CN100513426C

CN100513426C - 一种枸杞多糖的制备方法

Info

Publication number: CN100513426C
Application number: CNB2007100902104A
Authority: CN
Inventors: 孙步祥; 汤凌志; 易永基; 唐淑萍; 王智慧
Original assignee: GUILIN LAIYIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: GUILIN LAIYIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd; Guilin Layn Natural Ingredients Corp
Priority date: 2007-04-13
Filing date: 2007-04-13
Publication date: 2009-07-15
Anticipated expiration: 2027-04-13
Also published as: CN101029088A

Abstract

本发明公开了一种枸杞多糖的制备方法，是利用枸杞干\鲜果为原料，利用柱层析来提高枸杞多糖的纯度，整个工艺过程包括浸泡、破碎、提取、酶解、柱层析、醇沉、脱醇、干燥等步骤，工艺简单、生产周期短、工艺过程利于控制、原料消耗少、生产成本低。

Description

一种枸杞多糖的制备方法

技术领域

本发明涉及生物制品和化学工程技术，特别涉及一种从枸杞中提取枸杞多糖的方法。

背景技术

枸杞(Lycium chinense Mill.)既是常用的中药材，又是保健食品，医食同源。枸杞的别名很多，又叫贡果、血杞子、枸杞豆，产地称为“红果子”、“明目子”等。它是匣科落叶灌木植物枸杞的成熟果实，落叶灌木，因栽培经人工整枝而形成具有树冠的直立灌木，单主干茎粗直径10-20cm，株高1.5m左右，冠径1.6m左右，叶互生或簇生，披针形或长椭圆状披针形，花冠漏斗状，紫堇色，果实为浆果，红色，形似纺锤，更似红玛瑙坠。历史上是皇室贡品，素有“红宝”美称，富含植物多糖、蛋白质、维生素等营养成分。枸杞的主要功效为滋补肝肾，益精明目；用于虚痨精亏、腰膝酸痛；眩晕耳鸣、内热肖渴、血虚萎黄，目昏不明。历代养生家、医学家都很看重枸杞的补养功效。早在《神农本草经》中就指出：久服坚筋骨；《名医别录》谓枸杞擅长“补益精气”；《食疗本草》也记载枸杞“能益人，去虚劳”。枸杞在滋补肝肾、益精明目方面的功效不仅为历代医家和食疗学家所推崇。现代药理研究证明，枸杞所含主要成份枸杞多糖(Lycium chinense polysaccharide，简称LBP)是枸杞中最重要的功效成分，是一种水溶性多糖，已明确该多糖系蛋白多糖，分子量为22～25kD，是由六种乙碳单糖ARA、CLC、GAL、MAN、XYL和RHA组成的多糖侧链和十八种氨基酸组成的蛋白质主链构成。枸杞多糖是枸杞子调节免疫、延缓衰老的主要活性成分，能提高人的免疫功能，促进机体产生NK-杀伤细胞，并提高其活性，通过提高机体免疫功能可以间接起到抗病毒作用，对均衡神经一内分泌一免疫网络有着重要作用，能直接作用于人体的下丘脑一垂体，促进代谢功能、内分泌功能和生殖功能的调节，其对恶性肿瘤、艾滋病的预防与治疗也能起到积极作用，另外其可改善老年人易疲劳、食欲不振和视力模糊等症状，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗肿瘤、抗衰老等作用。

经过专利检索，发现专利“申请号200510046785.7发酵法提取枸杞多糖”，该发明公开了一种应用生物工程技术提取加工枸杞多糖的方法，是利用安琪酵母生长过程中消耗单糖、双糖、含氮物质的手段来提高枸杞多糖的纯度，整个工艺过程包括粉碎，浸泡，有氧发酵，过滤，脱色，除杂，真空蒸馏。该方法，采用发酵工艺，生产过程中易出现发酵不完全，杂质多等问题。专利“申请号02115382.5一种枸杞多糖及其制备方法和应用”，公开了枸杞多糖的制备方法：以中药枸杞为原料，加入8～20倍50～100℃的热水，用高速剪切机剪切10～40分钟，压榨，取压榨出的汁高速离心，离心液用截留分子量为5～10万的超滤膜过滤，超滤液再用截留分子量为3000～10000的超滤膜浓缩，冷冻干燥，即得。该方法，采用膜分离，生产中收率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用现代生物方法提取枸杞多糖的技术，来达到提高枸杞多糖纯度、减少工业废物排放、缩短生产过程，降低生产成本的目的。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种枸杞多糖的提取加工方法，具体提取加工步骤为：

1、原料的选择及前处理：选用新鲜枸杞或枸杞干果，清水洗涤多次以去除杂质，洗涤时间以30秒至1分钟为宜；

2、浸泡：枸杞与纯净水的体积比为1:3-5的比例常温浸泡，枸杞干果浸泡时间以6～8小时为宜，新鲜枸杞可适当缩短至2～3小时；

3、破碎：将浸泡后的枸杞和浸泡液一起注入粉碎机进行破碎；

4、提取：按枸杞破碎液与纯净水的体积比为1:1-2的比例添加纯净水后提取，提取温度为80-100℃，压力为60-80KPa，提取时间为1-2小时；收集提取液，残渣重新以10倍剂量纯水提取2次；

5、酶解：合并提取液，按0.05-0.5g/L的量加入果胶酶，于50-60℃保温酶解2-3小时，加热提取液至沸腾，终止酶解反应；

6、浓缩：提取液过滤后离心，合并上清液，残渣以纯净水洗涤后过滤，将滤液和离心后的上清液合并，进行减压浓缩；

7、柱层析：将浓缩后的溶液通过柱层析树脂柱，用相当于进柱液体体积3-5倍的纯净水清洗树脂，以去除溶液中的色素，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变浅红再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，树脂柱再用75％以上浓度的乙醇清洗处理，洗去吸附的色素等物质；

8、醇沉：浓缩洗脱液，往浓缩液中加入95％以上浓度的乙醇，加入醇的剂量一般为浓缩洗脱液体积的5～7倍，调整溶液醇浓度达80％以上，然后，于2-10℃静置4～8小时充分沉淀；

9、脱醇：过滤，收集沉淀，用95％浓度乙醇洗涤沉淀2～3次，以纯净水溶解沉淀后减压浓缩，至25～30婆美度浸膏；

10、干燥：将浸膏进行冷冻干燥，粉碎后得到枸杞多糖粉末。

本发明，步骤2中枸杞与纯净水的体积比最佳为1:4；步骤2中，枸杞干果浸泡最佳时间为7小时、新鲜枸杞浸泡最佳时间为2小时，时间过短会影响浸出率，浸泡时间过长会影响生产周期或容易染菌；步骤4中，最佳提取温度为90℃、压力为70KPa，温度过高、压力过大会破坏枸杞中的活性物质；步骤5中，果胶酶的适宜用量为0.1-0.2g/L；步骤7中，柱层析树脂选自型号为D101型、D201型、DA201型、AB—8型的大孔吸附树脂、型号为HP20SS或SP20SS的小粒度合成吸附树脂；步骤8中，静置时最佳温度为4℃，温度过高不利于沉淀，温度过低则增加能耗。

本发明的制备方法得到的枸杞多糖为金黄色、味微甜或无味、颗粒细小的粉末，其中枸杞多糖的含量为40％以上。

本发明提取加工方法与现有的技术相比具有如下优点：

●反应过程简单：目前国内应用的乙醇沉淀提取法步骤烦杂，仅无水乙醇洗涤一项就需洗涤数次，本发明结合柱层析技术，减少了乙醇沉淀法的步骤；

●原料消耗减少，乙醇沉淀提取法大量消耗无水乙醇，对提取原料是一种无形的浪费；

●生产工艺简单、生产周期短、工艺过程利于控制，避免了发酵法的微生物发酵不完全、膜分离的收率低等缺陷。

具体实施方式

实施例1

1、原料的选择及前处理：选用新鲜枸杞适量，清水洗涤多次以去除杂质，洗涤时间以30秒至1分钟为宜；

2、浸泡：按枸杞与纯净水的体积比为1:3的比例常温浸泡，新鲜枸杞可适当缩短至3小时；

4、提取：按枸杞破碎液与纯净水的体积比为1:1的比例添加纯净水后提取，提取温度为80℃，压力为60KPa，提取时间为1小时；收集提取液，残渣重新以10倍剂量纯水提取2次；

5、酶解：合并提取液，按0.05g/L的量加入果胶酶，于50-60℃保温酶解2-3小时，加热提取液至沸腾，终止酶解反应；

7、柱层析：将浓缩后的溶液通过柱层析，型号为D201树脂柱，用相当于进柱液体体积3-5倍的纯净水清洗树脂，以去除溶液中的色素，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变浅红再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，树脂柱再用75％以上浓度的乙醇清洗处理，洗去吸附的色素等物质；

8、醇沉：浓缩洗脱液，往浓缩液中加入95％以上浓度的乙醇，加入醇的剂量一般为浓缩洗脱液体积的5～7倍，调整溶液醇浓度达80％以上，然后，于2℃静置4小时充分沉淀；

实施例2

1、原料的选择及前处理：选用枸杞干果适量，清水洗涤多次以去除杂质，洗涤时间以30秒至1分钟为宜；

2、浸泡：按枸杞与纯净水的体积比为1:4的比例常温浸泡，新鲜枸杞可适当缩短至7小时；

4、提取：按枸杞破碎液与纯净水的体积比为1:2的比例添加纯净水后提取，提取温度为90℃，压力为70KPa，提取时间为1小时；收集提取液，残渣重新以10倍剂量纯水提取2次；

5、酶解：合并提取液，按0.2g/L的量加入果胶酶，于50-60℃保温酶解2-3小时，加热提取液至沸腾，终止酶解反应；

7、柱层析：将浓缩后的溶液通过柱层析，型号为D101树脂柱，用相当于进柱液体体积3-5倍的纯净水清洗树脂，以去除溶液中的色素，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变浅红再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，树脂柱再用75％以上浓度的乙醇清洗处理，洗去吸附的色素等物质；

8、醇沉：浓缩洗脱液，往浓缩液中加入95％以上浓度的乙醇，加入醇的剂量一般为浓缩洗脱液体积的5～7倍，调整溶液醇浓度达80％以上，然后，于4℃静置6小时充分沉淀；

实施例3

2、浸泡：按枸杞与纯净水的体积比为1:5的比例常温浸泡，新鲜枸杞可适当缩短至8小时；

4、提取：按枸杞破碎液与纯净水的体积比为1:2的比例添加纯净水后提取，提取温度为100℃，压力为80KPa，提取时间为1小时；收集提取液，残渣重新以10倍剂量纯水提取2次；

5、酶解：合并提取液，按0.5g/L的量加入果胶酶，于50-60℃保温酶解2-3小时，加热提取液至沸腾，终止酶解反应；

7、柱层析：将浓缩后的溶液通过柱层析，型号为HP20SS的小粒度合成吸附柱，用相当于进柱液体体积3-5倍的纯净水清洗树脂，以去除溶液中的色素，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变浅红再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，树脂柱再用75％以上浓度的乙醇清洗处理，洗去吸附的色素等物质；

8、醇沉：浓缩洗脱液，往浓缩液中加入95％以上浓度的乙醇，加入醇的剂量一般为浓缩洗脱液体积的5～7倍，调整溶液醇浓度达80％以上，然后，于10℃静置8小时充分沉淀；

Claims

1、一种枸杞多糖的制备方法，其特征在于：从枸杞子中提取枸杞多糖，具体步骤为：

1)、原料的选择及前处理：选用新鲜枸杞或枸杞干果，清水洗涤多次以去除杂质，洗涤时间为30秒至1分钟；

2)、浸泡：按枸杞与纯净水的体积比为1:3-5的比例常温浸泡，枸杞干果浸泡时间为6～8小时，新鲜枸杞浸泡时间为2～3小时；

3)、破碎：将浸泡后的枸杞和浸泡液一起注入粉碎机进行破碎；

4)、提取：按枸杞破碎液与纯净水的体积比为1:1-2的比例添加纯净水后提取，提取温度为80-100℃，压力为60-80KPa，提取时间为1-2小时；收集提取液，残渣重新以10倍剂量纯水提取2次；

5)、酶解：合并提取液，按0.05-0.5g/L的量加入果胶酶，于50-60℃保温酶解2-3小时，加热提取液至沸腾，终止酶解反应；

6)、浓缩：提取液过滤后离心，合并上清液，残渣以纯净水洗涤后过滤，将滤液和离心后的上清液合并，进行减压浓缩；

7)、柱层析：将浓缩后的溶液通过柱层析树脂柱，用进柱液体体积3-5倍的纯净水清洗树脂，以去除溶液中的色素，当流出液变浅黄时，开始收集流出液，当流出液颜色由浅黄变浅红再变浅，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，树脂柱再用75％以上浓度的乙醇清洗处理，洗去吸附的色素；

所述柱层析树脂选自型号为D101型、D201型、DA201型、AB—8型的大孔吸附树脂或型号为HP20SS或SP20SS的小粒度合成吸附树脂；

8)、醇沉：浓缩洗脱液，往浓缩液中加入95％以上浓度的乙醇，加入醇的剂量为浓缩洗脱液体积的5～7倍，调整溶液醇浓度达80％以上，然后，于2-10℃静置4～8小时充分沉淀；

9)、脱醇：过滤，收集沉淀，用95％度乙醇洗涤沉淀2～3次，以纯净水溶解沉淀后减压浓缩，至25～30婆美度浸膏；

10)、干燥：将浸膏进行冷冻干燥，粉碎后得到枸杞多糖粉末。

2、如权利要求1所述的一种枸杞多糖的制备方法，其特征在于：步骤2)中枸杞与纯净水的体积比为1:4。

3、如权利要求1所述的一种枸杞多糖的制备方法，其特征在于：步骤2)中，枸杞干果浸泡最佳时间为7小时、新鲜枸杞浸泡时间为2小时。

4、如权利要求1所述的一种枸杞多糖的制备方法，其特征在于：步骤4)中，提取温度为90℃、压力为70KPa。

5、如权利要求1所述的一种构杞多糖的制备方法，其特征在于：步骤5)中，果胶酶的用量为0.1-0.2g/L。

6、如权利要求1所述的一种枸杞多糖的制备方法，其特征在于：步骤8)中，静置时温度为4℃。