100管以0-0.5mol/LNaCl洗脱，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。分离出2个组分，合并多糖峰的收集液，冷冻干燥，得甘蔗渣多糖。
b)凝胶柱纯化（SephadexG-200）：将两个组分分别上凝胶柱（1.6×80cm）纯化，以水洗脱，流速0.3ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。两个组分经凝胶纯化后均得到一个峰。浓缩后冷冻干燥。
c)凝胶柱纯度验证（SephacrylS-300）：两个组分用SephacrylS-300凝胶柱（1.6×80cm）验证其纯度，均以水洗脱，流速0.3ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。均得到单一对称峰，说明是纯的多糖。
（7）冷冻干燥：将纯化后的两个峰收集后，用蒸馏水透析2d，浓缩，冷冻干燥，得到两个甘蔗渣多糖纯品粉末。
实施例4
（1）脱脂：取一定量的甘蔗渣，加入9倍量95%乙醇浸泡30min，回流8h，滤过，滤渣烘干。
（2）提取：步骤（1）所得滤渣依次加11倍量、8倍量水回流提取两次，每次4h，滤过合并滤液，滤液浓缩，加4倍量95%乙醇，静置12h，抽滤，滤渣经干燥得粗多糖。
（3）脱蛋白：步骤（2）所得甘蔗渣粗多糖用水溶解，将氯仿按多糖溶液1/5体积加入，随之加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合剧烈振摇搅拌后，以5000rpm，15min离心，出去蛋白。如此重复脱蛋白8次。
（4）透析：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，弃不溶物，得上清液，用截留分子量3000的透析袋将上清液在流水中透析48h，再在去离子水中透析24h，进一步去除寡糖、无机盐、色素等小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液。
（5）冷冻干燥：步骤（4）所得甘蔗渣多糖浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品。
（6）纯化：将步骤（5）所得甘蔗渣多糖经DEAE-52纤维素和葡聚糖凝胶层析。
a)阴离子交换色谱柱（DEAE-52纤维素）：以蒸馏水平衡DEAE-52纤维素（2.6×40cm），上样量100mg，流速0.5ml/min，收集150管，前50管以水为洗脱液，后100管以0-0.5mol/LNaCl洗脱，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。分离出2个组分，合并多糖峰的收集液，冷冻干燥，得甘蔗渣多糖。
b)凝胶柱纯化（SephadexG-150）：将两个组分分别上凝胶柱（1.6×80cm）纯化，以水洗脱，流速0.5ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。两个组分经凝胶纯化后均得到一个峰。浓缩后冷冻干燥。
c)凝胶柱纯度验证（SephacrylS-200）：两个组分用SephacrylS-200凝胶柱（1.6×80cm）验证其纯度，均以水洗脱，流速0.5ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。均得到单一对称峰，说明是纯的多糖。
（7）冷冻干燥：将纯化后的两个峰收集后，用蒸馏水透析1-4d，浓缩，冷冻干燥，得到两个甘蔗渣多糖纯品粉末。
实施例5
（1）脱脂：取一定量的甘蔗渣，加入11倍量95%乙醇浸泡60min，回流7h，滤过，滤渣烘干。
（2）提取：步骤（1）所得滤渣依次加12倍量、9倍量水回流提取两次，每次4h，滤过合并滤液，滤液浓缩，加5倍量95%乙醇，静置12h，抽滤，滤渣经干燥得粗多糖。
（3）脱蛋白：步骤（2）所得甘蔗渣粗多糖用水溶解，将氯仿按多糖溶液1/5体积加入，随之加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合剧烈振摇搅拌后，以6000rpm，10min离心，出去蛋白。如此重复脱蛋白10次。
（4）透析：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，弃不溶物，得上清液，用截留分子量3000的透析袋将上清液在流水中透析48h，再在去离子水中透析24h，进一步去除寡糖、无机盐、色素等小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液。
（5）冷冻干燥：步骤（4）所得甘蔗渣多糖浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品。
（6）纯化：将步骤（5）所得甘蔗渣多糖经DEAE-Cellulose阴离子交换柱和葡聚糖凝胶层析。
a)阴离子交换色谱柱（DEAE-Cellulose）：以蒸馏水平衡DEAE-Cellulose（2.6×40cm），上样量100mg，流速0.4ml/min，收集150管，前50管以水为洗脱液，后100管以0-0.5mol/LNaCl洗脱，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。分离出2个组分，合并多糖峰的收集液，冷冻干燥，得甘蔗渣多糖。
b)凝胶柱纯化（SephacrylS-100）：将两个组分分别上凝胶柱（1.6×80cm）纯化，以水洗脱，流速0.4ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。两个组分经凝胶纯化后均得到一个峰。浓缩后冷冻干燥。
c)凝胶柱纯度验证（SephacrylS-300）：两个组分用SephacrylS-300凝胶柱（1.6×80cm）验证其纯度，均以水洗脱，流速0.4ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。均得到单一对称峰，说明是纯的多糖。
（7）冷冻干燥：将纯化后的两个峰收集后，用蒸馏水透析3d，浓缩，冷冻干燥，得到两个甘蔗渣多糖纯品粉末。
实施例6
（1）脱脂：取一定量的甘蔗渣，加入8倍量95%乙醇浸泡45min，回流6h，滤过，滤渣烘干。
（2）提取：步骤（1）所得滤渣依次加12倍量、6倍量水回流提取两次，每次2h，滤过合并滤液，滤液浓缩，加4倍量95%乙醇，静置12h，抽滤，滤渣经干燥得粗多糖。
（3）脱蛋白：步骤（2）所得甘蔗渣粗多糖用水溶解，将氯仿按多糖溶液1/5体积加入，随之加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合剧烈振摇搅拌后，以3000rpm，25min离心，出去蛋白。如此重复脱蛋白8次。
（4）透析：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，弃不溶物，得上清液，用截留分子量3000的透析袋将上清液在流水中透析48h，再在去离子水中透析24h，进一步去除寡糖、无机盐、色素等小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液。
（5）冷冻干燥：步骤（4）所得甘蔗渣多糖浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品。
（6）纯化：将步骤（5）所得甘蔗渣多糖经DEAE-Sepharosefastflow和葡聚糖凝胶层析。
a)阴离子交换色谱柱（DEAE-Sepharosefastflow）：以蒸馏水平衡DEAE-Sepharosefastflow（2.6×40cm），上样量100mg，流速0.8ml/min，收集150管，前50管以水为洗脱液，后100管以0-0.5mol/LNaCl洗脱，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。分离出2个组分，合并多糖峰的收集液，冷冻干燥，得甘蔗渣多糖。
b)凝胶柱纯化（SephacrylS-200）：将两个组分分别上凝胶柱（1.6×80cm）纯化，以水洗脱，流速0.8ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。两个组分经凝胶纯化后均得到一个峰。浓缩后冷冻干燥。
c)凝胶柱纯度验证（SephacrylS-300）：两个组分用SephacrylS-300凝胶柱（1.6×80cm）验证其纯度，均以水洗脱，流速0.2ml/min，苯酚-硫酸法检测多糖出峰，绘制洗脱曲线。均得到单一对称峰，说明是纯的多糖。
（7）冷冻干燥：将纯化后的两个峰收集后，用蒸馏水透析4d，浓缩，冷冻干燥，得到两个甘蔗渣多糖纯品粉末。
Claims (7)
1.一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)脱脂：取甘蔗渣以乙醇浸泡、回流，滤过后滤渣烘干；
(2)提取：步骤(1)所得滤渣经水提醇沉法得粗多糖；
(3)脱蛋白：步骤(2)所得粗多糖用水溶解，通过sevag法将蛋白分离；
(4)透析：步骤(3)所得的粗品浓缩，离心，将上清液在水中透析，去除小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液；
(5)冷冻干燥：步骤(4)所得甘蔗渣多糖溶液浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品；
(6)纯化：将步骤(5)所得甘蔗渣多糖经离子交换色谱法与凝胶色谱法纯化，其中离子交换色谱法为：采用阴离子交换色谱柱，流速0.2-0.8ml/min，先后以水、0-0.5mol/LNaCl洗脱，分离出两个组分；凝胶色谱法采用葡聚糖凝胶柱、琼脂糖凝胶柱、DEAE-葡聚糖凝胶柱、凝胶柱SephacrylS-100、凝胶柱SephacrylS-200、凝胶柱SephacrylS-300、凝胶柱SephacrylS-400、凝胶柱SephacrylS-500或凝胶柱DEAESepharoseCL-6B，过两次凝胶柱，在后的凝胶柱的分离精度高于在先的凝胶柱，将经离子交换色谱法分离出的两个组分分别上第一凝胶柱纯化，以水洗脱，流速0.2-0.8ml/min，浓缩后冷冻干燥，然后上第二凝胶柱，以水洗脱，流速0.2-0.8ml/min；
(7)冷冻干燥，将步骤(6)纯化后的两个峰的收集液，用截留分子量3000的透析袋在蒸馏水中透析1-4d，浓缩，冷冻干燥，得到两个甘蔗渣多糖纯品粉末。
2.根据权利要求1所述的一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中，取一定量的甘蔗渣，加入6-12倍量95％乙醇浸泡30-60min，回流4-8h，滤过，滤渣烘干。
3.根据权利要求1所述的一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的水提醇沉法是：将步骤(1)所得滤渣依次加8-12倍量、6-10倍量水回流提取两次，每次2-4h，滤过合并滤液，滤液浓缩，加3-5倍量95％乙醇，静置，抽滤，滤渣经干燥得粗多糖。
4.根据权利要求1所述的一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的sevag法是：将步骤(2)所得甘蔗渣粗多糖用水溶解，将氯仿按多糖溶液1/5体积加入，随之加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合剧烈振摇搅拌后，以2000-6000rpm，10-30min离心，除去蛋白，如此重复7-10次。
5.根据权利要求1所述的一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其特征在于：所述步骤(4)中的透析是：步骤(3)所得的粗品浓缩，离心，得上清液，用截留分子量3000的透析袋将上清液在流水中透析40-55h，再在去离子水中透析20-30h，收集甘蔗渣多糖溶液。
6.根据权利要求1所述的一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其特征在于：所述的步骤(6)中，阴离子交换色谱柱选自DEAE-Sepharosefastflow、DEAE-Cellulose。
7.根据权利要求1所述的一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其特征在于：所述的步骤(6)中，葡聚糖凝胶柱选自SephadexG-50、SephadexG-75、SephadexG-100、SephadexG-150或SephadexG-200，DEAE-葡聚糖凝胶柱选择凝胶柱DEAESephadexA-50或凝胶柱DEAESephadexA-25。
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| "银杏多糖的提取分离、结构鉴定及活性测定";原菲;《中国优秀硕士论文全文数据库（电子期刊） 医药卫生科技辑》;20101015(第10期);E057-41,第17-19页 * |
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