CN103275175B - 蒲公英小分子糖蛋白的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备方法，包括以下步骤：步骤一、对蒲公英根搅拌提取。步骤二、对蒲公英根提取并进行初步纯化得到蒲公英小分子糖蛋白提取物。步骤三、对蒲公英小分子糖蛋白进行进一步纯化。步骤四、检测蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性。本发明由于采用了对蒲公英根干粉搅拌提取并纯化的技术手段，所以使一定抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备工艺更简单方便，且对蒲公英蛋白质的提纯效果更好，具有很好的应用前景。

Description

蒲公英小分子糖蛋白的制备方法
技术领域
本发明属于一定抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备领域，尤其涉及一种具有抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备工艺。
背景技术
蒲公英属菊科多年生草本植物。头状花序，种子上有白色冠毛结成的绒球，花开后随风飘到新的地方孕育新生命。蒲公英植物体中含有蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖等多种健康营养成分，有利尿、缓泻、退黄疸、利胆等功效。蒲公英同时含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、微量元素及维生素等，有丰富的营养价值，可生吃、炒食、做汤，是药食兼用的植物。
现有的制备蒲公英小分子糖蛋白的技术是从蒲公英干燥全草中分离出3种含有O-糖肽键的蒲公英糖蛋白(TMGP)均一组分，其中的TMGP-a含有少量硫酸基，TMGP-b的糖侧链为硫酸化多糖，TMGP-c含有β-吡喃糖苷键，且TMGP对·OH和O2·-自由基具有较强的清除作用。这种方法很难实现，并且提纯效果不好，应用性很差。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备工艺，旨在解决蒲公英小分子糖蛋白难以提纯的问题。
本发明是这样实现的，一种具有抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备方法。
步骤一、对蒲公英根搅拌提取。
步骤二、对蒲公英提取并进行初步纯化得到蒲公英小分子糖蛋白提取物。
步骤三、对蒲公英小分子糖蛋白进行进一步纯化。
步骤四、检测蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性。
进一步，取一定量蒲公英根，80℃烘干恒重，粉碎过80目筛。称取一定量的蒲公英干粉，以水为提取溶剂，按照物料比1∶16的比例于80℃下搅拌提取。
进一步，提取及初步纯化工艺为向三角烧瓶中加入80℃左右的水，然后移至恒温水浴锅上，保持提取温度80℃回流提取4h，提取1次；在70-80℃下减压浓缩总体积至1/4，加入活性炭使其最终浓度为0.5％，室温搅拌脱色30分钟，6000r·min-1离心10min取上清液弃沉淀；再加入三氯乙酸使其浓度为3％，摇匀、静置过夜，6000r·min-1离心10min，取上清液弃沉淀。用截留分子量为14000Da的透析袋搅拌透析48小时，然后浓缩透析袋外样品至1/5体积，加入酒精使酒精最终浓度为70％，醇沉过夜。然后6000r·min-1离心10min，弃上清液，沉淀即为蒲公英小分子糖蛋白提取物。
进一步，蒲公英小分子糖蛋白的纯化工艺是取一定量的蒲公英小分子糖蛋白提取液配制多糖浓度为10％的溶液，按质量比(多糖∶树脂)1∶30上DEAE-52离子交换柱。然后用无离子水洗脱至洗脱液加硫酸蒽酮试剂不变色为止，再用4个柱体积0.2mol·L-1的NaCl洗脱，收集洗脱液；洗脱液过SephadexG-50柱子进行脱盐，280nm下接取所有蛋白峰混合，真空冷冻干燥，即为黄精糖蛋白纯品。
进一步，蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性是通过Fenton氧化法和邻苯三酚自氧化分别检测其对羟基自由基和超氧阴离子的清除能力发现，蒲公英小分子糖蛋白具有Vc相当的对羟基自由基和超氧阴离子的清除能力。
由于采用了对蒲公英干粉搅拌提取并纯化的技术手段，所以使一定抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备工艺更简单方便，且对蒲公英蛋白质的提纯效果更好，具有很好的应用前景。
附图说明
图1是本发明提供的具有抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备工艺的流程图。
具体实施方式
本发明是这样实现的，结合附图1，一种具有抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备方法。
S101、对蒲公英根搅拌提取。
S102、对蒲公英提取并进行初步纯化得到蒲公英小分子糖蛋白提取物。
S103、对蒲公英小分子糖蛋白进行进一步纯化。
S104、检测蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性。
进一步，取一定量蒲公英根，80℃烘干恒重，粉碎过80目筛。称取一定量的蒲公英干粉，以水为提取溶剂，按照物料比1∶16的比例于80℃下搅拌提取。
进一步，提取及初步纯化工艺为向三角烧瓶中加入80℃左右的水，然后移至恒温水浴锅上，保持提取温度80℃回流提取4h，提取1次；在70-80℃下减压浓缩总体积至1/4，加入活性炭使其最终浓度为0.5％，室温搅拌脱色30分钟，6000r·min-1离心10min取上清液弃沉淀；再加入三氯乙酸使其浓度为3％，摇匀、静置过夜，6000r·min-1离心10min，取上清液弃沉淀。用截留分子量为14000Da的透析袋搅拌透析48小时，然后浓缩透析袋外样品至1/5体积，加入酒精使酒精最终浓度为70％，醇沉过夜。然后6000r·min-1离心10min，弃上清液，沉淀即为蒲公英小分子糖蛋白提取物。
进一步，蒲公英小分子糖蛋白的纯化工艺是取一定量的蒲公英小分子糖蛋白提取液配制多糖浓度为10％的溶液，按质量比(多糖∶树脂)1∶30上DEAE-52离子交换柱。然后用无离子水洗脱至洗脱液加硫酸蒽酮试剂不变色为止，再用4个柱体积0.2mol·L-1的NaCl洗脱，收集洗脱液；洗脱液过SephadexG-50柱子进行脱盐，280nm下接取所有蛋白峰混合，真空冷冻干燥，即为黄精糖蛋白纯品。
进一步，蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性是通过Fenton氧化法和邻苯三酚自氧化分别检测其对羟基自由基和超氧阴离子的清除能力发现，蒲公英小分子糖蛋白具有Vc相当的对羟基自由基和超氧阴离子的清除能力。
取一定量的蒲公英根进行搅拌提取；进行初步纯化得到蒲公英小分子糖蛋白提取物；对蒲公英小分子糖蛋白提纯物进行进一步纯化；检测蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性从而获得一种具有抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白。

Claims (1)

1.一种具有抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：
步骤一、对蒲公英根搅拌提取；
步骤二、对蒲公英根提取并进行初步纯化得到蒲公英小分子糖蛋白提取物；
步骤三、对蒲公英小分子糖蛋白进行进一步纯化；
步骤四、检测蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性；
取蒲公英根，80℃烘干恒重，粉碎过80目筛；称取蒲公英干粉，以水为提取溶剂，按照物料比1∶16的比例于80℃下搅拌提取；
提取及初步纯化工艺为向三角烧瓶中加入80℃左右的水，然后移至恒温水浴锅上，保持提取温度80℃回流提取4h，提取1次；在70-80℃下减压浓缩总体积至1/4，加入活性炭使其最终浓度为0.5％，室温搅拌脱色30分钟，6000r·min-1离心10min取上清液弃沉淀；再加入三氯乙酸使其浓度为3％，摇匀、静置过夜，6000r·min-1离心10min，取上清液弃沉淀；用截留分子量为14000Da的透析袋搅拌透析48小时，然后浓缩透析袋外样品至1/5体积，加入酒精使酒精最终浓度为70％，醇沉过夜；然后6000r·min-1离心10min，弃上清液，沉淀即为蒲公英小分子糖蛋白提取物；
蒲公英小分子糖蛋白的纯化工艺是取的蒲公英小分子糖蛋白提取液配制糖蛋白浓度为10％的溶液，按质量比多糖∶树脂1∶30上DEAE-52离子交换柱；然后用无离子水洗脱至洗脱液加硫酸蒽酮试剂不变色为止，再用4个柱体积0.2mol·L-1的NaCl洗脱，收集洗脱液；洗脱液过SephadexG-50柱子进行脱盐，280nm下接取所有蛋白峰混合，真空冷冻干燥，即为蒲公英小分子糖蛋白纯品；
蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性是通过Fenton氧化法和邻苯三酚自氧化分别检测其对羟基自由基和超氧阴离子的清除能力发现，蒲公英小分子糖蛋白具有Vc相当的对羟基自由基和超氧阴离子的清除能力。
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