CN111803531A - 一种蒲公英叶水溶性粗提物的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种蒲公英叶水溶性粗提取物的制备方法，包括水提预处理、水浸提、浓缩、喷雾干燥等步骤；整体步骤流程简单、提取率高、提取成本低；制取的蒲公英水溶性粗提物有效成分含量高，能够用于制备提高免疫力和抗菌消炎活性的饲料添加剂。其中，水溶性粗提物提取率可达27.4％，相较于目前市场上粗提物的提取率13.7％，提高了2倍；咖啡酸含量由0.02％提高到1.1％以上。

Description

一种蒲公英叶水溶性粗提物的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及植物中有效成分提取的技术领域，更具体的说是涉及一种蒲公英水提取物的制备方法。
背景技术
蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.)，又名婆婆丁、黄花苗、黄花地丁、黄花郎、木山药、浆薄薄、补补丁、奶汁或苦蓿等。广泛分布于华北、华中、华东、东北等区的许多地方，蒲公英治疗病疾古籍早有记载，其中李时珍《本草纲目》中明确记载：女人乳痈肿，水煮汗饮及封之，立消；解食毒、散滞气、化热毒、消恶肿、结核、疗肿、壮筋骨；白汁涂恶刺、狐尿刺疮，即愈。并且，现代医学也研究证实，蒲公英具有很高的药用价值，其提取物被用于治疗肝脏和胆囊阻塞，改善肝功能，促进胆汁分泌和作为利尿剂使用。蒲公英含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、微量元素及维生素等，具有丰富的营养价值，可生吃、炒食、做汤等，是菊科多年生草本植物，被卫生部列入药食同源物质名单。随着人工栽培蒲公英的单位或个人日益增多，其开发利用前景更加广阔。
蒲公英叶作为蒲公英种植产业的副产品，含有各种营养物质的同时，也富含多种药理活性成分，如黄酮、酚酸等。黄酮类主要包含木樨草素、槲皮素、单糖类衍生物等，酚酸类主要包含绿原酸、咖啡酸等。主要的药理作用为清热解毒、抗炎、抗菌、抗病毒和抗肿瘤等作用。目前，针对蒲公英药理作用以单一成分作为指标进行的分离、纯化生产较多，如：公开号 CN103070899A记载了一种蒲公英总黄酮的分离纯化方法：提取过程主要包括甲醇回流提取、浓缩、pH调节、大孔树脂柱分离等步骤，最终可得到纯度96％的总黄酮，但该提取方法使用85～100％甲醇作为提取液，再用甲醇、丙酮等洗脱进行分离、纯化；极容易造成提取物中残留有毒性溶剂，且使用大孔树脂柱等分离、纯化，步骤繁琐，成本高，不适合大规模生产。公开号 CN201110062814.4记载了一种蒲公英黄酮的提取方法，该专利使用了石油醚对蒲公英进行脱色，并且将提取物用于制药领域，同样极容易造成提取物中残留有毒性溶剂，此外，该专利将蒲公英的整个植株作为原材料，增加了生产成本。
蒲公英药理活性为多种有效成分协同发挥作用，尤其在提高免疫力的功能利用方面。目前，国内蒲公英粗提物的制备依然多采用有机溶剂分离、纯化，主要应用于中药领域。公开号CN107998166A记载了蒲公英提取物的制备方法，该专利将蒲公英进行破碎后加入70～80％的乙醇，经过微波提取，再经过丙酮萃取，最后经过层析柱纯化，尽管得到木樨草素、槲皮素、咖啡酸和绿原酸总含量≥70％的粗提物，但是在提取过程中用到丙酮等机溶剂，易造成提取物中残留有毒性溶剂，且使用硅胶层析柱等分离、纯化，步骤繁琐，成本高，不适合大规模生产。公开号CN109045094A记载了一种蒲公英提取物的制备方法，该专利将蒲公英粉用70～80％乙醇溶液微波提取50～60s，将提取液减压浓缩至无醇味的浓缩液，离心后将上清液通过微滤膜得蒲公英提取物，尽管操作步骤较其他专利简便不少，但提取溶液仍然为有机溶剂。公开号 CN103445173A记载了一种制备蒲公英叶水溶性活性提取物的方法，该专利使用蒸馏水或去离子水为载体，采用常压提取、旋蒸浓缩、喷雾冷冻干燥等工艺得到的提取物，酚酸类活性物质仅为1.59％。公开号CN107998166A记载了一种蒲公英提取物的制备方法，采用了水提，但也采取醇沉、大孔树脂纯化等工艺，提取物的咖啡酸含量由0.02％提高到0.8％以上。
上述公知技术，主要有蒲公英有机溶剂浸提和水提技术，有机溶剂浸提可在一定程度上加大提出率，但需要大孔树脂吸附洗脱、微孔滤膜过滤除杂等流程，不仅操作复杂，制备成本高，而且存在有机溶剂残留的风险，并没有真正解决生产所需的安全问题；水提技术提取率低、得到的提取物主效成分含量低，咖啡酸仅有0.8％(CN105287682A)，酚酸类活性物质仅为1.59％ (CN103445173A)。并且，蒲公英提取物专利技术主要用于中药生产领域，在替代抗生素饲料的规模化生产中的应用技术匮乏。
因此，亟需提供一种操作简单、提取率高、蒲公英的抗菌消炎功能成分含量高、适于替代抗生素饲料的蒲公英水溶性粗提取物的制备方法。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种以水为提取载体，以大叶蒲公英叶片为提取原材料，提高酚酸物质含量的蒲公英水提取物的制备方法，整体步骤流程简单、提取率高、提取成本低，制取备的蒲公英水提物酚酸类活性物质有效成分含量高，具有优异的抗菌消炎活性和免疫力提升功效，并且可作为替代饲料中抗生素的饲料添加剂。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种蒲公英叶水溶性粗提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)水提预处理：将蒲公英加入纤维素酶溶液中，浸泡，得到预处理的蒲公英；
(2)水浸提：预处理的蒲公英进行3次水浸提，合并浸提液，过滤后静置得到提取液
(3)浓缩干燥：提取液蒸发浓缩，经过喷雾干燥后过筛，得到蒲公英水提物。
优选的，步骤(1)中所述蒲公英叶是将新鲜采摘的大叶蒲公英的叶子洗净、切段3～5cm，先在阴凉处失水20％～40％，再晒干或烘箱中60～75℃烘烤 4～6h制得。
先在阴凉处失水，又经过晒干或烘箱烘干，但是要切记避免新鲜蒲公英直接阳光下暴晒。
优选的，步骤(1)中所述纤维素酶溶液中纤维素酶的质量百分比为0.1％，所述纤维素酶的酶活力为5000～10000U/g。
优选的，步骤(1)中所述蒲公英叶与所述纤维素酶溶液的质量体积比为 1g:(5mL～10mL)，调节pH值为4，浸泡的温度为50～80℃，时间为6～12h。
为了更好的破坏蒲公英细胞的细胞壁，使有效成分更好的浸提出来，同时添加纤维素酶可以调节溶液的pH值为4左右。
优选的，步骤(1)中，将洗净的大叶蒲公英叶子切段4cm，阴凉处失水 25％，再晒干或烘箱中65℃烘烤6h，1g蒲公英叶子加入6mL 0.1％纤维素酶，浸泡的温度为60℃，时间为8h。
优选的，步骤(2)所述水浸提的压力为-0.04～0.08MPa，温度为80～95℃；过滤采用300目滤布或滤网，静置时间为0.5～1.5h。
优选的，步骤(2)中所述多次加水浸提为：预处理的蒲公英加入水进行第一次浸提，固液分离得到第一浸提液和第一浸提物；第一次浸提物中加水进行第二次浸提，再次固液分离得到第二浸提液和第二浸提物；第二浸提物中加水进行第三次浸提，固液分离得到第三浸提液和第三浸提物；合并第一浸提液、第二浸提液和第三浸提液，过滤后静置得到提取液。
优选的，步骤(2)中第一次浸提加入预处理的蒲公英10～15倍量的水，时间为4～6h；第二次浸提加入第一浸提物6～10倍量的水，时间为3～5h；第三次浸提加入第二浸提物2～4倍量的水，时间为2～4h。
优选的，步骤(2)具体为：在负压条件为：-0.05MPa，温度为90℃；第一次浸提加入预处理的蒲公英10倍量的水，时间为4h；第二次浸提加入第一浸提物6倍量的水，时间为3h；第三次浸提加入第二浸提物2倍量的水，时间为2h。合并第一浸提液、第二浸提液和第三浸提液，静置1h，使用300目滤布或滤网过滤后得到提取液。
优选的，步骤(3)中蒸发浓缩至20～25℃条件下浓缩液比重为1:(0.5～3)；
优选的，步骤(3)中所述喷雾干燥采用喷雾干燥机干燥，所述喷雾干燥机运行条件为：进风温度：140～150℃，出风温度：80～90℃，蠕动泵速度： 20～25RPM，通针：7～8H：95℃下干燥3h，80℃下干燥2h，70℃下干燥13h；所述筛分采用80～100目筛。
优选的，步骤(3)具体为：将步骤(2)中得到的提取液蒸发浓缩至20～25℃条件下浓缩液比重为1：1.2；喷雾干燥机运行条件为：进风温度：150℃，出风温度：85℃，蠕动泵速度：20RPM，通针频率：8Hz；将喷雾干燥后蒲公英水提物过100目筛即可。
本发明还提供了一种蒲公英叶水溶性粗提取物的应用，根据上述方法制备得到的蒲公英水提物在制备抗菌消炎饲料添加剂中的应用，可以替代饲料中的抗生素。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种蒲公英水提取物的制备方法，具有如下有益效果：
(1)本发明公开的整体步骤流程简单、提取率高、提取成本低，
(2)本发明制取的蒲公英水提物有效成分含量高，具有优异的抗炎活性，可以用于制备抗炎药物。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1蒲公英水提物提取率与温度关系图。
图2不同温度下所得蒲公英水提物HPLC图。
其中，图1为不同温度处理蒲公英提取物提取率；图2为蒲公英不同处理提取物功能成分液相图谱。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例提供了一种蒲公英叶水溶性粗提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)水提预处理：将蒲公英加入纤维素酶溶液中，浸泡，得到预处理的蒲公英；所述蒲公英叶是将新鲜采摘的大叶蒲公英的叶子洗净、切段3～5cm，先在阴凉处失水20％～40％，再晒干或烘箱中60～75℃烘烤4～6h制得；所述纤维素酶为0.1％纤维素酶，所述纤维素酶的酶活力为5000～10000U/g；所述蒲公英叶与所述纤维素酶溶液的质量体积比为1g:(5mL～10mL)，调节pH值为4，浸泡的温度为50～80℃，时间为6～12h；
(2)水浸提：预处理的蒲公英进行多次水浸提，合并浸提液，过滤后静置得到提取液；水浸提的压力为-0.04～0.08MPa，温度为80～95℃；过滤采用 300目滤布或滤网，静置时间为0.5～1.5h；多次加水浸提为：预处理的蒲公英加入水进行第一次浸提，固液分离得到第一浸提液和第一浸提物；第一次浸提物中加水进行第二次浸提，再次固液分离得到第二浸提液和第二浸提物；第二浸提物中加水进行第三次浸提，固液分离得到第三浸提液和第三浸提物；合并第一浸提液、第二浸提液和第三浸提液，过滤后静置得到提取液；第一次浸提加入预处理的蒲公英10～15倍量的水，时间为4～6h；第二次浸提加入第一浸提物6～10倍量的水，时间为3～5h；第三次浸提加入第二浸提物2～4 倍量的水，时间为2～4h；
(3)浓缩干燥：提取液蒸发浓缩，经过喷雾干燥后过筛，得到蒲公英水提物；蒸发浓缩至20～25℃条件下浓缩液比重为1:(0.5～3)；所述喷雾干燥采用喷雾干燥机干燥，所述喷雾干燥机运行条件为：进风温度：140～150℃，出风温度：80～90℃，蠕动泵速度：20～25RPM，通针：7～8H：95℃下干燥3h， 80℃下干燥2h，70℃下干燥13h；所述筛分采用80～100目筛；
为了进一步的优化技术方案，步骤(1)中，将洗净的“滨蒲1号”叶子切段4cm，阴凉处失水25％，再晒干或烘箱中65℃烘烤6h，1g蒲公英叶子加入 6mL 0.1％纤维素酶，浸泡的温度为60℃，时间为8h。
为了进一步的优化技术方案，步骤(2)具体为：在负压条件为：－0.05MPa，温度为90℃；第一次浸提加入预处理的蒲公英10倍量的水，时间为4h；第二次浸提加入第一浸提物6倍量的水，时间为3h；第三次浸提加入第二浸提物2倍量的水，时间为2h。合并第一浸提液、第二浸提液和第三浸提液，静置1h，使用300目滤布或滤网过滤后得到提取液。
为了进一步的优化技术方案，步骤(3)具体为：将步骤(2)中得到的提取液蒸发浓缩至20～25℃条件下浓缩液比重为1：1.2；喷雾干燥机运行条件为：进风温度：150℃，出风温度：85℃，蠕动泵速度：20RPM，通针频率： 8Hz；将喷雾干燥后蒲公英水提物过100目筛即可。
实施例1
本发明实施例1公开了一种蒲公英水提取物的制备方法，具体包括如下步骤：
(1)将洗净的“滨蒲1号”叶子切段4cm，阴凉处失水25％，再晒干或烘箱中65℃烘烤6h，得到蒲公英叶；然后将蒲公英叶按照1g蒲公英叶加入6mL 0.1％纤维素酶溶液比例，加入纤维素酶溶液中浸泡，浸泡温度为60℃、时间为8h；
(2)水浸提过程负压条件为：-0.05MPa，温度为80℃，第一次浸提加入预处理的蒲公英10倍量的水，时间为4h，第二次浸提加入第一浸提物6倍量的水，时间为3h，第三次浸提加入第二浸提物2倍量的水，时间为2h，合并第一浸提液、第二浸提液和第三浸提液，静置1h，使用300目滤布或滤网过滤后得到提取液；
(3)将提取液蒸发浓缩至20～25℃条件下浓缩液比重为1：1.2；喷雾干燥机运行条件为：进风温度：150℃，出风温度：85℃，蠕动泵速度：20RPM，通针频率：8Hz；将喷雾干燥后蒲公英水提物过100目筛即可。该温度下称取蒲公英叶子500g，最终得到水提物53.5g，提取率为10.7％。
实施例2
本发明实施例2公开了一种蒲公英水提取物的制备方法，具体包括如下步骤：
(1)将洗净的“滨蒲1号”叶子切段4cm，阴凉处失水25％，再晒干或烘箱中65℃烘烤6h，得到蒲公英叶；按照1g蒲公英叶加入6mL 0.1％纤维素酶溶液比例加入至纤维素酶溶液中浸泡，浸泡的温度为60℃、时间为8h；
(2)浸提的负压条件为：-0.05MPa，温度为85℃，第一次浸提加入预处理的蒲公英10倍量的水，时间为4h，第二次浸提加入第一浸提物6倍量的水，时间为3h，第三次浸提加入第二浸提物2倍量的水，时间为2h，合并第一浸提液、第二浸提液和第三浸提液，静置1h，使用300目滤布或滤网过滤后得到提取液；
(3)将提取液蒸发浓缩至20～25℃条件下浓缩液比重为1：1.2；喷雾干燥机运行条件为：进风温度：150℃，出风温度：85℃，蠕动泵速度：20RPM，通针频率：8Hz；将喷雾干燥后蒲公英水提物过100目筛即可。该温度下称取蒲公英叶子500g，最终得到水提物100g，提取率为20.0％。
实施例3
本发明实施例3公开了一种蒲公英水提取物的制备方法，具体包括如下步骤：
(1)将洗净的“滨蒲1号”叶子切段4cm，阴凉处失水25％，再晒干或烘箱中65℃烘烤6h，得到蒲公英叶；按照1g蒲公英叶子加入6mL 0.1％纤维素酶，进行混合浸泡，浸泡温度为60℃、时间为8h；
(2)浸提的负压条件为：-0.05MPa，温度为90℃，第一次浸提加入预处理的蒲公英10倍量的水，时间为4h，第二次浸提加入第一浸提物6倍量的水，时间为3h，第三次浸提加入第二浸提物2倍量的水，时间为2h，合并第一浸提液、第二浸提液和第三浸提液，静置1h，使用300目滤布或滤网过滤后得到提取液；
(3)将提取液蒸发浓缩至20～25℃条件下浓缩液比重为1：1.2；喷雾干燥机运行条件为：进风温度：150℃，出风温度：85℃，蠕动泵速度：20RPM，通针频率：8Hz；将喷雾干燥后蒲公英水提物过100目筛即可。该温度下称取蒲公英叶子500g，最终得到水提物137g，提取率为27.4％。
实施例4
本发明实施例4公开了一种蒲公英水提取物的制备方法，具体包括如下步骤：
(1)将洗净的“滨蒲1号”叶子切段4cm，阴凉处失水25％，再晒干或烘箱中65℃烘烤6h，1g蒲公英叶子加入6mL 0.1％纤维素酶，浸泡的温度为60℃，时间为8h；
(2)浸提的负压条件为：-0.05MPa，温度为95℃，第一次浸提加入预处理的蒲公英10倍量的水，时间为4h，第二次浸提加入第一浸提物6倍量的水，时间为3h，第三次浸提加入第二浸提物2倍量的水，时间为2h，合并第一浸提液、第二浸提液和第三浸提液，静置1h，使用300目滤布或滤网过滤后得到提取液；
(3)将提取液蒸发浓缩至20～25℃条件下浓缩液比重为1：1.2；喷雾干燥机运行条件为：进风温度：150℃，出风温度：85℃，蠕动泵速度：20RPM，通针频率：8Hz；将喷雾干燥后蒲公英水提物过100目筛即可。该温度下称取蒲公英叶子500g，最终得到水提物103.6g，提取率为20.7％。
效果检测
一、蒲公英水提物提高蛋鸡抗氧化系统作用试验
1试验目的
研究在蛋鸡饲料中添加蒲公英水提物对蛋鸡抗氧化系统的影响。
2试验材料
“滨蒲1号”蒲公英水提物(以本发明最佳实施例3所得的蒲公英水提物)。
3试验动物
海兰褐蛋鸡。
4试验场所
河北兴达饲料集团有限公司蛋鸡试验场
5试验设置
取产蛋期336只健康的蛋鸡，随机分为3组，记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组
Ⅰ组为空白对照组(DZ)，分为4个平行组，每组12只蛋鸡，饲喂基础日粮，自由饮水，共计48只蛋鸡；
Ⅱ、Ⅲ组均为实验组：
Ⅱ组为蒲公英叶干粉实验组(GF)，分别饲喂添加0.1％，0.3％，0.5％蒲公英干粉的基础日粮，自由饮水，每浓度分为4个平行组，每个浓度48只蛋鸡，共计144只蛋鸡；
Ⅲ组为蒲公英叶水提物实验组(TQ)，分别饲喂添加0.1％，0.3％，0.5％蒲公英水提物的基础日粮，自由饮水，每浓度分为4个平行组，每个浓度48 只蛋鸡，共计144只蛋鸡；
蛋鸡分笼饲养，自由采食和饮水，按正常免疫程序进行常规免疫，试验期42d，本次实验采用单因素完全随机设计，实验用蛋鸡饲养于同一鸡舍，采用立体笼养方式饲养，通风、采光等条件完全一致，日喂2次，日均光照16h，鸡舍定期消毒。整个实验期自由采食、自由饮水。实验蛋鸡只日粮参考NRC (1994)营养需要量标准设计产蛋鸡基础日粮，其它操作严格按照蛋鸡饲养管理办法进行。
6指标测定
于实验结束，每重复取血样3组，翼下静脉采血6mL，其中4mL血液不加抗凝剂，室温下自然凝固后，冷冻离心机中3000rpm/min离心分离得血清，零下20℃保存，用于测定抗氧化功能酶(SOD、T-AOC、MDA)。
7试验结果
表1对蛋鸡抗氧化系统的影响
Figure BDA0002467885800000101
注：同行中标有不同小写字母者表示组间有著性差异(P＜0.05)，标有相同小写字母者表示组间无显著性差异(P＞0.05)。
表1结果显示：SOD、T-AOC实验组的数值均大于对照组，MDA含量的数值则为对照组大于各个实验组，由此可以说明，添加蒲公英干粉、蒲公英水提物均可以调节蛋鸡的氧化-抗氧化系统，提高机体的整体免疫功能，且添加蒲公英水提物的效果要优于添加蒲公英干粉的效果。
二、蒲公英水提物提高蛋鸡抗免疫作用试验
1试验目的
研究在蛋鸡饲料中添加蒲公英水提物对蛋鸡抗氧化系统的影响。
2试验材料
“滨蒲1号”蒲公英水提物(以本发明最佳实施例3所得的蒲公英水提物)。
3试验动物
海兰褐蛋鸡。
4试验场所
河北兴达饲料集团有限公司蛋鸡试验场
5试验设置
取产蛋期336只健康的蛋鸡，随机分为3组，记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组
Ⅰ组为空白对照组(DZ)，分为4个平行组，每组12只蛋鸡，饲喂基础日粮，自由饮水，共计48只蛋鸡；
Ⅱ、Ⅲ组均为实验组：
Ⅱ组为蒲公英叶干粉实验组(GF)，分别饲喂添加0.1％，0.3％，0.5％蒲公英干粉的基础日粮，自由饮水，每浓度分为4个平行组，每个浓度48只蛋鸡，共计144只蛋鸡；
Ⅲ组为蒲公英叶水提物实验组(TQ)，分别饲喂添加0.1％，0.3％，0.5％蒲公英水提物的基础日粮，自由饮水，每浓度分为4个平行组，每个浓度48 只蛋鸡，共计144只蛋鸡；
蛋鸡分笼饲养，自由采食和饮水，按正常免疫程序进行常规免疫，试验期42d，本次实验采用单因素完全随机设计，实验用蛋鸡饲养于同一鸡舍，采用立体笼养方式饲养，通风、采光等条件完全一致，日喂2次，日均光照16h，鸡舍定期消毒。整个实验期自由采食、自由饮水。实验蛋鸡只日粮参考NRC (1994)营养需要量标准设计产蛋鸡基础日粮，其它操作严格按照蛋鸡饲养管理办法进行。
6指标测定
于实验结束，每重复取血样3组，翼下静脉采血6mL，其中4mL血液不加抗凝剂，室温下自然凝固后，冷冻离心机中3000rpm/min离心分离得血清，零下20℃保存，用于测定血清免疫球蛋白(IgA、IgM)。
7试验结果
表2对蛋鸡免疫功能的影响
Figure BDA0002467885800000111
Figure BDA0002467885800000121
注：同行中标有不同小写字母者表示组间有著性差异(P＜0.05)，标有相同小写字母者表示组间无显著性差异(P＞0.05)。
表2结果显示：各实验组的IgM均与对照组有显著性差异(P<0.05)， IgA各组之间没有显著性差异(P＞0.05)，但实验组的数值均大于对照组，由此可以说明，添加蒲公英干粉、蒲公英水提物均可以调节蛋鸡的体液免疫和细胞免疫，提高机体的整体免疫功能，且添加蒲公英水提物的效果要优于添加蒲公英干粉的效果。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种蒲公英叶水溶性粗提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)水提预处理：将蒲公英加入纤维素酶溶液中，浸泡，得到预处理的蒲公英；
(2)水浸提：预处理的蒲公英进行3次水浸提，合并浸提液，过滤后静置得到提取液；
(3)浓缩干燥：提取液蒸发浓缩，经过喷雾干燥后过筛，得到蒲公英水提物。
2.根据权利要求1所述的一种蒲公英叶水溶性粗提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述蒲公英叶是将新鲜采摘的大叶蒲公英的叶子洗净、切段3～5cm，先在阴凉处失水20％～40％，再晒干或烘箱中60～75℃烘烤4～6h制得。
3.根据权利要求1所述的一种蒲公英叶水溶性粗提提物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述纤维素酶溶液中纤维素酶的质量百分比为0.1％，所述纤维素酶的酶活力为5000～10000U/g。
4.根据权利要求1所述的一种蒲公英叶水溶性粗提提物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述蒲公英叶与所述纤维素酶溶液的质量体积比为1g:(5mL～10mL)，调节pH值为4，浸泡的温度为50～80℃，时间为6～12h。
5.根据权利要求1所述的一种蒲公英叶水溶性粗提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述水浸提的压力为-0.04～0.08MPa，温度为80～95℃；过滤采用300目滤布或滤网，静置时间为0.5～1.5h。
6.根据权利要求1所述的一种蒲公英叶水溶性粗提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述3次加水浸提为：预处理的蒲公英加入水进行第一次浸提，固液分离得到第一浸提液和第一浸提物；第一次浸提物中加水进行第二次浸提，再次固液分离得到第二浸提液和第二浸提物；第二浸提物中加水进行第三次浸提，固液分离得到第三浸提液和第三浸提物；合并第一浸提液、第二浸提液和第三浸提液，过滤后静置得到提取液。
7.根据权利要求6所述的一种蒲公英叶水溶性粗提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中第一次浸提加入预处理的蒲公英10～15倍量的水，时间为4～6h；第二次浸提加入第一浸提物6～10倍量的水，时间为3～5h；第三次浸提加入第二浸提物2～4倍量的水，时间为2～4h。
8.根据权利要求1所述的一种蒲公英叶水溶性粗提取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中蒸发浓缩至20～25℃条件下浓缩液比重为1:(0.5～3)。
9.根据权利要求1所述的一种蒲公英水提物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述喷雾干燥采用喷雾干燥机干燥，所述喷雾干燥机运行条件为：进风温度：140～150℃，出风温度：80～90℃，蠕动泵速度：20～25RPM，通针：7～8H：95℃下干燥3h，80℃下干燥2h，70℃下干燥13h；所述筛分采用80～100目筛。
10.一种蒲公英叶水溶性粗提取物的应用，其特征在于，根据权利要求1-9任一所述方法制备得到的蒲公英水提物在制备抗菌消炎饲料添加剂中的应用。
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